CN107101999A - 半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法 - Google Patents

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Abstract

半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，涉及植物成分含量检测技术领域。利用化学显色原理目视颜色的差异性，实现大麻植物中THC含量的快速识别。取大麻鲜叶、烘干的叶片、大麻表皮、大麻花蕊等大麻植株各个部位样品3～5mm，放置于已处理的显色板上，滴加显色剂1～3滴，观察样品周围斑点颜色及斑点大小，若样品周围斑点颜色为淡黄色、浅粉色或者无色，则样品中THC含量明显低于0.3％；若样品周围颜色为红色或者深红色，则样品中THC含量明显高于0.3％。该方法具有快速、操作简单、检测成本低、方法普适性好、样品处理简单等优点，可供大麻作物生长现场及实验室进行快速筛查，本发明具有良好的应用前景。

Description

半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法
技术领域
本发明属于植物成分含量检测技术领域，具体涉及一种半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法。
背景技术
大麻属于木兰纲(Magnoliopsida)荨麻目(Urticales)大麻科(Cannabina ceae)大麻属(Cannabis)大麻种(Cannabis sativa L.)一年生草本植物。大麻植物活性成分包括大麻酚和非大麻酚类化合物，其中大麻酚类化合物数量及生物活性成分较多。大麻酚类化合物主要包括四氢大麻酚(Tetrahydrocannabinol，THC)、大麻二酚(Cannabidiol,CBD)、大麻酚(Cannabinol，CBN)及大麻萜酚(Cannabichromene，CBC)等成分。目前，已有很多国家在麻类作物开发利用方面进行了深入的研究，涉及麻纺、造纸、建材、麻塑、吸污、食用、医药等诸多领域。我国麻类作物种类众多种植地域覆盖面广，是继粮、棉、油、菜之后的又一大作物群，因此推广和普及麻类作物的开发及产品深加工具有深远意义。但是大麻酚类化合物中THC成分具有致幻作用，易于被不法分子用来提炼毒品造成社会危害。按照国际禁毒公约规定，大麻植株中THC含量低于0.3％的品种称为纤维大麻(Hemp),高于0.3％的品种称为药用(毒品)大麻(Marijuana.Hashish)。
近年来我国在大麻种植利用及产品深加工方面不断进展，但是随之而来的大麻毒品(THC)相关案件不断增加，大麻推广种植与THC毒品案件增加的矛盾日益增强。因此，迫切需要研发一种快速检测THC含量的识别方法，用于大麻种植管理中快速检测植株中THC含量是否低于0.3％，为大麻禁(限)种及执法管理部门监管提供必要的监控手段，同时为工业大麻育种研究工作提供快速而又准确的筛选方法。
大麻酚类化合物成分复杂数量众多，给大麻酚类化合物定性定量分析造成了一定的困难。目前国内外文献中有基于化学显色原理，利用薄层色谱技术进行大麻酚类化合物分析检测的方法，例如郭孟壁提供的一种检测方法(一种半定量快速检测大麻植物中Δ9-THC含量的方法[P].中国：102175813B，2011.11.16)，判定其是否为工业大麻或药用(毒品)大麻；有基于气相色谱法、液相色谱法进行准确定量的分析检测方法，判定其是否为工业大麻或药用(毒品)大麻。然而上述方法具有检验速度慢、分析操作繁琐、专业性强、检验成本高等缺点，这些方法都不能满足大麻植物育种或监管中，大批量测试大麻植株THC含量是否低于0.3％的要求。
发明内容
本发明目的是提供了一种半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，利用化学显色原理技术快速准确的实现大麻植株中THC含量快速筛选。
本发明通过以下技术方案实现：
一种半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，包括如下步骤：
步骤1、显色板的制备：将滤纸裁剪成每张尺寸20×20cm，将裁剪好的滤纸完全浸入饱和碳酸钠溶液或饱和碳酸氢钠溶液或饱和磷酸钠溶液中，浸泡时间2～5min，将浸泡好的滤纸取出后自然晾干，将已晾干的滤纸用铅笔从一端开始等分为2×2cm的方格，并在方格上用数字进行标号，制成显色板待用；
步骤2、显色剂的配置：称取一定量的快蓝B盐或快蓝BB盐溶解于水溶性有机溶剂中，配置成浓度为0.002～0.008g/ml的溶液，置于棕色瓶中保存，待用；
步骤3、待测样品的取样：取3～5mm长度的待测样品，样品质量0.1～1g，直接置于显色板中一个方格中心位置处或置于研钵中研磨1～2min后、取出研磨后的样品均匀涂于步骤1制备的显色板中一个方格中心位置处，待测；
步骤4、样品的显色测试：将步骤3显色板上制备的待测样品上滴加步骤2制备的显色剂，滴加量0.05～0.2ml，滴加后2～10s，目视观察样品周围显色板的颜色；
步骤5、样品的含量判定：根据步骤4中显色板上样品周围显示的颜色不同，判定大麻植物中四氢大麻酚的含量，样品周围颜色为淡黄色或者浅粉色或者无色，判定样品中四氢大麻酚含量低于0.3％；样品周围斑点颜色为红色或者深红色，判定样品中四氢大麻酚含量高于0.3％。
本发明所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，步骤1中的滤纸是定性滤纸或者定量滤纸。
