CN1812973B

CN1812973B - 可用作蛋白激酶抑制剂的吲唑化合物

Info

Publication number: CN1812973B
Application number: CN038056127A
Authority: CN
Inventors: H·宾奇; G·布伦奇利; J·M·C·戈利克; R·尼格特尔; M·莫蒂默尔; S·帕特尔; A·拉瑟福德
Original assignee: Vertex Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Vertex Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2002-01-25
Filing date: 2003-01-23
Publication date: 2010-12-22
Anticipated expiration: 2023-01-23
Also published as: TW200306819A; WO2003064397A1; US20040009968A1; KR20100119902A; RU2004125852A; EP2295413A1; MXPA04007126A; US7041687B2; KR20040078676A; NO20043531L; EP1467972A1; JP4718118B2; AU2003212833B2; CN1812973A; AR038202A1; HK1096385A1; NO328041B1; PL371512A1; JP2006176530A; JP2005524631A

Abstract

本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的衍生物，其中R¹、R²、V¹、V²和V³是如说明书所述的。这些化合物是蛋白激酶的抑制剂，特别是AKT、PKA、PDK1、p70S6K或ROCK激酶的抑制剂，这些激酶是参与增殖与神经变性障碍的哺乳动物蛋白激酶。本发明还提供包含本发明化合物的药物组合物和利用这些化合物治疗各种障碍的方法。

Description

可用作蛋白激酶抑制剂的吲唑化合物

相关申请的交叉参考

本申请要求保护2002年1月25日提交的美国临时专利申请60/351,597的优先权，其内容结合在此作为参考。

技术领域

本发明属于医药化学领域，涉及蛋白激酶抑制剂化合物、含有这类化合物的组合物和使用方法。更确切地，这些化合物是AKT、PKA、PDK1、p70S6K和ROCK激酶的抑制剂，可用于治疗疾病，例如癌症。

背景技术

近年来，更好地理解与目标疾病有关的酶和其他生物分子的结构，大大有助于寻求新的治疗剂。已经成为广泛研究的主体的一类重要的酶是蛋白激酶。

蛋白激酶介导细胞内信号转导。它们通过影响磷酰基从三磷酸核苷转移至参与发信号途径的蛋白质接纳体而做到这一点。通过大量激酶和途径，细胞外与其他刺激导致各种细胞应答发生在细胞内部。这类刺激的实例包括环境与化学应激反应信号(例如渗压休克、热休克、紫外辐射、细菌内毒素、H₂O₂)、细胞因子(例如白介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子α(TNF-α))和生长因子(例如粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和成纤维细胞生长因子(FGF))。细胞外刺激可以影响一种或多种细胞应答，涉及细胞生长、移行、分化、激素分泌、转录因子活化、肌肉收缩、糖代谢、蛋白质合成控制和细胞周期调节。

很多疾病与由蛋白激酶介导的事件激发的异常细胞应答有关。这些疾病包括自体免疫疾病、炎性疾病、神经病学与神经变性疾病、癌症、心血管疾病、变态反应与气喘、阿尔茨海默氏病或涉及激素的疾病。因此，医药化学界一直努力发现蛋白激酶抑制剂，它们作为治疗剂是有效。发现以选择性方式发挥作用的蛋白激酶抑制剂已经成为一项挑战。由于有大量蛋白激酶参与多种细胞应答，非选择性抑制剂可能引起所不希望的副作用。

AKT(已知也称PKB或Rac-PKβ)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，已经显示在若干类型癌症中被过度表达，是正常细胞功能的介质[(Khwaja，A.，Nature，401，pp.33-34，1999)；(Yuan，Z.Q.，et al.，Oncogene，19，pp.2324-2330，2000)；(Namikawa，K.，et al.，J Neurosci.，20，pp.2875-2886，2000)]。AKT包含N-末端血小板-白细胞C激酶底物同源性(PH)结构域、激酶结构域和C-末端“尾”区。迄今已经报道了人AKT激酶的三种同种型(AKT-1，-2和-3)[(Cheng，J.Q.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89，pp.9267-9271，1992)；(Brodbeck，D.et al.，J.Biol.Chem.274，pp.9133-9136，1999)]。PH结构域与3-磷酸肌醇结合，一旦受生长因子的刺激，例如血小板衍生生长因子(PDGF)、神经生长因子(NGF)和胰岛素样生长因子(IGF-1)，由磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)合成3-磷酸肌醇[(Kulik et al.，Mol.Cell.Biol.，17，pp.1595-1606，1997)；(Hemmings，B.A.，Science，275，pp.628-630，1997)]。与PH结构域结合的脂质促进AKT易位于血浆膜，有利于另一种含PH结构域蛋白激酶PDK1分别在AKT同种型1、2和3的Thr308、Thr309和Thr305的磷酸化。AKT-1、-2和-3的C-末端尾区中分别在Ser473、Ser474或Ser472的磷酸化都需要第二种尚未知晓的激酶，目的是产生完全活化的AKT酶。

一旦定位于膜，AKT介导细胞内的若干功能，包括胰岛素的代谢效应(Calera，M.R.et al.，J.Biol.Chem.，273，pp.7201-7204，1998)、分化和/或增殖的诱导、蛋白质合成应激反应(Alessi，D.R.et al.，Curr.Opin.Genet.Dev.，8，pp.55-62，1998)。

AKT调节作用改变的表现出现在损伤和疾病中，最重要的角色是在癌症中。对AKT的第一次解释与人卵巢癌有关，发现AKT的表达在15％的病例中有所增加(Cheng，J.Q.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，89，pp.9267-9271，1992)。还已发现在12％的胰腺癌中被过度表达(Cheng，J.Q.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，93，pp.3636-3641，1996)。经过证明，AKT-2在12％的卵巢癌中被过度表达，AKT的增加在50％的未分化肿瘤中尤其频繁，提示了AKT也可能与肿瘤侵袭有关(Bellacosa，et al.，Int.J.Cancer，64，pp.280-285，1995)。

已经显示PKA(已知也称cAMP-依赖性蛋白激酶)调节很多极重要功能，包括能量代谢、基因转录、增殖、分化、生殖功能、分泌、神经元活动、记忆、收缩性和运动性(Beebe，S.J.，Semin.Cancer Biol.，5，pp.285-294，1994)。PKA是一种四元全酶，它含有两个催化性亚单位，与一个均二聚的调节性亚单位结合(它起到抑制催化性亚单位的作用)。一旦与cAMP结合(酶的活化)，催化性亚单位从调节性亚单位上离解下来，产生活性丝氨酸/苏氨酸激酶(McKnight，G.S.et al.，Recent Prog.Horm.Res.，44，pp.307，1988)。迄今已经报道过催化性亚单位的三种同工型(C-α，C-β和C-γ)(Beebe，S.J.et al.，J.Biol.Chem.，267，pp.25505-25512，1992)，其中C-α亚单位得到最为广泛的研究，主要因为它在原发性和转移性黑瘤中的表达升高(Becker，D.etal.，Oncogene，5，pp.1133，1990)。迄今，调制C-α亚单位活性的策略牵涉抗体的使用，这些分子借助定向于调节性二聚物和反义寡核苷酸表达而阻滞PKA活性。

与Rho缔合的卷曲螺旋生成激酶(ROCK)(Ishizaki，T.et al.，EMBO J.，15，pp.1885-1893，1996)是一种160kDa的丝氨酸/苏氨酸激酶，它激活小的G-蛋白RhoA。ROCK在大量疾病中都有牵连，包括高血压[(Chitaley，et al.，Curr.Hypertens.Rep.2001 Apr.，3(2)，pp.139-144)；(Uehata，M.et al.，Nature，389，pp.990-994，1997)]、勃起功能障碍(Chitaley，K.et al.，Nature Medicine，7，pp.119-122，2001)、血管生成(Uchida，S.et al.，Biochem.Biophys.Res.Commun.，269(2)，pp.633-40，2000)、神经变性(Bito，H.et al.，Neuron，26，pp.431-441，2000)、转移瘤[(Takamura，M.et al.，Hepatology，33，pp.577-581，2001)；(Genda，T.et al.，Hepatology，30，pp.1027-1036，1999)]、青光眼(Rao，et al.，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.，42，pp.1029-37，2001)、炎症(Ishizuka，T.et al.，J.Immunol.，167，pp.2298-2304，2001)、动脉硬化(Smimokawa，et al.，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.，11，pp.2351-2358，2000)、免疫抑制(Lou，Z.et al.，J.Immunol.，167，pp.5749-5757，2001)、再狭窄(Seaholtz，et al.，Circ.Res.，84，pp.1186-1193，1999)、气喘(Yoshii，et al.，Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.，20，pp.1190-1200，1999)、心肥大(Kuwahara，K.et al.，FEBS Lett.，452，pp.314-318，1999)。

核糖体蛋白激酶p70S6K-1与-2是AGC亚家族蛋白激酶的成员，该亚家族主要由PKB和MSK组成。p70S6激酶催化核糖体蛋白S6的磷酸化和随后的活化，该蛋白质在编码蛋白合成装置成份的mRNA的翻译上调中有所牵连。

这些mRNA在它们的5’转录起始位点含有寡嘧啶道，称为5’TOP，已经显示这是它们在翻译水平上的调节作用所必需的(Volarevic，S.et al.，Prog.Nucleic Acid Res.Mol.Biol.65，pp 101-186，2001)。p70S6K依赖性S6磷酸化响应于多种激素和生长因子而受到刺激，主要经由PI3K途径(Coffer，P.J.et al.，Biochem.Biophys.Res.Commun，198，7 pp 780-786，1994)，这也许是在mTOR的调节之下，因为雷帕霉素起到抑制p70S6K活性和阻滞蛋白质合成的作用，具体而言是编码核糖体蛋白质的这些mRNA翻译下调的结果(Kuo，C.J.etal.，Nature，358，pp 70-73，1992)。

体外PDK1催化p70催化性结构域活化袢中Thr252的磷酸化，它是p70活性所不可缺少的(Alessi，D.R.，Curr.Biol.，8，pp 69-81，1998)。雷帕霉素的使用和果蝇属dp70S6K与小鼠p70S6K1的基因缺失研究已经确立了p70在细胞生长和增殖信号中所扮演的核心角色。

3-磷酸肌醇-依赖性蛋白激酶-1(PDK-1)在调节属于AGC亚家族蛋白激酶中的大量激酶活性中扮演关键角色(Alessi，D.et al.，Biochem.Soc.Trans，29，pp.1，2001)。它们包括蛋白激酶B(PKB，已知也称AKT)、p70核糖体S6激酶(S6K)(Avruch，J.et al.，prog.Mol.Subcell.Biol.，2001，26，pp.115，2001)和p90核糖体S6激酶(Frodin，M.et al.，EMBO J.，19，pp.2924-2934，2000)的同工型。PDK1介导的信号响应于胰岛素和生长因子而受到活化，是细胞附着于细胞外基质的后果(整联蛋白信号)。一旦被活化，这些酶借助使关键的调节性蛋白质磷酸化而介导很多不同的细胞事件，这些蛋白质扮演重要的角色，控制着细胞存活、生长、增殖和葡萄糖调节等过程[(Lawlor，M.A.et al.，J.CellSci.，114，pp.2903-2910，2001)，(Lawlor，M.A.et al.，EMBO J.，21，pp.3728-3738，2002)]。PDK1是一种556个氨基酸的蛋白质，具有一个N-末端催化性结构域和一个C-末端血小板-白细胞C激酶底物同源性(PH)结构域，它借助在它们的活化袢使这些激酶磷酸化而激活它的底物(Belham，C.et al.，Curr.Biol.，9，pp.R93-R96，1999)。很多人类癌症、包括前列腺癌和NSCL，已经提高了PDK1信号途径功能，这是由大量不同的遗传事件所引起的，例如PTEN突变或某些关键调节性蛋白质的过度表达[(Graff，J.R.，Expert Opin.Ther.Targets，6，pp.103-113，2002)，(Brognard，J.，et al.，Cancer Res.，61，pp.3986-3997，2001)]。作为一种治疗癌症的潜在机理，PDK1的抑制得到PTEN阴性人癌细胞系(U87MG)用指向PDK1的反义寡核苷酸转染的证明。所得PDK1蛋白水平的降低引起细胞增殖和存活的减少(Flynn，P.，et al.，Curr.Biol.，10，pp.1439-1442，2000)。所以，PDK1的ATP结合位点抑制剂的设计尤其为癌症化疗提供了诱人的目标。

