CN111458499A - 新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒及检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒，属于生物检测技术领域，包括设有盒腔的试剂盒体，沿试剂盒体的长度方向盒腔内依次排列设有样品垫、滤血垫、结合垫、硝酸纤维素膜及吸水滤纸，结合垫上包被有标记物标记的新型冠状病毒单克隆检测抗体和质控物，硝酸纤维素膜包括平行且间隔设置的检测区和质控区，检测区包被并固定有识别单一抗原表位的新型冠状病毒单克隆捕获抗体，质控区包被并固定有质控捕获抗体；盒盖上设置有与样品垫对应的加样口和与检测区及质控区对应的显示窗口。该试剂盒具有操作简单、耗时短、效率高、样本量少、检测灵敏度高、成本低等优点。

Description

新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒及检测方法

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，更具体地说，涉及新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒及检测方法。

背景技术

新型冠状病毒感染疑似病例的确定首先是通过如下途径，即病患满足以下条件：白细胞或淋巴细胞数量偏低；具有肺炎影像学病征；连续使用细菌性肺炎药物三天病情无好转。确定疑似病例后主要通过分离并培养病毒株或者荧光定量PCR手段或者病毒序列匹配的方法对病例进行确诊。但这些确诊方法都存在问题：病毒株分离培养时间长、难度大；RT-PCR检测时间长，甚至会出现假阴、假阳等误诊结果；序列匹配方法繁琐，成本高。因此，亟需研制快速有效的对新型冠状病毒的检测诊断设备或方法，加强对疫情的防控和治疗。

同时，由于甲型流感病毒是最为常见的流感病毒，也是最容易变异的病毒之一，通常表现为流感样症状，包括发热、咽痛、流涕、鼻塞、咳嗽、咳痰、头痛、全身酸痛、乏力，部分病例出现呕吐、腹泻。乙型流感病毒是流行性感冒病毒的简称，是由流感病毒引起的一种传染性极强的急性呼吸道传染病。乙型病毒常引起局限性流行，患者会有全身不适、高烧、肌痛等症状，病情得不到控制会出现一些并发症，例如脑炎、肺炎等。甲型流感病毒和乙型流感病毒均具有传染性和巨大的危害性，且造成的临床症状及引起的并发症和新型冠状病毒具有相似性。

因此，检测区分新型冠状病毒、甲型流感病毒和/或乙型流感病毒，尤其是在新型冠状病毒(2019-nCoV)传染阶段进行病毒种类的有效区分，有利于新型冠状病毒的防治和减少疫情恐慌，对于新型冠状病毒和甲型/乙型流感病毒的诊断和治疗都具有指导性意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒及检测方法，其可以对样品进行快速高效的新型冠状病毒的检测诊断，且一次可以对临床症状和并发症具有相似性的病毒进行临床区分，确定样品中所携带的病毒类型，提高检测效率。

为实现上述目的，本发明提供的一种新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒，包括设有盒腔的试剂盒体，沿所述试剂盒体的长度方向所述盒腔内依次排列设置有样品垫、滤血垫、结合垫、硝酸纤维素膜及吸水滤纸，所述结合垫上包被有用标记物标记的新型冠状病毒单克隆检测抗体、甲型和/或乙型流感病毒单克隆检测抗体及质控物，所述硝酸纤维素膜包括间隔设置的检测区和质控区，所述检测区包被并固定有识别单一抗原表位的新型冠状病毒单克隆捕获抗体、甲型和/或乙型流感病毒单克隆捕获抗体，所述质控区包被并固定有质控捕获抗体；所述试剂盒体的盒盖上设置有与所述样品垫对应的加样口和与所述检测区及所述质控区对应的显示窗口。

优选地，所述检测区设有间隔排列的包被线，所述新型冠状病毒单克隆捕获抗体、所述甲型流感病毒单克隆捕获抗体和/或所述乙型流感病毒单克隆捕获抗体与所述包被线一一对应、分别包被并固定在对应的所述包被线上，形成新型冠状病毒检测带、甲型流感病毒检测带和/或乙型流感病毒检测带。

