CN1853621A - 松油酸的用途 - Google Patents

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Abstract

松油酸或其衍生物可以用于控制体重。例如,松油酸可以食物补充剂、药物组合物或食品组合物的形式得以应用。

Description

松油酸的用途
本发明涉及组合物,该组合物可以用来控制体重、控制食物的摄取和食欲、以及控制和/或减轻体重。该组合物含有松油酸(pinolenic acid)或其衍生物。
现代社会中,肥胖日渐变为一个普遍的个人问题。一般来说,体重超标和肥胖的原因是由于能量摄取和吸收的不均衡。对于每个个体来说,能量不均衡是由于环境和遗传决定因素等多种不同因素和条件共同作用所造成的。肥胖可以促使多种疾病的发生率上升,包括冠状动脉疾病、高血压、中风、糖尿病以及某些癌症。
减肥经常被认为是那些正在忍受由肥胖导致的疾病的病人的首要任务。为了控制总体重,个人可以进行体重控制,其目标会根据个人的需要不同而不同。例如,过度肥胖或体重超标的人可能希望减轻体重,其他人则可能希望使体重保持在一个基本恒定的水平。既使一旦有人体重减轻了,通常也要进行体重控制以阻止体重反弹。最有效的减肥方案一般包括低卡路里的食谱和/或提高能量支出。一段时间后,一些进行体重控制的人就会感到他们的饥饿水平和/或对高糖食物的渴望度增加了。这会导致人们偏离他们的体重控制计划。因此,就需要开发出新的并有效的方式来支持体重控制,并帮助人们继续他们的体重控制计划。本发明的目的就是提供一种提供这种支持的新方式。
松油酸(即5,9,12C18:3脂肪酸,一种具有18个碳原子,且在5,9和12位具有三个双键的脂肪酸),存在于如松子油及其分馏物中(J Am Oil ChemSoc 1998,75,P.45-50)。已知松子油可应用于食品,因而松油酸也可以应用于食品,参见例如FR-A-2756465,其公开了将含有15%松油酸的浓缩物用作为食品添加剂。这里的松油酸是用来为组合物提供一种降血脂作用。
WO98/43513公开了指甲锉可用松油酸涂层,这样可以防止因使用指甲锉而造成的感染。
根据JP-A-61238729记载的内容,松子油可以被用作一种抗胆甾醇剂。其他公开松油酸的保健作用的文献包括JP-A-61058536,其中非常概括地公开了松油酸对人的健康的有益活性。但并未进一步详细公开其保健活性。Sugano BritJ.of Nutr 72(1994)775-783,公开了含有松油酸食物的多种保健作用。所述保健作用是降低血胆固醇(hypocholesterolaemic)作用,对ADP-诱导血小板聚集的作用,对主动脉prostacylic的产生和血压的作用。EP-A-1088552公开了松油酸作为一种抗炎药的用途。
Matsuo等,Prostaglandins,Leukotrienes and Essential Fatty Acids,(1996),55(4),223-229公开了γ-亚麻酸和松油酸对于Brown-Norway大鼠的免疫参数的作用。
然而,没有一篇上述现有技术文献记载松油酸或其衍生物可以用来治疗或预防肥胖、和/或控制体重。
US 6429190,US 2002/0119948和US 2002/0119915记载了用来增加饱满感的组合物,其包括一种钙源、蛋白质和一种12碳到18碳的脂肪酸。所述文献中描述的脂肪酸是油酸。
WO 02/088159公开了具有药理活性的尿苷酯,以及含有它们的构成酸和尿苷化合物的组合物,以及它们的多种不同医学应用。但是这篇文献既没有公开游离脂肪酸的单独应用,也没有给出用于治疗肥胖的任何实例。
EP-A-1504778,2005年2月9日公开,记载了一种用于治疗肥胖的可植入式泵。这种泵可含有脂肪酸,但并未公开松油酸。
CN-A-1377673涉及松子油在治疗高血脂引发的心、脑血管疾病和肥胖症,以及高血糖症引发的糖尿病方面的用途。
