CN103091422B - 一种检测水产品中硝基酚钠残留量的方法 - Google Patents
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Abstract
一种检测水产品中硝基酚钠残留量的方法，属于水产品检测技术领域，它包括样品提取和净化、标准曲线的绘制、仪器条件及定性与定量。本发明质谱仪选择APCI离子源，邻硝基酚钠的灵敏度提高了数十倍；采用中性氧化铝净化，可以有效去除样品中脂肪等干扰物质，缩短浓缩时间；浓缩时加入氢氧化钠，使邻硝基酚钠在样品中始终以钠盐形式存在，保证了邻硝基酚钠的回收率在70%以上；浓缩后加入磷酸，可以中和过量的氢氧化钠，使待净化液的pH保持在3左右，能够满足上固相萃取柱的要求。本发明填补了目前水产品和其他动物源性食品中没有硝基酚钠残留量检测方法的空白，对准确科学的评价水产品质量安全及制定水产品中有害物质的新标准具有重要意义。
Description
技术领域
本发明属于水产品检测技术领域，是一种用高效液相色谱-串联质谱法（LC/APCI-MS/MS）测定水产品中硝基酚钠残留量的方法。
背景技术
20世纪60年代日本旭化学工业株式会社最先发现的高效植物生长调节剂，由对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠混配而成，它能迅速渗透到植物体内，调节和控制植物体内的核酸、蛋白质及酶的合成，促进植物原生质流动，增加细胞活力，从而促进植物的萌芽、发根、生长和结果。其在农业上的应用不可避免地将随雨水等汇集于养殖水体中，从而导致其在水产品中残留。同时，硝基酚钠作为一种新型鱼虾促生长药物添加剂，在预防和治疗疾病方面具有较好的疗效。该药物在东南亚某些国家广泛用于水产养殖业中。硝基酚钠还应用在畜牧上，在提高肉、蛋、毛、皮产量和质量的同时，还能增强动物的免疫能力，预防多种疾病。此外，硝基酚钠还是重要的多用途工业有机化合物，作为原料和中间物被广泛应用于火药、药物、杀虫剂、色素、染料、木材、防腐剂、橡胶等化学工业中，具有致畸或致癌作用，并可在食物链中积聚。这些化合物随工业废水、农业径流水、生活污水流入水体，最终进入海洋，对海洋水生生物的生长、发育和繁殖构成威胁，并且对人体健康有潜在的危害。
硝基酚钠是水体中常见的有机物质，它们在水中超过一定量时就会危及鱼虾及它们的饵料生物，同时也是危害环境和人类健康的污染物。美国环保局（EPA）已将邻硝基苯酚、对硝基苯酚列为“优先控制污染物”，并限制自然水体中它们的质量浓度不大于10μg/L。我国农业部公告第193号食品动物禁用的兽药及其它化合物清单将硝基酚钠列为禁用药物。目前，国家及行业还没有水产品中硝基酚钠残留量的测定方法。我国行业标准SN 0198-93《出口蔬菜中复硝盐残留量检验方法》规定了出口番茄中硝基酚钠残留量的测定方法，采用的是气相色谱法，其中邻硝基苯酚钠的测定低限为0.01mg/kg；对硝基苯酚钠为0.02mg/kg；5-硝基邻甲氧基苯酚钠为0.01mg/kg。
关于酚类化合物的分析方法通常采用薄层紫外分光光度法（TLC-UV）、高效液相色谱法、气相色谱法。TLC-UV法的准确度较低，精密度不理想，操作步骤繁琐，耗时费力；高效液相色谱法采用紫外检测器检测，干扰较多，灵敏度较差，无法满足残留检测的要求。硝基酚钠的物理化学性质不同于硝基苯酚，硝基酚钠属于强极性化合物，采用气相色谱法需先将其衍生化降低极性后，再进行测定，操作过程较为繁琐。采用常规的配有ESI源的液相色谱-串联质谱仪测定，邻硝基酚钠的灵敏度很差。而本发明采用配有APCI源的液相色谱-串联质谱仪测定，可以极大的提高邻硝基酚钠的灵敏度，有效将三种目标化合物分离并进行定性和定量测定。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种检测水产品中硝基酚钠残留量的方法，本方法对硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠的检出限为1μg/kg，邻硝基酚钠的检出限为2μg/kg；对硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠定量限为2μg/kg,邻硝基酚钠的定量限为5μg/kg；对硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠在2μg/kg～200μg/kg添加浓度范围内，回收率为70%～110%，邻硝基酚钠在5μg/kg～200μg/kg添加浓度范围内，回收率为70%～110%；本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤20%。
本发明是按照以下操作方法完成的：
