MXPA06001685A - Inhibidores de proteasoma y metodos de uso de los mismos. - Google Patents

Inhibidores de proteasoma y metodos de uso de los mismos.

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MXPA06001685A
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Abstract

La presente invencion se refiere a compuestos de acido boronico, esteres boronicos y composiciones de estos que pueden modular la apoptosis, tal como mediante la actividad de proteasomas. Los compuestos y composiciones pueden utilizarse en metodos para reducir la apoptosis y tratar enfermedades tales como cancer y otros desordenes asociados directa o indirectamente con la actividad de proteasomas.

Description

INHIBIDORES DE PROTEASOMA Y MÉTODOS DE USO DE LOS MISMOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a compuestos de ácido bórico y esteres bóricos útiles como inhibidores de proteasoma y para la modulación de la apoptosis. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El proteasoma, (denominado también proteasa multicatalítica (MCP), proteinasa multicatalítica, complejo proteinasa multicatalítica, complejo endopeptidasa multicatalitica, 20S, 26S, o ingesina) es un gran complejo multiproteico presente en el citoplasma y en el núcleo de todas las células eucariotas. Es una estructura celular altamente conservada responsable de la proteolisis dependiente de ATP de la mayor parte de las proteínas celulares (Tanaka, Biochem Biophy. Res . Común . , 1998, 247, 537). El proteasoma 26S está compuesto por un complejo catalítico con un núcleo 20S que está terminado en cada extremo por una subunidad reguladora 19S. El proteasoma 20S archaebacteria contiene catorce copias de dos tipos distintos de subunidades, a y ß, que forman una estructura cilindrica compuesta por cuatro anillos apilados . Los anillos superior e inferior contienen siete subunidades a cada uno, mientras que los anillos interiores contienen siete subunidades ß. El proteasoma 20S eucariota más complejo está compuesto por aproximadamente 15 subunidades distintas de 20-30 kDa y se caracteriza por tres actividades principales con respecto a sustratos peptídicos. Por ejemplo, el proteasoma muestra actividades hidrolíticas de péptido tríptico, quimiotríptico, y peptidilglutamilo (Rivett, Biochem. J. , 1993, 291, 1 y Orlowski, Biochemistry, 1990, 29, 10289) . Además, el proteasoma tiene un mecanismo con un único sitio activo que se cree que utiliza un resto treonina como nucleófilo catalítico (Seemuller, et al., Science, 1995, 268, 579). El proteasoma 26S es capaz de degradar proteínas que se han marcado mediante la adición de moléculas de ubiquitina. Típicamente, la ubiquitina se une a los grupos e-amino de Usinas en procesos ultietapa que utilizan ATP y enzimas El (activantes de ubiquitina) y E2 (conjugación de ubiquitina) . Las proteínas sustrato ulti-ubiquitinadas son reconocidas por el proteasoma 26S y se degradan. Las cadenas de multi-ubiquitina generalmente se liberan del complejo y la ubiquitina se recicla (Goldberg, et al., Nature, 1992, 351, 375) . Numerosas proteínas reguladoras son sustratos para la proteolisis dependiente de ubiquitina. Muchas de estas proteínas funcionan como reguladores de procesos celulares fisiológicos y patofisiológicos . Las alteraciones en la actividad del proteasoma se han visto implicadas en numerosas patologías incluyendo enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, así como lesiones por oclusión/isquemia repercusión, y envejecimiento del sistema nervioso central. La ruta de ubiquitina-proteasoma juega también un papel importante en el crecimiento neoplásico. La degradación regulada de proteínas tales como ciclinas, inhibidores de CDK2, y supresores tumorales se cree que es importante en la progresión del ciclo celular y la mitosis. Un sustrato conocido del proteasoma es el supresor tumoral p53, que está implicado en diversos procesos celulares (véase, por ejemplo, Ko, L.J. Genes Dev. , 1996, 10, 1054). Se ha demostrado que el supresor tumoral p53 induce apoptosis en diversas líneas celulares hematopoyéticas (Oren, M., Semen . Cáncer Biol . , 1994, 5, 221) . La inducción de p53 conduce a la detención del crecimiento celular en la fase Gl del ciclo celular así como a la muerte celular por apoptosis. Se sabe que la degradación del supresor tumoral p53 se realiza por la ruta de ubiquitina-proteasoma, y que la interrupción de la degradación de p53 por la inhibición del proteasoma es un modo posible de inducción de apoptosis. El proteasoma es necesario también para la activación del factor de transcripción NF-KB por degradación de su proteína inhibidora, I?B (Palombella, et al., Cell, 1994, 18, 773) . NF-?B tiene un papel en el mantenimiento de la viabilidad celular a través de la transcripción de los inhibidores de la apoptosis. Se ha demostrado que el bloqueo de la actividad de NF-?B hace a las células más susceptibles a apoptosis. Se ha informado sobre diversos inhibidores de la actividad proteolítica del proteasoma. Véase, por ejemplo, Kisselev, et al., Chemistry & Biology, 2001, 8, 739. Lactacistina es un metabolito de Streptomyces que inhibe específicamente la actividad proteolítica del complejo proteasoma (Fenteany, et al., Science, 1995, 268, 726). Esta molécula es capaz de inhibir la proliferación de diversos tipos celulares (Fenteany, et al., Proc. Nati . Acad. Sci . EE. UU. , 1994, 91, 3358). Se ha demostrado que lactacistina se une irreversiblemente, a través de su resto ß-lactona, a un resto treonina localizado en el extremo amino terminal de la subunidad ß del proteasoma.
Se ha informado que los aldehidos peptídicos inhiben la actividad de tipo quimiotripsina asociada con el proteasoma (Vinitsky, et al., Biochemistry, 1992, 31 , 9421; Tsubuki, et al., Biochem . Biophys . Res . Común . , 1993, 196, 1195; y Rock, et al., Cell, 1994, 78, 761) . También se ha informado sobre los inhibidores de dipeptidil aldehido que tienen valores de IC50 in vitro en el intervalo de 10-100 nM (Iqbal, M., et al . , J. Med. Chem. 1995, 38, 2276) . Se ha informado también sobre una serie de inhibidores in vitro similarmente potentes a partir de dipéptidos derivados de a-cetocartonilo esteres y esteres bóricos (labal, et al., Bioorg. Med. Chem . Lett . 1996, 6, 287, Patentes de Estados Unidos N° 5.614.649; 5.830.870; 5.990.083; 6.096.778; 6.310.057; Solicitud de Patente de Estados Unidos Publicada N° 2001/0012854, y el documento WO 99/30707) . Anteriormente ya se ha informado sobre compuesto éster y ácido peptidil bórico N-terminal (Patentes de Estados Unidos N° 4.499.082 y 4.537.773; documento WO 91/13904; Kettner, et al., J. Bio . Chem. , 1984, 259, 15106). Estos compuestos se presentan como inhibidores de ciertas enzimas proteolíticas. Se ha demostrado que los compuestos éster y ácido bórico tripéptido N-terminal inhiben el crecimiento de células cancerosas (Patente de Estados Unidos N° 5.106.948). Se ha demostrado que una amplia clase de compuesto éster y ácido bórico tri-péptido N-terminal y análogos de los mismos inhiben renina (Patente de Estados Unidos N° 5.169.841). También se ha informado sobre diversos inhibidores de las actividades peptidasa del proteasoma. Véase, por ejemplo, Dick, et al., .Biochemistry, 1999, 30, 2725; Goldberg, et al., Nature, 1992, 351, 375; Goldberg, Eur. J. Biochem. , 1992, 203, 9; Orlowski, Biochemistry, 1990, 29, 10289; Rivett, et al., Archs . Biochem . Biophys . , 1989, 218, 1; Rivett, et al., J. Biol . Chem. , 1989, 264, 12215; Tanaka, et al., New Biol . , 1992, 4, 1; Murakami, et al., Procedimiento . Nati . Acad. Sci . EE.UU., 1986, 83, 7588; Li et al., Biochemistry, 1991, 30, 9709; Goldberg, Eur. J. Biochem. , 1992, 203, 9; y Aoyagi, et al., Porteases and Biological Control, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1975), página. 429-454. Stein et al., Solicitud de Patente de Estados Unidos con N° de Serie 08/212.909, presentada el 15 de marzo, 1994, informa sobre aldehidos útiles para reducir en un animal tanto la velocidad de pérdida de masa muscular como la velocidad de degradación de proteína intracelular. Se dice también que los compuestos reducen la velocidad de degradación de la proteína p53 en un animal. Palombella, et al., documento WO 95/25533, informa sobre el uso de aldehidos peptídicos para reducir el contenido celular y la actividad de NF-?B en un animal poniendo en contacto las células del animal con un inhibidor de aldehido peptídico de la función de proteasoma o la conjugación de ubiquitina. Goldberg y Rock, documento WO 94/17816, informan sobre el uso de inhibidores de proteasoma para inhibir la presentación del antígeno MHC-I. Stein, et al., Patente de Estados Unidos N° 5.693.617 informa sobre compuestos aldehido de peptidilo como inhibidores de proteasoma útiles para reducir la velocidad de degradación de proteínas en un animal. La inhibición del proteasoma 26S y 2OS por derivados indanona y un método para inhibir la proliferación celular usando derivados indanona se presenta en Lum et al., Patente de Estados Unidos N° 5.834.487. Los compuestos alfa-cetoamida útiles para tratar trastornos mediados por el proteasoma 20S en mamíferos se presentan en Wang et al., Patente de Estados- Unidos N° 6.075.150. France et al., documento WO 00/64863, informa sobre el uso de derivados del ácido 2, 4-diamino-3-hidrocrboxílico como inhibidores de proteasoma. Los derivados de ácido carboxílico como inhibidores de proteasoma se presentan en Yamaguchi et al., documento EP 1166781. Ditzel, et al., documento EP 0 995 757 informa sobre inhibidores bivalentes del proteasoma. Los derivados • 2-aminobencilestatina que inhiben de manera no covalente la actividad de . tipo quimiotripsina del proteasoma 20S los ha presentado Garcia-Echevarria, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett . , 2001, 11 , 1317. Algunos otros inhibidores de proteasoma pueden contener restos boro. Por ejemplo, Drexler et al., WO 00/64467, informa sobre un método de inducción selectiva de la apoptosis en células endoteliales activadas o células leucémicas que tienen un alto nivel de expresión de c-myc usando boronato tetrapeptídico que contienen inhibidores de proteasoma. Furet et al., en el documento WO 02/096933 informan sobre esteres y ácidos 2- [ [N- (2-amino-3- (heteroaril o aril) ropionil) aminoacil] amino] -alquilbóricos para el tratamiento terapéutico de enfermedades proliferativas en animales de sangre caliente. Las Patentes de Estados Unidos N° 6.083.903; 6.297.217; 5.780.454; 6.066.730; 6.297.217; 6.548.668; Solicitud de Patente de Estados Unidos N° 2002/0173488; y documento WO 96/13266 informan sobre compuesto éster y ácido bórico y sobre un método para reducir la velocidad de degradación de las proteínas. Un método para inhibir la replicación viral usando ciertos ácidos y esteres bóricos se presenta también en la Patente de Estados Unidos N° 6.465.433 y en el documento WO 01/02424. Las composiciones farmacéuticamente aceptables de ácidos bóricos y nuevos anhídridos de ácido bórico y compuestos boronoato éster se presentan en Pamondon, et al., Solicitud de Patente de Estados Unidos Publicada N° 2002/0188100. Una serie de ácidos di- y tripeptidil bóricos se muestra como inhibidores del proteasoma 20S y 26S en Gardner, et al., Biochem . J. , 2000, 346, 447. Otros peptidilos que contienen boro y compuestos relacionados se presentan en las Patentes de Estados Unidos N° 5.250.720; 5.242.904; 5.187.157; 5.159.060; 5.106.948; 4.963.655; 4.499.082; y en el documento WO 89/09225, WO 98/17679, WO 98/22496, WO 00/66557, WO 02/059130, WO 03/15706, WO 96/12499, WO 95/20603, WO 95/09838, WO 94/25051, WO 94/25049, WO 94/04653, WO 02/08187, EP 632026, y EP 354522. Existe un gran interés, como ponen de manifiesto las referencias anteriores, en fármacos que pueden modular la actividad del proteasoma. Por ejemplo, las moléculas capaces de inhibir la actividad del proteasoma pueden detener o retrasar la progresión del cáncer interfiriendo con la degradación ordenada de las proteínas del ciclo celular o supresores de tumores. En consecuencia, hay una necesidad creciente por inhibidores de proteasoma nuevos y/o mejorados. SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a nuevos compuestos de ácido bórico y éster bórico útiles como inhibidores de proteasoma y para modular la apoptosis. La presente invención también comprende métodos para la inhibición de proteasa multicatalítica ("MCP") asociada con ciertos trastornos, incluyendo el tratamiento de trastornos de pérdida muscular.
En una realización, se proporcionan compuestos que tienen la Fórmula (I) : m en la que los miembros constituyentes se definen más adelante, así como los miembros constituyentes preferidos. En otra realización, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I) y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En otra realización, la presente invención proporciona un método para inhibir la actividad del proteasoma que comprende poner en contacto un compuesto de Fórmula (I) con dicho proteasoma. En otra realización, la presente invención proporciona un método para tratar el cáncer que comprende administrar a un mamífero que tiene, o está predispuesto a, dicho cáncer una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I) . En otra realización, la presente invención proporciona un método para tratar el cáncer que comprende administrar a un mamífero que tiene, o está predispuesto a, dicho cáncer una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I) y donde dicho cáncer se selecciona entre cáncer de piel, próstata, colorectal, páncreas, riñon, ovario, mama, hígado, lengua, pulmón y tejido de músculo liso. En otra realización, la presente invención proporciona un método para tratar el cáncer que comprende administrar a un mamífero que tiene, o está predispuesto a, dicho cáncer una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I) , y donde dicho cáncer se selecciona entre leucemia, linfoma, linfoma no Hodgkin, mieloma y mieloma múltiple. En otra realización, la presente invención proporciona un método para tratar el cáncer que comprende administrar a un mamífero que tiene, o está predispuesto a, dicho cáncer una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I) junto con uno o más agentes antitumorales o anticancerosos y/o radioterapia. En otra realización, la presente invención proporciona un método para inhibir la actividad del factor de transcripción NF-?B que comprende poner en contacto I?B, el inhibidor del factor de • transcripción NF-?B, con un compuesto de Fórmula (I) . En otra realización, la presente invención proporciona un compuesto de Formula (I) para uso en terapia. En otra realización, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de Formula (I) para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer. Estas y otras características de los compuestos se expondrán de forma más extensa a lo largo de la descripción. DESCRIPCIÓN DE LAS REALIZACIONES DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona, entre otros, compuestos que pueden inhibir la actividad del proteasoma y que pueden usarse para el tratamiento de enfermedades y trastornos relacionados con la actividad del proteasoma. Los compuestos de la invención incluyen compuestos de Fórmula (I) : 0) o sales farmacéuticamente aceptables, formas estereoisoméricas o tautoméricas de los mismos, donde: R1 es alquilo C?~C ; Y es o H, CN, N02, o un grupo protector de guanidino; Z es -CN, -C(=0)0R5, ftalimido, -NHS02R6 o -NR3R4; R3 es H o alquilo C?-C4; R4 se selecciona entre el grupo aril-S02-, aril-C(=0)-, aralquil~C(=0) -, alquil-C (=0) -, aril-OC (=0) -, aralquil-OC(=0)-, alquil-0C(=0)-, aril-NHC (=0) - y alquil-NHC (=0) -; donde el arilo o aralquilo está opcionalmente sustituido con uno o más grupos metilo o metoxi; R5 es H, alquilo Ci-Cß, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, donde R5 está opcionalmente sustituido con uno o más halo, alquilo C?-C , arilo o heteroarilo; R6 es alquilo C?-C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-Cs, donde R6 está opcionalmente sustituido con uno o más halo, alquilo Cx-C4, arilo o heteroarilo; Q se selecciona entre B(OR9)2, éster pinanodiol bórico, éster pinacol bórico, éster 1, 2-etanodiol bórico, éster 1,3- propanodiol bórico, éster 1, 2-propanodiol bórico, éster 2,3-butanodiol bórico, éster 1, 1, 2, 2-tetrametiletanodiol bórico, éster 1, 2-diisopropiletanodiol bórico, éster 5, 6-decanodiol bórico, éster 1, 2-diciclohexiletanodiol bórico, éster biciclohexil-1, 1' -diol bórico y éster 1, 2-difenil-l, 2-etanodiol bórico; R9 es H, alquilo C?~C4, cicloalquilo, cicloalquilalquilo arilo, o aralquilo; m es 2, 3 ó 4; y n es 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ,11, 12, 13 ó 14. En algunas realizaciones, R1 es etilo, propilo o butilo.
En algunas realizaciones, R1 es 2-propilo. En algunas realizaciones, Q es éster pinanodiol bórico.
En algunas realizaciones, Q es éster biciclohexil-1, V -diol bórico. En algunas realizaciones, Q es B(OH)2. En algunas realizaciones, Z es ftalimido, NHR4 o CN. En algunas realizaciones, n es 8, 9, 10 u 11, En algunas realizaciones, m es 3, En algunas realizaciones, n es 8, 9, 10 u 11; y m es 3.
