CN101940655A - 地黄叶总苷胶囊剂的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种地黄叶总苷胶囊剂的检测方法，该检测方法包括性状、检查、鉴别和含量测定项目；所述鉴别是对该胶囊中所含地黄叶总苷和毛蕊花糖苷的成分鉴别，所述含量测定是对该胶囊中所含地黄叶总苷和毛蕊花糖苷的含量测定的方法。它针对目前地黄叶总苷胶囊尚无有效的控制产品质量、及无科学合理的质量控制检测方法，是在对地黄叶提取物地黄叶总苷充分研究的基础上，确定了以毛蕊花糖苷为被测成分，结合该药物的制备工艺，制定了具体可行的成分鉴别和含量测定方法，所采用的鉴别方法专属性强，含量测定准确度高，重现性好，从而建立了地黄叶总苷胶囊制剂的质量控制标准，以有效控制地黄叶总苷胶囊的质量，从而保证了该药物的临床疗效和安全性。

Description

地黄叶总苷胶囊剂的检测方法 

技术领域

本发明涉及一种地黄叶总苷胶囊制剂的检测方法，属于对药品进行质量控制的技术领域。 

背景技术

地黄作为一种传统中药材，因含有多种类型的药理活性成分，已在医药学界被广泛的研究和应用，但地黄的地上部分很少见有化学成分的研究报道。本申请的发明人对地黄的地上部分地黄叶进行了研究，在化学成分研究及其活性筛选中发现了以毛蕊花糖苷为主要成分的地黄叶总苷具有免疫抑制作用，且含量较高，因而开发出了以地黄叶为原料提取地黄叶总苷，研制了国家中药二类新药地黄叶总苷胶囊，该药物具有滋阴补肾，活血凉血的功效，适用于慢性肾小球肾炎轻症属气阴两虚者。由于该药物是一种新药，目前尚缺乏具体的能够有效控制该制剂生产质量的检测方法和质量标准，故不能保证该药物临床治疗的有效性、安全性。 

发明内容

本发明的目的，是提供一种地黄叶总苷胶囊制剂的质量检测方法。它是针对上述地黄叶总苷胶囊目前尚缺乏能有效的控制产品质量，及无科学合理的质量检测方法和控制标准，是在对地黄叶提取物充分研究的基础上，确认了提取物地黄叶总苷为毛蕊花糖苷类成分，占总提取物50％以上；并采用多种现代色谱技术(HPLC-对照品加样法、HPLC-UV全波长对比法、HPLC-MS鉴定法等)，鉴定出地黄叶总苷中50％以上的主要有效成分为毛蕊化糖苷及其它多种苯乙醇苷类成分。其中，主要成分毛蕊花糖苷占地黄叶总苷的25％以上，含量较高，易作为对照品得到，因而确定了以毛蕊花糖苷为被测成分，结合本药物的制备工艺，通过回归方程、回收率、精密度、重现性等方法学的研究考察，建立了地黄叶 总苷胶囊中毛蕊花糖苷的含量测定方法(HPLC色谱法)、总成分的含量测定方法(UV比色法)以及化学反应鉴别、薄层色谱鉴别等多项标准。 

本发明所述的地黄叶总苷胶囊是这样构成的：【处方】地黄叶总苷75g；【制法】取地黄叶总苷细粉75g粉碎成细粉，与淀粉混匀，制粒，干燥，加入适量的微粉硅胶，灌装成胶囊，制成1000粒，即得。 

本发明的地黄叶总苷胶囊剂的检测方法，主要包括性状、鉴别、检查、鉴别和含量测定项目；其中：鉴别是对制剂中地黄叶总苷和毛蕊花糖苷的成分鉴别；含量测定是对制剂中地黄叶总苷、毛蕊花糖苷的含量测定。 

地黄叶总苷的成分鉴别是以三氯化铁乙醇溶液为鉴别剂的鉴别方法。 

毛蕊花糖苷的成分鉴别是以对照品毛蕊花糖苷为对照，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝7∶3∶0.5为展开剂的薄层色谱法。 

