ES2223512T3 - Uso de derivados de acidos 2,4-diamino-3-hidroxicarboxilicos como inhibidores de la proteasoma. - Google Patents
Uso de derivados de acidos 2,4-diamino-3-hidroxicarboxilicos como inhibidores de la proteasoma.Info
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Abstract
Uso de un ácido 2, 4-diamino-3-hidroxicarboxílico de fórmula I en donde A y B representan independientemente un enlace o una mitad aminoacilo insustituida o sustituida; R1 representa hidrógeno; un grupo amino-protector; un grupo de fórmula R5Y- en donde R5 representa hidrógeno o un grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heterociclilo o heterociclilalquilo, insustituido o sustituido; e Y representa -CO-; -NH-CO-; -NH-CS-; -SO2-; -O-CO-; o -O-CS-; R2 representa la cadena lateral de un aminoácido natural; un grupo alquilo, arilalquilo, heteroarilalquilo o cicloalquilalquilo; o trimetilsililmetilo, 2-tienilmetilo o estirilmetilo; R3 representa halógeno, alquilo, alcoxi o hidroxialcoxi; y R4 representa 2(R)-hidroxiindan-1(S)-ilo; (S)-2-hidroxi-1- feniletilo; o 2-hidroxi-bencilo insustituido o sustituido en la posición 4 por metoxi; en forma libre o en forma de una sal o complejo farmacéuticamente aceptable en la preparación de una composiciónfarmacéutica para el tratamiento de una enfermedad proliferativa sensible a la inhibición del complejo multicatalítico de proteasoma.
Description
Uso de derivados de ácidos
2,4-diamino-3-hidroxicarboxílicos
como inhibidores de la proteasoma.
La presente invención se refiere a un nuevo uso
de ácidos
2,4-diamino-3-hidroxicarboxílicos
de fórmula I en donde los símbolos y sustituyentes tienen los
significados ofrecidos más adelante, en forma libre o en forma de
una sal o complejo farmacéuticamente aceptable, siendo referido
dicho grupo de compuestos de aquí en adelante y de forma colectiva
como Compuestos de la Invención, en la preparación de una
composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad
proliferativa, por ejemplo de un tumor sólido; a nuevos ácidos
2,4-diamino-3-hidroxicarboxílicos
y sus sales farmacéuticamente aceptables; y a una composición
farmacéutica que comprende un Compuesto de la Invención junto con
un vehículo farmacéutico.
Las proteínas reconocidas para la degradación por
el complejo multicatalítico de proteasoma son conocidas por tener,
inter alia, funciones en el control del ciclo celular (por ejemplo,
ciclinas, p21, p27) y en la apoptosis (por ejemplo, p53) (Rolfe,
M., Chiu, I.M. y Pagano, M., The ubiquitin-mediated
proteolytic pathway as therapeutic area. J. Mol. Med. 75, 1997,
5-17). Por tanto, los inhibidores de la proteasoma
son adecuados para el tratamiento de enfermedades proliferativas
que responden a la inhibición de la actividad de la proteasoma. Se
pueden citar aquí las enfermedades proliferativas tales como
psoriasis y en particular tumores sólidos tales como tumor de
colon, tumor de mama, tumor de pulmón y tumor de próstata.
La presente invención se refiere al nuevo uso de
ácidos
2,4-diamino-3-hidroxicarboxílicos
de fórmula I,
en
donde
A y B representan independientemente un enlace o
una mitad aminoacilo insustituida o sustituida;
R_{1} representa hidrógeno; un grupo
amino-protector; un grupo de fórmula R_{5}Y- en
donde R_{5} representa hidrógeno o un grupo alquilo, alquenilo,
alquinilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo,
heterociclilo o heterociclilalquilo, insustituido o sustituido; e Y
representa -CO-; -NH-CO-; -NH-CS-;
-SO_{2}-; -O-CO-; o -O-CS-;
R_{2} representa la cadena lateral de un
aminoácido natural; un grupo alquilo, arilalquilo,
heteroarilalquilo o cicloalquilalquilo; o trimetilsililmetilo,
2-tienilmetilo o estirilmetilo;
R_{3} representa halógeno, alquilo, alcoxi o
hidroxialcoxi; y
R_{4} representa
2(R)-hidroxiindan-1(S)-ilo;
(S)-2-hidroxi-1-feniletilo;
o 2-hidroxi-bencilo insustituido o
sustituido en la posición 4 por metoxi;
en donde el ácido
2,4-diamino-3-hidroxicarboxílico
se encuentra en forma libre o como una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo, en la preparación de una composición
farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad proliferativa
sensible a una inhibición del complejo multicatalítico de
proteasoma.
Alquilo insustituido o sustituido es
preferentemente alquilo de 1 a 5 átomos de carbono, con preferencia
de 1 a 4 átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, isopropilo
o terc-butilo; especialmente es de 1 o 4 átomos de
carbono. El sustituyente es, por ejemplo, fenoxi, hidroxi o amino
sin proteger o protegido.
Arilalquilo insustituido o sustituido es, por
ejemplo, fenilalquilo que en conjunto tiene de 7 a 10 átomos de
carbono, tal como bencilo o 2-feniletilo. Esta
insustituido o sustituido en la mitad arilo o alquilo por, por
ejemplo, hidroxi, tal como en bencil-CH(OH)-
o fenil-CH(CH_{2}OH)-, por alquilo, amino
o alquilamino; o es, por ejemplo, naftilalquilo de 1 a 4 átomos de
carbono en la parte alquileno, especialmente naftilmetilo.
Un grupo amino-protector es
preferentemente benciloxicarbonilo, cicloalquilalcoxicarbonilo,
especialmente ciclohexilmetoxicarbonilo o
terc-butoxicarbonilo. Heteroarilalquilo insustituido
o sustituido es preferentemente piridilalquilo, en especial
2-piridilmetilo y
4-piridilmetilo.
Arilo, heteroarilo y las partes arilo de
arilalquilo y heteroarilalquilo pueden ser mono- o policíclicos,
tales como, por ejemplo, piridilo, naftilo o bencimidazolilo. La
parte alquileno de arilalquilo o heteroarilalquilo puede estar
sustituida, por ejemplo, por metoxi.
Un grupo heterociclilo, y la parte heterociclilo
de un grupo heterociclilalquilo, es un grupo heterocíclico saturado
que tiene uno o más heteroátomos seleccionados entre nitrógeno,
oxígeno y azufre. Preferentemente tiene 5 o 6 átomos constituyentes
en el anillo y preferentemente hasta 3 heteroátomos.
Cicloalquilalquilo es preferentemente
ciclohexilalquilo; con preferencia es de 1 a 4 átomos de carbono en
la parte alquileno.
Halógeno es fluor, cloro, bromo o yodo,
preferentemente cloro o bromo.
Alquilo y alcoxi son preferentemente de 1 a 4
átomos de carbono, en especial de 1 o 2 átomos de carbono, más
especialmente metilo o metoxi.
Hidroxialcoxi es preferentemente
\omega-hidroxialcoxi de 2 a 4 átomos de carbono,
especialmente 2-hidroxietoxi.
Una sal es, por ejemplo, una sal de adición de
ácido tal como un hidrocloruro.
Los compuestos de fórmula I tienen varios centros
quirales y, por tanto, pueden existir en una variedad de
estereoisómeros. La invención proporciona todos los estereoisómeros
así como mezclas racémicas, salvo que se indique lo contrario. Los
isómeros pueden ser resueltos o separados por técnicas
convencionales, por ejemplo cromatografía. Como se desprende de la
fórmula I, la configuración en el átomo de carbono en la posición 2
es R, en las posiciones 3 y 4 es S.
R_{1} es preferentemente hidrógeno,
piridilalcoxicarbonilo, naftilalcoxicarbonilo,
naftilalquilcarbonilo,
bencil-CH(OH)-carbonilo,
fenoximetilcarbonilo, fenilalquilcarbonilo o un grupo
amino-protector tal como
terc-butoxicarbonilo, cicloalquilalcoxicarbonilo,
en especial ciclohexilmetoxicarbonilo, o benciloxicarbonilo que
está insustituido o sustituido por alquilo o amino; en especial es
naftilmetoxicarbonilo, naftilmetilcarbonilo, piridilmetoxicarbonilo,
fenilpropionilo, aminofenilpropionilo,
terc-butoxicarbonilo,
amino-benciloxicarbonilo, alquilbenciloxicarbonilo,
dialquilbenciloxicarbonilo o benciloxicarbonilo, incluso más
preferentemente benciloxicarbonilo.
Cuando A es una mitad aminoacilo insustituida o
sustituida, preferentemente es una mitad
\alpha-aminoacilo insustituida o sustituida, tal
como alanina, leucina, isoleucina, asparagina, valina,
terc-butilglicina, terc-leucina o
histidina. Preferentemente es la mitad protegida o sin proteger de
un \alpha-aminoácido natural, preferentemente de
un aminoácido que es una parte constitutiva normal de las proteínas,
o terc-leucina. Preferentemente tiene la
configuración L. En especial, A es glicina,
L-valina,
L-terc-leucina o un enlace, incluso
más preferentemente
L-terc-leucina.
R_{2} es preferentemente la cadena lateral de
un aminoácido natural, preferentemente de un
\alpha-aminoácido, con preferencia de un
aminoácido que es una parte constitutiva normal de las proteínas.
Por ejemplo, es isopropilo, aminocarbonilmetilo, metilo,
1-metilpropilo, bencilo,
4-hidroxibencilo o isobutilo, preferentemente
bencilo.