本发明提供松油酸或其衍生物在制备用于控制体重的组合物方面的用途,该组合物通过降低饥饿感和/或增加饱满感来控制体重。本发明还提供松油酸或其衍生物在降低饥饿感和增加饱满感方面的用途。因此,本发明的组合物适合用来治疗或预防肥胖、和/或用于控制体重,该组合物含有松油酸或其衍生物。可以用于本发明的松油酸的衍生物,包括松油酸的盐和烷基酯。其他可以用于本发明的松油酸的衍生物有松油酸的异构体,例如几何异构体(含有一个或多个反式双键;松油酸的双键都是顺式)和/或含有18个碳原子和3个双键的化合物,与松油酸相比,其3个双键中的1个或多个双键在烷基链的不同位置,包括例如γ-亚麻酸、α-亚麻酸、石榴油酸、桐酸以及它们的盐和烷基酯。
因此,本发明还涉及α-亚麻酸或其衍生物在通过降低饥饿感和/或增加饱满感来控制体重方面的应用;γ-亚麻酸或其衍生物在通过降低饥饿感和/或增加饱满感来控制体重方面的应用;石榴油酸或其衍生物在通过降低饥饿感和/或增加饱满感来控制体重方面的应用;桐酸(也称为α-桐酸)或其衍生物在通过降低饥饿感和/或增加饱满感来控制体重方面的应用。
本发明还考虑松油酸或其衍生物用于治疗或预防肥胖和/或控制体重。所述松油酸或其衍生物可以单独使用,或者可以作为组合物的一种成分使用,这种组合物可以包含其他可食的和/或可药用的成分。优选该组合物进一步包含10-60wt%的亚油酸和/或5-52wt%的油酸,可以是游离酸或甘油酯的形式(如甘油单酯、甘油二酯或甘油三酯)。附加地或可选地,该组合物可以包含0.5-5wt%的紫杉油酸(taxoleic acid)。
令人惊奇地发现松子油中的脂肪酸,例如松油酸,可用于刺激胆囊收缩素(CCK)的释放。CCK是一种随着食物消耗而释放的肽。当食物被消耗时,CCK释放蛋白(CCKRP)被释放至小肠。CCKRP刺激CCK从小肠细胞中释放出来。CCK的释放产生与饱满感相关的行为症状(behavioural symptoms)。另外,CCK水平的升高可以使肠内IgA的水平升高,这样可以提高粘膜免疫性。增加肠道内IgA的水平可以使防御微生物入侵的能力增强。因此,本发明还考虑一种提高免疫力的方法(如粘膜免疫力),包括施用松油酸或其衍生物,松油酸或其衍生物用来提高免疫力(如粘膜免疫力),以及松油酸或其衍生物在制备用于提高免疫力(如粘膜免疫力)的组合物方面的用途。提高免疫力可以用来治疗和/或预防感染,例如细菌或病毒感染。
在广义上,本发明涉及含有18个碳原子和3个双键的直链羧酸(以及它们的衍生物如盐和酯)在控制体重和/或治疗或预防肥胖方面的应用。体重控制可以包括减少饥饿感和/或增加饱满感。
本发明的组合物可以是任何适合的形式,如食物补充剂、药物组合物或食品组合物。术语组合物的意思是指松油酸或其衍生物可与其它的一种或多种成分(如存在于松子油中那样)一起存在。所述其它的一种或多种成分可以与松油酸或其衍生物一起存在于混合物中,或者它们可以构成产品包装的一部分(如胶囊,其中松油酸或其衍生物被包在胶囊中)。
本发明的组合物一般包含0.3-100wt%,优选5-80wt%,最优选10-50wt%(如10-30wt%或20-30wt%)的松油酸或其衍生物。技术人员应意识到本发明组合物中松油酸或其衍生物的百分含量是由该组合物的性质所决定的。例如,松油酸或其衍生物在药物组合物或食物补充剂中的重量百分含量可能要高于在食品组合物中的重量百分含量。
当本发明的组合物是食物补充剂或药物组合物形式时,松油酸或其衍生物,或含有这些化合物的一种的混合物可以是用食品级包胶囊材料包胶囊的形式。适合的包胶囊材料是本领域公知的,包括例如明胶和甘油。
用于本发明的松油酸可以是游离脂肪酸、松油酸的衍生物或它们的混合物的形式,包括不同衍生物的混合物。衍生物是无毒、可食且优选包括例如盐和酯。可用于本发明的松油酸的其他衍生物是松油酸的异构体,如几何异构体(含有一个或多个反式双键;松油酸的双键都是顺式)和/或含有18个碳原子和3个双键的化合物,与松油酸相比,这3个双键中,有1个或多个双键在烷基链的不同位置,包括,例如γ-亚麻酸、α-亚麻酸、石榴油酸、桐酸以及它们的盐和烷基酯。合适的盐包括含有食品级阳离子的盐如钠盐。合适的酯包括含有1-6个碳原子的烷基酯。优选的酯是甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯。
优选地,本发明的组合物不含(或基本上不含,即含有少于0.1mg)尿苷酯,和/或选自尿苷、脱氧尿苷、尿苷一磷酸、脱氧尿苷一磷酸的核苷和/或核苷酸和/或它们的可药用的盐。
