CN1839139B - 蛋白酶体抑制剂及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供能够例如通过抑制蛋白酶体活性而调控凋亡的硼酸化合物，硼酸酯，及其组合物。所述化合物和组合物可以用于诱导凋亡和治疗疾病例如癌症和其他直接或间接与蛋白酶体活性有关的失调的方法中。

Description

蛋白酶体抑制剂及其使用方法

发明领域

本发明涉及有效用作蛋白酶体抑制剂和调节凋亡的硼酸和硼酸酯化合物。

发明背景

蛋白酶体，(也称作多催化蛋白酶(MCP)，多催化蛋白酶，多催化蛋白酶复合物，多催化内肽酶复合物，20S，26S，或ingensin)是存在于所有真核细胞的细胞质和核内的大的多蛋白复合物。它是高度保守的细胞结构，负责大多数细胞蛋白ATP-依赖的蛋白水解(Tanaka，Biochem Biophy.Res.Commun.，1998，247，537)。26S蛋白酶体由20S核心催化复合物组成，其在各末端被19S调控亚基加帽。古细菌20S蛋白酶体含有两种不同类型亚基α和β的14个拷贝，形成由四个堆叠的环组成的圆柱状结构。顶部和底部环各含有7个α亚基，而内部环含有7个β亚基。更复杂的真核20S蛋白酶体包括大约15个不同的20-30kDa亚基，并且特征为与肽底物有关的三个主要活性。例如，蛋白酶体显示胰蛋白酶的，胰凝乳蛋白酶的，和肽基谷氨酰基肽水解活性(Rivett，Biochem.J.，1993，291，1和Orlowski，Biochemisty，1990，29，10289)。此外，蛋白酶体具有独特的活性位点机制，被认为利用苏氨酸残基作为催化性的亲核试剂(Seemuller，等，Science，1995，268，579)。

26S蛋白酶体能够降解通过添加泛素分子而被标记的蛋白。通常，泛素利用ATP和E1(泛素活化)和E2(泛素结合)酶而以多步骤方法与赖氨酸的ε-氨基连接。多泛素化的底物蛋白被26S蛋白酶体识别并降解。通常从复合物释放多泛素链而泛素被再循环(Goldberg等，Nature，1992，357，375)。

许多调控蛋白是泛素依赖的蛋白水解的底物。许多这些蛋白起着生理性以及病理性细胞过程的调控因子的作用。蛋白酶体活性的改变已经与很多病理学包括神经退性性变疾病例如Parkinson氏病，阿尔茨海默氏病以及阻塞/局部缺血重新灌流损伤，和中枢神经系统老化相关。

泛素蛋白酶体途径也在肿瘤生长中起重要作用。蛋白例如细胞周期蛋白，CDK2抑制剂，和肿瘤抑制剂受调控的降解据信对于细胞周期进行和有丝分裂是重要的。已知的蛋白酶体底物是肿瘤抑制物p53，其与数个细胞过程有关(参见，如，Ko，L.J.Genes Dev.，1996，10，1054)。肿瘤抑制剂p53已经显示在数个造血细胞系中诱导凋亡(Oren，M.，Semin.Cancer Biol.，1994，5，221)。p53的诱导导致细胞生长停止在细胞周期的G1期以及由凋亡引起的细胞死亡。肿瘤抑制剂p53降解已知通过泛素蛋白酶体途径进行，并且通过抑制蛋白酶体而干扰p53降解是诱导凋亡的可能模式。

蛋白酶体也是通过降解转录因子NF-κB的抑制蛋白IκB而使该转录因子活化所需要的(Palombella等，Cell，1994，78，773)。NF-κB通过转录凋亡抑制剂而在维持细胞存活中起作用。阻断NF-κB活性已经显示使细胞更易于凋亡。

已经报道了蛋白酶体蛋白水解活性的数个抑制剂。参见，例如，Kisselev等，Chemistry & Biology，2001，8，739。Lactacystin是特异性抑制蛋白酶体复合物的蛋白水解活性的链霉菌代谢物(Fenteany等，Science，1995，268，726)。该分子能够抑制数个细胞类型的增殖(Fenteany等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1994，91，3358)。已经显示lactacystin通过其β内酯部分不可逆地结合到位于蛋白酶体β亚基氨基末端的苏氨酸残基。

肽醛已经被报道抑制与蛋白酶体有关的胰凝乳蛋白酶样活性(Vinitsky等，Biochemistry，1992，31，9421；Tsubuki等，Biochem.Biophys.Res.Commun.，1993，196，1195；和Rock等，Cell，1994，78，761)。已经报道了体外IC₅₀值为10-100nM的二肽醛抑制剂(Iqbal，M.等，J.Med.Chem.1995，38，2276)。也已经报道一系列来自α-酮羰基和硼酸酯衍生的二肽的同样有效的体外抑制剂(Iqbal等，Bioorg.Med.Chem.Lett.1996，6，287，U.S.专利5,614,649；5,830,870；5,990,083；6,096,778；6,310,057；U.S.专利申请公开2001/0012854，和WO99/30707)。

以前已经报道N-末端肽基硼酸酯和酸化合物(U.S.专利4,499,082和4,537,773；WO91/13904；Kettner等，J.Biol.Chem.，1984，259，15106)。这些化合物被报道为某些蛋白水解酶的抑制剂。N-末端三肽硼酸酯和酸化合物已经显示抑制癌症细胞的生长(U.S.专利5,106,948)。大量种类的N-末端三肽硼酸酯和酸化合物及其类似物已经显示抑制肾素(U.S.专利5,169,841)。

已经报道了蛋白酶体肽酶活性的不同抑制剂。参见，如Dick等，Biochemistry，1991，30，2725；Goldberg等，Nature，1992，357，375；Goldberg，Eur.J.Biochem.，1992，203，9；Orlowski，Biochemistry，1990，29，10289；Rivett等，Archs.Biochem.Biophys.，1989，218，1；Rivett等，J.Biol.Chem.，1989，264，12215；Tanaka等，New Biol.，1992，4，1；Murakami等，Proc.Natl.Acad Sci.USA，1986，83，7588；Li等，Biochemistry，1991，30，9709；Goldberg，Eur.J.Biochem.，1992，203，9；和Aoyagi等，蛋白酶和生物调控(Proteases and BiologicalControl)，冷泉港实验室出版社(1975)，pp.429-454。

Stein等，U.S.专利申请序列号08/212,909，1994年3月15日提交，报道有效用于降低动物中肌肉质量损失率和细胞内蛋白分解率的肽醛。该化合物据称还降低动物中p53蛋白的降解率。Palombella等，WO95/25533，报道通过将动物细胞与蛋白酶体功能或泛素结合的肽醛抑制剂接触，使用肽醛来降低动物NF-κB的细胞含量和活性。Goldberg和Rock，WO94/17816，报道使用蛋白酶体抑制剂来抑制MHC-I抗原递呈。Stein等，U.S.专利5,693,617报道作为蛋白酶体抑制剂的肽醛有效降低动物蛋白的降解率。Lum等，U.S.专利5,834,487报道了26S和20S蛋白酶体被茚酮衍生物的抑制和使用茚酮衍生物抑制细胞增殖的方法。Wang等，U.S.专利6,075,150报道α-酮酰胺化合物有效治疗由哺乳动物20S蛋白酶体介导的失调。France等，WO00/64863，报道使用2，4-二氨基-3-羟基羧酸衍生物作为蛋白酶体抑制剂。Yamaguchi等，EP1166781报道羧酸衍生物作为蛋白酶体抑制剂。Ditzel等，EP0995757报道蛋白酶体的二价抑制剂。Garcia-Echeverria等，Bioorg.Med.Chem.Lett.，2001，11，1317报道非共价抑制20S蛋白酶体的胰凝乳蛋白酶样活性的2-氨基苄基抑制素衍生物。

一些另外的蛋白酶体抑制剂可以包括硼部分。例如，Drexler等，WO00/64467，报道在活化的内皮细胞或具有高表达水平c-myc的白血病细胞中，通过使用含有蛋白酶体抑制剂的四肽硼酸酯选择性诱导凋亡的方法。Furet等，WO02/096933报道2-[[N-(2-氨基-3-(杂芳基或芳基)丙酰)氨酰]氨基]-烷基硼酸和酯用于治疗温血动物的增殖性疾病。U.S.专利6,083,903；6,297,217；5,780,454；6,066,730；6,297,217；6,548,668；U.S.专利申请公开2002/0173488；和WO96/13266报道硼酸酯和硼酸化合物以及用于降低蛋白降解率的方法。U.S.专利6,465,433和WO01/02424也报道了使用某种硼酸和硼酸酯抑制病毒复制的方法。Plamondon等，U.S.专利申请公开2002/0188100报道硼酸和新的硼酸酐和硼酸酯化合物的药学可接受的组合物。Gardner等，Biochem.J.，2000，346，447显示一系列的二肽基和三肽基硼酸是20S和26S蛋白酶体的抑制剂。

其他含硼肽基和相关化合物报道于U.S.专利5,250,720；5,242,904；5,187,157；5,159,060；5,106,948；4,963,655；4,499,082；和WO89/09225，WO/98/17679，WO98/22496，WO00/66557，WO02/059130，WO03/15706，WO96/12499，WO95/20603，WO95/09838，WO94/25051，WO94/25049，WO94/04653，WO02/08187，EP632026，和EP354522。

如上述参考文献所示，对于能调控蛋白酶体活性的药学有着很大的需求。例如能够抑制蛋白酶体活性的分子可以通过干扰细胞周期蛋白或肿瘤抑制剂的有序降解而中止或延缓癌症进展。因此，对新的和/或改进的蛋白酶体抑制剂有着持续的需求。

发明概述

本发明涉及有效用作蛋白酶体抑制剂并调控凋亡的新的硼酸和硼酸酯化合物。本发明还包括抑制与某些失调相关的多催化蛋白酶(“MCP”)，包括治疗肌肉萎缩失调(wasting diorder)的方法。

在一个实施方案中提供通式(I)的化合物：

其中组成部分以及优选的组成部分在下文中定义。

在另一个实施方案中本发明提供含有通式(I)的化合物和药学可接受的载体的药学组合物。

在另一个实施方案中本发明提供抑制蛋白酶体活性的方法，包括将通式(I)的化合物与所述蛋白酶体接触。

在另一个实施方案中本发明提供治疗癌症的方法，包括对具有或倾向于具有所述癌症的哺乳动物给药治疗有效量的通式(I)的化合物。

在另一个实施方案中本发明提供治疗癌症的方法，包括对具有或倾向于具有所述癌症的哺乳动物给药治疗有效量的通式(I)的化合物，其中所述癌症选自皮肤癌，前列腺癌，结肠直肠癌，胰腺癌，肾癌，卵巢癌，乳腺癌，肝癌，舌癌，肺癌，和平滑肌组织癌。

在另一个实施方案中本发明提供治疗癌症的方法，包括对具有或倾向于具有所述癌症的哺乳动物给药治疗有效量的通式(I)的化合物，其中所述癌症选自白血病，淋巴瘤，非-Hodgkin淋巴瘤，骨髓瘤，和多发性骨髓瘤。

在另一个实施方案中本发明提供治疗癌症的方法，包括对具有或倾向于具有所述癌症的哺乳动物给药治疗有效量的通式(I)的化合物，并结合一种或多种抗肿瘤或抗癌剂和/或放射疗法。

在另一个实施方案中本发明提供一种抑制转录因子NF-κB活性的方法，包括将转录因子NF-κB的抑制剂IκB与通式(I)的化合物接触。

在另一个实施方案中本发明提供用于治疗的通式(I)的化合物。

在另一个实施方案中本发明提供通式(I)的化合物在生产治疗癌症的药学中的应用。

该化合物的这些和其他的特征将随继续公开的内容而以扩展的形式阐述。

发明实施方案的描述

本发明提供能抑制蛋白酶体活性和可用于治疗与蛋白酶体活性有关的疾病或失调的化合物等。本发明的化合物包括通式(I)的化合物或其药学可接受的盐，立体异构或互变异构形式：

其中：

R¹是C₁-C₄烷基；

Y是H，CN，NO₂，或胍基保护基团；

Z是-CN，-C(＝O)OR⁵，苯二甲酰亚氨基，-NHSO₂R⁶，或-NR³R⁴；

R³是H或C₁-C₄烷基；

R⁴选自芳基-SO₂-，芳基-C(＝O)-，芳烷基-C(＝O)-，烷基-C(＝O)-，芳基-OC(＝O)-，芳烷基-OC(＝O)-，烷基-OC(＝O)-，芳基-NHC(＝O)-，和烷基-NHC(＝O)-；其中芳基或芳烷基任选被一个或多个甲基或甲氧基取代；