Cuando B es una mitad aminoacilo insustituida o
sustituida, preferentemente es una mitad
\alpha-aminoacilo insustituida o sustituida, tal
como fenilalanina, valina, leucina, isoleucina, alanina o
asparagina. Preferentemente es la mitad insustituida o sustituida
de un \alpha-aminoácido natural, preferentemente
de un aminoácido que es una parte constitutiva normal de las
proteínas. Los \alpha-aminoácidos con un segundo
grupo carboxilo, por ejemplo ácido glutaminíco, están esterificados
preferentemente con un alcohol C_{1}-C_{3}, en
especial metanol. Preferentemente tiene la configuración L. En
especial, B es L-valina, éster metílico de ácido
L-glutamínico o un enlace, incluso más
preferentemente L-valina.
R_{3} es preferentemente halógeno, metilo o
metoxi, en especial metoxi.
R_{4} es preferentemente
2(R)-hidroxiindan-1(S)-ilo
o 2-hidroxibencilo insustituido o sustituido como
se ha definido anteriormente, en especial 2-
hidroxi-4-metoxibencilo.
Y es preferentemente -CO- o
-O-CO-, en especial -O-CO-.
R_{5} es preferentemente un grupo alquilo,
arilalquilo o heteroarilalquilo, insustituido o sustituido, en
especial alquilo; cuando es heteroarilalquilo insustituido o
sustituido es preferentemente piridilalquilo, en especial
2-piridilmetilo; cuando es arilalquilo insustituido
o sustituido es preferentemente
bencil-CH(OH)-; cuando es alquilo sustituido,
es preferentemente fenoximetilo.
Los Compuestos de la Invención se describen en
las solicitudes de patentes EP 94810150.6 y JP
041047/94 y en las patentes AU 672867, EC 967021, TW NI-74341 y US 5.538.997 como activos contra el SIDA debido a su capacidad para inhibir la proteinasa de HIV.
041047/94 y en las patentes AU 672867, EC 967021, TW NI-74341 y US 5.538.997 como activos contra el SIDA debido a su capacidad para inhibir la proteinasa de HIV.
De acuerdo con la presente invención, se ha
encontrado ahora que los Compuestos de la Invención tienen de manera
sorprendente un efecto beneficioso sobre enfermedades
proliferativas, por ejemplo sobre psoriasis y en particular sobre
tumores sólidos tales como tumor de colon, tumor de mama, tumor de
pulmón y tumor de próstata.
Los Compuestos de la Invención se pueden preparar
mediante un procedimiento como el descrito en las patentes y
solicitudes de patentes anteriormente citadas. En especial, los
compuestos de la tabla I se pueden preparar mediante los
procedimientos descritos a continuación (se hace referencia a US
5.538.997).
| Abreviaturas: | |
| Bn | bencilo |
| BOC | terc-butoxicarbonilo |
| ES-MS | espectrometría de masas de pulverización electrónica |
| Glu | ácido glutamínico |
| Gly | glicina |
| HPLC | cromatografía líquida de alta presión |
| Me | metilo |
| TFA | ácido trifluoracético |
| tLeu | terc-leucina |
| Val | valina |
| Z | benciloxicarbonilo |
Los ejemplos 1-15 se preparan en
la forma descrita en el esquema de reacción general de US 5.538.997
para la conversión de compuestos de fórmula III a compuestos de
fórmula VII. La síntesis de los diferentes bloques de construcción
se describe en la referida patente US en los ejemplos 1 a 4,
columnas 6 a 8, y en "Otros compuestos intermedios", columnas
9 a 11.
La pureza de los compuestos de verifica mediante
HPLC analítica de fase inversa en una columna Nucleosil C18 (250 x
4 mm, 5 mm, 100 \ring{A}): Sistema A: gradiente lineal durante 7
minutos de MeCN/0,09% TFA y H_{2}O/0,1% TFA de 1:49 a 1:0 y 3 min
a 1:0; velocidad de flujo 2,0 mL/min, detección a 215 nm; Sistema
B: gradiente lineal durante 10 min de MeCN/0,09% TFA y H_{2}O/0,1%
TFA de 1:49 a 1:0; velocidad de flujo 2,0 mL/min, detección a 215
nm. Sistema C: HPLC analítica de fase inversa en una columna
Nucleosil C_{18AB} (125 x 3 mm, 3 \mum, 120 \ring{A});
gradiente lineal durante 7 minutos de MeCN/0,09% TFA y H_{2}O/0,1%
TFA de 1:49 a 1:0 y 3 min a 1:0; velocidad de flujo 1,15 mL/min,
detección a 215 nm.
El compuesto del ejemplo 1 corresponde al
compuesto del ejemplo 4 de US 5.538.997.
El compuesto del título se prepara de manera
análoga a la descrita en el ejemplo 4 de US 5.538.997. Los bloques
de construcción se preparan utilizando
\gamma-metiléster
\alpha-p-nitrofeniléster de ácido
BOC-L-glutámico en lugar de
p-nitrofeniléster de
BOC-L-valina en la etapa C.c) y
BOC-L-valina en lugar de
BOC-L-terc-leucina
en la etapa B) en "Otros compuestos intermedios";
ES-MS 856 [M + H^{+}].
El compuesto del ejemplo 3 corresponde al
compuesto del ejemplo 11 de US 5.538.997.
El compuesto del título se prepara de manera
análoga a la descrita en el ejemplo 4 de US 5.538.997 empleando
naftalen-1-ilmetiléster
4-nitrofeniléster de ácido carbónico en lugar de
N-(benciloxicarboniloxi)-succinimida. El
naftalen-1-ilmetiléster
4-nitrofeniléster de ácido carbónico se prepara a
partir de 1-naftalenmetanol (Aldrich, Buchs,
Switzerland) de acuerdo con un procedimiento conocido en el estado
de la técnica (P. Furet et al., J. Med. Chem. 1997,
40, 3551-3556). ES-MS
(compuesto del título): 877,3 [M + H^{+}], 899,4 [M + Na^{+}];
la HPLC (Sistema A) produjo un solo pico a t_{R} = 7,30 min.
El compuesto del título se prepara de manera
análoga a la descrita en el ejemplo 4 de US 5.538.997 empleando
naftalen-1-ilmetiléster
4-nitrofeniléster de ácido carbónico en lugar de
N-(benciloxicarboniloxi)-succinimida. El
naftalen-1-ilmetiléster
4-nitrofeniléster de ácido carbónico se prepara a
partir de 1-naftalenmetanol (Aldrich, Buchs,
Switzerland) de acuerdo con un procedimiento conocido en el estado
de la técnica (P. Furet et al., J. Med. Chem. 1997,
40, 3551-3556). ES-MS
(compuesto del título): 877,3 [M + H^{+}], 899,4 [M + Na^{+}];
la HPLC (Sistema A) produjo un solo pico a t_{R} = 7,38 min.
El compuesto del título se prepara de manera
análoga a la descrita en el ejemplo 4 de US 5.538.997 empleando
4-nitrofeniléster
piridin-4-ilmetiléster de ácido
carbónico en lugar de
N-(benciloxicarboniloxi)-succinimida. El
4-nitrofeniléster
piridin-4-ilmetiléster de ácido
carbónico se prepara a partir de 4-(hidroximetil)piridina
(Fluka, Buchs, Switzerland) de acuerdo con un procedimiento
conocido en el estado de la técnica (P. Furet et al., J. Med.
Chem. 1997, 40, 3551-3556).
ES-MS (compuesto del título): 828,3 [M + H^{+}],
849,2 [M + Na^{+}]; la HPLC (Sistema B) produjo un solo pico a
t_{R} = 6,80 min.
El compuesto del título se prepara de manera
análoga a la descrita en el ejemplo 4 de US 5.538.997. Se prepara
uno de los bloques de construcción utilizando
Z-L-glicina en lugar de
BOC-L-terc-leucina
en la etapa B) en "Otros compuestos intermedios".
ES-MS: 771,0 [M + H^{+}]; la HPLC (Sistema B)
produjo un solo pico en t_{R} = 9,45 min.
El compuesto del ejemplo 8 corresponde al
compuesto del ejemplo 22 de US 5.538.997. ES-MS:
813,0 [M + H^{+}]; la HPLC (Sistema A) produjo un solo pico en
t_{R} = 7,53 min.
El compuesto del título se prepara de manera
análoga a la descrita en el ejemplo 4 de US 5.538.997. Se prepara
uno de los bloques de construcción empleando
p-nitrofeniléster de
BOC-L-terc-leucina
en lugar de p-nitrofeniléster de
BOC-L-valina en la etapa C.c) en
"Otros compuestos intermedios". ES-MS
(compuesto del título): 841,0 [M + H^{+}]; la HPLC (Sistema A)
produjo un solo pico en t_{R} = 7,22 min.
El compuesto del título se prepara de manera
análoga a la descrita en el ejemplo 4 de US 5.538.997 empleando
ácido 1-naftilacético (Fluka, Buchs, Switzerland)
para incorporar el grupo N-terminal final R_{1}.
El ácido 1-naftilacético (1,1 equivalentes) se
acopla primero con
2-(2-piridon-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio-tetrafluorborato
(1,1 equivalentes; Fluka) en presencia de diisopropiletilamina (2,2
equivalentes) y empleando N,N-dimetilacetamida como
disolvente. ES-MS (compuesto del título): 861,0 [M +
H^{+}], 883,1 [M + H^{+}]; la HPLC (Sistema A) produjo un solo
pico en t_{R} = 7,17 min.