一种检测水产品中硝基酚钠残留量的方法，用乙腈提取样品中的对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠，提取液经中性氧化铝去脂，碱性条件下浓缩后，经HLB固相萃取柱净化，用配有APCI源的液相色谱-串联质谱仪测定，对水产品中的对硝基酚钠、邻硝基酚钠和5-硝基邻甲氧基苯酚钠残留量进行准确的定性和定量分析。
一种检测水产品硝基酚钠残留量的方法，它包括样品提取、净化、基质加标标准曲线的绘制、实验所用的仪器条件和定性与定量，具体步骤如下：
（1）样品提取
样品用乙腈超声波提取，提取液过中性氧化铝柱，收集滤液，滤液中加入氢氧化钠溶液，减压浓缩，再加入磷酸，离心，取上清液备用。
（2）净化
将步骤（1）的上清液转移至HLB固相萃取柱中，用水淋洗，抽干后，用甲醇洗脱，收集洗脱液于容量瓶中，并用含0.1%甲酸的乙酸铵水溶液定容，涡旋混合，过0.22μm有机相微孔滤膜后，进LC-MS/MS分析。
（3）基质加标标准曲线的绘制
分别称取5g空白试样，准确加入相应量的标准工作液，使对硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠最终溶液浓度均分别为0.001μg/mL、0.005μg/mL0.010μg/mL、0.050μg/mL、0.100μg/mL、0.200μg/mL，邻硝基酚钠最终溶液浓度为0.002μg/mL、0.005μg/mL、0.010μg/mL、0.050μg/mL、0.100μg/mL、0.200μg/mL，按照上述（1）和（2）操作步骤进行提取和净化，进LC-MS/MS分析，绘制标准曲线。
（4）实验所用的仪器条件
色谱条件如下：
a)色谱柱：C18反相色谱柱，2.1mm×150mm，5μm；
b)柱温：室温；
c)流速：0.5mL/min；
d)进样量：25μL；
e)流动相：A：甲醇，B：水，梯度洗脱程序见表1。
表1流动相梯度洗脱条件
| 时间/（min） | A甲醇/（%） | B水/（%） |
| 0 | 30 | 70 |
| 5 | 80 | 20 |
| 6 | 30 | 70 |
| 10 | 30 | 70 |
质谱条件如下：
a)离子化模式：大气压化学电离源（APCI）；
b)扫描方式：负离子扫描；
c)放电电流：4μA；
d)喷雾温度：400℃；
e)鞘气压力：45psi；
f)辅助气流量：5psi；
g)离子传输毛细管温度：250℃；
h)源内碰撞诱导解离电压：4v；
i)扫描模式：选择反应监测（SRM），选择反应监测母离子、子离子和碰撞能量见表2；
j)碰撞气压力：氩气，1.5mTorr。
表2选择反应监测母离子、子离子和碰撞能量
（5）定性与定量
①定性测定
在同样测试条件下，试样液中目标化合物的保留时间与标准工作液中目标化合物的保留时间之比，偏差在±2.5%以内，且检测到的定性离子的相对丰度，应与浓度相近的标准工作液中定性离子相对丰度一致，其偏差应符合表3要求。
表3基峰与次强碎片离子丰度比要求
| 次强碎片离子相对丰度/（%） | 允许偏差/（%） |
| ＞50 | ±20 |
| 20～50（不含20） | ±25 |
| 10～20（不含10） | ±30 |
| ≤10 | ±50 |
②定量测定
取试样溶液和相应的标准工作液，作多点校准，按外标法以峰面积定量。标准溶液及试样溶液中对硝基酚钠、邻硝基酚钠和5-硝基邻甲氧基苯酚钠的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。
③空白实验
除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。
④结果计算和表述
按式（a）计算试样中对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠残留量：
式中：
X-试样中对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠的残留量，μg/kg；
C-试样溶液中对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠的浓度，ng/mL；
V-最终样液定容体积，mL；
f-稀释倍数；
m—试样量，g。
注：计算结果需扣除空白值。测定结果用两次平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。
⑤方法灵敏度、准确度和精密度
灵敏度：本方法对硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠的检出限为1μg/kg，邻硝基酚钠的检出限为2μg/kg。对硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠定量限为2μg/kg,邻硝基酚钠的定量限为5μg/kg。