不同的癌细胞基因型范围已被归因于下列细胞生理学上的六种实质性改变的表现：生长信号发送的自我充足、细胞凋亡的回避、对生长抑制性信号发送的不敏感、无限的复制潜力、持续的血管生成和引起转移的组织侵入(Hanahan，D.et al.，Cell，100，pp.57-70，2000)。PDK1是PI3K信号途径的关键介质，它调节多数细胞功能，包括生长、增殖和存活。所以，抑制这种途径能够影响癌症进展的六个确定条件中的四种或更多，因此预期PDK1抑制剂将对多种人类癌症的生长都有影响。

具体而言，增加了的PI3K途径活性水平与大量人类癌症的形成、向侵袭性顽固性状态的进展(对化学疗法的获得性耐受性)和预后不良直接相关。这种增加了的活性已被归因于一系列关键事件，包括降低了的负性途径调节剂(例如磷酸酶PTEN)的活性，正性途径调节剂(例如Ras)的活化突变，和该途径本身组分(例如PKB)的过度表达，实例包括：脑(神经胶质瘤)、乳腺、结肠、头颈、肾、肺、肝、黑瘤、卵巢、胰腺、前列腺、肉瘤、甲状腺[(Teng，D.H.et al.，CancerRes.，57，pp.5221-5225，1997)，(Brognard，J.et al.，Cancer Res.，61，pp.3986-3997，2001)，(Cheng，J.Q.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.，93，pp.3636-3641，1996)，Int.J.Cancer，64，pp.280，1995)，(Graff，J.R.，Expert Opin.Ther. Targets，6，pp.103-113，2002)，Am.J.Pathol.，159，pp.431，2001)]。

另外，通过该途径的基因knockout、基因knockdown、优势负性研究和小分子抑制剂降低途径功能已被证明体外逆转很多癌症表型(有些研究还已证明有相似的体内作用)，例如在一系列细胞系中阻滞增殖，减少活力和使癌细胞敏感于已知的化学疗法，代表了下列癌症：胰腺[(Cheng，J.Q.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.，93，pp.3636-3641，1996)，Neoplasia，3，pp.278，2001)]、肺[(Brognard，J.et al.，CancerRes.，61，pp.3986-3997，2001)，Neoplasia，3，pp.278，2001)]、卵巢[(Hayakawa，J.et al.，Cancer Res.，60，pp.5988-5994，2000)，Neoplasia，3，pp.278，2001)]、乳腺(Mol.Cancer Ther.，1，pp.707，2002)、结肠[(Neoplasia，3，pp.278，2001)，(Arico，S.et al.，J.Biol.Chem.，277，pp.27613-27621，2002)]、子宫颈(Neoplasia，3，pp.278，2001)、前列腺[(Endocrinology，142，pp.4795，2001)，(Thakkar，H.et al.J.Biol.Chem.，276，pp.38361-38369，2001)，(Chen，X.et al.，Oncogene，20，pp.6073-6083，2001)]和脑(成胶质细胞瘤)[(Flynn，P.et al.，Curr.Biol.，10，pp.1439-1442，2000)]。

因此，迫切需要开发AKT、PKA、PDK1、p70S6K和ROCK蛋白激酶的抑制剂，它们可用于治疗各种与AKT、PKA、PDK1、p70S6K和ROCK活化有关的疾病或病症，特别是鉴于目前大多数这些障碍不能得到足够的治疗。

发明内容

现已发现，本发明化合物及其药学上可接受的组合物是有效的AKT、PKA、PDK1、p70S6K和ROCK蛋白激酶的抑制剂。这些化合物具有式I：

或其药学上可接受的盐，其中V¹、V²、V³、R¹和R²是如下所定义的。

这些化合物及其药学上可接受的组合物可用于治疗或减轻多种障碍的严重性，包括变应性障碍(例如气喘)、炎性疾病、增殖性障碍和神经病学障碍。

发明详述

本发明涉及式I化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R¹选自卤素、CN、N(R⁴)₂、T-R或T-Ar；

每个T独立地选自价键或C_1-6亚烷基链，其中T的至多两个亚甲基单位可选地和独立地被-O-、-N(R)-、-S-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-C(O)-或-SO₂-代替；

每个R独立地选自氢或可选被取代的C_1-6脂族基团；或者：

同一氮上的两个R基团与其所连接的氮原子一起构成5-7元饱和、部分不饱和或芳香的环，所述环具有1-3个独立选自氮、氧或硫的杂原子；

R²选自Q-Ar、Q-N(R⁵)₂或Q-C(R)(Q-Ar)R³，其中：

R和R³可选地构成5-7元饱和或部分不饱和的环，所述环具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子；

每个Q独立地选自价键或C_1-4亚烷基链；

每个Ar独立地是可选被取代的环，选自5-7元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环，所述环具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子，或者8-10元饱和、部分不饱和或完全不饱和的二环，所述环具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子；

R³选自R’、Ar¹、Q-OR⁵、Q-OC(O)R⁵、Q-CONHR⁵、Q-OC(O)NHR⁵、Q-SR⁵、Q-N(R⁴)₂、N(R)(Q-Ar)、N(R)C(O)Q-N(R⁴)₂或N(R)Q-N(R⁴)₂；

R’是可选被取代的C_1-6脂族基团；

每个R⁴独立地选自R、COR⁵、CO₂R⁵、CON(R⁵)₂、SO₂R⁵、SO₂N(R⁵)₂或Ar¹；

每个R⁵独立地选自R或Ar；

V¹、V²和V³各自独立地选自氮或C(R⁶)；

每个R⁶独立地选自R、Ar¹、卤素、CN、NO₂、OR、SR、N(R⁴)₂、N(R)COR、N(R)CON(R⁴)₂、N(R)C(O)OR、CON(R₄)₂、OC(O)N(R⁴)₂、CO₂R、OC(O)R、N(R)SO₂R、N(R)SO₂N(R⁴)₂、SO₂R或SO₂N(R⁴)₂；

每个Ar¹独立地选自可选被取代的5-7元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环，所述环具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子；

其条件是：

若V¹、V²和V³各自是CH，T是价键，R²是Q-C(R)(Q-Ar)R³，其中Ar是可选被取代的苯基环，则R³不是Q-OR⁵或C(O)NH₂；

若V¹、V²和V³各自是CH，R¹是氢，则R²是Q-C(R)(Q-Ar)R³，其中R³不是R’、Q-OC(O)R⁵或OCH₂苯基。

正如本文所用的，应当适用下列定义，另有指示除外。短语“可选被取代的”与短语“取代或未取代的”是可互换使用的。除非另有指示，可选被取代的基团可以在该基团每个可取代的位置具有取代基，并且每个取代是彼此独立的。

本文所用的术语“脂族”或“脂族基团”表示直链或支链C₁-C₁₂烃链，它是完全饱和的或者含有一个或多个不饱和单元，或者表示单环C₃-C₈烃或二环C₈-C₁₂烃，它是完全饱和的或者含有一个或多个不饱和单元，但是它不是芳族的(本文也称为“碳环”或“环烷基”)，它具有单一的与分子其余部分连接的点，其中所述二环系统中任意个别的环具有3-7个成员。例如，适合的脂族基团包括但不限于直链或支链烷基、烯基、炔基及其杂种，例如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。

术语“烷基”、“烷氧基”、“羟基烷基”、“烷氧基烷基”和“烷氧基羰基”——单用或者作为更大部分的一部分——包括含有一至十二个碳原子的直链和支链。术语“烯基”和“炔基”——单用或者作为更大部分的一部分——应当包括含有二至十二个碳原子的直链和支链。

术语“卤代烷基”、“卤代烯基”和“卤代烷氧基”表示被一个或多个卤原子取代的烷基、烯基或烷氧基，视情况而定。术语“卤素”表示F、Cl、Br或I。

术语“杂原子”表示氮、氧或硫，包括氮和硫的任意氧化形式和任意碱性氮的季铵形式。术语“氮”还包括杂环的可取代氮。举例而言，在具有0-4个选自氧、硫或氮的杂原子的饱和或部分不饱和环中，氮可以是N(如在3，4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或NR⁺(如在N-取代的吡咯烷基中)。

术语“芳基”——单用或者作为更大部分的一部分，例如在“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中——表示具有总计五至十四个环成员的单环、二环和三环环系，其中该系统中的至少一个环是芳族的，其中该系统中的每个环含有3至7个环成员。术语“芳基”可以与术语“芳基环”互换使用。

本文所用的术语“杂环”、“杂环基”或“杂环的”表示具有五至十四个环成员的非芳族单环、二环或三环环系，其中一个或多个环成员是杂原子，其中该系统中的每个环含有3至7个环成员。

术语“杂芳基”——单用或者作为更大部分的一部分，例如在“杂芳烷基”或“杂芳基烷氧基”中——表示具有总计五至十四个环成员的单环、二环和三环环系，其中该系统中的至少一个环是芳族的，该系统中的至少一个环含有一个或多个杂原子，其中该系统中的每个环含有3至7个环成员。术语“杂芳基”可以与术语“杂芳基环”或术语“杂芳族”互换使用。

芳基(包括芳烷基、芳烷氧基、芳氧基烷基等)或杂芳基(包括杂芳烷基和杂芳基烷氧基等)可以含有一个或多个取代基。在芳基、杂芳基、芳烷基或杂芳烷基的不饱和碳原子上，适合的取代基选自卤素、氧代、N₃、-R°、-OR°、-SR°、1，2-亚甲二氧基、1，2-亚乙二氧基、被保护的OH(例如酰氧基)、苯基(Ph)、被R°取代的Ph、-O(Ph)、被R°取代的-O(Ph)、-CH₂(Ph)、被R°取代的-CH₂(Ph)、-CH₂CH₂(Ph)、被R°取代的-CH₂CH₂(Ph)、-NO₂、-CN、-N(R°)₂、-NR°C(O)R°、-NR°C(O)N(R°)₂、-NR°CO₂R°、-NR°NR°C(O)R°、-NR°NR°C(O)N(R°)₂、-NR°NR°CO₂R°、-C(O)C(O)R°、-C(O)CH₂C(O)R°、-CO₂R°、-C(O)R°、-C(O)N(R°)₂、-OC(O)N(R°)₂、-S(O)₂R°、-SO₂N(R°)₂、-S(O)R°、-NR°SO₂N(R°)₂、-NR°SO₂R°、-C(＝S)N(R°)₂、-C(＝NH)-N(R°)₂或-(CH₂)_yNHC(O)R°，其中y是0-4，每个R°独立地选自氢、可选被取代的C_1-6脂族基团、具有0-4个独立选自氮、氧或硫杂原子的未取代的5-6元杂芳基或杂环、苯基(Ph)、-O(Ph)或-CH₂(Ph)-CH₂(Ph)。R°的脂族基团上的取代基选自NH₂、NH(C_1-4脂族基团)、N(C_1-4脂族基团)₂、卤素、C_1-4脂族基团、OH、O-(C_1-4脂族基团)、NO₂、CN、CO₂H、CO₂(C_1-4脂族基团)、-O(卤代C_1-4脂族基团)或卤代C_1-4脂族基团。

脂族基团或非芳族杂环可以含有一个或多个取代基。在脂族基团或非芳族杂环的饱和碳上，适合的取代基选自如上关于芳基或杂芳基的不饱和碳所列举的那些和下列：＝O、＝S、＝NNHR^*、＝NN(R^*)₂、＝N-、＝NNHC(O)R^*、＝NNHCO₂(烷基)、＝NNHSO₂(烷基)或＝NR^*，其中每个R^*独立地选自氢和可选被取代的C_1-6脂族基团。R^*的脂族基团上的取代基选自NH₂、NH(C_1-4脂族基团)、N(C_1-4脂族基团)₂、卤素、C_1-4脂族基团、OH、O-(C_1-4脂族基团)、NO₂、CN、CO₂H、CO₂(C_1-4脂族基团)、-O(卤代C_1-4脂族基团)或卤代C_1-4脂族基团。

非芳族杂环氮上的取代基选自选自-R⁺、-N(R⁺)₂、-C(O)R⁺、-CO₂R⁺、-C(O)C(O)R⁺、-C(O)CH₂C(O)R⁺、-SO₂R⁺、-SO₂N(R⁺)₂、-C(＝S)N(R⁺)₂、-C(＝NH)-N(R⁺)₂或-NR⁺SO₂R⁺，其中R⁺是氢、可选被取代的C_1-6脂族基团、可选被取代的苯基(Ph)、可选被取代的-O(Ph)、可选被取代的-CH₂(Pb)、可选被取代的-CH₂CH₂(Ph)或者未取代的5-6元杂芳基或杂环。R⁺的脂族基团或苯基环上的取代基选自NH₂、NH(C_1-4脂族基团)、N(C_1-4脂族基团)₂、卤素、C_1-4脂族基团、OH、O-(C_1-4脂族基团)、NO₂、CN、CO₂H、CO₂(C_1-4脂族基团)、-O(卤代C_1-4脂族基团)或卤代C_1-4脂族基团。

