CN104865334B

CN104865334B - 一种检测叶面肥料中生长调节剂的方法

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Publication number: CN104865334B
Application number: CN201510255458.6A
Authority: CN
Inventors: 张娟; 邹惠玲; 朱海荣; 杜伯会; 王东岳; 刘爽; 齐云; 夏攀登; 刘金凤; 周莉莉; 范晓明
Original assignee: Shandong Institute for Product Quality Inspection
Current assignee: Shandong Institute for Product Quality Inspection
Priority date: 2015-05-19
Filing date: 2015-05-19
Publication date: 2016-04-20
Anticipated expiration: 2035-05-19
Also published as: CN104865334A

Abstract

本发明涉及一种生长调节剂的检测方法，特别涉及一种检测叶面肥料中生长调节剂的方法。该检测叶面肥料中生长调节剂的方法，将生长调节剂标准物质配成一系列已知浓度的生长调节剂溶液，将该生长调节剂标准溶液进行高效液相色谱分析，以植物生长调节剂浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图得到生长调节剂浓度与其峰面积的线性回归方程；将待测样品进行处理，处理后将样品进行高效液相色谱分析，得到生长调节剂高效液相色谱图和峰面积，峰面积带入上述线性回归方程后得到相应的生长调节剂浓度。本发明方法通用性强、选择性好、灵敏度高、可操作性强，适用于叶面肥料中氯吡脲、烯效唑、萘乙酸及脱落酸的高效液相色谱法测定。

Description

一种检测叶面肥料中生长调节剂的方法

（一）技术领域

本发明涉及化学分析技术领域，特别涉及一种检测叶面肥料中生长调节剂的方法。

（二）背景技术

随着施肥技术的发展，近年来叶面施肥已经成为强化作物的营养和防止某些缺素病状的有效措施，但由于监管力度不够，在叶面肥生产、销售过程中存在许多非法添加使用农药（包括植物生长调节剂）的行为。在农业生产中，氯吡脲、复硝酚钠、生长素、赤霉素、乙烯、细胞分裂素、脱落酸、油菜素内酯等通常作为植物生长调节剂，用于调节植物的生长发育，这些生长调节剂的非法添加，为农业生产安全带来了重大隐患。

氯吡脲是人工合成高效植物生长调节剂，它对植物生长促进作用效果优异，尤其是促进果实膨大，被广泛应用于猕猴桃、葡萄、苹果黄瓜等作物上。萘乙酸具有促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根，增加坐果、防止落果，改变雌、雄花比率等特点。脱落酸可以抑制种子提前萌发、诱导休眠，在农业生产上常作为种子萌发的有效抑制剂，用于种子的储藏。烯效唑作为植物生长延缓剂，早期用于水稻、小麦等大田作物，现已广泛应用于果树、烟草和花卉等植物。氯吡脲、萘乙酸、脱落酸和烯效唑在农业生产中显示出了巨大潜力和经济效益，但向叶面肥中非法添加这些物质在一定程度上对环境和土壤造成了破坏，建立肥料中这些物质含量的检测方法尤为迫切。目前，氯吡脲和烯效唑的检测多采用HPLC法，萘乙酸的检测可采用化学法、高效液相色谱法和液相色谱法，而HPLC和放射免疫法常被用于检测脱落酸。目前对多种组分的同时检测研究还很少，且存在样品前处理过程复杂、溶剂消耗多、分析时间长等问题。另外，关于植物生长调节剂的检测通常见于蔬菜、水果中的残留分析，对叶面肥中的植物生长调节剂检测研究报道甚少。

（三）发明内容

本发明为了弥补现有技术的不足，发明了一种处理过程快捷，含量检测较准确的一种检测叶面肥料中生长调节剂的方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种检测叶面肥料中生长调节剂的方法，其特征是：称取生长调节剂溶于溶剂中，分别配置一系列已知浓度的生长调节剂标准溶液，将该生长调节剂标准溶液进行高效液相色谱分析，得到生长调节剂高效液相色谱图和峰面积，以植物生长调节剂浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得到生长调节剂浓度与其峰面积的线性回归方程；将待测样品进行处理，处理后将样品进行高效液相色谱分析，得到相应的峰面积，将峰面积带入上述线性回归方程后得到相应的生长调节剂浓度；其中，高效液相色谱分析的条件具体为：采用二极管阵列检测器；RP18色谱柱，粒径为5μm，规格为250mm×4.6mm；以甲醇和水为流动相；检测波长为190~380nm；流动相流速为0.5~2.0mL/min；色谱柱柱温30~38℃；进样量10μL。