En algunas realizaciones, la presente invención proporciona compuestos de Formula (I): o sales farmacéuticamente aceptables, formas estereoisoméricas o tautoméricas de los mismos, donde: R1 es 2-propiló; Y es -N02; Z es -CN, -C(=0)OR5, ftalimido, -NHS02R6 o -NHR4; R4 se selecciona entre el grupo aril-S02-, alquil-S02-, aril-C(=0)-, aralquil-C(=0)-, alquil-C (=0) -, aril-OC (=0) -, aralquil-OC(=0)-, alquil-OC (=0) -, aril-NHC (=0) - y alquil- NHC(=0)-; donde dicho arilo o aralquilo está opcionalmente sustituido con uno o más grupos metilo o metoxi; R5 es H o alquilo C?-C6, donde dicho alquilo está opcionalmente sustituido con uno o más halo, arilo o heteroarilo; R6 es alquilo C?-C6, donde dicho alquilo está opcionalmente sustituido con uno o más halo, arilo o heteroarilo; Q se selecciona entre B(OR9)2, éster pinanodiol bórico, éster pinacol bórico, éster 1, 2-etanodiol bórico, éster 1,3-propanodiol bórico, éster 1, 2-propanodiol bórico, éster 2,3-butanodiol bórico, éster 1, 1, 2, 2-tetrametiletanodiol bórico, éster 1, 2-diisopropiletanodiol bórico, éster 5, 6-decanodiol bórico, éster 1, 2-diciclohexiletanodiol bórico, éster biciclohexil-1, 1' -diol bórico y éster 1, 2-difenil-l, 2-etanodiol bórico; R9 es H o alquilo Cx-C4; m es 3; y n es 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 u 11, En algunas realizaciones, la presente invención proporciona compuestos de Formula (I-s) : (I-s) o una sal farmacéuticamente aceptable, formas estereoisoméricas o tautoméricas de los mismos, donde: R1 es alquilo C?~C4; Y es CN o N02; Z es -CN, -C(=0)OR5, ftalimido, -NHS02R6 o -NR3R4; R3 es H o alquilo Cx-C4; R4 se selecciona entre el grupo aril-S02-, alquil-S02-, aril-C(=0)-, aralquil-C(=0)-, alquil-C (=0) -, aril-OC (=0) -, aralquil-0C(=0)-, alquil-OC (=0) -, aril-NHC (=0) - y alquil- NHC(=0)-; donde dicho arilo o aralquilo está opcionalmente sustituido con uno o más grupos metilo o metoxi; R5 es H, alquilo C?-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, donde R5 está opcionalmente sustituido con uno o más halo, alquilo C?-C4, arilo o heteroarilo; R6 es alquilo C?-C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, donde R6 está opcionalmente sustituido con uno o más halo, alquilo C?-C4, arilo o heteroarilo; Q se selecciona entre B(OR9)2, éster pinanodiol bórico, éster 1, 2-diciclohexiletanodiol bórico y éster biciclohexil-1,1' -diol bórico; R9 es H o alquilo C?~C4; m es 2, 3 ó 4; y n es 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10 ,11, 12, 13 ó 14 En algunas realizaciones, la presente invención proporciona compuestos de Formula (I-s) (I-s) o formas de sal farmacéuticamente aceptables de los mismos. En otras realizaciones, la presente ' invención proporciona compuestos de Formula (I-s) seleccionados entre: Ejemplo 10, Ejemplo 11, Ejemplo 12, Ejemplo 13, Ejemplo 14, Ejemplo 15, Ejemplo 16, Ejemplo 17, Ejemplo 18, Ejemplo 19, Ejemplo 20, Ejemplo 21, Ejemplo 22, Ejemplo 23 y Ejemplo 24; o una sal farmacéuticamente aceptable o una forma de base libre de los mismos. Se aprecia que ciertas características de la invención que, por claridad, se describen en el contexto de realizaciones diferentes, también pueden proporcionarse en combinación con una realización unitaria. En cambio, diversas características de la invención que, por brevedad, se describen en el contexto de una realización unitaria, también pueden proporcionarse de forma separada o en cualquier subcombinación adecuada. Como se usa en este documento, la expresión "ácido bórico" se refiere a un compuesto que contiene un resto B(OH)2. En algunas realizaciones, los compuestos ácido bórico pueden formar anhídridos oligoméricos por deshidratación del resto bórico. Por ejemplo, Snyder, et al., J. Am . Chem . Soc, 1958, 80, 3611 informa sobre ácidos arilbóricos oligoméricos. De seta manera, a menos que se indigue otra cosa, "ácido bórico", o una Fórmula química que contiene un resto -B(OH)2, pretende incluir ácidos bóricos libres, anhídridos oligoméricos, incluyendo pero sin limitación, dímeros, trímeros, tetrámeros y mezclas de los mismos. Como se usa en este documento, "anhídrido de ácido bórico" o "anhídrido bórico" se refieren a un compuesto formado por la combinación de dos o más moléculas de un compuesto ácido bórico de Fórmula (I) , con pérdida de una o más moléculas de agua de los restos ácido bórico. Cuando se pone en contacto con agua, el compuesto anhídrido de ácido bórico puede hidratarse para liberar el compuesto ácido bórico libre. En algunas realizaciones, la estructura del anhídrido de ácido bórico puede contener dos, tres, cuatro o más unidades de ácido bórico y puede tener una configuración lineal o cíclica. En algunas realizaciones, el compuesto anhídrido de ácido bórico existe sustancialmente en una forma oligomérica unitaria; sin embargo, los anhídridos de ácido bórico también incluyen mezclas de diferentes anhídridos de ácido bórico oligoméricos así como ácidos bóricos. Los ejemplos no limitantes de anhídridos de ácido bórico de la invención incluyen compuestos de Fórmula (II) y (III) donde G es un resto de Fórmula (IV) y t es de O a lO ó l, 2, 3 ó 4.
(El) En algunas realizaciones, al menos aproximadamente el 80% del ácido bórico presente en un compuesto anhídrido de ácido bórico existe en una forma de anhídrido oligomérico unitaria. En otras realizaciones, al menos 85, aproximadamente 90, aproximadamente 95 o ' aproximadamente 99% del ácido bórico presente en el anhídrido de ácido bórico existe en una forma de anhídrido oligomérico unitaria. En algunas realizaciones, el compuesto anhídrido de ácido bórico consta esencialmente de un anhídrido de ácido bórico oligomérico unitario. En otras realizaciones más, el compuesto anhídrido de ácido bórico consta de un anhídrido de ácido bórico oligomérico unitario. En otras realizaciones, el compuesto anhídrido de ácido bórico contiene una boroxina de Fórmula (III), en la que t es 1. Los compuestos anhídrido de ácido bórico pueden prepararse a partir del compuesto ácido bórico correspondiente por exposición a condiciones deshidratantes, incluyendo, por ejemplo, cristalización, liofilización, exposición a calor y/o exposición a un agente secante. Algunos disolventes de cristalización adecuados incluyen acetato de etilo, diclorometano, hexanos, éter, benceno, acetonitrilo, etanol y mezclas de los mismos. Como se usa en este documento, la expresión "éster bórico" o ?éster de ácido bórico" se refiere a un derivado de éster de un compuesto ácido bórico. Como se usa en este documento, la expresión "éster bórico cíclico" pretende indicar un resto bórico cíclico estable de fórmula general -B(OR) (OR) en la gue dos sustituyentes R tomados juntos contienen de 2 a 20 átomos de carbono, y opcionalmente, un heteroátomo que puede ser N, S u O. Los esteres bóricos cíclicos se conocen en la técnica. Los ejemplos de esteres bóricos cíclicos incluyen, pero sin limitación, éster pinanodiol bórico, éster pinacol bórico, éster 1, 2-etanodiol bórico, éster 1, 3-propanodiol bórico, éster 1, 2-propanodiol bórico, éster 2, 3-butanodiol bórico, éster 1, 1, 2, 2-tetrametiletanodiol bórico, éster 1,2-diisopropiletanodiol bórico, éster 5, 6-decanodiol bórico, 1, 2-diciclohexiletanodiol bórico, biciclohexil-1, 1' -diol, éster dietanolamina bórico y éster 1, 2-difenil-l, 2-etanodiol bórico. Como se usa en este documento, el término "alquilo" o "alquileno" pretende indicar un grupo hidrocarburo saturado que es de cadena lineal o ramificada. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen metilo (Me), etilo (Et) , propilo (por ejemplo, n-propilo y isopropilo), butilo (por ejemplo, n-butilo, isobutilo, s-butilo, t-butilo), pentilo (por ejemplo, n-pentilo, isopentilo, neopentilo) y similares. ün grupo alquilo puede contener de 1 a aproximadamente 20, de 2 a aproximadamente 20, de 1 a aproximadamente 10, de 1 a aproximadamente 8, de 1 a aproximadamente 6, de 1 a aproximadamente 4, o de 1 a aproximadamente 3 átomos de carbono. Como se usa en este documento, el término "alquenilo" se refiere a un grupo alquilo que tiene uno o más dobles enlaces carbono-carbono. Los ejemplos de grupos alquenilo incluyen etenilo, propenilo, butenilo, pentenilo, hexenilo, butadienilo, pentadienilo, hexadienilo y similares. Como se usa en este documento, el término "alquinilo" se refiere a un grupo alquilo que tiene uno o más triples enlaces carbono-carbono. Los ejemplos de grupos alquinilo incluyen etinilo, propinilo, butinilo, pentinílo y similares. Como se usa en este documento, el término "haloalquilo" se refiere a un grupo alquilo que tiene uno o más sustituyentes halógeno. Los ejemplos de grupos haloalquilo incluyen CF3, C2F5, CHF2, CC13, CHC12, C2C15 y similares, ün grupo alquilo en el que todos los átomos de hidrógeno se reemplazan con átomos de halógeno puede denominarse "perhaloalquilo." Los ejemplos de grupos perhaloalquilo incluyen CF3 y C2F5. Como se usan en este documento, los grupos "carbociclilo" son restos de hidrocarburos cíclicos saturados (es decir, no contienen dobles o triples enlaces) o insaturados (es decir, contienen uno o más dobles o triples enlaces) . Los grupos carbociclilo pueden ser mono- o policíclicos. Los ejemplos de grupos carbociclilo incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciciohexilo, cicioheptilo, ciclopentenilo, 1, 3-ciclopentadienilo, ciciohexenilo, norbornilo, norpinilo, norcarnilo, adamantilo, fenilo y similares. Los grupos carbociclilo pueden ser aromáticos (por ejemplo, "arilo") o no aromáticos (por ejemplo, "cicloalquilo") . En algunas realizaciones, los grupos carbociclilo pueden tener de 3 a aproximadamente 20, de 3 a aproximadamente 10, o de 3 a aproximadamente 7 átomos de carbono. Como se usa en este documento, el término "arilo" se refiere a grupos carbociclilo aromáticos que incluyen hidrocarburos aromáticos, monocíclicos o policíclicos tales como, por ejemplo, fenilo, naftilo, antracenilo, fenantrenilo y similares. En algunas realizaciones, los grupos arilo tienen de 6 a aproximadamente 18 átomos de carbono. Como se usa en este documento, el término "cicloalquilo" se refiere a grupos carbociclilo no aromáticos incluyendo grupos alquilo, alquenilo y alquinilo ciclados. Los grupos cicloalquilo pueden incluir sistemas de anillos bi- o policíclicos. Los ejemplos de grupos cicloalquilo incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciciohexilo, cicioheptilo, ciclopentenilo, ciciohexenilo, ciciohexadienilo, cicloheptatrienilo, norbornilo, norpinilo, norcarnilo, adamantilo y similares. También se incluyen en la definición de cicloalquilo restos que tienen uno o más anillos aromáticos condensados (es decir, que tienen un enlace en común con) al anillo cicloalquilo, por ejemplo, derivados benzo de ciclopentano (indanilo) , ciciohexano (tetrahidronaftilo) y similares. Como se usan en este documento, los grupos "heterocarbociclilo" pueden ser grupos carbociclilo saturados o insaturados en los que uno o más de los átomos de carbono que forman el anillo del grupo carbociclilo se reemplazan con un heteroátomo tal como O, S o N. Los grupos heterocarbociclilo pueden ser aromáticos (por ejemplo, "heteroarilo") o no aromáticos (por ejemplo, "heterocicloalquilo") . Los grupos heterocarbociclilo pueden corresponder a grupos heteroarilo hidrogenados y parcialmente hidrogenados. Los grupos heterocarbociclilo pueden contener, además de al menos un heteroátomo, de aproximadamente 1 a aproximadamente 20, de aproximadamente 2 a aproximadamente 10, o de aproximadamente 2 a aproximadamente 7 átomos de carbono y pueden unirse a través de un átomo de carbono o heteroátomo. Además, los grupos heterocarbociclilo pueden estar sustituidos o sin sustituir. Los ejemplos de grupos heterocarbociclilo incluyen morfolino,, tiomorfolino, piperazinilo, tetrahidrofuranoilo, tetrahidrotienilo, 2,3-dihidrobenzofurilo, 1, 3-benzodioxol, benzo-1, 4-dioxano, piperidinilo, pirrolidinilo, isoxazolidinilo, isotiazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, tiazolidinilo, imidazolidinilo y similares. Como se usan en este documento, los grupos "heteroarilo" son .grupos heterocarbociclilo aromáticos e incluyen hidrocarburos aromáticos, monocíclicos y bicíclicos que tienen al menos un miembro heteroátomo del anillo tal como azufre, oxígeno o nitrógeno. Los grupos heteroarilo incluyen, sin limitación, piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridazinilo, triazinilo, furilo, quinolilo, isoquinolilo, tienilo, imidazolilo, tiazolilo, indolilo, pirrolilo, oxazolilo, benzofurilo, benzotienilo, benztiazolilo, isoxazolilo, pirazolilo, triazolilo, tetrazolilo, indazolilo, 1, 2, 4-tiadiazolilo, isotiazolilo, benzotienilo, purinilo, carbazolilo, bencimidazolilo y similares. En algunas realizaciones, los grupos heteroarilo pueden tener de 1 a aproximadamente 20 átomos de carbono, y en otras realizaciones de aproximadamente 3 a aproximadamente 20 átomos de carbono. En algunas realizaciones, los grupos heteroarilo tienen de 1 a aproximadamente 4, de 1 a aproximadamente 3, o de 1 a 2 heteroátomos. Como se usa en este documento, el término "heterocicloalquilo" se refiere a un grupo heterocarbociclilo no aromático que incluye grupos alquilo, alquenilo y alquinilo ciclados donde uno o más de los átomos de carbono que forman el anillo se reemplazan con un heteroátomo tal como un átomo de O, N o S. También se incluyen en la definición de heterocicloalquilo restos que tienen uno o más anillos aromáticos condensados (es decir, que tienen un enlace en común con) al anillo heterocíclico no aromático, por ejemplo ftalimidilo, naftalimidilo, diimidilo piromelítico, ftalanilo y derivados benzo de heterociclos saturados tales como grupos indoleno e isoindoleno. Como se usa en este documento, el término "halo" o "halógeno" incluye flúor, cloro, bromo y yodo. Como se usa en este documento, el término "alcoxi" se refiere a un grupo -O-alquilo. Los ejemplos de grupos alcoxi incluyen metoxi, etoxi, propoxi (por ejemplo, n-propoxi e isopropoxi), t-butoxi y similares.
