CN102707057A - 一种用于快速检测登革热病毒IgG、IgM型抗体的胶体金试纸条 - Google Patents

Abstract

本发明“一种用于快速检测登革热病毒IgG、IgM型抗体的胶体金试纸条”，属于医用检测耗材，其特征在于，在所述金标纤维结合垫上包被有1种至4种抗原，所述抗原选自胶体金标记的四个亚型的登革热病毒的抗原，所述质控线C上包被有抗登革热病毒抗原多克隆抗体，所述检测线T₁上包被有抗μ链单抗，所述检测线T₂上包被有抗人IgG单抗。本发明试纸条采用抗体捕获法和免疫胶体金技术相结合能快速检测血清型1、2、3及4型的登革热病毒IgG、IgM型抗体，具有简便、灵敏、特异、准确的优点，并且本发明用样量少，节省资源，储存条件宽泛，可同时一次性判读出登革热病毒IgG或IgM型抗体的阳性结果。

Description

一种用于快速检测登革热病毒IgG、IgM型抗体的胶体金试纸条

技术领域，

本发明属于生物检测领域，涉及一种医用检测耗材，具体涉及一种用于快速检测登革热病毒IgG、IgM型抗体的胶体金试纸条。

背景技术

登革热是登革热病毒引起、伊蚊传播的一种急性传染病。临床特征为起病急骤，高热，全身肌肉、骨髓及关节痛，极度疲乏，部分患者有皮疹、出血倾向和淋巴结肿大。登革热为全球最严重的由蚊虫传播的病毒性疾病。该病毒主要是通过埃及伊蚊传播，超过100个国家报告过登革热爆发，有2.5亿人生活在登革高感染区，每年会发生5000万到1亿例登革出血热，200000-500000例登革感染者最终发展为登革出血热，平均有5%的登革出血热患者会死亡。

登革热病毒是小型黄病毒，属于黄热病毒属，按流行病学分类属虫媒病毒B组，血清学上分为1,2,3，4共四个血清型。登革热病毒能够引起一系列临床症状，包括有生命危险的失血性休克综合征和较少见的伴有肝衰与脑病的急性肝炎。感染登革热病毒轻则突然发热、剧烈肌肉疼痛、骨关节痛，重则广泛出血、迅速休克。

免疫胶体金技术(Immunogold labelling techique)是上世纪80年代继荧光素、放射性同位素和酶三大标记技术后发展起来的固相标记免疫测定技术。该技术主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，形成肉眼可见的红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中。快速诊断试纸条是20世纪90年代以来在单克隆抗体技术、胶体金免疫层析技术和新型层析材料基础上发展起来的一项新型体外诊断技术，近年来发展迅速，在生物医学领域特别是医学检验中得到了广泛应用。该技术主要是将特异性的抗原或抗体以条带状固定在硝酸纤维膜上，胶体金标记试剂吸附在结合垫上，当待测样品加到试纸条一端的样品垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体区域时，待测物金标试剂复合物与之发生特异性结合而被截留，胶体金标记聚集在检测带上，可通过目测得到直观的显色结果。而游离的标记物则越过检测带，从而达到与检测物自动分离的目的。

抗体捕获法（亦称反向间接法）ELISA，主要用于血清中某种抗体亚型成分的测定。其原理是将抗原固化在基质上，加入含抗体的杂交瘤培养上清，洗去未结合的抗体，结合于抗原上的抗体可由标记有荧光素、放射性核素或一些酶的兔抗小鼠免疫球蛋白抗体识别。

常用的抗体检测方法有：ELISA法和RT-PCR法。但这些检测技术需要特殊的仪器设备，并且需要专业技术人员在专业的实验室进行检测，操作复杂，耗时长，不适宜于现场即使检测。

目前,现有技术中还没出现能实现血清型为1,2,3,4的登革热病毒IgG和IgM抗体同时检测并且具有简便、快捷、准确特点的仪器，因此对于登革热病毒IgG和IgM抗体的检测，耗时较长，检测过程繁琐。