术语“亚烷基链”表示直链或支链碳链，它可以是完全饱和的或者具有一个或多个不饱和单元，并且具有两个与分子其余部分连接的点。

本发明化合物限于化学上可行的和稳定的那些。因此，上述化合物中取代基或变量的组合仅当这样一种组合导致稳定的或化学上可行的化合物时才是可允许的。稳定的化合物或化学上可行的化合物是这样的，当在没有水分或其他化学反应条件下保持在40℃或以下的温度下达至少一周，其化学结构没有实质性改变。

除非另有规定，本文所述结构也表示包括该结构的全部立体化学形式；也就是就每一不对称中心的R和S构型。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映体与非对映体混合物都属于本发明的范围。除非另有规定，本文所述结构也表示包括仅在一个或多个同位素富集原子的存在上有差异的化合物。例如，具有本发明结构、但是氢被氘或氚代替或者碳被¹³C-或¹⁴C-富集的碳代替的化合物也属于本发明的范围。

本发明化合物可以存在交替的互变异构形式。除非另有指示，一种互变体的表示法也表示包括另一种。

本发明的一种实施方式涉及式Ia化合物：

或其药学上可接受的盐，其中R¹和R²是如上关于式I化合物所定义的。

按照一种优选的实施方式，本发明涉及这样的式I化合物，其中V¹是N，V²是CH，V³是CH。

优选的式I化合物包括这些，其中V¹是C-R⁶，V²是CH，V³是CH或N。

本发明的另一种优选实施方式涉及这样的式I化合物，其中V¹是C-R⁶，V²是CH，V³是N。

本发明的另一种优选实施方式涉及这样的式I化合物，其中V¹是C-R⁶，V²是CH，V³是CH。

按照另一种优选的实施方式，本发明涉及这样的式Ia化合物，其中V²是CH，V³是CH。

按照另一种优选的实施方式，本发明涉及这样的式Ia化合物，其中V²和V³各自是N。

式I或Ia的优选R¹基团包括氢、卤素、CN、N(R⁴)₂和可选被取代的C_1-6脂族基团。这类R¹基团的实例包括氯、溴、氟、NH₂、NHMe、NHEt、NH-(可选被取代的苯基)、NH-环己基、NHCH₂(可选被取代的苯基)、NHC(O)(可选被取代的苯基)、NHC(O)NH(可选被取代的苯基)、NHC(O)CH₂(可选被取代的苯基)、NHC(O)CH₂CH₂(可选被取代的苯基)、N(R)C(O)(可选被取代的苯基)、NHC(O)萘基、NHC(O)噻吩基、NRC(O)噻吩基、SC(O)噻吩基、CH₂C(O)噻吩基、NHC(O)吡啶基、NHC(O)呋喃基、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、乙炔基和叔丁基。

当存在时，式I或Ia的R¹的苯基环的可选取代基是可选被取代的R°、卤素、硝基、CN、OR°、SR°、N(R°)₂、SO₂R°、C(O)R°、C(O)OR和C(O)N(R°)₂，其中每个R°定义同上。这类基团的实例包括氯、溴、氟、CN、硝基、OMe、OPh、OCF₃、OCH₂Ph、OEt、SCHF₂、甲基、乙基、异丙基、丙基、乙烯基、CF₃、乙炔基、CH₂Ph、CH₂NH₂、CH₂N(Et)₂、CH₂吗啉-4-基、CH₂哌啶-1-基、CH₂咪唑-1-基、CH₂哌嗪-1-基、C(O)NH₂、C(O)Me、SO₂Me、NHEt和NHMe。

当式I或Ia的R¹是T-Ar时，优选的Ar基团选自可选被取代的5-6元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环，所述环具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子。这类Ar环的实例包括可选被取代的苯基、噻吩基、呋喃和吡啶基环。R¹的T-Ar基团的优选T部分选自价键、-N(R)C(O)-、-NH-、-NHCH₂-、-NHSO₂-、-CH₂NH-、-SC(O)-、-CH₂C(O)-、-C≡C-、-CH₂-或-CH₂CH₂-。R¹的T-Ar基团的更优选T部分选自-NHC(O)-、-NH-、-NHCH₂-、-CH₂-、-C≡C-或-CH₂CH₂-。R¹的T-Ar基团的最优选T部分选自-N(R)C(O)-、-NH-或-NHCH₂-。当存在时，Ar基团上的优选取代基包括氟与CF₃、Me、Et、iPr、乙烯基、乙炔、Ar、Cl、CF₃、硝基、CN、OMe、OPh、OCF₃、SO₂NH₂、C(O)OEt、C(O)OH、CH₂CO₂H、CH₂CH₂CO₂H、CH₂NH₂与C(O)NH₂、噻吩基、噁唑基、异噁唑基和四唑基。

式I或Ia的优选Q基团选自价键、-CH₂-或-CH₂CH₂-。

当式I或Ia的R²是Q-Ar时，优选的Ar基团是可选被取代的环，选自5-6元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环，所述环具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子，或者9-10元饱和、部分不饱和或完全不饱和的二环，所述环具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子。这类单环的实例包括苯基、吡啶基、嘧啶基、吡啶酮基、呋喃基、四唑基、噻吩基、环戊基、环己基和环庚基。这类二环的实例包括苯并[1，3]二氧杂环戊烯基、二氢茚-1-酮基、萘基、苯并噻吩基、2，3-二氢-1H-异吲哚基、二氢茚基、苯并呋喃基和吲哚基。

当存在时，R²的Ar环上的优选取代基包括R°、卤素、氧代、OR°、苯基、可选被取代的二烷基氨基、卤代烷基、C(O)R°、NHC(O)R或SR°。这类优选取代基的实例包括氯、溴、氟、OH、OMe、NHC(O)CH₃、OEt、C(O)苯基、O苯基、N(CH₂CH₂Cl)₂、N(Me)₂、CF₃和SCF₃。式I或Ia的优选Ar基团的其他实例包括如下表1所示那些。

当式I或Ia的R²基团是Q-C(R)(Q-Ar)R³时，优选的R³基团包括R’、Q-OR⁵、Q-N(R⁴)₂、Ar¹、N(R)C(O)Q-N(R⁴)₂和N(R)Q-N(R⁴)₂。这类R³基团的实例包括CH₂OH、OH、NH₂、CH₂NH₂、CH₂NHMe、CH₂N(Me)₂、CH₂CH₂NH₂、CH₂CH₂NHMe、CH₂CH₂N(Me)₂、CH₂C(Me)₂NH₂、CH₂C(Me)₂CHMe、NHCO₂叔丁基、苯基、环戊基、甲基、乙基、异丙基、环丙基、NH(CH₂)₃NH₂、NH(CH₂)₂NH₂、H(CH₂)₂NHEt、NHCH₂吡啶基、NHSO₂苯基、NHC(O)CH₂C(O)O叔丁基、NHC(O)CH₂NH₃和NHCH₂-咪唑-4-基。

更优选地，式I或Ia的R³基团选自OH、NH₂、CH₂NH₂、CH₂NHMe、CH₂N(Me)₂、CH₂CH₂NH₂、CH₂CH₂NHMe 、CH₂CH₂N(Me)₂、CH₂C(Me)₂NH₂、CH₂C(Me)₂CHMe、NHCO₂叔丁基、苯基、NH(CH₂)₃NH₂、NH(CH₂)₂NH₂、NH(CH₂)₂NHEt、NHCH₂吡啶基、NHSO₂苯基、NHC(O)CH₂C(O)O叔丁基、NHC(O)CH₂NH₃和NHCH₂-咪唑-4-基。

最优选地，式I或Ia的R³基团选自CH₂CH₂NH₂。

由R²的Q-C(R)(Q-Ar)R³基团的R与R³部分所生成的优选环选自5-6元饱和的环，具有0-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子。由R与R³所生成的这类环的实例包括哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、吗啉基和硫代吗啉基。

当式I或Ia的R²基团是Q-C(R)(Q-Ar)R³时，Q-C(R)(Q-Ar)R³部分的优选Ar基团选自可选被取代的5-6元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环，所述环具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子，或者可选被取代的9-10元饱和、部分不饱和或完全不饱和的二环，所述环具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子。这类单环的实例包括苯基、吡啶基、呋喃基、吡啶酮和噻吩基。这类二环的实例包括苯并[1，3]二氧杂环戊烯基、萘基、二氢茚基和吲哚基。当存在时，R²的Q-C(R)(Q-Ar)R³基团的Ar环上的优选取代基包括R°、卤素、OR°、苯基、N(R°)₂、NHC(O)R°或SR°。这类基团的实例包括氟、氯、溴、CF₃、OH、OMe、OPh、OCH₂Ph、SMe、NH₂、NHC(O)Me、甲基、乙基、异丙基、异丁基和环丙基。

当存在时，式I或Ia的优选R⁶基团选自卤素、R和Ar¹。当存在时，式I或Ia的更优选R⁶基团选自卤素、可选被取代的C_1-4脂族基团、或可选被取代的5-6元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环，所述环具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子。这类基团的实例包括氯、溴、甲基、乙基、叔丁基、环丙基、异丙基、苯基和吡啶基。

按照另一种实施方式，本发明涉及式I’化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R¹选自卤素、CN、N(R⁴)₂、T-R或T’-Ar；

T选自价键或C_1-6亚烷基链，其中T的至多两个亚甲基单位可选地和独立地被-O-、-N(R)-、-S-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-C(O)-或-SO₂-代替；

T’是C_1-6亚烷基链，其中T’的至多两个亚甲基单位可选地和独立地被-O-、-N(R)-、-S-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-C(O)-或-SO₂-代替；

每个R独立地选自氢或可选被取代的C_1-6脂族基团；或者：

R²选自Q-Ar、Q-N(R⁵)₂或Q-C(R)(Q-Ar)R³，其中：

每个Q独立地选自价键或C_1-4亚烷基链；

R’是可选被取代的C_1-6脂族基团；

每个R⁵独立地选自R或Ar；

V¹、V²和V³各自独立地选自氮或C(R⁶)；

每个R⁶独立地选自R、Ar¹、卤素、CN、NO₂、OR、SR、N(R⁴)₂、N(R)COR、N(R)CON(R⁴)₂、N(R)C(O)OR、CON(R⁴)₂、OC(O)N(R⁴)₂、CO₂R、OC(O)R、N(R)SO₂R、N(R)SO₂N(R⁴)₂、SO₂R或SO₂N(R⁴)₂；

其条件是：

式I’的优选R¹和R²基团是如上关于式I和Ia化合物所述那些。当R¹是T’-Ar时，式I’的优选T’基团选自-NHC(O)-、-NH-、-NHCH₂-、-NHSO₂-、-CH₂NH-、-CH₂-、-C≡C-或-CH₂CH₂-。式I’的更优选T’基团选自-NHC(O)-、-NH-、-NHCH₂-、-NHSO₂-或-CH₂NH-。

按照另一种实施方式，本发明涉及式Ib化合物：

或其药学上可接受的盐，其中R¹、R³、Q和Ar如上关于式I化合物所定义的。

式Ib的优选R¹基团包括如上关于式I和Ia化合物所述那些。

式Ib的优选V¹、V²和V³基团是如上关于式I化合物所述的优选V¹、V²和V³基团。

式Ib的优选Q基团包括如上关于式I和Ia化合物所述那些。

式Ib的优选Ar基团包括可选被取代的环，选自5-6元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环，所述环具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子，或者9-10元饱和、部分不饱和或完全不饱和的二环，所述环具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子。这类单环的实例包括苯基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、环戊基、环己基和环庚基。这类二环的实例包括苯并[1，3]二氧杂环戊烯基、二氢茚-1-酮基、萘基、苯并噻吩基、2，3-二氢-1H-异吲哚基、二氢茚基、苯并呋喃基和吲哚基。当存在时，式Ib的Ar基团上的优选取代基包括R°、卤素、OR°、苯基、可选被取代的二烷基氨基、卤代烷基、C(O)R°或SR°。这类优选取代基的实例包括四唑基、噁唑基、异噁唑基、氯、溴、氟、OH、OMe、OEt、C(O)苯基、O苯基、N(CH₂CH₂Cl)₂、N(Me)₂、CF₃和SCF₃。