R⁵是H，C₁-C₆烷基，C₂-C₆链烯基，C₂-C₆炔基，其中R⁵任选被一个或多个卤素，C₁-C₄烷基，芳基，或杂芳基取代；

R⁶是C₁-C₈烷基，C₂-C₈链烯基，C₂-C₈炔基，其中R⁶任选被一个或多个卤素，C₁-C₄烷基，芳基，或杂芳基取代；

Q选自B(OR⁹)₂，蒎烷二醇硼酸酯，颇哪醇硼酸酯，

1，2-乙二醇硼酸酯，1，3-丙二醇硼酸酯，

1，2-丙二醇硼酸酯，2，3-丁二醇硼酸酯，

1，1，2，2-四甲基乙二醇硼酸酯，

1，2-二异丙基乙二醇硼酸酯，5，6-癸二醇硼酸酯，

1，2-二环己基乙二醇硼酸酯，双环己基-1，1’-二醇硼酸酯，和

1，2-二苯基-1，2-乙二醇硼酸酯；

R⁹是H，C₁-C₄烷基，环烷基，环烷基烷基，芳基，或芳烷基；

m是2，3，或4；以及

n是3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，或14。

在一些实施方案中R₁是乙基，丙基，或丁基。

在一些实施方案中R₁是2-丙基。

在一些实施方案中Q是蒎烷二醇硼酸酯。

在一些实施方案中Q是双环己基-1，1’-二醇硼酸酯。

在一些实施方案中Q是B(OH)₂。

在一些实施方案中Z是苯二甲酰亚氨基，NHR⁴，或CN。

在一些实施方案中n是8，9，10，或11。

在一些实施方案中m是3。

在一些实施方案中n是8，9，10，或11；以及m是3。

在一些实施方案中本发明提供通式(I)的化合物，或其药学可接受的盐，立体异构或互变异构形式，

其中：

R¹是2-丙基；

Y是-NO₂；

Z是-CN，-C(＝O)OR⁵，苯二甲酰亚氨基，-NHSO₂R⁶，或-NHR⁴；

R⁴选自芳基-SO₂-，烷基-SO₂-，芳基-C(＝O)-，芳烷基-C(＝O)-，烷基-C(＝O)-，芳基-OC(＝O)-，芳烷基-OC(＝O)-，烷基-OC(＝O)-，芳基-NHC(＝O)-，和烷基-NHC(＝O)-；其中所述芳基或芳烷基任选被一个或多个甲基或甲氧基取代；

R⁵是H或C₁-C₆烷基，其中所述烷基任选被一个或多个卤素，芳基，或杂芳基取代；

R⁶是C₁-C₆烷基，其中所述烷基任选被一个或多个卤素，芳基，或杂芳基取代；

Q选自B(OR⁹)₂，蒎烷二醇硼酸酯，颇哪醇硼酸酯，

1，2-乙二醇硼酸酯，1，3-丙二醇硼酸酯，

1，2-丙二醇硼酸酯，2，3-丁二醇硼酸酯，

1，1，2，2-四甲基乙二醇硼酸酯，

1，2-二异丙基乙二醇硼酸酯，5，6-癸二醇硼酸酯，

1，2-二环己基乙二醇硼酸酯，双环己基-1，1’-二醇硼酸酯，和

1，2-二苯基-1，2-乙二醇硼酸酯；

R⁹是H或C₁-C₄烷基；

m是3；以及

n是4，5，6，7，8，9，10或11。

在一些实施方案中本发明提供通式(I-s)的化合物或其药学可接受的盐，立体异构或互变异构形式：

其中：

R¹是C₁-C₄烷基；

Y是CN或NO₂；

Z是-CN，-C(＝O)OR⁵，苯二甲酰亚氨基，-NHSO₂R⁶，或-NR³R⁴；

R³是H或C₁-C₄烷基；

R⁴选自芳基-SO₂-，烷基-SO₂-，芳基-C(＝O)-，芳烷基-C(＝O)-，烷基-C(＝O)-，芳基-OC(＝O)-，芳烷基-OC(＝O)-，烷基-OC(＝O)-，芳基-NHC(＝O)-，和烷基-NHC(＝O)-；其中所述芳基或芳烷基任选被一个或多个甲基或甲氧基取代；

R⁵是H，C₁-C₆烷基，C₂-C₆链烯基，C₂-C₆炔基，其中R⁵任选被一个或多个卤素，C₁-C₄烷基，芳基，或杂芳基取代；

R⁶是C₁-C₈烷基，C₂-C₈链烯基，C₂-C₈炔基，其中R⁶任选被一个或多个卤素，C₁-C₄烷基，芳基，或杂芳基取代；

Q选自B(OR⁹)₂，蒎烷二醇硼酸酯，1，2-二环己基乙二醇硼酸酯，和双环己基-1，1’-二醇硼酸酯；

R⁹是H或C₁-C₄烷基；

m是2，3，或4；以及

n是3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，或14。

在一些实施方案中本发明提供通式(I-s)的化合物或其药学可接受的盐形式：

在另一些实施方案中本发明提供选自以下实施例的通式(I-s)的化合物或其药学可接受的盐或游离碱形式：实施例10，实施例11，实施例12，实施例13，实施例14，实施例15，实施例16，实施例17，实施例18，实施例19，实施例20，实施例21，实施例22，实施例23，和实施例24。

应当理解，为了清楚起见，在分开的实施方案中描述本发明的某些特征，这些特征也可以组合在单一实施方案中提供。相反，为简洁起见而在单一实施方案中描述的本发明的不同特征也可以分开提供或以任何合适的亚组合形式提供。

这里使用的“硼酸”指含有B(OH)₂部分的化合物。在一些实施方案中，硼酸化合物可以通过硼部分的脱水而形成寡聚酐。例如，Snyder等，J.Am.Chem.Soc.，1958，80，3611报道寡聚芳基硼酸。因此，除非另有说明，“硼酸”，或含有B(OH)₂部分的化学通式旨在包括游离硼酸，寡聚酐，包括但不限于二聚体，三聚体，四聚体及其混合物。

这里使用的，“硼酸酐”或“硼酐”指将两个或多个通式(I)的硼酸化合物分子组合，从硼酸部分失去一个或多个水分子而形成的化合物。当接触水时，硼酸酐化合物可以被水化释放游离硼酸化合物。在一些实施方案中，硼酸酐结构可以包含两个，三个，四个或更多硼酸单元并可以具有环状或线性构型。在一些实施方案中，硼酸酐化合物基本以单个寡聚体形式存在；然而硼酸酐还包括不同的寡聚硼酸酐以及游离硼酸的混合物。

本发明硼酸酐非限制性的例子包括通式(II)和(III)的化合物，其中G是通式(IV)的部分，而t是0到10或1，2，3，或4。

在一些实施方案中，硼酸酐化合物中至少大约80％的硼酸以单个寡聚酐形式存在。在另外的实施方案中，硼酸酐化合物中至少大约85，大约90，大约95，或大约99％的硼酸以单个寡聚酐形式存在。在一些实施方案中，硼酸酐化合物基本由单个寡聚硼酸酐组成。在另外的实施方案中，硼酸酐化合物由单个寡聚硼酸酐组成。在另外的实施方案中，硼酸酐化合物包含通式(III)的环硼氧烷(boroxine)，其中t是1。

硼酸酐化合物可以通过将对应的硼酸化合物暴露于脱水条件，包括例如，结晶，冻干，加温和/或暴露于干燥剂而制备。一些合适的结晶溶剂包括乙酸乙酯，二氯甲烷，己烷，醚，苯，乙腈，乙醇及其混合物。

这里使用的，“硼酯”或“硼酸酯”指硼酸化合物的酯衍生物。

这里使用的，“环硼酸酯”用于表示通式-B(OR)(OR)的稳定的环状硼部分，其中两个R取代基合起来含有2到20碳原子，并任选含有N，S，或O的杂原子。环硼酸酯是本领域公知的。环硼酸酯的例子包括但不限于，蒎烷二醇硼酸酯，颇哪醇硼酸酯，1，2-乙二醇硼酸酯，1，3-丙二醇硼酸酯，1，2-丙二醇硼酸酯，2，3-丁二醇硼酸酯，1，1，2，2-四甲基乙二醇硼酸酯，1，2-二异丙基乙二醇硼酸酯，5，6-癸二醇硼酸酯，1，2-二环己基乙二醇硼酸酯，双环己基-1，1′-二醇，二乙醇胺硼酸酯，和1，2-二苯基-1，2-乙二醇硼酸酯。

这里使用的，术语“烷基”或“亚烷基”用于表示直链或支链的饱和烃基。烷基的例子包括甲基(Me)，乙基(Et)，丙基(如，n-丙基和异丙基)，丁基(如，n-丁基，异丁基，s-丁基，t-丁基)，戊基(如，n-戊基，异戊基，新戊基)等。烷基可以包括从大约1到大约20，从2到大约20，从1到大约10，从1到大约8，从1到大约6，从1到大约4，或从1到大约3个碳原子。

这里使用的，“链烯基”指具有一个或多个碳碳双键的烷基。链烯基的例子包括乙烯基，丙烯基，丁烯基，戊烯基，己烯基，丁间二烯基，戊间二烯基，己间二烯基等。

这里使用的，“炔基”指具有一个或多个碳碳三键的烷基。炔基的例子包括乙炔基，丙炔基，丁炔基，戊炔基等。

这里使用的，“卤烷基”指具有一个或多个卤素取代的烷基。卤烷基的例子包括CF₃，C₂F₅，CHF₂，CCl₃，CHCl₂，C₂Cl₅等。所有的氢原子被卤原子取代的烷基可以称为“全卤烷基”。全卤烷基的例子包括CF₃和C₂F₅。

这里使用的，“碳环基”是饱和的(即不含有双键或三键)或不饱和的(即，含有一个或多个双键或三键)的环烃部分。碳环基可以是单环或多环的。碳环基的例子包括环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基，环戊烯基，1，3-环戊间二烯基，环己烯基，降冰片基(norbornyl)，降蒎基(norpinyl)，降蒈基(norcarnyl)，金刚烷基，苯基等。碳环基可以是芳族(如，“芳基”)或非芳族的(如，“环烷基”)。在一些实施方案中，碳环基可以具有从3到大约20，3到大约10，或3到大约7个碳原子。

这里使用的，“芳基”指芳族碳环基，包括单环或多环芳烃例如苯基，萘基，蒽基，菲基等。在一些实施方案中，芳基具有从6到大约18个碳原子。

这里使用的，“环烷基”指非芳族碳环基，包括环化的烷基，烯基，和炔基。环烷基可以包括双环或多环系统。环烷基的例子包括环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基，环戊烯基，环己烯基，环己间二烯基，环庚三烯基，降冰片基，降蒎基，降蒈基，金刚烷基等。环烷基的定义还包括具有稠合到(即与其共享键的)环烷基环的一个或多个芳环的部分，例如，环戊烷的苯并衍生物(茚满基)，环己烷的苯并衍生物(四氢萘基)等。

这里使用的，“杂碳环基”可以是饱和的或不饱和的碳环基，其中碳环基的一个或多个成环碳原子被杂原子例如O，S，或N取代。杂碳环基可以是芳族的(如，“杂芳基”)或非芳族的(如“杂环烷基”)。杂碳环基对应于氢化或部分氢化的杂芳基。杂碳环基除了至少一个杂原子外可以包括从大约1到大约20，大约2到大约10，或大约2到大约7个碳原子，并可以通过碳原子或杂原子而连接。此外，杂碳环基可被取代或未取代。杂碳环基的例子包括吗啉基，硫代吗啉基，哌嗪基，四氢呋喃基，四氢噻吩基，2，3-二氢苯并呋喃基，1，3-苯并间二氧杂环戊烯，苯并-1，4-二噁烷，哌啶基，吡咯烷基，异噁唑烷基，异噻唑烷基，吡唑烷基，噁唑烷基，噻唑烷基，咪唑烷基等。

这里使用的，“杂芳基”是芳族杂碳环基并包括具有至少一个杂原子环成员例如硫，氧或氮的单环和多环芳烃。杂芳基包括而不限于，吡啶基，嘧啶基，吡嗪基，哒嗪基，三嗪基，呋喃基，喹啉基，异喹啉基，噻吩基，咪唑基，噻唑基，吲哚基，吡咯基，噁唑基，苯并呋喃基，苯并噻吩基，苯并噻唑基，异噁唑基，吡唑基，三唑基，四唑基吲哚基，1，2，4-噻二唑基，异噻唑基，苯并噻吩基，嘌呤基，咔唑基，苯并咪唑基等。在一些实施方案中，杂芳基可以具有从1到大约20个碳原子，在另外的实施方案中杂芳基具有从大约3到大约20个碳原子。在一些实施方案中，杂芳基具有1到大约4，1到大约3，或1到2个杂原子。

这里使用的，“杂环烷基”指非芳族杂碳环基，包括环化的烷基，链烯基，和炔基，其中一个或多个成环碳原子被杂原子例如O，N，或S原子取代。还包括在杂环烷基的定义中的是具有一个或多个稠合(即共享键)到非芳族杂环的芳环的部分，例如邻苯二甲酰亚胺基，萘二甲酰亚氨基均苯四酸二酰亚胺基，phthalanyl，和饱和的杂环的苯并衍生物例如吲哚烯基(indolene)和异吲哚烯基。