其中，所述流动相流速为1.0mL/min；色谱柱柱温35℃。

所述待测样品为叶面肥，所述叶面肥包括固体叶面肥，液体叶面肥或粉剂叶面肥。

所述生长调节剂包括氯吡脲、烯效唑、萘乙酸和脱落酸。

所述氯吡脲最大吸收波长为262nm，烯效唑最大吸收波长为254nm，萘乙酸最大吸收波长在280nm，脱落酸最大吸收波长在245nm。

所述样品进行高效液相色谱分析时需要进行色谱分离，色谱分离采用梯度洗脱程序：0~7.0min，30%~45%甲醇；7.0~13.0min，45%~55%甲醇；13.0~18.0min，55%~80%甲醇；18.0~26.0min，80%~90%甲醇；26.0~26.1min，90%~30%甲醇；26.1~33.0min，30%甲醇。

所述溶剂包括甲醇、甲醇-水、甲醇-0.1%甲酸水、甲醇-20mM醋酸铵。

测试前样品处理的方法是：精确称取2.0g待测样品，研磨后置于50mL比色管中，加入萃取剂，涡旋振荡3min至样品完全溶解，取涡旋后的样品溶液1mL至10mL容量瓶，定容至刻度线；将容量瓶中的溶液转移至50mL的EP管中，超声提取40min，然后以8000r/min离心10min，取上清液若干在容量瓶中稀释至相应浓度，稀释后的溶液过0.45μm有机相滤膜，待测。

所述萃取剂为酸性甲醇-氯化钠溶液。

在配置一系列已知浓度的生长调节剂溶液时，各生长调节剂溶液浓度为1～100μg/mL。

其中，氯吡脲、烯效唑、萘乙酸和脱落酸标准品购于德国Dr.ehrenstorfer公司，甲醇为色谱纯(美国Fisher公司)，水为超纯水(18.2MΩcm)；采用的仪器是：Waterse2695高效液相色谱仪；二极管阵列（PDA）检测器；Empower数据处理系统（美国Waters公司）；Milli-Q超纯水器（美国Millipore公司）；Sigma3-18K高速冷冻离心机（德国Sigma公司）；电子天平（瑞士Sartorius公司）；SIR漩涡混合器（德国IKA公司）。

在本方法所确定的色谱条件下，对氯吡脲、烯效唑、萘乙酸及脱落酸四种待测物在1.0~100mg/L一系列质量浓度的混合标液按浓度从低到高进样分析测定，四种待测物的线性范围、线性回归方程、相关系数和定量限见表1。

表1生长调节剂的线性范围、线性方程、相关系数和定量限

本发明的有益效果为：本发明利用高效液相色谱技术建立了同时测定叶面肥中4种植物生长调节剂（氯吡脲、烯效唑、萘乙酸和脱落酸)的定量检测方法，弥补了叶面肥料中植物生长调节剂检测方法的空缺；使本方法具有前处理简单、快捷的优势；在本方法所确定的色谱条件下，氯吡脲、烯效唑、萘乙酸及脱落酸四种待测物在1.0~100.0mg/L线性相关系数在0.999以上，检出限为0.1μg/mL。另外，氯吡脲、烯效唑、萘乙酸和脱落酸的检测方法通用性强、选择性好、灵敏度高、可操作性强，适用于叶面肥料中氯吡脲、烯效唑、萘乙酸及脱落酸的高效液相色谱法测定。

（四）附图说明

图1为脱落酸的液相色谱图。

图2为萘乙酸的液相色谱图。

图3为氯吡脲的液相色谱图。

图4为烯效唑的液相色谱图。

（五）具体实施方式

实施例1

精确称取2.0g样品（精确至0.01g），研磨后置于50mL比色管中，加入15mL甲醇，加入2mL质量分数为50%的NaCl水溶液，涡旋振荡3min至样品完全溶解，取涡旋后的样品溶液1mL至10mL容量瓶，定容至刻度线；将容量瓶中的溶液转移至50mL的EP管中，超声提取40min，然后以8000r/min离心10min，取上清液若干在容量瓶中稀释至相应浓度，稀释后的溶液过0.45μm有机相滤膜，待测；

将上述待测样品通过高效液相色谱仪进行分析，高效液相色谱仪条件为：RP18色谱柱，粒径为5μm，规格为250mm×4.6mm；以甲醇和水为流动相；检测波长为190~380nm；流动相流速为0.5mL/min；色谱柱柱温30℃；进样量10μL；将待测液峰面积带入线性公式得到相应生长调节剂的浓度，进而求出其在叶面肥中的含量。