式Ib的优选R³基团包括R’、Q-OR⁵、Q-N(R⁴)₂、Ar¹、N(R)C(O)Q-N(R⁴)₂和N(R)Q-N(R⁴)₂。这类R³基团的实例包括CH₂OH、OH、NH₂、CH₂NH₂、CH₂NHMe、CH₂N(Me)₂、CH₂CH₂NH₂、CH₂CH₂NHMe、CH₂C(Me)₂NH₂、CH₂C(Me)₂CHMe、CH₂CH₂N(Me)₂、CH₂CH₂NH₂、NHCO₂叔丁基、苯基、环戊基、甲基、乙基、异丙基、环丙基、NH(CH₂)₃NH₂、NH(CH₂)₂NH₂、NH(CH₂)₂NHEt、NHCH₂吡啶基、NHSO₂苯基、NHC(O)CH₂C(O)O叔丁基、NHC(O)CH₂NH₃和NHCH₂-咪唑-4-基。

更优选地，式Ib的R³基团选自OH、NH₂、CH₂NH₂、CH₂NHMe、CH₂N(Me)₂、CH₂CH₂NH₂、CH₂CH₂NHMe、CH₂CH₂N(Me)₂、CH₂C(Me)₂NH₂、CH₂C(Me)₂CHMe、NHCO₂叔丁基、苯基、NH(CH₂)₃NH₂、NH(CH₂)₂NH₂、NH(CH₂)₂NHEt、NHCH₂吡啶基、NHSO₂苯基、NHC(O)CH₂C(O)O叔丁基、NHC(O)CH₂NH₃和NHCH₂-咪唑-4-基。

最优选地，式Ib的R³基团选自CH₂CH₂NH₂。

由式Ib的Q-C(R)(Q-Ar)R³基团的R与R³部分所生成的优选环选自5-6元饱和的环，具有0-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子。由R与R³所生成的这类环的实例包括哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、吗啉基和硫代吗啉基。

本发明的另一种实施方式涉及式IIa化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R¹选自卤素、CN、N(R⁴)₂或T-R；

每个R独立地选自氢或可选被取代的C_1-6脂族基团；或者：

R²是Q-C(R)(Q-Ar)R³，其中：

每个Q独立地选自价键或C_1-4亚烷基链；

R’是可选被取代的C_1-6脂族基团；

每个R⁴独立地选自R、COR、CO₂R、CON(R)₂、SO₂R、SO₂N(R)₂或Ar¹；

每个R⁵独立地选自R或Ar；

V¹、V²和V³各自独立地选自氮或C(R⁶)；

其条件是：

若R¹是氢，则R³不是R’、Q-OC(O)R⁵或OCH₂苯基。

式IIa的优选R¹基团包括卤素、N(R⁴)₂和可选被取代的C_1-6脂族基团。这类基团的实例包括氯、溴、氟、NH₂、NHMe、NHEt、NH-环己基、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、乙炔基和叔丁基。

式IIa的优选V¹、V²和V³基团是如上关于式I化合物所述的优选V¹、V²和V³基团。

式IIa的优选Q基团选自价键、-CH₂-或-CH₂CH₂-。

式IIa的优选R³基团包括R’、Q-OR⁵、Q-N(R⁴)₂、Ar¹、N(R)C(O)Q-N(R⁴)₂和N(R)Q-N(R⁴)₂。这类R³基团的实例包括CH₂OH、OH、NH₂、CH₂NH₂、CH₂NHMe、CH₂N(Me)₂、CH₂CH₂NH₂、CH₂CH₂NHMe、CH₂C(Me)₂NH₂、CH₂C(Me)₂CHMe、CH₂CH₂N(Me)₂、CH₂CH₂NH₂、NHCO₂叔丁基、苯基、环戊基、甲基、乙基、异丙基、环丙基、NH(CH₂)₃NH₂、NH(CH₂)₂NH₂、NH(CH₂)₂NHEt、NHCH₂吡啶基、NHSO₂苯基、NHC(O)CH₂C(O)O叔丁基、NHC(O)CH₂NH₃和NHCH₂-咪唑-4-基。

更优选地，式IIa的R³基团选自OH、NH₂、CH₂NH₂、CH₂NHMe、CH₂N(Me)₂、CH₂CH₂NH₂、CH₂CH₂NHMe、CH₂CH₂N(Me)₂、CH₂C(Me)₂NH₂、CH₂C(Me)₂CHMe、NHCO₂叔丁基、苯基、NH(CH₂)₃NH₂、NH(CH₂)₂NH₂、NH(CH₂)₂NHEt、NHCH₂吡啶基、NHSO₂苯基、NHC(O)CH₂C(O)O叔丁基、NHC(O)CH₂NH₃和NHCH₂-咪唑-4-基。

最优选地，式IIa的R³基团选自CH₂CH₂NH₂。

由式IIa的R²的R与R³部分所生成的优选环选自5-6元饱和的环，具有0-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子。由R与R³所生成的这类环的实例包括哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、吗啉基和硫代吗啉基。

式IIa的R²的优选Ar基团选自可选被取代的5-6元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环，所述环具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子，或者可选被取代的9-10元饱和、部分不饱和或完全不饱和的二环，所述环具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子。这类单环的实例包括苯基、吡啶基、呋喃基和噻吩基。这类二环的实例包括苯并[1，3]二氧杂环戊烯基、萘基、二氢茚基和吲哚基。当存在时，式IIa的R²的Q-C(R)(Q-Ar)R³基团的Ar环上的优选取代基包括R°、卤素、OR°、苯基、N(R°)₂、NHC(O)R°或SR°。这类基团的实例包括氟、氯、溴、CF₃、OH、OMe、OPh、OCH₂Ph、SMe、NH₂、NHC(O)Me、甲基、乙基、异丙基、异丁基和环丙基。

本发明的另一种实施方式涉及式IIb化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R¹是T-Ar；

每个R独立地选自氢或可选被取代的C_1-6脂族基团；或者：

R²是Q-C(R)(Q-Ar)R³，其中：

每个Q独立地选自价键或C_1-4亚烷基链；

R’是可选被取代的C_1-6脂族基团；

每个R⁵独立地选自R或Ar；

V¹、V²和V³各自独立地选自氮或C(R⁶)；

其条件是：

若V¹、V²和V³各自是CH，T是价键，R²是Q-C(R)(Q-Ar)R³，其中Ar是可选被取代的苯基环，则R³不是Q-OR⁵或C(O)NH₂。

式IIb的优选V¹、V²和V³基团是如上关于式I化合物所述那些。

式IIb的R¹的优选Ar基团选自可选被取代的5-6元芳基环，所述环具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子。式IIb的R¹的T-Ar基团的优选T部分选自价键、-NHC(O)-、-NH-、-NHCH₂-、-NHSO₂-、-CH₂NH-、-C≡C-、-CH₂-或-CH₂CH₂-。R¹的T-Ar基团的最优选T部分选自-NHC(O)-、-NH-、-NHCH₂-、-CH₂-或-CH₂CH₂-。式IIb的R¹基团的实例包括NHCH₂(可选被取代的苯基)、NHC(O)(可选被取代的苯基)、NHC(O)NH(可选被取代的苯基)、NHC(O)CH₂(可选被取代的苯基)、NHC(O)CH₂CH₂(可选被取代的苯基)、NHC(O)(可选被取代的苯基)、NHC(O)萘基、NHC(O)噻吩基、NHC(O)吡啶基、NHC(O)呋喃基、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、乙炔基和叔丁基。

当存在时，式IIb的R¹的Ar基团上的优选取代基包括R°、卤素、硝基、CN、OR°、SR°、N(R°)₂、SO₂R°、C(O)R°、C(O)OR和C(O)N(R°)₂，其中每个R°定义同上。这类基团的实例包括氯、溴、氟、CN、硝基、OMe、OPh、OCF₃、OCH₂Ph、OEt、SCHF₂、甲基、乙基、异丙基、丙基、乙烯基、CF₃、乙炔基、CH₂Ph、CH₂NH₂、CH₂N(Et)₂、CH₂吗啉-4-基、CH₂哌啶-1-基、CH₂咪唑-1-基、CH₂哌嗪-1-基、C(O)NH₂、C(O)Me、SO₂Me、NHEt和NHMe。

式IIb的优选Q基团是如上关于式I和Ib化合物所述那些。

式IIb的优选R³基团包括R’、Q-OR⁵、Q-N(R⁴)₂、Ar¹、N(R)C(O)Q-N(R⁴)₂和N(R)Q-N(R⁴)₂。这类R³基团的实例包括CH₂OH、OH、NH₂、CH₂NH₂、CH₂NHMe、CH₂N(Me)₂、CH₂CH₂NH₂、CH₂CH₂NHMe、CH₂C(Me)₂NH₂、CH₂C(Me)₂CHMe、CH₂CH₂N(Me)₂、CH₂CH₂NH₂、NHCO₂叔丁基、苯基、环戊基、甲基、乙基、异丙基、环丙基、NH(CH₂)₃NH₂、NH(CH₂)₂NH₂、NH(CH₂)₂NHEt、NHCH₂吡啶基、NHSO₂苯基、NHC(O)CH₂C(O)O叔丁基、NHC(O)CH₂NH₃和NHCH₂-咪唑-4-基。

更优选地，式IIb的R³基团选自CH₂NHMe、CH₂N(Me)₂、CH₂CH₂NH₂、CH₂CH₂NHMe、CH₂CH₂N(Me)₂、CH₂C(Me)₂NH₂、CH₂C(Me)₂CHMe、NHCO₂叔丁基、苯基、NH(CH₂)₃NH₂、NH(CH₂)₂NH₂、NH(CH₂)₂NHEt、NHCH₂吡啶基、NHSO₂苯基、NHC(O)CH₂C(O)O叔丁基、NHC(O)CH₂NH₃和NHCH₂-咪唑-4-基。

最优选地，式IIb的R³基团选自CH₂CH₂NH₂。

由式IIb的R²的R与R³部分所生成的优选环选自5-6元饱和的环，具有0-2个独立选自氮、氧或硫的杂原子。由R与R³所生成的这类环的实例包括哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、吗啉基和硫代吗啉基。

式IIb的R²的优选Ar基团选自可选被取代的5-6元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环，所述环具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子，或者可选被取代的9-10元饱和、部分不饱和或完全不饱和的二环，所述环具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子。这类单环的实例包括苯基、吡啶基、嘧啶基、吡啶酮基、呋喃基、四唑基、噻吩基、环戊基、环己基和环庚基。这类二环的实例包括苯并[1，3]二氧杂环戊烯基、二氢茚-1-酮基、萘基、苯并噻吩基、2，3-二氢-1H-异吲哚基、二氢茚基、苯并呋喃基和吲哚基。当存在时，式IIb的R²的Q-C(R)(Q-Ar)R³基团的Ar环上的优选取代基包括R°、卤素、OR°、苯基、N(R°)₂、NHC(O)R°或SR°。这类基团的实例包括氟、氯、溴、CF₃、OH、OMe、OPh、OCH₂Ph、SMe、NH₂、NHC(O)Me、甲基、乙基、异丙基、异丁基和环丙基。

按照另一种实施方式，本发明涉及式III化合物：

或其药学上可接受的盐，其中R¹、R³、Q和Ar是如上关于式I化合物所定义的。式III的优选V¹、V²、V³、R¹、R³、Q和Ar基团是如上关于式I或Ib化合物所述那些。

按照另一种实施方式，本发明涉及式IV化合物：

或其药学上可接受的盐，其中R¹、R³、Q和Ar是如上关于式I化合物所定义的。式IV的优选V¹、V²、V³、R¹、R³、Q和Ar基团是如上关于式I或Ib化合物所述那些。

按照另一种实施方式，本发明涉及式V化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

每个R独立地选自氢或可选被取代的C_1-6脂族基团；或者：

R²是Q-C(R)(Q-Ar)R³，其中：

每个Q独立地选自价键或C_1-4亚烷基链；

R’是可选被取代的C_1-6脂族基团；

每个R⁵独立地选自R或Ar；

V¹、V²和V³各自独立地选自氮或C(R⁶)；

每个Ar¹独立地选自可选被取代的5-7元饱和、部分不饱和或完全不饱和的单环，所述环具有0-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子。

式V的优选Ar基团是如上关于式I或Ib化合物所述那些。

式V的优选V¹、V²和V³基团是如上关于式I或Ib化合物所述那些。

式V的优选R²基团是如上关于式I或Ib化合物所述那些。

代表性式I化合物如下表1所述。

表1

本发明化合物可以如下流程I-XVII、本文所述合成实施例和本领域技术人员已知的一般方法所述加以制备。

流程I

试剂：(a)N₂H₄·H₂O，BuOH，回流；(b)SnCl₂·2H₂O，BuOH，回流。

上述流程I显示制备其中R¹不是氢的氨基吲唑化合物3的一般方法。当R¹是烷基或芳基时，可以制备硝基吲唑化合物2，方法基本上与Henke，et al，J.Med.Chem.，1997，40，2706所述相似。在步骤(b)还原硝基得到化合物3，方法如Bellamy，et al，Tetrahedron Lett.，1984，25，839所述。作为替代选择，可以在Pd/C的存在下将化合物2用氢气处理，实现2的硝基的还原，方法基本上与Boyer，et al，J Chem.Res.Miniprint，1990，11，2601所述相似。另一种实现化合物2硝基的还原的方法是水解，方法基本上与Lee，et al，Synthesis，2001，1，81所述相似。