Como se usa en este documento, el término "tioalcoxi" se refiere a un grupo alcoxi en el que el átomo de 0 se reemplaza con un átomo de S . Como se usa en este documento, el término "ariloxi" se refiere a un grupo -O-arilo. ün ejemplo de grupo ariloxi es fenoxi. Como se usa en este documento, el término "aralquilo" se refiere a un resto alquilo sustituido con un grupo arilo. Los ejemplos de grupos aralquilo incluyen grupos bencilo y naftilmetilo. En algunas realizaciones, los grupos arilalguilo tienen de 7 a 11 átomos de carbono. Como se usa en este documento, el término "amino" se refiere a un grupo NH2. El término "alquilamino" se refiere a un grupo amino sustituido con un grupo alquilo y el término "dialquilamino" se refiere a un grupo amino sustituido con dos grupos alquilo. Por el contrario, el término "aminoalquilo" se refiere a un grupo alquilo sustituido con un grupo amino . Como se usa en este documento, el término "cicloalquilalquilo" se refiere a un grupo alquilo sustituido con un grupo cicloalquilo. Como se usa en este documento, la expresión "grupo protector" se refiere a un grupo funcional químico que puede unirse selectivamente a y retirarse de funcionalidades, tales como grupos hidroxilo, grupos amino y grupos carboxilo. Los grupos protectores se introducen normalmente en un compuesto químico para proporcionar dicha funcionalidad inerte a las condiciones de reacción químicas a las que se expone el compuesto. Puede emplearse cualquiera de una diversidad de de grupos protectores con la presente invención. ün grupo protector de un resto amino puede denominarse "grupo protector de amino" y un grupo protector de un resto guanidino puede denominarse "grupo protector de guanidino". Los grupos protectores de amino y guanidino pueden tener las fórmulas aril-S02-, alquil-S02-, aril-C(=0)-, aralquil-C (=0) -, alquil-C(=0)-, aril-OC (=0) -, aralquil-OC (=0) -, alquil-OC (=0) -, aril-NHC (=0) -, alquil-NHC (=0) - y similares, donde dichos grupos alquilo, arilo y aralquilo pueden estar sustituidos o sin sustituir. Los ejemplos de grupos protectores de amino y guanidino también pueden incluir t-butiloxicarbonilo (BOC) , fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc) , benciloxicarbonilo (Cbz) y un grupo ftalimido. Otros grupos protectores incluyen los siguientes restos: MTR MTS PMC ; y TOS. Otros grupos protectores representativos pueden encontrarse en T. W. Green y P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis , 3a Ed., Wiley & Sons, Inc., Nueva York (1999) , que se incorpora en este documento como referencia en su totalidad. Como se usa en este documento, el término "sustituido" indica que al menos un átomo de hidrógeno de un grupo químico se reemplaza con un resto no hidrógeno. Los ejemplos de sustituyentes incluyen F, Cl, Br, I, alquilo C?-C6, alquenilo C?-C6, alquinilo Cr-C6, haloalquilo, NRERF, N3, N02, CN, CNO, CNS, C(=0)ORE, RECO, REC(=0)0, RECONRE, RERFNCO, ureído, 0RE SRE S02-alquilo, S02-arilo y S02-NRERF, donde cada uno de RE y RF es, independientemente, H o alquilo Ci-Ce- Como alternativa, RE y RF pueden combinarse, con el nitrógeno al que están unidos, para formar un anillo heterocíclico de 5 a 7 miembros, por ejemplo pirrolidinilo, piperidinilo, morfolinilo, piperazinilo y N-metilpiperazinilo. Cuando un grupo químico de este documento está "sustituido", éste puede tener hasta la valencia total de sustitución, con la condición de que el compuesto resultante sea un compuesto estable o una estructura estable; por ejemplo, un grupo metilo puede estar sustituido con 1, 2 ó 3 sustituyentes, un grupo metileno puede estar sustituido con 1 ó 2 sustituyentes, un grupo fenilo puede estar sustituido con 1, 2, 3, 4 ó 5 sustituyentes, y similares. Como se usa en este documento, la expresión "compuesto estable" o "estructura estable" se refiere a un compuesto que es lo suficientemente robusto para sobrevivir al aislamiento en un grado útil de pureza de una mezcla de reacción, y preferiblemente capaz de producir una formulación en un agente terapéuticamente eficaz. La presente invención se refiere únicamente a compuestos estables. Los compuestos descritos en este documento pueden ser asimétricos (por ejemplo, que tienen uno o más estereocentros) . Se incluyen todos los estereoisómeros, tales como enantiómeros y diastereómeros, a menos gue se indique otra cosa. Los compuestos de la presente invención que contiene átomos de carbono sustituidos asimétricamente pueden aislarse en formas ópticamente activa o racémica. Los métodos sobre cómo preparar formas ópticamente activas a partir de materiales de partida ópticamente activos se conocen en la técnica, tales como por resolución de mezclas racémicas o por síntesis estereoselectiva. Los compuestos de la invención también incluyen formas tautoméricas, tales como tautómeros ceto-enol. Las formas tautoméricas pueden estar en equilibrio o estéricamente bloqueadas en una forma por sustitución apropiada. Los compuestos de la invención también incluyen todos los isótopos de átomos que se encuentran en los intermedios o en los compuestos fiables. Los isótopos incluyen aquellos átomos que tienen el mismo número atómico pero diferentes números másicos . Por ejemplo, los isótopos de hidrógeno incluyen tritio y deuterio. La expresión "farmacéuticamente aceptable" se emplea en este documento para indicar aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que son adecuadas, dentro del alcance del juicio médico, para el uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin inducir una toxicidad excesiva, irritación, respuestas alérgica u otro problema o complicación, en proporción a una relación beneficio/riesgo razonable. La presente invención también incluye sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos descritos en este documento. Como se usa en este documento, la expresión "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a derivados de los compuestos descritos donde el compuesto parental se modifica convirtiendo un resto ácido o base existente en su forma de sal. Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero sin limitación, sales de ácidos minerales u orgánicos de residuos básicos tales como aminas; sales alcalinas u orgánicas de residuos ácidos tales como ácidos carboxílicos; y similares. Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención incluyen las sales no tóxicas convencionales o las sales amónicas cuaternarias del compuesto parental formado, por ejemplo, a partir de ácidos inorgánicos u orgánicos no tóxicos. Por ejemplo, dichas sales no tóxicas convencionales incluyen aquellas derivadas de ácidos inorgánicos tales como clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, sulfámico, fosfórico, nítrico y similares; y las sales preparadas a partir de ácidos orgánicos tales como acético, propiónico, succínico, glicólico, esteárico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, pamoico, maleico, hidroximaleico, fenilacéticó, glutámico, benzoico, salicílico, sulfanílico, 2-acetoxibenzoico, fumárico, toluenosulfónico, metanosulfónico, etanodisulfónico, oxálico, isetiónico y similares. Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención pueden sintetizarse a partir del compuesto parental que contiene un resto ácido o básico por métodos químicos convencionales. En general, dichas sales pueden prepararse haciendo reaccionar las formas de ácido o base libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o ácido apropiado en agua o en un disolvente orgánico, o en una mez.cla de los dos; en general, se prefiere un medio acuoso de tipo éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo. Las listas de sales adecuadas se encuentran en Remington' s Pharmaceutical Sciences, 17a ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, pág. 1418, cuya descripción se incorpora en este documento como referencia. Síntesis Los compuestos de la invención, incluyendo sales y solvatos de los mismos, pueden prepararse usando técnicas de síntesis orgánica conocidas y pueden sintetizarse de acuerdo con cualquiera de diversas vías sintéticas posibles. Las reacciones para preparar los compuestos de la invención pueden realizarse en disolventes adecuados que pueden seleccionarse fácilmente por un especialista en la técnica de síntesis orgánica. Los disolventes adecuados pueden ser sustancialmente no reactivos con los materiales de partida (reactivos) , los intermedios o productos a las temperaturas a las que se realizan las reacciones, es decir, temperaturas que pueden variar de la temperatura de congelación del disolvente a la temperatura de ebullición del disolvente. Una reacción dada puede realizarse en un disolvente o en una mezcla de más de un disolvente. Dependiendo de la etapa de reacción particular, pueden elegirse los disolventes adecuados para la etapa de reacción particular. La preparación de compuestos de la invención puede implicar la protección y desprotección de diversos grupos químicos. La necesidad de protección y desprotección, y la selección de los grupos protectores adecuados pueden determinarse fácilmente por un especialista en la técnica. La química de los grupos protectores puede encontrarse, por ejemplo, en T. W. Greene y P. G. M. Wuts, Protectíve Groups in Organic Synthesis, 3a Ed., Wiley & Sons, Inc., Nueva York (1999) , que se incorpora en este documento como referencia en su totalidad. Los compuestos de la invención pueden prepararse por acoplamiento secuencial de los tres componentes de fragmentos (Fl, F2 y F3) . Fragmento Fl La síntesis de compuestos de la invención puede implicar un fragmento que contiene boro (Fl) que tiene una estructura indicada por la Fórmula (A) .
(A) El resto éster bórico de Fl puede incluir, por ejemplo, un diol éster tal como el que se indica por los átomos de oxígeno que conectan el bucle de la Fórmula (A) . La estereoquímica del átomo de carbono alfa con el átomo de boro en la Fórmula (A) puede controlarse usando un grupo éster bórico estereoquímicamente puro, o sustancialmente estereoquímicamente puro. Como ejemplo, el fragmento Fl puede prepararse haciendo reaccionar un compuesto de Fórmula (B) (que muestra un éster pinanodiol bórico obtenido a partir de (+) -pinanodiol) con una base fuerte (por ejemplo, diisoropilamida de litio o diciclohexilamida de litio) en presencia de un exceso de diclorometano o dibrornómetaño, seguido de adición de un ácido de Lewis (por ejemplo ZnCl2, ZnBr2 o FeCl ) para producir un compuesto de Fórmula (C) (en la que L es halo) que tiene un estereocentro introducido nuevamente en el carbono alfa al boro.
(C) El compuesto de Fórmula (B) también puede prepararse de acuerdo con un procedimiento de dos etapas que implica la reacción de un trialcoxiborano, preferiblemente triisopropoxiborano, con (1S, 2S, 3R, 5S) -(+) -pinanodiol, para dar un intermedio mono-alcoxi- [ (1S, 2S, 3R, 5S) - (+) -pinanodiol] borano en el que dos de los grupos alcoxi del trialcoxi-borano se han reemplazado con (1S, 2S, 3R, 5S) - (+) -pinanodiol. Este pinanodiol alcoxi borano mixto, después de la reacción con el derivado organometálico apropiado, por ejemplo el reactivo de Grignard R1CH2MgBr o el alquillitio R1CH2Li, da el compuesto (B) con buenos rendimientos y purezas. El proceso que comienza con triisopropoxiborano para dar el pinanodiol isopropoxi borano mixto intermedio ( F) y los compuestos de Fórmula (B) se representa en el siguiente esquema.
El compuesto de Fórmula (C) , a su vez, puede hacerse reaccionar con una amida alcalina (por ejemplo, bis (trimetilsilil) amida de litio, bis (trimetilsilil) amida sódica y bis (trimetilsilil) amida potásica) u otro nucleófilo que invierta de manera eficaz el estereocentro formado nuevamente (por ejemplo por medio de un mecanismo de tipo SN2) e introduzca un grupo amina (NR2) en lugar del grupo halo (por ejemplo, cloro) , formando un compuesto de Fórmula (D) (en la que R puede ser, por ejemplo, alquilo, Si (alquilo) 3, arilo o aralquilo).
(D) El compuesto de Fórmula (D) puede hacerse reaccionar además con un agente capaz de convertir el grupo NR2 en NH2, o una sal del mismo, para formar un fragmento Fl sustancialmente capaz de acoplarse con otro fragmento a través de la amina. Un agente adecuado para convertir el grupo NR2 en NH2 puede ser un ácido prótico tal como HCl, por ejemplo cuando R es un grupo sililo (por ejemplo, trimetilsililo) . Fragmento F2 La sección media de compuestos de la presente invención puede representarse por el fragmento F2 que se acopla al fragmento Fl mediante formación de enlace un enlace peptídico para formar un intermedio F2-F1. Los métodos para acoplar compuestos a través de enlaces peptídicos, o enlaces amida, se conocen bien en la técnica y se describen, por ejemplo, en The Pept des : Analysis, Synthesis, Biology, Vol. I., eds. Gross, et al., Academic Press, 1979. Un ejemplo de fragmento F2 se proporciona en la Fórmula (E) (Pg es un grupo protector de amino, Y y m son como se han definido en este documento) . Además, la protección del grupo amino de aminoácidos usando Boc u otros grupos protectores de amino se conoce bien en la técnica .
