CN117589908A - 一种硫酸吗啡栓剂有关物质和含量的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种硫酸吗啡栓剂有关物质和含量的测定方法，属药物分析技术领域，有关物质包括已知杂质A、B、C、D、E、F，包括以下步骤：S1、分别配制溶剂、系统适用性溶液、对照溶液、对照品溶液和供试品溶液；S2、采用液相色谱法测定硫酸吗啡栓剂中有关物质；S3、色谱条件如下：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速：0.8～1.2ml/min，进样量：10～50ul，柱温：25～35℃，流动相包括：将离子对‑磷酸盐缓冲液:甲醇体积比为70:30混合均匀。本发明能快速、有效、准确的检测硫酸吗啡栓剂的有关物质及含量。本发明方法操作简单，分析时间短，准确度高，重复性好，为硫酸吗啡栓剂提供了可靠的检测方法。
Description
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，具体而言，涉及一种硫酸吗啡栓剂有关物质及含量的检测方法。
背景技术
硫酸吗啡化学名为17-甲基-4,5α-环氧-7,8-二脱氢吗啡喃-3,6α-二醇硫酸盐五水合物，是一种镇痛药，为《麻醉药品管理条例》的品种，其生产、销售和使用均受到严格限制。其制剂在临床上常用于急性锐痛，用于麻醉和手术前可保持病人宁静进入嗜睡。也用于癌症患者的第三阶梯止痛。
有关物质主要是在生产过程中带入的起始原料、中间体、聚合体、副反应产物，以及贮藏过程中的降解产物等。有关物质研究是药品质量研究中关键性的项目之一，其含量不仅是反映药品纯度的直接指标，而且有重要的安全意义。
2023版英国药典收载的硫酸吗啡栓有关物质检查方法耗时较长，分析时间为50min，色谱条件为梯度洗脱，容易出现鬼峰，影响结果判定；2023版英国药典中硫酸吗啡栓含量测定方法专属性较差，难以将主成分硫酸吗啡与已知杂质有效分离，影响结果判定。国家药品监督管理局颁布的硫酸吗啡栓质量标准(YBH02582008)中含量测定方法存在主峰与杂质共洗脱现象，难以准确定量，且该标准未收载有关物质检查方法。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种硫酸吗啡栓剂有关物质和含量的检测方法，以改善上述问题。
本发明目的是由以下技术方案实现的：
一种硫酸吗啡栓剂有关物质的检测方法，有关物质包括已知杂质A、B、C、D、E、F，包括以下步骤：
S1、配制溶液：分别配制溶剂、系统适用性溶液、对照品溶液、对照溶液和供试品溶液；
所述溶剂为：取对苯二酚30mg加水溶解，加醋酸10ml，用水稀释至1000ml；
所述系统适用性溶液为：取杂质A、B、C、D、E、F、硫酸吗啡对照品精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中含杂质A、B、C、D、E、F各10μg、硫酸吗啡500μg的溶液；
所述对照品溶液为取杂质A、B、C、D、E、F、硫酸吗啡对照品精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中含杂质A、B、C、D、E、F各10μg、硫酸吗啡2.5μg的溶液；
所述对照溶液为：取供试品溶液1ml，置200ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过；
所述供试品溶液为：取硫酸吗啡栓剂置分液漏斗中，加三氯甲烷20ml，振摇使基质溶解，用溶剂提取3次，每次15ml，合并提取液置50ml容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，其中硫酸吗啡栓剂含硫酸吗啡25mg；
S2、测定方法：采用液相色谱法测定硫酸吗啡栓剂中有关物质，待系统稳定后，分别进溶剂、系统适用性溶液；将同体积的供试品溶液和对照溶液分别采用高效液相色谱进行检测，根据高效液相色谱检测结果分析有关物质；或将同体积的供试品溶液和对照品溶液分别采用高效液相色谱进行检测，采用外标法对供试品溶液中的有关物质进行计算；