发明内容

为解决上述领域的需求和空白，本发明旨在提供一种用于快速检测登革热病毒IgG、IgM型抗体的胶体金试纸条，本发明试纸条采用抗体捕获法原理和免疫胶体金技术相结合快速检测人血清、血浆或全血中的登革热病毒IgG、IgM型抗体，能定性检测血清型1、2、3，4型四种登革病毒的IgG、IgM抗体，用于临床实验室对具有持续发烧的登革感染症状或接触史的患者的辅助性诊断。本发明试纸条操作简单，拿来即用，能够满足不同层次人员的需要，容易普及到基层社区医院，以符号显示结果，摆脱了对设备、仪器、人员及贮存和运输环境的特殊要求，并且具有快速、简便、灵敏、准确、特异的特点，同时本发明用样量少，节省资源，储存条件宽泛，可同时一次性判读出登革热病毒IgG或IgM型抗体的阳性结果。

一种用于快速检测登革热病毒IgG、IgM型抗体的胶体金试纸条，在高度方向上包括基板支撑层、反应试剂载体吸附层，所述反应试剂载体吸附层固定在所述基板支撑层上；

所述反应试剂载体吸附层从加液端到手持端依次设有样品纤维垫，金标纤维结合垫，纤维素药膜，手持端吸水材料垫；

在所述样品纤维垫、金标纤维结合垫和手持端吸水材料垫上覆盖有保护膜层，

所述纤维素药膜从加液端到手持端依次设有质控线C、检测线T₁，T₂，所述质控线C和检测线T₁，T₂相互平行且与所述胶体金试纸条长度方向相垂直，

其特征在于，在所述金标纤维结合垫上包被有1种至4种抗原，所述抗原选自胶体金标记的四个亚型的登革热病毒的抗原；所述质控线C上包被有抗登革热病毒抗原多克隆抗体，所述检测线T₁上包被有抗μ链单抗，所述检测线T₂上包被有抗人IgG单抗。

所述两条检测线T₁、T₂从加液端到手持端依次设置。

在所述样品纤维垫上对应的保护膜层上表面标有与所述检测线T₁，T₂平行的可视的MAX标志线。

所述样品纤维垫的材料是玻璃纤维棉，所述吸水材料垫的材料是粗纤维吸水纸，所述金标纤维结合垫的材料是吸附金标蛋白的玻璃纤维棉。

所述保护膜层为胶带。

所述基板支撑层为不吸水的塑料基板。

还包括外壳，所述外壳具有中空位，所述中空位与所述反应试剂载体吸附层及所述基板支撑层形成的简易胶体金试纸条的形状大小相匹配，用于装载所述反应试剂载体吸附层，所述外壳上表面对应于样品纤维垫及纤维素药膜的位置分别设有加样窗和视窗。

一种用于快速检测登革热病毒IgG、IgM型抗体的试剂盒，其特征在于：包括有上述权利要求1-7中任一胶体金试纸条和样品稀释用具。

技术效果：

根据胶体金检测的原理，将本发明的胶体金试纸条水平放置，取1μl待测液滴加到试纸条加液端的样品纤维层，再滴加2滴（约80-100μl）样品稀释液。待测液中的物质在纤维层材料的毛细作用下沿着试纸条从加液端向手持端移动，待测液中的登革抗体经过金标纤维层时与胶体金标记登革抗原粘附在一起并向吸水纸垫方向移动，待测液中的登革抗体经过检测线时，与检测线上包被的抗μ链单抗、抗人IgG单抗由于特异性结合导致胶体金在检测线上聚集，使检测线显色。其余胶体金标记蛋白继续迁移，到对照线时，由于采用的胶体金标记登革抗原与对照线上包被的抗登革热病毒抗原多克隆抗体能特异结合，因此，胶体金在对照线上聚集使对照线显色。即若检测线T₁和对照线都显色，表明待测液为登革热病毒IgM抗体阳性；若检测线T₂和对照线都显色，表明待测液为登革热病毒IgG抗体阳性；若检测线T₁、T₂和对照线都显色，表明待测液为登革热病毒IgG抗体和IgM抗体阳性；如果，待测液中不存在登革抗体，那么，待测液迁移至检测线时，待测液中没有与检测线上包被的物质能够结合的成分，从而导致胶体金不会聚集于检测线，因此，检测线不会显色，但是对照线处仍然显色。即仅仅有对照线显色，表明待测液为阴性。无论靶标物质是否存在于样本中，一条红色条带都会出现在对照区（C）内。对照区（C）内所显现的红色条带是判定是否有足够样本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。