(E) Los compuestos de Fórmula (E) son aminoácidos o derivados de aminoácidos disponibles en el mercado o se preparan por métodos convencionales conocidos por un especialista en la técnica. Fragmentos F3 Un fragmento (F3) adicional puede acoplarse al fragmento F2 del intermedio F2-F1 por formación de enlaces peptídicos. Los métodos para acoplar compuestos a través de enlaces peptídicos, o enlaces amida, se conocen bien en la técnica y se describen, por ejemplo, en The Peptides : Analysis , Synthesis, Biology, Vol. I., eds. Gross, et al., Academic Press, 1979. ün ejemplo de fragmento F2 se proporciona en la Fórmula (F) (R2 es H, y Z y n son como se han definido en este documento) CF) Otros medios de acoplamiento se conocen en la técnica y también son adecuados. Los fragmentos F3 pueden obtenerse de distribuidores comerciales o fabricarse por métodos conocidos por un especialista en la técnica. Las reacciones pueden controlarse de acuerdo con un método adecuado conocido en la técnica. Por ejemplo, la formación de productos puede controlarse por medios espectroscópicos, tales como espectroscopia de resonancia magnética nuclear (por ejemplo, aH o 13C) , espectroscopia de infrarrojos, espectrofotometría (por ejemplo, UV-visible) o espectrometría de masas, o por cromatografía tal como cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) o cromatografía de capa fina. Los compuestos de la invención pueden prepararse de acuerdo con métodos para preparar ácidos aminobóricos, esteres de los mismos, y compuestos relacionados descritos en la técnica, como en las Patentes de Estados Unidos N° 4.537.773 y 5.614.649, que se incorporan en este documento como referencia en su totalidad. Los compuestos de la invención que contiene esteres bóricos, tales como pinanodiol esteres, pueden hidrolizarse mediante cualquier medio adecuado para preparar derivados de ácido bórico (-B(OH)2) correspondientes. Las condiciones de hidrólisis pueden incluir poner en contacto un éster bórico con exceso de ácido, por ejemplo un ácido prótico como HCl.
En cambio, los ácidos bóricos pueden esterificarse poniendo en contacto el compuesto ácido (-B(OH)2) con un alcohol tal como un diol durante un tiempo suficiente para producir el éster correspondiente. La reacción de esterificación puede catalizarse con ácido o base. La invención se describirá con más detalle a modo de ejemplos específicos. Los siguientes ejemplos se ofrecen con fines ilustrativos, y no pretenden limitar la invención de manera alguna. Los especialistas en la técnica reconocerán fácilmente una diversidad de parámetros no críticos que pueden cambiarse o modificarse para producir esencialmente los mismos resultados. EJEMPLOS Ejemplo 1 Síntesis de sal clorhidrato de (IR) -1- [ (3aS,4S, 6S,7aR) -hexahidro-3a, 5 , 5-trimetil-4 , 6-metano-l , 3 , 2-benzodioxaboroI-2-il] -3-metilbutilamina Etapa 1 : 2- (2-Metilpropil) ~ (3aS, 4S, 6S, laR) -hexahidro-3a, 5 ,5-trxmetil-4 , 6-metileno-l , 3 , 2-benzodioxaborol Una mezcla de (+) -pinanodiol (23,9 g, 0,140 mol) y ácido 2-metilpropilbórico (15 g, 0,147 mol) en éter dietílico (300 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 24 h. La mezcla se secó sobre sulfato sódico anhidro y se purificó por cromatografía en columna (Gel de Sílice, malla 230-400) , eluyendo con una mezcla 90:10 de hexano: acetato de etilo. El producto se obtuvo en forma de un aceite transparente (32, 6 g, rendimiento de 94%) . 1H RMN (DMSO-d5) : 4,28 (1H, dd, J = 8,8 Hz, 2,0); 2,30 (ÍH, m) ; 2,18 (ÍH, m) ; 1,96 (1H, t, J = 5,3); 1,86 (1H, m) ; 1,78 (ÍH, ajustado, J = 6,8); 1,68 (ÍH, m) ; 1,30 (3H, s) ; 1,25 (3H, s); 1,01 (ÍH, d) ; 0,9 (6H, d, J = 6,6); 0,81 (3H,s) ; 0, 69 (2H, m) . Etapa 2: 2- [ (1S) ~l-Cloro-3-metilbutil] - (3aS,4S, 6S,laR) -hexahidro-3a ,5 , 5-trimetíl-4 , 6-metano-l ,3 , 2-benzodioxaborol Se preparó una solución de diisopropilamida de litio mediante la adición de una solución 10,0 M de butillitio en hexano (25,4 ml, 0,254 mol) a una solución de diisopropilamina (35,7 ml, 0,254 mol) en tetrahidrofurano seco (60 ml) a -50°C y se dejó que la temperatura aumentara a -30°C. Esta solución se transfirió mediante una cánula a una solución de 2- (2-metilpropil) - (3aS, 4S, 6S, 7aR) -hexahidro-3a, 5, 5-trimetil-4, 6-metano-l, 3, 2-benzodioxaborol de la Etapa 1 (50 g, 0,212 mol) y CH2C12 (50 ml, 0,848 mol) en tetrahidrofurano seco (700 ml) , mientras se mantenía la temperatura por debajo de -70°C. Después, se añadió una solución 1,0 M de cloruro de cinc seco en éter dietílico (339 ml, 0,339 mol) durante un periodo de 30 minutos mientras se mantenía la temperatura interna por debajo de -70°C. La mezcla de reacción se agitó a -78 °C durante 3 horas y después se dejó calentar a temperatura ambiente. Después de retirar los disolventes por evaporación rotatoria, el residuo se repartió entre éter de petróleo (1000 ml) y una solución acuosa al 10% de cloruro amónico (800 ml) . La capa acuosa se extrajo de nuevo con éter de petróleo (300 ml) . Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron. El producto se obtuvo en forma de un aceite pardo (59,0 g, rendimiento de 98%) que contenía aproximadamente 9% mol/mol de material de partida ("""H RMN) , y se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. 1H RMN (DMSO-d6) : 4,43 (1H, dd, J = 8,8, 1,8); 3,59 (ÍH, m) ; 2,33 (ÍH, ) ; 2,21 (1H, m) ; 2,01 (1H, m) ; 1,88 (ÍH, m) ; 1,84-1,55 (5H, m) ; 1,34 (3H, s); 126 (3H, s); 1,09 (ÍH, , J = 10,1); 0,9 (3H, d, J = 6,8); 0,87 (3H, d, J = 6:4); 0,82 (3H, s) . Etapa 3 : N,N-Bis (trimetilsilil) - (IR) -1- [3aS, 4S, 6S, laR) -hexahidro-3a , 5 , 5-trimetil-4 , 6-metano-l , 3 , 2-benzodioxaborol-2-xl] -3-metxlbutxlamina Se añadió una solución 1,0 M de bis (trimetilsilil) amida de litio en tetrahidrofurano (189 ml, 0,189 mol), durante 30 minutos, a una solución de 2- [ (1S) -l-cloro-3-metilbutil] - (3aS, 4S, 6S, 7aR) -hexahidro-3a, 5, 5-trimetil-4, 6-metano-l, 3, 2-benzodioxaborol bruto de la Etapa 2 (59,0 g, pureza del 91%, 0,189 mol) en tetrahidrofurano (580 ml) mientras se enfriaba a -78°C. La mezcla de reacción se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente durante una noche. El disolvente se retiró por evaporación rotatoria y el residuo se recogió con hexano seco (800 ml) . La suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y después el sólido se retiró por filtración sobre una torta de celite, que se lavó con hexano seco (3 x 100 ml) . El filtrado se concentró, dando un producto puro de forma satisfactoria en forma de un aceite pardo (79 g) con rendimiento prácticamente cuantitativo. El producto ' se usó para la siguiente etapa sin purificación adicional . 1H RMN (DMSO-d6) : 4,33 (ÍH, dd, J = 1,5 Hz, 8,6); 2,58 (ÍH, m) ; 2,29 (1H, m) ; 2,18 (ÍH, m) ; 1,95 (ÍH, t, J = 5,9); 1,85 (ÍH, m) ; 1,9-1,55 (3H, m) ; 1,31 (3H, s) ; 1,24 (3H, s) ; 1,17 (1H, m) ; 1,01 (ÍH, d, J = 10,6); 0,85 (3H, d, J = 6,6), 0,83 (3H, d, J = 6,6); 0,80 (3H, s) ; 0,08 (18H, s) . Etapa 4 : Sal clorhidrato de (IR) -1- [ (3aS , 4S , 6S , 7aR) -hexahidro-3a , 5 , 5-trimetil- , 6-metano-l , 3, 2-benzodioxaborol -2-il] -3-metilbutilamina A una solución de N,N-bis (trimetilsilil) - (IR) -1-[ (3aS, 4S, 6S, 7aR) -hexahidro-3a, 5, 5-trimetil-4, 6-metano-l, 3, 2-benzodioxaborol-2-il] -3-metilbutilamina bruta de la Etapa 3 (79 g, 0,193 mol) en una mezcla de dioxano (100 ml) y éter dietílico (200 ml) se le añadió una solución 4 N de cloruro de hidrógeno en dioxano (193 ml, 0,772 mol), mientras se enfriaba a 0°C. Después, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas y se concentró. El residuo se recogió con hexano anhidro (500 ml) y se añadió una solución 2 M de cloruro de hidrógeno en éter dietílico (48 ml, 0,096 mol) . La mezcla se agitó a 0°C durante 1 hora y después se concentró. El residuo se recogió con hexano anhidro y la suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante una noche. El sólido se recogió por filtración y se secó al vacío, proporcionando 38,1 g de producto (rendimiento del 66%) . Se obtuvo un segundo cultivo (4,13 g, rendimiento del 7%) a partir de las aguas madre. XH RMN (DMSO-d6) : 7,85 (3H, a); 4,45 (ÍH, dd, J = 9,2 Hz); 2,78 (ÍH, m) ; 2,34 (1H, m) ; 2,21 (1H, m) ; 2,01 (1H, t, J = 5,3); 1,89 (1H, m) ; 1,82-1,65 (2H, m) ; 1,49 (ÍH, m) ; 1,38 (3H, s); 1,27 (3H, s); 1,12 (1H, d, J = 1,12); 0,87 (6H, d, J = 6, 6) ; 0,83 (3H, s) . Ejemplo 2 1,1-Dimetiletiléster del ácido N- [ (1S) -1- [ [ [ (IR) -1-[ (3aS,4S, 6S,7aR) -hexahidro-3a,5,5-trimetil-4, 6-metano-l,3,2-benzodioxaborol-2-il] -3-metilbutil] amino] carbonil] -4-[ [imino (nitroamino) metil] amino]butil] -carbámico Método A: HOAt /HATU A una solución de BocNH (N02) ArgOH (15,7 g, 49,3 mmol) en DMF anhidra (100 ml) se le añadieron HATU (hexafluorofosfato de - (7-azabenzotriazol-l-il) -1, 1, 3, 3-tetrametiluronio; 18,7 g, 49,3 mmol) y HOAt (l-hidroxi-7-azabenzotriazol; 6,71 g, 49,3 mmol) . La mezcla se enfrió a 0°C y se añadió N-metilmorfolina (13,6 ml, 0,123 mol). Después de 10 minutos, se añadió la sal clorhidrato de (IR) -1- [ (3aS, 4S, 6S, 7aR) -hexahidro-3a, 5, 5-trimetil-4, 6-metano-l, 3, 2-benzodioxaborol-2-il] -3-metilbutilamina del Ejemplo 1 (12,4 g, 41,1 mmol). El baño de refrigeración se retiró y la mezcla se agitó a t.a. durante 4,5 horas. La mezcla se diluyó con acetato de etilo (800 ml) , se lavó con una' solución al 2% de ácido cítrico (2 x 150 ml) , una solución al 2% de NaHC03 (2 x 150 ml) y una solución al 2% de NaCl (2 x 150 ml) . Las fases acuosas se extrajeron de nuevo con acetato de etilo (150 ml) . Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El residuo oleoso resultante se redisolvió en acetato de etilo (500 ml) y la solución se lavó con agua fría (200 ml) . Las fases acuosas se extrajeron de nuevo con acetato de etilo (500 ml) . Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El residuo se disolvió en éter dietílico (100 ml) y la solución se añadió lentamente a hexano (600 ml) mientras se enfriaba. El sólido blanco se recogió por filtración (43,4 g) y se purificó por cromatografía en columna eluyéndo inicialmente con una mezcla 50:50 de hexano: acetato' de etilo y después con acetato de etilo. Las fracciones que contenían el producto se concentraron, el residuo se disolvió en éter dietílico (100 ml) y la solución resultante se añadió lentamente a hexano (600 ml) mientras se agitaba. El sólido blanco se recogió por filtración (15,2 g, rendimiento de 66%). Método B : IBCF A una suspensión de BocNH (N02) ArgOH (5,82 g, 18,2 mmol) en diclorometano anhidro (100 ml) se le añadió N-metilmorfolina (2,0 ml, 18,2 mmol). La mezcla se enfrió a -15°C y después se añadió cloroformiato de isobutilo (2,37 ml, 18,2 mmol) . La mezcla se agitó a -15°C durante 10 minutos y después se añadió la sal clorhidrato de (1R)-1-[ (3aS, 4S, 6S, 7aR) -hexahidro-3a, 5, 5-trimetil-4, 6-metano-l, 3, 2-benzodioxaborol-2-il] -3-metilbutilamina obtenida como en el Ejemplo 1 (5,0 g, 16,6 mmol), seguido inmediatamente de más N-metilmorfolina (2,0 ml, 18,2 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 1,5 horas a -15°C, después se dejó calentar a temperatura ambiente y se repartió entre acetato de etilo (150 ml) , agua (150 ml) y ácido clorhídrico 0,1 N (10 ml) . La fase orgánica se lavó con una solución saturada de NaHC03, se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró. El residuo oleoso (9,25 g) se purificó por cristalización en acetato de etilo, proporcionando tres cultivos de producto satisfactoriamente puro (5,03 g, rendimiento de 54%). XH RMN (DMSO-de): 8,80 (ÍH, a); 8,50 (1H, a), 7,87 (2H, a);7,01 (1H, d, J = 7,9), 4,07 (ÍH, dd, J = 7,9); 4,0 (ÍH, ) ; 3,12 (2H, m) ; 2,55 (ÍH, m) ; 2,2 (ÍH, m) ; 2,01 (1H, m) ; 1,83 (ÍH, t, J = 5,1); 1,78 (1H, m) ; 1,74-1,44 (7H, m) ; 1,38 (9H, s); 1,33 (1H, d, J = 10,3); 1,24 (5H, s); 1,22 (3H, s) ; 0,84 (6H, d, J = 6,6); 0,81 (3H, s) Ejemplo 3 N-[ (IR) -l-[ (3aS,4S,6S,7aR) -hexahidro-3a, 5 ,5-trimetil-4 , 6-metano-l,3,2-benzodioxaborol-2-il] -3-metilbutil] (2S) -2-amino-5- [ [imino (nitroamino)metil] amino]pentanamida; sal clorhidrato Método A Una solución 4 N de cloruro de hidrógeno en dioxano (15 ml) se añadió a una solución de 1, 1-dimetiletil éster del ácido carbámico, N- [ (1S) -1- [ [ [ (IR) -1- [ (3aS, S, 6S, 7aR) -hexahidro-3a, 5, 5-trimetil-4, 6-metano-l, 3, 2-benzodioxaborol-2-il] -3-metilbutil] amino] carbonil] -4- [ [imino (nitroamino) metil] amino] butilo] del Ejemplo 2 (4,04 g, 7,06 mmol) en una mezcla de dioxano (40 ml) y éter dietílico (7 ml) , mientras se enfriaba a 0°C. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 4 horas más. El disolvente se retiró por evaporación rotatoria, el residuo se trató con éter dietílico (50 ml) y la mezcla se agitó a t.a. durante res días. El sólido resultante se recogió por filtración, proporcionando 3,18 g de producto puro (rendimiento del 90%) Método B Se disolvió 1, 1-dimetiletil éster del ácido carbámico, N-[ (lS)-l-[ [ [ (lR)-l-[ (3aS,4S, 6S, 7aR) -hexahidro-3a, 5, 5-trimetil- , 6-metano-l, 3, 2-benzodioxaborol-2-il] -3- etilbutil] amino] carbonil] -4- [ [imino (nitroamino) metil] amino] butilo] del Ejemplo 2 (3 g, 5,3 mmol) en Et20 (40 ml) y se añadió gota a gota una solución de HCl aproximadamente al 10% en Et20 (20 ml) a 0°C en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se dejó en agitación durante 5 horas más. El disolvente se decantó, el residuo se lavó dos veces con Et20 (20 ml) y se secó al vacío para dar el compuesto del título en forma de un polvo blanco (2,43 g, rendimiento del 91%) . 1H RMN (DMS0-d6) : 8,56 (2H, a); 822 (3H, a); - 1 , 97 (2H, a); 4,28 (ÍH, dd, J = 8,6 Hz, 2,01); 3,77 (1H, ) ; 3,04 (ÍH, m) ; 2,28 (ÍH, m) ; 2,11 (2H, m) , 1,92 (ÍH, t, J = 5,5); 1,83 (ÍH, m) ; 1,79-1,59 (4H, m) ; 1,59-1,37 (3H, m) ; 1,31 (4H, s) ; 1,24 (3H, s); 1,19 (1H, d, J = 10,4); 0,88 (3H, d, J = 6,0); 0,86 (3H, d, J = 6,0); 0,81 (3H, s) . Ejemplo 4 Ácido [ (lR)-l-[[(2S)-2-amino-5- [ [imino (nitroamino)metil] amino] -1-oxometil] amino] -3-m ilb il] -bórico, sal clorhidrato Se disolvió cuidadosamente 1, 1-dimetiletil éster del ácido carbámico, N- [ (1S) -1- [ [ [ (IR) -1- [ (3aS, 4S, 6S, 7aR) -hexahidro-3a, 5, 5-trimetil-4, 6-raetano-l, 3, 2-benzodioxaborol-2-il] -3-metilbutil] amino] carbonil] -4- [ [imino (nitroamino)metil] amino] butilo] del Ejemplo 2 (3,1 g, 5,48 mmol), en una atmósfera de nitrógeno a 0°C, en 20 ml de HCl al 37%; la mezcla resultante se dejó calentar a temperatura ambiente y se dejó en agitación durante una noche. La mezcla de reacción se lavó con Et20 hasta gue se completó la retirada del pinanodiol; la solución acuosa se concentró a seguedad y se secó al vacío para proporcionar 1,82 gramos (4,93 mmol, rendimiento del 90%) del compuesto del título, usado sin purificación adicional. XH RMN: (DMSO + D20 + TFA): 3,78 (m, ÍH) ; 3,19 ( , 2H) ; 3,09 (m, ÍH) ; 1,71 (m, 2H) ; 1,70-1,48 (m, 3H) ; 1,49-1,23 (m, 2H) ; 0,89 (d, J = 5, 8 Hz, 3H) ; 0,88 (d, J = 5, 8 Hz, 3H) . Ejemplo 5 Ácido 10- (1 ,3-dioxo-l ,3-dihidro-isoindol-2-il) -decanoico .
