CN111610333A - 一种基于指尖血的酶联免疫分析方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种基于指尖血的酶联免疫分析方法,涉及免疫检测技术领域。该基于指尖血的酶联免疫分析方法,包括以下操作步骤:1)将血小板单克隆抗体SZ‑51与膜糖蛋白单克隆抗体SZ‑21分别加入稀释液进行稀释,然后加入到聚苯乙烯酶标板表面,将酶标板在低温下过夜并加入封闭液;2)使用清洗液将酶标板清洗三次,形成包被的聚苯乙烯酶标板;3)采集指尖血,将待测指尖血中加入pH值为7.4的0.2M磷酸缓冲液,配制待测指尖血标准品溶液,混合均匀后低温保存备用。本发明,通过利用酶联免疫分析方法对指尖血中血小板的活化程度进行测定,能够测定血小板功能活化剂或抑制剂对血小板功能的影响,测定过程无需过多的大型设备,操作简单,省时省力,成本低。
Description
技术领域
本发明涉及免疫检测技术领域,具体为一种基于指尖血的酶联免疫分析方法。
背景技术
酶联免疫分析法是一种利用抗原抗体之间专一性键结的特性对检体进行检测的方法。ELISA分析法由于其快速、简便的分析特性,广泛用于血清、血浆、尿、便、组织液等样品中各种生化指标、疾病标志物的临床检验。其中,双抗体夹心法是检测抗原最常用的ELISA分析方法,其基本工作原理是:利用连接于固相载体上的抗体和酶标抗体分别与样品中被检测抗原分子上的两个抗原决定簇结合,形成固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物。由于反应系统中固相抗体和酶标抗体的量相对于待测抗原是过量的,因此复合物的形成量与待测抗原的含量在检测范围内成正比,测定复合物中的酶作用于加入的底物后生成的有色物质量,即可确定待测抗原含量。
目前,基于指尖血的酶联免疫分析时需要运用到大型仪器辅助,设备较昂贵、成本高、操作复杂、费时,而且往往都需要受过专门培训的技术人员才会使用,难以在基层医疗单位普及推广,不适合于大众人群对血小板的活化程度进行测定。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足,本发明提供了一种基于指尖血的酶联免疫分析方法,解决了现有技术中存在的缺陷与不足。
(二)技术方案
为实现以上目的,本发明通过以下技术方案予以实现:一种基于指尖血的酶联免疫分析方法,包括以下操作步骤:
1)将血小板单克隆抗体SZ-51与膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21分别加入稀释液进行稀释,然后将血小板单克隆抗体SZ-51稀释液与膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21稀释液加入到聚苯乙烯酶标板表面,将酶标板在低温下过夜并加入封闭液;
2)使用清洗液将酶标板清洗三次,洗涤除去杂质,形成包被的聚苯乙烯酶标板;
3)采集指尖血,将待测指尖血中加入pH值为7.4的0.2M磷酸缓冲液,配制待测指尖血标准品溶液,混合均匀后低温保存备用;
4)待测指尖血标准品溶液加入到包被的聚苯乙烯酶标板表面,使其与抗体键合,随后用清洗液洗涤聚苯乙烯酶标板并甩干;
5)往包被的聚苯乙烯酶标板表面加入Biotin-SZ2,使其进行反应,随后用清洗液洗涤聚苯乙烯酶标板并甩干;
6)往包被的聚苯乙烯酶标板表面加入亲和素标记的辣根过氧化物酶检测与邻苯二胺进行显色反应后,最后用酶标仪读取吸光度。
优选的,所述步骤1中稀释液为碳酸盐缓冲液,稀释的浓度为5-10ug/ml。
优选的,所述步骤1中酶标板过夜的温度为3-4℃。
优选的,所述步骤5中反应的温度为30-36℃,反应时间为10-20分钟。
优选的,所述清洗液为PBS溶液与质量浓度为0.04%-0.06%的吐温20组成,其中吐温20占清洗液质量的0.08%-0.12%。
(三)有益效果
本发明提供了一种基于指尖血的酶联免疫分析方法。具备以下有益效果:
该基于指尖血的酶联免疫分析方法,通过利用酶联免疫分析方法对指尖血中血小板的活化程度进行测定,能够测定血小板功能活化剂或抑制剂对血小板功能的影响,测定过程无需过多的大型设备,操作简单,省时省力,成本低。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例一:
本发明实施例提供一种基于指尖血的酶联免疫分析方法,包括以下操作步骤:
1)将血小板单克隆抗体SZ-51与膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21分别加入稀释液进行稀释,其中稀释液为碳酸盐缓冲液,稀释的浓度为5ug/ml,然后将血小板单克隆抗体SZ-51稀释液与膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21稀释液加入到聚苯乙烯酶标板表面,将酶标板在低温下过夜并加入封闭液,其中酶标板过夜的温度为3℃;
2)使用清洗液将酶标板清洗三次,洗涤除去杂质,形成包被的聚苯乙烯酶标板;
3)采集指尖血,将待测指尖血中加入pH值为7.4的0.2M磷酸缓冲液,配制待测指尖血标准品溶液,混合均匀后低温保存备用;
4)待测指尖血标准品溶液加入到包被的聚苯乙烯酶标板表面,使其与抗体键合,随后用清洗液洗涤聚苯乙烯酶标板并甩干;
5)往包被的聚苯乙烯酶标板表面加入Biotin-SZ2,使其进行反应,反应的温度为36℃,反应时间为10分钟,随后用清洗液洗涤聚苯乙烯酶标板并甩干;
6)往包被的聚苯乙烯酶标板表面加入亲和素标记的辣根过氧化物酶检测与邻苯二胺进行显色反应后,最后用酶标仪读取吸光度。