用于本发明的松油酸的适合来源为松子油或其浓缩物。例如,松油酸的甘油酯可以从松子油或其浓缩物中获得。优选使用松油酸或其衍生物含量多于15wt%或多于28wt%的油或浓缩物。
本发明的组合物可以包含一种或多种其他的脂肪酸(即含有12-24个碳原子的直链羧酸)。适用于本发明的其他脂肪酸的例子包括亚油酸、油酸、紫杉油酸、刺柏油酸(juniperonic)、金松油酸(sciadonic)、饱和脂肪酸、共轭亚油酸(任选作为一种异构体富集混合物)和EPA(二十碳五烯酸)和DHA(二十二碳六烯酸)(任选作为一种EPA或DHA的异构体富集混合物)。富集包括通常存在的(如存在于天然产物中的)异构体混合物的改变,如不同几何异构体的相对量的改变。在这些组合物中,其他的脂肪酸或其他脂肪酸的每一种可以独立地以游离脂肪酸或其衍生物(包括甘油单酯、甘油二酯或甘油三酯和盐),或它们的混合物的形式存在。
根据本发明,松油酸或其衍生物在被用于制备组合物前,任选与这些附加的脂肪酸或甘油酯混合。当本发明的组合物除松油酸或其衍生物外还含有一种或多种脂肪酸和/或甘油酯时,则这种(些)附加的脂肪酸和/或甘油酯优选选自液态油,如豆油、向日葵油、菜籽油和棉籽油;可可脂和代可可脂;棕榈油及其分馏物;酶制脂肪;鱼油及其分馏物;共轭亚油酸及其异构体富集的混合物;γ-亚麻酸及其富集混合物;硬化液态油;及它们的混合物。
通过用NMR-脉冲测量不稳定的脂肪,含有一种或多种附加的脂肪酸或甘油酯的混合物优选显示如下的固体脂肪含量:
N20=1-80,优选5-45
N35小于20,优选小于10,最优选小于5。
这些数值可以如下获得:在80℃融化脂肪,冷却至0℃,将脂肪在0℃保持30分钟,然后,在测定N值前将脂肪加热到测定温度N,并保持这个温度30分钟。
用来制备本发明的组合物的脂肪酸混合物优选包含1.5-60wt%的,更优选28-60wt%的松油酸;以及10-60wt%的亚油酸和5-52wt%的油酸,例如25-85wt%(亚油酸+油酸),0-70wt%,如25-65wt%(反式脂肪酸+饱和脂肪酸)。其中反式脂肪酸的含量优选小于10wt%。一个合适的混合物实例是其中反式脂肪酸+饱和脂肪酸的含量小于10wt%。
或者,本发明的组合物中除了松油酸外,可以不含或基本上不含脂肪酸(即,可以含小于1wt%,更优选小于0.1wt%,如小于0.01wt%的其他C12-C24的脂肪酸)。
本发明的组合物可包含钙源和/或镁源。附加地或可选择地,该组合物可以包含蛋白质(包括蛋白水解物)。本发明组合物中松油酸和钙和/或镁和/或蛋白质的组合可以增加CCK从肠细胞的释放。
在另一实施方案中,本发明的组合物可不含或基本上不含钙离子和/或蛋白质(即,这些组分中的每一种在组合物中的含量小于1wt%,更优选小于0.1wt%,如小于0.01wt%)。
典型地,本发明的组合物含有松油酸和/或其衍生物作为唯一活性成分。
本发明的组合物可被用来帮助控制体重,如使体重保持在基本上恒定的水平,或帮助减轻体重。换言之,使用该组合物能够帮助使身材变苗条,例如通过帮助诱导脂肪减少。
本发明的组合物的应用可以帮助减少卡路里的摄取。这能够帮助使体重维持在一个基本恒定的水平和/或可以帮助减轻体重、和/或帮助减肥。体重的减轻可以增加能级。
使用本发明组合物能够降低饥饿感和/或增加饱满感、和/或减少对高卡路里食品的渴望,例如通过使胃给高卡路里食品提供较小的空间。具体而言,使用本发明的组合物可以增强和/或延长饱满感或餐前、中和/或之后的胀饱感。
使用本发明组合物可以减少进规定饮食期间的饥饿感,因此,可以增加控制饮食的成功率。
食用本发明的组合物可以刺激CCK和/或IgA的释放。
使用本发明组合物可以帮助降低食欲,例如通过增加充分满足感和饱满感和/或胀饱感。
本发明也提供一种治疗或预防肥胖的方法。该方法是对哺乳动物,如人类施用有效量的如上所述的组合物。本发明还提供一种控制体重的方法。该方法是对哺乳动物,如人类施用有效量的如上所述的组合物。所述施用不需要在医师或是药师的监督下完成,而简单地包括使哺乳动物摄取这种组合物即可,该组合物例如以食品或食物补充剂的形式。优选地,本发明的组合物在饭前2小时到3分钟施用,更优选在饭前1小时到15分钟服用,和甚至更优选在饭前35-25分钟施用。