Etapa 1 : 2-Undec-10-enil-l ,3-dioxo-l ,3-dihidroisoindol A una mezcla de 10-undecen-l-ol (4,23 g, 24,8 mmol), ftalimida (3,65 g, 24,8 mmol) y trifenilfosfina (6,51 g, 24,8 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (30 ml) se le añadió lentamente una solución de DEAD (3,9 ml, 24,8 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (10 ml) mientras se mantenía la temperatura por debajo de 8-10°C. Después de 2 horas, se añadieron más DEAD (1,0 ml, 6,37 mmol) y trifenilfosfina (1,3 g, 4,96 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción se concentró y el residuo se trituró con éter dietílico (50 ml) . El sólido se retiró por filtración y se lavó con éter dietílico (2 x 50 ml) . Los filtrados combinados se concentraron y el residuo se trituró con hexano (50 ml) a 40°C. El sólido resultante se retiró por filtración y se lavó con hexano (2 x 50 ml) . Los filtrados combinados se concentraron y el residuo se purificó por cromatografía en columna eluyendo con una mezcla 10:2 de hexano: acetato de etilo. El producto se obtuvo en forma de un sólido blanco con bajo punto de fusión (4,9 g, rendimiento de 66%) . P.f. 25-30°C. XH RMN (DMSO-d6) 7,83 (4H, m) ; 5,76 (ÍH, ) ; 4,96 (1H, de, J = 17,2, 1,6 Hz); 4,90 (1H, ddt, J = 10,2,2,2,1,1); 3,54 (2H, t, J = 7,1), 1,97 (2H, c, J = 6,7); 1,56 (2H, m) ; 1,35-1,15 (14H, m) . Etapa 2 : Ácido 10- (1 ,3-dioxo-l ,3~dihidro-isoindol-2~il) -decanoico . una solución de 2-undec-10-enil-l, 3-dioxo-l, 3-dihidroisoindol (2 g, 6,68 mmol) de la Etapa 1 y Aliquat® 336 (0,2 g) en una mezcla de hexano (20 ml) y ácido acético (6 ml) se añadió gota a gota a una solución de permanganato potásico (2,76 g, 20 mmol) en agua (28 ml) mientras se enfriaba a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 7 horas y después se añadió una solución acuosa de bisulfito sódico hasta que desapareció el color púrpura. Después, la mezcla se extrajo con acetato de etilo, la fase orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla 2:1 de hexano: acetato de etilo. El producto se obtuvo en forma de un sólido blanco (1,29 g, rendimiento de 61%). P.f. 58-60°C. 1H RMN (DMSO-ds) 11,95 (1H, a); 7,85 (4H, m) ; 3,55 (2H, t, J = 7,2 Hz) ; 2,17 (2H, t, J = 7,2 Hz) ; 1,7-1,4 (4H, m) ; 1,22 (10H, m) . Ejemplo 6 Ácido 6- (etilsulfonilamino) hexanoico Una solución de cloruro de etanosulfonilo (3,9 ml, 41,1 mmol) en dioxano (10 ml) se añadió a una solución de ácido 6-aminohexanoico (2 g, 15,2 mmol) en NaOH 1 N (56 ml) y dioxano (10 ml) , mientras se agitaba a 0-5°C. El pH de la mezcla de reacción se ajustó a 8-9 mediante la adición de una solución al 25% de hidróxido sódico. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 30 minutos. Se añadió más solución al 25% de NaOH para ajustar el pH a aproximadamente 11. Después de 3,5 h, se añadieron ácido clorhídrico 1 N (15 ml) y acetato de etilo (60 ml) . La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró. El residuo se trituró con una mezcla de éter dietílico (5 ml) y hexano (15 ml) . El sólido se recogió por filtración y se secó, proporcionando 1,3 g del compuesto del título (rendimiento del 40%) . XH RMN (DMSO-d6) : 11,9 (ÍH, s) ; 6,97 (1H, t, J = 5,7 Hz) ; 2,97 (2H, c, J = 7,1); 2,88 (2H, c, J = 6,6); 2,2 (2H, t, J = 7,3); 1,47 (4H, m) ; 1,29 (2H, m) ; 1,18 (3H, t, J =• 7,3). Ejemplo 7 Ácido 8- (etilsulfonilamino) octanoico Una solución de cloruro de etanosulfonilo (1,5 ml, 15,7 mmol) en dioxano (5 mi) se añadió a una solución de ácido 8-aminooctanoico (1 g, 6,28 mmol) en NaOH 1 N (22 ml) y dioxano (5 ml) , mientras se agitaba a 0-5°C. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 3,5 minutos. Durante este periodo, a intervalos de 1 hora, el pH se ajustó a 7-8 mediante la adición de una solución al 25% de NaOH. La mezcla de reacción se lavó con éter dietílico (30 ml) . El pH se ajustó a 1-2 mediante la adición de HCl 1 N y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (70 ml) . La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró. El residuo se trituró con una mezcla de éter dietílico. El sólido se recogió por filtración y se secó al vacío proporcionando 600 mg del compuesto del título (rendimiento del 38%) . 2H RMN (DMSO-d6) : 11,9 (ÍH, s); 6,96 (1H, t, J = 6 Hz); 2,96 (2H, c, J = 7,1); 2,88 (2H, c, J = 6,6); 2,2 (2H, t, J = 7,3); 1,45 (4H, m) ; 1,26 (6H, m) ; 1,18 (3H, t, J = 7,3). Ejemplo 10 N- [ (1S) -1- [ [ [ (IR) -1- [ (3aS , 4S , 6S , 7aR) -hexahidro-3a-5 ,5-trimetil-4 , 6-metano-l ,3 ,2-benzodioxaborol-2-il] -3-metilbutil] amino] carbonil] -4- [ [imino (nitroamino) etil] amino]butil] 10- (l,3-dioxo-l,3-dihidro-isoindol-2-il) -decanamida; Acoplamiento por el método IBCF A una solución de ácido 10- (1, 3-dioxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -decanoico (353 mg, 1,11 mmol) , preparado de acuerdo con el Ejemplo 5 en diclorometano anhidro (10 ml) se le añadió N-metilmorfolina (122 µl, 1,11 mmol). La mezcla se enfrió a -15 °C y después se añadió lentamente cloroformiato de isobutilo (144 µl, 1,11 mmol). Después de 15 minutos, se añadieron (2S) -2-amino-5- [ [imino (nitroamino) metil] amino] pentanamida, N- [ (IR) -1- [ (3aS, 4S, 6S, 7aR) -hexahidro-3a, 5, 5-trimetil-4, 6-metano-l, 3, 2- benzodioxaborol-2-il] -3-metilbutilo] , sal clorhidrato del Ejemplo 3 (508 mg, 1,01 mmol) y más N-metilmorfolina (122 µl, 1,11 mmol). La mezcla de reacción se agitó a -15-10°C durante 4 h, después se concentró hasta bajo volumen y se repartió entre acetato de etilo (20 ml) y agua (10 ml) . La fase acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (10 ml) . Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron. El residuo se recogió con acetato de etilo (3 ml) y la solución se añadió gota a gota a hexano (120 ml) mientras se agitaba a temperatura ambiente. El sólido se recogió por decantación y se secó al vacío (730 mg, 94%) . 2H RMN (DMSO-de): 8,81 (1H, d, J = 2,7 Hz) ; 8,52 (ÍH, a); 7,98 (1H, d, J = 8,05); 7,88 (2H, a); 7,85 (4H, m) ; 4,34 (ÍH, m) ; 4,06 (ÍH, dd, J = 7,1); 3,56 (2H, t, J = 7,14); 3,14 (2H,m); 2,55 (ÍH, m) ; 2,19 (1H, m) ; 2,10 (2H, t, J = 7,14); 2,0 (ÍH, m) ; 1,82 (1H, t, J = 5,7); 1,78 (ÍH, m) ; 1,73-1,35 (10H, m) ; 1,31 (ÍH, d, J = 9,9); 124 (19H, m) ; 0,84 (9H, m) ; 0,79 (3H, s) . Ejemplo 11 N- [ (1S) -1- [ [ [ (IR) -1- [ (3aS , 4S , 6S , 7aR) -hexahidro-3a, 5 , 5-trimetil-4 , 6-metano-l , 3 , 2-benzodioxaborol-2-il] -3-metilbu il] mino] carbonil] -4- [ [imino (nitroamino)metil] amino] util] 12- [ (1,1-dimetiletoxi) carbonilamino] dodecanamida Quiral El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 10 anterior a partir de ácido 12-terc-butoxicarbonilamino-dodecanoico y el producto del Ejemplo 3, usando los reactivos y condiciones de reacción apropiados. Datos analíticos: XE RMN (DMSO-de) 8,81 (ÍH, d, J = 2,4); 8,52 (ÍH, a); 7,98 (1H, d, J = 8,05); 7,85 (2H, muy a); 6,73 (ÍH, t, J = 5,3); 4,33 (ÍH, m) ; 4,07 (1H, d, J = 8,4); 3,14 (2H, m) ; 2,88 (2H, c, J = 6,6); 2,56 (ÍH, m) ; 2,19 (1H, m) ; 2,10 (2H, t, J = 7,1); 2,01 (ÍH, m) ; 1,83 (1H, t, J = 5,7); 1,78 (1H, m) ; 1,73-1,41 (8H, m) ; 1,36 (9H, s) ; 1,33-1,15 (25H, m) ; 0,84 (6H, d, J = 6,5); 0,80 (3H, s). Ejemplo 12 N- [ (1S) -1- [ [ [ (IR) -1- [ (3aS , 4S , 6S , 7aR) -hexahidro-3a,5,5-trimetil-4 , 6-metano-l , 3 , 2-benzodioxaborol-2-il] -3-metilbutil] amino] carbonil] -4- [ [imino (nitroamino)metil] amino] util] 4- (metoxicarbonil) heptanamida Quiral El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 10 anterior a partir de éster monometílico del ácido octanodioico y el producto del Ejemplo 3, usando los reactivos y condiciones de reacción apropiados. Datos analíticos: XH RMN (DMSO-de): 8,80 (ÍH, s a); 8,51 (ÍH, a); 7,98 (1H, d, J = 8,0 Hz); 8,3-7,5 (2H, a); 4,32 (1H, m) ; 4,06 (ÍH, d a, J = 8,4); 3,12 (2H, m) ; 2,55 (ÍH, m) ; 2,26 (2H, t, J = 7,3); 2,18 (ÍH, m) ; 2,09 (2H, t, J. = 7,1); 2,01 (ÍH, ) ; 1,85-1,2 (19H, ) ; 1,23 (3H, s) ; 1,21 (3H, s) ; 0,83 (6H, d, J '= 6,6); 0,79 (3H, s) . Ejemplo 13 N- [ (1S) -1- [ [ [ (IR) -1- [ (3aS , 4S , 6S , 7aR) -hexahidro-3a,5,5-trimetil-4 , 6-metano-l , 3 , 2-benzodioxaborol-2-il] -3-metilb il] amino] carbonil] -4- [ [imino (nitroamino)metil] amino]butil] 11-cianoundecanamida Se añadieron PS-carbodiimida (N-ciclohexilcarbodiimida- N' -propiloximetilpoliestireno, 769 mg, 1 mmol, cargando 1,31 mmol/g) y HOAt (l-hidroxi-7-azabenzotriazol, 115 mg, 0,85 mmol) a una solución de ácido 11-cianoundecanoico (115 mg, 0,54 mmol) en diclorometano (DCM) (9 ml) . Después de agitar durante 10 minutos, se añadieron (2S) -2-amino-5- [ [imino (nitroamino) metil] amino] pentanamida, N- [ (IR) -1- [ (3aS, 4S, 6S, 7aR) -hexahidro-3a, 5, 5-trimetil-4, 6-metano-l, 3, 2-benzodioxaborol-2-il] -3-metilbutilo] , sal clorhidrato del Ejemplo 3 (251 mg, 0,50 mmol) y DIPEA (0,128 ml, 0,75 mmol). La suspensión se agitó durante una noche a temperatura ambiente y después la PS-Carbodiimida se retiró por filtración y se lavó varias veces con DCM (4 x 6 ml) . La fase orgánica se pasó a través de un cartucho VARÍAN CHEM ELUT para extracción líquido-líquido pre-acondicionado NaHC03 acuoso saturado y finalmente se lavó con DCM (15 ml) . El disolvente se evaporó y la reacción bruta se purificó con una columna ISOLÜTE SPE-SI de fase normal (DCM 9, MeOH 1) para proporcionar 200 mg del compuesto deseado (rendimiento del 61%) . RMN (CDC13) : 7,53 (s, a, 2H) ; 7,36 (d, a, J = 4,7 Hz, 1H) ; 6,88 (d, J = 8,2 Hz, 1H) ; 4,46 (m, 1H) ; 4,15 (dd, J = 8,5, 1,9 Hz, ÍH) ; 3,19 (m, 2H) ; 2,93 ( , 1H) ; 2,23 (t, J = 7,2 Hz, 2H) ; 2,21 (m, ÍH) ; 2,09 (t, J = 7,5, 2H) ; 2,04 (m, ÍH) ; 1,88 (t, J - 5,4 Hz, ÍH) ; 1,77 ( , ÍH) ; 1,69 (m, ÍH) ; 1,64-1,43 (m, 9H) ; 1,40-1,26 (m, 4H) ; 1,26 (s, 3H) ; 1,24-1,12 (m, 16H); 0,80 (d, J = 6,6, 3H) ; 0,79 (d, J = 6,6, 3H) ; 0,73 (s, 3H) . LC-MS 659,7, MH+ . ESI. POS; AQA; nebulización 4 kV/destilación primaria: 20V/sonda 250°C. Ejemplo 14 N- [ (1S) -1- [ [ [ (IR) -1- [ (3aS , 4S , 6S , 7aR) -hexahidro-3a, 5 , 5-trimetil-4 , 6-metano-l , 3 , 2-benzodioxaboroI-2-il] -3-metilbu il] amino] carbonil] -4-[ [imino (nitroamino) metil] amino] util] 9-cianononamida Quiral El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 13 anterior a partir de ácido 9-ciano-nonanoico y el producto del Ejemplo 3, usando los reactivos y condiciones de reacción apropiados. Datos analíticos: MS : MH+ 632,5 Ejemplo 15 N- [ (1S) -1- [ [ [ (IR) -1- [ (3aS , 4S , 6S , 7aR) -hexahidro-3a, 5 , 5-trimetil-4 , 6-metano-13 , 2-benzodioxaborol-2-il] -3-metilbutil] amino] carbonil] -4- [ [imino (nitroamino)metil] amino]butil] 6- (acetilamino) hexanamida Quiral El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 13 anterior a partir de ácido 6-acetilamino-hexanoico y el producto del Ejemplo 3, usando los reactivos y condiciones de reacción apropiados. Datos analíticos: MS : [MH]+ 622,3 Ejemplo 16 N- [ (1S) -1- [ [ [ (IR) -1- [ (3aS , 4S , 6S , 7aR) -hexahidro-3a,5,5-trimetil-4 , 6-metano-l , 3 , 2-benzodioxaborol-2-il] -3-metilbu il] amino] carbonil] -4- [ [imino (nitroaminoJm il] amino]butil] 12- (l,3-dioxo-l,3-dihidro-isoindol-2-il) -dodecamida El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 13 anterior a partir de ácido 11- (1, 3-dioxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -undecanoico y el producto del Ejemplo 3, usando los reactivos y condiciones de reacción apropiados. Datos analíticos: MS : [MH] + 794,42 Ejemplo 17 N-[ (1S) -l-[ [ [ (IR) -l-[ (3aS,4S,6S,7aR) -hexahidro-3a,5 , 5-trimetil-4 , 6-metano-l , 3 , 2-benzodioxaboroI-2-il] -3-metilbu il] amino] carbonil] -4- [ [imino (nitroamino)metil] amino]butil] 6- (etanosulfonilamino) hexanamida A una solución de ácido 6- (etilsulfonilamino) hexanoico (90 mg, 0,40 mmol, 1,2 equiv.), del Ejemplo 6, en DMF seca (10 ml) se le añadió TBTU (tetrafluoroborato de (N,N,N',N'~ tetrametil-O- (benzotriazol-1-il) uronio; 130 mg, 0,40 mmol, 1,2 eguiv. ) . La mezcla se enfrió a 0-5°C con un baño de hielo y se añadió NMM (0,12 ml, 1,08 mmol, 2,7 equiv.). Después de unos minutos, se añadió N- [ (IR) -1- [ (3aS, 4S, 6S, 7aR) -hexahidro-3a, 5, 5-trimetil-4, 6-metano-l, 3, 2-benzodioxaborol-2-il] -3-metilbutil] (2S) -2-amino-5- [ [imino (nitroamino) etil] -amino] pentanamida, sal clorhidrato (170 mg, 0,33 mmol, 1 equiv.), del Ejemplo 3. La mezcla se agitó a t.a. durante 2 h, se vertió en agua (150 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 ml) . La capa orgánica se lavó con una solución de ácido cítrico al 2% (20 ml) , bicarbonato sódico al 2% (20 ml) y NaCl al 2% (20 ml) , se secó sobre sulfato sódico anhidro y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, eluyente acetato de etilo) para dar 30 mg de un sólido amorfo (rendimiento del 13%) . Datos analíticos: aH RMN (DMSO-d6) : 8,83 (ÍH, d, J = 2,7 Hz) ; 8,51 (1H, a); 8,00 (1H, d, J = 8,0 Hz) ; 8,3-7,5 (2H, a); 6,94 (1H, t, J = 5,8): 4,32 (ÍH, m) ; 4,06 (ÍH, dd, J = 1,8, 8,6); 3,13 (2H, m) ; 2,95 (2H, c, J = 7,3); 2,87 (2H, c, J = 6,7); 2,55 (ÍH, m) ; 2,19 (ÍH, m) ; 2,10 (2H, t, J = 7,5); 2,00 (1H, m) ; 1,85-1,1 (17H, m) ; 1,24 (3H, s) ; 1,21 (3H, s) ; 1,16 (3H, t, J = 7,5); 0,83 (6H, d, J = 6,6); 0,79 (3H, s) . Ejemplo 18 6-Bencenosulfonilaminohexanamida, N- [ (1S) -1- [ [ [ (IR) -1-[ (3aS , 4S , 6S , 7aR) -hexahidro-3a, 5 , 5-trimetil-4 , 6-metano-l ,3,2-beiizodioxaborol-2-il] -3-metilbutil] amino] carbonil] -4-[ [imino (nitroamino)metil] amino]butilo] El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 17 anterior a partir de ácido 8-fenilsulfonilamino-hexanoico y el producto del Ejemplo 3, usando los reactivos y condiciones de reacción apropiados.
