CN103267760A - 一种地沟油的检测方法及检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公布了一种地沟油检测方法，通过测定酸价、过氧化值、极性物质、含水量4大指标来进行判断。本发明还公布了该方法专用的试剂盒。本发明提供的检测地沟油的方法及试剂盒，简单易操作，速度快，检测效果明显、检出率高。
Description
技术领域
本发明涉及一种地沟油的检测方法和检测试剂盒。
背景技术
“地沟油”泛指在生活中存在的各类劣质油，如回收的食用油、老煎炸油、屠宰后的动物边角料熬制的油等，长期食用可能会引发癌症，对人体的危害极大。但有一些不法商贩受利益驱动而不顾人民群众生命安全私自生产加工地沟油并作为食用油低价销售给一些小餐馆，给人们的身心都带来极大伤害。
目前国内尚未有检测地沟油的统一标准。现行的国家强制性标准《食用植物油卫生标准》（2716—2005）中，关于食用油的理化指标检测包括酸价、过氧化值、浸出油溶剂残留、游离酚（棉籽油）、总砷、铅、黄曲霉毒素、苯并芘、农药残留共9项指标，分别对植物原油和植物食用油进行不同的标准检测。但是植物原油、植物食用油均不是地沟油。而标准里这9项基本的食用油检测指标，即使是地沟油炼出来的油也都可能合格，根本无法针对地沟油去进行辨别性检测。
专利201010225657.X，公开了一种检测地沟油的方法，为对待检测油样提取DNA后，以所提取的DNA作为模板，利用荧光定量PCR扩增动物特有基因片段，鉴定食用油中是否掺有地沟油。
专利201110456243.2，以样品油不应存在的动物外源成分作为地沟油的鉴别依据，以动物外源成分的线粒体特征DNA为检测的具体标靶。首先从样品油中获得线粒体DNA，并对提取的DNA进行检测或者对其信号扩增后检测，从而有效的鉴别和检测地沟油。
上述的检测方法针对的指标单一，设备复杂，指标偏僻，操作困难，专业要求高，检测速度慢，不适合家用、民用，更不适合快检，以及低成本的频繁检测。
专利201210236063.8，公开了一种酸价检测试剂，油样检测溶液颜色为纯浅黄色，酸价达到8mgKOH/g，检测灵敏度低，漏检率高。同时极性物质检测试剂标准溶液颜色过浅，样品溶液颜色难以与标准溶液颜色相比较，检测要求较高，时间过长。
2011年12月之前，卫生部已征集了由7家技术机构提供的5种检验方法，但经过论证证明，特异性不强，不能作为“地沟油”判定手段。随后，卫生部第二轮面向社会广泛公开征集“地沟油”检测方法，但目前仍没有方便、高效、准确的检测方法。为了应对“禁止地沟油上餐桌”的健康、法律、行政需求，我国急需探索新的技术、试剂和方法。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种新的地沟油的检测方法。
本发明的地沟油检测方法，包括酸价、过氧化值、极性物质、含水量4大指标，4大指标缺一不可，其依据在于：泔水油、尸油、煎炸油、混合油，均包含极性物质；动物油存在酸价、过氧化值、水分超标等问题。
具体各项指标的检测方法如下所述。
（1）酸价
试剂A：质量体积份（m/v）0.001%～0.01%的指示剂，溶解于氯仿和乙醇，或氯仿和甲醇，或正己烷和乙醇，或正己烷和甲醇的混合溶液中，混合溶液中前后两种成分的体积比均为1:5～1:20，用缓冲溶液调节成中性。
油样与试剂A按照体积比1:5～1:50混匀后，通过显色反应来判断结果。
所述指示剂为麝香草酚蓝与无色酚酞，或者其他乙醇溶液为黄色或橙色的指示剂。
优选地，所述指示剂为麝香草酚蓝与无色酚酞，质量比为10:1～25:1。
所述缓冲溶液为柠檬酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液，pH=7。
比色卡在结果判断中起到关键性的作用，油脂中的脂肪酸或游离酸与指示剂发生显色反应，呈现不同的颜色，将溶液颜色与比色卡进行比色，可以快速地得到待测油样的酸价。比色卡上酸价对应的颜色是由不同酸价的油样品测定得到。