这里使用的，“卤”或“卤素”包括氟，氯，溴和碘。

这里使用的，“烷氧基”指-O-烷基基团。烷氧基的例子包括甲氧基，乙氧基，丙氧基(如，n-丙氧基和异丙氧基)，t-丁氧基等。

这里使用的，“硫代烷氧基”指其中O原子被S原子取代的烷氧基。

这里使用的，“芳氧基”指-O-芳基。芳氧基的例子是苯氧基。

这里使用的，“芳烷基”指被芳基取代的烷基部分。芳烷基的例子包括苄基和萘甲基。在一些实施方案中，芳烷基具有从7到11个碳原子。

这里使用的，“氨基”指NH₂。“烷基氨基”指被烷基取代的氨基，而“二烷基氨基”指被两个烷基取代的氨基。相反，“氨基烷基”指被氨基取代的烷基。

这里使用的，“环烷基烷基”指被环烷基取代的烷基。

这里使用的，“保护基团”指可以选择性附加官能团例如羟基，氨基，和羧基并从其除去的化学官能团。保护基团通常被引入到化学化合物中以产生对该化合物所暴露的化学反应条件为惰性的官能团。多种保护基团中的任意一种可以用于本发明。氨基部分的保护基团称为“氨基保护基团”，而胍基部分的保护基团称作“胍基保护基团”。氨基和胍基保护基团可以具有通式芳基-SO₂-，烷基-SO₂-，芳基-C(＝O)-，芳烷基-C(＝O)-，烷基-C(＝O)-，芳基-OC(＝O)-，芳烷基-OC(＝O)-，烷基-OC(＝O)-，芳基-NHC(＝O)-，烷基-NHC(＝O)-等，其中所述烷基，芳基和芳烷基可以被取代或未取代。氨基和胍基保护基团的例子可以包括t-丁基氧羰基(BOC)，芴基甲氧基羰基(Fmoc)，苄氧基羰基(Cbz)，和苯二甲酰亚氨基。其他的保护基团包括如下部分：

其他代表性的保护基团可以在T.W.Green和P.G.M.Wuts，有机合成中的保护基团(Protective Groups in Organic Synthesis)，第3版，Wiley & Sons，Inc.，New York(1999)，其在此以全文引为参考。

这里使用的，“取代的”表示化学基团中的至少一个氢原子被非氢部分取代。取代基的例子包括F，Cl，Br，I，C₁-C₆烷基，C₁-C₆链烯基，C₁-C₆，炔基，卤烷基，NR^ER^F，N₃，NO₂，CN，CNO，CNS，C(＝O)OR^E，R^ECO，R^EC(＝O)O，R^ECONR^E，R^ER^FNCO，脲基，OR^E，SR^E，SO₂-烷基，SO₂-芳基，和SO₂-NR^ER^F，其中R^E和R^F分别独立是H或C₁-C₆烷基。或者，R^E和R^F可以与其上连接的氮组合形成5到7员杂环，例如吡咯烷基，哌啶基，吗啉基，哌嗪基，和N-甲基哌嗪基。当此处的化学基团是“取代的”时，其可以具有多达全部化合价取代，只要得到的化合物是稳定的化合物或稳定的结构；例如，甲基可以被1，2，或3个取代基取代，亚甲基可以被1或2个取代基取代，苯基可以被1，2，3，4，或5个取代基取代等。

这里使用的“稳定的化合物”或“稳定的结构”指足够稳定能够经历从反应混合物中分离至有用程度的纯度，并优选能够配制成有效药剂的化合物。本发明只涉及稳定的化合物。

此处描述的化合物可以是非对称的(如，具有一个或多个立构中心)。所有的立体异构体，除非另有说明，包括例如对映异构体和非对映异构体。包含非对称取代的碳原子的本发明的化合物可以以光学活性或外消旋形式分离。如何从光学活性起始材料制备光学活性形式的方法是本领域公知的，例如通过拆分外消旋混合物或立体选择性合成。

本发明的化合物还包括互变异构形式，例如酮-烯醇互变异构体。互变异构形式可以处于平衡或通过合适的取代而立体锁定于一种形式。

本发明的化合物还可以包括中间化合物或最终化合物中原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但质量数不同的那些原子。例如氢的同位素包括氚和氘。

“药学可接受的”此处用于指化合物，材料，组合物和/或剂量形式，其在可靠的医疗判断的范围内适合用于与人类和动物的组织接触而没有过量毒性，刺激，过敏反应或其他问题和并发症，与合适的优点/风险比相称。

本发明还包括此处所述化合物药学可接受的盐。这里使用的“药学可接受的盐”指公开的化合物的衍生物，其中母体化合物通过转化现有的酸或碱部分而改性为其盐形式。药学可接受的盐的例子包括但不限于，碱性残基例如胺的无机或有机酸的盐；酸性残基例如羧酸的碱或有机盐等。本发明药学可接受的盐包括例如从无毒的无机或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐或季铵盐。例如，这样的常规无毒盐包括从无机酸例如盐酸，氢溴酸，硫酸，氨基磺酸，磷酸，硝酸等衍生的盐；和从有机酸例如乙酸，丙酸，丁二酸，乙醇酸，硬脂酸，乳酸，苹果酸，酒石酸，柠檬酸，抗坏血酸，双羟萘酸(pamoic)，马来酸，羟基马来酸，苯乙酸，谷氨酸，苯甲酸，水杨酸，对氨基苯磺酸，2-乙酸基苯甲酸，富马酸，甲苯磺酸，甲磺酸，甲基二磺酸，草酸，羟乙磺酸等制备的盐。本发明药学可接受的盐可以从含有碱性或酸性部分的母体化合物通过常规的化学方法合成。通常，这样的盐可以通过将这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量量的合适碱或酸的水或有机溶剂，或上述两者的混合物反应而制备。通常，非水介质如醚，乙酸乙酯，乙醇，异丙醇或乙腈是优选的。合适的盐的列表可以在Remington药学科学，第17版，Mack出版公司，Easton，Pa.，1985，p.1418中找到，其公开的内容在此引为参考。

合成

本发明的化合物，包括其盐和溶剂化物，可以使用已知的有机合成技术制备并根据众多可能的任一合成途径合成。

制备本发明的化合物的反应可以在合适的溶剂中进行，所述溶剂可以由有机合成领域的技术人员容易地选择。合适的溶剂在反应进行的温度，即从溶剂凝固点温度到溶剂沸点温度的范围内基本不与起始材料(反应物)，中间产物，或产物反应。给定的反应可以在一种溶剂或一种以上溶剂的混合物中进行。根据具体的反应步骤，可以选择对具体反应步骤合适的溶剂。

本发明的化合物的制备包括对不同化学基团的保护和去保护。保护和去保护的需求，和选择合适的保护基团可以由本领域技术人员容易地决定。保护基团的化学性质可以在，例如，T.W.Green和P.G.M.Wuts，有机合成中的保护基团，第3版，Wiley & Sons，Inc.，NewYork(1999)中找到，其在此以全文引为参考。

本发明的化合物可以通过顺序偶联3个片段组分(F1，F2，和F3)而制备。

F1片段

本发明的化合物的合成包括具有通式(A)所示结构的含硼片段(F1)。

F1的硼酸酯部分包括例如，二醇酯，例如通式(A)的环连接氧原子所示。

通式(A)中对硼原子的α位碳原子而言的立体化学可以使用非对称的硼酸酯基在制备F1时进行控制。例如，硼酸的蒎烷二醇酯可以利于立体化学纯或基本立体化学纯的F1片段的制备。作为例子，F1片段的制备方法如下：将通式(B)的化合物(显示获自(+)-蒎烷二醇的蒎烷二醇硼酸酯)与强碱(如二异丙基氨基化锂或二环己基氨基化锂)在过量二氯甲烷或二溴甲烷存在下反应，随后添加Lewis酸(如，ZnCl₂，ZnBr₂，或FeCl₃)以产生在对硼为α位碳处具有新引入的立构中心的通式(C)的化合物(其中L是卤素)。

通式(B)的化合物还可以根据两步方法制备，包括三烷氧基硼烷，优选三异丙氧基硼烷，与(1S，2S，3R，5S)-(+)蒎烷二醇反应产生单烷氧基[(1S，2S，3R，5S)-(+)蒎烷二醇]硼烷中间产物，其中三烷氧基硼烷中的两个烷氧基已经被(1S，2S，3R，5S)-(+)蒎烷二醇取代。混合的蒎烷二醇烷氧基硼烷，在与合适的有机金属衍生物例如Grignard试剂R¹CH₂MgBr或烷基锂R¹CH₂Li反应后产生收率和纯度高的化合物(B)。从三异丙氧基硼烷开始产生中间产物混合的蒎烷二醇异丙氧基硼烷(F)和通式(B)的化合物的方法显示于下面的流程中。

通式(C)的化合物又可以与氨基碱金属(如，双(三甲基甲硅烷基)氨基化锂，双(三甲基甲硅烷基)氨基化钠，和双(三甲基甲硅烷基)氨基化钾)或其他有效转化新形成的立构中心的亲核试剂(例如通过SN2型机制)反应并引入氨基(NR₂)取代卤素基团(如，氯)，形成通式(D)的化合物(其中R可以是，如烷基，Si(烷基)₃，芳基，或芳烷基)。

通式(D)的化合物可以另外与能够将NR₂基团转化为NH₂，或其盐的试剂反应，以形成基本能够与另外的片段通过胺偶联的F1片段。将NR₂基团转化为NH₂的合适的试剂可以是质子酸，例如HCl，例如当R是甲硅烷基(如，三甲基甲硅烷基)时。

F2片段

本发明的化合物的中间部分可以由片段F2表示，该片段通过用于形成F2-F1中间产物的肽键而连接到片段F1。通过肽键或酰胺键偶联化合物的方法是本领域公知的，并描述于例如肽：分析，合成，生物学(The Peptides：Analysis，Synthesis，Biology)，第1卷，Gross等编，Academic出版社，1979。F2片段的例子以通式(E)(P_g是氨基保护基团，Y和m在此处定义)提供。另外，使用Boc或其他的氨基保护基团保护氨基酸的氨基是本领域公知的。

通式(E)的化合物是可商购或通过本领域技术人员已知的常规方法制备的氨基酸或氨基酸衍生物。

F3片段

另一个片段(F3)可以通过形成肽键而连接到F2-F1中间产物的F2片段。通过肽键或酰胺键偶联化合物的方法是本领域公知的，并描述于例如肽：分析，合成，生物学(The Peptides：Analysis，Synthesis，Biology)，第1卷，Gross等编，Academic出版社，1979。F2片段的例子提供于通式(F)(R²是H，Z和n此处定义)。

其他偶联方法也是本领域已知的并且也是合适的。F3片段可以商购得到或用本领域技术人员已知的方法制备。

根据任何本领域已知的合适的方法监测反应。例如，可以通过光谱方法，例如核磁共振光谱(如，¹H或¹³C)红外光谱，分光光度测定(如，UV-可见)，或质谱，或通过色谱例如高压液相色谱(HPLC)或薄层层析而监测产物形成。

本发明的化合物可以根据本领域描述的制备氨基硼酸，其酯和相关化合物的方法制备，例如U.S.专利4,537,773和5,614,649，其各自在此以全文引为参考。

包含硼酸酯，例如蒎烷二醇酯的本发明的化合物可以被任何合适的方法水解以制备对应的硼酸(-B(OH)₂)衍生物。水解条件包括将硼酸酯与过量酸，例如质子酸如HCl反应。

相反，硼酸可以通过将酸化合物(-B(OH)₂)与醇例如二醇接触充足的时间以产生对应的酯而被酯化。酯化条件可以是酸或碱催化的。

本发明将通过具体实施例更详细地描述。下面的实施例被提供用于示例的目的，而不是用于以任何方式限制本发明。本领域技术人员将容易地认识到可以改变或调整多种非关键的参数以产生基本相同的结果。

实施例

实施例1

(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基胺盐酸盐的合成

步骤1：2-(2-甲基丙基)-(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borole

(+)-蒎烷二醇(23.9g，0.140mol)和2-甲基丙基硼酸(15g，0.147mol)的二乙基醚(300ml)的混合物在室温搅拌24小时。混合物对无水硫酸钠干燥并通过柱层析纯化(硅胶230-400目)，用己烷∶乙酸乙酯90∶10混合物洗脱。获得清澈油状产物(32.6g，收率94％)。

¹HNMR(DMSO-d₆)：4.28(1H，dd，J＝8.8Hz，2.0)；2.30(1H，m)；2.18(1H，m)；1.96(1H，t，J＝5.3)；1.86(1H，m)；1.78(1H，set，J＝6.8)；1.68(1H，m)；1.30(3H，s)；1.25(3H，s)；1.01(1H，d)；0.9(6H，d，J＝6.6)；0.81(3H，s)；0.69(2H，m).

步骤2：2-[(1S)-1-氯-3-甲基丁基]-(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borole

通过在-50℃向二异丙基胺(35.7ml，0.254mol)的无水四氢呋喃(60ml)溶液添加10.0M丁基锂的己烷溶液(25.4ml，0.254mol)，并使温度上升到-30℃而制备二异丙基氨基化锂溶液。通过导管将溶液转移到步骤1的2-(2-甲基丙基)-(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borole(50g，0.212mol)和CH₂Cl₂(50ml，0.848mol)的无水四氢呋喃(700ml)的溶液中，同时保持温度低于-70℃。然后在30分钟内添加1.0M干燥氯化锌的二乙基醚(339ml，0.339mol)溶液同时保持内部温度低于-70℃。反应混合物-78℃搅拌3小时，然后加温到室温。通过旋转蒸发除去溶剂后，在石油醚(1000ml)和10％氯化铵水溶液(800ml)之间分配残余物。进一步用石油醚(300ml)提取水相。组合的有机相对无水硫酸钠干燥并浓缩。获得含有大约9％mol/mol起始物质(¹H-NMR)的褐色油状产物(59.0g，收率98％)，并且无须进一步纯化而用于后续步骤。

¹HNMR(DMSO-d₆)：4.33(1H，dd，J＝1.5Hz，8.6)；2.58(1H，m)；2.29(1H，m)；2.18(1H，m)；1.95(1H，t，J＝5.9)；1.85(1H，m)；1.9-1.55(3H，m)；1.31(3H，s)；1.24(3H，s)；1.17(1H，m)；1.01(1H，d，J＝10.6)；0.85(3H，d，J＝6.6)，0.83(3H，d，J＝6.6)；0.80(3H，s)；0.08(18H，s).

