CN1959405B

CN1959405B - 一种对伞花烃的含量测定方法

Info

Publication number: CN1959405B
Application number: CN2005100158891A
Authority: CN
Inventors: 于红梅; 高钧; 宋福行; 魏峰
Original assignee: Tianjin Tasly Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Tasly Pharmaceutical Group Co Ltd
Priority date: 2005-11-04
Filing date: 2005-11-04
Publication date: 2011-02-16
Anticipated expiration: 2025-11-04
Also published as: CN1959405A

Abstract

本发明公开了一种荆花胃康胶丸中对伞花烃的含量测定方法，具体地包括将样品的溶解后采用高效液相色谱法进行测定。

Description

一种对伞花烃的含量测定方法

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及中药中对伞花烃的含量测定方法。

背景技术

荆花胃康胶丸由天津天士力制药股份有限公司生产，是土荆芥油加入适量精炼植物油制成的胶丸制剂，具有理气散寒，消热化瘀功能。由于本品所含的成份多且复杂，且有的结构及性状极其相似，原质量控制方法采用药典规定的经典挥发油测定法测定总挥发油的含量，不能反映其中有效成份的含量的变化。测定总挥发油的含量需首先确定其相对密度。然而，土荆芥挥发油中各成分的含量因产地不同，所取部位不同而异，其相对密度也很难确定为一固定值；且采用经典挥发油测定法，操作步骤较为繁琐，时间较长，不利于微量、快速、准确的定量。

发明内容

本发明的目在于为了解决上述问题，提供了一种中药荆花胃康胶丸中对伞花烃的含量测定方法。

更有效的控制荆花胃康胶丸的质量，本发明建立高效液相色谱方法测定该方中的单体指标成分对伞花烃的含量。与原经典挥发油测定法测定总挥发油含量相比较，本发明操作简单快速，准确可靠，灵敏度、精密度和回收率高，重现性好，能更有效控制荆花胃康胶丸原料和制剂的质量。

本发明通过以下方案予以实施：

a.供试品溶液的制备；

b.所得供试品溶液进行高效液相色谱法测定。

其中，步骤a中配制的供试品溶液浓度为2～50mg·mL^-1，供试品溶液的制备采用甲醇、乙腈、甲醇水混合液、乙腈水混合液、或甲醇乙腈混合液为溶剂；步骤b中对所得供试品溶液进行高效液相色谱法测定采用碳十八或碳八烷基键合硅胶为固定相，优选碳十八为固定相，乙腈-磷酸水溶液系统为流动相，乙腈与磷酸水溶液比例为1∶0.25～19，优选为1.86∶1，磷酸水溶液中磷酸浓度为0～2％，流速为0.3～5mL·min^-1，优选为1mL·min^-1，柱温为10～40℃，优选为30℃，检测波长为240～270nm，优选为265nm，外标法所配制的对照品溶液浓度为0.2～20mg·mL^-1。

本发明建立高效液相色谱方法测定该方中的单体指标成分对伞花烃的含量。与原经典挥发油测定法测定总挥发油含量相比较，本发明操作简单快速，准确可靠，灵敏度、精密度和回收率高，重现性好，能更有效控制荆花胃康胶丸原料和制剂的质量。

