CN113567661A - 一种酶标抗体保护液 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及酶联免疫检测试剂技术领域，公开了一种酶标抗体保护液，包括以下成分：唾液酸糖蛋白(来源于燕窝)、明胶(来源于牛)、Procline 200、Triton X－100、聚乙烯吡咯烷酮，并用0.1M的磷酸缓冲液调节pH＝7.4。本发明的酶标抗体保护液，采用来源于燕窝的唾液酸糖蛋白作为保护蛋白，唾液酸糖蛋白是一种保水性良好的蛋白，对抗体和酶均由良好的保护作用，并且该蛋白来自于金丝雀唾液，不含有免疫球蛋白，以解决现有的酶标抗体保护溶液因自身含有免疫球蛋白导致的无法适用于含有免疫球蛋白的酶联免疫分析或以免疫球蛋白为检测对象的酶联免疫分析。
Description
技术领域
本发明涉及酶联免疫检测试剂技术领域，特别是涉及一种酶标抗体保护液。
背景技术
在酶联免疫检测试剂盒生产中，需要使用保护溶液对抗体和酶标抗体进行保护，以使商品化试剂盒拥有更长的货架期。目前的保护溶液对酶标抗体的保护期一般为1年，无法适应长时间保存的要求。并且因为其中含有由蛋白成分带入的免疫球蛋白，如传统的酶标抗体保护液含有牛血清白蛋白，卵白蛋白，乳蛋白等蛋白，不可避免的代入IgG，IgY等免疫球蛋白，给一些对免疫球蛋白林敏的免疫检测实验带来背景值，导致酶联免疫检测试剂盒无法适用于一些特殊的酶联免疫分析，如以免疫球蛋白为检测对象的免疫分析，或者背景干扰要求较高的免疫分析。此外，传统的酶标抗体保护液还含有蔗糖、果糖、海藻糖等小分子糖类，对免疫检测带来一定的干扰。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：现有的保护溶液无法长时间保存，以及无法适用于含有免疫球蛋白的酶联免疫分析或者以免疫球蛋白为监测对象的酶联免疫分析。
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种酶标抗体保护液，包括以下成分：唾液酸糖蛋白(来源于燕窝)、明胶(来源于牛)、Procline 200、Triton X－100、聚乙烯吡咯烷酮，并用0.1M的磷酸缓冲液调节pH＝7.4。Procline 200在本发明的方案中作为防腐剂，与其他组分共同作用以延长酶标抗体保护液的保护时间。Triton X－100用于增加唾液酸糖蛋白的溶解性。
优选的，唾液酸糖蛋白采用以下步骤制备：10g干燕窝，使用7M尿素浸提20～24小时，离心取上清液，然后使用40Kda截流量透析膜进行透析除去尿素，最后将透析后的产物冻干即得到唾液酸糖蛋白。
优选的，唾液酸糖蛋白的浓度为0.5～3mg/mL，明胶的浓度为1～4mg/mL，Procline200的浓度为2.5～6mg/mL，Triton X－100的浓度为2.5～6mg/mL，聚乙烯吡咯烷酮的浓度为3～6mg/mL。
优选的，唾液酸糖蛋白的浓度为1mg/mL，明胶浓度为2mg/mL，Procline 200浓度为5mg/mL，Triton X－100的浓度为5mg/mL，聚乙烯吡咯烷酮的浓度为5mg/mL。
优选的，磷酸缓冲液包括以下含量的组分：0.1mol/L的磷酸氢二钠(Na2HPO4)、0.1mol/L的磷酸二氢钠(NaH2PO4)，其中磷酸氢二钠与磷酸二氢钠的体积比为80～83：17～20，使用0.1M的NaOH或者HCl调节pH至7.4。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
1、本发明的酶标抗体保护液，采用来源于燕窝的唾液酸糖蛋白作为保护蛋白，唾液酸糖蛋白是一种保水性良好的蛋白，对抗体和酶均有良好的保护作用，并且该蛋白来自于金丝雀唾液，不含有免疫球蛋白，以解决现有的酶标抗体保护溶液因自身含有免疫球蛋白导致的无法适用于含有免疫球蛋白的酶联免疫分析或以免疫球蛋白为检测对象的酶联免疫分析；
2、本发明的酶标抗体保护液，采用高糖基化(糖蛋白中糖的比例约为40％)的唾液酸糖蛋白作为酶标抗体保护蛋白，其中的糖类与蛋白以结合态的形式存在于保护液中，不会对酶联免疫检测造成干扰；
3、本发明的酶标抗体保护液，采用来源于燕窝的唾液酸糖蛋白对抗体、酶、酶标抗体均有良好的保护作用，对抗体、酶、酶标抗体在37℃条件下的有效保护时长分别可达到4年、2年和1年，远高于目前市售的酶标抗体保护溶液。并且，该保护溶液由于糖类为以与蛋白结合态的形式存在，高糖基化的蛋白需要多种酶对糖链进行分解，而传统保护液中的普通蛋白分解仅仅需要蛋白酶，因此，唾液酸糖蛋白的微生物利用率更低，不易变质，能够有效提高酶联免疫检测试剂盒的货架期，提升产品的性能。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。