步骤3：N，N-双(三甲基甲硅烷基)-(1R)-1-(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基胺

向步骤2的粗制2-[(1S)-1-氯-3-甲基丁基]-(3As，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borole(59.0g，纯度91％，0.189mol)的四氢呋喃(580ml)溶液中30分钟内添加1.0M双(三甲基甲硅烷基)氨基化锂的四氢呋喃(189ml，0.189mol)溶液，同时保持冷却在-78℃。反应混合物缓慢升温到室温过夜。通过旋转蒸发除去溶剂，用无水己烷(800ml)吸收残余物。得到的悬液在室温搅拌2小时，然后通过塞里饼(celite cake)过滤而除去固体，用无水己烷(3×100ml)洗涤该饼。滤出物被浓缩以实际上可观的收率产生棕色油状的纯度合用的产物(79g)。该产物无需进一步纯化步骤而用于下一步。

¹H NMR(DMSO-d₆)：4.33(1H，dd，J＝1.5Hz，8.6)；2.58(1H，m)；2.29(1H，m)；2.18(1H，m)；1.95(1H，t，J＝5.9)；1.85(1H，m)；1.9-1.55(3H，m)；1.31(3H，s)；1.24(3H，s)；1.17(1H，m)；1.01(1H，d，J＝10.6)；0.85(3H，d，J＝6.6)，0.83(3H，d，J＝6.6)；0.80(3H，s)；0.08(18H，s)。

步骤4：(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基胺盐酸盐

向步骤3的粗N，N-双(三甲基甲硅烷基)-(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基胺(79g，0.193mol)的二噁烷(100ml)和二乙基醚(200ml)的混合物的溶液中添加4N盐酸的二噁烷(193ml，0.772mol)溶液，同时冷却在0℃。然后在室温搅拌该混合物4小时并浓缩。用无水己烷(500ml)吸收残余物并添加2M盐酸的二乙基醚(48ml，0.096mol)溶液。混合物在0℃搅拌1小时，然后浓缩。用无水己烷(500ml)吸收残余物，得到的悬液在室温搅拌过夜。过滤收集固体并真空干燥得到38.1g产物(收率66％)。从母液再次获得产物(4.13g，收率7％)。

¹HNMR(DMSO-d₆)：7.85(3H，br)；4.45(1H，dd，J＝9.2Hz)；2.78(1H，m)；2.34(1H，m)；2.21(1H，m)；2.01(1H，t，J＝5.3)；1.89(1H，m)；1.82-1.65(2H，m)；1.49(1H，m)；1.38(3H，s)；1.27(3H，s)；1.12(1H，d，J＝1.12)；0.87(6H，d，J＝6.6)；0.83(3H，s)。

实施例2

N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基-氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯

方法A：HOAt/HATU

向BocNH(NO₂)ArgOH(15.7g，49.3mmol)的无水DMF(100ml)溶液中添加HATU(O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基uronium六氟磷酸盐；18.7g，49.3mmol)和HOAt(1-羟基-7-氮杂苯并三唑；6.71g，49.3mmol)。混合物被冷却到0℃并添加N-甲基吗啉(13.6ml，0.123mol)。10分钟后，添加实施例1的(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基胺盐酸盐(12.4g，41.1mmol)。除去冷却浴并将混合物在室温搅拌4.5小时。混合物用乙酸乙酯(800ml)稀释，用2％柠檬酸溶液(2×150ml)，2％NaHCO₃溶液(2×150ml)和2％NaCl溶液(2×150ml)洗涤。进一步用乙酸乙酯(150ml)抽提水相。组合的有机相对硫酸钠干燥并浓缩。得到的油状残余物重溶解于乙酸乙酯(500ml)并用冷水(200ml)洗涤该溶液。进一步用乙酸乙酯(150ml)抽提水相。组合的有机相对硫酸钠干燥并浓缩。残余物溶解于二乙基醚(100ml)并且将溶液在搅动下缓慢添加到己烷(600ml)中。过滤收集白色固体(43.4g)并经柱层析纯化，开始用50∶50己烷∶乙酸乙酯混合物然后用乙酸乙酯洗脱。浓缩含有产物的级分，残余物溶解在二乙基醚(100ml)中并且在搅拌下将得到的溶液缓慢添加到己烷(600ml)中。过滤收集白色固体(15.2g，收率66％)。

方法B：IBCF

向BocNH(NO₂)ArgOH(5.82g，18.2mmol)的无水二氯甲烷(100ml)悬液中添加N-甲基吗啉(2.0ml，18.2mmol)。混合物被冷却到-15℃，然后加入异丁基氯甲酸酯(2.37ml，18.2mmol)。混合物在-15℃搅拌10分钟然后加入实施例1获得的(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基胺盐酸盐(5.0g，16.6mmol)，随后立即加入N-甲基吗啉(2.0ml，18.2mmol)。反应混合物在-15℃搅拌1.5小时，然后加温到室温并在乙酸乙酯(150ml)，水(150ml)和0.1N盐酸(10ml)之间分配。用NaHCO₃的饱和溶液洗涤有机相，对无水硫酸钠干燥并浓缩。通过从乙酸乙酯中结晶纯化油状残余物提供3批纯度适合的产物(5.03g，收率54％)。

¹HNMR(DMSO-d₆)：8.80(1H，br)；8.50(1H，br)，7.87(2H，br)；7.01(1H，d，J＝7.9)，4.07(1H，dd，J＝7.9)；4.0(1H，m)；3.12(2H，m)；2.55(1H，m)；2.2(1H，m)；2.01(1H，m)；1.83(1H，t，J＝5.1)；1.78(1H，m)；1.74-1.44(7H，m)；1.38(9H，s)；1.33(1H，d，J＝10.3)；1.24(5H，s)；1.22(3H，s)；0.84(6H，d，J＝6.6)；0.81(3H，s)

实施例3

N-[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]-(2S)-2-氨基-5-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]戊酰胺盐酸盐

方法A

将4N盐酸的二噁烷(15ml)溶液添加到实施例2的N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(4.04g，7.06mmol)的二噁烷(40ml)和二乙基醚(7ml)混合物的溶液中，同时保持冷却在0℃。反应混合物被加温到室温，并继续搅拌4小时。通过旋转蒸发除去溶剂，残余物用二乙基醚(50ml)处理，混合物在室温搅拌3天。过滤收集得到的固体，产生3.18g纯产物(收率90％)。

方法B

实施例2的N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(3g，5.3mmol)被溶解于Et₂O(40mL)并在0℃、氮氛下滴加大约10％HCl的Et₂O(20mL)溶液。反应混合物被加温到室温并再搅拌5小时。

倾出溶剂，用Et₂O(20mL)洗涤过两次的残余物被真空干燥产生白色粉末状的标题化合物(2.43g，收率91％)。

¹HNMR(DMSO-d₆)：8.56(2H，br)；8.22(3H，br)；7.97(2H，br)；4.28(1H，dd，J＝8.6Hz，2.01)；3.77(1H，m)；3.04(1H，m)；2.28(1H，m)；2.11(2H，m)，1.92(1H，t，J＝5.5)；1.83(1H，m)；1.79-1.59(4H，m)；1.59-1.37(3H，m)；1.31(4H，s)；1.24(3H，s)；1.19(1H，d，J＝10.4)；0.88(3H，d，J＝6.0)；0.86(3H，d，J＝6.0)；0.81(3H，s)。

实施例4

[(1R)-1-[[(2S)-2-氨基-5-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]-1-氧戊基]氨基]-3-甲基丁基]硼酸盐酸盐

实施例2的N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(3.1g，5.48mmol)在0℃、氮氛下被小心溶解于20mL 37％HCl；所得混合物被加温到室温并搅拌过夜。用Et₂O洗涤反应混合物直至完全除去蒎烷二醇；浓缩水溶液至干燥并真空干燥产生1.82克(4.93mmol，收率90％)标题化合物，无须进一步纯化即可使用。

¹H-NMR：(DMSO+D₂O+TFA)：3.78(m，1H)；3.19(m，2H)；3.09(m，1H)；1.71(m，2H)；1.70-1.48(m，3H)；1.49-1.23(m，2H)；0.89(d，J＝5.8Hz，3H)；0.88(d，J＝5.8Hz，3H)。

实施例5

10-(1，3-二氧-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-癸酸

步骤1：2-十一碳-10-烯基-1，3-二氧-1，3-二氢异吲哚

向10-十一碳烯-1-醇(4.23g，24.8mmol)，苯邻二甲酰亚胺(3.65g，24.8mmol)和三苯基膦(6.51g，24.8mmol)的无水四氢呋喃(30ml)混合物中，缓慢添加DEAD(3.9ml，24.8mmol)的无水四氢呋喃(10ml)溶液，同时保持温度低于8-10℃。两小时后再添加DEAD(1.0ml，6.37mmol)和三苯基膦(1.3g，4.96mmol)，混合物在室温搅拌过夜。浓缩反应混合物并用二乙基醚(50ml)研碎残余物。过滤除去固体并用二乙基醚(2×50ml)洗涤。浓缩组合的滤出物并用己烷(50ml)在40℃研碎残余物。过滤除去所得固体并用己烷(2×50ml)洗涤。浓缩组合的滤出物并通过柱层析纯化用10∶2己烷∶乙酸乙酯混合物洗脱。获得低熔点白色固体产物(4.9g，收率66％)。

M.p.25-30℃。¹HNMR(DMSO-d₆)7.83(4H，m)；5.76(1H，m)；4.96(1H，dq，J＝17.2，1.6Hz)；4.90(1H，ddt，J＝10.2，2.2，1.1)；3.54(2H，t，J＝7.1)，1.97(2H，q，J＝6.7)；1.56(2H，m)；1.35-1.15(14H，m)。

步骤2：10-(1，3-二氧-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-癸酸。

步骤1的2-十一碳-10-烯基-1，3-二氧-1，3-二氢异吲哚(2g，6.68mmol)和

336(0.2g)的己烷(20ml)和乙酸(6ml)混合物的溶液被滴加到高锰酸钾(2.76g，20mmol)的水(28ml)溶液中，同时保持冷却在0℃。反应混合物在室温搅拌7小时，然后添加亚硫酸氢钠水溶液直至紫色消失。然后用乙酸乙酯抽提混合物，将有机相对硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过硅胶柱层析纯化用2∶1己烷∶乙酸乙酯混合物洗脱。获得白色固体产物(1.29g，收率61％)。M.p.58-60℃。

¹HNMR(DMSO-d₆)11.95(1H，br)；7.85(4H，m)；3.55(2H，t，J＝7.2Hz)；2.17(2H，t，J＝7.2Hz)；1.7-1.4(4H，m)；1.22(10H，m)。

实施例6

6-(乙基磺酰氨基)己酸

乙磺酰氯(3.9ml，41.1mmol)的二噁烷(10ml)溶液被添加到6-氨基己酸(2g，15.2mmol)的1N NaOH(56ml)和二噁烷(10ml)溶液中，同时在0-5℃搅拌。通过添加25％氢氧化钠溶液将反应混合物的pH调整为8-9。混合物被加温到室温并搅拌30分钟。再添加25％NaOH溶液以调整pH至大约11。在3.5h后添加1N盐酸(15ml)和乙酸乙酯(60ml)。将有机相对硫酸钠干燥并浓缩。残余物用二乙基醚(5ml)和己烷(15ml)的混合物研碎。过滤收集固体并干燥产生1.3g标题化合物(收率40％)。

¹HNMR(DMSO-d₆)：11.9(1H，s)；6.97(1H，t，J＝5.7Hz)；2.97(2H，q，J＝7.1)；2.88(2H，q，J＝6.6)；2.2(2H，t，J＝7.3)；1.47(4H，m)；1.29(2H，m)；1.18(3H，t，J＝7.3)。

实施例7

8-(乙基磺酰氨基)辛酸

乙磺酰氯(1.5ml，15.7mmol)的二噁烷(5ml)溶液被添加到8-氨基辛酸(1g，6.28mmol)的1N NaOH(22ml)和二噁烷(5ml)溶液中，同时在0-5℃搅拌。混合物被加温到室温并搅拌3.5分钟。在该阶段中，每隔1小时通过添加25％氢氧化钠溶液将混合物的pH调整为7-8。该反应混合物用二乙基醚(30ml)洗涤。通过添加1N盐酸将pH调整为1-2并用乙酸乙酯(70ml)抽提混合物。将有机相对硫酸钠干燥并浓缩。残余物用二乙基醚的混合物研碎。过滤收集固体并真空干燥产生600mg标题化合物(收率38％)。