Datos analíticos: 1H RMN (DMSO-de): 8,83 (1H, d, J = 2,8 Hz) ; 8,51 (1H, a); 7,97 (ÍH, d, J = 7,8 Hz) ; 8,2-7,6 (2H, a); 7,77 (2H, m) ; 7,65-7,5 (4H, m) ; 4,31 (ÍH, m) ; 4,05 (ÍH, dd, J = 1,8, 8,6); 3,12 (2H, m) ; 2,69 (2H, c, J = 7,0); 2,54 (ÍH, m) ; 2,20 (1H, m) ; 2,05 (2H, t, J = 7,5); 2,01 (1H, m) ; 1,85-1,1 (21H, ) ; 122 (3H, s); 1,21 (3H, s) ; 0,82 (6H, d, J = 6,6); 0,79 (3H, s) . Ejemplo 19 N- [ (1S) -1- [ [ [ (IR) -1- [ (3aS , 4S , 6S , 7aR) -hexahidro-3a, 5 , 5-trimetil-4 , 6-metano-l , 3 , 2-benzodioxaborol-2-il] -3-metilbutil] amino] carbonil] -4- [ [imino (nitroamino)metil] amino]butil 8-(etanosulfonilamino) octanamida El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 17 anterior a partir de ácido 8-etanosulfonilamino-octanoico (Ejemplo 7) y el producto del Ejemplo 3, usando los reactivos y condiciones de reacción apropiados. Datos analíticos: XE RMN (DMSO-d6): 8,81 (ÍH, s a); 8,51 (ÍH, a); 7,98 (ÍH, d, J = 7,8 Hz); 8,3-7,5 (2H, a); 6,93 (ÍH, t, J = 5,7): 4,32 (ÍH, m) ; 4,06 (ÍH, dd, J = 1,8, 8,6); 3,13 (2H, m) ; 2,95 (2H, c, J = 7,3); 2,87 (2H, c, J = 6,7); 2,55 (ÍH, m) ; 2,19 (1H, m) ; 2,10 (2H, t, J = 7,0); 2,00 (1H, m) ; 1,85-1,1 (17H, m) ; 1,23 (3H, s); 1,21 (3H, s); 1,16 (3H, t, J = 7,3); 0,83 (6H, d, J = 6, 6) ; 0,79 (3H, s) . Ejemplo 20 Acido [ (IR) -1- [ [ (2S) -5- [ [imino (nitroamino)metil] amino] -2-[ (11-cianoundecanoil) amino] -1-oxopen il] amino] -3-metilbutil] -bórico Quiral A una solución de DMAP (4-Dimetilaminopiridina, 22,7 mg, 0,185 mmol) y ácido 11-cianoundecanoico (97,2 mg, 0,46 mmol) en diclorometano (5,2 ml) se le añadió PS-HOBT (1-Hidroxibenzotriazol-6-sulfonamidometilpoliestireno, 277 mg, 0,31 mmol, cargando 1,12 mmol/g). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos y después se añadió una solución de diisopropilcarbodiimida (0,218 ml, 1,39 mmol) en DCM (diclorometano, 0,6 ml) . La suspensión se agitó durante 4 horas a temperatura ambiente y después la resina se filtró en una atmósfera de nitrógeno y se lavó varias veces con DMF (3 x 5 ml) , DCM (3 5 ml) , DMF (3 x 5 ml) y THF (3 x 5 ml) . La resina bien secada se suspendió en una solución de sal clorhidrato del ácido [ (IR) -1- [ [ (2S) -2-amino-5- [ [imino (nitroamino) -metil] amino] -1-oxopentil] amino] -3-metilbutil] -bórico del Ejemplo 4 (55,2 mg, 0,15 mmol) y DIPEA (N, N-diisopropiletilamina, 0,051 ml, 0,293 mmol) en DCM (4 ml) y DMF (0,6 ml) . La mezcla de reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La resina se retiró por filtración, se lavó con DMF (10 ml) y DCM (2 ml) y el disolvente se concentró a sequedad. El residuo se purificó por elución sobre un cartucho ISOLUTE SPE-DIOL, usando mezclas de 95/5 a 50/50 de DCM/Metanol. Las fracciones que contenían el producto se recogieron y se concentraron. La purificación final se realizó sobre un cartucho de fase normal ISOLUTE SPE-SI de 2 g usando mezclas de 100/0 a 50/50 de DCM/Metanol (25 mg, rendimiento de 35%). Datos analíticos: MS: [M-18]H+ 508,5 Ejemplo 21 Ácido [ (IR) -l-[ [ (2S) -5- [ [imino (nitroamino) etil] amino] -2- [ (9-cianononanoil) amino] -1-oxopentil] amino] -3-metilbutil] -bórico Quiral El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 20 anterior a partir de ácido 11-ciano-nonanoico y el producto del Ejemplo 4, usando los reactivos y condiciones de reacción apropiados. Datos analíticos: MS : [M-18]H+ 480,1 Ejemplo 22 Ácido [ (IR) -l-[ [ (2S) -5-[ [imino (nitroamino) metil] amino] -2-[[7- (metoxicarbonil) heptanoil] amino] -1-oxopentil] amino) -3-metilbutil] -bórico Una mezcla de 4- (metoxicarbonil) heptanamida, N-[(1S)-1-[ [ [ (lR)-l-[ (3aS,4S, 6S, 7aR) -hexahidro-3a, 5, 5-trimetil-4, 6-metano-1, 3, 2-benzodioxaborol-2-il] -3-metilbutil] amino] carbonil] -4- [ [imino (nitroamino) metil] amino]butilo] , preparada por el método del Ejemplo 12, (300 mg, 0,47 mmol), ácido 2-metilpropilbórico (96 mg, 0,94 mmol) y una solución 4 N de cloruro de hidrógeno y dioxano (120 µl) en una mezcla heterogénea 40:60 de metanol :hexano (10 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió hexano (5 ml) , la mezcla se agitó durante un momento y después se retiró la capa de hexano. Se añadieron hexano preparado recientemente (5 ml) , una solución 4 N de cloruro de hidrógeno y dioxano (120 µl) y ácido 2-metilpropilbórico (96 mg, 0,94 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La capa de hexano se retiró y la fase de metanol se lavó con hexano (2 x 5 ml) . El residuo obtenido después de la concentración de la fase de metanol se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla 40:40:20 de acetona:metanol ¡hexano. El producto se redisolvió en acetato de etilo (200 ml) y la fase orgánica se lavó con agua (2 x 10 ml) , se secó sobre sulfato sódico y se concentró. El residuo se disolvió en la cantidad mínima de metanol y la solución se filtró a través de un lecho de algodón y se concentró. El residuo se trituró con éter dietílico. El sólido se recogió por decantación y después se trituró con acetato de etilo (15 ml) . El sólido se recogió por decantación y se secó al vacío, proporcionando el producto en forma de un sólido blanco (30 mg, rendimiento de 13%). Datos analíticos: XH RMN (DMSO-de): 8,60 (ÍH, d, J = 8,4 Hz) ; 8,50 (1H, a); 8,06 (1H, d, J = 7,9); 7,92 (2H, a); 4,36 (ÍH, m) ; 3,58 (3H, s); 3,13 (2H, m) ; 2,55 (1H, m) ; 2,28 (2H, t, J = 7,5); 2,12 (2H, m) ; 1,69 (1H, m) ; 1,49 (7H, m) ; 1,24 (7H, m) ; 0,81 (6H, m) . Análisis elemental calculado: C 47,82% H 7,83% N 16,73% Encontrado: C 48,13% H 7,50% N 16,34% Ejemplo 23 Ácido [ (IR) -1- [ [ (2S) -5- [ [imino (nitroamino)metil] amino] -2-[ (10- (l,3-dihidro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-il) -1-oxodecil] -) mino] -1-oxopentil] amino] -3-metilbutil] -bórico Quiral El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 22 anterior a partir del producto del Ejemplo 10, usando los reactivos y condiciones de reacción apropiados. Datos analíticos: XH RMN (MeOH-d4) : 7,82 (4H, m) ; 4,52 (1H, ) ; 3,66 (2H, t, J = 7,3); 3,27 (2H, ) ; 2,75 (1H, m) ; 2,24 (2H, t, J = 7,3 Hz) ; 1,9-1,2 (20H, m) ; 0,91 (6H, d, J = 6,6) . Ejemplo 24 Ácido [ (IR) -1- [ [ (2S) -5- [ [imino (nitroamino)m til] amino] -2- [ [6- (acetilamino)hexanoil] amino] -1-oxopentil] amino] -3-metilbutil] -bórico Quiral Se disolvió 6- (acetilamino) hexanamida, N-[(1S)-1- [ [ [ (IR) -1- [ (3aS, 4S, 6S, 7aR) -hexahidro-3a, 5, 5-trimetil-4, 6-metano-1, 3, 2-benzodioxaborol-2-il] -3-metilbutil] amino] -carbonil] -4- [ [imino (nitroamino) metil] amino] butilo] , del Ejemplo 15 (48 mg, 0,077 mmol), en Et20 (2 ml) y se añadió HCl al 37% (1 ml) cuidadosamente a 0°C. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se dejó en agitación durante una noche. La mezcla se concentró a seguedad y el residuo se disolvió en MeOH (1 ml) y se eluyó a través de un cartucho ISOLUTE PSA con MeOH (10 ml) . El disolvente se evaporó y el producto bruto se purificó eluyendo a través de un cartucho 500 mg ISOLÜTE SPE-SI usando mezclas de 90/10 a 50/50 de DCM/Metanol para proporcionar el compuesto del título (19,4 mg, rendimiento de 52%). Datos analíticos: MS : [M-18]H+ 470,2 UTILIDAD Actividad del Compuesto Los presentes compuestos pueden inhibir la actividad del proteasoma. La siguiente Tabla F-1 proporciona datos relacionados con diversos compuestos de ejemplo de la invención con respecto a, por ejemplo, capacidad para inhibir la actividad del proteasoma. Métodos y Composiciones Los compuestos de la presente invención pueden inhibir la actividad del proteasoma que conduce a la inhibición o bloqueo de diversas funciones intracelulares con las que el proteasoma está directa o indirectamente relacionado. Por ejemplo, los inhibidores de proteasoma pueden modular, tal como inducir la apoptosis en una célula. En algunas realizaciones, los compuestos de este documento pueden destruir células tumorales por inducción de apoptosis. Por tanto, los presentes compuestos pueden usarse para tratar cáncer, tumores u otros trastornos proliferativos. En realizaciones adicionales, la inhibición de la función de proteasoma por los compuestos de la invención puede inhibir la activación o el procesado del factor de transcripción NF-?B. Esta proteína juega un papel en la regulación de genes implicados en las respuestas inmunes e inflamatorias así como la viabilidad celular. La inhibición de la función de proteasoma puede inhibir la ruta de ubiquitinación/proteolisis . Esta ruta cataliza, entre otros, la degradación selectiva de las proteínas altamente anormales y proteínas reguladoras de corta vida. En algunas realizaciones, los compuestos de la invención pueden evitar la degradación de p53 que típicamente se degrada por la ruta dependiente de ubiquitina. La ruta de ubiquitinación/proteolisis está implicada también en el procesado de antígenos celulares o virales internalizados en péptidos antigénicos que se unen a moléculas MHC-I . Por tanto, los compuestos de la invención pueden usarse para reducir la actividad del sistema proteolítico dependiente de ATP citosólico-ubiquitina en numerosos tipos de células. En consecuencia, la utilidad de dichos compuestos puede incluir productos terapéuticos tales como el tratamiento de diversas enfermedades o trastornos asociados con proteasoma. Los métodos incluyen administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención, o una composición del mismo, a un mamífero tal como un ser humano que tiene una enfermedad o un trastorno asociado con proteasoma. La expresión "terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad suficiente para prevenir, aliviar o mejorar cualquier fenómeno tal como una causa o síntoma, que se sabe en la técnica que está relacionado con la enfermedad o trastorno. Las enfermedades o trastornos tratables (condiciones físicas anormales) pueden asociarse con actividades normales o anormales de proteasoma tal como la regulación de la apoptosis. Se conocen numerosas enfermedades o trastornos que están asociados con proteasoma o que se tratan deseablemente por inducción de apoptosis, e incluyen, por ejemplo, diversos cánceres y tumores incluyendo los asociados con piel, próstata, colorectal, páncreas, riñon, ovario, mama, hígado, lengua, pulmón y tejidos de músculo liso. Los tumores preferidos que pueden tratarse con inhibidores de proteasoma incluyen, aunque sin limitación tumores hematológicos tales como por ejemplo leucemias, linfomas, linfoma no Hodgkin, mieloma, mieloma múltiple así como tumores sólidos tales como por ejemplo tumor colorectal, de mama, de próstata, de pulmón y de páticreas . Para citar efectos terapéuticos, los inhibidores de proteasoma pueden administrarse a pacientes en forma de agentes únicos o en combinación con uno o más agentes antitumorales o anticancerosos y/o radioterapia. Los ejemplos de otros agentes antitumorales o anticancerosos que pueden administrarse ventajosamente simultáneamente con un inhibidor de proteasoma incluyen, aunque sin limitación, adriamicina, daunomicina, metotrexato, vincristina, 6- ercaptopurina, arabinósido citosina, ciclofosfamida, 5-Fü, hexametilmelamina, carboplatino, cisplatino, idarubicina, paclitaxel, docetaxel, topotecan, irinotecara, gemcitabina, L-PAM, BCNÜ y VP-16. Los métodos para determinar la apoptosis xn vitro se conocen bien en la técnica y hay kits disponibles en el mercado. Véase, por ejemplo, el ensayo Apo-ONE™ Homogeneous Caspase-3/7 de Promega Corporation, Madison Wl, EE.UU. (Technical Bulletin No. 295, revisado 2/02, Promega Corporation) . Otras enfermedades o trastornos asociados con proteasoma incluyen la proteolisis acelerada o potenciada que ocurre en músculos atrofiados como los asociados a menudo con la activación de un proceso no lisomal que necesita ATP que implica ubiquitina. La proteolisis acelerada o potenciada puede ser el resultado de cualquier causa numerosa incluyendo sepsis, quemaduras, traumatismo, cáncer, infección, enfermedades neurodegenerativas tales como distrofia muscular, acidosis o lesiones espinales/nerviosas, uso de corticoesteroides, fiebre, estrés e inanición. Los compuestos de la invención pueden ensayarse para la inhibición del desgaste muscular mediante diversos procedimientos conocidos en la técnica tales como medida de la secreción urinaria del aminoácido modificado 3-metilhistidina (véase, por ejemplo, Young, et al., Federa tion Proc, 1978, 31, 229). Los compuestos de la presente invención pueden usarse adicionalmente para tratar o prevenir enfermedades o trastornos asociados con la actividad de NF-KB incluyendo, por ejemplo, infección por el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) y trastornos inflamatorios resultantes por ejemplo del rechace de trasplantes, artritis, infección, enfermedad inflamatoria del intestino, asma, osteoporosis, osteoartritis, psoriasis, restenosis y enfermedades autoinmunes. En consecuencia, un proceso que previene la activación de NF-?B en pacientes que padecen dicha enfermedad sería terapéuticamente beneficioso. La inhibición de la actividad de KF-?B puede medirse usando un ensayo de unión a ADN tal como el descrito en Palombella, et al., Cell , 1994, 78, 773. Los especialistas habituales en la técnica podrán identificar fácilmente individuos que son propensos a o que se sospecha que padecen dichas enfermedades o trastornos usando técnicas de diagnóstico convencionales. Ejemplo A Ensayo para la Actividad de tipo Quimiotripsina del Proteasoma de Eritrocito Humano 20S (HEP) Se ensayó la actividad de tipo quimiotripsina del proteasoma de los compuestos de la invención de acuerdo con el siguiente procedimiento. En placas de microtitulación de 96 pocilios, se puso proteasoma de eritrocito humano 20S (HEP) adquirido en Immatics Biotechnologies Inc., Tubingen, Alemania, en las placas a 0,2 µg/ml (sitios catalíticos aproximadamente 0,6 nM) en SDS al 0,4% en tampón Tris 20 mM. Un sustrato fluorimétrico Suc-LLVY-AMC (Succinil-Leu-Leu-Val-Tyr-7-amino-4-metilcumarina) , adquirido en Sigma Inc., St . Louis, MO, EE.UU. se usó a una concentración final de 100 µl a partir de una solución madre de 10 mM en dimetiisulfóxido. Los volúmenes de reacción fueron de 100 µl por pocilio. Después de la incubación durante diversos periodos de tiempo a 37 °C, la concentración de AMC libre (aminometilcumarina) se determinó en un lector de microplaca Perkin Elmer HTS 7000 Plus, excitación a 370 nm y emisión a 465 nm. La actividad del proteasoma se determinó en condiciones en las que la hidrólisis del sustrato aumentó linealmente con el tiempo y el cambio en la señal de fluorescencia fue proporcional a la concentración de AMC libre. Ejemplo B Ensayo para la Actividad de a-Quimiotripsina En placas de microtitulación de 96 pocilios a-quimiotripsina bovina, adquirida en Sigma Inc., se puso en las placas a 10 ng/ml (sitios catalíticos aproximadamente 2 pM en NaCl 0,5 M en tampón Hepes 50 mM. Un sustrato fluorimétrico Suc-AAPF-AMC (succinil-Ala-Ala-Pro-Phe-7-amido-4-metilcumarina) , adquirido en Sigma Inc., St . Louis, MO, EE.UU., se añadió a una concentración final de 25 µM de una solución madre de 10 mM en dimetiisulfóxido. Los volúmenes de reacción fueron de 100 µl/pocillo. Después de la incubación durante diversos periodos de tiempo a temperatura ambiente, la concentración de AMC libre se determinó en un lector de microplaca Perkin Elmer HTS 7000 Plus, excitación a 370 nm y emisión a 465 nm. La actividad del proteasoma se determinó en condiciones en las gue la hidrólisis del sustrato aumentó linealmente con el tiempo y el cambio en la señal de fluorescencia fue proporcional a la concentración de AMC libre. Ejemplo C Determinación de Valores de IC50 para Inhibidores de HEP y a-Quimiotripsina Los valores de IC50 se definen típicamente como la concentración de un compuesto necesaria para producir el 50% de la inhibición de la actividad de la enzima. Los valores de IC50 son indicadores útiles de la actividad de un compuesto para su uso diseñado. Los inhibidores de proteasoma de la invención pueden considerarse activos y tiene valores de IC50 de menos de aproximadamente 1 µM para la inhibición de proteasoma de eritrocito humano (HEP) . En algunas realizaciones, la inhibición muestra alguna especificidad para HEP y la proporción de IC50 para inhibición de a-quimiotripsina bovina frente a IC50 para la inhibición de HEP, es decir, IC50 (a-quimiotripsina) /IC50 (HEP), es mayor de aproximadamente 100. La inhibición de la actividad de tipo quimiotripsina de HEP y de a-quimiotripsina bovina se determinó incubando la enzima con diversas concentraciones de inhibidores putativos durante 15 minutos a 37°C (o temperatura ambiente para a-quimiotripsina antes de la adición del sustrato) . Cada condición experimental se evaluó por triplicado y se realizaron réplicas de los experimentos para los inhibidores descritos en este documento. Los compuestos de la presente invención se consideran activos en el ensayo identificado anteriormente si sus valores de IC50 para la inhibición de HEP son menores de 100 nM. Preferiblemente los compuestos de la presente invención tendrán valores de IC50 para la inhibición de HEP menores de 100 nM. Más preferiblemente los compuestos de la presente invención tendrán valores de IC50 para la inhibición de HEP menores de 10 nM. Los compuestos de la presente invención han demostrado, en el ensayo identificado anteriormente, valores de IC50 para la inhibición de HEP menores de 1000 nM. Ejemplo D Ensayo Celular para Actividad de tipo Quimiotripsina de Proteasoma en la línea celular Molt-4 La actividad de tipo quimiotripsina de proteasoma en células Molt-4 (leucemia humana) se ensayó de acuerdo con el siguiente procedimiento. Una breve descripción del método se publicó anteriormente (Harding et al., J. Immunol, 1995, 155, 1767) . Las células Molt-4 se lavaron y se resuspendieron en solución salina tamponada con HEPES (KCl 5,4 mM, NaCl 120 mM, Glucosa 25 mM, MgS04 1,5 mM, piruvato sódico 1 M, Hepes 20 mM) y se pusieron en placas blancas de microtitulación de 96 pocilios a una concentración final de 6 x 106' células/ml. Después, diversas concentraciones de inhibidor de proteasoma 5X (o DMSO diluido para los controles), preparado a partir de soluciones 250X DMSO diluyendo 50 veces usando solución salina tamponada con HEPES) se añadieron a la placa a una concentración final IX. Después de 20 minutos de incubación a 37°C, un sustrato permeable de célula fluorimétrica (MeOSuc-FLF-AFC) (metoxisuccinil-Phe-Leu-Phe-7-amino-4-trifluorometilcumarina) adquirido en Enzyme Systems Products, número de catálogo AFC-88, se añadió a cada pocilio a una concentración final de 25 µM a partir de una solución madre de 20 M en DMSO. Los volúmenes de reacción fueron de 100 µl por pocilio. La concentración de AFC libre se controló cada 1,5 min durante 30 min (22 ciclos) en un lector de microplacas Polastar Óptima, BMG Labtechnologies, usando una longitud de onda de excitación de 390 nm y una longitud de onda de emisión de 520 nm. La actividad del proteasoma se determinó en condiciones en las que la hidrólisis del sustrato aumentó linealmente con el tiempo y el cambio en la señal fluorescente fue proporcional a la concentración de AFC libre. Ejemplo E Determinación de valores EC50 para inhibidores de proteasoma en la línea celular MOLT-4. Los valores de EC50 se define típicamente como la concentración de un compuesto necesaria para producir una inhibición de la actividad enzimática que sea la mitad entre la respuesta máxima y mínima (0% y 85-90% respectivamente para este ensayo) . Los valores EC50 son indicadores útiles de la actividad de un compuesto para su uso designado. Los compuestos de la invención pueden considerarse activos si tienen un EC50 de menos de aproximadamente 10 µM. La inhibición de la actividad de tipo quimiotripsina de proteasoma en células MOLT-4 se determinó incubando células con diversas concentraciones de inhibidores putativos durante 15 minutos a 37 °C antes de la adición del sustrato. Cada condición experimental se evaluó por triplicado y las réplicas de los experimentos se realizaron para los inhibidores descritos en este documento. Los compuestos de la presente invención se consideran activos en el ensayo identificado anteriormente si sus valores EC50 para la inhibición de proteasoma en MOLT-4 son menores de 10 µM. Preferiblemente, los compuestos de la presente invención tendrán valores EC50 para la inhibición de proteasoma en MOLT-4 menor de 5 µM. Más preferiblemente, los compuestos de la presente invención tendrán valores EC50 para la inhibición de proteasoma en MOLT-4 menor de 200 nM. Los compuestos de la presente invención han demostrado en el ensayo identificado anteriormente, valores de EC50 para la inhibición de proteasoma en MOLT-4 menores de 10 µM. Ejemplo F Ensayo para la Actividad de tipo Tripsina de Proteasoma La actividad de tipo tripsina de proteasoma humano puede ensayarse como se ha descrito anteriormente con las siguientes modificaciones. Las reacciones pueden realizarse en tampón Tris-glicerol (pH 9,5) suplementado con 2-mercaptoetanol 1 mM y el sustrato puede ser un sustrato fluorogénico tal como benciloxicarbonil-Phe-Arg-AMC (100 µM) .