采用本发明测定供试品中对伞花烃的含量，供试品用量小，操作简单快速，所得结果准确可靠，解决了目前所采用方法中存在的操作繁琐，耗物耗时等问题。

方法学考察

本发明通过精密度、回收率等指标进一步考察了

1样品

土荆芥油；荆花胃康胶丸。

2仪器与试剂

Agilent 1100高效液相色谱仪，配置四元泵，在线真空脱气机，二极管阵列检测器，柱温箱。

对伞花烃对照品，购自中国药品生物制品检定所(含量99.0％)；甲醇和磷酸，分析纯，天津市化学试剂三厂；乙腈，色谱纯，Merck公司；纯化水。

3 HPLC条件

色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18，250mm×4.6mm，5μm；

流动相：乙腈-0.1％磷酸水溶液(65∶35)；

流速：1.0mL·min^-1；

柱温：30℃；

检测波长：265nm。

4系统适用性试验

以对伞花烃计算，理论板数为6000，与相邻色谱峰的分离度大于1.5。

5方法与结果

5.1对照品溶液的制备

取对伞花烃对照品适量，精密称定重量为59.49mg，用甲醇溶解，定容至5mL，制成浓度为11.90mg·mL^-1的对伞花烃对照品溶液。

5.2供试品溶液的制备

取供试品适量，精密称定，置5mL容量瓶中，加入甲醇，定容至5mL，摇匀，即得。

5.3标准曲线的绘制

精密量取浓度为11.90mg·mL^-1对伞花烃对照品溶液0.5mL，置于5mL容量瓶中，加甲醇至刻度，制成浓度为1.19mg·mL^-1的对照品溶液。分别吸取1.19mg·mL^-1对照品溶液5μL、15μL、18μL，11.90mg·mL^-1对照品溶液6μL、8μL、10μL注入高效液相色谱仪分析，记录峰面积。以进样质量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，在5.95μg～119.00μg范围内，峰面积与浓度呈良好线性关系，R²＝0.9998，标准曲线为y＝168.38x+183.11。

5.4稳定性试验

制备供试品溶液，分别在第0、2、4、8、16、24h，精密量取15μL注入高效液相色谱仪分析，计算峰面积的RSD为0.6％，表明供试品溶液在24h内稳定。结果见表1。

表1 稳定性试验结果

5.5仪器精密度试验

取同一对照品溶液，吸取10μL注入高效液相色谱仪分析，连续分析6次，计算各峰面积的RSD为0.6％。结果见表2。

表2 仪器精密度试验结果

5.6重复性试验

依“供试品溶液制备”项下方法制备供试品溶液6份，各吸取10μL注入高效液相色谱仪分析，计算对伞花烃含量，测定结果的RSD为0.6％。重复性试验结果见表3。

表3 重复性试验结果

5.7回收率试验

精密吸取浓度为11.90mg·mL^-1的对伞花烃对照品溶液3.8mL，置于25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1.81mg·mL^-1的对伞花烃对照品溶液。取供试品适量，精密称量六份，分别置于5mL容量瓶中，加入1.81mg·mL^-1对照品溶液1mL，加入甲醇至刻度。计算平均回收率为98.1％，RSD为1.2％。回收率试验结果见表4。

表4 回收率试验结果

5.8含量测定

分别精密称取各供试品适量，依“供试品制备”项下方法制备供试品溶液，各吸取10μL，注入高效液相色谱仪，测定，计算。含量测定试验结果见表5。

表5 含量测定试验结果

5.9耐用性试验

换用色谱柱DIKMA Diamonsil C18(5μm，250mm×4.6mm)，分别精密吸取4.46mg·mL^-1对伞花烃对照品溶液和6.24mg·mL^-1土荆芥种子挥发油溶液10μL，注入高效液相色谱仪，计算，分离度大于1.5。

6结论

采用本发明可以精确地测定其指标成份对伞花烃的含量，对荆花胃康胶丸进行更为有效的质量控制。

附图说明

图1、荆花胃康胶丸中对伞花烃含量测定HPLC色谱图

图2、荆花胃康胶丸原料中对伞花烃含量测定HPLC色谱图

图3、对伞花烃对照品HPLC色谱图。

具体实施方式

下面通过实施例进一步详细说明本发明的有益效果，该实施例仅用于说明本发明而对本发明并没有限制。

实施例1

步骤a.样品的制备：取荆花胃康胶丸40粒(批号：050504，天津天士力制药股份有限公司生产)，置烧瓶中，加水500ml与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，置电热套中缓缓加热至沸，并保持微沸约5h，至测定器中挥发油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水放出，至油层上端到达刻度0线上端5mm处为止。放置1h以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量，按相对密度0.970计算，即得挥发油。挥发油适量(约50mg)，精密称定，置5mL容量瓶中，加入甲醇，定容，摇匀，即得供试品溶液。