本发明的胶体金试纸条不同于现有的试纸条之处在于：在所述金标纤维结合垫上包被有胶体金标记的四个亚型的登革热病毒的抗原的14种抗原，所述质控线C上包被有抗登革热病毒抗原多克隆抗体，所述检测线T₁上包被有抗μ链单抗，所述检测线T₂上包被有抗人IgG单抗。本发明试纸条采用抗体捕获法原理快速检测血清型1、2、3及4型的登革热病毒IgG、IgM型抗体。

所述检测线T1上包被有抗μ链单抗，所述检测线T2上包被有抗人IgG单抗。单抗，即单克隆抗体，其只识别一种表位（抗原决定簇）的抗体，来自单个B淋巴细胞的克隆或一个杂交瘤细胞的克隆。因此，它只对一种抗原起反应，所以效率很高，不会跟别的抗原反应，其特异性高。即抗人IgG抗体只会与IgG抗体反应，抗μ链抗体也只会与IgM抗体反应，适合于检测线T1、T2上包被。而多抗则是是对特定抗原所产生的一组免疫球蛋白混合物，每种免疫球蛋白能识别抗原分子上的一个表位。因此，抗登革病毒抗原多克隆抗体，可以是IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等抗体，其特异性相对要低，并且会与标记中的登革病毒抗原反应，故适合于质控线C上包被。

IgM抗体阳性意味着被测者是登革热病毒的初次感染或近期感染；IgG抗体阳性意味着被测者是有过登革热病毒感染史或远期感染；IgM和IgG抗体均为阳性意味着被测者是被登革热病毒二次感染或者处于恢复期状态。本发明产品在检测时候，是通过待测液经毛细作用，从加液端往手持端迁移，先经过T₁，再经过T₂，如此顺序，可使T₁位置显色快，反应时间短。若是登革抗体阳性的时候，则可使包被的抗μ链单抗比抗人IgG单抗先行与待测液中的靶标物质反应，提高反应速率，显色速度也会提高。若IgM为阳性，即可立即判断出被测者被登革热病毒感染。这对于在临床判读结果上有更重要的意义。

所述两条检测线T₁、T₂从加液端到手持端依次设置。本发明可通过在金标纤维结合垫处理方式上，即在所述金标纤维结合垫上包被有胶体金标记的四个亚型的登革热病毒的其中1种抗原，从而实现对血清型1、2、3及4型的登革热病毒IgG、IgM型抗体的快速检测。若在所述金标纤维结合垫上包被有胶体金标记的四个亚型的登革热病毒的4种抗原，则可检测出总的登革热病毒IgG、IgM型抗体的快速检测。

本发明，优选在所述样品纤维垫上对应的保护膜层上表面标有与所述检测线T₁，T₂平行的可视的MAX标志线。用于提醒操作人员，操作时待测液不要超过标志线，以免引起假阳性。

本发明，优选所述样品纤维垫的材料玻璃纤维棉，所述吸水材料垫的材料是粗纤维吸水纸，所述纤维素药膜垫的材料是硝酸纤维素膜，所述金标纤维结合垫的材料是吸附金标蛋白的玻璃纤维棉。这些材料配合使用，其吸水性及毛吸作用配合良好，保证本发明检测试纸条的检测速度和准确性。

本发明，优选保护膜层为胶带，使试纸条免受污染，成本低且效果好。

本发明，优选基板支撑层为不吸水的塑料基板，不吸水的材料，避免支撑材料吸收待测液从而影响水平方向的迁移。

本发明，优选还包括外壳，所述外壳具有中空位，所述中空位与所述反应试剂载体吸附层及所述基板支撑层形成的简易胶体金试纸条的形状大小相匹配，用于装载所述反应试剂载体吸附层，所述外壳上表面对应于样品纤维层及纤维素药膜的位置分别设有加样窗和视窗。便于携带和保存。

本发明试纸条采用抗体捕获法和免疫胶体金技术相结合快速检测人血清、血浆或全血中的登革热病毒IgG、IgM型抗体，能定性检测血清型1、2、3，4型四种登革病毒的IgG、IgM抗体，用于临床实验室对具有持续发烧的登革感染症状或接触史的患者的辅助性诊断；本发明试纸条操作简单，使用方便，拿来即用，不需要本领域的专业人员，能够满足不同层次人员的需要，并且保证检测的灵敏性、准确性和高效率。