实施例：本实施例提供一种酶标抗体保护液，包括以下含量的成分：唾液酸糖蛋白(来源于燕窝)1g、明胶(来源于牛)2g、5g Procline 200、5g Triton X－100、聚乙烯吡咯烷酮5g、0.1M的pH＝7.4磷酸缓冲液1L。将唾液酸糖蛋白、明胶加入磷酸缓冲液中，加热到沸腾，搅拌溶解后冷却至室温，再加入Procline 200、Triton X－100、聚乙烯吡咯烷酮，然后使用0.22μm的滤膜过滤除菌分装。
采用本实施例制备的酶标抗体保护液分别对抗体(这里的抗体是指黄曲霉毒素B1抗体)、辣根过氧化物酶、辣根过氧化物酶标记抗体在37℃条件下进行对比实验，与现有的保护液1、现有保护液2进行保护性能的对比，现有的保护液1和2均来源于文献：不同酶标抗体稀释液对酶标抗体稳定性的影响，李亚璞，河北省科学院生物研究所，河北，石家庄，050081，【生理生化、遗传育种、耕作栽培】，2014.14.001，DOI：10.16498。其中，现有的保护液1为处理1中所使用的北京泰天和酶联稀释液，现有的保护液2为处理5中所使用的酶标抗体稀释液。并将对比实验数据进行记录于下表1、表2、表3中。
表1：37℃下抗体保护试验
从表1中可以看出，本发明的保护液的OD值在初始值、2年、3年、4年、5年后的数值均大于现有的保护液1和2，可见本发明实施例制备的酶标抗体保护液对抗体具有良好的保护性能。
表2：37℃下辣根过氧化物酶保护试验
从表2可以看出，本发明实施的酶标抗体保护液的OD值在初始值、1年、2年、3年后的测试数值均大于现有的保护液1和2，说明本发明的酶标抗体保护液对辣根过氧化物酶具有良好的保护作用。
表3：37℃下辣根过氧化物酶标记抗体保护试验
从表3可以看出本发明的酶标抗体保护液在的OD值初始值、6个月、1年、2年后的数值均大于现有的保护溶液1和2，特别是2年后的OD值仍大于1.225，具有良好的检测能力，说明本发明的酶标抗体保护液对辣根过氧化物酶标记抗体的保护作用明显强于现有的保护溶液1和2。
综上，本发明的酶标抗体保护液，采用来源于燕窝的唾液酸糖蛋白作为保护蛋白，唾液酸糖蛋白是一种保水性良好的蛋白，对抗体和酶均由良好的保护作用，并且该蛋白来自于金丝雀唾液，不含有免疫球蛋白，以解决现有的酶标抗体保护溶液因自身含有免疫球蛋白导致的无法适用于含有免疫球蛋白的酶联免疫分析或以免疫球蛋白为检测对象的酶联免疫分析；采用高糖基化的唾液酸糖蛋白作为酶标抗体保护蛋白，其中的糖类以蛋白结合态的形式存在于保护液中，不会对酶联免疫检测造成干扰；采用来源于燕窝的唾液酸糖蛋白对抗体、酶、酶标抗体均有良好的保护作用，对抗体、酶、酶标抗体在37℃条件下的有效保护时长分别可达到4年、2年和1年，远高于目前市售的酶标抗体保护溶液。并且，该保护溶液由于糖类为以与蛋白结合态的形式存在，微生物利用率更低，因此更加不易变质，能够有效提高酶联免疫检测试剂盒的货架期，提升产品的性能。本发明的酶标抗体保护液至少可以应用在通过血液检测牛的布鲁氏菌病、口蹄疫、结核病等牛源性的疫病上。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和替换，这些改进和替换也应视为本发明的保护范围。
Claims (5)
1.一种酶标抗体保护液，其特征在于，包括以下成分：唾液酸糖蛋白(来源于燕窝)、明胶(来源于牛)、Procline 200、Triton X－100、聚乙烯吡咯烷酮，并用0.1M的磷酸缓冲液调节pH＝7.4。
2.根据权利要求1所述的酶标抗体保护液，其特征在于：唾液酸糖蛋白采用以下步骤制备：10g干燕窝，使用7M尿素浸提20～24小时，离心取上清液，然后使用40Kda截流量透析膜进行透析除去尿素，最后将透析后的产物冻干即得到唾液酸糖蛋白。
3.根据权利要求1所述的酶标抗体保护液，其特征在于：唾液酸糖蛋白的浓度为0.5～3mg/mL，明胶的浓度为1～4mg/mL，Procline 200的浓度为2.5～6mg/mL，Triton X－100的浓度为2.5～6mg/mL，聚乙烯吡咯烷酮的浓度为3～6mg/mL。
4.根据权利要求3所述的酶标抗体保护液，其特征在于：唾液酸糖蛋白的浓度为1mg/mL，明胶浓度为2mg/mL，Procline 200浓度为5mg/mL，Triton X－100的浓度为5mg/mL，聚乙烯吡咯烷酮的浓度为5mg/mL。
5.根据权利要求1所述的酶标抗体保护液，其特征在于：磷酸缓冲液包括以下含量的组分：0.1mol/L的磷酸氢二钠(Na2HPO4)、0.1mol/L的磷酸二氢钠(NaH2PO4)，其中磷酸氢二钠与磷酸二氢钠的体积比为80～83：17～20，使用0.1M的NaOH或者HCl调节pH至7.4。
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