本发明可以被用于哺乳动物,优选人类。可以从本发明的组合物获益的其他哺乳动物包括宠物(如狗、猫、马、兔子、仓鼠和豚鼠)和农场动物(如牛、羊和猪)。狗和猫是特别优选的。
当制备食品时,可以首先将松油酸或其衍生物与其他用于食品的构成成分混合。然而,这不是必需的。这些混合物,例如,可以作为健康脂肪组合物有益地用于食品中。
松子油可以被用于本发明的组合物中。虽然松子油可含有高达大约26wt%的松油酸,但如果可以得到松油酸含量更高的浓缩物,这将是很有利的(特别是用于食物补充剂,这样能够使其为小剂量的形式)。用于本发明的松油酸或其衍生物的浓缩物可以用任何合适的方法制备。EP-A-1088552记载了一种合适的方法。
在一种合适的方法中,使用酶解法或是甘油醇解法,这里使用的酶可以将含有δ5双键的脂肪酸和其他脂肪酸区分开。该方法包括以下步骤:
i)在酶存在下,使顺5双键的脂肪酸的含量至少为2wt%的甘油酯原料与水或甘油反应,所述酶可以将含有δ5双键的脂肪酸和其他脂肪酸区分开;
ii)将反应混合物分成富含偏甘油酯的部分,以及富含脂肪酸的部分;
iii)任选在合适的酶存在下,将步骤ii)的偏甘油酯转化为游离脂肪酸;
iv)任选在合适的催化剂如合适的酶存在下,将步骤ii)的富含脂肪酸的部分通过与甘油反应,将其转化成甘油三酯;
v)任选将步骤ii)的富含偏甘油酯原料分成:a)富含甘油单酯的组分,b)富含甘油二酯的组分和c)富含甘油三酯的组分,然后任选地在合适的酶存在下,将a)和b)的偏甘油酯通过与脂肪酸反应转化为甘油三酯。
在步骤i)中,优选使用松油酸含量为5-50wt%,优选10-35wt%的甘油酯原料。该原料的实例是松油酸油及其浓缩物。这种方法制备出的浓缩物含有至少28wt%的松油酸。
适用于步骤i)、iii)、iv)和v)中的酶是脂肪酶。合适的脂肪酶包括皱褶假丝酵母脂酶(Candida rugosa lipase)、脂肪酶QL、脂肪酶SL、脂肪酶OF、戴尔根霉(Rhizopus delemar)脂肪酶、米根霉(Rhizopus oryzae)脂肪酶、白地霉(Geotrichum candidum)B脂肪酶、和Rhizaomucoe miehei脂肪酶。步骤i)的优选酶是皱褶假丝酵母脂肪酶和白地霉B脂肪酶。
合适的脂肪酶还包括Lipozyme IM(一种商品酶)。用于步骤iv)的酶优选是Lipozyme M(来源于Rhizomucor miehei)
本发明的组合物可以是食品。可使用松油酸或其衍生物或含有这些化合物的混合物的食品包括,但不仅限于:人造黄油;低脂的涂抹食品;非常低脂的涂抹食品;双连续的涂抹食品(bicontinuous spreads);水连续的涂抹食品(watercontinuous spreads);糖果产品,例如巧克力,糖衣或夹心;冰淇淋;冰淇淋包衣;冰淇淋夹心;调味品;蛋黄酱;沙司;面包房用脂肪(bakery fats);起酥油;乳酪;膳食替代产品(meal replacement products);保健条状食品(healthbars);牛奶什锦早餐条(muesli bars);饮料;乳制品;低糖产品;低卡路里产品;汤;谷类食物;奶昔(milk shakes)。
将松油酸或其衍生物或含有这些化合物中的至少一种的混合物添加至食品可以对这些食品的质地、硬度、外观、流变性质、口中融化性、风味、涂抹性、微观结构(晶体大小、液滴大小)、充气性或制备难易度具有积极的效果。在这方面,使用松油酸的甘油酯尤其有益。
组合物的其它实例是药物组合物,例如为以下形式:片剂,丸剂,胶囊,薄膜衣片(caplets),多颗粒(multiparticulates)包括:颗粒、珠、微丸、微囊化颗粒,粉剂,酏剂,糖浆,悬浮剂和溶液。药物组合物包含可药用的稀释剂或载体。优选使药用组合物适合肠胃外给药(如口服)。口服的组合物可以是固体或液体形式,可以是片剂、粉剂、悬浮液和糖浆。任选地,该组合物包含一种或多种矫味剂和/或着色剂。适用于该组合物的可药用载体是药学领域公知的。本发明的组合物以重量计可含有0.1-99%的松油酸。本发明的组合物一般以单位剂量的形式制备。优选所述松油酸的单位剂量是1mg-1000mg(更优选100mg-750mg)。制备这些组合物所用的赋形剂是本领域公知的赋形剂。