（2）过氧化值
试剂B：含质量体积浓度0.1%的碘化亚铜与质量体积浓度10%的碘化钾的水溶液；试剂E：质量体积浓度（m/v）1%～15%吡咯水溶液。
试剂B与油样以体积比2:1～10:1混合后，加入试剂E，通过显色反应来判断结果。
比色卡在结果判断中起到关键性的作用，油样中的过氧化物与过氧化物试剂发生氧化还原反应，呈现不同颜色，通过比色，可以快速地得到待测油样的过氧化值。过氧化值对应的颜色是由不同过氧化值的油样品测定得到。
（3）极性物质
试剂C： 体积浓度70%～79%的有机醇类物质，如甲醇、乙醇、正丁醇、正丙醇、异戊醇中的一种或多种，优选为异戊醇；体积浓度20%的液态烷烃，如环己烷、异辛烷或二者混合液，优选为异辛烷；体积浓度1%～10%的有机酸，如甲酸、乙酸、丙酸中的一种或多种，优选为乙酸；
试剂F：质量体积浓度5%～15%的钼磷酸溶于甲醇或乙醇等易挥发的有机试剂；
将油样与试剂C混合，做薄层层析，以试剂C为展开剂，层析结束后在层析板上滴加试剂F，若有连续墨绿色条带出现，则极性物质含量不合格。
食用植物油经高温加热和反复使用后将会产生某些极性物质（如丙稀酰胺、多环芳烃、醛基和羰基等有害物质）。地沟油中这些物质的含量很高，并且化学结构与原植物油相近，一般提炼处理方式不太容易将这些物质清除出去；同时，地沟油熬制和精炼过程中也会产生某些极性物质。
地沟油中存在的极性物质不是指某一种物质, 而是指具有一定极性的一类物质, 确切地讲应称其为极性物质组合（统称为地沟油极性标志物）。极性标志物能较真实和全面的反映油脂的劣变程度（劣质油），这些极性标志物在“高效薄层色谱”中会表现为明显的拖尾斑。当测量某一油品有明显极性组分“拖尾”现象时，即可判断其为地沟油，可根据进一步调查取证来确定其到底是煎炸过的油，还是潲水油或经过提炼仍未能将极性组分清除干净的地沟油。
（4）含水量
试剂D：无水硫酸铜粉末或无水氯化钴粉末。
油样中加入试剂D，油样和试剂D的用量比为100:1～200:1（v/v），震荡后，若颜色为白色或极浅的蓝色，则说明油脂含水量合格；若下层粉末颜色为蓝色，且粉末结块，则说明油脂含水量超标。
以上任一检测结果判为不合格，则油脂样品被判为地沟油。
本发明还提供一种根据上述地沟检测方法制备的试剂盒，所述试剂盒包括：
试剂A：质量体积份0.001%～0.01%的指示剂，溶解于氯仿和乙醇，或氯仿和甲醇，或正己烷和乙醇，或正己烷和甲醇的混合溶液中，体积比均为1:5～1:20，用柠檬酸盐或磷酸盐缓冲溶液调节成中性；
试剂B：含质量体积浓度0.1%的碘化亚铜与质量体积浓度10%的碘化钾的水溶液；
试剂C： 体积浓度70%～79%的有机醇类物质，如甲醇、乙醇、正丁醇、正丙醇、异戊醇中的一种或多种，优选为异戊醇；体积浓度20%的液态烷烃，如环己烷、异辛烷或二者混合液，优选为异辛烷；体积浓度1%～10%的有机酸，如甲酸、乙酸、丙酸中的一种或多种，优选为乙酸；
试剂D：无水硫酸铜粉末或无水氯化钴粉末；
试剂E：质量体积浓度1%～15%吡咯水溶液；
试剂F：质量体积浓度5%～15%的钼磷酸溶于甲醇或乙醇中。
进一步地，所述指示剂为麝香草酚蓝与无色酚酞，质量比为5:1～10:1。
所述试剂盒还可以包括酸价比色卡、过氧化值比色卡、反应试管、吸管、硅胶板等。
本发明提供的检测地沟油的方法及试剂盒，简单易操作，速度快，检测效果明显、检出率高。
具体实施方式
实施例1
准备油样1，根据标GB/T-5530 2005方法测定油样1的酸价值为6，过氧化值为10。将油进行加热处理，同时添加0.2%的水。
利用本发明的方法测定如下：
（1）酸价测定
油样1与试剂A混匀后，通过与比色卡比色判断结果。
（2）过氧化值测定
试剂B：含质量体积浓度0.1%的碘化亚铜与质量体积浓度10%的碘化钾的水溶液；
试剂E：质量体积浓度1%～15%吡咯水溶液。