所述成分鉴别方法包括以下： 

(1)地黄叶总苷的成分鉴别： 

取本品内容物，研细，加甲醇，振摇使溶解，滤过，取滤液，加9％三氯化铁乙醇溶液，即显墨绿色。 

(2)毛蕊花糖苷的成分鉴别： 

取本品内容物，研细，加甲醇，振摇使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取毛蕊花糖苷对照品加甲醇制成对照品溶液，吸取上述两种溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝7∶3∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以9％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

更具体的成分鉴别方法包括以下： 

(1)地黄叶总苷的成分鉴别： 

取本品内容物40mg，研细，加甲醇5ml，振摇使溶解，滤过，取滤液1ml，加9％三氯化铁乙醇溶液2～3滴，即显墨绿色； 

(2)毛蕊花糖苷的成分鉴别： 

取本品内容物20mg，研细，加甲醇2ml，振摇使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取毛蕊花糖苷对照品加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝7∶3∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以9％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

地黄叶总苷的含量测定是以对照品毛蕊花糖苷为对照，采用分光光度法测定； 

毛蕊花糖苷的含量测定是以对照品毛蕊花糖苷为对照，以甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66为流动相，采用高效液相色谱法测定。 

所述含量测定方法包括以下： 

(1)地黄叶总苷的含量测定： 

取毛蕊花糖苷对照品，精密称定，置量瓶中，加甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66，混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；精密量取对照溶液五份，分别置量瓶中，用上述混合溶剂稀释至刻度，摇匀，以相应试剂为空白，用紫外-可见分光光度法，测定吸光度，以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；取本品内容物，研细，混匀，精密称取，置量瓶中，加入甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66混合溶液，超声处理，放冷，加上述混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液，置量瓶中，加上述混合溶剂稀释至刻度，摇匀，以相应试剂为空白，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中毛蕊花糖苷的含量，即得，本品每粒含地黄叶总苷以毛蕊花糖苷计，应在37.5mg～54.0mg之间。 

(2)毛蕊花糖苷的含量测定： 

以十八烷基硅烷键和硅胶为填料，以甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66为流动相，流速为1ml/min，检测波长为330nm，理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于8500；取毛蕊花糖苷对照品，精密称定，置量瓶中，加甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液，置量瓶中，用流动相甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66混合溶剂稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；取本品内容物，混匀，研细，精密称取，置量瓶中，加流动相，超声处理，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液，置量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得供 试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即得毛蕊花糖苷的含量，本品每粒含毛蕊花糖苷应在18.0mg～25.0mg之间。 

更具体的含量测定方法包括以下： 

(1)地黄叶总苷的含量测定： 

取毛蕊花糖苷对照品约8mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66，混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液(每1ml含毛蕊花糖苷约0.16mg)；精密量取对照溶液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0ml，分别置50ml量瓶中，用上述混合溶剂稀释至刻度，摇匀，以相应试剂为空白，用紫外-可见分光光度法，在330nm的波长处测定吸光度，以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；取本品内容物，研细，混匀，精密称取约0.18g，置50ml量瓶中，加入甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66混合溶液45ml，超声处理25分钟，放冷，加上述混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1ml，置50ml量瓶中，加上述混合溶液稀释至刻度，摇匀，以相应试剂为空白，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中毛蕊花糖苷的含量，即得，本品每粒含地黄叶总苷以毛蕊花糖苷计，应在37.5mg～54.0mg之间； 

(2)毛蕊花糖苷的含量测定： 

以十八烷基硅烷键和硅胶为填料，以甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66为流动相，流速为1ml/min，检测波长为330nm，理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于8500；取毛蕊花糖苷对照品约8mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液2ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液(每1ml含毛蕊花糖苷约0.032mg)；取本品内容物，混匀，研细，精密称取约0.18g，量50ml量瓶中，加流动相45ml，超声处理25分钟，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液个10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得毛蕊花糖苷的含量，本品每粒含毛蕊花糖苷应在18.0mg～25.0mg之间。 

为了确保本发明的成分鉴别和含量测定方法科学、合理、可行，本申请人对方法中药品成分的鉴别和含量测定方法进行了研究，具体试验资料如下： 

一、地黄叶总苷胶囊的鉴别方法研究 

根据对地黄叶总苷的成分分析研究，确认地黄叶总苷中主要含有苯乙醇苷类成分，其结构特点均含有酚羟基，故建立了酚羟基的三氯化铁络合反应。并根据毛蕊花糖苷的性质特征，建立了薄层色谱鉴别。 

二、地黄叶总苷胶囊的含量测定方法研究 

1、地黄叶总苷的含量测定 

(1)仪器、试药 

仪器：紫外可见分光光度计WFZ800-D2，北京光学仪器厂。UV-240(PC)，SHIMADZUCORPORATION. 