该组合物的另外的产品实例是食物补充剂(该术语包括营养制品),例如,是软胶囊(soft gel)或硬胶囊形式,所述胶囊包含选自明胶、甘油、淀粉、改性淀粉、淀粉衍生物如:葡萄糖、蔗糖、乳糖和果糖的囊衣材料。囊衣材料任选含有交联剂或聚合剂、稳定剂、抗氧化剂、保护光敏填充物的光吸收剂和防腐剂等。优选,食物补充剂中松油酸的单位剂量是1mg-1000mg(更优选100mg-750mg)。在单位剂量形式中的松子油的用量优选为100mg-2000mg,如250mg-1500mg(如750mg),如每天服用4次。
本发明的组合物可以含有食品或药品领域公知的其他添加剂,包括但不仅限于:矫味成分、着色剂、甜味剂和乳化剂。
下述非限制性的实施例是用来举例说明本发明的,并不能限制本发明的范围。在这些实施例以及说明书中,所有的百分比、份数和比率除特别说明外均以重量计。
实施例
实施例1
做体外试验来测定不同的游离脂肪酸对CCK从肠细胞释放的作用。这个试验显示了松子油的游离脂肪酸以及松油酸作为一种产生饱满感的成分的作用(参见下面的数据)。
细胞培养
STC1-1细胞系是在以下条件下培养作出的:37℃下,5%二氧化碳、95%空气中,添加了5%FCS、2mM谷氨酰胺、100U/ml青霉素和50μM链霉素的RPMI1640。通过用PBS冲洗细胞层以及在胰蛋白酶-EDTA溶液中温育,细胞常规传代达到70-80%的融合。平板密度2×106细胞/75cm2可用于常规继代培养。
试验方案
在试验前24小时,将STC1细胞以40-50%的融合度接种于6孔培养平板。试验当天,用1ml含有0.2%(重量/体积)BSA(KRBB)的Krebs-Ringer碳酸氢盐缓冲液(pH7,4)冲洗细胞。在2ml KRBB中,加或不加被测试物培养1小时之前,STC1细胞在2ml KRBB中预先温育15分钟。温育结束时,收集上层液,然后以1000rpm离心5分钟,随之立即在-20℃下冷冻以用作RIA分析。在提取了培养细胞内含物后,用荧光分析法测定DNA含量。
RIA分析
CCK的免疫活性使用抗血清.39A(1/300,000)测定,抗血清与CCK-33和CCK-8发生100%交叉反应,抗血清与硫酸化胃泌素-17发生12%交叉反应,抗血清与非硫酸化胃泌素-17发生5%交叉反应,以及抗血清与非硫酸化CCK-8和胃泌素-34发生小于0.1%交叉反应。以CCK-8作标准。Bolton-Hunter(Thr,Nle)-CCK-9通过氯胺-T法用碘125标记,然后用反相HPLC纯化。试验用缓冲液为0.05M、pH为7.5的磷酸钠。每个1μl-200μl上层液的等分试样测定2次(第0日),在第1日加入标记物,48小时后进行炭沉淀。
图1的柱形图显示的是使用来自松子的游离脂肪酸(FFAs)和其他FFAs产生的CCK水平。
从图1可以看出,松子油产生的CCK水平明显高于其它实验材料产生的CCK水平。每个样品有三个不同浓度测定的CCK水平:以300g/mol的FFA的分子量计,它们是100μM、500μM和1mM。Marinol是一种来自于LodersCroklaan BV(Wormerveer,The Netherlands)、含有EPA和DHA的鱼油。Clarinol是一种来自Loders Croklaan BV(Wormerveer,The Netherlands)的含有80%共轭亚油酸的产品,其他FFA样品是来自一些不同的天然产品。
实施例2
以下是根据本发明的明胶胶囊的一个实施例。根据本领域熟知的方法,将含有松油酸的组合物装入明胶胶囊,最终的胶囊产品含有500mg松油酸,成人每日可服多至4次,每次1粒。
实施例3
实施例3关系以下附图,归纳如下:
图2显示的是在服用3g松油酸FFA(较高的曲线;虚线)或安慰剂(较低的曲线;实线)后的CCK血液水平(pmol/l)。
图3显示的是在服用3g松油酸FFA(较高的曲线;虚线)或安慰剂(较低的曲线;实线)后的GLP1血液水平(pmol/l)。
图4显示的是在服用3g松油酸FFA(较低的曲线;虚线)或安慰剂(较高的曲线;实线)后,4小时之内对吃东西的渴望度。