本发明所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，步骤2中的水溶性有机溶剂是甲醇、乙醇、二甲基甲酰胺中的一种。
本发明所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，步骤2中的显色剂浓度为0.002g/ml、0.004g/ml、0.006g/ml、0.008g/ml中的一种。
本发明所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，步骤2中的乙醇溶剂为95％的乙醇溶剂。
本发明所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，步骤3中的待测样品是大麻新鲜叶片、烘干后的大麻叶片、大麻植株茎秆、大麻种子、大麻种皮、大麻花蕊中的一种。
本发明所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，步骤3中的研钵是玛瑙研钵。
本发明所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，步骤5中参照比色卡色系进行颜色判断，色度弱于GB5.6R7/6.8 0263标准，判定样品中四氢大麻酚含量低于0.3％。
本发明检测效率高、适用范围广、操作简单、效率高、检测成本低，特别适合大麻作物中THC含量大批量检测。本发明检测准确率能够达到95％以上。
相对于现有技术本发明具有以下优点：
样品测试范围普适性好，大麻鲜叶、烘干的叶片、大麻表皮、大麻花蕊等大麻植株各个部位均可以采用本发明方法进行快速检测；
测试方法简单，本发明适用于大麻培育研究工作或监管部门进行THC含量大批量快速检测，操作方法简单易学不需要专业培训。尤其适合对生长期新鲜大麻植物中THC含量测试，避免了传统样品前处理方法中烘干的步骤，大大提高了工作效率；
检测时间短，单次检测过程在5秒内完成，特别适合大麻植物田间批量测试，可以实现对大麻田间单株植物及植株中不同部位进行THC含量靶向检测；
本发明能实现对大麻植物进行半定量快速检测，既可以进行实验室快速筛查，又可以在大麻植物种植现场进行快速筛查。
附图说明
图1为利用具体实施方式一所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法检测36组大麻植物样品的对比照片。
具体实施方式
具体实施方式一：
一种半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，包括如下步骤：
步骤1、显色板的制备：将定性滤纸裁剪成每张尺寸20×20cm，将裁剪好的滤纸完全浸入饱和碳酸钠溶液或饱和碳酸氢钠溶液或饱和磷酸钠溶液中，浸泡时间2min，将浸泡好的滤纸取出后自然晾干，将已晾干的滤纸用铅笔从一端开始等分为2×2cm的方格，并在方格上用数字进行标号，制成显色板待用；
步骤2、显色剂的配置：称取一定量的快蓝B盐溶解于水溶性有机溶剂中，配置成浓度为0.002g/ml的溶液，置于棕色瓶中保存，待用；
步骤3、待测样品的取样：取3mm长度的待测样品，样品质量0.1g，直接置于显色板中一个方格中心位置处或置于研钵中研磨1min后、取出研磨后的样品均匀涂于步骤1制备的显色板中一个方格中心位置处，待测；
步骤4、样品的显色测试：将步骤3显色板上制备的待测样品上滴加步骤2制备的显色剂，滴加量0.2ml，滴加后5s，目视观察样品周围显色板的颜色；
步骤5、样品的含量判定：根据步骤4中显色板上样品周围显示的颜色不同，判定大麻植物中四氢大麻酚的含量，样品周围颜色为淡黄色或者浅粉色或者无色，判定样品中四氢大麻酚含量低于0.3％；样品周围斑点颜色为红色或者深红色，判定样品中四氢大麻酚含量高于0.3％。
本实施方式所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，步骤2中的水溶性有机溶剂是95％的乙醇溶剂。综合考虑安全、环保、挥发性等因素，本实施方式采用95％的乙醇溶剂；调节显色剂溶液的pH值，pH值为酸性或者碱性显色效果差异性不强，不利于直接目视观察。
本实施方式所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，步骤3中的待测样品是大麻新鲜叶片。
本实施方式所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，步骤3中的研钵是玛瑙研钵。
本实施方式所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，步骤5中参照比色卡色系进行颜色判断，色度弱于GB5.6R7/6.8 0263标准，判定样品中四氢大麻酚含量低于0.3％。
利用本实施方式进行大麻新鲜叶片测试，测试取不同THC含量的大麻植物样品35份，采用本实施方式所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法操作并作出含量判定，与HPLC仪器准确定量分析结果比较，准确率达到95％以上，测试结果如表1所示，测试得到的显色图片如附图1所示。附图1中比色卡的色度从上到下依次为：GB9.4R8.5/1.8A0261，GB8.1R7.5/3.6B0262、GB5.6R7/6.8C10263、GB6.9R5/6C10264、GB6.3R6/6.4C10265。
表1大麻植物样品THC含量判定结果
注:+为阳性(样品THC含量>0.3％)，-为阴性(样品THC含量>0.3％)，*表示误判结果。