试药：甲醇、冰醋酸均为分析纯，水为蒸馏水。毛蕊花糖苷对照品由中国中医研究院中药研究所提供。 

(2)检测波长：毛蕊花糖苷及供试品溶液在330nm波长处有最大吸收，且其它辅料等在该波长处无吸收，故正文规定检测波长为330nm。 

(3)方法学考察(样品批号：980201) 

①提取条件：选用了与HPLC测定毛蕊花糖苷同样的提取条件，称取一份样品，完成两项测定，可简化操作步骤。 

②阴性对照试验：为考察其它辅料是否干扰地黄叶总苷的测定，除地黄叶总苷外，按处方比例量称取其它各辅料，与供试品溶液同法制成阴性对照溶液并测定，吸收度为0.002。200～700nm波长范围扫描，结果在330nm±50nm处无吸收。说明其它辅料在330nm波长处不干扰地黄叶总苷的含量测定。 

③样品浓度与峰面积之间的线性关系考察：取对照品7.79mg，置50ml量瓶中，加混合溶剂溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密吸取该溶液1、3、5、7、9ml，分别置50ml量瓶中，加混合溶剂至刻度，摇匀。照紫外-可分光光度法，以同批混合溶剂为空白，在330nm的波长处测定吸收度。以毛蕊花糖苷对照品吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，数据(见表1)由计算机处理并绘制标准曲线， 

回归方程：Y＝0.00063+33.4816X (X：mg/ml)； 

          r＝0.99998 

线性范围：0.003116～0.028044mg/ml 

表明毛蕊花糖苷浓度在0.003116～0.028044mg/ml时，与吸收度呈良好的线性关系，且通过原点。 

表1标准曲线测定数据 

④精密度试验：取对照品溶液(0.01558mg/ml)，依法在330nm的波长处测定吸收度。重复测定5次，毛蕊花糖苷吸收度的相对标准偏差为0.1％。结果见表2。 

表2精密度试验结果 

⑤重复性试验：取样品，按拟定的含量测定法，平行试验5份，结果如表3。由表3可见该方法有良好的重复性。 

表3重复性试验结果 

⑥供试品溶液稳定性考察取样品，按拟定的含量测定方法制备供试品溶液，在室温下自然放置，间隔一定时间依法测定一次吸收度，测至24小时，结果如表4。可见供试品溶液中地黄叶总苷的含量至少在24小时内稳定性良好。 

表4稳定性试验结果 

⑦回收率试验：取已测知含量的胶囊内容物细粉约60～110mg，精密称定，置50ml量瓶中，精密加入对照品溶液10ml(o.7508mg/ml)及甲醇-冰醋酸-水(33∶1∶66)混合溶剂约35ml，按样品测定法测定，计算回收率，结果列入表5，表明本法具有良好的回收率。 

表5回收率测定结果 

⑧测定方法及结果：照拟定的检测方法正文测定方法测定3批样品，结果列于表6。 

表6地黄叶总苷含量测定结果 

由上述3批含量测定试验结果，定为本品每粒含地黄叶总苷以毛蕊花糖苷计不得少于37.5mg。 

二、毛蕊花糖苷含量测定的方法研究 

毛蕊花糖苷的含量测定： 

(1)被测成分的选择： 

毛蕊花糖苷是本品所含的主要有效成分，含量高，在紫外区有吸收，可建立简便、迅速、准确、且能适合一般生产客观情况的含量测定方法。 

(2)测定方法的选择： 

高效液相色谱法有准确，快速，灵敏的特点，操作简便，省时，试验消耗低。根据文献选用高效液相色谱法。 

(3)仪器、试药仪器：美国光谱物理公司sP一8810液相色谱仪，SP-100紫外-可见光检测仪，汉化工作站(Js一3030)采集处理数据。 

试药：甲醇、冰醋酸均为分析纯，水为重蒸馏水。毛蕊花糖苷对照品由中国中医研究院中药研究所提供。‘ 

(4)色谱条件 

①固定相：以文献为依据选用十八烷基硅烷键合硅胶。 

②流动相：参考文献，经试验比较甲醇一水、甲醇一酸水等不同比例的流动相，选择以甲醇-冰醋酸-水(33∶1∶66)作为流动相，该溶剂系统对被测成分分离好，分离度R＝17，符合药典规定，没有发现有其它成分干扰。 