El compuesto del título se prepara de manera
análoga a la descrita en el ejemplo 4 de US 5.538.997 empleando
3-metilbenciléster 4-nitrofeniléster
de ácido carbónico en lugar de
N-(benciloxicarboniloxi)-succinimida. El
3-metilbenciléster 4-nitrofeniléster
de ácido carbónico se prepara a partir de alcohol
3-metilbencílico (Aldrich, Buchs, Switzerland) de
acuerdo con un procedimiento conocido en el estado de la técnica
(P. Furet et al., J. Med. Chem. 1997, 40,
3551-3556). ES-MS (compuesto del
título): 841,0 [M + H^{+}], 843,0 [M + Na^{+}]; la HPLC
(Sistema A) produjo un solo pico a t_{R} = 7,17 min.
El compuesto del título se prepara de manera
análoga a la descrita en el ejemplo 4 de US 5.538.997, pero
empleando ácido
3-(3-terc-butoxicarbonilamino-fenil)-propionico
para incorporar el grupo N-terminal final R_{1}.
El ácido
3-(3-terc-butoxicarbonilamino-fenil)-propionico
se prepara a partir de ácido
3-(3-aminofenil)propiónico (Trans World
Chemicals, Inc., Rockville, USA) de acuerdo con un procedimiento
conocido en la técnica (P. Furet et al., J. Med. Chem. 1997,
40, 3551-3556) y se incorpora en el terminal N
empleando un protocolo análogo al del ejemplo 10. El grupo
terc-butoxicarbonilo se separa por tratamiento con
ácido trifluoracético. ES-MS (compuesto del título):
840,0 [M + H^{+}], 862,1 [M + Na^{+}]; la HPLC (Sistema A)
produjo un solo pico en t_{R} = 5,74 min.
El compuesto del título se prepara de manera
análoga a la descrita en el ejemplo 4 de US 5.538.997 empleando
3-terc-butoxicarbonilamino-benciléster
4-nitrofeniléster de ácido carbónico en lugar de
N-(benciloxicarboniloxi)-succinimida. El
3-terc-butoxicarbonilamino-benciléster
4-nitrofeniléster de ácido carbónico se prepara a
partir de alcohol 3-aminobencílico (Aldrich) de
acuerdo con un procedimiento conocido en la técnica (P. Furet et
al., J. Med. Chem. 1997, 40, 3551-3556). El
grupo terc-butoxicarbonilo se separa por
tratamiento con ácido trifluoracético. ES-MS
(compuesto del título): 842,0 [M + H^{+}], 864,0 [M + Na^{+}],
t_{R} = 5,85 min (HPLC, Sistema A).
El compuesto del título se prepara de manera
análoga a la descrita en el ejemplo 4 de US 5.538.997 empleando
3,5-dimetil-benciléster
4-nitro-feniléster de ácido
carbónico en lugar de
N-(benciloxicarboniloxi)-succinimida. El
3,5-dimetil-benciléster
4-nitro-feniléster de ácido
carbónico se prepara a partir de alcohol
3,5-dimetilbencílico (Aldrich, Switzerland) de
acuerdo con un procedimiento conocido en la técnica (P. Furet et
al., J. Med. Chem. 1997, 40, 3551-3556).
ES-MS (compuesto del título): 855,0 [M + H^{+}],
877,0 [M + Na^{+}], t_{R} = 7,32 min (HPLC, Sistema A).
El compuesto del título se prepara de manera
análoga a la descrita en el ejemplo 4 de US 5.538.997 empleando
3,5-dimetil-benciléster
4-nitro-feniléster de ácido
carbónico en lugar de
N-(benciloxicarboniloxi)-succinimida. El
ciclohexilmetiléster
4-nitro-feniléster de ácido
carbónico (1,1 equivalentes) se prepara a partir de
ciclohexil-metanol (Fluka, Buchs, Switzerland) de
acuerdo con un procedimiento conocido en la técnica (P. Furet et
al., J. Med. Chem. 1997, 40, 3551-3556).
ES-MS (compuesto del título): 833,0, t_{R} = 7,55
min (HPLC, Sistema C).
Se pueden preparar 20 g de una solución para
aplicación oral como sigue (% significa peso ingrediente/peso
solución total):
| Cremophor RH 40 | 9,6 g (48%), |
| mono-di-tri-glicéridos de aceite de maíz | 5,8 g (29%), |
| propilenglicol | 3,8 g (19%), |
| compuesto de fórmula I | 0,8 g ( 4%). |
La solución se mantiene a temperatura ambiente
hasta su uso.
La utilidad de los Compuestos de la Invención en
el tratamiento de las enfermedades proliferativas mencionadas
anteriormente, por ejemplo, se puede demostrar en los métodos de
ensayo descritos a continuación.
Los Compuestos de la Invención inhiben la 20S
proteasoma.
El complejo multicatalítico de proteasoma es
responsable de la proteolisis dependiente de ATP de la mayoría de
las proteínas celulares. Aunque la 20S proteasoma contiene el
núcleo proteolítico, la misma no puede degradar proteínas in
vitro salvo que se compleje con 19S caps, en cualquiera de los
extremos de su estructura, que así mismo contiene múltiples
actividades de ATPasa. Esta estructura más grande se conoce como la
26S proteasoma y degradará rápidamente proteínas que han sido
reconocidas para la degradación por la adición de múltiples
moléculas del polipéptido ubiquitina de 8,5 kDa. Las proteínas
reconocidas para la degradación proteasómica tienen funciones en el
control del ciclo celular (por ejemplo, ciclinas, p21, p27) y en la
apóptosis (por ejemplo, p53) (Rolfe, M., Chiu, I.M. y Pagano, M.,
véase anteriormente). Los Compuestos de la Invención resultan por
tanto altamente adecuados para el tratamiento de enfermedades que
responden a la inhibición de la actividad de la 20S proteasoma, lo
cual es el caso para las enfermedades proliferativas antes
mencionadas.
La inhibición de la actividad de tipo
quimotripsina de la 20S proteasoma se puede demostrar por el
siguiente experimento. Este está basado en la hidrólisis del
péptido fluorogénico Suc-LLVY-AMC
(succinil-leucina-leucina-valina-tirosina-7-amino-4-metil-cumarina),
el cual se disocia exclusivamente en el enlace
Y-AMC por la 20S proteasoma. La hidrólisis de este
péptido viene acompañada de un incremento de la intensidad de
fluorescencia (\lambda_{ex} 355 nm, \lambda_{em} 460 nm)
debido a la liberación de la fluorescencia de
2-aminobenzoilo internamente enfriada que acompaña a
la difusión además del producto de hidrólisis
Suc-LLVY.
Se preincuban 2 \mul de una solución 1 mM de un
compuesto del ensayo en DMSO (dimetilsulfóxido, concentración
lineal de 20 \muM en el pocillo) durante 60 minutos a temperatura
ambiente en placas de microvaloración de 96 pocillos de color negro
junto con una mezcla de 1 \mul de 20S proteasoma de placenta
humana (Diabetes Forschungsinstitut, Dusseldorf, Germany; alrededor
de 100 ng de proteasoma, dependiendo del preparado de proteasoma) y
47u \mul tampón-Ca (5 mM CaCl_{2}, 20 mM
Tris/HCl (hidrocloruro de
tris-(hidroximetil)-amino-metano)
pH 8,0). Se mezclan y se añaden entonces 3 \mul de una solución
2,67 mM de Suc-LLVY-AMC (Bachem,
Switzerland) en DMSO (concentración lineal de 80 \muM en el
pocillo) y 47 \mul de tampón-Ca. La mezcla
resultante se incuba durante 3-24 horas a 37ºC. Si
se desea, la proteolisis del sustrato se puede detener por adición
de 50 \mul de solución de parada (100 mM de ácido
monocloroacético, 130 mM de NaOH, 100 mM de ácido acético, pH =
4,3). La fluorescencia se controla con un lector de placas de
microvaloración FLUOROSKAN ASCENT™.
Por cada serie de mediciones han de realizarse
dos experimentos de control:
1.) valor 0%: se emplean 2 \mul de DMSO en el
ensayo antes descrito en lugar de 2 \mul de una solución 1 mM de
un compuesto del ensayo en DMSO y 48 \mul de
tampón-Ca en lugar de una mezcla de 47 \mul de
tampón-Ca y 1 \mul de proteasoma purificada.
2.) valor 100%: en el ensayo antes descrito se
emplean 2 \mul de DMSO en lugar de 2 \mul de una solución 1 mM
del compuesto del ensayo en DMSO.
Cálculo:
% \ actividad
\ remanente=\frac{\text{(valor del compuesto - valor
0%)}}{\text{(valor 100% - valor 0%)}} \ \cdot
100%
El valor IC_{50} se define como aquella
concentración de un compuesto a la cual la actividad remanente es
del 50%. Ejemplos de valores IC_{50} determinados en este ensayo
para los Compuestos de la Invención se ofrecen a continuación
(Tabla 2).
La actividad antitumoral de los Compuestos de la
Invención se puede demostrar también in vivo:
Se emplean ratones BALB/c nu/un hembras o machos
(Novartis animal farm, Sisseln, Switzerland o Bomholtgaard,
Copenhagen, Denmark) con tumores humanos transplantados
subcutáneamente, para la evaluación de la actividad antitumoral de
los Compuestos de la Invención contra líneas celulares procedentes
de los cuatro tipos de tumores: tumor de mama:
MCF-7; tumor de pulmón: NCI H596; tumor de colon:
HCT 116; y tumor de próstata: PC 3.