准确度：本方法对硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠在2μg/kg～200μg/kg添加浓度范围内，回收率为70%～110%，邻硝基酚钠在5μg/kg～200μg/kg添加浓度范围内，回收率为70%～110%。
精密度：本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤20%。
本发明与现有技术相比的有益效果是：
1.本发明采用高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中硝基酚钠残留量，流动相使用甲醇和水，配制简单，定容溶液中加入甲酸，使硝基酚钠呈硝基苯酚形式存在而可以保留在C18反相色谱柱上，离子源使用APCI源，与目前常用的ESI源相比，可以使硝基酚钠中具有挥发性的邻硝基苯酚的灵敏度提高数十倍。
2.提取液使用乙腈，可以有效去除蛋白质及部分脂肪类干扰物质；在样品提取过程中采用中性氧化铝去脂，可以有效去除样品基质中脂肪等干扰物质，缩短下一步的浓缩时间，避免浓缩时样品的损失；在浓缩时加入氢氧化钠，使邻硝基酚钠在样品基质中始终以钠盐稳定态形式存在，保证了邻硝基酚钠的回收率在70%以上；浓缩后加入磷酸，可以中和过量的氢氧化钠，并使待净化液的pH保持在3左右，能够满足上固相萃取净化柱的要求。
3.本方法填补了目前我国只有番茄中复硝盐测定方法，而没有水产品和其他动物源性产品中硝基酚钠测定方法的空白。本发明采用液相色谱-串联质谱法，能够排除干扰准确定性，同时还能准确定量，而现有的检测方法采用的是气相色谱法，衍生化后容易产生本底干扰，且在定性方面有缺陷。与现有的技术方法相比，本发明在定性、定量、灵敏度和准确度方面都具有明显的优势。
附图说明
图1：A．总离子流图；B.对硝基酚钠和邻硝基酚钠的选择离子流图：1.对硝基酚钠，2.邻硝基酚钠；C.5-硝基邻甲氧基苯酚钠的选择离子流图：3.5-硝基邻甲氧基苯酚钠。
具体实施方式
下面通过实施例详细叙述本发明的技术内容：
本发明为利用高效液相色谱-串联质谱法分析水产品中硝基酚钠残留量的方法，用乙腈提取样品中的对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠，提取液经中性氧化铝去脂，碱性条件下浓缩后，经HLB固相萃取柱净化，用配有APCI源的液相色谱-串联质谱仪测定，对水产品中的对硝基酚钠、邻硝基酚钠和5-硝基邻甲氧基苯酚钠残留量进行准确的定性和定量分析。
水产品种类繁多，如鱼类、虾类、蟹类、鳖等，在其生长过程中由于受到饲料、水体、土壤等环境因素及人为用药等因素的影响，硝基酚钠不可避免会在水产品中富集和残留，是影响其食用安全性评价的关键因素。因此，我们选择水产品中最具有代表性的鳗鱼、对虾、河蟹作为验证的实施例。
实施例1鳗鱼中硝基酚钠残留量的测定
1.本实施例选用的仪器及设备：LC/APCI-MS/MS液相色谱-串联质谱仪
（1）HPLC部分（Thermo Fisher公司，型号Surveyor），使用MS高压液相泵，配有自动进样器，柱温箱，使用CAPCELL PAK C18反相色谱柱，150mm×2.1mm,5μm。
（2）TSQ Quantum Access质谱仪（Thermo Fisher公司）：配有APCI离子源，三重四极杆，碰撞池，真空系统，气路控制系统；
（3）超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司，型号KQ-600DE）；
（4）高速冷冻离心机:10000r/min（HITACHI，型号CR22G）；
（5）高速离心机：4000r/min（Thermo Fisher）；
（6）涡旋混合器(Talboys)；
（7）旋转蒸发仪（德国Heidoplh公司，型号Laborota4000）；
（8）固相萃取装置（SUPELCO）；
（9）分析天平：感量0.00001g（德国赛多利斯公司，型号CP225D）；
（10）天平：感量0.01g(德国赛多利斯公司，型号CPA1003P)；
（11）0.22μm水相微孔滤膜（艾杰尔）；
（12）纯度≥99.99%的氮气；
（13）纯度≥99.99%的氩气。
2．配制标准溶液与试剂
（1）乙腈(Merck)。
（2）甲醇(Merck)。
（3）乙酸铵(Merck)。
（4）甲酸（BIOSZUNE LIFE SCIENCES DEP）。
（5）氢氧化钠：优级纯（国药集团化学试剂有限公司）。
（6）磷酸：85%，优级纯（国药集团化学试剂有限公司）。
（7）中性氧化铝，100-200目，层析用(Fluka)。
（8）10mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）：准确称取0.771g乙酸铵，加入1mL甲酸，用水溶解并定容至1L，混匀后备用。