③检测波长：毛蕊花糖苷及供试品溶液在330nm波长处均有最大吸收，且其它辅料在该波长处无吸收，故正文规定检测波长为330nm。 

根据上述研究结果确定色谱条件为：色谱柱：Phenomenex，LUNA C18(2)5um，4.60×250mm；流动相：甲醇-冰醋酸-水(33∶1∶66)；流速：1ml/min；检测波长：330nm。柱温：35℃。 

(5)方法学考察(样品批号：980201) 

①提取条件的选择毛蕊花糖苷易溶于甲醇、乙醇，溶于水。工艺研究中证明毛蕊花糖苷在弱酸性条件下更为稳定，并比较了甲醇、含1％冰醋酸的甲醇、甲醇一冰醋酸一水(33∶1∶66)等为提取溶剂，测定结果无显著性差异，故选用更经济而安全的甲醇一冰醋酸一水混合溶剂作为提取溶剂，经考察以其制备的供试品溶液在24小时内稳定性良好。供试品溶液的制备方法同拟定的检测方法正文。 

②对照品的纯度检查 

含量测定用毛蕊花糖苷对照品由中国中医研究院中药研究所提供(批号：941206)。精密吸取高浓度的对照品溶液(o.501mg/ml)20ul注入高效液相色谱仪，重复进样三次，测定其峰面积。除去溶剂峰后，用归一化法计算，得毛蕊花糖苷的平均含量为98.97％(n＝3)，符合含量测定对对照品的要求。 

③阴性对照试验：为考察其它辅料是否干扰毛蕊花糖苷的测定，除地黄叶总甙外，按处方比例量称取其它各辅料，与供试品溶液同法制成阴性对照溶液，同法测定。说明其它辅料不影响毛蕊花糖苷的含量测定。 

④样品浓度与峰面积之间的线性关系考察：取对照品6.64mg，置25ml量瓶中，加混合溶剂溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密吸取该溶液0.2、0.5、1.0、2.0、3.0ml，分别置10ml量瓶中，加混合溶剂至刻度，摇匀。分别精密吸取对照品溶液10ul，按上述色谱条件测定峰面积(数据见表7)，以峰面面积分值为纵坐标，毛蕊花糖苷量为横坐标，数据由计算机处理并绘制标准曲线。 

回归方程：Y＝12609.3967+3441299.1255X (X：μg)； 

          r＝0.99996 

线性范围：0.05312～0.7968ug 

表明毛蕊花糖苷进样量在0.05312～0.7968ug时，与相应的响应值(峰面积)呈良好的线性关系，且通过原点。 

表7标准曲线测定数据 

⑤精密度试验：精密吸取对照品溶液(0.03116mg/ml)，重复进样5次，毛蕊花糖苷峰面积积分值的相对标准偏差＜2％。结果见表8。 

表8精密度试验结果 

⑥重复性试验：取样品，按拟定的含量测定方法，平行试验5份，结果如表9。由表9可见该方法有良好的重复性。 

表9重复性试验结果 

⑦供试品溶液稳定性考察 

取样品，按拟定的含量测定方法制备供试品溶液，在温室下自然放置，，间隔一定时间测定一次峰面积，，测至24小时，结果如表10。可见样品溶液中毛蕊花糖苷的含量至少在24小时内稳定性良好。 

表10稳定性试验结果 

⑧回收率试验：取已测知含量的胶囊内容物细粉约60～110mg，精密称定，置50ml量瓶中，精密加入对照品浓溶液10ml(0.7508mg/ml)及甲醇-冰醋酸一水(33∶1∶66)混合溶剂约35ml，按样品测定法测定，计算回收率，结果列入表11。结果表明，本法具有良好的回收率。 