A partir de la American Type Culture Collection
(ATCC; Rockville, USA) se obtienen carcinoma de colon humano HCT
116 (ATCC CCL 247), carcinoma de pulmón humano de células escamosas
NCI H596 (ATCC HTB 178), carcinoma de mama dependiente de
estrógenos MCF-7 (ATCC HTB 22) y la línea celular de
cáncer de próstata humana PC 3. Las células se cultivan a 37ºC en
una atmósfera de 5% v/v de CO_{2} y 80% de humedad relativa en
los siguientes medios: NCI H 596: RPMI 1640, 20% v/v FBS (suero
bovino fetal), 1% p/v glutamina; HCT-116: McCoy's
5A, 10% v/v FBS, 1% p/v glutamina; PC 3: RPMI 1640, 20% v/v FBS, 1%
p/v glutamina; MCF-7, RPMI 1640, 20% v/v FBS, 1% p/v
glutamina. Todas estas líneas celulares son adherentes y pueden ser
liberadas mediante enjuagado con sal compensada de Hank y
tratamiento con tripsina al 0,25% p/v. Todas estas células se
preparan como materiales de células madre (en medios de cultivo
suplementados para contener 20% v/v FBS y 7% v/v DMSO) y se guardan
a -125ºC (vapores de nitrógeno líquido). A partir de los materiales
de células madre se preparan materiales de células de trabajo
mediante descongelación y expansión de las células durante tres
subcultivos, los cuales se distribuyen entonces en viales y se
congelan. La viabilidad (ensayo de exclusión con azul de tripano
empleando 0,5% p/v de azul de tripano) antes de la congelación es
de >90% para todas las líneas celulares.
Los ratones se mantienen bajo condiciones
controladas (Condiciones Higiénicas Optimas, [OHC]) con acceso
libre a comida y agua estériles. Los tumores se establecen después
de la inyección subcutánea de células (un mínimo de 2 x 10^{6}
células en 100 \mul de PBS (salina tamponada con fosfato) o
media) en los ratones portadores (4-8 ratones por
línea celular). Las inyecciones se efectúan s.c. en el lomo
izquierdo del ratón en un punto equidistante entre el rabo y la
cabeza. Los tumores resultantes son subcultivados en serie durante
un mínimo de tres transplantes consecutivos antes de iniciarse el
tratamiento. Los tumores son transplantados cuando el tumor alcanza
un volumen de 800 a 1.000 mm^{3}.
Los ratones donantes se anestesian (Forene®,
Abbott, Switzerland) y se sacrifican mediante dislocación cervical.
Se desinfecta la piel y el tumor se separa por disección. Empleando
un escalpelo, se retiran los bordes exteriores de la masa tumoral y
la masa resultante se recorta en piezas de alrededor de
3-4 mm de altura. Se cortan secciones de
3-4 mm^{2} y se colocan en NaCl estéril al 0,9%
p/v. Las secciones del tumor que están necróticas no se
utilizan.
Se implantan fragmentos del tumor s.c. en el lomo
izquierdo de los ratones receptores. Los ratones receptores son
anestesiados (Forene®, Abbott, Switzerland) y se desinfecta la piel
de toda la espalda y lados de los ratones. Se sube la piel 0,5 a 1
cm por encima del rabo y se efectúa una sola incisión de 1 a 1,5
cm. Se introducen secciones del tumor en una aguja de trocar de
calibre 13. La aguja del trocar se introduce en la abertura de la
piel y se hace avanzar por debajo de la piel hasta un punto
equidistante entre la cabeza y el rabo. Se deposita el fragmento de
tumor haciendo avanzar el trocar. La herida se sutura empleando una
o dos grapas metálicas.
En el caso de tumores de mama dependientes de los
estrógenos, se colocan subcutáneamente, en el otro lomo, pellets de
estrógenos (17b-estradiol, 5 mg/pellet que
proporciona una liberación sostenida durante 60 días, obtenidos en
Innovative Research of America, Sarasota, USA).
Se dejan aumentar los tumores hasta un tamaño de
100 a 150 mm^{3} antes de iniciarse el tratamiento. Los tumores
son entonces medidos y colocados en grupos (normalmente n = 6 a 8),
cuyos grupos son equilibrados de acuerdo con el tamaño medio y
variedad de volúmenes de los tumores. Los grupos son asignados de
forma aleatoria a grupos de tratamiento.
Se disuelven soluciones madre de 40 mg/ml de
compuesto en 100% de DMSO y se agita a temperatura ambiente hasta
que se obtiene una solución clara. Antes de cada administración, se
añade 10% de Tween 80 (FLUKA, Buchs, Switzerland) a la solución
madre y luego se diluye 1:20 (v/v) con NaCl estéril al 0,9% p/v o
agua. Se preparan diariamente soluciones y diluciones antes de la
aplicación. Las aplicaciones se efectúan los 7 días de la semana
(p.o., i.p., s.c. o i.v.). Los volúmenes de aplicación son: p.o.,
25 ml/kg, i.p., 25 ml/kg, s.c., 10 ml/kg, i.v., 10 ml/kg.
El crecimiento de los tumores se controla una
vez, dos veces o tres veces a la semana (dependiendo de la
velocidad de crecimiento de la línea tumoral) y 24 horas después
del último tratamiento mediante medición de los diámetros
perpendiculares. Se emplean calibres capaces de determinar
distancias en mm. Los volúmenes de los tumores se calculan de
acuerdo con la fórmula L x D^{2} x \pi/6. La actividad
antitumoral se expresa como T/C % (incremento medio de los
volúmenes de los tumores de los animales tratados divido por el
incremento medio de los volúmenes de los tumores de los animales de
control multiplicado por 100). La regresión tumoral (%) representa
el volumen medio más pequeño del tumor en comparación con el
volumen medio del tumor al inicio del tratamiento. Los volúmenes de
los tumores Delta (\Delta) comparan el cambio en el volumen del
tumor mediante la duración del experimento (volumen en el último día
de tratamiento - volumen en el primer día de tratamiento). Aquellos
animales en donde el tumor alcanza un tamaño que excede
aproximadamente de 1.500 a 2.000 mm^{3} son sacrificados.
También se registran los pesos corporales y datos
de supervivencia. Los pesos corporales Delta (\Delta) se calculan
como una indicación de la tolerabilidad al tratamiento (peso en el
último día de tratamiento - peso en el primer día de tratamiento).
La pérdida de peso corporal estadísticamente importante, o las
mortalidades, se consideran como indicadores de una pobre
tolerabilidad al tratamiento. Además, los ratones son controlados
una o dos veces al día respecto a su salud en general.
La técnica básica para los análisis estadísticos
consiste en utilizar ensayos para múltiples comparaciones
destinadas a juzgar el significado estadístico de las diferencias
entre los grupos de tratamiento y diferencias dentro de un grupo,
para determinar si el tratamiento indujo o no regresiones estables
de la enfermedad o del tumor. Dado que los volúmenes de los tumores
subcutáneos no siempre se encuentran distribuidos de manera normal,
se determinan las diferencias en los volúmenes de los tumores
subcutáneos entre los grupos de tratamiento empleando el análisis
unidireccional no paramétrico ANOVA de
Kruskal-Wallis y se determina el significado
estadístico de las diferencias entre los grupos de tratamiento en
comparación con los grupos de control empleando el ensayo de
Dunnett. Las comparaciones por pares entre todos los grupos se
llevan a cabo empleando el método de
Student-Newman-Keuls (SNK). En el
caso de que solo se comparen dos grupos, se emplea el ensayo de la
suma Rank. Se distribuyen de manera normal los pesos corporales de
los animales y se analizan los cambios en los pesos corporales
dentro de un grupo mediante ensayos t por pares y las diferencias
entre los grupos se analizan mediante el ensayo unidireccional ANOVA
y se efectúan comparaciones por pares empleando el ensayo Tukey.
Para todos los ensayos, el nivel de significado se establece en p
< 0,05.
Otro ensayo in vivo para determinar la
acción antitumoral de los Compuestos de la Invención consiste en el
siguiente ensayo con fibra hueca:
En este ensayo cuatro tumores humanos diferentes,
encapsulados en fibras huecas, se implantan subcutánea y/o
intraperitonealmente en ratones desnudos (ratones hembras atímicos
cruzados (Ncr nu/nu)). Los animales son tratados entonces con un
compuesto del ensayo formulado en un vehículo adecuado, mientras
que los animales de control se tratan solo con el vehículo. Al
término del experimento, se recuperan las fibras y se mide el
número de células viables empleando un ensayo metabólico (MTT
bromuro de
3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazolio).
La actividad del compuesto del ensayo se mide comparando el
crecimiento de las células en los animales experimentales (T) con
el crecimiento en las células en los animales de control tratados
solo con el vehículo (C) y se expresa como %T/C.
A partir de la American Type Culture Collection
(ATCC; Rockville, USA) se obtienen carcinomas de colon humano SW
620 y LS 174T y carcinoma de mama MDA-MB- 435S. El
carcinoma de colon MIP 101, que expresa altos niveles de
pgp-1, fue establecido originalmente a partir de un
paciente en el Dana Farber Cancer Institute, Boston, USA. Todas las
líneas celulares se hacen crecer de acuerdo con técnicas
convencionales de cultivo de tejidos en RPMI 1640 conteniendo los
siguientes aditivos: 5% FBS (Suero Bovino Fetal), 5 mg/ml insulina,
5 mg/ml transferían, 5 ng/ml ácido selenioso, 1 nM
\beta-estradiol, 1 nM testosterona.