（9）10mol/L氢氧化钠溶液：准确称取40g氢氧化钠，用水溶解并定容至100mL。
（10）对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠标准储备液：分别称取对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠约10.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，配成浓度分别为1.0mg/mL的标准储备液，-20℃冷冻保存。
（11）硝基酚钠混合标准工作液：分别准确移取1mL对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠标准储备液，用甲醇稀释并定容至100mL，配成浓度为10μg/mL的混合标准工作液，2℃~8℃冷藏保存。
（12）中性氧化铝柱：玻璃层析柱（
2号砂芯）中装填2cm中性氧化铝，使用前用5mL乙腈活化。
（13）HLB固相萃取柱（60mg，3mL）（Waters公司）：使用前依次用5mL甲醇、5mL水活化。
所用的试剂除特殊说明外均为色谱纯，整个实验过程中用水均为超纯水。
3．样品处理的步骤
（1）提取
称取匀浆后的鳗鱼样品5g，置于50mL离心管中，加入乙腈10mL，涡旋混合1min，超声提取10min，4000r/min离心10min，取上清液于另一50mL离心管中。残渣用10mL乙腈重复提取一遍，合并上清液，过中性氧化铝柱，滤液接收于50mL梨形瓶中，用5mL乙腈淋洗中性氧化铝柱，合并淋洗液于50mL梨形瓶中。在梨形瓶中加入10mol/L氢氧化钠溶液200μL，于40℃旋转蒸发至约2mL，加入磷酸200μL后，转移至15mL塑料离心管中，用8mL水分3次洗涤梨形瓶，洗涤液合并至15mL塑料离心管中，于10000r/min离心5min，取上清液，备用。
（2）净化
将上清液转移至HLB固相萃取柱中，用3mL水淋洗，抽干后，用2.5mL甲醇洗脱，整个萃取过程流速小于每秒一滴。收集洗脱液于5mL容量瓶中，并用10mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)定容，涡旋混合，过0.22μm有机相微孔滤膜后，进LC-MS/MS分析。
（3）基质加标标准曲线的绘制
分别称取5g鳗鱼空白试样，准确加入相应量的标准工作液，使对硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠最终溶液浓度均分别为0.001μg/mL、0.005μg/mL0.010μg/mL、0.050μg/mL、0.100μg/mL、0.200μg/mL，邻硝基酚钠最终溶液浓度为0.002μg/mL、0.005μg/mL、0.010μg/mL、0.050μg/mL、0.100μg/mL、0.200μg/mL，按照上述操作步骤进行提取和净化，进LC-MS/MS分析，绘制标准曲线。
4.实验所用的仪器条件
色谱条件如下：
a)色谱柱：CAPCELL PAK C18MGⅡ反相色谱柱，2.1mm×150mm，5μm；
b)柱温：室温；
c)流速：0.5mL/min；
d)进样量：25μL；
e)流动相：A：甲醇，B：水，梯度洗脱程序见表1。
质谱条件如下：
a)离子化模式：大气压化学电离源（APCI）；
b)扫描方式：负离子扫描；
c)放电电流：4μA；
d)喷雾温度：400℃；
e)鞘气压力：45psi；
f)辅助气流量：5psi；
g)离子传输毛细管温度：250℃；
h)源内碰撞诱导解离电压：4v；
i)扫描模式：选择反应监测（SRM），选择反应监测母离子、子离子和碰撞能量见表2；
j)碰撞气压力：氩气，1.5mTorr。
5）样品检测与结果计算
(1)定性测定
在同样测试条件下，试样液中目标化合物的保留时间与标准工作液中目标化合物的保留时间之比，偏差在±2.5%以内，且检测到的定性离子的相对丰度，应与浓度相近的标准工作液中定性离子相对丰度一致，其偏差应符合表3要求。
（2）定量测定
取试样溶液和相应的标准工作液，作多点校准，按外标法以峰面积定量。标准溶液及试样溶液中对硝基酚钠、邻硝基酚钠和5-硝基邻甲氧基苯酚钠的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。标准溶液和试样溶液特征离子质量色谱图和质谱图参见图1。
（3）空白实验
除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。
（4）结果计算和表述
采用Xcalibur软件对数据进行处理，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，然后对样品峰进行分析处理，即可得到待测样液中硝基酚钠的浓度，按式（a）计算试样中对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠残留量：