S3、色谱条件如下：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速：0.8～1.2ml/min，检测波长：210～240nm，进样量：10～50ul，柱温：25～35℃，流动相包括：将离子对-磷酸盐缓冲液:甲醇体积比为70:30混合均匀；其中，缓冲液中离子对w/v浓度为0.18％～0.22％，磷酸盐w/v浓度为0.008mol/L～0.012mol/L，pH值为2.5～2.7。
优选的，所述色谱柱尺寸为4.6x150mm，5um。
优选的，所述离子对为庚烷磺酸钠，磷酸盐为磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵中的任意一种。
优选的，所述磷酸盐为磷酸二氢钾，w/v浓度为0.01mol/L。
优选的，所述离子对-磷酸盐缓冲液还包括三乙胺，三乙胺的v/v浓度为0.05％～0.15％。
优选的，所述三乙胺浓度为0.1％。
优选的，所述流速为1.0mL/min。
优选的，所述柱温为30℃。
优选的，所述pH值为2.5。
本发明还提供了一种硫酸吗啡栓剂含量的检测方法，利用所述的有关物质的检测方法，包括以下步骤：将同体积的供试品溶液、硫酸吗啡对照品溶液分别在高效液相色谱仪上进行检测后，采用外标法对供试品溶液中硫酸吗啡进行计算；其中，检测波长包括220～230nm或280～285nm；硫酸吗啡对照品溶液为：取硫酸吗啡对照品精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中含硫酸吗啡0.5mg的溶液。
本发明具有以下有益效果：
通过选择特定的高效液相色谱条件，可以有效地对硫酸吗啡栓剂中有关物质实现检测，能够保证在以上各有关物质有效成分高效分离的基础上，使其具有良好的专属性、重复性与准确度，从而更好地实现对硫酸吗啡栓剂的质量控制。此外，以上硫酸吗啡栓剂含量的检测方法，能够实现对硫酸吗啡栓剂的高效、准确的定量检测。
本发明研究了一种等度洗脱方法，能在30分钟内完成原方法中所有已知杂质的分离分析，能够显著提高分析效率及分析方法的耐用性。另外，现有方法中，硫酸吗啡栓中的杂质B的含量会在供试品放置过程中逐渐增大，为避免该情况发生，采用含1％醋酸的30μg/ml对苯二酚溶液为溶剂，则可以很好的解决上述问题。
本发明能快速、有效、准确的检测硫酸吗啡栓剂的有关物质及含量。本发明方法操作简单，分析时间短，准确度高，重复性好，为硫酸吗啡栓剂提供了可靠的检测方法，为药物产品质量控制及研究提供了参考。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1本发明有关物质测定方法系统适用性色图谱；
图2硫酸吗啡全波长扫描图；
图3 2023版英国药典有关物质测定方法中系统适用性色谱图；
图4 2023版英国药典含量测定方法中系统适用性色谱图；
图5国家药品监督管理局硫酸吗啡栓质量标准(YBH02582008)含量测定方法中系统适用性色谱图；
图中纵坐标mAU代表信号强度。
具体实施方式
下面通过具体实施例，并结合附图，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例1本发明有关物质测定方法系统适用性试验
色谱条件：含0.202％庚烷磺酸钠的0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(含0.1％三乙胺，用磷酸调节pH值至2.5)-甲醇(70:30)为流动相；色谱柱：Waters Symmetry C18柱(4.6×150mm，5μm)；流速：1.0ml/min；检测波长：230nm；进样量：20ul；柱温：30℃。系统适用性溶液：取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、硫酸吗啡对照品加溶剂溶解并稀释制成每1ml中约含杂质A、B、C、D、E、F各10μg、硫酸吗啡500μg的溶液。本实施例磷酸盐为磷酸二氢钾，实际应用中还可以选用磷酸二氢钠、磷酸二氢铵中的任意一种。本实施例所用色谱条件为最佳适用条件，实际应用中能达到要求的其它条件也适用，如实施例4的端点条件及端点范围内的条件。
如图1所示，在该色谱条件下硫酸吗啡相邻峰之间的分离度以及各杂质之间的分离度均大于2.0，说明本方法分离度高、专属性强，具体结果见表1。
表1有关物质系统适用性结果
实施例2有关物质及含量测定试验
a、有关物质测定试验