Se encapsulan cuatro líneas de células tumorales
sólidas humanas en fibras huecas de PVDF (fluoruro de
polivinilideno) con un diámetro interior de 1 mm (Biopore, Spectrum
Medical, CA, USA). Después de la encapsulación y antes de
implantarse en los animales, se deja que las células se adhieran a
la superficie interior de la fibra por incubación en los medios de
cultivo de tejidos durante 24 horas. Se implantan entonces cuatro
fibras huecas en uno de los animales por vía intraperitoneal o
subcutánea. En el diseño experimental, se emplean de 4 a 6 animales
por grupo y el experimento consiste en un mínimo de tres
grupos:
| 1. | Grupo de "Tiempo 0" |
| 2. | Grupo de Control (placebo) |
| 3. | Grupo "Tratado" (compuesto ensayado) |
El tratamiento se inicia 24 horas después de la
implantación de las fibras. Los animales se tratan una vez al día,
en los días 1, 3 y 5. Al mismo tiempo que comienza el tratamiento,
los animales del grupo de "Tiempo 0" son sacrificados, se
recuperan las fibras y se determina el número de células viables al
comienzo del experimento (T_{0}). En el día 7 después de la
implantación, todos los animales son sacrificados, se recuperan las
fibras y se determina el número de células viables para el grupo de
Control (C_{v}) y para el grupo "Tratado" (T_{v}). Se
calcula entonces en %T/C de acuerdo con la fórmula:
%T/C = (T_{v}
- T_{0})/(C_{v} - T_{0}) x
100%
Las fibras se cortan a la longitud deseada y se
remojan durante al menos 12 horas en etanol al 70%. A continuación,
se esterilizan las fibras y los instrumentos para la encapsulación.
La línea celular tumoral sólida humana, crecida en el cultivo de
tejido, es tripsinizada, suspendida en una pequeña cantidad de
medios de cultivo de tejidos y transferida a las fibras empleando
una jeringa. Las fibras son selladas por calor e incubadas a 37ºC
durante 24 horas en una atmósfera que comprende 5% CO_{2}. Las
fibras se implantan entonces subcutánea y/o intraperitonealmente en
ratones desnudos.
Se añade 1 g de MTT a 200 ml de PBS (salina
tamponada con fosfato), se agita durante 20 minutos y se filtra
(filtro de 0,22 micrómetros). Se mezclan 10 ml de esta solución con
40 ml de RPMI 1640 con aditivos para obtener la solución de trabajo
de MTT. Las fibras se incuban en 5 ml de RPMI 1640 durante 30
minutos a 37ºC con una estabilización de 5% CO_{2}. Se añaden 0,5
ml de la solución de trabajo de MTT a cada pocillo de la placa de
muestras. Las placas se incuban a 37ºC en 5% CO_{2} durante 4
horas. Se aspira el MTT de cada pocillo de la placa de muestras. A
cada pocillo de la placa de muestras se añaden 2 ml de solución
acuosa al 2,5% de sulfato de protamina. Las placas se incuban a 4ºC
durante 24 horas. Se aspira el sulfato de protamina de cada pocillo
de la placa de muestras. A cada pocillo se añaden 2 ml de sulfato
de protamina y las placas se incuban a 4ºC durante otras
2-4 horas. Cada fibra se transfiere a un pocillo de
una placa de 24 pocillos. Las fibras se cortan de manera que las
mismas residan en el fondo de los pocillos y se secan durante la
noche. Se añaden 250 \mul de DMSO a cada pocillo. Las placas se
colocan en un sacudidor orbital durante 4 horas con una cubierta
para proteger al MTT de la luz. Se transfieren 150 \mul de cada
muestra al pocillo adecuado de una placa de 96 pocillos. Las placas
son leídas a 540 nm empleando DMSO como pocillo testigo.
Como es conocido a partir de la bibliografía al
respecto, los fármacos a base de péptidos muestran de manera
característica una pobre biodisponibilidad oral. Esto constituye
uno de los principales obstáculos en el desarrollo de fármacos
eficaces en esta clase estructural péptida. De manera sorprendente,
los Compuestos de la Invención muestran una excelente
biodisponibilidad después de la administración oral. Esto se puede
demostrar, por ejemplo, en el siguiente ensayo:
Para administración peroral, se prepara una
solución de la sustancia de ensayo (25 mg/ml) en un disolvente
adecuado tal como Cremophor RH40®/Maisine®/propilenglicol/etanol
(38/32/15/15). Ratones Balb/c hembras se dejan sin recibir alimento
alguno durante 24 horas antes del inicio del experimento y durante
todo este último se administra agua ad libitum. En diversos
momentos después de la administración del fármaco, se obtienen
muestras de sangre sacrificando los animales bajo anestesia
cortándoles la vena yugular, seguido por dislocación cervical. Se
recogen muestras en tubos heparinizados (habitualmente
0,4-0,6 ml). Para el análisis de las muestras se
emplean extracción en fase sólida y HPLC. La concentración de
fármaco en las muestras se calcula mediante análisis de regresión
lineal mínimo-cuadrática de la relación de área
pico (inhibidor/referencia interna) de referencias de sangre
versus la concentración. A partir de los datos de
concentración versus tiempo, se calcula el valor del "Area
por Debajo de la Curva" (AUC) mediante la regla trapezoidal.
En este ensayo, los compuestos descritos en US
5.538.997 exhiben valores AUC de alrededor de 25 \muM.h a 160
\muM.h a una dosis de 125 mg/kg.
El ensayo demuestra que los Compuestos de la
Invención pueden ser utilizados como productos farmacéuticos.
La invención se refiere en particular al uso de
los Compuestos de la Invención, en donde:
A y B representan independientemente un enlace o
una mitad aminoacilo que está insustituida o sustituida por alquilo
o alcoxicarbonilalquilo;
R_{1} representa hidrógeno; un grupo
amino-protector; un grupo de fórmula R_{5}Y- en
donde R_{5} representa hidrógeno o un grupo alquilo, alquenilo,
alquinilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo,
heterociclilo o heterociclilalquilo, insustituido o sustituido; e Y
representa -CO-; -NH-CO-; -NH-CS-;
-SO_{2}-; -O-CO-; o -O-CS-;
R_{2} representa la cadena lateral de un
aminoácido natural; un grupo alquilo, arilalquilo,
heteroarilalquilo o cicloalquilalquilo; o trimetilsililmetilo,
2-tienilmetilo o estirilmetilo;
R_{3} representa halógeno, alquilo, alcoxi o
hidroxialcoxi; y
R_{4} representa
2(R)-hidroxiindan-1(S)-ilo;
(S)-2-hidroxi-1-feniletilo;
o 2-hidroxi-bencilo insustituido o
sustituido en la posición 4 por metoxi.
La invención se refiere en particular
preferentemente al uso de los Compuestos de la Invención, en
donde:
A y B representan independientemente un enlace o
una mitad aminoacilo que está insustituida o sustituida por alquilo
o alcoxicarbonilalquilo;
R_{1} representa hidrógeno; un grupo
amino-protector; un grupo de fórmula R_{5}Y- en
donde R_{5} representa hidrógeno o un grupo alquilo, alquenilo,
alquinilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo,
heterociclilo o heterociclilalquilo, insustituido o sustituido; e Y
representa -CO-; -NH-CO-; -NH-CS-;
-SO_{2}-; -O-CO-; o -O-CS-;
R_{2} representa arilalquilo;
R_{3} representa halógeno, alquilo, alcoxi o
hidroxialcoxi; y
R_{4} representa
2-hidroxibencilo insustituido o sustituido en la
posición 4 por metoxi.
Además, la invención se refiere preferentemente
al uso de un Compuesto de la Invención, en donde:
A y B representan independientemente una mitad
aminoacilo, que está insustituida o sustituida por alquilo
C_{1}-C_{4} o
alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilalquilo(C_{1}-C_{4});
R_{1} representa hidrógeno o un grupo de
fórmula R_{5}Y- en donde R_{5} representa hidrógeno; alquilo
C_{1}-C_{4} que está insustituido o sustituido
por fenoxi, hidroxi o amino; alquenilo
C_{2}-C_{4}; alquinilo
C_{2}-C_{4}; arilo
C_{6}-C_{10}; arilalquilo
C_{7}-C_{12} que está insustituido o sustituido
por hidroxi, alquilo C_{1}-C_{4}, amino o
alquil(C_{1}-C_{4})amino;
piridilalquilo(C_{1}-C_{4}) e Y
representa -O-CO- o -CO-;
R_{2} representa arilalquilo
C_{7}-C_{12};
R_{3} representa halógeno, alquilo
C_{1}-C_{4}, alcoxi
C_{1}-C_{4} o
hidroxialcoxi(C_{1}-C_{4}); y
R_{4} representa
2-hidroxibencilo que está insustituido o sustituido
en la posición 4 por metoxi.
Más preferentemente, la invención se refiere al
uso de un Compuesto de la Invención, en donde:
A y B representan independientemente una mitad
aminoacilo, que está insustituida o sustituida por alquilo
C_{1}-C_{4} o
alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilalquilo(C_{1}-C_{4});
R_{1} representa hidrógeno o un grupo de
fórmula R_{5}Y- en donde R_{5} representa hidrógeno; alquilo
C_{1}-C_{4} que está insustituido o sustituido
por fenoxi, hidroxi o amino; alquenilo
C_{2}-C_{4}; alquinilo
C_{2}-C_{4}; arilo
C_{6}-C_{10}; arilalquilo
C_{7}-C_{12} que está insustituido o sustituido
por hidroxi, alquilo C_{1}-C_{4}, amino o
alquil(C_{1}-C_{4})amino;
piridilalquilo(C_{1}-C_{4}) e Y
representa -O-CO- o -CO-;
R_{2} representa arilalquilo
C_{7}-C_{12};
R_{3} representa alcoxi
C_{1}-C_{4}; y
R_{4} representa
2-hidroxibencilo sustituido en la posición 4 por
metoxi.