图5显示的是在服用3g松油酸FFA(较低的曲线;虚线)或安慰剂(较高的曲线;实线)后,4小时内预期的对食品的摄取度。
图6显示的是在服用3g松油酸实施例3(ii)TG(较高的曲线;虚线)或安慰剂(较低的曲线;实线)后CCK血液水平(pmol/l)。
图7显示的是在服用3g松油酸TG(较低的曲线;虚线)或安慰剂(较高的曲线;实线)后,4小时之内对吃东西的渴望度。
图8显示的是在服用3g松油酸TG(较低的曲线;虚线)或安慰剂(较高的曲线;实线)后,4小时内预期的对食品的摄取度。
在上述图中,星号显示明显区别。
分析了含有松油酸的二个组合物:实施例3(i)为含有游离脂肪酸(FFA)形式的松油酸的组合物;实施例3(ii)为含有甘油三酯(TG)形式的松油酸的组合物。二种组合物的脂肪酸甲酯(FAME)分析如下:
  俗名   化学名  缩写   粗制松子油  实施例3(ii)TG  实施例3(i)FFA
  棕榈酸   十六烷酸  C16:0   4.3  4.1  4.4
  棕榈油酸   顺-9十六烯酸  C16:1   0.2  0.2  0.2
  十七烷酸   十七烷酸  C17:0   0.1  0.1  0.1
  硬脂酸   十八烷酸  C18:0   2.1  2.1  2.1
  油酸   顺-9十八烯酸  C18:1   24.4  24.5  24.9
  亚油酸   顺-9,12十八碳二烯酸  C18:2   44.3  45.5  45.9
  紫杉油酸   顺-5,9十八碳二烯酸  5,9-C18:2   2.1  2.2  2.1
  亚麻酸   顺-9,12,15十八碳三烯酸  9,12,15-C18:3   0.3  0.2  0.2
  松油酸   顺-5,9,12十八碳三烯酸  5,9,12-C18:3   15.6  15.9  15.8
以18位体重超标的妇女(BMI=25-30)作为试验对象,做一个随机交叉(cross-over)的安慰剂对照的双盲试验,上述妇女服用3g实施例3(i)FFA的组合物,3g实施例3(ii)TG的组合物,或3g安慰剂(橄榄油)胶囊,并食用由2片白面包和果酱组成的低脂肪早餐。分别取0,30,60,90,120,180和240分钟时的血液样品来分析CCK、GLP-1、葡萄糖、胰岛素、游离脂肪酸和甘油三酯,对于主观饱满感的评价是通过对吃东西的渴望度以及对预期食品的消耗度作视觉模拟评分(VAS)而进行的。根据拉丁方设计(Latin squaredesign),在两个星期内以随机顺序对每个实施对象进行三种治疗,并以一星期为洗脱期(wash-out period)。
VAS标尺是由150-mm的水平线构成的,在其两端有表示最积极或最消极感觉的短语,试验对象在与她们饥饿感相当的水平线的点上划垂直线,VAS上的线距换算成0-100分。
CCK和GLP-1浓度可以通过使用优化的及合法商业化的人RIA试剂盒来测定。用ANOVA进行统计学评价治疗效果,p<0.05被认为显效。
不良事件(AEs)也被监视
服用3g实施例3(i)FFA组合物30分钟后,诱导CCK的释放达到峰值,这显著高于服用安慰剂的情况(图2)。服用实施例3(i)FFA组合物后60分钟时,GLP-1的释放达到峰值,并也显著高于服用安慰剂的GLP-1释放水平情况(图3)。在4小时期间,根据曲线下面积,服用了实施例3(i)FFA组合物的CCK释放于血液中的总量比服用安慰剂的高60%,GLP1水平比服用安慰剂的高25%。在服用实施例3(i)FFA组合物后的4小时期间(图4和5)也降低了“想吃东西”和“预期摄食”的分数。这些分数在服用实施例3(i)FFA组合物后的30分钟时最低,而且与服用安慰剂相比差异是显著的。实施例3(ii)TG的组合物对食欲感和CCK释放量的影响与实施例3(i)FFA组合物相类似(图6至图8)。
总的来说,CCK和GLP1的数据清晰而明确的显示了治疗效果。FFA和TG组合物在30-60分钟内可以提高饱满感诱导激素、CCK和GLP1的血中水平,并且直至服用后4小时,都保持较高水平。并且,在服用实施例3(i)FFA组合物和实施例3(ii)TG组合物后的30分钟时,想吃东西和预期摄食的分数比服用安慰剂后30分钟时的要低。