其中清洗液为PBS溶液与质量浓度为0.04%-0.06%的吐温20组成,其中吐温20占清洗液质量的0.08%-0.12%。
实施例二:
本发明实施例提供一种基于指尖血的酶联免疫分析方法,包括以下操作步骤:
1)将血小板单克隆抗体SZ-51与膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21分别加入稀释液进行稀释,其中稀释液为碳酸盐缓冲液,稀释的浓度为7ug/ml,然后将血小板单克隆抗体SZ-51稀释液与膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21稀释液加入到聚苯乙烯酶标板表面,将酶标板在低温下过夜并加入封闭液,其中酶标板过夜的温度为3.5℃;
2)使用清洗液将酶标板清洗三次,洗涤除去杂质,形成包被的聚苯乙烯酶标板;
3)采集指尖血,将待测指尖血中加入pH值为7.4的0.2M磷酸缓冲液,配制待测指尖血标准品溶液,混合均匀后低温保存备用;
4)待测指尖血标准品溶液加入到包被的聚苯乙烯酶标板表面,使其与抗体键合,随后用清洗液洗涤聚苯乙烯酶标板并甩干;
5)往包被的聚苯乙烯酶标板表面加入Biotin-SZ2,使其进行反应,反应的温度为33℃,反应时间为15分钟,随后用清洗液洗涤聚苯乙烯酶标板并甩干;
6)往包被的聚苯乙烯酶标板表面加入亲和素标记的辣根过氧化物酶检测与邻苯二胺进行显色反应后,最后用酶标仪读取吸光度。
其中清洗液为PBS溶液与质量浓度为0.04%-0.06%的吐温20组成,其中吐温20占清洗液质量的0.08%-0.12%。
实施例三:
本发明实施例提供一种基于指尖血的酶联免疫分析方法,包括以下操作步骤:
1)将血小板单克隆抗体SZ-51与膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21分别加入稀释液进行稀释,其中稀释液为碳酸盐缓冲液,稀释的浓度为10ug/ml,然后将血小板单克隆抗体SZ-51稀释液与膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21稀释液加入到聚苯乙烯酶标板表面,将酶标板在低温下过夜并加入封闭液,其中酶标板过夜的温度为4℃;
2)使用清洗液将酶标板清洗三次,洗涤除去杂质,形成包被的聚苯乙烯酶标板;
3)采集指尖血,将待测指尖血中加入pH值为7.4的0.2M磷酸缓冲液,配制待测指尖血标准品溶液,混合均匀后低温保存备用;
4)待测指尖血标准品溶液加入到包被的聚苯乙烯酶标板表面,使其与抗体键合,随后用清洗液洗涤聚苯乙烯酶标板并甩干;
5)往包被的聚苯乙烯酶标板表面加入Biotin-SZ2,使其进行反应,反应的温度为30℃,反应时间为20分钟,随后用清洗液洗涤聚苯乙烯酶标板并甩干;
6)往包被的聚苯乙烯酶标板表面加入亲和素标记的辣根过氧化物酶检测与邻苯二胺进行显色反应后,最后用酶标仪读取吸光度。
其中清洗液为PBS溶液与质量浓度为0.04%-0.06%的吐温20组成,其中吐温20占清洗液质量的0.08%-0.12%。
本发明,通过利用酶联免疫分析方法对指尖血中血小板的活化程度进行测定,能够测定血小板功能活化剂或抑制剂对血小板功能的影响,测定过程无需过多的大型设备,操作简单,省时省力,成本低。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例,对于本领域的普通技术人员而言,可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (5)
1.一种基于指尖血的酶联免疫分析方法,其特征在于:包括以下操作步骤:
1)将血小板单克隆抗体SZ-51与膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21分别加入稀释液进行稀释,然后将血小板单克隆抗体SZ-51稀释液与膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21稀释液加入到聚苯乙烯酶标板表面,将酶标板在低温下过夜并加入封闭液;
2)使用清洗液将酶标板清洗三次,洗涤除去杂质,形成包被的聚苯乙烯酶标板;
3)采集指尖血,将待测指尖血中加入pH值为7.4的0.2M磷酸缓冲液,配制待测指尖血标准品溶液,混合均匀后低温保存备用;
4)待测指尖血标准品溶液加入到包被的聚苯乙烯酶标板表面,使其与抗体键合,随后用清洗液洗涤聚苯乙烯酶标板并甩干;
5)往包被的聚苯乙烯酶标板表面加入Biotin-SZ2,使其进行反应,随后用清洗液洗涤聚苯乙烯酶标板并甩干;
6)往包被的聚苯乙烯酶标板表面加入亲和素标记的辣根过氧化物酶检测与邻苯二胺进行显色反应后,最后用酶标仪读取吸光度。
2.根据权利要求1所述的一种基于指尖血的酶联免疫分析方法,其特征在于:所述步骤1中稀释液为碳酸盐缓冲液,稀释的浓度为5-10ug/ml。
3.根据权利要求1所述的一种基于指尖血的酶联免疫分析方法,其特征在于:所述步骤1中酶标板过夜的温度为3-4℃。
4.根据权利要求1所述的一种基于指尖血的酶联免疫分析方法,其特征在于:所述步骤5中反应的温度为30-36℃,反应时间为10-20分钟。
5.根据权利要求1所述的一种基于指尖血的酶联免疫分析方法,其特征在于:所述清洗液为PBS溶液与质量浓度为0.04%-0.06%的吐温20组成,其中吐温20占清洗液质量的0.08%-0.12%。
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