试剂B与油样以体积比2:1～10:1混合后，加入试剂E，通过与比色卡比色判断结果。
（3）极性物质测定
将油样与试剂C混合，做薄层层析，以试剂C为展开剂，层析结束后在层析板上滴加试剂F，若有连续墨绿色条带出现，则极性物质含量不合格。
（4）含水量
试剂D：无水硫酸铜粉末或无水氯化钴粉末。
油样中加入试剂D，油样和试剂D的体积比为100:1～200:1（v/v），震荡后，若颜色为白色或极浅的蓝色，则说明油脂含水量合格；若下层粉末颜色为蓝色，且粉末结块，则说明油脂含水量超标。
实施例2 地沟油检测试剂盒
试剂盒组成
反应管A、B、C、D中分别装有试剂A、B、C、D。
各试剂的组分为：
试剂A：0.01%（m/v）的麝香草酚蓝与0.001%（m/v）的无色酚酞，溶于氯仿与乙醇混合溶液（体积比10:1），用柠檬酸盐缓冲液调整至中性，每管1ml；
试剂B：含质量体积浓度0.1%的碘化亚铜与质量体积浓度10%的碘化钾的水溶液，每管1ml；
试剂C：78%体积浓度的异戊醇、20%体积浓度的异辛烷、2%体积浓度的乙酸，每管2ml；
试剂D：250mg无水硫酸铜粉末；
试剂E：质量体积浓度（m/v）10%吡咯水溶液，每瓶10ml；
试剂F：质量体积浓度（m/v）5%钼磷酸乙醇溶液，每瓶10ml。
柠檬酸盐缓冲液的配制方法：（以20ml计），1.4ml的0.1mol/L柠檬酸溶液与18.6ml的0.1mol/L柠檬酸钠溶液混合。
酸价比色卡设置了酸价1、2、3、4、5、6，超过4即为不合格，过氧化值比色卡设置了过氧化值0、5、10、15、20、30，超过20即为不合格。
实施例3 利用试剂盒测定油样（编号930028 ）
利用实施例2中的试剂盒进行测定。
（1）酸价的检测
取1支反应管A，打开盖子，用3mL吸管吸取待检测油样2 mL滴入反应管A中，拧紧盖子，室温反应，充分震荡混匀1分钟，
立即观察管中溶液的颜色，对照比色卡，与比色卡颜色一致的数值即为检测油样的酸价。
溶液颜色立即变为黄色；对比比色卡，酸价为6，超标。
（2）过氧化值的检测
取1支反应管B，打开盖子，用0.5 mL吸管吸取待检测油样3滴滴入反应管B中，然后用0.5 mL吸管滴加1滴试剂E 到反应管B中，拧紧盖子，充分震荡混匀10秒，
观察管中液体的颜色，对照比色卡，与比色卡颜色一致的数值即为检测油样的过氧化值，溶液颜色为浅蓝色，过氧化值为5，合格。
（3）极性物质的检测
用3 mL吸管从反应管C中吸取1 mL液体，加到层析杯中，再用0.5 mL吸管吸取待检测油样3滴滴入反应管C中，拧紧盖子后充分震荡混匀30 秒，静置后液体待检。
取一张硅胶板，在底端向上0.5 cm处用铅笔轻轻划一条平行线，沿直线进行点样，点与点间距0.5 cm，每板可同时检测2个油样。
用毛细管从反应管C中吸取少量液体点样于硅胶板上，点样直径大小约2毫米，用镊子将硅胶板插入到层析杯中，注意杯中液体不要浸没到平行线，用计时器计时7分钟；
用镊子将硅胶板取出，用电吹风吹干表面液体，用3 mL吸管取试剂F迅速均匀地滴加到硅胶板上（保证试剂F均匀涂于硅胶板上），多余液体用纸巾吸去，用电吹风吹干并加热硅胶板黄色部分约30秒，即可观察硅胶板上的墨绿色印记，油样的极性物质区域呈连续条带状，说明极性物质超标。
（4）含水量检测
取 1支反应管D，打开盖子，用3 mL吸管吸取待检测油样5 mL滴入试剂D管中，拧紧盖子，充分震荡混匀2分钟，静置2分钟左右；观察管子下层粉末颜色，颜色为白色，说明待测油样中水分不超标。
综合上述实验结果，待测油样疑似为地沟油。
同时使用国标GB/T-5530 2005方法测定油样930028的酸价以及过氧化值，酸价为8.2，过氧化值为4，酸价超过国家标准，同时使用国标GB/T 7102.2来检测极性物质，极性物质超标，使用GB/T 5528-2008测定油脂含水量，符合要求。说明油样930028疑似为地沟油，检测结果与试剂盒检测结果相同。
实施例4 油样测定（编号750004）
利用实施例2中的试剂盒进行测定。