实施例2

将上述待测液通过高效液相色谱仪进行分析，高效液相色谱仪条件为：RP18色谱柱，粒径为5μm，规格为250mm×4.6mm；以甲醇和水为流动相；检测波长为190~380nm；流动相流速为1.0mL/min；色谱柱柱温35℃；进样量10μL；将待测液的峰面积带入线性公式得到相应生长调节剂的浓度，进而求出其在叶面肥中的含量。

实施例3

将上述待测液通过高效液相色谱仪进行分析，高效液相色谱仪条件为：高效液相色谱分析的条件包括RP18色谱柱，粒径为5μm，规格为250mm×4.6mm；以甲醇和水为流动相；检测波长为190~380nm；流动相流速为1.5mL/min；色谱柱柱温38℃；进样量10μL；将待测液峰面积带入线性公式得到相应生长调节剂的浓度，进而求出其在叶面肥中的含量。

实施例4

在空白样品中添加标准溶液进行加标回收率实验，取6个平行样，按实施例2所述方法进行提取处理并分析测定，计算添加回收率和精密度，结果见表2。可知平均回收率在90.0%~105.0%之间，相对标准偏差在0.85%~3.37%之间，数据表明本方法可满足检测要求，方法具有良好的重复性和再现性。

表2肥料中4种生长添加剂的回收率和精密度结果（n=6）

实施例5

选取30种市售叶面肥样品，依次编号。检测结果显示，30种样品中7种样品含有植物生长调节剂，1号和7号是含有脱落酸的液体肥料，6号和10号是含有萘乙酸的液体肥料，3号是含有氯吡脲的液体肥料，9号和16号是含有烯效唑的液体肥料，相应样品的植物生长调节剂含量见表3。

表3实际样品检测结果

Claims

1.一种检测叶面肥料中生长调节剂的方法，其特征是：称取生长调节剂溶于溶剂中，分别配置一系列已知浓度的生长调节剂标准溶液，将该生长调节剂溶液进行高效液相色谱分析，得到生长调节剂标准溶液的峰面积，得到生长调节剂浓度与其峰面积的线性回归方程；将待测样品进行处理，处理后将样品进行高效液相色谱分析，将峰面积带入上述线性回归方程后得到相应的生长调节剂浓度；其中，高效液相色谱分析的条件具体为：采用二极管阵列检测器；RP18色谱柱，粒径为5μm，规格为250mm×4.6mm；以甲醇和水为流动相；检测波长为190~380nm；流动相流速为0.5-1.5mL/min；色谱柱柱温30~38℃；进样量10μL；所述生长调节剂包括氯吡脲、烯效唑、萘乙酸和脱落酸；氯吡脲最大吸收波长为262nm，烯效唑最大吸收波长为254nm，萘乙酸最大吸收波长在280nm，脱落酸最大吸收波长在245nm；所述样品进行高效液相色谱分析时需要进行色谱分离，色谱分离采用梯度洗脱程序：0.0~7.0min，30%~45%甲醇；7.0~13.0min，45%~55%甲醇；13.0~18.0min，55%~80%甲醇；18.0~26.0min，80%~90%甲醇；26.0~26.1min，90%~30%甲醇；26.1~33.0min，30%甲醇；所述溶剂包括甲醇、甲醇-水、甲醇-0.1%甲酸水、甲醇-20mM醋酸铵；其中，待测样品处理包括：精确称取2.0g待测样品，研磨后置于50mL比色管中，加入萃取剂，涡旋振荡3min至样品完全溶解，取涡旋后的样品溶液1mL至10mL容量瓶，定容至刻度线；将容量瓶中的溶液转移至50mL的EP管中，超声提取40min，然后以8000r/min离心10min，取上清液若干在容量瓶中稀释至相应浓度，稀释后的溶液过0.45μm有机相滤膜，待测。

2.根据权利要求1所述的检测叶面肥料中生长调节剂的方法，其特征是：所述流动相流速为1.0mL/min；色谱柱柱温35℃。

3.根据权利要求1所述的检测叶面肥料中生长调节剂的方法，其特征是：所述待测样品为叶面肥，所述叶面肥包括固体叶面肥，液体叶面肥或粉剂叶面肥。

4.根据权利要求1所述的检测叶面肥料中生长调节剂的方法，其特征是：所述萃取剂为酸性甲醇-氯化钠溶液。

5.根据权利要求1所述的检测叶面肥料中生长调节剂的方法，其特征是：在配置一系列已知浓度的生长调节剂标准溶液时，各个生长调节剂溶液浓度范围均为1～100μg/mL。