色谱条件保持参数为优选色谱条件同实施例1，分别配制溶剂、系统适用性溶液、对照溶液和6份不同批次的供试品溶液，溶剂为：取对苯二酚30mg加水溶解，加醋酸10ml，用水稀释至1000ml；系统适用性溶液为：取杂质A、B、C、D、E、F、硫酸吗啡对照品精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中含杂质A、B、C、D、E、F各10μg、硫酸吗啡500μg的溶液；对照溶液为：取供试品溶液1ml，置200ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过；供试品溶液为：取硫酸吗啡栓剂置分液漏斗中，加三氯甲烷20ml，振摇使基质溶解，用溶剂提取3次，每次15ml，合并提取液置50ml容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，其中硫酸吗啡栓剂含硫酸吗啡25mg；分别精密量取上述溶液各20μl，采用液相色谱法测定硫酸吗啡栓剂中有关物质，待系统稳定后，分别进溶剂、系统适用性溶液；将同体积的供试品溶液和对照溶液分别采用高效液相色谱进行检测，根据高效液相色谱检测结果分析有关物质；记录峰面积，考察供试品溶液中各个杂质含量，结果杂质C在6批次供试品溶液中均未检出，其它杂质检出结果见表2。
实际应用中，检测方法还可以用外标法，具体步骤如下：分别配制溶剂、系统适用性溶液、供试品溶液、对照品溶液，溶剂为：取对苯二酚30mg加水溶解，加醋酸10ml，用水稀释至1000ml；系统适用性溶液为：取杂质A、B、C、D、E、F、硫酸吗啡对照品精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中含杂质A、B、C、D、E、F各10μg、硫酸吗啡500μg的溶液；供试品溶液为：取硫酸吗啡栓剂置分液漏斗中，加三氯甲烷20ml，振摇使基质溶解，用溶剂提取3次，每次15ml，合并提取液置50ml容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，其中硫酸吗啡栓剂含硫酸吗啡25mg；对照品溶液为：取杂质A、B、C、D、E、F、硫酸吗啡对照品精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中含杂质A、B、C、D、E、F各10μg、硫酸吗啡2.5μg的溶液；采用液相色谱法测定硫酸吗啡栓剂中有关物质，待系统稳定后，分别进溶剂、系统适用性溶液；将同体积的供试品溶液和对照品溶液分别采用高效液相色谱进行检测，采用外标法对供试品溶液中的有关物质进行计算。
表2有关物质测定结果表
b、含量测定试验
色谱条件保持参数为优选色谱条件同实施例1，测定波长为284nm，分别配制硫酸吗啡对照品溶液和6份不同批次的供试品溶液，硫酸吗啡对照品溶液为：取硫酸吗啡对照品精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中含硫酸吗啡0.5mg的溶液，供试品溶液为：取硫酸吗啡栓剂置分液漏斗中，加三氯甲烷20ml，振摇使基质溶解，用溶剂提取3次，每次15ml，合并提取液置50ml容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，其中硫酸吗啡栓剂含硫酸吗啡25mg。分别精密量取上述两种溶液各20μl，将同体积的供试品溶液、硫酸吗啡对照品溶液分别在高效液相色谱仪上进行检测后，采用外标法对供试品溶液中硫酸吗啡进行计算；记录峰面积，考察供试品溶液中硫酸吗啡含量，结果见表3。
表3含量测定结果表
由表2和表3可知，本发明方法可以实现各个杂质的良好分离和准确定量，并且可以在较短的分析时间内完成含量和有关物质的同时测定。
实施例3溶液稳定性试验
色谱条件为其它参数保持优选条件同实施例1一致，分别采用1％醋酸溶液和含1％醋酸的30μg/ml对苯二酚溶液为提取溶剂，制备供试品溶液。供试品溶液为：取硫酸吗啡栓剂置分液漏斗中，加三氯甲烷20ml，振摇使基质溶解，用溶剂提取3次，每次15ml，合并提取液置50ml容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，其中硫酸吗啡栓剂含硫酸吗啡25mg；分别精密量取上述两种溶液各20μl，于0min、100min、200min、300min、400min、500min、600min、700min、800min、18h注入液相色谱仪，记录峰面积，考察主峰以及各杂质峰面积随时间变化情况，结果见表4～表5。