式中：
X-试样中对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠的残留量，μg/kg；
C-试样溶液中对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠的浓度，ng/mL；
V-最终样液定容体积，mL；
f-稀释倍数；
m—试样量，g。
注：计算结果需扣除空白值。测定结果用两次平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。
6.结果
本方法对硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠的检出限为1μg/kg，邻硝基酚钠的检出限为2μg/kg。对硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠定量限为2μg/kg,邻硝基酚钠的定量限为5μg/kg。本方法对硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠在2μg/kg～200μg/kg添加浓度范围内，回收率为70%～110%，邻硝基酚钠在5μg/kg～200μg/kg添加浓度范围内，回收率为70%～110%。本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤20%。
对虾、河蟹中硝基酚钠残留量的测定方法与鳗鱼相同，鳗鱼、对虾和河蟹加标回收率和精密度的测定结果见表4。
表4鳗鱼、对虾和河蟹加标回收率和精密度的测定结果
Claims (2)
1.一种检测水产品中硝基酚钠残留量的方法，其特征在于其步骤如下：用乙腈提取样品中的对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠，提取液经中性氧化铝去脂，碱性条件下浓缩后，再加入磷酸，离心，取上清液经HLB固相萃取柱净化，用配有APCI源的液相色谱-串联质谱仪测定，对水产品中的对硝基酚钠、邻硝基酚钠和5-硝基邻甲氧基苯酚钠残留量进行准确的定性和定量分析；所述的配有APCI源的液相色谱-串联质谱仪的仪器条件包括
（1）色谱条件如下：
a)色谱柱：C18反相色谱柱，2.1mm×150mm，5μm；
b)柱温：室温；
c)流速：0.5mL/min；
d)进样量：25μL；
e)流动相：A：甲醇，B：水，梯度洗脱程序见表1；
表1流动相梯度洗脱条件
（2）质谱条件如下：
a)离子化模式：大气压化学电离源，简称APCI；
b)扫描方式：负离子扫描；
c)放电电流：4μA；
d)喷雾温度：400℃；
e)鞘气压力：45psi；
f)辅助气流量：5psi；
g)离子传输毛细管温度：250℃；
h)源内碰撞诱导解离电压：4v；
i)扫描模式：选择反应监测，选择反应监测母离子、子离子和碰撞能量见表2；
j)碰撞气压力：氩气，1.5mTorr；
表2选择反应监测母离子、子离子和碰撞能量
所述的定性与定量分析方法如下：
①定性测定
在同样测试条件下，试样液中目标化合物的保留时间与标准工作液中目标化合物的保留时间之比，偏差在±2.5%以内，且检测到的定性离子的相对丰度，应与浓度相近的标准工作液中定性离子相对丰度一致，其偏差应符合表3要求；
表3基峰与次强碎片离子丰度比要求
②定量测定
取试样溶液和相应的标准工作液，作多点校准，按外标法以峰面积定量；标准溶液及试样溶液中对硝基酚钠、邻硝基酚钠和5-硝基邻甲氧基苯酚钠的响应值均应在仪器检测的线性范围之内；
③空白实验
除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行；
④结果计算和表述
按式（a）计算试样中对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠残留量：
式中：
X—试样中对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠的残留量，μg/kg；
C—试样溶液中对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠的浓度，ng/mL；
V—最终样液定容体积，mL；
f—稀释倍数；
m—试样量，g。
2.一种检测水产品中硝基酚钠残留量的方法，它包括样品提取、净化、基质加标标准曲线的绘制、实验所用的仪器条件和定性与定量，其特征在于具体步骤如下：
（1）样品提取
样品用乙腈超声波提取，提取液过中性氧化铝柱，收集淋洗液，离心，取上清液，加入氢氧化钠溶液，减压浓缩，再加入磷酸，离心，取上清液备用；
（2）净化