流程II

上述流程II显示制备其中R¹是氨基或烷基氨基的氨基吲唑化合物3的一般方法。可以从2-氟-5-硝基苄腈(1)制备硝基吲唑化合物2，方法基本上与Parnell，et al，J.Chem.Soc.，1959，2363所述相似。然后可以从化合物2制备氨基吲唑化合物3，如上流程I所述。

流程III

试剂：(a)Cl₂，乙酸；(b)H₂，Pd/C。

上述流程III显示制备其中R¹是卤素的式I化合物的方法。例如，可以使5-硝基-1H-吲唑(5)氯化，得到3-氯-5-硝基-1H-吲唑6，方法采用v.Auwers，et al，Justus Liebigs Ann.Chem.，1927，451，295。作为替代选择，可以将硝基吲唑5用N-氯琥珀酰亚胺处理，生成3-氯硝基吲唑6。还原6可以生成氨基化合物7，方法如Boyer，et al.，J Chem.Res.Miniprint，1990，11，2601所述。

流程IV

上述流程IV概括制备式I化合物的合成途径。利用本领域已知的标准偶联条件，使起始的氨基吲唑3与羧酸化合物8偶联，生成式I化合物。在必要时，可以在偶联之前保护R²的反应性官能团。在某些情况下，用Boc基团保护吲唑环NH可以提高偶联反应的收率。

流程V

试剂：(a)KHMDS，THF，-78℃；(b)LiOH，MeOH，H₂O.

上述流程V显示制备α-羟基酸12的一般方法，12用于按照流程IV所述方法制备其中R³是OH的式Ib化合物。从9和10生成α-羟基酯化合物11，方法基本上与Hernandez，et al，J.Org.Chem.，1995，60，2683所述相似。氧氮杂环丙烷试剂10可以按照Davies，et al.，J.Org.Chem.，1988，53，2087所述工艺加以制备。

流程VI

试剂：(a)MsCl，吡啶，THF；(b)NHR，吡啶，THF；(c)TFA，CH₂Cl₂.

上述流程VI显示从如上流程V所述其中R³是羟基的式Ib化合物制备其中R³是多种氨基的式Ib化合物的一般方法。可以将化合物13在THF中用甲磺酰氯和吡啶处理，得到甲磺酰基衍生物14。甲磺酰基然后可以被所需的氨基置换，得到化合物15。除去Boc保护基团，得到化合物16。每一步都是本领域技术人员熟知的。

流程VII

试剂：(a)NBS，hv，CCl₄；(b)NHR，K₂CO₃，THF；(c)LiOH，THF，H₂O.

上述流程VII显示制备羧酸中间体的方法，该中间体可用于制备其中R³是氨基的式Ib化合物。这种方法可以用于制备其中R³是式N(R⁴)₂、N(R)COT_nN(R⁴)₂或N(R)T_nN(R⁴)₂多种氨基的式Ib化合物。上述步骤每一步都是本领域技术人员熟知的。然后可以按照流程IV使羧酸化合物20与氨基吲唑偶联，得到式Ib化合物。

流程VIII

试剂：(a)I₂，KOH，DMF，室温

上述流程VIII显示从5-硝基吲唑(5)制备3-碘-5-硝基吲唑(21)，方法基本上与已公布的PCT申请WO 02/10137所述相似。

流程IX

试剂：(a)Br₂，AcOH，回流。

上述流程IX显示3-溴-5-硝基吲唑的制备方法，方法基本上与Benchidimi，et al，J Het.Chem.，1979，16，1599所述相似。

流程IX

试剂：(a)Pd(PPh₃)₂Cl₂，CuI，Et₃N，DMF，50℃。

上述流程IX显示其中R¹是炔基的式I化合物的一般制备方法。借助Sonograshira偶联法，使溴吲唑(22)与丙炔(23)偶联，得到5-硝基-3-丙-1-炔基-1H-吲唑(24)。本领域技术人员将认识到，多种炔烃可进行上述反应，可用于制备多种其中R¹基团的T部分是炔基的式I化合物。

流程X

试剂：(a)MEMCl，NaHMDS，THF，室温；(b)RB(OH)₂，Pd(dppf)₂Cl₂，K₂PO₄，DME，室温.

上述流程X显示硝基吲唑(2)的替代制备方法。可以保护碘吲唑化合物21的NH-基团。尽管上面描绘了MEM-保护基团的使用，不过本领域技术人员将认识到多种保护基团都将适合于上述反应。其他氨基保护基团是本领域熟知的，详细描述在Protecting Groups inOrganic Synthesis，Theodora W. Greene and Peter G.M.Wuts，1991，published by John Wiley and Sons中。利用本领域熟知的Suzuki偶联法使氨基被保护的碘吲唑(25)与烃基代硼酸偶联。本领域技术人员将认识到多种烃基代硼酸都可以用在Suzuki偶联中，从而得到多种其中R¹是烷基或芳基的吲唑(26)。

流程XI

试剂：(a)NaNO₂，AcOH，回流。

上述流程XI显示7-氯-5-硝基吲唑(28)的一般制备方法，在乙酸的存在下将2-氯-6-甲基-4-硝基苯基胺(27)用硝酸钠处理。

流程XII

试剂：(a)R⁶B(OH)₂，Pd(PPh₃)4，Na₂CO₃，DME，aq.EtOH；(b)NaNO₂，AcOH，回流。

上述流程XII显示制备在7-位具有R⁶取代基的式I化合物(31)的一般方法。在步骤(a)，利用Suzuki偶联条件使2-溴-6-甲基-4-硝基苯基胺(29)与烃基代硼酸偶联，生成中间体化合物(30)。本领域技术人员将认识到多种烃基代硼酸都适合于上述反应，将可用于制备多种在吲唑环7-位具有R⁶取代基的式I化合物(31)。在步骤(b)将中间体(30)用硝酸钠和乙酸在回流下处理，生成吲唑环。

流程XIV

试剂：(i)LDA，-78℃；(ii)ICH₂CN，-78℃至环境温度，THF；(b)H₂，PtO₂，HCl，MeOH；(C)8M HCl，回流；(d)(Boc)₂O，Na₂CO₃，aq.THF，环境温度。

上述流程XIV显示制备被保护的氨基酸中间体(36)的一般方法，该中间体可用于制备其中R³是T_nN(R⁴)₂的式Ib化合物。氰基化合物(33)是这样制备的，将酯(17)用二异丙氨基化锂(LDA)在-78℃下处理，然后加入碘乙腈。在钯催化剂的存在下用氢还原腈，方法基本上与Prager，et al，Aust.J.Chem.，1997，50，813所述相似。水解所得胺(34)，生成酸化合物35。然后如下用BOC基团保护氨基，在含水碳酸钠的存在下，在四氢呋喃中，将35用BOC-酸酐处理。其他氨基保护基团是本领域熟知的，详细描述在Protecting Groups in OrganicSynthesis，Theodora W.Greene and Peter G.M.Wuts，1991，publishedby John Wiley and Sons中。

流程XV

试剂：(a)丙烯酸叔丁基酯，KOtBu，THF，-78℃至室温；(b)TFA，DCM；(c)DPPA，PhMe，室温；(d)tBuOH，SnCl₂(cat)，80℃；(e)LiOH，aq.THF.

上述流程XV显示制备被保护的氨基酸中间体36的替代方法，该中间体可用于制备其中R³是T_nN(R⁴)₂的式Ib化合物。丙烯酸叔丁基酯向酯17阴离子的Michael加成得到二酯37。选择性裂解化合物37的叔丁基酯，得到酸中间体38。然后将单酯38先后用叠氮化二苯基磷酰和叔丁醇处理，得到BOC-保护的氨基酯39。酯的水解得到所需被保护的氨基酸中间体(36)。

流程XVI

试剂：(a)H₂，Pd/C；(b)Ac₂O；(c)NOCl；(d)苯，回流；(e)KOH，乙醇，回流。

上述流程XVI显示制备其中V³是N的本发明化合物的一般方法。从氨基被保护的吡啶化合物40制备吡啶并吡唑中间体41，该中间体可用于制备其中V³是N的本发明化合物，方法基本上与Foster，H.E.et.al.，J.Chem.Soc.，Perkin Trans 1，1973，2901所述相似。

流程XVII

试剂：(a)P₂S₅，二甲苯，回流；(b)NaNH₂，RCl

上述流程XVI显示制备其中式I的R¹基团的T部分的亚甲基单位被-O-或-S-代替的本发明化合物的一般方法。生成吲唑42的方法基本上与Pfannstiel，K.et.al.，Ber1942，75B，1096和Vicente，J et al.，Heterocycles，1997，45(1)，129所述相似。按照Kuroda，T.et al.JP50130759所述工艺，从化合物42合成吲唑45。

流程XVIII

上述流程XVIII显示制备其中V¹是氮的式I化合物的一般流程，方法基本上与Fanta，Org.Synth.Coll.，4，844所述相似。

流程XIX

试剂：(a)N₂H₄·H₂O，BuOH，回流；(b)(Boc)₂O，EtⁱPr₂N，DMAP(cat)，THF，室温；(c)RC(O)Cl，Py；(d)H₂，Pd/C，MeOH，室温；(e)R²CO₂H，PyBroP，DCM；(f)RC(O)Cl，EtⁱPr₂N，DCM；(g)TFA，DCM.

上述流程XVIII显示制备其中R¹是NH₂、NHC(O)R或NHC(O)Ar的本发明化合物的合成途径。可以将腈4用肼处理，得到3-氨基吲唑49。内环氮的选择性Boc-保护、继之以外环氮的酰化，得到5-硝基吲唑51。硝基可以被氢化作用还原(流程III)，使所得氨基与酸8偶联(流程IV)。作为替代选择，5-硝基吲唑50的氢化作用得到3，5-二氨基吲唑52。用酸8选择性酰化，得到吲唑53，后者可以被加工得到吲唑54。所有所用方法都是本领域技术人员已知的。

按照本领域已知的方法，可以体外、体内或者在细胞系中测定用在本发明中的化合物作为AKT、PKA、PDK1、p70S6K或ROCK激酶抑制剂的活性。体外测定法包括测定活化AKT、PKA、PDK1、p70S6K或ROCK的磷酸化活性或ATP酶活性的抑制作用。可供替代的体外测定法量化抑制剂与AKT、PKA、PDK1、p70S6K或ROCK结合的能力。抑制剂的结合可以这样测量，在结合之前放射性标记抑制剂，分离抑制剂/AKT、抑制剂/PKA、抑制剂/PDK1、抑制剂/p70S6K或抑制剂/ROCK复合体，测定所结合的放射性标记的量。作为替代选择，抑制剂的结合可以这样测定，进行竞争实验，其中将化合物与AKT、PKA、PDK1、p70S6K或ROCK一起培育，这些激酶与已知的放射性配体结合。测定用在本发明中的化合物作为AKT、PKA、PDK1、p70S6K或ROCK激酶抑制剂的详细条件如下实施例所述。

按照另一种实施方式，本发明提供组合物，包含本发明化合物或其药学上可接受的衍生物和药学上可接受的载体、助剂或赋形剂。化合物在本发明组合物中的量是这样的，它有效可测量地抑制生物样本或患者中的蛋白激酶，确切为AKT、PKA、PDK1、p70S6K或ROCK激酶。优选地，本发明组合物被配制成用于对需要这类组合物的患者给药。最优选地，本发明组合物被配制成用于对患者口服给药。

本文所用的术语“患者”表示动物，优选哺乳动物，最优选人类。

术语“药学上可接受的载体、助剂或赋形剂”表示无毒的载体、助剂或赋形剂，它不破坏与之配制的化合物的药理活性。可以用在本发明组合物中的药学上可接受的载体、助剂或赋形剂包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(例如人血清白蛋白)、缓冲物质(例如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐)、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。

本文所用的术语“可测量地抑制”表示在包含所述组合物和AKT、PKA、PDK1、p70S6K或ROCK激酶的样本与包含AKT、PKA、PDK1、p70S6K或ROCK激酶而没有所述组合物的等价样本之间，AKT、PKA、PDK1、p70S6K或ROCK活性的可测量的变化。