表4以1％醋酸溶液为溶剂的有关物质供试品稳定性
表5以含1％醋酸的30μg/ml对苯二酚溶液为溶剂的有关物质供试品稳定性
由表4和表5可知，未加对苯二酚的供试品溶液在18h内杂质B的峰面积不断增大，其18h的峰面积是0h峰面积的1.8倍；而含有对苯二酚的供试品溶液中，杂质B的峰面积在18h内基本保持不变。因此，对苯二酚的加入，有效地维持了供试品溶液的稳定性，该供试品溶液在18h内稳定。
实施例4耐用性试验
色谱条件保持参数为优选色谱条件同实施例1，一次只动一个变量，依次分别将流速设为0.9ml/min、1.1ml/min，柱温设为25℃、35℃，pH设为2.3、2.7，流动相比例设为68:32、72:28，并选取不同品牌的色谱柱，记录各条件下硫酸吗啡与各杂质之间的最小分离度。试验结果见表6。
表6耐用性试验结果
实施例5最佳检测波长的选择
取硫酸吗啡对照品适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中含10μg的溶液。照紫外-可见分光光度法，在210nm～400nm范围内对对照品溶液进行光谱扫描。如图2所示，对照品溶液在210nm、240nm、284nm处有最大吸收，从而在210nm-240nm以及280-285nm均能够进行一定检测，选择230nm作为有关物质的检测波长，选择284nm作为含量测定检测波长。
对比例1
根据2023版英国药典中硫酸吗啡栓有关物质测定方法进行操作。
系统适用性溶液：同实施例1中系统适用性溶液的配制。
色谱条件：以庚烷磺酸钠溶液为流动相A(取庚烷磺酸钠1.01g，加水1000ml溶解，用50％磷酸调节pH值至2.6)，以甲醇为流动相B，按表7进行梯度洗脱；色谱柱为WatersSymmetry C18柱(4.6×150mm，5μm)；检测波长为230nm；柱温为35℃；流速为1.5ml/min。进样体积为20μl。色谱图见图3，系统适用性试验结果见表8。
表7 2023版英国药典中硫酸吗啡栓有关物质测定方法梯度洗脱条件
表8 2023版英国药典中硫酸吗啡栓有关物质测定方法系统适用性试验结果
由图3和表8可见，在上述色谱条件下，使用2023版英国药典中有关物质方法，分析时长为50min，系统适用性溶液中的最小分离度为1.9；本发明方法可在30min内完成有关物质的良好分离，且最小分离度为2.5(见表1)。说明本发明方法更加快速高效，简便易行。
对比例2
根据2023版英国药典中硫酸吗啡的含量测定方法进行操作。
系统适用性溶液：同实施例1中系统适用性溶液的配制。
色谱条件：Nucleosil C18柱(10cm×4.6mm，5μm)，流动相为60％甲醇溶液(含0.005mol/L丁二酸二辛酯磺酸钠和0.01mol/L醋酸钠)用冰醋酸调节至pH至5.5，流速为2.0ml/min，柱温为室温，检测波长为285nm，进样体积为20μl。色谱图见图4。
由图4可见，在上述色谱条件下，使用2023版英国药典中推荐的色谱柱，主峰保留时间为2.7min，主峰与杂质E无法基线分离，且该方法色谱条件中流动相使用的试剂以及色谱柱并不常见，方法普及性不高。
对比例3
根据国家药品监督管理局硫酸吗啡栓质量标准(YBH02582008)中硫酸吗啡的含量测定方法进行操作。
系统适用性溶液：同实施例1中系统适用性溶液的配制。
色谱条件：Waters Symmetry C18柱(4.6×150mm)，以甲醇-庚烷磺酸钠醋酸溶液(取庚烷磺酸钠2.02g，加水适量溶解，加冰醋酸5ml，加水稀释至1000ml，摇匀)(50:50)为流动相；检测波长为233nm。色谱图见图5。
由图5可见，在上述色谱条件下，使用国家药品监督管理局硫酸吗啡栓质量标准(YBH02582008)中色谱条件，主峰保留时间为2.8min，杂质D、F、E与主峰存在共洗脱现象，无法基线分离，专属性较差。
综上所述，本发明将梯度改为等度，运行时间大大减少，通过改变不同流速、不同柱温、不同pH值，不同流动相比例，以及不同色谱柱，各色谱峰之间均能够实现良好分离，说明本方法耐用性良好。本发明明显优于英国药典2023中硫酸吗啡的有关物质方法(对比例1)和含量测定方(对比例2)、优于国家药品监督管理局硫酸吗啡栓质量标准(YBH02582008)中硫酸吗啡的含量测定方法(对比例3)，选择本发明的检测方法可以更准确可靠的控制硫酸吗啡栓的质量。
