CN1963509A - 一种狂犬病毒保护性抗体胶体金检测试纸条 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种检测狂犬病毒保护性抗体的胶体金检测试纸条。它是在硝酸纤维膜(NC膜)上,分别包被狂犬病毒糖蛋白和抗狂犬病毒多克隆抗体,结合胶体金标记的狂犬病毒抗原,应用膜层析双抗原夹心法,检测标本中的狂犬病毒保护性抗体。应用本发明试纸条检测,减少了繁琐的程序,操作方便快捷,10-15分钟判读结果,不需特殊仪器也不需专业培训,适用于医院等基层单位,适合大规模的流行病学调查及应付突发事件。
Description
技术领域
本发明属于生物检测领域,具体涉及一种狂犬病毒保护性抗体检测试纸条及其应用。
背景技术
狂犬病是由狂犬病毒引起的人畜共患的传染病,该病极为凶险,一旦发病,100%死亡。迄今为止,对此病尚无有效的治疗方法,只有注射狂犬疫苗和抗狂犬病血清或免疫球蛋白进行预防。注射狂犬疫苗能否取得保护作用,一个重要的指标就是检测血清中狂犬病毒抗体,只有产生了足量的保护性抗体才能认为免疫成功。
常用的检测狂犬病毒抗体的方法有:快速荧光灶抑制试验、放射免疫分析法、中和试验、血凝抑制试验和补体结合试验。这些检测方法需要在国家认证的专业实验室进行,操作复杂,费用昂贵,具有一定的危险性。最近出现的酶联免疫吸附试验,虽然时间缩小到2小时,在一般实验室即可进行,但其检测的抗体是总抗体,不能真实反映保护性抗体的水平,而且必须由专业人员操作,需要配备特殊的仪器,不易推广。
发明内容
(一)要解决的技术问题
本发明的目的是提供一种方便、快捷的检测血清标本中狂犬病毒保护性抗体的试纸条。发明人通过在硝酸纤维膜(NC膜)上包被狂犬病毒糖蛋白和抗狂犬病毒多克隆抗体二条带,并结合应用胶体金标记的狂犬病毒抗原,实现了在试剂条上检测狂犬病毒保护性抗体,完成了本发明。克服了现有技术操作复杂、繁琐、时间长、需要仪器、需要专业人员,需要一定条件的实验室,以及只能检测狂犬病毒的全抗体而不能检测保护性抗体的不足。
(二)技术方案
本发明提供了一种检测试纸条,它包含:
(1)包被狂犬病毒糖蛋白和抗狂犬病毒多克隆抗体二条带的硝酸纤维膜;
(2)含有胶体金标记狂犬病毒抗原的玻璃纤维膜。
优选的,本发明所述试纸条,它还包含:
(1)反应支持物;
(2)吸水垫;
(3)金标抗原保护膜。
其中反应支持物优选PVC板;吸水垫优选滤油纸;金标抗原保护膜具有吸水功能,优选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
本发明还公开了所述试纸条在检测狂犬病毒保护性抗体中的应用。
本发明的技术方案是:采用提纯的狂犬病毒糖蛋白和抗狂犬病毒多克隆抗体分别固相于硝酸纤维膜(NC膜)上,结合胶体金标记的狂犬病毒抗原,应用膜层析双抗原夹心法的原理检测标本中的狂犬病毒保护性抗体。
(三)有益效果
本发明的有益效果是:试纸条能定性检测血清中抗狂犬病毒的保护性抗体,克服了以往只能检测全病毒抗体的不足。用试纸条检测,方便、快速、简捷,不需特殊仪器设备,不需专业培训,结果清晰易辨,操作简单,易于推广,适合于突发事件的大批量现场检测,适用于基层和流行病学调查,对疫苗效果的观察起到诊断作用。
附图说明
图1:A本发明试纸条的正面示意图;
B本发明试纸条的侧面示意图;
1:吸水垫;
2:硝酸纤维膜(A:包被狂犬病毒糖蛋白的条带;B:包被抗狂犬病毒多克隆抗体的条带);
3:含有胶体金标记狂犬病毒抗原的玻璃纤维膜;
4:金标抗原保护膜;
5:反应支持物。
图2:检测结果示意图;从左至右依次为:T、C两条线显色为阳性;C一条线显色为阴性;T、C两条线未显色为无效。
具体实施方式
实施例1:狂犬病毒保护性抗体胶体金检测试纸条(参见图1)
反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板;吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸;1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗狂犬病毒多克隆抗体;狂犬病毒糖蛋白;含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的狂犬病毒玻璃纤维膜;金标抗原保护膜为2.7cm×0.4cm的聚脂膜;即形成了狂犬病毒保护性抗体检测试纸条。
实施例2:狂犬病毒保护性抗体胶体金检测试纸条(参见图1)