¹HNMR(DMSO-d₆)：11.9(1H，s)；6.96(1H，t，J＝6Hz)；2.96(2H，q，J＝7.1)；2.88(2H，q，J＝6.6)；2.2(2H，t，J＝7.3)；1.45(4H，m)；1.26(6H，m)；1.18(3H，t，J＝7.3)。

实施例10

N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-10-(1，3-二氧-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-癸酰胺

IBCF方法偶联

向根据实施例5制备的10-(1，3-二氧-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-癸酸(353mg，1.11mmol)的无水二氯甲烷(10ml)溶液中添加N-甲基吗啉(122μl，1.11mmol)。混合物被冷却到-15℃，然后缓慢加入异丁基氯甲酸酯(144μl，1.11mmol)。15分钟后加入实施例3的N-[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]-(2S)-2-氨基-5-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]戊酰胺盐酸盐(508mg，1.01mmol)并再加入N-甲基吗啉(122μl，1.11mmol)。在-15-10℃搅拌反应混合物4小时，然后浓缩到小体积并在乙酸乙酯(20ml)和水(10ml)之间分配。进一步用乙酸乙酯(10ml)抽提水相。组合的有机相对硫酸钠干燥并浓缩。用乙酸乙酯(3ml)吸收残余物并将溶液滴加到己烷(120ml)中，同时室温下搅拌。倾出液体而收集固体并真空干燥(730mg，94％)。

¹HNMR(DMSO-d₆)：8.81(1H，d，J＝2.7Hz)；8.52(1H，br)；7.98(1H，d，J＝8.05)；7.88(2H，br)；7.85(4H，m)；4.34(1H，m)；4.06(1H，dd，J＝7.1)；3.56(2H，t，J＝7.14)；3.14(2H，m)；2.55(1H，m)；2.19(1H，m)；2.10(2H，t，J＝7.14)；2.0(1H，m)；1.82(1H，t，J＝5.7)；1.78(1H，m)；1.73-1.35(10H，m)；1.31(1H，d，J＝9.9)；1.24(19H，m)；0.84(9H，m)；0.79(3H，s)。

实施例11

N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-12-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基氨基]十二酰胺

手性

根据上述实施例10的方法，从12-叔-丁氧基羰基氨基-十二酸和实施例3的产物使用合适的试剂和反应条件制备标题化合物。分析数据：

¹HNMR(DMSO-d6)8.81(1H，d，J＝2.4)；8.52(1H，br)；7.98(1H，d，J＝8.05)；7.85(2H，v.br)；6.73(1H，t，J＝5.3)；4.33(1H，m)；4.07(1H，d，J＝8.4)；3.14(2H，m)；2.88(2H，q，J＝6.6)；2.56(1H，m)；2.19(1H，m)；2.10(2H，t，J＝7.1)；2.01(1H，m)；1.83(1H，t，J＝5.7)；1.78(1H，m)；1.73-1.41(8H，m)；1.36(9H，s)；1.33-1.15(25H，m)；0.84(6H，d，J＝6.5)；0.80(3H，s)。

实施例12

N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]4-(甲氧基羰基)庚酰胺

手性

根据上述实施例10的方法，从辛二酸单甲基酯和实施例3的产物使用合适的试剂和反应条件制备标题化合物。分析数据：

¹H-NMR(DMSO-d6)：8.80(1H，br s)；8.51(1H，br)；7.98(1H，d，J＝8.0Hz)；8.3-7.5(2H，br)；4.32(1H，m)；4.06(1H，br d，J＝8.4)；3.12(2H，m)；2.55(1H，m)；2.26(2H，t，J＝7.3)；2.18(1H，m)；2.09(2H，t，J＝7.1)；2.01(1H，m)；1.85-1.2(19H，m)；1.23(3H，s)；1.21(3H，s)；0.83(6H，d，J＝6.6)；0.79(3H，s)。

实施例13

N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基-11-氰基十一酰胺

手性

PS-碳二亚胺(N-环己基碳二亚胺-N′-丙氧基甲基聚苯乙烯，769mg，1mmol，载荷1.31mmol/g)和HOAt(1-羟基-7-氮杂苯并三唑，115mg，0.85mmol)被添加到11-氰基十一酸(115mg，0.54mmol)的二氯甲烷(DCM)(9mL)溶液中。搅拌10分钟后添加实施例3的N-[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]-(2S)-2-氨基-5-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]戊酰胺盐酸盐(251mg，0.50mmol)和DIPEA(0.128ml，0.75mmol)。悬液在室温摇动过夜然后滤去PS碳二亚胺并用DCM洗涤数次(4×6mL)。将有机相通过用饱和NaHCO₃预处理的用于液液抽提的VARIANCHEM ELUT柱体，最后用DCM(15mL)洗涤。蒸发溶剂，将粗反应物用常相ISOLUTE SPE-SI柱(DCM9，MeOH 1)纯化以产生200mg所需的化合物(收率61％)。NMR(CDCl₃)：7.53(s，br，2H)；7.36(d，br，J＝4.7Hz，1H)；6.88(d，J＝8.2Hz，1H)；4.46(m，1H)；4.15(dd，J＝8.5，1.9Hz，1H)；3.19(m，2H)；2.93(m，1H)；2.23(t，J＝7.2Hz，2H)；2.21(m，1H)；2.09(t，J＝7.5，2H)；2.04(m，1H)；1.88(t，J＝5.4Hz，1H)；1.77(m，1H)；1.69(m，1H)；1.64-1.43(m，9H)；1.40-1.26(m，4H)；1.26(s，3H)；1.24-1.12(m，16H)；0.80(d，J＝6.6，3H)；0.79(d，J＝6.6，3H)；0.73(s，3H)。LC-MS 659.7，MH+.ESI POS；AQA；喷雾器4kV/撇乳器：20V/探针250℃。

实施例14

N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-9-氰基壬酰胺

手性

根据上述实施例13的方法，从9-氰基壬酸和实施例3的产物使用合适的试剂和反应条件制备标题化合物。分析数据：MS：MH+632.5

实施例15

N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基-6-(乙酰氨基)己酰胺

手性

根据上述实施例13的方法，从6-乙酰氨基-己酸和实施例3的产物使用合适的试剂和反应条件制备标题化合物。分析数据：MS：[MH]+622.3

实施例16

N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-12-(1，3-二氧-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-十二酰胺

手性

根据上述实施例13的方法，从11-(1，3-二氧-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-十一酸和实施例3的产物使用合适的试剂和反应条件制备标题化合物。分析数据：MS：[MH]+794.42

实施例17

N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-6-(乙磺酰氨基)己酰胺

向实施例6的6-(乙基磺酰氨基)己酸(90mg，0.40mmol，1.2当量)的无水DMF(10ml)溶液中，添加TBTU((N，N，N’，N’-四甲基-O-(苯并三唑-1-基)uronium四氟硼酸盐；130mg，0.40mmol，1.2当量)。混合物用冰浴冷却到0-5℃并添加NMM(0.12ml，1.08mmol，2.7当量)。数分钟后，添加实施例3的N-[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]-(2S)-2-氨基-5-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]-氨基]戊酰胺盐酸盐(170mg，0.33mmol，1当量)。混合物在室温搅拌2小时，注入水(150ml)中并用乙酸乙酯(2×50ml)抽提。用柠檬酸2％(20ml)，碳酸氢钠2％(20ml)，和NaCl 2％(20ml)溶液洗涤有机相，对无水硫酸钠干燥，并减压蒸发。通过柱层析纯化残余物(硅胶，洗脱剂乙酸乙酯)产生30mg无定形固体(收率13％)。

分析数据：¹H-NMR(DMSO-d₆)：8.83(1H，d，J＝2.7Hz)；8.51(1H，br)；8.00(1H，d，J＝8.0Hz)；8.3-7.5(2H，br)；6.94(1H，t，J＝5.8)：4.32(1H，m)；4.06(1H，dd，J＝1.8，8.6)；3.13(2H，m)；2.95(2H，q，J＝7.3)；2.87(2H，q，J＝6.7)；2.55(1H，m)；2.19(1H，m)；2.10(2H，t，J＝7.5)；2.00(1H，m)；1.85-1.1(17H，m)；1.24(3H，s)；1.21(3H，s)；1.16(3H，t，J＝7.5)；0.83(6H，d，J＝6.6)；0.79(3H，s)。

实施例18

N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-6-苯磺酰氨基己酰胺

根据上述实施例17的方法，从8-苯磺酰氨基-己酸和实施例3的产物使用合适的试剂和反应条件制备标题化合物。分析数据：¹H-NMR(DMSO-d₆)：8.83(1H，d，J＝2.8Hz)；8.51(1H，br)；7.97(1H，d，J＝7.8Hz)；8.2-7.6(2H，br)；7.77(2H，m)；7.65-7.5(4H，m)；4.31(1H，m)；4.05(1H，dd，J＝1.8，8.6)；3.12(2H，m)；2.69(2H，q，J＝7.0)；2.54(1H，m)；2.20(1H，m)；2.05(2H，t，J＝7.5)；2.01(1H，m)；1.85-1.1(21H，m)；1.22(3H，s)；1.21(3H，s)；0.82(6H，d，J＝6.6)；0.79(3H，s).

实施例19

N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基-8-(乙磺酰氨基)辛酰胺

根据上述实施例17的方法，从8-乙磺酰氨基-辛酸(实施例7)和实施例3的产物使用合适的试剂和反应条件制备标题化合物。分析数据：

¹H-NMR(DMSOd₆)：8.81(1H，br s)；8.51(1H，br)；7.98(1H，d，J＝7.8Hz)；8.3-7.5(2H，br)；6.93(1H，t，J＝5.7)：4.32(1H，m)；4.06(1H，dd，J＝1.8，8.6)；3.13(2H，m)；2.95(2H，q，J＝7.3)；2.87(2H，q，J＝6.7)；2.55(1H，m)；2.19(1H，m)；2.10(2H，t，J＝7.0)；2.00(1H，m)；1.85-1.1(17H，m)；1.23(3H，s)；1.21(3H，s)；1.16(3H，t，J＝7.3)；0.83(6H，d，J＝6.6)；0.79(3H，s)。

实施例20

[(1R)-1-[[(2S)-5-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]-2-[(11-氰十一烷酰)氨基]-1-氧戊基]氨基]-3-甲基丁基]-硼酸

手性

向DMAP(4-二甲基氨基吡啶，22.7mg，0.185mmol)和11-氰基十一酸(97.2mg，0.46mmol)的二氯甲烷(5.2ml)溶液中加入PS-HOBT(1-羟基苯并三唑-6-亚磺酰氨基甲基聚苯乙烯，277mg，0.31mmol，载荷1.12mmol/g)。混合物在室温搅拌10分钟，然后加入二异丙基碳二亚胺(0.218ml，1.39mmol)的DCM(二氯甲烷，0.6ml)溶液。悬液在室温摇动4小时然后在氮氛下过滤树脂并用DMF(3×5ml)，DCM(3×5ml)，DMF(3×5ml)和THF(3×5ml)洗涤数次。充分干燥的树脂悬浮于实施例4的[(1R)-1-[[(2S)-2-氨基-5-[[亚氨基(硝基氨基)-甲基]氨基]-1-氧戊基]氨基]-3-甲基丁基]硼酸盐酸盐(55.2mg，0.15mmol)和DIPEA(N，N-二异丙基乙基胺，0.051ml，0.293mmol)的DCM(4ml)和DMF(0.6ml)溶液中。反应混合物在室温摇动过夜。过滤掉树脂并用DMF(10ml)和DCM(2ml)洗涤，溶剂被浓缩至于燥。在ISOLUTE SPE-DIOL柱体上，使用从95/5到50/50的DCM/甲醇混合物洗脱而纯化残余物。收集含有产物的级分并浓缩。通过在2g ISOLUTE SPE-SI常相柱体上使用从100/0到50/50的DCM/甲醇混合物洗脱而最终纯化(25mg，收率35％)。

分析数据：MS：[M-18]H+508.5

实施例21

[(1R)-1-[[(2S)-5-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]-2-[(9-氰基壬酰基)氨基]-1-氧戊基]氨基]-3-甲基丁基]硼酸

手性

根据上述实施例20的方法，从11-氰基-壬酸和实施例4的产物使用合适的试剂和反应条件制备标题化合物。分析数据：MS：[M-18]H+480.1

实施例22

[(1R)-1-[[(2S)-5-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]-2-[[7-(甲氧基羰基)庚酰基]氨基]-1-氧戊基]氨基]-3-甲基丁基]硼酸

手性

实施例12的方法制备的N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-4-(甲氧基羰基)庚酰胺(300mg，0.47mmol)，2-甲基丙基硼酸(96mg，0.94mmol)和4N盐酸二噁烷溶液(120μl)的甲醇∶己烷40∶60非均相混合物(10ml)的混合物在室温搅拌2小时。添加己烷(5ml)，混合物搅拌一段时间，然后除去己烷层。加入新鲜己烷(5ml)，4N盐酸二噁烷溶液(120μl)和2-甲基丙基硼酸(96mg，0.94mmol)，并将混合物在室温搅拌2小时。除去己烷层，并将甲醇相用己烷(2×5ml)洗涤。浓缩甲醇相获得的残余物通过硅胶柱层析纯化，使用40∶40∶20丙酮∶甲醇∶己烷混合物洗脱。产物重新溶解于乙酸乙酯(200ml)，用水洗涤有机相(2×10ml)，对硫酸钠干燥并浓缩。残余物溶解于最小量的甲醇中，将溶液滤过棉塞并浓缩。用二乙基醚研碎残余物。倾出液体收集固体，然后用乙酸乙酯(15ml)研碎。倾出液体收集固体并真空干燥产生白色固体产物(30mg，产率13％)。

分析数据：¹HNMR(DMSO-d₆)：8.60(1H，d，J＝8.4Hz)；8.50(1H，br)；8.06(1H，d，J＝7.9)；7.92(2H，br)；4.36(1H，m)；3.58(3H，s)；3.13(2H，m)；2.55(1H，m)；2.28(2H，t，J＝7.5)；2.12(2H，m)；1.69(1H，m)；1.49(7H，m)；1.24(7H，m)；0.81(6H，m)。

元素分析计算值：C47.82％ H7.83％ N16.73％

实验值：C48.13％ H7.50％ N16.34％

实施例23

[(1R)-1-[[(2S)-5-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]-2-[(10-(1，3-二氢-1，3-二氧-2H-异吲哚-2-基)-1-氧癸基)-]氨基]-1-氧戊基]氨基]-3-甲基丁基]硼酸

手性

根据上述实施例22的方法，从实施例10的产物使用合适的试剂和反应条件制备标题化合物。

分析数据：¹H-NMR(MeOH-d₄)：7.82(4H，m)；4.52(1H，m)；3.66(2H，t，J＝7.3)；3.27(2H，m)；2.75(1H，m)；2.24(2H，t，J＝7.3Hz)；1.9-1.2(20H，m)；0.91(6H，d，J＝6.6).