“药学上可接受的盐”表示本发明化合物的任何无毒的盐或酯的盐，一旦对接受者给药，即能够直接或间接提供本发明化合物或其抑制性的活性代谢产物或残余物。本文所用的术语“其抑制活性代谢产物或残余物”意味着其代谢产物或残余物也是AKT、PKA、PDK1、p70S6K或ROCK家族激酶的抑制剂。

本发明化合物的药学上可接受的盐包括从药学上可接受的无机与有机酸和碱衍生的那些。适合的酸盐的实例包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚酸盐、甘油磷酸盐、乙醇酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、扑酸盐、果胶酯酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。其他的酸、例如草酸，尽管本身不是药学上可接受的，不过在获得本发明化合物和它们的药学上可接受的酸加成盐时可以用于制备可用作中间体的盐。

从适当的碱衍生的盐包括碱金属(例如钠和钾)、碱土金属(例如镁)、铵和N⁺(C_1-4烷基)₄盐。本发明也涵盖本文所公开的化合物的任何含碱性氮基团的季铵化。借助这类季铵化可以得到水或油可溶性或可分散性产物。

本发明组合物可以被口服、肠胃外、吸入喷雾、局部、直肠、鼻、颊、阴道或者经由植入药库给药。本文所用的术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、损伤内和颅内注射或输注技术。优选地，组合物是口服、腹膜内或静脉内给药的。本发明组合物的无菌可注射形式可以是水性或油性混悬液。这些混悬液可以按照本领域已知的技术加以配制，使用适合的分散或湿润剂和悬浮剂。无菌可注射的制备物也可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射的溶液或混悬液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。可以采用的可接受的载体和溶剂有水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，习惯上采用无菌的不挥发油作为溶剂或悬浮介质。

为此，可以采用任意品牌的不挥发油，包括合成的单-或二-甘油酯。脂肪酸、例如油酸及其甘油酯衍生物，可用于制备注射剂，因为它们是天然的药学上可接受的油，例如橄榄油或蓖麻油，尤其是它们的聚氧乙基化形式。这些油溶液或悬液还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或相似的分散剂，它们常用于配制药学上可接受的剂型，包括乳剂和悬液。出于配制的目的，还可以使用其他常用的表面活性剂，例如吐温类、司盘类和其他乳化剂或生物利用度增强剂，它们常用于制造药学上可接受的固体、液体或其他剂型。

本发明的药学上可接受的组合物可以被口服给药，任意口服可接受的剂型包括但不限于胶囊剂、片剂、水悬液或溶液。在口用片剂的情况下，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。也通常加入润滑剂，例如硬脂酸镁。关于胶囊剂型口服给药，有用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当口用需要水悬液时，将活性成分与乳化及悬浮剂混合。如果需要的话，还可以加入某些甜味剂、矫味剂或着色剂。

作为替代选择，本发明的药学上可接受的组合物可以是栓剂的形式，用于直肠给药。它们可以这样制备，将药物与适合的无刺激性赋形剂混合，后者在室温下是固体，但是在直肠温度下是液体，因此将在直肠内熔化，释放药物。这类材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。

本发明的药学上可接受的组合物还可以被局部给药，尤其当治疗目标包括局部用药容易达到的部位或器官时，包括眼、皮肤或下肠道的疾病。适合的局部制剂容易根据每个这些部位或器官加以制备。

下肠道局部用药可以利用直肠栓剂(见上)或适合的灌肠剂进行。还可以使用局部透皮贴剂。

就局部用药而言，药学上可接受的组合物可以配制在适合的软膏中，其中含有悬浮或溶解在一种或多种载体中的活性组分。本发明化合物的局部给药载体包括但不限于矿物油、液体矿脂、白矿脂、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。作为替代选择，药物组合物可以配制成适合的洗剂或霜剂，其中含有悬浮或溶解在一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分。适合的载体包括但不限于矿物油、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。

就眼用而言，药学上可接受的组合物可以被配制成在等渗的pH调节的无菌盐水中的微粉化悬液或者优选地在等渗的pH调节的无菌盐水中的溶液，二者都含有或没有防腐剂，例如苯扎氯铵。作为替代选择，关于眼用，药物组合物可以配制在软膏中，例如矿脂。

本发明的药学上可接受的组合物还可以借助鼻气雾剂或吸入给药。这类组合物是按照药物制剂领域熟知的技术制备的，可以制成盐水溶液，采用苯甲醇或其他适合的防腐剂、提高生物利用度的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其他常规的增溶剂或分散剂。

最优选地，本发明的药学上可接受的组合物被配制成用于口服给药。

可以与载体材料混合制备单一剂型的本发明化合物的量将因所治疗的患者和特定的给药方式而异。优选地，组合物应当是这样配制的，以便可以对接受这些组合物的患者给以剂量在0.01-100mg/kg体重/天的抑制剂。

还应当理解的是就任意特定患者而言的具体剂量和治疗方案将依赖于各种因素，包括所采用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、排泄速率、药物组合、主治医师的判断和所治疗特定疾病的严重性。本发明化合物在组合物中的量还将依赖于组合物中的特定化合物。

依赖于所要治疗或预防的特定病症或疾病，在本发明组合物中还可以存在通常为治疗或预防该病症而给药的另外的治疗剂。本文所用的通常为治疗或预防特定疾病或病症而给药的另外的治疗剂已知也称“就所治疗的疾病或病症而言是适当的”。

例如，可以将化学治疗剂或其他抗增殖剂与本发明化合物联合治疗增殖性疾病和癌症。已知化学治疗剂的实例包括但不限于Gleevec^TM、阿霉素、地塞米松、长春新碱、环磷酰胺、氟尿嘧啶、托泊替康、紫杉醇、干扰素和铂衍生物。

其他可以与本发明抑制剂联合的药物的实例非限制性地包括：治疗阿尔茨海默氏病的，例如Aricept

和Excelon；治疗帕金森氏病的，例如L-多巴/卡比多巴、恩他卡朋、罗匹尼罗、普拉克索、溴隐亭、培高利特、苯海索和金刚烷胺；治疗多发性硬化(MS)的药物，例如β-干扰素(例如Avonex和Rebif)、Copaxone

和米托蒽醌；治疗气喘的，例如沙丁胺醇和Singulair

；治疗精神分裂症的药物，例如再普乐(zyprexa)、维思通(risperdal)、思瑞康(seroquel)和氟哌啶醇；抗炎剂，例如皮质类固醇、TNF阻滞剂、IL-1 RA、硫唑嘌呤、环磷酰胺和柳氮磺胺吡啶；免疫调制与免疫制剂剂，例如环孢菌素、他克莫司、雷帕霉素、麦考酚酸吗乙酯(mycophenolate mofetil)、干扰素、皮质类固醇、环磷酰胺、硫唑嘌呤和柳氮磺胺吡啶；神经营养因子，例如乙酰胆碱酯酶抑制剂、MAO抑制剂、干扰素、抗惊厥剂、离子通道阻滞剂、利鲁唑和治帕金森氏病药；治疗心血管疾病的药物，例如β-阻滞剂、ACE抑制剂、利尿剂、硝酸酯、钙通道阻滞剂和他汀类；治疗肝疾病的药物，例如皮质类固醇、考来烯胺、干扰素和抗病毒剂；治疗血液障碍的药物，例如皮质类固醇、治白血病药和生长因子；和治疗免疫缺陷障碍的药物，例如γ-球蛋白。

另外的治疗剂在本发明组合物中的含量将不多于通常在包含该治疗剂作为唯一活性成分的组合物中给药的量。优选地，另外的治疗剂在本文所公开的组合物中的量将是通常在包含该治疗剂作为唯一治疗活性成分的组合物中的含量的约50％至100％。

按照另一种实施方式，本发明涉及抑制生物样本中AKT、PKA、PDK1、p70S6K或ROCK激酶活性的方法，包含使所述生物样本与本发明化合物或包含所述化合物的组合物接触的步骤。优选地，该方法包含使所述生物样本与如上所述的本发明的优选化合物接触的步骤。

本文所用的术语“生物样本”非限制性地包括细胞培养物或其提取物；从哺乳动物得到的活组织检查材料或其提取物；和血液、唾液、尿、粪、精液、泪或其他体液或其提取物。

生物样本中AKT、PKA、PDK1、p70S6K或ROCK激酶活性的抑制作用可用于本领域技术人员已知的多种目的。这类目的的实例包括但不限于输血、器官移植、生物样本贮存和生物测定。

本发明的另一方面涉及治疗AKT-、PKA-、PDK1-、p70S6K-或ROCK-介导的患者疾病的方法，该方法包含对需要的患者给以治疗有效量的本发明化合物或包含所述化合物的药学上可接受的组合物。按照优选的实施方式，本发明涉及给以式I’化合物或包含所述化合物的药学上可接受的组合物。更优选的实施方式涉及给以如上所述的式I’优选化合物或包含所述化合物的药学上可接受的组合物。

按照另一种实施方式，本发明涉及治疗AKT-、PKA-、PDK1-、p70S6K-或ROCK-介导的患者疾病的方法，该方法包含对需要的患者给以治疗有效量的式IIa、IIb或V化合物或包含所述化合物的药学上可接受的组合物。按照另一种实施方式，所述方法包含对需要的患者给以治疗有效量的如上所述的式IIa、IIb或V优选化合物或包含所述化合物的药学上可接受的组合物。

按照另一种实施方式，本发明涉及治疗AKT-、PKA-、PDK1-、p70S6K-或ROCK-介导的患者疾病的方法，该方法包含对需要的患者给以治疗有效量的式III或IV化合物或包含所述化合物的药学上可接受的组合物。按照另一种实施方式，所述方法包含对需要的患者给以治疗有效量的如上所述的式III或IV优选化合物或包含所述化合物的药学上可接受的组合物。

按照另一种实施方式，本发明提供治疗或减轻AKT-介导的患者疾病或病症严重性的方法，包含对所述患者给以根据本发明的组合物的步骤。

本文所用的术语“AKT-介导的病症”或“疾病”表示已知AKT在其中扮演角色的任何疾病或其他有害病症。术语“AKT-介导的病症”或“疾病”还表示因AKT抑制剂治疗而缓解的那些疾病或病症。AKT-介导的疾病或病症包括但不限于增殖性障碍、癌症、心血管障碍、类风湿性关节炎和神经变性障碍。优选地，所述癌症选自胰腺癌、前列腺癌或卵巢癌。

按照另一种实施方式，本发明提供治疗或减轻PKA-介导的患者疾病或病症严重性的方法，包含对所述患者给以根据本发明的组合物的步骤。

本文所用的术语“PKA-介导的病症”或“疾病”表示已知PKA在其中扮演角色的任何疾病或其他有害病症。术语“PKA-介导的病症”或“疾病”还表示因PKA抑制剂治疗而缓解的那些疾病或病症。PKA-介导的疾病或病症包括但不限于增殖性障碍和癌症。

按照另一种实施方式，本发明提供治疗或减轻PDK1-介导的患者疾病或病症严重性的方法，包含对所述患者给以根据本发明的组合物的步骤。

本文所用的术语“PDK1-介导的病症”或“疾病”表示已知PDK1在其中扮演角色的任何疾病或其他有害病症。术语“PDK1-介导的病症”或“疾病”还表示因PDK1抑制剂治疗而缓解的那些疾病或病症。PDK1-介导的疾病或病症包括但不限于增殖性障碍和癌症。优选地，所述癌症选自胰腺癌、前列腺癌或卵巢癌。

按照另一种实施方式，本发明提供治疗或减轻p70S6K-介导的患者疾病或病症严重性的方法，包含对所述患者给以根据本发明的组合物的步骤。

本文所用的术语“p70S6K-介导的病症”或“疾病”表示已知p70S6K在其中扮演角色的任何疾病或其他有害病症。术语“p70S6K-介导的病症”或“疾病”还表示因p70S6K抑制剂治疗而缓解的那些疾病或病症。p70S6K-介导的疾病或病症包括但不限于增殖性障碍，例如癌症和结节状硬化。

按照另一种实施方式，本发明提供治疗或减轻ROCK-介导的患者疾病或病症严重性的方法，包含对所述患者给以根据本发明的组合物的步骤。

本文所用的术语“ROCK-介导的病症”或“疾病”表示已知ROCK在其中扮演角色的任何疾病或其他有害病症。术语“ROCK-介导的病症”或“疾病”还表示因ROCK抑制剂治疗而缓解的那些疾病或病症。这类病症非限制性地包括高血压、心绞痛、脑血管收缩、气喘、外周循环障碍、早产、癌症、动脉硬化、痉挛、视网膜病、炎症、自体免疫障碍、AIDS和骨质疏松。