（1）酸价的检测
取1支反应管A，打开盖子，用3mL吸管吸取待检测油样2 mL滴入反应管A中，拧紧盖子，室温反应，充分震荡混匀1分钟，
立即观察管中溶液的颜色，对照比色卡，与比色卡颜色一致的数值即为检测油样的酸价。
溶液颜色立即变为蓝色；对比比色卡，酸价为1，合格。
（2）过氧化值的检测
取1支反应管B，打开盖子，用0.5 mL吸管吸取待检测油样3滴滴入反应管B中，然后用0.5 mL吸管滴加1滴试剂E 到反应管B中，拧紧盖子，充分震荡混匀10秒，
观察管中液体的颜色，对照比色卡，与比色卡颜色一致的数值即为检测油样的过氧化值，溶液颜色为深蓝色，过氧化值为30，超标。
（3）极性物质的检测
用3 mL吸管从反应管C中吸取1 mL液体，加到层析杯中，再用0.5 mL吸管吸取待检测油样3滴滴入反应管C中，拧紧盖子后充分震荡混匀30 秒，静置后液体待检。
取一张硅胶板，在底端向上0.5 cm处用铅笔轻轻划一条平行线，沿直线进行点样，点与点间距0.5 cm，每板可同时检测2个油样。
用毛细管从反应管C中吸取少量液体点样于硅胶板上，点样直径大小约2毫米，用镊子将硅胶板插入到层析杯中，注意杯中液体不要浸没到平行线，用计时器计时7分钟；
用镊子将硅胶板取出，用电吹风吹干表面液体，用3 mL吸管取试剂F迅速均匀地滴加到硅胶板上（保证试剂F均匀涂于硅胶板上），多余液体用纸巾吸去，用电吹风吹干并加热硅胶板黄色部分约30秒，即可观察硅胶板上的墨绿色印记，油样的极性物质区域呈点状分布，说明油样极性物质合格。
（4）含水量检测
取 1支反应管D，打开盖子，用3 mL吸管吸取待检测油样5 mL滴入试剂D管中，拧紧盖子，充分震荡混匀2分钟，静置2分钟左右；观察管子下层粉末颜色，颜色为白色，说明待测油样中水分未超标。
综合上述实验结果待测油样疑似为地沟油。
同时使用国标GB/T-5530 2005方法测定油样750004的酸价以及过氧化值，酸价为2.5，过氧化值为23，酸价超过国家标准，同时使用国标GB/T 7102.2来检测极性物质，极性物质合格，使用GB/T 5528-2008测定油脂含水量，含水量合格。综合上述结果，判断油样750004疑似为地沟油，检测结果与试剂盒检测结果相同。
实施例5 油样测定（编号04456）
利用实施例2中的试剂盒进行测定。
（1）酸价的检测
取1支反应管A，打开盖子，用3mL吸管吸取待检测油样2 mL滴入反应管A中，拧紧盖子，室温反应，充分震荡混匀1分钟，
立即观察管中溶液的颜色，对照比色卡，与比色卡颜色一致的数值即为检测油样的酸价。
溶液颜色立即变为蓝色；对比比色卡，酸价为1，合格。
（2）过氧化值的检测
取1支反应管B，打开盖子，用0.5 mL吸管吸取待检测油样3滴滴入反应管B中，然后用0.5 mL吸管滴加1滴试剂E 到反应管B中，拧紧盖子，充分震荡混匀10秒，
观察管中液体的颜色，对照比色卡，与比色卡颜色一致的数值即为检测油样的过氧化值，溶液颜色为浅蓝色，过氧化值为10，合格。
（3）极性物质的检测
用3 mL吸管从反应管C中吸取1 mL液体，加到层析杯中，再用0.5 mL吸管吸取待检测油样3滴滴入反应管C中，拧紧盖子后充分震荡混匀30 秒，静置后液体待检。
取一张硅胶板，在底端向上0.5 cm处用铅笔轻轻划一条平行线，沿直线进行点样，点与点间距0.5 cm，每板可同时检测2个油样。
用毛细管从反应管C中吸取少量液体点样于硅胶板上，点样直径大小约2毫米，用镊子将硅胶板插入到层析杯中，注意杯中液体不要浸没到平行线，用计时器计时7分钟；
用镊子将硅胶板取出，用电吹风吹干表面液体，用3 mL吸管取试剂F迅速均匀地滴加到硅胶板上（保证试剂F均匀涂于硅胶板上），多余液体用纸巾吸去，用电吹风吹干并加热硅胶板黄色部分约30秒，即可观察硅胶板上的墨绿色印记，油样的极性物质区域呈连续线状分布，说明油样极性物质不合格。
（4）含水量检测