附图说明：

图1本发明试纸条的俯视图；

其中：1-手持端，2-质控线C线，3-检测线T₂线，4-检测线T₁,5-MAX标志线，6-加液端，7-纤维素药膜，8-样品纤维垫,9-手持端吸水材料垫，10-金标纤维结合垫,14-胶带边缘线。

图2本发明试纸条的纵向剖面图

其中：7-纤维素药膜，8-样品纤维垫,9-手持端吸水材料垫，10-金标纤维结合垫,11-手持端胶带，12-箭头胶带,13-基板支撑层。

具体实施方式：

提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。

本发明旨在提供一种用于快速检测登革热病毒IgG、IgM型抗体的胶体金试纸条，本发明试纸条采用抗体捕获法和免疫胶体金技术相结合快速检测人血清、血浆或全血中的登革热病毒IgG、IgM型抗体，能定性检测血清型1、2、3，4型四种登革病毒的IgG、IgM抗体，用于临床实验室对具有持续发烧的登革感染症状或接触史的患者的辅助性诊断；本发明试纸条操作简单，使用方便，拿来即用，不需要本领域的专业人员，能够满足不同层次人员的需要，容易普及到基层社区医院，以符号显示结果，摆脱了对设备、仪器、人员及贮存和运输环境的特殊要求，并且具有快速、简便、灵敏、准确、特异的特点。

根据胶体金检测的原理，将本发明的胶体金试纸条水平放置，取1μl待测液滴加到试纸条加液端的样品纤维层，再滴加2滴（约80-100μl）样品稀释液。待测液中的物质在纤维层材料的毛细作用下沿着试纸条从加液端向手持端移动，待测液中的登革抗体经过金标纤维层时与胶体金标记登革抗原粘附在一起并向吸水纸垫方向移动，待测液中的登革抗体经过检测线时，与检测线上包被的抗μ链单抗、抗人IgG单抗由于特异性结合导致胶体金在检测线上聚集，使检测线显色。其余胶体金标记蛋白继续迁移，到对照线时，由于采用的胶体金标记登革抗原与对照线上包被的抗登革热病毒抗原多克隆抗体能特异结合，因此，胶体金在对照线上聚集使对照线显色。即若检测线T₁和对照线都显色，表明待测液为登革热病毒IgM抗体阳性；若检测线T₂和对照线都显色，表明待测液为登革热病毒IgG抗体阳性；若检测线T₁、T₂和对照线都显色，表明待测液为登革热病毒IgG抗体和IgM抗体阳性；如果，待测液中不存在登革抗体，那么，待测液迁移至检测线时，待测液中没有与检测线上包被的物质能够结合的成分，从而导致胶体金不会聚集于检测线，因此，检测线不会显色，但是对照线处仍然显色。即仅仅有对照线显色，表明待测液为阴性。无论靶标物质是否存在于样本中，一条红色条带都会出现在对照区（C）内。对照区（C）内所显现的红色条带是判定是否有足够样本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。

本发明用于快速检测登革热病毒IgG、IgM型抗体的胶体金试纸条，在高度方向上包括基板支撑层13、反应试剂载体吸附层，所述反应试剂载体吸附层固定在所述基板支撑层13上；所述反应试剂载体吸附层从加液端6到手持端1依次设有样品纤维垫8，金标纤维结合垫10，纤维素药膜7，手持端吸水材料垫9；在所述样品纤维垫8、金标纤维结合垫10和手持端吸水材料垫9上覆盖有保护膜层。所述纤维素药膜7上从加液端6到手持端1依次设有质控线C-2、检测线T₁-4，T₂-3，所述质控线C-2和检测线T₁-4，T₂-3相互平行且与所述胶体金试纸条长度方向相垂直。

本发明的胶体金试纸条不同于现有的试纸条之处在于：在所述金标纤维结合垫10上包被有1种至4种抗原，所述抗原选自胶体金标记的四个亚型的登革热病毒的抗原；所述质控线C-2上包被有抗登革热病毒抗原多克隆抗体，所述检测线T₁-4上包被有抗μ链单抗，所述检测线T₂-3上包被有抗人IgG单抗。本发明试纸条采用抗体捕获法原理快速检测血清型1、2、3及4型的登革热病毒IgG、IgM型抗体。