按照另一种实施方式，本发明涉及治疗或减轻疾病或病症严重性的方法，选自增殖性障碍、心脏障碍、炎症、自体免疫障碍、病毒疾病或骨障碍，其中所述方法包含给以有效量本发明化合物的步骤。优选地，所述方法包含给以有效量本发明优选化合物的步骤。

按照优选的实施方式，本发明涉及治疗或减轻疾病或病症严重性的方法，选自癌症、类风湿性关节炎、气喘、HIV、心绞痛、外周循环障碍、高血压、动脉硬化或骨质疏松。

优选地，本发明涉及治疗或减轻癌症严重性的方法。

更优选地，本发明涉及治疗或减轻癌症严重性的方法，选自脑(神经胶质瘤)、乳腺、结肠、头颈、肾、肺、肝、黑瘤、卵巢、胰腺、前列腺、肉瘤或甲状腺的癌症。

最优选地，本发明涉及治疗或减轻胰腺、前列腺或卵巢癌症的严重性的方法。

在可供替代的实施方式中，采用不含另外的治疗剂的组合物的本发明方法包含对所述患者分开给以另外的治疗剂的另外的步骤。当这些附加治疗剂被分开给药时，它们可以在本发明组合物的给药之前、同时或之后对患者给药。

本发明化合物或其药物组合物还可以被掺入到用于涂覆可植入医药装置的组合物中，例如假体、人工瓣膜、血管移植物、斯滕特氏印模和导管。血管斯滕特氏印模例如已经用于克服再狭窄(血管壁在损伤之后的再狭窄)。不过，采用斯滕特氏印模或其他可植入装置的患者面临凝块形成或血小板活化的危险。用包含本发明化合物的药学上可接受的组合物预先涂覆该装置，可以防止或缓和这些副作用。美国专利6,099,562、5,886,026和5,304,121描述了适合的涂层和涂覆可植入装置的一般制备。涂层通常是生物相容性聚合材料，例如水凝胶聚合物、聚甲基二硅氧烷、聚己内酯、聚乙二醇、聚乳酸、乙烯乙酸亚乙酯和它们的混合物。涂层可以可选地进一步被适合的氟硅酮、多糖、聚乙二醇、磷脂或其组合的表层所覆盖，以赋予组合物以控制释放特征。涂有本发明组合物的可植入装置是本发明的另一种实施方式。

具体实施方式

为了可以更加充分地理解本文所述发明，阐述下列实施例。应当理解的是这些实施例仅供例证，决不被解释为限制本发明。

合成实施例

本文所用的术语“R_t(min)”表示HPLC保留时间，以分钟计，与化合物有关。除非另有指示，用于获得所报道的保留时间的HPLC方法如下：

柱子：XTerra C8柱，4.6×150mm

梯度：0-100％乙腈+甲醇60∶40(20mM Tris磷酸盐)

流速：1.51mL/分钟

检测：225nm

实施例1

2-(3-氯-苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-乙酰胺(I-6)：向5-氨基吲唑(1mmol)、HOBt(1mmol)与3-氯苯基乙酸(1.1mmol)的DMF(4mL)溶液加入N-甲基吗啉(1.1mmol)。搅拌10分钟后，加入EDC HCl(1.1mmol)，将反应混合物在环境温度下搅拌过夜。浓缩反应混合物，残余物经过反相制备型HPLC纯化[Waters Delta-Pak C18，15uM，100A柱，梯度10％-100％B(溶剂A：含0.05％TFA的水；溶剂B：CH₃CN)，历经10分钟，流速25mL/min]，得到化合物I-6(79mg，42％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ3.68(2H，s)，7.12-7.73(6H，m)，8.00(1H，s)，8.11(1H，s)，10.10(1H，s)，12.97(1H，bs)；MS(ES+)：m/e＝(M+H)286.

实施例2

我们已经制备了其他式I化合物，方法基本上与实施例1所述那些相似。这些化合物的特征数据总结在下表2中，包括HPLC、LC/MS(观测)和¹H NMR数据。

¹H NMR数据总结在下表2中，其中¹H NMR数据是在400MHz下、在氘代DMSO中获得的，另有指示除外，并且发现与结构一致。化合物编号对应于表1中所列举的化合物编号。

表2：所选择的式I化合物的特征数据

实施例3

5-[2-(3-氯-苯基)-2-甲磺酰氧基-乙酰氨基]-吲唑-1-羧酸叔丁基酯：按照S.J.Brickner，WO 90/02744所概括的工艺制备5-氨基-吲唑-1-羧酸叔丁基酯。然后按照实施例1所述工艺使5-氨基-吲唑-1-羧酸叔丁基酯与2-(3-氯苯基)-2-羟基乙酸偶联，得到5-[2-(3-氯-苯基)-2-羟基-乙酰氨基]-吲唑-1-羧酸叔丁基酯。在0℃下向5-[2-(3-氯-苯基)-2-羟基-乙酰氨基]-吲唑-1-羧酸叔丁基酯(7.47mmol)的无水THF(20mL)溶液加入吡啶(37.33mmol，5当量)，继之以按逐滴方式加入甲磺酰氯(22.40mmol，3当量)。将所得溶液在环境温度下搅拌过夜。然后在真空中浓缩反应混合物，使所得油在EtOAc与盐水之间分配。将有机层用盐水洗涤(三次)，经硫酸钠干燥，过滤，在真空中浓缩，得到标题化合物(3.58g，定量收率)，无需进一步纯化即可使用。

实施例4

5-[2-(2-叔丁氧羰基氨基-乙基氨基)-2-(3-氯-苯基)-乙酰氨基]-吲唑-1-羧酸叔丁基酯：向5-[2-(3-氯-苯基)-2-甲磺酰氧基-乙酰氨基]-吲唑-1-羧酸叔丁基酯(1.49mmol)的无水THF(4mL)溶液加入吡啶(4.48mmol，3当量)继之以(2-氨基-乙基)-氨基甲酸叔丁基酯的无水THF溶液(3当量，～0.5mL/mmol)。将所得溶液在60℃下回流过夜。然后在真空中浓缩反应混合物，使所得油在EtOAc与盐水之间分配。将有机层用盐水洗涤(三次)，经硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩。残余物经过硅胶色谱纯化，用EtOAc∶己烷(60∶40)洗脱，得到标题化合物，收率85％。

实施例5

2-(2-氨基-乙基氨基)-2-(3-氯-苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-乙酰胺(I-59)：向5-[2-(2-叔丁氧羰基氨基-乙基氨基)-2-(3-氯-苯基)-乙酰氨基]-吲唑-1-羧酸叔丁基酯(1.26mmol)加入三氟乙酸(5mL)，将反应混合物搅拌1.5小时。在真空中浓缩反应混合物，残余物经过反相制备型HPLC纯化[Waters Delta-Pak C18，15uM，100A柱，梯度10％-100％B(溶剂A：含0.05％TFA的水；溶剂B：CH₃CN)，历经10分钟，流速25mL/min]，得到标题化合物(172mg，82％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ2.5-5.5(9H，br m)，6.9-7.3(1H，m)，7.4-8.2(8H，m)，9.2-10.8(1H，br m)，13.0(1H，br s)；MS(ES+)：m/e＝344.4(100％)，346.4(40％).

实施例6

我们已经制备了其他式I化合物，方法基本上与实施例1、3、4和5所述那些相似。这些化合物的特征数据总结在下表3中，包括HPLC、LC/MS(观测)和¹H NMR数据。

¹H NMR数据总结在下表3中，其中¹H NMR数据是在400MHz下、在氘代DMSO中获得的，另有指示除外，并且发现与结构一致。化合物编号对应于表1中所列举的化合物编号。

表3：所选择的式I化合物的特征数据

实施例7

({[(3-氯-苯基)-(1H-吲唑-5-基氨甲酰基)-甲基]-氨甲酰基}-甲基)-氨基甲酸叔丁基酯：向2-氨基-2-(3-氯-苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-乙酰胺(0.17mmol)与叔丁氧羰基氨基-乙酸(0.17mmol)的THF(2mL)溶液加入HOBt(0.18mmol)。将反应混合物冷却至0℃，加入EDC(0.18mmol)，将反应混合物搅拌过夜。然后在真空中浓缩反应混合物，使残余物在EtOAc与盐水之间分配。将有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩。残余物经过硅胶色谱纯化，用EtOAc∶己烷(80∶20)洗脱，得到标题化合物，收率55％。

实施例8

2-(2-氨基-乙酰氨基)-2-(3-氯-苯基)-N-(1H-吲唑-5-基)-乙酰胺(I-74)：在0℃下，向({[(3-氯-苯基)-(1H-吲唑-5-基氨甲酰基)-甲基]-氨甲酰基}-甲基)-氨基甲酸叔丁基酯(0.09mmol)的二氯甲烷(2.5mL)溶液加入三氟乙酸(2.5mL)，将反应混合物搅拌1小时。在真空中浓缩反应混合物，得到标题化合物(9mg，24％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ3.8(2H，m)，5.8(1H，m)，7.4-7.7(5H，m)，7.9-8.2(4H，m)，9.3-9.4(1H，m)，10.6(1H，s)，13.0(1H，br s)；MS(ES+)：m/e＝358.3(40％)，134.3(100％).

实施例9

我们已经制备了其他式I化合物，方法基本上与实施例7和8所述那些相似。这些化合物的特征数据总结在下表4中，包括HPLC、LC/MS(观测)和¹H NMR数据。

¹H NMR数据总结在下表4中，其中¹H NMR数据是在400MHz下、在氘代DMSO中获得的，另有指示除外，并且发现与结构一致。化合物编号对应于表1中所列举的化合物编号。

表4：所选择的式I化合物的特征数据

实施例10

(2-叔丁氧羰基氨基-乙基氨基)-(3-甲氧基-苯基)-乙酸甲基酯：向(3-甲氧基-苯基)-乙酸甲基酯(19.6mmol)的CCl₄溶液加入N-琥珀酰亚胺(19.6mmol)，向反应混合物照射2小时。然后在真空中浓缩反应混合物，得到中间体溴-(3-甲氧基-苯基)-乙酸甲基酯。在氮气氛下向溴-(3-甲氧基苯基)-乙酸甲基酯的THF(30mL)溶液加入(2-氨基-乙基)-氨基甲酸叔丁基酯(20.6mmol)的THF(20mL)溶液继之以K₂CO₃(39.2mmol，2当量)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。使反应混合物在水(50mL)与EtOAc(2×50mL)之间分配，合并有机层，干燥(硫酸钠)，在真空中浓缩，得到油。该油经过硅胶柱色谱纯化，使用EtOAc∶汽油(1∶1)作为洗脱剂，得到标题化合物，为油，收率53％。

实施例11

(2-叔丁氧羰基氨基-乙基氨基)-(3-甲氧基-苯基)-乙酸：向(2-叔丁氧羰基氨基-乙基氨基)-(3-甲氧基-苯基)-乙酸甲基酯(10.4mmol)的THF∶H₂O(3∶1，40mL)溶液加入LiOH(10.9mmol)，将反应混合物在室温下搅拌3小时。在真空中浓缩反应混合物，用H₂O稀释，用2M HCl溶液中和，过滤收集所得沉淀，得到标题化合物，收率46％。

实施例12

2-(2-氨基-乙基氨基)-N-(1H-吲唑-5-基)-2-(3-甲氧基-苯基)-乙酰胺(I-1017)：按照实施例1所述方法使5-氨基吲唑与(2-叔丁氧羰基氨基-乙基氨基)-(3-甲氧基-苯基)-乙酸偶联。然后按照实施例8所述方法除去BOC保护基团，得到化合物I-1017。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ3.02-3.14(4H，m)，3.80(3H，s)，4-5(1H，vbr s)，5.11(1H，brs)，7.05(1H，d)，7.20(2H，m)，7.40(2H，m)，7.52(1H，d)，7.5-8(2H，brs)，8.05(1H，s)，8.07(1H，s)，8.2-10.1(1H，brs)，10.68(1H，brs)，13.15(1H，brs)；MS(ES+)：m/e＝340.