En una modalidad preferida de la invención, el
animal de sangre caliente es un ser humano.
En otra modalidad preferida de la invención, la
dosis terapéuticamente eficaz inhibe la proliferación celular en un
tumor.
Un subgrupo preferido de los Compuestos de la
Invención son los compuestos de fórmula I como se ha definido
anteriormente en donde R_{4} es 2-hidroxibencilo
o, preferentemente,
2-hidroxi-4-metoxibencilo.
La invención se refiere en particular a los
Compuestos de la Invención de fórmula I*,
en
donde
A y B representan independientemente una mitad
aminoacilo insustituida o sustituida;
R_{2} representa arilalquilo;
R_{3} representa halógeno, alquilo, alcoxi o
hidroxialcoxi;
R_{4} representa
2-hidroxibencilo insustituido o sustituido en la
posición 4 por metoxi; y
R_{5} representa arilalquilo e Y representa
-CO-; o
R_{5} representa alquilo sustituido por
cicloalquilo, naftilo, piridilo o fenilo en donde el fenilo está
sustituido por alquilo o amino; e Y representa
-O-CO-.
Los Compuestos de la Invención de fórmula I* que
son preferidos son aquellos, en donde:
A y B representan independientemente
L-terc-leucina,
L-valina, éster metílico de ácido
L-glutamínico o glicina;
R_{2} representa arilalquilo;
R_{3} representa alcoxi; y
R_{4} representa
2-hidroxi-4-metoxibencilo;
R_{5} representa arilalquilo e Y representa
-CO-; o
R_{5} representa alquilo sustituido por
cicloalquilo, naftilo, piridilo o fenilo en donde el fenilo está
sustituido por alquilo o amino; e Y representa
-O-CO-.
Los Compuestos de la Invención de fórmula I* que
son sumamente preferidos son aquellos, en donde:
A y B representan independientemente
L-terc-leucina,
L-valina, éster metílico de ácido
L-glutamínico o glicina;
R_{2} representa arilalquilo
C_{7}-C_{12};
R_{3} representa alcoxi
C_{1}-C_{4};
R_{4} representa
2-hidroxi-4-metoxibencilo;
y
R_{5} representa arilalquilo
C_{7}-C_{12} e Y representa -CO-; o
R_{5} representa alquilo
C_{1}-C_{4} sustituido por cicloalquilo
C_{5}-C_{7}, naftilo, piridilo o fenilo en donde
el fenilo está sustituido por alquilo
C_{1}-C_{4} o amino; e Y representa
-O-CO-.
Otra modalidad preferida de la invención se
refiere al uso de los siguientes compuestos o de una sal
farmacéuticamente aceptable de uno de estos compuestos:
éster de bencilo de ácido
{[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-2-metil-propilcarba-
moil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]-2-metil-propil}-carbámico;
moil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]-2-metil-propil}-carbámico;
N-{4(S)-[N-benciloxicarbonil-terc-leucinoil)amino]-3-(S)-hidroxi-2(R)-(4-metoxibencilamino)-5-fenil}pentanoil-L-valinaa-N-[(2-hidroxi-4-metoxi)bencil]amida;
o
éster de terc-butilo de ácido
{1-[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-2-metil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico.
Además, la invención se refiere a un compuesto
seleccionado del grupo consistente en:
éster metílico de ácido
4-[4-(2-benciloxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-3-hidroxi-2-(4-metoxi-bencilamino)-5-fenil-pentanoilamino]-4-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-butírico;
éster de
naftalen-1-ilmetilo de ácido
{1-[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencil-carbamoil)-2-metil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
éster de
naftalen-1-ilmetilo de ácido
{1-[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencil-carbamoil)-2-metil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
éster de
piridin-4-ilmetilo de ácido
{1-[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencil-carbamoil)-2-metil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
éster de bencilo de ácido
{[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-2-metil-propilcarba-
moil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]metil}-carbámico;
moil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]metil}-carbámico;
éster de bencilo de ácido
{[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-2,2-dimetil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
[1-(2-hdiroxi-4-metoxi-bencil-carbamoil)-2-metil-propil]-amida
de ácido
4-[3,3-dimetil-2-(2-naftalen-1-il-acetilamino)-butirilamino]-3-hidroxi-2-(4-metoxi-bencilmaino)-5-fenil-pentanoico;
éster de 3-metilbencilo de ácido
{1-[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencil-carbamoil)-2-metil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-2-metil-propil]-amida
de ácido
4-{2-[3-(3-amino-fenil)-propionilamino]
-3,3-dimetil-butirilamino}-3-hidroxi-2-(4-metoxi-bencilamino)-5-fenil-pentanoico;
-3,3-dimetil-butirilamino}-3-hidroxi-2-(4-metoxi-bencilamino)-5-fenil-pentanoico;
éster de
3-amino-bencilo de ácido
{1-[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-2-metil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
éster de
3,5-dimetil-bencilo de ácido
{1-[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-2-metil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
o una sal farmacéuticamente aceptable de uno de
estos compuestos.
En una modalidad más preferida de la invención,
la invención se refiere al éster metílico de ácido
4-[4-(2-benciloxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-3-hidroxi-2-(4-metoxi-bencilamino)-5-fenil-pentanoilamino]-4-(2-hidroxi-4-
metoxi-bencilcarbamoil)-butírico o a una sal farmacéuticamente aceptable de este compuesto.
metoxi-bencilcarbamoil)-butírico o a una sal farmacéuticamente aceptable de este compuesto.
Por otro lado, la invención se refiere en
particular a un compuesto seleccionado del grupo consistente
en:
éster metílico de ácido
4-[4-(2-benciloxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-3-hidroxi-2-(4-metoxi-bencilamino)-5-fenil-pentanoilamino]-4-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-butírico;
éster de
naftalen-1-ilmetilo de ácido
{1-[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencil-carbamoil)-2-metil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
éster de
naftalen-1-ilmetilo de ácido
{1-[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencil-carbamoil)-2-metil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
éster de
piridin-4-ilmetilo de ácido
{1-[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencil-carbamoil)-2-metil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
éster de bencilo de ácido
{[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-2-metil-propilcarba-
moil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]metil}-carbámico;
moil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]metil}-carbámico;
éster de bencilo de ácido
{[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-2,2-dimetil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
y
éster de ciclohexilmetilo de ácido
{1-[(1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-2-metil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
o
o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho
compuesto para utilizarse en un método de tratamiento terapéutico
del cuerpo humano o animal.
Además, la invención se refiere al uso de un
Compuesto de la Invención para el tratamiento de una enfermedad
proliferativa. La invención se refiere también al uso del Compuesto
de la Invención en la inhibición del complejo multicatalítico de
proteasoma en animales de sangre caliente, en particular en seres
humanos.
Los Compuestos de la Invención se pueden mezclar
con diluyentes y vehículos quimioterapéuticamente aceptables
convencionales y administrase, por ejemplo, por vía parenteral o
intravenosa, preferentemente por vía oral, en formas tales como
soluciones, comprimidos o cápsulas. Las concentraciones de sustancia
activa variarán, como es lógico, en función, por ejemplo, del
Compuesto de la Invención empleado, del tratamiento deseado y de la
naturaleza de la forma.
Dichas composiciones forman parte de la
invención. La invención se refiere así también a una composición
farmacéutica que comprende un Compuesto de la Invención de fórmula
I* junto con un vehículo farmacéutico, en especial para el
tratamiento de una enfermedad proliferativa.
Se pueden obtener composiciones estables para
administración oral que ofrecen una alta eficiencia de absorción y
una alta carga de fármaco mediante la formulación de un agente de
la invención con un medio de vehículo que comprende una fase
hidrófila, una fase lipófila y un surfactante. Preferentemente, la
composición se encuentra en forma de un "preconcentrado en
microemulsión" o "preconcentrado en emulsión", en
particular del tipo que proporciona microemulsiones o emulsiones
o/w (aceite-en-agua). Sin embargo,
la composición puede estar en forma de una microemulsión o una
emulsión que además contiene una fase acuosa, preferentemente agua.
Un "preconcentrado en microemulsión" es una formulación que
forma de manera espontánea una microemulsión en un medio acuoso,
por ejemplo en agua o en los jugos gástricos después de la
aplicación oral. Una "microemulsión" es una dispersión
coloidal no opaca o sustancialmente no opaca que se forma de manera
espontánea o de un modo sustancialmente espontáneo cuando sus
componentes se ponen en contacto entre sí. Una microemulsión es
termodinámicamente estable.
Un "preconcentrado en emulsión" es una
formulación que forma de manera espontánea una emulsión en un medio
acuoso, por ejemplo en agua o en los jugos gástricos, después de la
aplicación oral. La emulsión formada es opaca y termodinámicamente
estable. La fase lipófila puede comprender de 10 a 85% en peso del
medio de vehículo; el surfactante puede comprender de 5 a 80% en
peso del medio de vehículo; la fase hidrófila puede comprender de 10
a 50% en peso del medio de vehículo.
El Compuesto de la Invención está presente
preferentemente en una cantidad de alrededor de 1 a 15% en peso de
la composición, más preferentemente de alrededor de 2 a 8%.
La fase hidrófila se puede elegir, por ejemplo,
entre Transcutol®
(C_{2}H_{5}-[O-(CH_{2})_{2}]_{2}-OH),
Glycofurol® (conocido también como polietilenglicoléter de alcohol
tetrahidrofurfurílico) y 1,2-propilenglicol, o
mezclas de los mismos, y preferentemente es
1,2-propilenglicol. Puede incluir otros
co-componentes hidrófilos, por ejemplo alcanoles
C_{1}-C_{5}.