附；已知杂质信息，见表9。
表9已知杂质信息
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种硫酸吗啡栓剂有关物质的检测方法，有关物质包括已知杂质A、B、C、D、E、F，其特征在于，包括以下步骤：
S1、配制溶液：分别配制溶剂、系统适用性溶液、对照品溶液、对照溶液和供试品溶液；
所述溶剂为：取对苯二酚30mg加水溶解，加醋酸10ml，用水稀释至1000ml；
所述系统适用性溶液为：取杂质A、B、C、D、E、F、硫酸吗啡对照品精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中含杂质A、B、C、D、E、F各10μg、硫酸吗啡500μg的溶液；
所述对照品溶液为取杂质A、B、C、D、E、F、硫酸吗啡对照品精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中含杂质A、B、C、D、E、F各10μg、硫酸吗啡2.5μg的溶液；
所述对照溶液为：取供试品溶液1ml，置200ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过；
所述供试品溶液为：取硫酸吗啡栓剂置分液漏斗中，加三氯甲烷20ml，振摇使基质溶解，用溶剂提取3次，每次15ml，合并提取液置50ml容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，其中硫酸吗啡栓剂含硫酸吗啡25mg；
S2、测定方法：采用液相色谱法测定硫酸吗啡栓剂中有关物质，待系统稳定后，分别进溶剂、系统适用性溶液；将同体积的供试品溶液和对照溶液分别采用高效液相色谱进行检测，根据高效液相色谱检测结果分析有关物质；或将同体积的供试品溶液和对照品溶液分别采用高效液相色谱进行检测，采用外标法对供试品溶液中的有关物质进行计算；
S3、色谱条件如下：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速：0.8～1.2ml/min，检测波长：210～240nm，进样量：10～50ul，柱温：25～35℃，流动相包括：将离子对-磷酸盐缓冲液:甲醇体积比为67～72:32～28混合均匀；其中，缓冲液中离子对w/v浓度为0.18％～0.22％，磷酸盐w/v浓度为0.008mol/L～0.012mol/L，pH值为2.5～2.7。
2.根据权利要求1所述的一种硫酸吗啡栓剂有关物质的检测方法，其特征在于，所述色谱柱尺寸为4.6x150mm，5μm。
3.根据权利要求1所述的一种硫酸吗啡栓剂有关物质的检测方法，其特征在于，所述离子对为庚烷磺酸钠，磷酸盐为磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵中的任意一种。
4.根据权利要求4所述的一种硫酸吗啡栓剂有关物质的检测方法，其特征在于，所述磷酸盐为磷酸二氢钾，w/v浓度为0.01mol/L。
5.根据权利要求1所述的一种硫酸吗啡栓剂有关物质的检测方法，其特征在于，所述离子对-磷酸盐缓冲液还包括三乙胺，三乙胺的v/v浓度为0.05～0.15％。
6.根据权利要求6所述的一种硫酸吗啡栓剂有关物质的检测方法，其特征在于，所述三乙胺浓度为0.1％。
7.根据权利要求1所述的一种硫酸吗啡栓剂有关物质的检测方法，其特征在于，所述流速为1.0ml/min。
8.根据权利要求1所述的一种硫酸吗啡栓剂有关物质的检测方法，其特征在于，所述柱温为30℃。
9.根据权利要求1所述的一种硫酸吗啡栓剂有关物质的检测方法，其特征在于，所述pH值为2.5。
10.一种硫酸吗啡栓剂含量的检测方法，其特征在于，利用权利要求1～9任一项所述的有关物质的检测方法，包括以下步骤：将同体积的供试品溶液、硫酸吗啡对照品溶液分别在高效液相色谱仪上进行检测后，采用外标法对供试品溶液中硫酸吗啡进行计算；其中，检测波长包括220～230nm或280～285nm，硫酸吗啡对照品溶液为：取硫酸吗啡对照品精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中含硫酸吗啡0.5mg的溶液。
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