表11回收率测定结果 

⑨测定方法及结果：分别精密吸取对照品溶液和供试溶液各10ul依上述色谱条件测定，计算毛蕊花糖苷的含量，结果列于表12。 

表12毛蕊花糖苷含量测定结果 

由上述3批含量测定试验结果，暂定本品含毛蕊花糖苷不得少于18mg。 

本发明有益效果： 

由上述具体试验资料表明，本发明是一种具体可行的成分鉴别和含量测定方法，所采用的鉴别方法专属性强，含量测定准确度高，重现性好，为生产单位、检测机构提供了检测指标、检测手段和技术方法等，以能更好的指导生产，使生产工艺控制更加严格合理，在产品生产过程中，用该质量测定方法能有效的控制产品的质量，从而确保地黄叶总苷胶囊药物的临床疗效和安全性。 

具体实施方式

本地黄叶总苷胶囊制剂的检测方法 

【处方】地黄叶总苷75g 

【制法】取地黄叶总苷细粉75g(以干燥品计)，粉碎成细粉，与淀粉混匀，制粒，干燥，加入适量的微粉硅胶，灌装成胶囊，制成1000粒，即得。 

【性状】本品为硬胶囊，内容物为浅棕色至棕褐色颗粒及粉末；气微，味微苦。 

【鉴别】 

(1)取本品内容物40mg，研细，加甲醇5ml，振摇使溶解，滤过，取滤液1ml，加9％三氯化铁乙醇溶液2～3滴，即显墨绿色； 

(2)取本品内容物20mg，研细，加甲醇2ml，振摇使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取毛蕊花糖苷对照品加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝7∶3∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以9％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

【检查】溶出度照溶出度测定法第一法，取本品以水900ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，经45分钟时，取溶液10ml，滤过，续滤液备用。 

精密量取上述续滤液3ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在330nm的波长处测定吸光度；另取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含15μg的溶液，同法测定，计算出每粒胶囊中地黄叶总苷的溶出量。限度为含量测定项下地黄叶总苷测得含量的70％，应符合规定。 

其它应符合中国药典一部胶囊剂项下有关的各项规定。 

【含量测定】 

(1)地黄叶总苷的含量测定： 

取毛蕊花糖苷对照品约8mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66，混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液(每1ml含毛蕊花糖苷约0.16mg)；精密量取对照溶液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0ml，分别置50ml量瓶中，用上述混合溶剂稀释至刻度，摇匀，以相应试剂为空白，用紫外-可见分光光度法，在330nm的波长处测定吸光度，以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；取本品内容物，研细，混匀，精密称取约0.18g，置50ml量瓶中，加入甲醇∶冰醋酸∶ 水＝33∶1∶66混合溶液45ml，超声处理25分钟，放冷，加上述混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1ml，置50ml量瓶中，加上述混合溶液稀释至刻度，摇匀，以相应试剂为空白，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中毛蕊花糖苷的含量，即得，本品每粒含地黄叶总苷以毛蕊花糖苷计，应在37.5mg～54.0mg之间； 

(2)毛蕊花糖苷的含量测定： 

以十八烷基硅烷键和硅胶为填料，以甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66为流动相，流速为1ml/min，检测波长为330nm，理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于8500；取毛蕊花糖苷对照品约8mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液2ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液(每1ml含毛蕊花糖苷约0.032mg)；取本品内容物，混匀，研细，精密称取约0.18g，量50ml量瓶中，加流动相45ml，超声处理25分钟，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液个10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得毛蕊花糖苷的含量，本品每粒含毛蕊花糖苷应在18.0mg～25.0mg之间。 

Claims (3)

1.一种地黄叶总苷胶囊剂的检测方法，所述地黄叶总苷胶囊剂由地黄叶总苷75g和适当辅料制备而成，该检测方法含性状、检查、鉴别和含量测定项目；其特征在于：所述鉴别是对该胶囊中所含地黄叶总苷和毛蕊花糖苷的成分鉴别，所述含量测定是对该胶囊中所含地黄叶总苷和毛蕊花糖苷的含量测定的方法：