将步骤（1）的上清液转移至HLB固相萃取柱中，用水淋洗，抽干后，用甲醇洗脱，收集洗脱液于容量瓶中，并用含0.1%甲酸的乙酸铵水溶液定容，涡旋混合，过0.22μm有机相微孔滤膜后，进LC-MS/MS分析；
（3）基质加标标准曲线的绘制
分别称取5g空白试样，准确加入相应量的标准工作液，使对硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠最终溶液浓度均分别为0.001μg/mL、0.005μg/mL0.010μg/mL、0.050μg/mL、0.100μg/mL、0.200μg/mL，邻硝基酚钠最终溶液浓度为0.002μg/mL、0.005μg/mL、0.010μg/mL、0.050μg/mL、0.100μg/mL、0.200μg/mL，按照上述（1）和（2）操作步骤进行提取和净化，进LC-MS/MS分析，绘制标准曲线；
（4）实验所用的仪器条件
色谱条件如下：
a)色谱柱：C18反相色谱柱，2.1mm×150mm，5μm；
b)柱温：室温；
c)流速：0.5mL/min；
d)进样量：25μL；
e)流动相：A：甲醇，B：水，梯度洗脱程序见表1；
表1流动相梯度洗脱条件
质谱条件如下：
a)离子化模式：大气压化学电离源，简称APCI；
b)扫描方式：负离子扫描；
c)放电电流：4μA；
d)喷雾温度：400℃；
e)鞘气压力：45psi；
f)辅助气流量：5psi；
g)离子传输毛细管温度：250℃；
h)源内碰撞诱导解离电压：4v；
i)扫描模式：选择反应监测，选择反应监测母离子、子离子和碰撞能量见表2；
j)碰撞气压力：氩气，1.5mTorr；
表2选择反应监测母离子、子离子和碰撞能量
（5）定性与定量
①定性测定
在同样测试条件下，试样液中目标化合物的保留时间与标准工作液中目标化合物的保留时间之比，偏差在±2.5%以内，且检测到的定性离子的相对丰度，应与浓度相近的标准工作液中定性离子相对丰度一致，其偏差应符合表3要求；
表3基峰与次强碎片离子丰度比要求
②定量测定
取试样溶液和相应的标准工作液，作多点校准，按外标法以峰面积定量；标准溶液及试样溶液中对硝基酚钠、邻硝基酚钠和5-硝基邻甲氧基苯酚钠的响应值均应在仪器检测的线性范围之内；
③空白实验
除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行；
④结果计算和表述
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X—试样中对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠的残留量，μg/kg；
C—试样溶液中对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠的浓度，ng/mL；
V—最终样液定容体积，mL；
f—稀释倍数；
m—试样量，g。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
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| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20130508 Assignee: SHANDONG SEATONE DETECTION EVALUATION TECHNICAL SERVICES CO.,LTD. Assignor: YELLOW SEA FISHERIES Research Institute CHINESE ACADEMY OF FISHERY SCIENCES Contract record no.: 2014990000924 Denomination of invention: Method for detecting residual quantity of sodium nitrophenol in aquatic product Granted publication date: 20140305 License type: Exclusive License Record date: 20141212 |
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| LICC | Enforcement, change and cancellation of record of contracts on the licence for exploitation of a patent or utility model | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20140305 |