实施例24

[(1R)-1-[[(2S)-5-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]-2-[[6-(乙酰氨基)己酰基]氨基]-1-氧戊基]氨基]-3-甲基丁基]硼酸

手性

实施例15的N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氢-3a，5，5-三甲基-4，6-亚甲基-1，3，2-苯并二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]-羰基]-4-[[亚氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-6-(乙酰氨基)己酰胺(48mg，0.077mmol)溶解于Et₂O(2ml)，并在0℃小心加入37％HCl(1ml)。反应混合物被加温到室温并摇动过夜。混合物被浓缩至干燥，将残余物溶解于MeOH(1ml)并从ISOLUTE PSA柱体上用MeOH(10ml)洗脱。蒸发溶剂，并使用从90/10到50/50的DCM/甲醇混合物从500mg ISOLUTEPSA柱体上洗脱而纯化粗产物以产生标题化合物(19.4mg，收率52％)。

分析数据：MS：[M-18]H+470.2

实用性

化合物活性

本发明的化合物可以抑制蛋白酶体活性。下表F-1提供与数个本发明示例化合物例如，抑制蛋白酶体活性的能力有关的数据。

方法和组合物

本发明的化合物可以抑制蛋白酶体的活性，导致抑制或阻断多种与蛋白酶体直接或间接相关的细胞内功能。例如，蛋白酶体抑制剂可以调控，例如诱导细胞内的凋亡。在一些实施方案中，此处的化合物可以通过诱导凋亡而杀死肿瘤细胞。因此，本发明化合物可以用于治疗癌症，肿瘤或其他增殖失调。

在另外的实施方案中，通过本发明化合物抑制蛋白酶体功能可以抑制转录因子NF-κB的活化或加工。该蛋白在涉及免疫和炎症反应以及细胞存活的基因的调控中发挥作用。蛋白酶体功能的抑制还抑制了泛素/蛋白水解途径。该途径催化选择性降解高度异常的蛋白和短寿命调控蛋白等。在一些实施方案中，本发明的化合物可以防止通常被泛素依赖的途径降解的p53的降解。泛素/蛋白水解途径还涉及将内吞的细胞或病毒抗原加工成为结合到MHC-I分子的抗原性肽。因此，本发明的化合物可以用于降低许多细胞类型的胞质ATP-泛素依赖的蛋白水解系统的活性。

因此，这些化合物的用处包括治疗，例如治疗与蛋白酶体有关的各种疾病或失调。方法包括对哺乳动物，例如患有与蛋白酶体有关的疾病或失调的人给药治疗有效量的本发明化合物或其组合物。“治疗有效量”指足以防止，减轻或改善任何现象，例如本领域已知与疾病或失调相关的起因或症状的量。

可治疗的疾病或失调(异常身体状况)可以与正常或异常的蛋白酶体活性有关，例如凋亡的调控。多种与蛋白酶体有关的或通过诱导凋亡而合意地治疗的疾病或失调是已知的，并包括例如，各种癌症和肿瘤，包括与皮肤癌，前列腺癌，结肠直肠癌，胰腺癌，肾癌，卵巢癌，乳腺癌，肝癌，舌癌，肺癌，和平滑肌组织癌相关的那些疾病。优选的可以通过蛋白酶体抑制剂而治疗的肿瘤包括但不限于血液肿瘤，例如白血病，淋巴瘤，非-Hodgkin淋巴瘤，骨髓瘤，和多发性骨髓瘤，以及实体瘤例如结肠直肠瘤，乳腺瘤，前列腺瘤，肺瘤和胰腺瘤。为引发治疗效果，蛋白酶体抑制剂可以作为单个试剂或与一种或多种抗肿瘤或抗癌试剂和/或放射疗法组合给药到病人。其他可以有利地与蛋白酶体抑制剂伴随给药的抗肿瘤或抗癌剂的例子包括但不限于，阿霉素，道诺霉素，甲氨蝶呤，长春新碱，6-巯基嘌呤，胞嘧啶阿拉伯糖苷，环磷酰胺，5-FU，六甲基三聚氰胺，卡铂，顺铂，伊达比星，紫杉醇，紫杉萜，喜树碱，依立替康，吉西他滨，L-PAM，BCNU和VP-16。体外测定凋亡的方法是本领域公知的而试剂盒可以商业购得。参见例如来自Promega公司，Madison WI，USA的Apo-ONE^TM均相Caspase-3/7分析(技术公告号295，2/02修改，Promega公司)。

与蛋白酶体相关的其他疾病或失调包括在萎缩的肌肉中发生的加速或增强的蛋白水解，例如通常与包括泛素的需非溶酶体ATP过程的活化有关。加速或增强的蛋白水解可以是众多起因中任何一种的结果，原因包括脓血症，烧伤，外伤，癌症，感染，神经变性疾病，例如肌肉萎缩症，酸毒症或脊髓/神经损伤，甾醇激素的使用，发烧，压力和饥饿。本发明的化合物可以通过本领域已知的任何方法，例如通过测量修饰的氨基酸3-甲基组氨酸的尿排泄(参见，如，Young等，FederationProc.，1978，37，229)，而检测对肌肉损耗的抑制作用。

本发明的化合物还可进一步用于治疗或防止与NF-κB活性有关的疾病或失调，包括例如，人免疫缺陷病毒(HIV)感染和来自例如，移植排斥，关节炎，感染，炎性肠炎，哮喘，骨质疏松，骨关节炎，牛皮癣，再狭窄，和自身免疫疾病的炎性失调。因此，防止患有上述病的病人中NF-κB的活化的方法将是治疗上有利的。NF-κB活性的抑制可以通过使用例如Palombella等，Cell，1994，78，773描述的DNA结合分析来测量。

本领域技术人员使用标准诊断技术容易地鉴定易于或怀疑患有这种疾病或失调的个体。

实施例A

20S人红细胞蛋白酶体(HEP)胰凝乳蛋白酶样活性的分析

根据以下方法分析本发明化合物的蛋白酶体胰凝乳蛋白酶样活性。

在96-孔量滴定中，以0.2μg/mL(大约0.6nM催化位点)的0.04％SDS 20mM Tris缓冲液覆盖购自Immatics Biotechnologies Inc.，Tubingen，德国的20S人红细胞蛋白酶体(HEP)。购自Sigma Inc.，St.Louis，MO，USA的荧光测定底物Suc-LLVY-AMC(琥珀酰-Leu-Leu-Val-Tyr-7-氨基-4-甲基香豆素)从10mM的二甲亚砜储存液添加到终浓度为100μM。反应体积为每孔100μL。在37℃孵育不同时间后，在Perkin Elmer HTS 7000Plus微量滴定板读板机上以370nM激发波长和465nM发射波长测定游离AMC(氨基甲基香豆素)的浓度。在底物水解随时间线性增加和荧光信号的改变与游离AMC的浓度成比例的条件下测定蛋白酶体活性。

实施例B

α胰凝乳蛋白酶活性的分析

在96-孔微量滴定板中，以10ng/mL(大约2pM催化位点)的0.5MNaCl 50mM Hepes缓冲液覆盖购自Sigma Inc.的牛α-胰凝乳蛋白酶。购自Sigma Inc.，St.Louis，MO，USA的荧光测定底物Suc-AAPF-AMC(琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe-7-氨基-4-甲基香豆素)从10mM的二甲亚砜储存液添加到终浓度为25μM。反应体积为每孔100μL。在室温孵育不同时间后，在Perkin Elmer HTS 7000Plus微量滴定板读板机上以370nM激发波长和465nM发射波长测定游离AMC的浓度。在底物水解随时间线性增加和荧光信号的改变与游离AMC的浓度成比例的条件下测定α胰凝乳蛋白酶活性。

实施例C

HEP和α-胰凝乳蛋白酶抑制剂IC₅₀值的测定

IC₅₀值通常被定义为对酶活性产生50％抑制所必需的化合物浓度。IC₅₀值是化合物对其指定用途的活性的有用指标。本发明的蛋白酶体抑制剂如果对于抑制人红细胞蛋白酶体(HEP)的IC₅₀值小于大约1μmol，则该因子可以认为是有活性的。在一些实施方案中，该抑制剂显示对于HEP的一些特异性并且抑制牛α-胰凝乳蛋白酶的IC₅₀相对与抑制HEP的IC₅₀的比率，即IC₅₀(α-胰凝乳蛋白酶)/IC₅₀(HEP)，大于大约100。

对HEP和牛α-胰凝乳蛋白酶的胰凝乳蛋白酶样活性的抑制通过将酶与各种浓度的假定抑制剂在添加底物之前在37℃(或对于α胰凝乳蛋白酶而言为室温)孵育15分钟而测定。各实验条件重复评估三份，并且对此处描述的抑制剂进行重复实验。

在上述鉴定的分析中，如果对于抑制HEP的IC₅₀值小于1000nM，则本发明的化合物可以认为是有活性的。优选本发明的化合物抑制HEP的IC₅₀值小于100nM。本发明更优选的化合物对抑制HEP的IC₅₀值会小于10nM。本发明的化合物在上述鉴定的分析中已经显示抑制HEP的IC₅₀值小于1000nM。

实施例D

在Molt-4细胞系中对蛋白酶体胰凝乳蛋白酶样活性的细胞分析

根据以下方法在Molt-4细胞(人白血病)中分析蛋白酶体胰凝乳蛋白酶样活性。以前已经公开了该方法的简要描述(Harding等，J.Immunol.，1995，155，1767)。

洗涤Molt-4细胞并重悬于HEPES-缓冲的盐水中(5.4mM KCl，120mM NaCl，25mM葡萄糖，1.5mM MgSO₄，1mM丙酮酸钠，20mMHepes)并以终浓度6×10⁶个细胞/孔覆盖于96孔微量滴定板中。然后将250×DMSO溶液用HEPES-缓冲的盐水稀释50倍制备各种5×蛋白酶体抑制剂浓缩液(或稀释的DMSO用作对照)，以1×终浓度添加到板中。在37℃孵育15分钟后，购自Enzyme Systems Products，目录号AFC-88的荧光测定的细胞可渗透的底物(MeOSuc-FLF-AFC)(甲氧基琥珀酰-Phe-Leu-Phe-7-氨基-4-三氟甲基香豆素)从20mM的DMSO储存溶液以终浓度25μM加入到各孔中。反应体积为每孔100μl。

在Polastar Optima，BMG Labtechnologies微量滴定板读板机上使用激发波长390nm和发射波长520nm以每1.5分钟检测游离AFC的浓度，持续30分钟(22个循环)。在底物水解随时间线性增加和荧光信号的改变与游离AFC的浓度成比例的条件下测定蛋白酶体活性。

实施例E

在MOLT-4细胞系中测定蛋白酶体抑制剂的EC₅₀值

EC₅₀值通常被定义为产生最小和最大反应(对该分析而言分别为0％和85-90％)之间半途酶活性抑制所需的化合物浓度。EC₅₀是化合物对其指定用途的活性的有用指标。本发明的化合物如果其EC₅₀值小于大约10μM，则可以认为是有活性的。

对MOLT-4细胞中蛋白酶体的胰凝乳蛋白酶样活性的抑制通过将细胞与各种浓度的假定抑制剂在添加底物之前在37℃孵育15分钟而测定。各实验条件进行三份重复评估，并且对此处描述的抑制剂进行重复实验。