反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板;吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸;1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗狂犬病毒多克隆抗体;狂犬病毒糖蛋白;含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的狂犬病毒玻璃纤维膜;金标抗原保护膜为2.7cm×0.4cm的滤纸纤维;即形成了狂犬病毒保护性抗体检测试纸条。
实施例3:狂犬病毒保护性抗体胶体金检测试纸条(参见图1)
反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板;吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸;1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗狂犬病毒多克隆抗体;狂犬病毒糖蛋白;含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的狂犬病毒玻璃纤维膜;金标抗原保护膜为2.7cm×0.4cm的玻璃纤维;即形成了狂犬病毒保护性抗体检测试纸条。
实施例4:检测方法(参见图2)
于实施例1试纸条“4”处,用吸管加入待检血清3-4滴(150μl),样品中的液体吸起上行,10-15分钟判读结果:
如血清标本中含有抗狂犬病毒糖蛋白抗体,则与试纸条上胶体金标记的狂犬病毒抗原形成相应的复合物,上行与包被在硝酸纤维膜上的狂犬病毒糖蛋白特异性结合,形成红色线条,即在“T”处形成红色条带。
无论是否含有相对应的抗原,胶体金标记的狂犬病毒继续向上爬行与包被在膜上的抗狂犬病毒多克隆抗体形成红色沉淀线,即在“C”处形成红色条带。此线是质控线,如此线不出现,说明试纸条失效。
阳性结果会出现2条红色沉淀线,阴性结果出现1条红色沉淀线,如不出现线条说明试纸条失效。
实验例1:临床检测结果
经检测121例狂犬疫苗免疫后的血清标本,与目前应用ELISA法(T1)相比较,试纸法(T2)灵敏度为92.4%,特异度93.8%。
ELISA法(T1)与试纸条法(T2)对比实验统计表
阳性 | 阴性 | |
T1 | 105 | 16 |
T2 | 97 | 15 |
灵敏度92.4% | 特异度93.8% |
Claims (6)
1、一种检测试纸条,其特征在于,它包含:
(1)包被狂犬病毒糖蛋白和抗狂犬病毒多克隆抗体二条带的硝酸纤维膜;
(2)含有胶体金标记狂犬病毒抗原的玻璃纤维膜。
2、根据权利要求1所述试纸条,它还包含:
(1)反应支持物;
(2)吸水垫;
(3)金标抗原保护膜。
3、根据权利要求2所述试纸条,其中反应支持物选用PVC板。
4、根据权利要求2所述试纸条,其中吸水垫选用滤油纸。
5、根据权利要求2所述试纸条,其中金标抗原保护膜选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
6、权利要求1-5之任一所述试纸条在检测狂犬病毒保护性抗体中的应用。
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CN 200510086850 CN1963509A (zh) | 2005-11-10 | 2005-11-10 | 一种狂犬病毒保护性抗体胶体金检测试纸条 |
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Publications (1)
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CN 200510086850 Pending CN1963509A (zh) | 2005-11-10 | 2005-11-10 | 一种狂犬病毒保护性抗体胶体金检测试纸条 |
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CN113252893A (zh) * | 2021-06-23 | 2021-08-13 | 北京市动物疫病预防控制中心 | 一种应用狂犬病毒g蛋白快速定量检测狂犬病毒抗体的方法、g蛋白的编码基因及试纸 |
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2005
- 2005-11-10 CN CN 200510086850 patent/CN1963509A/zh active Pending
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