优选地，所述新型冠状病毒单克隆捕获抗体、所述甲型流感病毒单克隆捕获抗体、所述乙型流感病毒单克隆捕获抗体及所述质控捕获抗体的包被量均为 0.01-5μg/cm。

优选地，所述标记物设置为荧光微球、胶体金、磁微粒或有色微球的任意一种。

优选地，所述样品垫、所述滤血垫、所述结合垫、所述硝酸纤维素膜及所述吸水滤纸均黏贴在所述底板上。

优选地，依次排列的所述样品垫、所述滤血垫、所述结合垫、所述硝酸纤维素膜及所述吸水滤纸之间，彼此相邻的两者的端部均相互重叠。

优选地，所述质控物设置为兔lgG抗体，所述质控捕获抗体设置为羊抗兔 lgG抗体。

优选地，所述标记物载有镧系元素或其螯合物。

优选地，所述镧系元素为钐、铕或铽。

本发明还提供了一种依据上述新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒的检测方法，包含：从所述加样口加入待检测样本至所述样品垫，然后加入样本稀释液；若所述新型冠状病毒检测带和所述质控区均显示标记物所携带的颜色，则样本检测结果为新型冠状病毒阳性；若所述甲型流感病毒检测带和所述质控区均显示标记物所携带的颜色，则样本检测结果为甲型流感病毒病毒阳性；若所述乙型流感病毒检测带和所述质控区均显示标记物所携带的颜色，则样本检测结果为乙型流感病毒阳性；若仅所述质控区显示标记物所携带的颜色，则样本为新型冠状病毒阴性；若所述检测区处和所述质控区均未显示标记物所携带的颜色，则检测失效。

本发明提供的技术方案中，新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒，在试剂盒体内依次排列设置有样品垫、滤血垫、结合垫、硝酸纤维素膜及吸水滤纸，结合垫上包被有标记物标记的新型冠状病毒单克隆检测抗体、甲型和/或乙型流感病毒单克隆检测抗体、及质控物，硝酸纤维素膜包括间隔设置的检测区和质控区，检测区包被并固定有识别单一抗原表位的新型冠状病毒单克隆捕获抗体、甲型和/或乙型流感病毒单克隆捕获抗体，质控区包被并固定有质控捕获抗体；试剂盒体的盒盖上设置有与样品垫对应的加样口和与检测区及质控区对应的显示窗口。

使用时，从加样口滴加待检样本至样品垫，然后滴加样本稀释液；样本将依次沿着试剂盒底板上的各个附着物从样品垫向吸水滤纸的方向移动，若样本中含有新型冠状病毒或甲型/乙型流感病毒，病毒抗原会与对应的检测抗体和捕获抗体分别进行免疫结合并被捕获，质控物会与质控捕获抗体进行结合并被捕获，捕获足量后会显示出肉眼可见的标记物的颜色。然后通过显示窗口进行显示，则样品中是否携带病毒、携带何种病毒，直观可读。本发明提供的新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒，能够快速高效的对样品进行检测，不仅能够简化新型冠状病毒的检测流程，对任何实验仪器、环境或者操作人员不具有依赖性，操作简单、方便、检测周期短效率高、易于判读；且试剂盒检测所需样本量少，通过抗体反应进行检测，检测灵敏度高，并具有成本低等优点；并一次可以对含新型冠状病毒在内的两种或三种病毒进行临床区分，确定样品中所携带的病毒类型，对临床症状和并发症具有相似性的病症进行一次性快速区分诊断，简化检验过程，提高检测效率。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例中的新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒的内部结构示意图；

图2为本发明实施例中检测试剂盒的外部结构示意图；

图3为本发明实施例中检测试剂盒的新型冠状病毒检测结果阳性示意图；

图4为本发明实施例中检测试剂盒的甲型流感病毒检测结果阳性示意图；

图5为本发明实施例中检测试剂盒的乙型流感病毒检测结果阳性示意图；

图6为本发明实施例中检测试剂盒的检测结果阴性示意图。

图1-图6中：

1、吸水滤纸；2、硝酸纤维素膜；3、结合垫；4、滤血垫；5、样品垫；6、底板；7、试剂盒体；8、加样口；9、显示窗口；10、质控条带；11、新型冠状病毒检测条带；12、甲型流感病毒检测条带；13、乙型流感病毒检测条带。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。

本具体实施方式的目的在于提供一种新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒及检测方法，其可以对样品进行快速高效的新型冠状病毒的检测诊断，且一次可以对临床症状和并发症具有相似性的病毒进行临床区分，确定样品中所携带的病毒类型，提高确诊效率。

以下，结合附图对实施例作详细说明。此外，下面所示的实施例不对权利要求所记载的发明的内容起任何限定作用。另外，下面实施例所表示的构成的全部内容不限于作为权利要求所记载的发明的解决方案所必需的。