在上述鉴定的分析中，如果对于MOLT-4细胞中蛋白酶体抑制的EC₅₀值小于10μM，则本发明的化合物可以认为是有活性的。优选本发明的化合物在MOLT-4细胞中蛋白酶体抑制的EC₅₀值小于2μM。更优选本发明的化合物在MOLT-4细胞中蛋白酶体抑制的EC₅₀值小于200nM。本发明的化合物在上述鉴定的分析中已经显示在MOLT-4细胞中蛋白酶体抑制的EC₅₀值小于10μM。

实施例F

蛋白酶体胰蛋白酶样活性的分析

人蛋白酶体的蛋白酶样活性可以根据具有如下修改的上述方法进行分析。在补充有1mM 2-巯基乙醇的Tris-甘油缓冲液(pH9.5)中进行反应，而底物可以是产生荧光的底物例如苄氧基羰基--Phe--Arg--AMC(100μM)。

在37℃孵育不同时间段后，在FluoroskanII分光荧光计上使用激发滤器390nm和发射滤器460nm检测游离AMC的浓度。在底物水解随时间线性增加和荧光信号的改变与游离AMC的浓度成比例的条件下测定蛋白酶体活性。

实施例G

体内抑制细胞肌肉的分解

抑制剂对幼年大鼠比目鱼肌减重萎缩的影响可以通过例如Tischler，Metabolism，1990，39，756描述的方法测定。例如，幼年雌性Sprague-Dawley大鼠(80-90g)可以如Jaspers等，J.Appl.Physiol.，1984，57，1472的描述固定尾(tail-cast)，悬吊后肢。动物的后肢被升高超出各动物被分别饲喂的笼舍的地板。动物可以自由获得食物和水，并可以在悬吊开始时和结束时称重。在悬吊期间，每天检查动物以保证它们的趾尖不触及笼舍地板，并且没有由固定引起的尾部肿胀。

实验设计-第一部分

各实验以悬吊20只大鼠开始，这些大鼠被随机分为4组、每组5只。A组被悬吊2天，提供基线数据以估计悬吊更长时间的其他动物比目鱼肌的大小。研究开始时组的平均体重可以比较并用作身体大小差异的校正因子。组B是另一个对照组，其一肢的比目鱼肌在减重两天后用汞撒利的水溶液处理，以显示各组动物减缓减重过程中的肌肉萎缩的能力。在开始减重后2天，将汞撒利的水溶液(200nM；4.mu.1/100g初始体重)注射到一个比目鱼肌。对侧的肌肉注射相似体积的0.9％盐水(“媒介物”)。在原位注射过程中动物可以用Innovar-vet(10μl/100g体重)维持镇静。注射后，动物再悬吊另外24小时，取出比目鱼肌。各实验的组C和D用于分别测试公开的化合物两个不同实施方案。动物可以如组B一样处理，除了可以在一条腿的比目鱼肌注射1mM蛋白酶体抑制剂的二甲亚砜(DMSO)，而在对侧比目鱼肌只注射DMSO。因此，各实验由两个对照组和本发明的蛋白酶体抑制剂的测试组成。完成具有不同对抑制剂的5个这样的实验对检测各抑制剂而言“n”值为10，并且各因子可以在不同批次的动物中测试。

比目鱼肌肌肉的处理--第一部分

在处死动物后，可以切碎比目鱼肌，剔除脂肪和结缔组织，并小心称重。然后在10％三氯乙酸(TCA)中将肌肉匀浆并通过离心沉淀蛋白。沉淀物用10％TCA洗涤一次和用乙醇∶醚(1∶1)洗涤一次。最终沉淀可以溶解在4ml 1N氢氧化钠中。然后通过双缩脲方法使用白蛋白作为标准品分析样品的蛋白含量。

数据分析--第一部分

抑制剂对总肌肉蛋白含量的影响主要通过与未处理的对侧肌肉的配对比较而检测。计算含量比率并通过分析差异(“ANOVA”)而统计分析。左腿总是处理过的腿，所以蛋白含量比例还可以与未处理的对照动物比较。以这种方式，通过比较两条腿蛋白含量而显示显著差异以及测试的抑制剂的相对效力。还可以对各单独处理的效果进行配对的学生检验。未处理的对照数据也提供第2天蛋白含量的估计值。这使得对B，C，D各组在24小时处理中的蛋白改变进行近似计算。

实验设计--第二部分

各实验由10只动物组成，其中每组5只用一种抑制剂测试其对蛋白合成的影响。对这方面研究而言不需要对照动物，因为对侧DMSO处理的肌肉用作抑制剂处理的肌肉的配对对照。各组可以如第一部分中组C和D的描述进行注射。原位处理后24小时，可以在两个比目鱼肌肌肉中分析蛋白合成的分数(fractional rate)。各肌肉可以注射含有³H-苯丙氨酸(50mM；1μCi/ml)的0.9％盐水溶液(3.5μl/100g终体重)。15分钟后切下中间三分之二的肌肉，并如下处理该肌肉。

比目鱼肌肌肉的处理--第二部分

肌肉首先在为终止蛋白合成含有0.5mM环己酰亚胺和为捕获细胞中的苯丙氨酸含有20mM环亮氨酸的0.84％盐水中洗涤10分钟。然后在冰冷的2％高氯酸中将肌肉匀浆。通过离心收集沉淀的蛋白。取一等分上清液用于液体闪烁计数，另一等分上清被处理将苯丙氨酸转化为苯乙基胺以荧光测定可溶的苯丙氨酸浓度.参见，如Garlick等，Biochem.J.，1980，192，719。这些值可以提供细胞内的比活性。肌肉蛋白中苯丙氨酸的比活性可以在6N HCl中通过加热水解蛋白后而测定。释放的氨基酸溶解在缓冲液中。取一等分用于闪烁计数，而另一等分用于分析上清部分的苯丙氨酸。蛋白合成的分数可以计算为：蛋白比活性/细胞内比活性.次数.时间。

数据分析--第二部分

对各抑制剂可以在配对基础上分析蛋白合成。对侧肌肉的学生配对t检验比较可以测定抑制剂是否对蛋白合成有影响。蛋白分解可以大约计算为蛋白合成的分数(来自第二部分)加上蛋白增长的分数(来自第一部分)，其中蛋白损失产生蛋白增长的负值。

定性而言，抑制剂减缓蛋白损失而不影响蛋白合成的能力表示这蛋白降解的减慢。

实施例H

抗肿瘤活性的体内研究

材料

用于体内研究的蛋白酶体抑制剂配制在合适的介质中用于静脉内(iv)或口服(po)给药。例如，对iv给药而言，化合物可以溶解在0.9％NaCl，或例如比例分别为87∶10∶3(v∶v∶v)的0.9％NaCl，solutol HS15和二甲亚砜的混合物中给药。

细胞系

下列不同组织来源的人或鼠肿瘤细胞系可以用于检测本发明的化合物的抗肿瘤活性：H460(人，肺)，A2780(人，卵巢)，PC-3(人，前列腺)，LoVo(人，结肠)，HCT116(人，结肠)，BXPC3(人，胰腺)，PANC-1(人，胰腺)，MX-1(人，乳腺)，MOLT(人，白血病)，多发性骨髓瘤(人，骨髓瘤)，YC8(鼠，淋巴瘤)，L1210(鼠，白血病)，3LL(鼠，肺)。

动物种类

商购得到5-6周免疫活性的或免疫失能(immunodeprived)的小鼠，例如从Harlan(Correzzana，Mi Italy)购得。CD1 nu/nu小鼠维持在无菌条件下，使用无菌笼舍，草垫，食物和酸化水。

肿瘤细胞植入和生长

不同组织类型(hystotype)(肺，卵巢，乳腺，前列腺，胰腺，结肠)实体瘤的模型可以皮下(sc.)移植到免疫活性小鼠(鼠模型)或免疫失能小鼠(人模型)的腋窝区域。原始获自ATCC的人肿瘤细胞系可以从“体外培养物”调整为在“体内”生长成实体瘤。

人或鼠的血液肿瘤模型可以根据它们的最高肿瘤一次采集量移植到免疫活性小鼠(鼠模型)或免疫失能小鼠(人白血病，淋巴瘤和骨髓瘤模型)的不同部位(iv，ip，ic或sc)。

药学处理

荷实体瘤(阶段性的)或血液肿瘤的小鼠在实验组(10只小鼠/组)中是随机分配的。对于实体瘤，各组平均肿瘤重量80-100mg被认为可以开始进行处理，弃去具有最小和最大肿瘤的小鼠。

实验组被随机分配药学处理和对照组。取决于化合物的生物利用用度，根据下列处理计划，动物可以iv或口服处理：每周一次或两次iv给药，或每日口服给药。

在实体瘤模型上，当植入肿瘤后(第0天)肿瘤大小在80-100mg范围时开始药学处理。

化合物可以在合适的溶剂中以10mL/公斤体重/小鼠的体积进行给药。

抗肿瘤活性参数

下列参数可用于评估抗肿瘤活性：

每周两次卡钳测量而检测各小鼠原发实体瘤的生长；

处理的小鼠与对照小鼠存活时间的比较；

每周两次评估单个小鼠体重。

在最后一次药学处理后一周，肿瘤生长抑制TWI％(原发肿瘤生长抑制与媒介处理的对照组的百分比)或分阶段的肿瘤情形下相对肿瘤生长抑制RTWI％进行评估，并且如下计算肿瘤重量(TW)：

TW＝1/2ab²

其中a和b是肿瘤质量的长径和短径，以mm表示。

抗肿瘤活性可以测定为肿瘤重量抑制(TWI％)，其按如下方程式计算：

在最后一次药学处理后一周，对RTWI％(原发肿瘤生长抑制与媒介处理的对照组的相对百分比)根据如下方程式进行评估：

其中

肿瘤消退的百分比可以按相对肿瘤重量的降低计算，测定为在给定日的肿瘤重量除以在实验开始时的初始肿瘤重量。

在血液肿瘤模型中，抗肿瘤活性可以测定为小鼠存活时间中值增加百分比，表示为处理组(T)与对照组(C)存活时间中值的比例(T/C％)。在实验结束(移植后60天)无肿瘤的小鼠不计算在内并视为长期存活者(LTS)。

荷瘤小鼠中的毒性评估

可以在粗尸检发现和重量损失的基础上每天评估毒性。当小鼠在媒介处理的对照动物之前死亡，或观察到显著的重量损失(＞20％)和/或脾脏和肝脏大小降低时，被认为死于毒性作用。

如下评估BWC％(体重改变％)：

100-(给定日的小鼠平均体重/处理开始时的平均体重)×100。该值在用测试化合物处理一周后测定。

实施例K

细胞体外存活性

根据以下方法，测定在存在测试化合物的情况下体外测量细胞存活性的IC₅₀值。细胞可以不同密度接种在96孔板中，然后在24小时后使用Calcein-AM存活性分析测定各细胞类型的最佳终密度。接着细胞以测定密度的100μL本领域技术人员已知的合适的细胞培养基接种在96孔板中。

可以对测试化合物进行连续稀释以使得浓度为所需评估浓度的两倍。当100μL该稀释液被加入到覆盖在100μL培养基中的细胞时，可以获得终浓度例如，0，11.7，46.9，187.5，375，和750nM。在接种细胞后3到4小时加入化合物至板，然后将板在37℃孵育所需的时间(如，一，二，或三天)。

在所需的时间点如下进行Calcein-AM存活性分析。使用多头管和金属板抽吸培养基只留下大约50μL/孔。孔用200μl DPBS洗涤三次，每次用多头管抽吸，留下50μL/孔。制备8μM Calcein-AM的DPBS溶液并向各孔加入150μL。然后将板在37℃孵育30分钟。孵育后，calcein可以用多头管抽吸并如前用200μL DPBS洗涤。在最终抽吸后，使用Cytofluor 2300荧光读板机测量荧光。阴性对照可以包含培养基而没有细胞，实验重复三份。

实施例L

体外动力学实验

可以使用Rock等，Cell，1994，78，761描述的方案测试本发明的化合物的蛋白酶体抑制活性。根据该方法，当蛋白酶体和测试化合物相互作用形成复合物时建立平衡的解离常数(K_i)。反应可以用来自兔肌肉的SDS-活化的20S蛋白酶体进行，蛋白酶体底物为Suc-LLVY-AMC。

实施例M

抑制NF-κB的活化

通过实施Palombella等，Cell，1994，78，773所描述的分析对本发明的化合物抑制NF-κB的活性进行分析。例如，MG63骨癌细胞可以通过用TNF-α处理指定的时间而刺激。制备全细胞提取物并通过电泳迁移分析使用来自人IFN-β基因启动子的PRO II探针进行分析。

实施例N

化合物活性

使用上述实施例C和实施例E的分析，下面的表F-1显示本发明的化合物抑制蛋白酶体的实用性。在下表中，对于HEP的抑制而言，实施例C，具有“+”的本发明的化合物对HEP抑制的IC₅₀小于1000nM；具有“++”的本发明的化合物小于100nM；具有“+++”的本发明的化合物小于10nM。在下表中，对于MOLT4的抑制而言，实施例E，具有“+”的本发明的化合物对HEP抑制的EC₅₀小于10000nM；具有“++”的本发明的化合物小于2000nM；具有“+++”的本发明的化合物小于200nM。当出现“＞+”时，活性大于分析的界限。当没有显示IC₅₀值或EC₅₀值时，数据还有待测定。

表F-1

实施例#             HEP(IC₅₀)            MOLT4(EC₅₀)