地黄叶总苷的成分鉴别是以三氯化铁乙醇溶液为鉴别剂的鉴别方法；

毛蕊花糖苷的成分鉴别是以对照品毛蕊花糖苷为对照，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝7∶3∶0.5为展开剂的薄层色谱法；

地黄叶总苷的含量测定是以对照品毛蕊花糖苷为对照，采用分光光度法测定；

毛蕊花糖苷的含量测定是以对照品毛蕊花糖苷为对照，以甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66为流动相，采用高效液相色谱法测定。

2.根据权利要求1所述地黄叶总苷胶囊剂的检测方法，其特征在于：

所述检测方法包括以下：

(1)地黄叶总苷的成分鉴别：

取本品内容物，研细，加甲醇，振摇使溶解，滤过，取滤液，加9％三氯化铁乙醇溶液，即显墨绿色；

(2)毛蕊花糖苷的成分鉴别：

取本品内容物，研细，加甲醇，振摇使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取毛蕊花糖苷对照品加甲醇制成对照品溶液，吸取上述两种溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝7∶3∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以9％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)地黄叶总苷的含量测定：

取毛蕊花糖苷对照品，精密称定，置量瓶中，加甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66，混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；精密量取对照溶液五份，分别置量瓶中，用上述混合溶剂稀释至刻度，摇匀，以相应试剂为空白，用紫外-可见分光光度法，测定吸光度，以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；取本品内容物，研细，混匀，精密称取，置量瓶中，加入甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66混合溶液，超声处理，放冷，加上述混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液，置量瓶中，加上述混合溶剂稀释至刻度，摇匀，以相应试剂为空白，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中毛蕊花糖苷的含量，即得，本品每粒含地黄叶总苷以毛蕊花糖苷计，应在37.5mg～54.0mg之间；

(4)毛蕊花糖苷的含量测定：

以十八烷基硅烷键和硅胶为填料，以甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66为流动相，流速为1ml/min，检测波长为330nm，理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于8500；取毛蕊花糖苷对照品，精密称定，置量瓶中，加甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液，置量瓶中，用流动相甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66混合溶剂稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；取本品内容物，混匀，研细，精密称取，置量瓶中，加流动相，超声处理，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液，置量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即得毛蕊花糖苷的含量，本品每粒含毛蕊花糖苷应在18.0mg～25.0mg之间。

3.根据权利要求2所述地黄叶总苷胶囊剂的检测方法，其特征在于：

更具体的检测方法包括以下：

(1)地黄叶总苷的成分鉴别：

取本品内容物40mg，研细，加甲醇5ml，振摇使溶解，滤过，取滤液1ml，加9％三氯化铁乙醇溶液2～3滴，即显墨绿色；

(2)毛蕊花糖苷的成分鉴别：

取本品内容物20mg，研细，加甲醇2ml，振摇使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取毛蕊花糖苷对照品加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝7∶3∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以9％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)地黄叶总苷的含量测定：

取毛蕊花糖苷对照品约8mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66，混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含毛蕊花糖苷约0.16mg对照品溶液；精密量取对照溶液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0ml，分别置50ml量瓶中，用上述混合溶剂稀释至刻度，摇匀，以相应试剂为空白，用紫外-可见分光光度法，在330nm的波长处测定吸光度，以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；取本品内容物，研细，混匀，精密称取约0.18g，置50ml量瓶中，加入甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66混合溶液45ml，超声处理25分钟，放冷，加上述混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1ml，置50ml量瓶中，加上述混合溶液稀释至刻度，摇匀，以相应试剂为空白，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中毛蕊花糖苷的含量，即得，本品每粒含地黄叶总苷以毛蕊花糖苷计，应在37.5mg～54.0mg之间；

(4)毛蕊花糖苷的含量测定：

以十八烷基硅烷键和硅胶为填料，以甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66为流动相，流速为1ml/min，检测波长为330nm，理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于8500；取毛蕊花糖苷对照品约8mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇∶冰醋酸∶水＝33∶1∶66混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液2ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含毛蕊花糖苷约0.032mg对照品溶液；取本品内容物，混匀，研细，精密称取约0.18g，量50ml量瓶中，加流动相45ml，超声处理25分钟，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液个10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得毛蕊花糖苷的含量，本品每粒含毛蕊花糖苷应在18.0mg～25.0mg之间。