取 1支反应管D，打开盖子，用3 mL吸管吸取待检测油样5 mL滴入试剂D管中，拧紧盖子，充分震荡混匀2分钟，静置2分钟左右；观察管子下层粉末颜色，颜色为白色，说明待测油样中水分未超标。
综合上述实验结果待测油样可能地沟油。
同时使用国标GB/T-5530 2005方法测定油样04456的酸价以及过氧化值，酸价为0.8，过氧化值为5，酸价超过国家标准，同时使用国标GB/T 7102.2来检测极性物质，极性物质超标，使用GB/T 5528-2008测定油脂含水量，含水量合格。综合上述结果，判断油样04456疑似为地沟油，检测结果与试剂盒检测结果相同。
Claims (6)
1.一种地沟油检测方法，其特征在于具体包括：
（1）酸价检测
试剂A：质量体积份0.001%～0.01%的指示剂，溶解于氯仿和乙醇，或氯仿和甲醇，或正己烷和乙醇，或正己烷和甲醇的混合溶液中，体积比均为1:5～1:20，用柠檬酸盐或磷酸盐缓冲溶液调节成中性；
油样与试剂A按照体积比1:5～1:50混匀后，通过显色反应来判断结果；
（2）过氧化值检测
试剂B：含质量体积浓度0.1%的碘化亚铜与质量体积浓度10%的碘化钾的水溶液；
试剂E：质量体积浓度1%～15%吡咯水溶液；
试剂B与油样以体积比2:1～10:1混合后，加入试剂E，通过显色反应来判断结果；
（3）极性物质检测
试剂C：体积浓度70%～79%的有机醇类物质，体积浓度20%的液态烷烃，体积浓度1%～10%的有机酸；
试剂F：质量体积浓度5%～15%的钼磷酸溶于甲醇或乙醇中；
将油样与试剂C混合，做薄层层析，以试剂C为展开剂，层析结束后在层析板上滴加试剂F，若有连续墨绿色条带出现，则极性物质含量不合格；
（4）含水量检测
试剂D：无水硫酸铜粉末或无水氯化钴粉末；
油样中加入试剂D，油样和试剂D的体积比100:1～200:1，震荡后，若颜色为白色或浅的蓝色，则说明油脂含水量合格；若下层粉末颜色为蓝色，且粉末结块，则说明油脂含水量超标；
以上任一检测结果判为不合格，则油脂样品被判为地沟油。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述试剂A中指示剂为麝香草酚蓝与无色酚酞，质量比为5:1～10:1。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述试剂C中所述有机醇类物质为甲醇、乙醇、正丁醇、正丙醇、异戊醇中的一种或多种；所述烷烃为环己烷、异辛烷或二者混合液；所述酸为甲酸、乙酸、丙酸中的一种或多种。
4.一种权利要求1-3所述的地沟油检测方法的专用试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括：
试剂A：质量体积份0.001%～0.01%的指示剂，溶解于氯仿和乙醇，或氯仿和甲醇，或正己烷和乙醇，或正己烷和甲醇的混合溶液中，体积比均为1:5～1:20，用柠檬酸盐或磷酸盐缓冲溶液调节成中性；
试剂B：含质量体积浓度0.1%的碘化亚铜与质量体积浓度10%的碘化钾的水溶液；
试剂C：体积浓度70%～79%的有机醇类物质，体积浓度20%的液态烷烃，体积浓度1%～10%的有机酸；
试剂D：无水硫酸铜粉末或无水氯化钴粉末；
试剂E：质量体积浓度1%～15%吡咯水溶液；
试剂F：质量体积浓度5%～15%的钼磷酸溶于甲醇或乙醇中。
5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于：所述指示剂为麝香草酚蓝与无色酚酞，质量比为10:1～25:1。
6.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于：所述试剂C中所述有机醇类物质为甲醇、乙醇、正丁醇、正丙醇、异戊醇中的一种或多种；所述烷烃为环己烷、异辛烷或二者混合液；所述酸为甲酸、乙酸、丙酸中的一种或多种。
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