请参考附图1-6，本实施例提供的一种新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒，如图2所示，试剂盒体7由底板6、侧壁和盖板组成，并设有盒腔。如图1 所示，沿试剂盒体7的长度方向盒腔内依次排列设置有样品垫5、滤血垫4、结合垫3、硝酸纤维素膜2及吸水滤纸1，这些附着物均可以黏贴在底板6上进行固定，底板6可以使用PVC板制作。盒盖和底板6之间具有间隙、促进液体在这些附着物上在毛细作用下快速流动。而依次排列的样品垫5、滤血垫4、结合垫3、硝酸纤维素膜2及吸水滤纸1之间，彼此相邻的两者的端部可以是彼此相抵或均相互重叠，如彼此相邻的两者的端部压在一起并粘结，以加强液体在相邻两者之间流动的安全过渡性。样品垫5和结合垫3都是现有技术中胶金体法中应用的样品垫和结合垫，都可以是玻璃纤维膜。

其中，结合垫3上包被有使用标记物标记的新型冠状病毒(2019-nCoV) 单克隆检测抗体、甲型和/或乙型流感病毒单克隆检测抗体及质控物，标记物可以为荧光微球、胶体金、磁微粒或有色微球等可以与抗体进行结合的带有颜色显示的一种物质。硝酸纤维素膜2包括沿样品垫5至吸水滤纸1方向间隔且平行设置的检测区和质控区，如图2所示，可以是检测区靠近结合垫3，质控区靠近吸水滤纸1，检测区对应包被并固定有有识别单一抗原表位的新型冠状病毒(2019-nCoV)单克隆捕获抗体、甲型和/或乙型流感病毒单克隆捕获抗体。质控区包被并固定有质控捕获抗体。质控物是能够与质控捕获抗体进行特异性结合但不能和新型冠状病毒单克隆捕获抗体进行结合的物质，如满足条件的任意一种蛋白，或质控物为兔lgG抗体，质控捕获抗体为羊抗兔lgG抗体。

试剂盒体7的盒盖上设置有与样品垫5对应的加样口8、以供待检样品加入至盒腔内落在样品垫5上。盒盖上在与检测区及质控区对应的位置还设置有显示窗口9，以显示检测结果。

显示窗口9旁侧还可以写有与检测区和质控区一一对应的区分标识，如图 2所示的，质控区的区分标识为C，新型冠状病毒(2019-nCoV)的检测区分标识为T1。

使用时，从加样口8滴加待检样本至样品垫5，然后滴加样本稀释液进行稀释，样本稀释液可以是0.01M磷酸盐缓冲液，而样本可以是全血样本或者是提取的血清或血浆。样本受毛细作用将依次沿着试剂盒底板6上的各个附着物从样品垫5向吸水滤纸1的方向移动，首先经过滤血垫4过滤，然后流经结合垫3时，若样品中含有新型冠状病毒(2019-nCoV)或甲型/乙型流感病毒，病毒抗原会与对应的检测抗体相结合生成复合物，然后该复合物及结合垫3上的质控物随样品液体继续流动，在流经硝酸纤维素膜2的检测区时，复合物会与对应的被固定的捕获抗体进行特异性结合，从而被集中捕获、停留在对应的捕获抗体的固定包被处，达到一定数量后，该处就会显示出肉眼可见的标记物的颜色；流经质控区时质控物会和被固定包被的质控捕获抗体进行特异性结合，被集中捕获在质控区，达到一定数量后，质控区也会显示出肉眼可见的标记物的颜色。故，若仅质控区显示标记物所携带的颜色，如图6所示，则样本检测结果呈阴性、未携带新型冠状病毒(2019-nCoV)及甲型和乙型流感病毒；若质控区和检测区均显示颜色，且检测区对应显示的为某一种病毒的检测颜色或检测位置显示颜色，则样本携带该种病毒，如图3-5所示；若质控区和检测区均未显示颜色，则属于操作失误或样品不合格，应当重新检测。