Claims (8)

1.一种半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤1、显色板的制备：将滤纸裁剪成每张尺寸20×20cm，将裁剪好的滤纸完全浸入饱和碳酸钠溶液或饱和碳酸氢钠溶液或饱和磷酸钠溶液中，浸泡时间2～5min，将浸泡好的滤纸取出后自然晾干，将已晾干的滤纸用铅笔从一端开始等分为2×2cm的方格，并在方格上用数字进行标号，制成显色板待用；
步骤2、显色剂的配置：称取一定量的快蓝B盐或快蓝BB盐溶解于水溶性有机溶剂中，配置成浓度为0.002～0.008g/ml的溶液，置于棕色瓶中保存，待用；
步骤3、待测样品的取样：取3～5mm长度的待测样品，样品质量0.1～1g，直接置于显色板中一个方格中心位置处或置于研钵中研磨1～2min后、取出研磨后的样品均匀涂于步骤1制备的显色板中一个方格中心位置处，待测；
步骤4、样品的显色测试：将步骤3显色板上制备的待测样品上滴加步骤2制备的显色剂，滴加量0.05～0.2ml，滴加后2～10s，目视观察样品周围显色板的颜色；
步骤5、样品的含量判定：根据步骤4中显色板上样品周围显示的颜色不同，判定大麻植物中四氢大麻酚的含量，样品周围颜色为淡黄色或者浅粉色或者无色，判定样品中四氢大麻酚含量低于0.3％；样品周围斑点颜色为红色或者深红色，判定样品中四氢大麻酚含量高于0.3％。
2.根据权利要求1所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，其特征在于：步骤1中的滤纸是定性滤纸或者定量滤纸。
3.根据权利要求1所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，其特征在于：步骤2中的水溶性有机溶剂是甲醇、乙醇、二甲基甲酰胺中的一种。
4.根据权利要求1所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，其特征在于：步骤2中的显色剂浓度为0.002g/ml、0.004g/ml、0.006g/ml、0.008g/ml中的一种。
5.根据权利要求3所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，其特征在于：步骤2中的乙醇溶剂为95％的乙醇溶剂。
6.根据权利要求1所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，其特征在于：步骤3中的待测样品是大麻新鲜叶片、烘干后的大麻叶片、大麻植株茎秆、大麻种子、大麻种皮、大麻花蕊中的一种。
7.根据权利要求1所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，其特征在于：步骤3中的研钵是玛瑙研钵。
8.根据权利要求1所述的半定量快速识别大麻植物中四氢大麻酚含量的方法，其特征在于：步骤5中参照比色卡色系进行颜色判断，色度弱于GB5.6R7/6.8 0263标准，判定样品中四氢大麻酚含量低于0.3％。
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