IgM抗体阳性意味着被测者是登革热病毒的初次感染或近期感染；IgG抗体阳性意味着被测者是有过登革热病毒感染史或远期感染；IgM和IgG抗体均为阳性意味着被测者是被登革热病毒二次感染或者处于恢复期状态。本发明产品在检测时候，是通过待测液经毛细作用，从加液端往手持端迁移，先经过T₁-4，再经过T₂-3，如此顺序，可使T₁-4位置显色快，反应时间短。若是登革抗体阳性的时候，则可使包被的抗μ链单抗比抗人IgG单抗先行与待测液中的靶标物质反应，提高反应速率，显色速度也会提高。若IgM为阳性，即可立即判断出被测者被登革热病毒感染。这对于在临床判读结果上有更重要的意义。

所述两条检测线T₁-4、T₂-3从加液端6到手持端1依次设置。本发明可通过在金标纤维结合垫10处理方式上，即在所述金标纤维结合垫10上包被有胶体金标记的四个亚型的登革热病毒的其中1种-4种抗原，从而实现对血清型1、2、3及4型的登革热病毒IgG、IgM型抗体的快速检测。若在所述金标纤维结合垫10上包被有胶体金标记的四个亚型的登革热病毒的4种抗原，则可检测出总的登革热病毒IgG、IgM型抗体的快速检测。

本发明，优选在样品纤维垫8上对应的保护膜层上表面标有与所述检测线T₁-4，T₂-3平行的可视的MAX标志线5。用于提醒操作人员，操作时待测液不要超过MAX标志线5，以免引起假阳性。

本发明，优选所述样品纤维垫8的材料是玻璃纤维棉，所述吸水材料垫9的材料是粗纤维吸水纸，所述纤维素药膜7的材料是硝酸纤维素膜，所述金标纤维结合垫10的材料是吸附金标蛋白的玻璃纤维棉。这些材料配合使用，其吸水性及毛吸作用配合良好，保证本发明检测试纸条的检测速度和准确性。

本发明，优选保护膜层为胶带，使试纸条免受污染，成本低且效果好。

本发明，优选基板支撑层15为不吸水的塑料基板，不吸水的材料，避免支撑材料吸收待测液从而影响水平方向的迁移。

本发明，优选样品纤维垫8的上表面及所述金标纤维结合垫10的下表面设一层无纺布。用于适量吸取液体，起到一定的缓冲作用。

本发明，优选还包括外壳，所述外壳具有中空位，所述中空位与所述反应试剂载体吸附层及所述基板支撑层15形成的简易胶体金试纸条的形状大小相匹配，用于装载所述反应试剂载体吸附层，所述外壳上表面对应于样品纤维垫8及纤维素药膜7的位置分别设有加样窗和视窗。便于携带和保存。

实验例1.本发明试纸条的制备方法

试剂：四个亚型的登革病毒的4种抗原和抗登革热病毒抗原多克隆抗体，购于中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所；抗μ链单抗和抗人IgG单抗，购于加拿大ArtronBioResearch Inc.进口。

试纸条的制备程序如下

纤维素药膜的包被

步骤1.将抗登革病毒抗原作为对照线C，抗μ链单抗作为检测线T1、抗人IgG单抗作为检测线T2，三个试剂分别按照所需的浓度（范围1.5-2mg/ml），用20mM的PBS进行稀释。

步骤2.将配制好的上述三个试剂，安装C、T1、T2位置分别包被到硝酸纤维素膜上，然后干燥6小时，温度为30℃，湿度≤35%，从而制得纤维素药膜。

步骤3.金标纤维层的标记：

1、取40nm的胶体金溶液，按终浓度8-12μl/ml加入0.2M K₂CO₃，加入一定浓度的登革病毒1型抗原，放置室温反应15-30分钟，然后按照浓度20μl/ml加入20%BSA的溶液，用于饱和游离的胶体金。最后10000rpm，离心30分钟，去除上清液中未结合的蛋白质。用等体积的0.5m硼酸溶液（含1%Tween、5%蔗糖、1%水解BSA、1%水解酪蛋白、0.1%PVA）复溶沉淀的胶体金标记原液。