不良事件或严重不良事件未见报告。更进一步而言,测定了在服用胶囊后0-4小时的血液中的葡萄糖、胰岛素、游离脂肪酸和甘油三酯的水平,并显示在各组之间,甘油三酯和游离脂肪酸的水平在任何时间点上均没有显著差异。葡萄糖和胰岛素的水平在两个组中都有升高,是由于所有参加者所吃的早餐是低糖含量的。在所有的组中4小时内,葡萄糖和胰岛素的反应是相似的,这表明实施例3(i)FFA组合物和实施例3(ii)TG组合物是完全可耐受的。
然而,在服用实施例3(i)FFA组合物后,葡萄糖的水平不如服用实施例3(ii)TG组合物和安慰剂后增加得多,而且在服用了实施例3(i)FFA组合物和实施例3(ii)TG组合物后,其降低梯度比服用安慰剂,即橄榄油要大。作为结果,服用实施例3(i)FFA组合物后,与服用安慰剂和实施例3(ii)TG组合物后相比,胰岛素的水平增加得更缓慢,并且随后快速下降。因此,与服用安慰剂相比,实施例3(i)FFA组合物可以使得血液中葡萄糖和胰岛素的水平变化更平缓,而实施例3(ii)TG组合物介于这两者之间。
实施例4
在体外实验中,测定了许多不同化合物带来的相对CCK的释放,以衡量出各种游离脂肪酸对CCK从肠内细胞释放的效果。这个研究显示了松子油中游离脂肪酸作为饱腹成分的效果,并因此显示了松油酸作为饱腹成分的效果(见以下数据)。松子油中以大量和少量存在的其它脂肪酸(如油酸、亚油酸、紫杉油酸、刺柏油酸(juniperonic acid)和金松油酸(sciadonic acid))并不能诱导大量的CCK。与含有16%的松油酸的组合物相比,含有27%的松油酸的组合物能诱导稍高量的CCK。
细胞培养
将肠内分泌STC1-1细胞系在以下条件下培养:37℃下,5%二氧化碳、95%空气,及标准培养基(DMEM)。通过用PBS冲洗细胞层以及在胰蛋白酶-EDTA溶液中温育细胞常规传代达到70-80%融合。平板密度2×106细胞/75cm2用来做常规继代培养。
试验方案
STC1细胞被接种于六孔培养板中,然后用对照培养基,使用或不使用被测试剂,温育1小时。所有试剂均在100μM浓度下以游离脂肪酸形式测试。由于脂肪酸被乙醇稀释,因此测试乙醇的作用,并显示CCK水平基线。由于已知癸酸不能诱导CCK产生,因此,用癸酸来作为一种阴性对照脂肪酸。铃蟾肽(bombesin)的效果作阳性对照。温育结束时收集上层液,离心并立即在-20℃下速冻,用于RIA分析。
通过显微镜检查细胞存活率。在提取培养细胞的内容物后,用荧光法分析DNA含量,另外,还测定了LDH的释放。
RIA分析
使用标准CCK RIA来测定CCK的释放量,并以6倍量测定脂肪酸的作用效果。
下表显示分别含有16%和27%松油酸的样品与阴性对照脂肪酸,癸酸相比,CCK释放量分别高出癸酸大约4倍和5倍。一种含有不到1%的松油酸的来源于Pinus pinea的油,诱导CCK释放不太好(仅为癸酸的大约2倍)。其他存在于松子油中的脂肪酸,如油酸、亚油酸、紫杉油酸、刺柏油酸和金松油酸也不能诱导大量CCK的释放(大约为癸酸的2倍)。相反,其他18:3的脂肪酸如石榴油酸、γ-亚麻酸、α-亚油酸和α-桐酸都是与松油酸相似的好的CCK释放促进剂,但要指出的是,这些脂肪酸是以纯品形式测定的,而松油酸只是在纯度为16%和27%下测定的。纯度为95%的CLA(c9,t11异构体与t10,c12异构体50∶50的混合物)并不能像含有松油酸的CLA一样带来CCK的高释放量。一种由分级棕榈油和燕麦油混合而成的商业产品也不能很有效地促进CCK的释放(是癸酸的2倍)。
  化合物   CCK相对释放量
  16%松油酸   188
  27%松油酸   210
  来源于Pinus pinea的油(0.35%松油酸)   101
  油酸18:1   90
  亚油酸18:2   68
  γ-亚麻酸18:3   140
  α-亚麻酸18:3   177
  α-桐酸18:3   212
  石榴油酸18:3   320
  棕榈油/燕麦油(商业产品)   91
  CLA混合物+16%松油酸   112
  癸酸   43
  乙醇   53
实施例5