如此设置，本实施例提供的新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒，能够快速高效的对样品进行检测，不仅能够简化新型冠状病毒(2019-nCoV)的检测流程、缩短检测诊断时间，并一次可以对含新型冠状病毒(2019-nCoV)在内的两种或三种病毒进行临床区分，确定样品中所携带的病毒类型，对临床症状和并发症具有相似性的病症进行一次性快速区分诊断，简化检验过程，提高确诊效率；且对任何实验仪器、环境或者操作人员不具有依赖性，操作简单、方便、检测周期短效率高、易于判读；且试剂盒检测所需样本量少，通过抗体反应进行检测，检测灵敏度高，并具有成本低等优点；检测过程不需要特殊的仪器设备、不依赖较高实验室条件，检测人员不需要专业培训，适应性强，便于随时随地的监测和检验，实现快速高效低成本的检测，能在基层社区医院和乡村医院推广。

以一次针对三种病毒进行检测为例，其中，通过疏水作用、氢键、静电作用等现有技术将新型冠状病毒单克隆捕获抗体、甲型流感病毒单克隆捕获抗体、乙型流感单克隆捕获抗体间隔的固定包被在硝酸纤维素膜2上、将质控捕获抗体固定包被在质控区，如图2-6所示，具体地：沿样品流动方向检测区设有间隔排列呈条状的包被线，新型冠状病毒单克隆捕获抗体、甲型流感病毒单克隆捕获抗体及乙型流感病毒单克隆捕获抗体各自位于其中一个包被线上，三者与三个包被线一一对应，且均包被并固定在对应的包被线上，形成新型冠状病毒检测带11、甲型流感病毒检测带12、乙型流感病毒检测带13，包被质控捕获抗体的质控区也可以是呈线带状的包被线，形成质控条带10。在试剂盒体7上对应于三个检测带的地方写有区分标记。新型冠状病毒检测带的区分标识为 T1，甲型流感病毒检测带12的区分标识为T2，乙型流感病毒检测带13的区分标识为T3。

使用时，将样品和稀释液从样品口加入样品垫5，样品流经检测区，携带有对应病毒抗原的复合物与对应检测带上的捕获抗体结合，且被集中捕获在该检测带上，则对应的检测带显示出颜色。则样品中若携带新型冠状病毒，则新型冠状病毒单克隆检测抗体和捕获抗体结合时就会被集中固定在新型冠状病毒检测带11处、显示出颜色，质控物和质控捕获抗体结合后就会被集中固定在质控条带10处，如图3所示；若样品中携带甲型流感病毒，则质控条带10和甲型流感病毒检测带12会显示颜色，检测试剂盒会如图4所示显示；若样品中携带乙型流感病毒，则质控条带10和乙型流感病毒检测带13会显示颜色，检测试剂盒会如图5所示显示；若样品中没有携带三类病毒，则仅质控条带10会显示颜色，检测试剂盒会如图6所示显示。若检测区和质控区均未显示标记物所携带的颜色，如图2所示，则检测失效。如此设置，可以避免混淆，对病毒种类的检测结果可以区分显示，直观判读，便捷高效。

需要说明的是，上述检测过程涉及的免疫反应原理、标记物标记原理和手段、层析原理都是现有技术，抗体包被、固定包被和捕获也是现有技术。

显示窗口9显示的颜色取决于标记物的类型，若标记物中载有镧系元素或其螯合物，如钐、铕或铽，则显示的颜色为红色或紫红色。显示窗口9可以是覆盖检测区和质控区的一个大窗口，也可以是与质控区和三个检测带一一对应的多个小窗口。试剂盒体1的盒盖上设置有开口及覆盖开口的透明物如透明塑料或玻璃、形成上述显示窗口9。

如图2所示，新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒可以呈扁平盒状，加样口8呈回字型，盒盖上对应于检测区和质控区的范围设置有显示窗口9，区分标识位于显示窗口9的一侧。

下面以具体数值为例对试剂盒进行描述说明：样品垫5的长度为14.0mm，滤血垫4的长度为11.0mm，样品垫5与滤血垫4重叠粘贴在一起的重叠长度为1.5mm。滤血垫4的顶端压住结合垫3的底端并与之粘贴，结合垫3的长度为6.0mm，滤血垫4与结合垫3重叠粘贴在一起的重叠长度为1.5mm，结合垫3的顶端压住硝酸纤维素膜2的底端并与之粘贴，结合垫3与硝酸纤维素膜 2重叠粘贴在一起的重叠长度为2.0mm。硝酸纤维素膜2的顶端被吸水滤纸1的底端压住并与之粘贴，吸水滤纸1长度为32.0mm，吸水滤纸1与硝酸纤维素膜2重叠粘贴在一起的重叠长度为2.0mm。标记物的终浓度偶联时的使用浓度为0.5-1.0mg/ml，标记物的直径为100nm-500nm。识别单一抗原表位的新型冠状病毒单克隆捕获抗体、甲型/乙型流感病毒单克隆捕获抗体终浓度为1-1.5 mg/ml；质控捕获抗体终浓度为0.5-1.0mg/ml，包被量均为0.01-5μg/cm。使用本实施例提供的新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒进行检测时，用移液枪吸取10μl的血清或全血样本直接滴加至加样口8，再滴加70-100μl的样本稀释液。则仅需要15分钟就可以读取实验结果。