步骤b.取对伞花烃(约60mg)，精密称定为58.84mg，置5mL容量瓶中，加入甲醇，定容，摇匀，即得对照品溶液。HPLC条件为：色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液(65∶35)；流速为1.0mL·min-1；柱温为30℃；检测波长为265nm。采用外标法进行含量测定，结果对伞花烃含量为11.52％。

实施例2

步骤1.挥发油同实施例1，采用乙腈溶解，得供试品溶液。荆花胃康胶丸(批号：050505，天津天士力制药股份有限公司生产)。

步骤2.取对伞花烃(约100mg)，精密称定为99.24mg，置5mL容量瓶中，加入甲醇，定容，摇匀，即得对照品溶液。HPLC条件为：色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈-2％磷酸水溶液(65∶17)；流速为1.0mL·min-1；柱温为10℃；检测波长为265nm。采用外标法进行含量测定，结果对伞花烃含量为13.16％。

实施例3

步骤1.挥发油同实施例1，采用甲醇水混合溶液进行溶解，得供试品溶液。荆花胃康胶丸(批号：050506，天津天士力制药股份有限公司生产)。

步骤2.取对伞花烃(约1mg)，精密称定为1.25mg，置5mL容量瓶中，加入甲醇，定容，摇匀，即得对照品溶液。HPLC条件为：色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈；流速为2.0mL·min-1；柱温为25℃；检测波长为265nm。采用外标法进行含量测定，结果对伞花烃含量为12.75％。

实施例4

步骤1.挥发油同实施例1，采用甲醇水混合溶液进行溶解，得供试品溶液。荆花胃康胶丸(批号：050507，天津天士力制药股份有限公司生产)。

步骤2.取对伞花烃(约50mg)，精密称定为52.37mg，置5mL容量瓶中，加入甲醇，定容，摇匀，即得对照品溶液。HPLC条件为：色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈-2％磷酸水溶液(65∶1235)；流速为1.0mL·min-1；柱温为30℃；检测波长为265nm。采用外标法进行含量测定，结果对伞花烃含量为15.81％。

实施例5

步骤1.挥发油同实施例1，采用甲醇水混合溶液进行溶解，得供试品溶液。荆花胃康胶丸(批号：050508，天津天士力制药股份有限公司生产)。

步骤2.取对伞花烃(约40mg)，精密称定为39.46mg，置5mL容量瓶中，加入甲醇，定容，摇匀，即得对照品溶液。HPLC条件为：色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈-2％磷酸水溶液(65∶1000)；流速为mL·min-1；柱温为30℃；检测波长为265nm。采用外标法进行含量测定，结果对伞花烃含量为12.49％。

Claims

1.一种对伞花烃的含量测定方法，由下述步骤组成：

a.荆花胃康丸供试品溶液的制备：取荆花胃康胶丸40粒，置烧瓶中，加水500ml与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，置电热套中缓缓加热至沸，并保持微沸约5h，至测定器中挥发油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水放出，至油层上端到达刻度0线上端5mm处为止；放置1h以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量，按相对密度0.970计算，即得挥发油；取挥发油适量，采用甲醇、乙腈、甲醇水混合液、乙腈水混合液、或甲醇乙腈混合液为溶剂，配制浓度为2～50mg·mL^-1荆花胃康丸供试品溶液；

b.所得供试品溶液采用外标法进行高效液相色谱法测定：采用碳十八或碳八烷基键合硅胶为固定相，乙腈-磷酸水溶液系统为流动相；流动相中乙腈与磷酸水溶液比例为1∶0.25～19，磷酸水溶液中磷酸浓度为0.1％或2％，流速为1.0mL·min^-1或2.0mL·min^-1，柱温为10～40℃；检测波长为265nm。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤b中外标法所配制的对照品溶液浓度为0.2～20mg·mL^-1。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于流动相中乙腈与磷酸水溶液比例为1.86∶1，流速为1mL·min^-1，柱温为30℃；检测波长为265nm。