实施例3(ii)和3(i)的松油酸TG和松油酸FFA组合物是用“粗制松子油”作为原料制得的。
在室温下,松子被供应商置于螺旋榨机中用高压压碎。在压榨的时候产生的唯一的热,是由于在螺旋榨机中压碎种子造成的,并且温度从不超过50℃。然后将榨出的油经帆布过滤。得到的产品就是“粗制松子油”。
上述粗制油被进一步加工成TG和FFA组合物。制备方法由以下主要步骤组成:精炼、水解和蒸馏。
精炼步骤是物理精炼,由使用漂白土以去除残留污染物的漂白步骤和随后的除臭步骤(汽提)所组成。精炼后的松子油即为TG组合物。
精炼后的松子油可以进一步用食品级脂肪酶水解得到游离脂肪酸、甘油和未完全水解油的残余物(甘油二酯和甘油三酯)。最后,将水解后的混合物蒸馏而得到FFA组合物。
实施例6
软胶囊是通过旋转模加工(rotary die processing)制备的。用于胶囊外壳的材料、凝胶和填充物都是分别配制的。一旦凝胶物料和填充物料准备就绪,凝胶就被延展成薄膜以形成两个明胶带,然后卷绕在两个决定胶囊尺寸和形状的独立的模具上。当明胶薄膜和模具相匹配之后,就仔细地以每个胶囊500mg、750mg或1000mg油的剂量将填充物注入到两个胶带之间,然后通过加热和加压立即密封。胶囊从机器中掉出,然后用热空气流干燥。

Claims (16)

1、松油酸或其衍生物在制备用于通过降低饥饿感和/或增加饱满感控制体重的组合物方面的用途。
2.根据权利要求1所述的用途,其中所述组合物是食物补充剂、药物组合物或食品组合物的形式。
3.根据权利要求1或2所述的用途,其中所述组合物包含松油酸,为游离脂肪酸、甘油单酯、甘油二酯、甘油三酯或它们的混合物的形式。
4.根据权利要求1-3任一项所述的用途,其中所述的组合物是松子油或来源于松子油。
5.根据权利要求1所述的用途,其中所述衍生物选自α-亚麻酸、γ-亚麻酸、石榴油酸、桐酸以及它们的盐或烷基酯。
6.根据权利要求5所述的用途,其中所述的烷基酯是甘油单酯、甘油二酯或甘油三酯或它们的混合物。
7.根据前述任一项权利要求所述的用途,其中所述组合物还包含脂肪酸或其衍生物,该脂肪酸或其衍生物选自亚油酸、油酸、共轭亚油酸、共轭亚油酸的浓缩异构体富集混合物、EPA和DHA、或它们的混合物。
8.根据权利要求7所述的用途,其中所述脂肪酸或其衍生物是作为游离脂肪酸、或甘油单酯、甘油二酯、甘油三酯或它们的混合物存在的。
9.根据权利要求1所述的用途,其中所述组合物还进一步包含至少一种形成自亚油酸、油酸、反式酸和饱和脂肪酸的甘油酯,且所述组合物是食品组合物。
10.根据权利要求9所述的用途,其中甘油酯选自液体油,该液体油选自豆油、向日葵油、菜籽油、棉籽油;可可脂和代可可脂;棕榈油及其分馏物;酶制脂肪;鱼油及其分馏物;共轭亚油酸及其异构体富集混合物;γ-亚油酸及其富集混合物;硬化液态油;及它们的混合物。
11.根据前述任一项权利要求所述的用途,其中所述组合物是食品,并选自人造黄油,低脂的涂抹食品;非常低脂的涂抹食品;双连续的涂抹食品;水连续的涂抹食品;糖果产品,例如巧克力,糖衣或夹心;冰淇淋;冰淇淋包衣;冰淇淋芯;调味品;蛋黄酱;沙司;面包房用脂肪;起酥油或乳酪;膳食替代产品;保健条状食品;牛奶什锦早餐条;饮料;乳制品;低糖产品;低卡路里产品;汤;谷类食物和奶昔。
12.根据权利要求1-8任一项所述的用途,其中所述组合物是药物组合物,其形式选自片剂,丸剂,胶囊,薄膜衣片,多微粒包括:颗粒、珠、微丸、微囊化颗粒,粉剂,酏剂,糖浆,悬浮剂和溶液。
13.根据权利要求1-8任一项所述的用途,其中所述组合物是软胶囊或硬胶囊形式的食物补充剂,其包含的囊衣材料选自明胶、淀粉、改性淀粉和淀粉衍生物。
14.根据前述任一项权利要求所述的用途,其中所述的组合物通过帮助保持体重和/或减轻体重、和/或帮助使身材变苗条、和/或减少卡路里摄取、和/或给高卡路里食品提供较小的空间而控制体重。
15.根据权利要求1-14任一项所述的用途,其中所述的哺乳动物是人。
16.权利要求1-14任一项所定义的组合物在制备用于刺激哺乳动物缩胆囊素(CCK)产生的组合物方面的用途。
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