2、按照上述步骤，将登革病毒2型抗原、登革病毒3型抗原、登革病毒4型抗原，分别制备成相应的胶体金标记原液。

3、最后，将这四种胶体金标记原液分别按照10-20%浓度，用0.5m硼酸溶液进行稀释，从而配制成标记后的胶体金工作液。然后再将该工作液铺于30*30cm玻璃纤维垫上，干燥6小时，温度为30℃，湿度≤35%，从而制得金标垫。

4、将1-4型的胶体金标记原液混合配制的所制得的金标垫，可以检测出登革热病毒1-4型的样本。若是使用其中一种类型的胶体金标记原液配制所制得的金标垫，则仅能检测出相对应的类型的样本。

步骤4.试纸条的组装：

1、将塑料板平放在操作台上，贴上双面胶带。

2、撕掉双面胶带衬纸，在距塑料板上端30mm处贴上已包被有抗μ链单抗、抗人IgG单抗和抗鼠IgG多克隆抗体的硝酸纤维素膜。

3、将粗纤维吸水纸压硝酸纤维素膜上端2mm贴上，上端与塑料板上端取齐。

4、将金标垫压于硝酸纤维素药膜下端2mm。

5、将玻璃纤维垫压于金标垫上约一半，下端与塑料板下端取齐贴上。

6、将箭头胶带压硝酸纤维素膜1.5-2mm贴上。

7、将手持端胶带压粗纤维吸水纸贴上。

实施例2.使用方法及方法学对比实验

本产品使用方法：

取待测样本1μl，滴加到水平试纸条的加液端MAX线以下部分的样品纤维层上，再滴加2滴（80-100μl）样本稀释液于样品纤维层上。

对比1：产品对比

本发明产品与现有技术速检测登革热病毒IgG、IgM型抗体的产品相比具有快速，准确，特异，便捷的特点，并且能定性检测血清型1、2、3，4型四种登革病毒的IgG、IgM抗体，在速检测登革热病毒IgG、IgM型抗体前、后都不需要做必要的仪器清洗及保养工作，并且不要求本领域的专业人员来操作。

对照产品1：中山生物工程有限公司的《登革病毒IgM抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）》国药准字S20060103

对照产品2：中山生物工程有限公司的《登革病毒IgG抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）》国药准字S20060101

对照产品1和对照产品2的使用方法如下：

1、将检测样本用样品稀释液做1∶50稀释。(先将10μl血清加入到90μl的样品稀释液中混匀，再将1∶10的稀释血清用样品稀释液做1∶5稀释充分混匀。标本稀释后应在2小时内使用。)

2、将25倍浓缩洗涤液加入到720ml(96T)蒸馏水或去离子水中混匀备用。

3、取出已包被板，加入已稀释好的样本100μl/孔，同时设阴、阳性对照及空白对照各二孔(阴、阳性对照孔分别直接加入相应对照血清100μl/孔，空白对照加入洗涤液100μl/孔)，振荡均匀后，于37℃水浴箱温育40分钟。

4、温育后，甩去板内液体，用洗涤液注满各孔，静置一分钟后甩干，重复洗涤五次，扣干。

5、加入酶标记物50μl/孔(空白孔不加)，振荡均匀后，于37℃水浴箱温育30分钟。

6、温育后，甩去板内液体，用洗涤液注满各孔，静置一分钟后甩干，重复洗涤五次，扣干。

7、每孔加入底物A、B液各50μl，37℃避光显色10分钟，再加入终止液50μl/孔，于450nm测OD值。

对照产品3：申请号为200510086853.2发明专利公开一种检测登革热病毒IgG、IgM型抗体的胶体金检测试纸条

对照产品3使用方法：

取150-200μl血清滴加至加样区，样品中的液体上行，若30秒内未见液体爬行，则再加1-2滴生理盐水或PBS缓冲液。

对比结果如表1：

由上述数据显示，本发明产品，样本用量少，无需使用仪器设备，可直接肉眼判读结果，检测时间短，储存条件宽泛，可在室温条件下储存等优势。

对比2：方法学对比

本发明产品与市场上用酶联免疫方法学，检测登革热病毒IgG、IgM型抗体的产品相比，都具备准确性和灵敏度高的特点，但本发明产品同时还具备快速、便捷、操作简单的特点。并且本发明可同时一次性判读出IgM或IgG阳性结果，而对于酶联免疫法，则只能一次性判读出单一的IgM或IgG阳性结果。且判读结果时间长。