Después de la incubación durante varios periodos de tiempo a 37 °C, la concentración de AMC libre puede determinarse en un espectro fluorimétrico Fluoroskan II con un filtro de excitación de 390 nm, y un filtro de emisión de 460 nm. La actividad proteasoma puede determinarse en condiciones en las que la hidrólisis del sustrato aumente linealmente con el tiempo y el cambio en la fluorescencia sea proporcional a la concentración de AMC libre. Ejemplo G Inhibición in vivo de la Degradación de Músculo Celular. El efecto de los inhibidores sobre la atrofia por ausencia de apoyo del músculo soleo en ratas jóvenes puede determinarse por ejemplo mediante los procedimientos descritos en Tischler, Metabolism, 1990, 39 , 756. Por ejemplo, ratas hembra jóvenes Sprague-Dawley (80-90 g) pueden suspenderse por las patas traseras y se les recoge la cola como se describe en Jaspers, et al., J. Appl . Physiol . , 1984 , 51 , 1472. Las patas traseras del animal pueden elevarse por encima del suelo de la jaula alojando cada animal individualmente. Los animales pueden tener acceso al alimento y al agua y pueden pesarse en el momento de la suspensión y en el momento de terminación. Durante el periodo de suspensión, los animales pueden comprobarse diariamente para asegurar que sus puntas del pie no están tocando el suelo de la jaula, y que no hay hinchamiento de la cola debido a haberla recogido. Diseño experimental - Parte I Cada experimento puede comenzar con la suspensión de 20 ratas que se dividen aleatoriamente en 4 grupos de 5 animales cada uno. El grupo A puede suspenderse durante 2 días, proporcionando datos iniciales aproximados de tamaño de músculo soleo en otros animales suspendidos para tiempos mayores. Los pesos corporales medios para los grupos en el principio del estudio pueden compararse y usarse como un factor de corrección para las diferencias de tamaño corporal. El grupo B puede ser un segundo grupo de control que tenga el soleo de un miembro tratado con una solución acuosa de mersalil después de dos días de ausencia de apoyo para demostrar la capacidad para ralentizar la atrofia muscular durante la ausencia de apoyo para cada grupo de animales. A los dos días después de que comience la ausencia de apoyo una solución acuosa de mersalil (200 nM, 4 µl/100 g y peso corporal inicial) puede inyectarse a un soleo. Al músculo contralateral puede inyectársele un volumen similar de solución salina al 0,9% ("vehículo"). Los animales pueden tranquilizarse con Innovar-vet (10 µl/100 g de peso corporal) durante el procedimiento de inyección in si tu . Después de las inyecciones, los animales pueden suspenderse durante 24 horas más y el soleo puede retirarse. Los grupos C y D para cada experimento pueden usarse para ensayar cada uno de las dos realizaciones diferentes de los compuestos descritos. Los animales pueden tratarse como en el grupo B, excepto que el inhibidor de proteasoma 1 mM contenido en dimetiisulfóxido (DMSO) puede inyectarse al soleo de una pata y DMSO solo al soleo contralateral. Por tanto, cada experimento consiste en dos grupos de control y el ensayo de inhibidores de proteasoma de la invención. La finalización de 5 de estos experimentos con diferentes pares de inhibidores proporciona un valor "n" de 10 para ensayar cada inhibidor y cada uno se ensaya en dos remesas diferentes de animales. Procesado de Músculo Soleo - Parte 1 Una vez sacrificado el animal, el soleo puede escindirse, separarse de la grasa y del tejido cognitivo y pesarse cuidadosamente. El músculo puede homogeneizarse después en ácido tricloroacético al 10% (TCA) y la proteína precipitada puede sedimentarse por centrifugación. El sedimento puede lavarse después una vez con TCA al 10% y una vez con etanol : éter (1:1). El sedimento final puede solubilizarse en 4 ml de hidróxido sódico 1 N. La mezcla puede analizarse después para el contenido de proteína mediante procedimiento biuret, usando albúmina como patrón. Análisis de Datos - Parte 1 El efecto de los inhibidores en el contenido de proteína de músculo total puede examinarse en primer lugar por comparación emparejada con el músculo contralateral no tratado. La proporción de contenidos puede calcularse y analizarse después estadísticamente mediante análisis de varianza ("ANOVA") . La pata izquierda puede ser siempre la pata tratada de manera que las proporciones de contenido de proteína pueden compararse con los animales de control no tratados también. De esta manera, una diferencia significativa puede mostrarse comparando el contenido de proteína de dos patas, así como la eficacia relativa de los inhibidores ensayados. Un ensayo de Student emparejado puede realizarse para cada efecto de cada tratamiento diferente. Los datos de control no tratado proporcionan también un contenido estimado de proteína del día 2. Esto permite la aproximación de los cambios de proteína durante las 24 horas de tratamiento para cada uno de los grupos B, C y D. Diseño Experimental - Parte 2 Cada experimento puede constar de 10 animales, ensayándose grupos de 5 animales con uno de los inhibidores para su efecto sobre la síntesis de proteína. Los animales de control no son necesarios para este aspecto del estudio, pues el músculo contralateral tratado con DMSO sirve como control emparejado para el músculo tratado con inhibidor. Cada grupo puede tratarse como se describe para los grupos C y D en la parte 1. 24 horas después del tratamiento in sxtu la velocidad fraccional de síntesis de proteína puede analizarse en ambos músculos soleos. Cada músculo puede inyectarse con solución salina al 0,9% (3,5 µg/100 g de peso corporal final) que contiene 3H-fenilalanina (50 mM, 1 µCi/ml) , 15 minutos después los 2/3 medios del músculo pueden escindirse y el músculo puede procesarse como se describe a continuación. Procesado del Soleo - Parte 2 El músculo puede lavarse en primer lugar durante 10 minutos en solución salina al 0,84% que contiene ciclohexi ida 0,5 mM, para terminar la síntesis de proteína, y cicloleucina 20 mM, para atrapar fenilalanina en la célula. El músculo puede homogeneizarse después en 2,5 ml de fenilalanina al 2% enfriada con hielo en la célula. El músculo puede homogeneizarse después en 2,5 ml de ácido perclórico al 2% enfriado con hielo. La proteína precipitada puede sedimentarse por centrifugación. Una alícuota del sobrenadante puede tomarse para conteo de centelleo líquido y otra alícuota puede procesarse para la conversión de fenilalanina a feniletilamina para determinar la concentración de fenilalanina soluble fluorométricamente . Véase, por ejemplo, Garlick, et al., Biocliem . J. , 1980, 192, 719. Estos valores pueden proporcionar la actividad específica intracelular. La actividad específica de fenilalanina en la proteína de músculo puede determinarse después de hidrolizar la proteína calentando en HCl 6 N. Los aminoácidos liberados pueden solubilizarse en tampón. Una alícuota puede tomarse para conteo de centelleo y otra para análisis de fenilalanina como para la fracción de sobrenadante. La velocidad fraccional de síntesis de proteína puede calcularse como: actividad específica de la proteína/actividad específica intracelular por tiempo. Análisis de datos - Parte 2 Los análisis de síntesis de proteínas pueden estar en una base emparejada para cada inhibidor. Las comparaciones del ensayo t de Student emparejado de los músculos contralaterales pueden determinar si hay un efecto del inhibidor sobre la síntesis de la proteína. La degradación de la proteína puede calcularse aproximadamente como la velocidad fraccional de la síntesis de proteína (de la parte 2) más la velocidad fraccional del aumento de proteína (de la parte 1) cuando la pérdida de proteína produce un valor negativo para el aumento de proteína. Cualitativamente, la capacidad de los inhibidores para ralentizar la pérdida de proteína sin afectar a la síntesis de proteína indica una ralentización de la degradación de la proteína. Ejemplo H Investigación in vivo de Actividad Antitumoral Materiales Los inhibidores de proteasoma usados para estudios in vivo pueden formularse en un medio apropiado para administración intravenosa (iv) u oral (po) . Por ejemplo, para la administración IV, los compuestos pueden administrarse disueltos en NaCl al 0, 9%, o en mezclas de NaCl al 0,9%, solutol HS15 y dimetiisulfóxido, por ejemplo, en la proporción 87:10:3 (v:v:v) respectivamente. Líneas celulares Las siguientes líneas celulares tumorales humanas y murinas de diferente origen histológico pueden usarse para ensayar la actividad antitumoral de los compuestos de la invención: H460 (humano, pulmón), A2780 (humano, ovario), PC-3 (humano, próstata) , LoVo (humano, colon) , HCT116 (humano, colon) , BXPC3 (humano, pancreático) , PANC-1 (humano, pancreático) , MX-1 (humano, mama) , MOLT (humano, leucemia) , mieloma múltiple (humano, mieloma) , IC8 (murino, limfoma) , L1210 (murina, leucemia) , 3LL (murino, pulmón) . Especies animales Se adquieren ratones de 5-6 semanas inmunocompententes o inmunodeprimidos a partir de fuentes comerciales por ejemplo de Harían (Correzzana, Mi Italia) . Ratones CD1 nu/nu se mantienen en condiciones estériles. Se usan jaulas, camas, alimentos esterilizados y agua acidificada. Implante y crecimiento de célula tumoral Los modelos de tumor sólido de diferente histotipo (pulmón, ovario, mama, próstata, pancreático, colon) pueden transplantarse por vía subcutánea (se) en la región auxiliar de ratones inmunocompetentes (modelos murinos) o ratones inmunodeprimidos (modelos humanos) . Las líneas celulares de tumor humano originalmente obtenidas de ATC, pueden adaptarse para crecer " in vivo" como tumor sólido a partir de "cultivo in vivo" . Los modelos de tumor humano o murino hematológico pueden transplantarse en diferentes sitios (iv, ip, ic o se) en ratones inmunocompententes (tumores murino) o en ratones inmunodeprimidos (modelos humanos de leucemia, linfoma y mieloma), de acuerdo con su mayor captación de tumor. Tratamiento con el fármaco Los ratones que llevaban tumores sólidos (estratificados) o he atológicos se distribuyen aleatoriamente en grupos experimentales (10 ratones/grupo). Para tumores sólidos, se considera un peso medio del tumor de 80-100 mg para cada grupo para comenzar el tratamiento. Los ratones con los tumores más pequeños y más grandes se descartan. Los grupos experimentales se asignan aleatoriamente al tratamiento con el fármaco y al grupo de control. Los animales pueden tratarse por iv o vía oral, dependiendo de la biodisponibilidad oral con los compuestos siguiendo diferentes esquemas de tratamiento: iv una vez a la semana o dos veces a la semana, o por administración oral diaria. Los modelos de tumor sólido, tratamiento con fármaco, pueden comenzar cuando el tamaño del tumor alcanza entre 80-100 mg después del trasplante del tumor (día cero) . Los compuestos pueden administrarse en un volumen de 10 mg/kd de peso corporal/ratón en el disolvente apropiado. Parámetros de actividad antxtumoral Pueden evaluarse los siguientes parámetros para la evaluación de la actividad antitumoral: crecimiento del tumor sólido primario; en cada ratón se controla mediante medidas con calibre 2 veces a la semana; tiempo de supervivencia de ratones tratados comparado con ratones de control; evaluación del peso corporal dos veces a la semana de ratones individuales. La inhibición - del crecimiento de tumores, % de TWI (porcentaje de inhibición primaria de crecimiento de tumor en comparación con grupos de control tratados con vehículo) o la inhibición relativa del crecimiento del tumor % de RTWI en caso de tumores estratificados, se evalúa una semana después del último tratamiento con fármaco y el peso del tumor (TW) puede calcularse de la siguiente manera TW = 1/2 ab2 en la que a y b son los diámetros mayor y menor de la masa del tumor en mm. La actividad antitumoral puede determinarse como inhibición del peso del tumor (% de TWI) que se calcula de acuerdo con la fórmula: Media TW tratado % de TWI= 100 x 100 Media TW controles El % de RTWI (porcentaje relativo de inhibición primaria de crecimiento de control en comparación con grupos de control tratados con vehículo) se evalúa una semana después del último tratamiento con fármaco de acuerdo con la siguiente fórmula Media RV ratones tratados % de RTWI= 100 x 100 Media RV de ratones de control Vt (peso del tumor en el día t) en la que RV Vo (peso inicial del tumor en el comienzo del tratamiento) El Porcentaje de Regresión de Tumor pude calcularse como regresiones en términos de peso relativo del tumor, determinado como peso del tumor en un día dado dividido por el peso inicial del tumor en el comienzo del experimento. En modelos tumorales hematológicos, la actividad antitumoral puede determinarse como aumento en el porcentaje del tiempo de supervivencia 'medio de ratones expresado como la proporción (% de T/C) del tiempo de supervivencia medio del grupo tratado (T) al del grupo de control (C) . Los animales que no tienen tumor al final del experimento (60 días después del transplante) se excluyen del cálculo y se consideran supervivientes a largo plazo (LTS) . .Evaluación de la toxicidad en ratones que llevan tumor La toxicidad puede evaluarse a diario en base a hallazgos en bruto en autopsia y la pérdida de peso. Se considera que los ratones han muerto de toxicidad cuando la muerte ocurre antes de la muerte de animales de control tratados con vehículo o cuando se observa una pérdida de peso corporal significativo (>20%) y/o reducción del tamaño del bazo o del hígado.
El % de BWC (porcentaje de cambio de peso corporal) se evalúa de la siguiente manera: 100 - (peso corporal medio del ratón en un día dado/peso corporal medio al comienzo del tratamiento) x 100. Este valor se determina una semana después del último tratamiento con el compuesto de ensayo. Ejemplo K Viabilidad in vitro de Células Los valores IC5o que miden la viabilidad in vi tro de células en presencia de compuestos de ensayo puede determinarse de acuerdo con el siguiente procedimiento. Las células pueden sembrarse en placas de 96 pocilios a densidades variables y ensayarse después usando µn ensayo de viabilidad en Calceína-AM después de- 24 horas para determinar la densidad final óptima para cada tipo de célula. Las células pueden sembrarse después en placas de 96 pocilios a la densidad determinada en 100 µl de un medio celular apropiado conocido por un especialista en la técnica . Pueden realizarse diluciones - en serie de los compuestos de ensayo de manera que las concentraciones sean dos veces la concentración deseada a evaluar. Cuando se añaden 100 µl de la dilución a las células puestas en placas en 100 µl de medio, puede obtenerse una concentración final de por ejemplo 0, 11,7, 47,9, 187,5, 375 y 750 nM. Los compuestos pueden añadirse a las placas 3 a 4 horas después de sembrar las células, después las placas pueden incubarse a 37°C durante momento temporal deseado (por ejemplo, 1, 2 o 3 días) . Los ensayos de viabilidad en calceína-AM pueden realizarse en los momentos temporales deseados de la siguiente manera. Los medios pueden aspirarse usando un colector y una placa metálica para dejar aproximadamente 50 µl/pocillo. Los pocilios pueden lavarse 3 veces- con 200 µl de PBS aspirando cada vez con el colector para dejar 50 µl/pocillo. una solución 8 µM de calceína-AM en DPBS puede prepararse y pueden añadirse 150 µl a cada pocilio. Las placas pueden incubarse después de 37°C durante 30 minutos. Después de la incubación, la calceína puede aspirarse con el colector y las células pueden lavarse con 200 µl de DPBS como en el caso anterior. Después de la aspiración final, la fluorescencia puede medirse usando un lector de placa de fluorescencia Cytofluor 2300. Los controles negativos pueden contener medios y no células, y los experimentos pueden realizarse por triplicado. Ejemplo L Experimentos Cinéticos in vitro. Los compuestos de la invención pueden ensayarse para actividad inhibidora de proteasoma usado un protocolo descrito en Rock, et al., Cell , 1994, 18, 761. De acuerdo con este procedimiento, las constantes de disociación (Ki) para el equilibrio establecido cuando el proteasoma y el compuesto de ensayo interaccionan para formar un complejo. Las reacciones pueden realizarse usando proteasoma 20S activado por SDS de músculo de conejo, y el sustrato proteasoma puede ser Suc-LLVY-AMC . Ejemplo M Inhibición de la Activación de NF-?B Los compuestos de la invención pueden ensayarse para inhibir la actividad de NF-?B realizando el ensayo descrito en Palo bella, et al., Cell , 1994, 18, 773). Por ejemplo, las células de osteocarcinoma MG63 pueden estimularse por tratamiento con TNF-a durante los tiempos designados. Pueden prepararse extractos de células enteras y analizarse por ensayos de desplazamiento de movilidad electroforética usando una sonda PRDII a partir del promotor de gen IFN-ß humano . Ejemplo N Actividad del Compuesto usando los ensayos del Ejemplo C y del Ejemplo E anteriores, la siguiente Tabla F-1 demuestra la utilidad de los compuestos de la invención para la inhibición de proteasoma. En las siguientes tablas, para la inhibición de HEP, el Ejemplo C, los compuestos de la presente invención con "+" son menores de 100 nM. Los compuestos de la presente invención con "++" son menores de 100 nM. Los compuestos de la presente invención con "+++" son menor de 10 nM en IC50 para la inhibición de HEP. En las siguientes tablas, para la inhibición de MOLT4, Ejemplo E, los compuestos de la presente invención con "+" son menores de 10000 nanoMolar; los compuestos de la presente invención con "++" son menores de 2000 nanoMolar; compuestos de la presente invención con "+++" son menores de 200 nanoMolar en EC50 para la inhibición de HEP. Cuando aparece ">+" es que la actividad fue mayor que los límites del ensayo. Cuando no se presenta un valor de IC50 o EC50, es porque los datos aún no se han determinado.