10                  +++                  +++

11                  +++                  +++

12                  +++                  ++

13                  +++                  +++

14                  +++                  +++

15                  ++

16                  +++                  +++

17                  ++                   ＞+

18                  +++                  ++

19                  +++                  +++

20                  +++                  +

21                  +++                  ＞+

22                  +++                  ＞+

23                  +++                  +++

24                  +++                  ＞+

药学制剂和剂型

当用作药学时，通式(I)的化合物可以药学组合物的形式给药。这些组合物可以多种途径给药，包括口服、直肠、经皮、皮下、静脉内、肌内和鼻内，并且可以用药学领域众所周知的方式制备。

本发明还包括药学组合物，其含有作为活性成分的上述通式(I)的一种或多种化合物与一种或多种药学可接受的载体组合。在制备本发明的组合物时，活性成分通常与赋形剂混合，被赋形剂稀释或例如以胶囊、小袋、纸或其他容器的形式封装在这样的载体之内。当赋形剂用作稀释剂时，其可以是用作活性成分的媒介、载体或介质的固体、半固体或液体材料。因此，组合物可以采取的形式为片剂、丸剂、粉剂、锭剂、小袋，扁囊剂、酏剂、悬剂、乳剂、溶液、糖浆、气溶胶(作为固体或在液体介质中)，含有例如直至10％重量活性化合物的油膏，软和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射液和无菌包装的粉末。

在制备制剂时，活性化合物可以在与其他成分组合前被粉碎以提供合适的颗粒大小。如果活性化合物是基本不溶的，其可以被粉碎到小于200目的颗粒大小。如果活性化合物是基本水溶的，颗粒大小可以通过粉碎调整以提供制剂中基本均一的分布，如大约40目。

一些合适的赋形剂的例子包括乳糖，葡萄糖，蔗糖，山梨糖醇，甘露糖醇，淀粉，阿拉伯胶，磷酸钙，藻酸盐，西黄蓍胶，明胶，硅酸钙，微晶纤维素，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素，水，糖浆，和甲基纤维素。该制剂还可以包括润滑剂例如滑石，硬脂酸镁，和矿物油；湿润剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂例如甲基和丙基羟基苯甲酸酯；甜味剂和调味剂。本发明的组合物可以通过使用本领域已知的方法，被制成制剂以在给药到病人之后提供活性成分迅速持续或延缓的释放。

所述组合物能够被制成单位剂型，各剂量含有从大约5到大约100毫克，更通常大约10到大约30毫克的所述活性成分。所述术语“单位剂型”指物理上离散的单位，适合用于人对象及其他哺乳动物的单一剂量，各单位含有计算产生所需的治疗效果的预定量的活性物质，以及合适的药学赋形剂。

活性化合物在宽的剂量范围内有效，并通常以药学有效量给药。然而应该理解，实际给药的化合物的量通常由医生根据有关的情形确定，这些情形包括治疗的病症，选择的给药途径，实际给药的化合物，单个病人的年龄、体重和反应，病人症状的严重程度等等。

对于制备固体组合物例如片剂而言，主要的活性成分与药学赋形剂混合以形成含有本发明化合物的均匀混合物的固体预制剂组合物。当称这些预制剂组合物为均相时，活性成分通常均匀地分散在整个组合物使得组合物可以容易地再分到相同有效单位剂型例如片剂、丸剂和胶囊中。这个固体预制剂然后再分到含有例如0.1到大约500mg本发明活性成分的上述类型的单位剂型中。

本发明的片剂或丸剂可以被涂布或复合以提供具有延长作用优点的剂型。例如，片剂或丸剂可以包含内部剂量和外部剂量组分，后者是前者之上的外壳形式。这两个组分可以被肠衣层分开，该层用于抵抗胃中的分解并允许内部组分完整地进入十二指肠或延缓释放。多种材料能被用于这样的肠衣层或涂层，这样的材料包括多种聚合物酸以及聚合物酸与例如虫胶，鲸蜡醇和纤维素醋酸酯等材料的混合物。

其中本发明的化合物和组合物可以被引入用于口服或注射给药的液体形式包括水溶液，合适调味的糖浆，水或油的悬液，和用食用油例如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油调味的乳剂，以及酏剂和类似的药学媒介。

用于吸入或吹入的组合物包括药学可接受的水或有机溶剂或其混合物的溶液和悬液，以及粉末。液体或固体组合物可以包含上述合适的药学可接受的赋形剂。在一些实施方案中，组合物通过口腔或鼻呼吸路径用于局部或全身效果而给药。组合物可以利用惰性气体而雾化。雾化的溶液可以从雾化装置直接吸入，或者雾化装置可以连接到面罩或间歇性正压呼吸机。溶液，悬液，或粉末组合物从以适当方式递送该制剂的装置经口或经鼻给药。

给药到病人的化合物或组合物的量将取决于给药的物质，给药的目的例如预防或治疗，病人的状态，给药的方式等等而改变。在治疗性应用中，组合物以足够治疗或至少部分阻止疾病的症状及其并发症的量给药到已经患有疾病的病人。足以实现此目的的量称为“治疗有效量”。有效剂量将取决于被治疗的疾病状况以及护理临床医生根据疾病的严重程度，病人的年龄、体重以及总体状况等因素而判断。

给药到病人的组合物可以是如上所述药学组合物的形式。这些组合物可以通过常规的无菌技术杀菌，或可以无菌过滤。水溶液可以被包装使用，或冻干，冻干制剂在给药前与无菌的含水载体结合。化合物制剂的pH通常在3到11之间，更优选从5到9，以及最优选从7到8。应该理解，上述赋形剂、载体或稳定剂的使用会导致形成药学盐。

本发明化合物的治疗剂量可以根据例如该治疗的具体用途，化合物的给药方式，病人的健康状况，以及处方医生的判断而改变。药学组合物中本发明化合物的比例或浓度可以取决于多种因素而改变，包括剂量，化学特性(如疏水性)，以及给药途径。例如，本发明化合物可以提供于含有大约0.1到大约10％w/v化合物的水性生理缓冲液中用于非肠道给药。一些通常的剂量范围为每天大约1μg/kg到大约1g/kg体重。在一些实施方案中，剂量范围从每天大约0.01mg/kg体重到大约100mg/kg体重。剂量极可能取决于这样的变量，如疾病或失调的类型和进展程度，具体病人的总体健康状态，选定的化合物的相对生物学功效，赋形剂的配方，及其给药途径。有效剂量可以从来自体外或动物模型测试系统的剂量反应曲线推出。

本发明还包括有效用于治疗或预防炎性疾病的药学试剂盒，其包含一种或多种含有包含治疗有效量的通式(I)的化合物的药学组合物的容器。如果需要，这样的试剂盒还包括一种或多种不同的常规药学试剂盒组分，比如具有一种或多种药学可接受的载体的容器，其他容器等等，这对于本领域技术人员而言是显而易见的。还可以在试剂盒中包含，或者作为插页或者作为标签的显示给药组分量的说明书，用于给药的指南，和/或用于混合组分的指南。

除此处描述的那些之外，对本领域技术人员而言根据上述描述对本发明进行的各种修改是显而易见的。这样的修改也落在权利要求的范围内。本申请引用的各参考文献在此以其全文引作参考。

Claims (18)

1.通式(I)的化合物或其药学可接受的盐，立体异构或互变异构形式：

其中：

R¹是C₁-C₄烷基；

Y是H，CN，NO₂，或胍基保护基团；

Z是-CN，-C(＝O)OR⁵，苯二甲酰亚氨基，-NHSO₂R⁶，或-NR³R⁴；

R³是H或C₁-C₄烷基；

R⁴选自C₆-C₁₈芳基-SO₂-，C₆-C₁₈芳基-C(＝O)-，C₇-C₁₁芳烷基-C(＝O)-，C₁-C₈烷基-C(＝O)-，C₆-C₁₈芳基-OC(＝O)-，C₇-C₁₁芳烷基-OC(＝O)-，C₁-C₈烷基-OC(＝O)-，C₆-C₁₈芳基-NHC(＝O)-，和C₁-C₈烷基-NHC(＝O)-；其中所述芳基或芳烷基任选被一个或多个甲基或甲氧基取代；

R⁵是H，C₁-C₆烷基，C₂-C₆链烯基或C₂-C₆炔基，其中R⁵任选被一个或多个卤素，C₁-C₄烷基，芳基，或杂芳基取代，其中芳基具有6到18个碳原子以及杂芳基具有3到20个碳原子；

R⁶是C₁-C₈烷基，C₂-C₈链烯基或C₂-C₈炔基，其中R⁶任选被一个或多个卤素，C₁-C₄烷基，芳基，或杂芳基取代，其中芳基具有6到18个碳原子以及杂芳基具有3到20个碳原子；

Q选自B(OR⁹)₂，蒎烷二醇硼酸酯，频哪醇硼酸酯，

1，2-乙二醇硼酸酯，1，3-丙二醇硼酸酯，

1，2-丙二醇硼酸酯，2，3-丁二醇硼酸酯，

1，1，2，2-四甲基乙二醇硼酸酯，

1，2-二异丙基乙二醇硼酸酯，5，6-癸二醇硼酸酯，

1，2-二环己基乙二醇硼

酸酯，双环己基-1，1’-二醇硼酸酯，和

1，2-二苯基-1，2-乙二醇硼酸酯；

R⁹是H，C₁-C₄烷基，C₃-C₁₀环烷基，C₆-C₁₈芳基，或C₇-C₁₁芳烷基；

m是2，3，或4；以及

n是3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，或14。

2.权利要求1的化合物，其中R¹是乙基，丙基，或丁基。

3.权利要求1的化合物，其中R¹是2-丙基。

4.权利要求1的化合物，其中Q是蒎烷二醇硼酸酯。

5.权利要求1的化合物，其中Q是B(OH)₂。

6.权利要求1的化合物，其中Z是苯二甲酰亚氨基，NHR⁴，或CN。

7.权利要求1的化合物，其中n是8，9，10，或11。

8.权利要求1的化合物，其中m是3。

9.权利要求1的化合物，其中n是8，9，10，或11；以及m是3。

10.权利要求1的化合物，或其药学可接受的盐，立体异构或互变异构形式，具有下列通式(I)：

其中：

R¹是2-丙基；

Y是-NO₂；

Z是-CN，-C(＝O)R⁵，苯二甲酰亚氨基，-NHSO₂R⁶，或-NHR⁴；

R⁴选自C₆-C₁₈芳基-SO₂-，C₁-C₈烷基-SO₂-，C₆-C₁₈芳基-C(＝O)-，C₇-C₁₁芳烷基-C(＝O)-，C₁-C₈烷基-C(＝O)-，C₆-C₁₈芳基-OC(＝O)-，C₇-C₁₁芳烷基-OC(＝O)-，C₁-C₈烷基-OC(＝O)-，C₆-C₁₈芳基-NHC(＝O)-，和C₁-C₈烷基-NHC(＝O)-；其中所述芳基或芳烷基任选被一个或多个甲基或甲氧基取代；

R⁵是H或C₁-C₆烷基，C₂-C₈链烯基或C₂-C₈炔基，其中R⁵任选被一个或多个卤素，芳基，或杂芳基取代，其中芳基具有6到18个碳原子以及杂芳基具有3到20个碳原子；

R⁶是C₁-C₆烷基，C₂-C₈链烯基或C₂-C₈炔基，其中R⁶任选被一个或多个卤素，芳基，或杂芳基取代，其中芳基具有6到18个碳原子以及杂芳基具有3到20个碳原子；

Q选自B(OR⁹)₂，蒎烷二醇硼酸酯，频哪醇硼酸酯，

1，2-乙二醇硼酸酯，1，3-丙二醇硼酸酯，

1，2-丙二醇硼酸酯，2，3-丁二醇硼酸酯，

1，1，2，2-四甲基乙二醇硼酸酯，

1，2-二异丙基乙二醇硼酸酯，5，6-癸二醇硼酸酯，

1，2-二环己基乙二醇硼酸酯，双环己基-1，1’-二醇硼酸酯，和

1，2-二苯基-1，2-乙二醇硼酸酯；

R⁹是H或C₁-C₄烷基；

m是3；以及

n是4，5，6，7，8，9，10或11。

11.权利要求1的化合物，或其药学可接受的盐，具有下式结构：

12.一种组合物，含有权利要求1-11中任一项的化合物和药学可接受的载体。

13.治疗有效量的至少一种权利要求1-11中任一项的化合物在制备用于抑制蛋白酶体活性的药物中的应用。

14.治疗有效量的至少一种权利要求1-11中任一项的化合物在制备用于治疗癌症的药物中的应用。

15.权利要求14的应用，其中所述癌症选自皮肤癌，前列腺癌，结肠直肠癌，胰腺癌，肾癌，卵巢癌，乳腺癌，肝癌，舌癌，肺癌，和平滑肌组织癌。

16.权利要求14的应用，其中所述癌症选自白血病，淋巴瘤，非-Hodgkin淋巴瘤，骨髓瘤，和多发性骨髓瘤。

17.权利要求14的应用，其中所述药物结合一种或多种抗肿瘤或抗癌剂和/或放射疗法使用。

18.治疗有效量的至少一种权利要求1-11中任一项的化合物在制备用于抑制转录因子NF-κB活性的药物中的应用。