对照产品1：中山生物工程有限公司的《登革病毒IgM抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）》国药准字S20060103

对照产品2：中山生物工程有限公司的《登革病毒IgG抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）》国药准字S20060101

对比结果如表2：

实施例3

本发明与申请号为200510086853.2发明专利公开一种检测登革热病毒IgG、IgM型抗体的胶体金检测试纸条相比，本发明产品具有如下优点：

1、样本量，本发明产品要比申请号为200510086853.2发明专利公开一种检测登革热病毒IgG、IgM型抗体的胶体金检测试纸条，用量少很多，节省资源，节约成本。

对比数据如下：

项目	对照产品	本发明产品
			样本量	150-200μl	1μl

2、本发明可通过胶体金制备，制作成单一一种型的胶体金试剂或者1-4型的混合胶体金试剂，即可区分出检测样品的血清型，而申请号为200510086853.2发明专利公开一种检测登革热病毒IgG、IgM型抗体的胶体金检测试纸条的产品，则无法区分出1-4种型样本情况。

对比数据如下：

本发明试纸条采用抗体捕获法与免疫胶体金技术相结合快速快速检测人血清、血浆或全血中的登革热病毒IgG、IgM型抗体，能定性检测血清型1、2、3，4型四种登革病毒的IgG、IgM抗体，用于临床实验室对具有持续发烧的登革感染症状或接触史的患者的辅助性诊断；本发明试纸条操作简单，使用方便，拿来即用，不需要本领域的专业人员，能够满足不同层次人员的需要，并且保证检测的灵敏性、准确性、特异性和高效率，并且本发明用样量少，节省资源，储存条件宽泛，可同时一次性判读出登革热病毒IIgG或IgM型抗体的阳性结果。

Claims (8)

1.一种用于快速检测登革热病毒IgG、IgM型抗体的胶体金试纸条，在高度方向上包括基板支撑层、反应试剂载体吸附层，所述反应试剂载体吸附层固定在所述基板支撑层上；

所述反应试剂载体吸附层从加液端到手持端依次设有样品纤维垫，金标纤维结合垫，纤维素药膜，手持端吸水材料垫；

在所述样品纤维垫、金标纤维结合垫和手持端吸水材料垫上覆盖有保护膜层，

所述纤维素药膜从加液端到手持端依次设有质控线C、检测线T₁，T₂，所述质控线C和检测线T₁，T₂相互平行且与所述胶体金试纸条长度方向相垂直，

其特征在于，在所述金标纤维结合垫上包被有1种至4种抗原，所述抗原选自胶体金标记的四个亚型的登革热病毒的抗原；所述质控线C上包被有抗登革热病毒抗原多克隆抗体，所述检测线T₁上包被有抗μ链单抗，所述检测线T₂上包被有抗人IgG单抗。

2.根据权利要求1所述的胶体金试纸条，其特征在于，所述两条检测线T₁、T₂从加液端到手持端依次设置。

3.根据权利要求1所述的胶体金试纸条，其特征在于，在所述样品纤维垫上对应的保护膜层上表面标有与所述检测线T₁，T₂平行的可视的MAX标志线。

4.根据权利要求1所述的胶体金试纸条，其特征在于，所述样品纤维垫的材料是玻璃纤维棉，所述吸水材料垫的材料是粗纤维吸水纸，所述金标纤维结合垫的材料是吸附金标蛋白的玻璃纤维棉。

5.根据权利要求1所述的胶体金试纸条，其特征在于，所述保护膜层为胶带。

6.根据权利要求1所述的胶体金试纸条，其特征在于，所述基板支撑层为不吸水的塑料基板。

7.根据权利要求1所述的胶体金试纸条，其特征在于，还包括外壳，所述外壳具有中空位，所述中空位与所述反应试剂载体吸附层及所述基板支撑层形成的简易胶体金试纸条的形状大小相匹配，用于装载所述反应试剂载体吸附层，所述外壳上表面对应于样品纤维垫及纤维素药膜的位置分别设有加样窗和视窗。

8.一种用于快速检测登革热病毒IgG、IgM型抗体的试剂盒，其特征在于：包括有上述权利要求1-7中任一胶体金试纸条和样品稀释用具。

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