Tabla F-1 Formulaciones Farmacéuticas y Formas de Dosificación Cuando se emplean como productos farmacéuticos, los compuestos de Fórmula (I) pueden administrarse en la forma de composiciones farmacéuticas. Estas composiciones pueden administrarse mediante diversas' vías incluyendo oral, rectal, transdérmica, subcutánea, ' intravenosa, intramuscular e intranasal, y pueden prepararse de una manera bien conocida en la técnica farmacéutica. Esta invención incluye también. composiciones farmacéuticas que contienen, como ingrediente activo, uno o más de los compuestos d§ Fórmula (I) anterior en combinación con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables. La preparación de las composiciones de la invención, el ingrediente activo típicamente se mezcla con un excipiente, se diluye en un excipiente o se encierra en el interior de un vehículo en forma por ejemplo de cápsula, sello, papelillo u otro envase. Cuando el recipiente sirve como diluyente, puede ser un material sólido, semisólido o líguido, gue actúa como vehículo soporte o medio para el ingrediente activo. Por tanto, las composiciones pueden estar en forma de comprimidos, pildoras, polvos, pastillas, sellos, obleas, elixires, suspensiones, emulsiones, jarabes, aerosoles (como en un medio sólido o líquido) , pomadas que contienen por ejemplo hasta el 10% en peso del compuesto activo, cápsulas de gelatina duras y blandas, supositorios o soluciones inyectables estériles y polvos envasados estériles. En la preparación de una formulación, el compuesto activo puede molerse para proporcionar el tamaño de partícula apropiado antes de combinarlo con los otros ingredientes. Si el compuesto activo es sustancialmente insoluble, puede molerse hasta un tamaño de partícula menor de malla 200. Si el compuesto activo es sustancialmente soluble en agua, el tamaño de partícula puede ajustarse moliéndolo para proporcionar una distribución sustancialmente uniforme en la formulación, por ejemplo, aproximadamente malla 40. Algunos ejemplos de excipientes adecuados incluyen lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidones, goma arábiga, fosfato calcico, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato calcico, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, celulosa, agua, jarabe, y metilcelulosa. Las formulaciones pueden incluir adicionalmente: agentes lubricantes tales como talco, estearato de magnesio y aceite mineral; agentes humectantes; agentes emulsionantes y de suspensión; agentes conservantes tales como metil- y propilhidroxi-benzoatos; . agentes edulcorante y agentes aromatizantes. Las composiciones de la invención pueden formularse para proporcionar la liberación rápida sostenida o retrasada del ingrediente activo después de la administración al paciente empleando procedimientos conocidos en la técnica. Las composiciones pueden formularse en una forma de dosificación unitaria, conteniendo cada dosificación de aproximadamente 5 a aproximadamente 100 mg, más habitualmente de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 mg, del ingrediente activo. La expresión "formas de dosificación unitarias" se refieren a unidades físicamente discretas' adecuadas como dosificaciones unitarias para sujetos humanos y otros mamíferos, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado, junto con un excipiente farmacéutico adecuado. El compuesto activo puede ser eficaz en un amplio intervalo de dosificación y generalmente se administra en una cantidad farmacéuticamente eficaz. Se entenderá, sin embargo, gue la cantidad de compuesto administrada realmente normalmente la determinará el médico, de acuerdo con las circunstancias relevantes, incluyendo la afección a tratar, la vía de administración elegida, el compuesto real administrado, la edad el peso y la respuesta del paciente individual, la gravedad de los síntomas del paciente y similares . Para la preparación de composiciones sólidas tales como comprimidos, el ingrediente activo principal se mezcla con un excipiente farmacéutico para formar una composición de preformulación sólida que contiene una mezcla homogénea de un compuesto de la presente invención. Cuando se hace referencia a estas composiciones de preformulación como homogéneas, el ingrediente activo está disperso uniformemente por toda la composición de manera que la composición puede subdividirse fácilmente en formas de dosificación unitaria igualmente eficaces tales como comprimidos, pildoras y cápsulas. Estas preformulación sólida se subdivide después en formas de dosificación unitarias del tipo descrito anteriormente que contiene por ejemplo de 0,1 a aproximadamente 500 mg del ingrediente activo de la presente invención. Los comprimidos o pildoras de la presente invención pueden recubrirse o pueden crearse comprimidos con ellos de otra manera para proporcionar una forma de dosificación gue tiene la ventaja de la acción prolongada. Por ejemplo, el comprimido o pildora puede comprender una dosificación interna un componente de dosificación externa, estando el último en forma de una envuelta sobre el primero. Los dos componentes pueden ser por separado una capa entérica que sirve para resistir la disgregación en el estómago y permitir gue el componente interno pase intacto al duodeno o que se retrase la liberación. Puede usarse una gran variedad de materiales para dichas capas entéricas o recubrimientos, tales como materiales que incluyen numerosos ácidos poliméricos y mezclas de ácidos poliméricos con dichos materiales como goma, laca, alcohol cetílico y acetato de celulosa. Las formas líquidas en las que los compuestos y composiciones de la presente invención pueden incorporarse para administración por vía oral o por inyección incluyen soluciones acuosas, jarabes adecuadamente aromatizados, suspensiones acuosas u oleosas y emulsiones aromatizadas con aceites comestibles tales como aceite de semilla de algodón, aceite de sésamo, aceite de coco y aceite de cacahuete, así como elixires y vehículos farmacéuticos similares. Las composiciones para inhalación o insuflación incluyen soluciones y suspensiones en disolventes acuosos u orgánicos farmacéuticamente aceptables, o mezclas de los mismos y polvos. Las composiciones líquidas o sólidas pueden contener excipientes farmacéuticamente aceptables como se ha descrito anteriormente. En algunas realizaciones, las composiciones se administran por vía respiratoria, oral o nasal para el efecto local o sistémico. Las composiciones pueden nebulizarse usando gases inertes. Las soluciones nebulizadas pueden respirarse directamente desde el dispositivo de nebulización o el dispositivo de nebulización puede unirse a una mascarilla facial o a una máquina de respiración de presión positiva intermitente. Las composiciones en solución, suspensión o polvo pueden administrarse por vía oral o nasal desde dispositivos que suministran la formulación de la manera apropiada. La cantidad de compuesto o composición administrada a un paciente variará dependiendo de lo que se administra, el propósito de la administración tal como profilaxis o terapia, el estado del paciente, la manera de administración y similares. En aplicaciones terapéuticas, las composiciones pueden administrarse a un paciente que ya padecía una enfermedad en una cantidad suficiente para curar o al menos detener parcialmente los síntomas de la enfermedad y sus complicaciones. Una cantidad adecuada para conseguir esto se denomina "cantidad terapéuticamente eficaz". Las dosis eficaces dependerán de la patología tratada así como del juicio del médico practicante dependiendo de factores tales como la gravedad de la enfermedad, la edad, el peso y el estado general del paciente y similares. Las composiciones administradas a un paciente pueden estar en forma de composiciones farmacéuticas descritas anteriormente. Estas composiciones pueden esterilizarse por técnicas de esterilización convencional o pueden filtrarse. Las soluciones acuosas pueden envasarse para su uso como tal o liofilizarse, combinándose la preparación liofilizada con un vehículo acuoso estéril antes de la administración. El pH de las preparaciones de compuesto típicamente estará entre 3 y 11, más preferiblemente entre 5 y 9 y más preferiblemente aún entre y 7 y 8. Se entenderá que el uso de ciertos de los excipientes vehículos o estabilizadores anteriores dará como resultado la formación de sales farmacéuticas. La dosificación terapéutica de los compuestos de la presente invención puede variar de acuerdo por ejemplo con el uso particular para el que se realiza el tratamiento, la manera de administración del compuesto, la salud y el estado del paciente y el juicio del médico practicante. La porción o concentración de un compuesto de la invención y una composición farmacéutica puede variar dependiendo de numerosos factores incluyendo la dosificación, características químicas (hidrofobicidad y la vía de administración) . Por ejemplo, los compuestos de la invención pueden proporcionarse en una solución fisiológica acuosa tampón que contiene de aproximadamente de 0,1 a aproximadamente 10% p/v del compuesto para administración parenteral. Algunos intervalos de dosis típicos son de aproximadamente 1 µg/kg a aproximadamente 1 g/kg de peso corporal por día. En algunas realizaciones, el intervalo de dosis es de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por día. La dosificación es probable que dependa de variables tales como el tipo y extensión de la progresión de la enfermedad o trastorno, el estado general de salud del paciente particular, la eficacia biológica relativa del compuesto seleccionado, formulación del excipiente y su vía de administración. Las dosis eficaces pueden extrapolarse desde las curvas dosis respuesta derivadas de sistemas de ensayo de modelos in vxtro o animales. La presente invención incluye también kits farmacéuticos útiles por ejemplo en el tratamiento o prevención de enfermedades inflamatorias que comprenden uno o más recipientes que contienen una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I) . Dichos kits pueden incluir adicionalmente, si se desea, uno o más componentes de kit farmacéutico convencional tal como por ejemplo recipientes con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, recipientes adicionales, etc., como resultará fácilmente evidente para los especialistas en la técnica. Las instrucciones, en forma de insertos o etiquetas, indicando cantidades de los componentes a administrar, guías de administración y/o guías para la mezcla de componentes, pueden incluirse también en el kit. Diversas modificaciones de la invención, además de las descritas en este documento, resultarán evidentes para los especialistas en la técnica a partir de la descripción anterior. Dichas modificaciones pretenden incluirse dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas. Cada referencia citada en la presente solicitud se incorpora a este documento como referencia en su totalidad.

Claims (20)

  1. REIVINDICACIONES Un compuesto de fórmula (I) (I) ' . o una sal farmacéuticamente aceptable, forma estereoisoméricas o tautomérica del mismo, donde: R1 es alquilo C?-C ; Y es o H, CN, N02, o un grupo protector de guanidino; Z es -CN, -C(=0)OR5, ftalimido, -NHS02R6 o -NR3R4; R3 es H o alquilo C?-C4; R4 se selecciona entre el grupo aril-S02-, aril-C(=0)-, aralquil-C(=0)-, alquil-C (=0) -, aril-OC (=0) -, aralquil- 0C(=0)-, alquil-0C(=0)-, aril-NHC (=0) - y alquil-NHC (=0) -; donde el arilo o aralquilo está opcionalmente sustituido con uno o más grupos metilo o metoxi; R5 es H, alquilo Ca-Cß, alquenilo C2-Ce, alquinilo C2-Ce, donde R5 está opcionalmente sustituido con uno o más halo, alquilo C?-C4, arilo o heteroarilo; Re es alquilo C?-C8, alquenilo C2-C8/ alquinilo C2-C8, donde R6 está opcionalmente sustituido con uno o más halo, alquilo C?~C4, arilo o heteroarilo; Q se selecciona entre B(0R9)2, éster pinanodiol bórico, éster pinacol bórico, éster 1, 2-etanodiol bórico, éster 1,3-propanodiol bórico, éster 1, 2-propanodiol bórico, éster 2,3- butanodiol bórico, éster 1, 1, 2, 2-tetrametiletanodiol bórico, éster 1, 2-diisopropiletanodiol bórico, éster 5, 6-decanodiol bórico, éster 1, 2-diciclohexiletanodiol bórico, éster biciclohexil-1, 1' -diol bórico y éster 1, 2-difenil-l, 2-etanodiol bórico; R9 es H, alquilo C?~C , cicloalquilo, cicloalquilalquilo arilo, o aralquilo; m es 2, 3 ó 4; y n es 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ,11, 12, 13 ó 14.
  2. 2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R1 es etilo, propilo o butilo.
  3. 3. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R1 es 2-propilo.
  4. 4. El compuesto de la reivindicación 1, en el que Q es éster pinanodiol bórico
  5. 5. El compuesto de la reivindicación 1, en el que Q es biciclohexil-1-1, 1' diol bórico
  6. 6. El compuesto de la reivindicación 1, en el que Q es B(OH)2
  7. 7. El compuesto de la reivindicación 1, en el que Z es ftalimido, NHR4, o CN.
  8. 8. El compuesto de la reivindicación 1, en el que n es 8, 9, 10 u 11.
  9. 9. El compuesto de la reivindicación 1, en el que m es 3.
  10. 10. El compuesto de la reivindicación 1, en el que n es 8, 9 10 u 11, y m es 3.
  11. 11. Un compuesto de la reivindicación 1, que tiene la Fórmula (I) : (I) o una sal farmacéuticamente aceptable, forma estereoisoméricas o tautomérica del mismo, donde: R1 es 2-propilo; Y es -N02; Z es -CN, -C(=0)0R5, ftalimido, -NHS02R6 o -NHR4; R4 se selecciona entre el grupo aril-S02-, alquil-S02-, aril-C(=0)-, aralquil-C(=0)-, alquil-C (=0) -, aril-OC (=0) -, aralquil-OC(=0) -, alquil-OC (=0) -, aril-NHC (=0) - y alquil-NHC(=0)-; donde dicho arilo o aralquilo está opcionalmente sustituido con uno o más grupos metilo o metoxi; R5 es H o alquilo C?-C6, donde dicho alquilo está opcionalmente sustituido con uno o más halo, arilo o heteroarilo; R es alquilo Ci-Cß, donde dicho alquilo está opcionalmente sustituido con uno o más halo, arilo . o heteroarilo; Q se selecciona entre B(0R9)2, éster pinanodiol bórico, éster pinacol bórico, éster 1, 2-etanodiol bórico, éster 1,3-propanodiol bórico, éster 1, 2-propanodiol bórico, éster 2,3-butanodiol bórico, éster 1, 1, 2, 2-tetrametiletanodiol bórico, éster 1, 2-diisopropiletanodiol bórico, éster 5, 6-decanodiol bórico, éster 1, 2-diciclohexiletanodiol bórico, éster biciclohexil-1, 1' -diol bórico y éster 1, 2-difenil-l, 2-etanodiol bórico; R9 es H o alquilo C?-C4; m es 3; y n es 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 u 11,
  12. 12. Un compuesto de la reivindicación 1 de fórmula (I-s) : (I-s) o una sal farmacéuticamente aceptable, forma estereoisoméricas o tautomérica del mismo, donde: R1 es alquilo C?-C ; Y es CN o N02; Z es -CN, -C(=0)0R5, ftalimido, -NHS02R6 o -NR3R4; R3 es H o alquilo C?~C4; R4 se selecciona entre el grupo aril-S02-, alquil-S02-, aril-C(=0)-, aralquil-C(=0)-, alquil-C (=0) -, aril-OC (=0) -, aralquil-OC(=0)-, alquil-OC (=0) -, aril-NHC (=0) - y alquil- NHC(=0)-; donde dicho arilo o aralquilo está opcionalmente sustituido con uno o más grupos metilo o metoxi; R5 es H, alquilo C?-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, donde R5 está opcionalmente sustituido con uno o más halo, alquilo C?-C4, arilo o heteroarilo; R6 es alquilo Ci-C8, alquenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, donde R6 está opcionalmente sustituido con uno o más halo, alquilo C?-C4, arilo o heteroarilo; Q se selecciona entre B(0R9)2, éster pinanodiol bórico, éster 1, 2-diciclohexiletanodiol bórico y éster biciclohexil-1,1' -diol bórico; R9 es H o alquilo Ci-C4; m es 2, 3 ó 4; y ' n es 3,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ,11, 12, 13 ó 14.
  13. 13. Un compuesto de la reivindicación 1, que tiene la fórmula: 25 25 o una sal farmacéuticamente aceptable o base libre del mismo.
  14. 14. Una composición que comprende un compuesto de una cualguiera de las reivindicaciones 1-13 y un vehículo farmacéuticamente aceptable .
  15. 15. Un método para inhibir la actividad del proteasoma que comprende poner en contacto un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-13 con dicho proteasoma.
  16. 16. Un método del tratamiento del cáncer que comprende administrar a un mamífero que tiene, o que está predispuesto a, dicho cáncer una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-13.
  17. 17. ün método de tratamiento del cáncer que comprende administrar a un mamífero que tiene, o que está predispuesto a, dicho cáncer una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-13 y en el que dicho cáncer se selecciona entre piel, próstata, colorectal, páncreas, riñon, ovario, mama, hígado, lengua, pulmón y tejido de músculo liso.
  18. 18. Un método de tratamiento del cáncer que comprende administrar a un mamífero que tiene, o que está predispuesto a, dicho cáncer una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-13 y en el que dicho cáncer se selecciona entre leucemia, linfoma, linfoma no Hodgkin, mieloma y mieloma múltiple.
  19. 19. ün método de tratamiento del cáncer que comprende administrar a un mamífero que tiene, o que está predispuesto a, dicho cáncer una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-13 en combinación con uno o más agentes antitumorales o anticancerosos y/o radioterapia.
  20. 20. Un método para inhibir la actividad del factor de transcripción NF-?B que comprende poner en contacto I?B, el inhibidor del factor de transcripción NF-?B, con un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-13.
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