Los componentes preferidos de la fase lipófila
son triglicéridos de ácidos grasos de cadena media, mono-, di- y
tri-glicéridos mezclados, y aceites vegetales
etoxilados y transesterificados. Los triglicéridos de ácidos grasos
de cadena media adecuados son aquellos conocidos y comercialmente
disponibles con los nombres registrados Miglyol®, Captex®, Captex®,
Neobee® y Mazol®; siendo Miglyol® el más preferido. Los mono-, di-
y tri-glicéridos mezclados comprenden
preferentemente mezclas de mono-, di- y
tri-glicéridos de ácidos grasos
C_{12-20}. El componente de ácido graso de los
mono-, di- y tri-glicéridos mezclados puede
comprender residuos de ácidos grasos saturados e insaturados. Los
aceites vegetales etoxilados y transesterificados comprenden
productos de transesterificación de, por ejemplo, aceite de
almendras, aceite de palma o, preferentemente, aceite de maíz,
aceite de girasol o aceite de cártamo y más preferentemente aceite
de maíz, con glicerol. Además de sus componentes de mono-, di- y
tri-glicéridos, los productos de transesterificación
comprenden también generalmente cantidades menores de glicerol
libre. Preferentemente se separa primero parte del glicerol para
proporcionar un "lote sustancialmente libre de glicerol" cuando
han de producirse cápsulas de gelatina blanda.
Los productos de transesterificación de aceite de
maíz y glicerol proporcionan mono-, di- y
tri-glicéridos mezclados particularmente adecuados.
Un ejemplo de un producto de glicéridos mezclados adecuado es el
producto de transesterificación comercialmente disponible con el
nombre registrado Maisine® [suministrado por Etablissements
Gattefossé, 69804 Saint-Priest, Cedex (France)]. El
contenido en ácidos grasos para Maisine® es habitualmente:
alrededor de 11% de ácido palmítico; alrededor de 2,5% de ácido
esteárico; alrededor de 29% de ácido oleico; alrededor de 56% de
ácido linoleico; y 1,5% de otros ácidos.
En el caso de que el agente de la invención haya
de administrarse en forma de una microemulsión o emulsión, es
preferible que los mono-, di- y tri-glicéridos
mezclados sean transparentes y permanezcan transparentes durante más
de 20 días tras el almacenamiento a temperaturas de 20 a 25ºC.
También deberá ser transparente una muestra de los mono-, di- y
tri-glicéridos mezclados, que se ha mantenido en el
refrigerador a temperaturas entre 2 y 8ºC aproximadamente durante 24
horas y luego mantenida a temperatura ambiente durante 1 hora.
Igualmente, los mono-, di- y tri-glicéridos tienen
preferentemente un bajo contenido en ácidos grasos saturados. Los
mono-, di- y tri-glicéridos mezclados que satisfacen
estos requisitos se pueden obtener a partir de productos
comercialmente disponibles mediante técnicas de separación ya
conocidas para separar los componentes de ácidos grasos saturados y
aumentar el contenido en componentes de ácidos grasos insaturados.
Normalmente, el total de componentes de ácidos grasos saturados será
menor del 15% en peso basado en el peso total de la fase lipófila.
Un procedimiento adecuado es el descrito en WO 93/09211.
La fase lipófila puede comprender
alternativamente aceites vegetales etoxilados y transesterificados
tales como aquellos obtenidos por reacción de varios aceites
vegetales naturales con polietilenglicoles que tienen un peso
molecular medio de 200 a 800, en presencia de un catalizador
adecuado. Los procedimientos son conocidos y un ejemplo se describe
en la patente US 3 288 824. En particular se prefiere el aceite de
maíz etoxilado y transesterificado. Un aceite vegetal etoxilado y
transesterificado preferido es Labrafil M 2125 CS®.
Ejemplos de surfactantes adecuados son:
i) Productos de reacción de un aceite de ricino
natural o hidrogenado y óxido de etileno. Los aceites disponibles
con el nombre comercial Cremophor® son especialmente adecuados.
Particularmente adecuados son Cremophor RH 40® y Cremophor RH60®.
También son adecuados los aceites de ricino de polietilenglicol
tales como aquellos disponibles con el nombre comercial Cremophor
EL®. Productos similares o idénticos que también pueden ser
utilizados son los disponibles con los nombres comerciales Nikkol®,
Mapeo®, Incrocas® y Tagat®.
ii) Esteres de polioxietilensorbitan-ácido graso,
por ejemplo ésteres del tipo conocido y comercialmente disponibles
con el nombre registrado Tween®.
iii) Esteres de polioxietileno-ácido graso, por
ejemplo ésteres de polioxietileno-ácido esteárico del tipo conocido
y comercialmente disponible con el nombre registrado Myrj®.
iv) Co-polímeros y
co-polímeros en bloque de
polioxietileno-polioxipropileno, por ejemplo del
tipo conocido y comercialmente disponible con los nombres
registrados Pluronic®, Emkalyx® y Poloxamer®, siendo especialmente
preferidos Pluronic F68® y Poloxamer 188®.
v) Dioctilsulfosuccinato o
di-[2-etilhexil]-succinato.
vi) Fosfolípidos, en particular lecitinas.
vii) Esteres de propilenglicol/mono- y di-ácidos
grasos.
El surfactante seleccionado tiene preferentemente
un HLB (equilibrio hidrófilo/lipófilo) de al menos 10.
Todas las características físicas de los
productos aquí referidos por sus nombres comerciales pueden
encontrarse, por ejemplo, en H.P. Fiedler, "Lexikon der
Hilfsstoffe für Pharmazie, Kosmetik und Angrenzende Gebiete",
Editio Cantor, D-7960 Aulendorf, Germany, 3ª
edición revisada y aumentada (1989). Preferentemente, la proporción
relativa del componente o componentes de la fase hidrófila, de la
fase lipófila y del surfactante se encuentra dentro de la región de
una "microemulsión" en un gráfico tridireccional convencional.
Las composiciones así obtenidas son preconcentrados en
microemulsión de alta estabilidad.
Alternativamente, los componentes se pueden
seleccionar para proporcionar un preconcentrado en emulsión. Las
composiciones en forma de preconcentrado en emulsión muestran
también buenas características de estabilidad.
Las composiciones farmacéuticas pueden incluir
también otros aditivos o ingredientes, por ejemplo antioxidantes.
Las mismas exhiben propiedades especialmente ventajosas cuando se
administran por vía oral, por ejemplo en términos de consistencia y
alto nivel de biodisponibilidad como se ha comprobado en pruebas de
biodisponibilidad convencionales. Los parámetros farmacocinéticos,
por ejemplo absorción y niveles en sangre, llegan a ser también
sorprendentemente más pronosticables y pueden eliminarse o
reducirse problemas en la administración con una absorción
errática. Además, la composición farmacéutica es eficaz con
materiales tensioactivos, por ejemplo sales biliares, presentes en
el tracto gastro-intestinal.
Las composiciones farmacéuticas para uso oral se
combinan preferentemente en formas de unidades de dosificación, por
ejemplo introduciéndolas en vainas de cápsulas administrables por
vía oral. Las vainas de las cápsulas pueden ser de gelatina blanda o
dura. Sin embargo, si se desea, las composiciones farmacéuticas
pueden encontrarse en forma de una solución bebible y pueden
incluir agua o cualquier otro sistema acuoso, para proporcionar
sistemas en emulsión o microemulsión adecuados para ser
bebidos.
Los Compuestos de la Invención son bien tolerados
a las dosis requeridas para su uso y por los métodos de acuerdo con
la presente invención. En función de la especie, edad, estado del
individuo, modo de administración y cuadro clínico particular, se
administran dosis eficaces, por ejemplo dosis diarias de
aproximadamente 0,05 a 10 g, con preferencia de alrededor de 0,1 a 5
g, por ejemplo de alrededor de 0,15 a 1,5 g, de un Compuesto de la
Invención, a un animal de sangre caliente con un peso corporal de
70 kg aproximadamente.
La presente invención se refiere en particular al
uso de los Compuestos de la Invención, y especialmente de aquellos
de fórmula I*, en la preparación de una composición farmacéutica
para el tratamiento de una enfermedad proliferativa, por ejemplo de
un tumor sólido, así como su uso para el tratamiento de dicha
enfermedad proliferativa.
Claims (14)
1. Uso de un ácido
2,4-diamino-3-hidroxicarboxílico
de fórmula I
en
donde
A y B representan independientemente un enlace o
una mitad aminoacilo insustituida o sustituida;
R_{1} representa hidrógeno; un grupo
amino-protector; un grupo de fórmula R_{5}Y- en
donde R_{5} representa hidrógeno o un grupo alquilo, alquenilo,
alquinilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo,
heterociclilo o heterociclilalquilo, insustituido o sustituido; e Y
representa -CO-; -NH-CO-; -NH-CS-;
-SO_{2}-; -O-CO-; o -O-CS-;
R_{2} representa la cadena lateral de un
aminoácido natural; un grupo alquilo, arilalquilo,
heteroarilalquilo o cicloalquilalquilo; o trimetilsililmetilo,
2-tienilmetilo o estirilmetilo;
R_{3} representa halógeno, alquilo, alcoxi o
hidroxialcoxi; y
R_{4} representa
2(R)-hidroxiindan-1(S)-ilo;
(S)-2-hidroxi-1-feniletilo;
o 2-hidroxi-bencilo insustituido o
sustituido en la posición 4 por metoxi;
en forma libre o en forma de una sal o complejo
farmacéuticamente aceptable en la preparación de una composición
farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad proliferativa
sensible a la inhibición del complejo multicatalítico de
proteasoma.