可以理解的是，上述各实施例中相同或相似部分可以相互参考，在一些实施例中未详细说明的内容可以参见其他实施例中相同或相似的内容。本发明提供的多个方案包含本身的基本方案，相互独立，并不互相制约，但是其也可以在不冲突的情况下相互结合，达到多个效果共同实现。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (10)

1.一种新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒，其特征在于，包括设有盒腔的试剂盒体(7)，沿所述试剂盒体(7)的长度方向所述盒腔内依次排列设置有样品垫(5)、滤血垫(4)、结合垫(3)、硝酸纤维素膜(2)及吸水滤纸(1)，所述结合垫(3)上包被有用标记物标记的新型冠状病毒单克隆检测抗体、甲型和/或乙型流感病毒单克隆检测抗体及质控物，所述硝酸纤维素膜(2)包括间隔设置的检测区和质控区，所述检测区包被并固定有识别单一抗原表位的新型冠状病毒单克隆捕获抗体、甲型和/或乙型流感病毒单克隆捕获抗体，所述质控区包被并固定有质控捕获抗体；所述试剂盒体(7)的盒盖上设置有与所述样品垫(5)对应的加样口(8)、和与所述检测区及所述质控区对应的显示窗口(9)。

2.如权利要求1所述的新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒，其特征在于，所述检测区设有间隔排列的包被线，所述新型冠状病毒单克隆捕获抗体、所述甲型流感病毒单克隆捕获抗体和/或所述乙型流感病毒单克隆捕获抗体与所述包被线一一对应、分别包被并固定在对应的所述包被线上，形成新型冠状病毒检测带(11)、甲型流感病毒检测带(12)和/或乙型流感病毒检测带(13)。

3.如权利要求1所述的新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒单克隆捕获抗体、所述甲型流感病毒单克隆捕获抗体、所述乙型流感病毒单克隆捕获抗体及所述质控捕获抗体的包被量均为0.01-5μg/cm。

4.如权利要求1所述的新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒，其特征在于，所述标记物设置为荧光微球、胶体金、磁微粒或有色微球的任意一种。

5.如权利要求1所述的新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫(5)、所述滤血垫(4)、所述结合垫(3)、所述硝酸纤维素膜(2)及所述吸水滤纸(1)均黏贴在所述底板(6)上。

6.如权利要求1所述的新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒，其特征在于，依次排列的所述样品垫(5)、所述滤血垫(4)、所述结合垫(3)、所述硝酸纤维素膜(2)及所述吸水滤纸(1)之间，彼此相邻的两者的端部均相互重叠。

7.如权利要求1所述的新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒，其特征在于，所述质控物设置为兔lgG抗体，所述质控捕获抗体设置为羊抗兔lgG抗体。

8.如权利要求1所述的新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒，其特征在于，所述标记物载有镧系元素或其螯合物。

9.如权利要求8所述的新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒，其特征在于，所述镧系元素为钐、铕或铽。

10.一种依据如权利要求2所述的新型冠状病毒和流感病毒检测试剂盒的检测方法，其特征在于，包含：

从所述加样口(8)加入待检测样本至所述样品垫(5)，然后加入样本稀释液；

若所述新型冠状病毒检测带(11)和所述质控区均显示标记物所携带的颜色，则样本检测结果为新型冠状病毒阳性；

若所述甲型流感病毒检测带(12)和所述质控区均显示标记物所携带的颜色，则样本检测结果为甲型流感病毒病毒阳性；

若所述乙型流感病毒检测带(13)和所述质控区均显示标记物所携带的颜色，则样本检测结果为乙型流感病毒阳性；

若仅所述质控区显示标记物所携带的颜色，则样本为新型冠状病毒阴性；

若所述检测区处和所述质控区均未显示标记物所携带的颜色，则检测失效。

Images