2. Uso de un ácido
2,4-diamino-3-hidroxicarboxílico
de fórmula I según la reivindicación 1, en donde:
A y B representan independientemente un enlace o
una mitad aminoacilo que está insustituida o sustituida por alquilo
o alcoxicarbonilalquilo;
R_{1} representa hidrógeno; un grupo
amino-protector; un grupo de fórmula R_{5}Y- en
donde R_{5} representa hidrógeno o un grupo alquilo, alquenilo,
alquinilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo,
heterociclilo o heterociclilalquilo, insustituido o sustituido; e Y
representa -CO-; -NH-CO-; -NH-CS-;
-SO_{2}-; -O-CO-; o -O-CS-;
R_{2} representa la cadena lateral de un
aminoácido natural; un grupo alquilo, arilalquilo,
heteroarilalquilo o cicloalquilalquilo; o trimetilsililmetilo,
2-tienilmetilo o estirilmetilo;
R_{3} representa halógeno, alquilo, alcoxi o
hidroxialcoxi; y
R_{4} representa
2(R)-hidroxiindan-1(S)-ilo;
(S)-2-hidroxi-1-feniletilo;
o 2-hidroxi-bencilo insustituido o
sustituido en la posición 4 por metoxi.
3. Uso de un ácido
2,4-diamino-3-hidroxicarboxílico
de fórmula I según la reivindicación 1, en donde:
A y B representan independientemente un enlace o
una mitad aminoacilo que está insustituida o sustituida por alquilo
o alcoxicarbonilalquilo;
R_{1} representa hidrógeno; un grupo
amino-protector; un grupo de fórmula R_{5}Y- en
donde R_{5} representa hidrógeno o un grupo alquilo, alquenilo,
alquinilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo,
heterociclilo o heterociclilalquilo, insustituido o sustituido; e Y
representa -CO-; -NH-CO-; -NH-CS-;
-SO_{2}-; -O-CO-; o -O-CS-;
R_{2} representa arilalquilo;
R_{3} representa halógeno, alquilo, alcoxi o
hidroxialcoxi; y
R_{4} representa
2-hidroxibencilo insustituido o sustituido en la
posición 4 por metoxi.
4. Uso de un ácido
2,4-diamino-3-hidroxicarboxílico
de fórmula I según la reivindicación 1, en donde:
A y B representan independientemente una mitad
aminoacilo, que está insustituida o sustituida por alquilo
C_{1}-C_{4} o
alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilalquilo(C_{1}-C_{4});
R_{1} representa hidrógeno o un grupo de
fórmula R_{5}Y- en donde R_{5} representa hidrógeno; alquilo
C_{1}-C_{4} que está insustituido o sustituido
por fenoxi, hidroxi o amino; alquenilo
C_{2}-C_{4}; alquinilo
C_{2}-C_{4}; arilo
C_{6}-C_{10}; arilalquilo
C_{7}-C_{12} que está insustituido o sustituido
por hidroxi, alquilo C_{1}-C_{4}, amino o
alquil(C_{1}-C_{4})amino;
piridilalquilo(C_{1}-C_{4}) e Y
representa -O-CO- o -CO-;
R_{2} representa arilalquilo
C_{7}-C_{12};
R_{3} representa halógeno, alquilo
C_{1}-C_{4}, alcoxi
C_{1}-C_{4} o
hidroxialcoxi(C_{1}-C_{4}); y
R_{4} representa
2-hidroxibencilo que está insustituido o sustituido
en la posición 4 por metoxi.
5. Uso de un ácido
2,4-diamino-3-hidroxicarboxílico
de fórmula I según la reivindicación 1, en donde:
A y B representan independientemente una mitad
aminoacilo, que está insustituida o sustituida por alquilo
C_{1}-C_{4} o
alcoxi(C_{1}-C_{4})carbonilalquilo(C_{1}-C_{4});
R_{1} representa hidrógeno o un grupo de
fórmula R_{5}Y- en donde R_{5} representa hidrógeno; alquilo
C_{1}-C_{4} que está insustituido o sustituido
por fenoxi, hidroxi o amino; alquenilo
C_{2}-C_{4}; alquinilo
C_{2}-C_{4}; arilo
C_{6}-C_{10}; arilalquilo
C_{7}-C_{12} que está insustituido o sustituido
por hidroxi, alquilo C_{1}-C_{4}, amino o
alquil(C_{1}-C_{4})amino;
piridilalquilo(C_{1}-C_{4}) e Y
representa -O-CO- o -CO-;
R_{2} representa arilalquilo
C_{7}-C_{12};
R_{3} representa alcoxi
C_{1}-C_{4}; y
R_{4} representa
2-hidroxibencilo sustituido en la posición 4 por
metoxi.
6. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
anteriores, en donde la enfermedad proliferativa es una enfermedad
tumoral.
7. Un compuesto de fórmula I*
en
donde
A y B representan independientemente una mitad
aminoacilo insustituida o sustituida;
R_{2} representa arilalquilo;
R_{3} representa halógeno, alquilo, alcoxi o
hidroxialcoxi;
R_{4} representa
2-hidroxibencilo insustituido o sustituido en la
posición 4 por metoxi; y
R_{5} representa arilalquilo e Y representa
-CO-; o
R_{5} representa alquilo sustituido por
cicloalquilo, naftilo, piridilo o fenilo en donde el fenilo está
sustituido por alquilo o amino; e
Y representa -O-CO-;
o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo.
8. Un compuesto de fórmula I* según la
reivindicación 7, en donde:
A y B representan independientemente
L-terc-leucina,
L-valina, éster metílico de ácido
L-glutamínico o glicina;
R_{2} representa arilalquilo;
R_{3} representa alcoxi; y
R_{4} representa
2-hidroxi-4-metoxibencilo;
R_{5} representa arilalquilo e Y representa
-CO-; o
R_{5} representa alquilo sustituido por
cicloalquilo, naftilo, piridilo o fenilo en donde el fenilo está
sustituido por alquilo o amino; e
Y representa -O-CO-;
o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo.
9. Un compuesto de fórmula I* según la
reivindicación 7, en donde:
A y B representan independientemente
L-terc-leucina,
L-valina, éster metílico de ácido
L-glutamínico o glicina;
R_{2} representa arilalquilo
C_{7}-C_{12};
R_{3} representa alcoxi
C_{1}-C_{4};
R_{4} representa
2-hidroxi-4-metoxibencilo;
y
R_{5} representa arilalquilo
C_{7}-C_{12} e Y representa -CO-; o
R_{5} representa alquilo
C_{1}-C_{4} sustituido por cicloalquilo
C_{5}-C_{7}, naftilo, piridilo o fenilo en donde
el fenilo está sustituido por alquilo
C_{1}-C_{4} o amino; e
Y representa -O-CO-;
o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo.
10. Un compuesto de fórmula I* según la
reivindicación 7 seleccionado del grupo consistente en:
éster metílico de ácido
4-[4-(2-benciloxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-3-hidroxi-2-(4-metoxi-bencilamino)-5-fenil-pentanoilamino]-4-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-butírico;
éster de
naftalen-1-ilmetilo de ácido
{1-[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencil-carbamoil)-2-metil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
éster de
naftalen-1-ilmetilo de ácido
{1-[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencil-carbamoil)-2-metil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
éster de
piridin-4-ilmetilo de ácido
{1-[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencil-carbamoil)-2-metil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
éster de bencilo de ácido
{[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-2-metil-propilcarba-
moil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]metil}-carbámico;
moil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]metil}-carbámico;
éster de bencilo de ácido
{[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-2,2-dimetil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
y las sales farmacéuticamente aceptables de estos
compuestos.
11. Un compuesto de fórmula I* según la
reivindicación 7, consistente en:
éster metílico de ácido
4-[4-(2-benciloxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-3-hidroxi-2-(4-metoxi-bencilamino)-5-fenil-pentanoilamino]-4-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-butírico;
o una sal farmacéuticamente aceptable de este
compuesto.
12. Un compuesto de fórmula I* según la
reivindicación 7 seleccionado del grupo consistente en:
[1-(2-hdiroxi-4-metoxi-bencil-carbamoil)-2-metil-propil]-amida
de ácido
4-[3,3-dimetil-2-(2-naftalen-1-il-acetilamino)-butirilamino]-3-hidroxi-2-(4-metoxi-bencilmaino)-5-fenil-pentanoico;
éster de 3-metilbencilo de ácido
{1-[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencil-carbamoil)-2-metil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-2-metil-propil]-amida
de ácido
4-{2-[3-(3-amino-fenil)-propionilamino]
-3,3-dimetil-butirilamino}-3-hidroxi-2-(4-metoxi-bencilamino)-5-fenil-pentanoico;
-3,3-dimetil-butirilamino}-3-hidroxi-2-(4-metoxi-bencilamino)-5-fenil-pentanoico;
éster de
3-amino-bencilo de ácido
{1-[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-2-metil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
éster de
3,5-dimetil-bencilo de ácido
{1-[1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-2-metil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
éster de ciclohexilmetilo de ácido
{1-[(1-bencil-2-hidroxi-3-[1-(2-hidroxi-4-metoxi-bencilcarbamoil)-2-metil-propilcarbamoil]-3-(4-metoxi-bencilamino)-propilcarbamoil]-2,2-dimetil-propil}-carbámico;
y las sal farmacéuticamente aceptables de estos
compuestos.
13. Un compuesto de fórmula I* según la
reivindicación 7 o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho
compuesto para utilizarse como un medicamento.
14. Una composición farmacéutica que comprende un
compuesto de fórmula I* según la reivindicación 7 o una sal
farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto junto con un
vehículo farmacéutico.
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