实施例13

5-硝基-1H-吲唑-3-基胺：将一水合肼(17.5mL，362mmol)加入到热的(50℃)2-氟-5-硝基苄腈(30g，181mmol)的EtOH(500mL)溶液中。将混合物在回流下加热4小时，然后冷却至室温，由此产物从溶液中沉淀出来。浓缩滤液，使残余物在EtOAc与饱和氯化铵溶液之间分配。分离有机相，经硫酸镁干燥，浓缩，得到进一步的产物。合并产物(32.2g，quant.)，无需进一步纯化即可进行下一步。

实施例14

3-氨基-5-硝基吲唑-1-羧酸叔丁基酯：在室温氮下，将二甲氨基吡啶(4g，36mmol)加入到5-硝基-1H-吲唑-3-基胺(32.2g，181mmol)、二碳酸二叔丁基酯(39.4g，181mmol)与三乙胺(25mL，181mmol)的THF(1L)溶液中。搅拌30分钟后，浓缩反应混合物，使残余物在EtOAc与饱和氯化铵溶液之间分配。分离各层，将有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，浓缩为橙色固体。从乙酸乙酯中重结晶，得到标题化合物，为黄色固体(25g，50％)。¹H NMR(400MHz，DMSO)1.60(9H，s)，6.75(2H，brs)，8.10(1H，d)，8.36(1H，d)，8.96(1H，s)；MS(ES-)m/e＝277.

实施例15

3，5-二氨基-吲唑-1-羧酸叔丁基酯：将3-氨基-5-硝基吲唑-1-羧酸叔丁基酯(3g，10.8mmol)溶于MeOH(50mL)，使溶液脱气(3x交替的真空/氮净化)。加入披钯碳10％w/w(300mg)，用氢代替氮气氛。3小时后，通过C盐

垫过滤混合物，浓缩滤液，得到标题化合物，为高粘性的油(2.17g，81％)。¹H NMR(400MHz，DMSO)1.55(9H，s)，5.07(2H，brs)，6.04(2H，brs)，6.79-6.82(2H，m)，7.62(1H，brs).MS(ES+)m/e＝249.

实施例16

3-氨基-5-[4-叔丁氧羰基氨基-2-(3，4-二氯-苯基)-丁酰氨基]-吲唑-1-羧酸叔丁基酯：在0℃下，向搅拌着的3，5-二氨基吲唑-1-羧酸叔丁基酯(2.17g，8.75mmol)、PyBroP(4.1g，8.75mmol)与4-叔丁氧羰基氨基-2-(3，4-二氯-苯基)-丁酸(3g，8.75mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液加入二异丙基乙胺(3.0mL，17.5mmol)。使所得混合物历经4小时温热至室温，然后浓缩，使残余物在EtOAc与氯化铵(饱和水溶液)之间分配。分离有机相，用碳酸氢钠(饱和水溶液)洗涤，然后干燥(硫酸钠)，浓缩为褐色泡沫。经过柱色谱纯化(二氧化硅，20％石油醚-EtOAc)，得到标题化合物，为浅褐色固体(2.92g，58％)；¹H NMR(400MHz，DMSO)1.36(9H，s)，1.56(9H，s)，1.80-1.90(1H，m)，2.10-2.20(1H，m)，2.89(2H，m)，6.29(2H，brs)，6.87(1H，t)，7.38(1H，d)，7.45(1H，d)，7.61-7.65(2H，m)，7.90(1H，m)，8.19(1H，s)，10.30(1H，s)；MS(ES+)m/e＝578.

实施例17

3-(3-氯苯甲酰氨基)-5-硝基吲唑-1-羧酸叔丁基酯：在氮下，将3-氨基-5-硝基吲唑-1-羧酸叔丁基酯(600mg，2mmol)溶于无水吡啶(15mL)。将溶液在冰浴上冷却，加入3-氯苯甲酰氯(0.3mL，2mmol)。6小时后，将混合物用EtOAc稀释，用1M盐酸溶液(x3)和盐水洗涤，然后经硫酸镁干燥，浓缩为固体。经过柱色谱纯化(二氧化硅，7∶3汽油-EtOAc)，得到标题化合物，为固体(300mg，39％)；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)1.77(9H，s)，7.52(1H，t)，7.62(1H，d)，7.90(1H，d)，8.07(1H，m)，8.32(1H，d)，8.45(1H，d)，9.22(1H，brs)，9.32(1H，s)；MS(ES+)m/e＝417.

实施例18

(5-硝基-1H-吲唑-3-基)-苯基胺：将2-氟-5-硝基-N-苯基苯甲酰胺(100mg，0.38mmol)悬浮在EtOH(10mL)中，将混合物加热至50℃。向所得溶液加入一水合肼(0.1mL，1.9mmol)。将混合物在回流下加热30分钟，此时LC-MS显示完全转化为芳基肼(ES+m/e＝273)。使混合物冷却至室温，浓缩，使残余物在EtOAc与饱和氯化铵溶液之间分配。分离各层，将有机相经硫酸钠干燥，浓缩为黄色泡沫。将残余物溶于磷酰氯(5mL)，将混合物在90℃下加热30分钟，然后冷却至室温，搅拌过夜。浓缩反应混合物，使残余物在EtOAc与饱和碳酸氢钠之间分配。将有机相经硫酸钠干燥，浓缩，得到标题化合物，为红色固体(80mg，83％)；¹H NMR(400MHz，DMSO)6.88(1H，t)，7.31(2H，t)，7.51(1H，d)，7.74(2H，t)，8.17(1H，dd)，9.24(1H，s)，9.42(1H，s)，12.74(1H，s)；MS(ES+)m/e＝255.

实施例19

N-(3-氰基-苯基)-2-氟-5-硝基-硫代苯甲酰胺：向N-(3-氰基-苯基)-2-氟-5-硝基-苯甲酰胺(10.0g；0.035mol)的甲苯(100mL)溶液加入Lawson试剂(7.84g；0.019mol)，将溶液回流16小时。在真空中浓缩反应混合物，经过快速色谱纯化，用30％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到标题化合物，为黄色固体(8.56g；81％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ_H7.60-7.75(2H，m)，7.80(1H，m)，8.15(1H，d)，8.40-8.50(1H，m)，8.50(1H，s)，8.50-8.55(1H，m)，12.45(1H，br).质谱(ES-)m/e＝300.22.

实施例20

3-(5-硝基-1H-吲唑-3-基氨基)-苄腈：向N-(3-氰基-苯基)-2-氟-5-硝基-硫代苯甲酰胺(8.56g；0.028mol)的正丁醇(300mL)溶液加入水合肼(2.54mL；0.053mol)，将溶液回流3小时。在真空中浓缩反应混合物，用热乙醇研制，得到标题化合物，为红色固体(4.93g；62％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ_H 7.30(1H，d)，7.45-7.60(2H，m)，7.90(1H，d)，8.20(1H，d)，8.25(1H，s)，9.20(1H，s)，9.85(1H，s).质谱(ES-)m/e＝278.28.

实施例21

3-氯-5-硝基吲唑：将5-硝基吲唑(5g，30.7mmol)悬浮在冰AcOH(150mL)中，将混合物加热至50℃。加入N-氯琥珀酰亚胺(4.9g，36.8mmol)，将混合物在回流下(形成溶液)加热1小时。浓缩反应混合物，在EtOAc与盐水之间分配。将有机相用饱和碳酸氢钠洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩为黄色固体。从EtOH中重结晶，得到标题化合物，为淡黄色固体(2.63g，43％)；¹H NMR(400MHz，DMSO)δ7.73(1H，d)，8.21(1H，dd)，8.51(1H，d)，13.97(1H，brs)；MS(ES-)m/e＝196.

实施例22

3-溴-5-硝基吲唑：将5-硝基吲唑(10g，61.3mmol)溶于乙酸(170mL)，将混合物加热至80℃。缓慢加入溴(3.1mL，60.7mmol)，将混合物加热至回流。2小时后，使反应混合物冷却至室温，滤出所得沉淀。浓缩滤液，使残余物在氯仿与饱和碳酸氢钠溶液之间分配，分离有机相，经硫酸钠干燥，分离到额外的产物。浓缩，得到固体，与最初的沉淀合并，得到标题化合物，为黄色固体(11.4g，77％)。¹H NMRδ7.74(1H，d)，8.21(1H，dd)，8.40(1H，d)，14.06(1H，brs)；MS(ES-)m/e＝240.

实施例23

3-碘-5-硝基-1H-吲唑：向5-硝基-1H-吲唑(10.0g，62.3mmol)的DMF(120mL)溶液加入氢氧化钾(12.9g，230.4mmol)，继之以历经5分钟逐批加入碘(31.1g，122.6mmol)。将所得混合物在室温下搅拌14小时，然后倒在10％焦亚硫酸钠(100mL)上，用乙酸乙酯萃取(3×50mL)。合并有机萃取液，用盐水(50mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，在真空中浓缩，得到标题化合物，为淡橙色固体(17.5g)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ7.77(1H，d)，8.26(1H，d)，8.34(1H，s)，14.15(1H，s).MS(ES+)m/e＝290.

实施例24

5-硝基-3-(三甲代甲硅烷基乙炔基)-吲唑-1-羧酸叔丁基酯：在氮下，将3-溴-5-硝基-吲唑-1-羧酸叔丁基酯(2g，5.8mmol)溶于无水DMF(30mL)，加入三乙胺(1.6mL，1.6mmol)。加入碘化铜(20mg，0.12mmol)、三甲代甲硅烷基乙炔(2.5mL，17.4mmol)、二氯化双三苯膦钯(84mg，0.12mmol)和另外1.6mL三乙胺，将混合物在50℃下加热过夜。使反应混合物冷却至室温，浓缩。将残余物溶于EtOAc，通过C盐

塞过滤。将滤液用饱和氯化铵溶液洗涤，经硫酸钠干燥，然后浓缩，得到黑色泡沫。经过色谱纯化(二氧化硅，1∶1汽油-EtOAc)，得到标题化合物，为黑色固体(940mg，45％)；MS(ES+)m/e＝360.

实施例25

3-碘-1-(2-甲氧基乙氧基甲基)-5-硝基-1H-吲唑：向3-碘-5-硝基-1H-吲唑(10.0g，34.6mmol)的THF(50mL)溶液加入双(三甲代甲硅烷基)氨基化钠(1M THF溶液，48.4mmol，48.4mL)，将溶液在室温下搅拌20分钟。加入2-甲氧基乙氧基甲基氯(4.9g，39.1mmol，4.5mL)，将溶液在室温下搅拌15小时。将反应用氯化铵(30mL，饱和水溶液)猝灭，用乙酸乙酯萃取(3×50mL)。合并有机萃取液，干燥(Na₂SO₄)，在真空中浓缩。所得残余物经过硅胶快速柱色谱纯化(1∶1EtOAc∶己烷)，得到标题化合物，为橙色固体(6.0g)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ3.35(3H，s)，3.50-3.52(2H，m)，3.68-3.70(2H，m)，5.86(1H，s)，7.69(1H，d)，8.38(1H，d)，8.53(1H，s).MS(ES+)m/e＝378.

实施例26

3-碘-1-(2-甲氧基乙氧基甲基)-5-硝基-3-苯基-1H-吲唑：向3-碘-1-(2-甲氧基乙氧基甲基)-5-硝基-1H-吲唑(0.50g，1.32mmol)、苯基代硼酸(0.22g，1.80mmol)、磷酸钾(1.26g，5.94mmol)与1，1′-双(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)-二氯甲烷配合物(0.15g，0.18mmol)的混合物加入无水二甲氧基乙烷(8.0mL)，在85℃下加热18小时。加入氯化铵溶液(30mL，饱和水溶液)，用乙酸乙酯萃取(3×30mL)。合并有机萃取液，干燥(Na₂SO₄)，在真空中浓缩。残余物经过硅胶快速柱色谱纯化(含3％MeOH的DCM)，得到标题化合物，为黄色固体(0.35g，81％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ3.37(3H，s)，3.51-3.53(2H，m)，3.73-3.75(2H，m)，5.93(1H，s)，7.50-7.54(1H，m)，7.57-7.61(2H，m)，7.73(1H，d)，7.98(2H，dd)，8.37(1H，dd)，9.00(1H，s).

实施例27

7-氯-5-硝基-1H-吲唑：向2-氯-6-甲基-4-硝基苯胺(5.49g，29.4mmol)的乙酸(150mL)溶液加入预溶于水(5ml)的亚硝酸钠(2.03g，29.4mmol)的水(5mL)溶液。将所得褐色浆液在室温下搅拌过夜，然后在60℃下搅拌另外4小时。借助真空蒸发除去大部分溶剂，将所得黑色残余物重新溶于EtOAc(100mL)，用盐水洗涤(2×70mL)。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤，浓缩，得到原料与产物91mg的混合物(1.49g)。粗混合物直接用于下一步。¹H NMR(400MHz，DMSO)δ8.25(1H，s)，8.50(1H，s)，8.85(1H，s)，14.30(1H，br s).MS(ES+)：m/e＝198(减去Boc).

实施例28

3-甲基-5-硝基-联苯-2-基胺：将2-溴-6-甲基-4-硝基苯胺(100mg，0.43mmol)、苯基代硼酸(81mg，0.66mmol)、2M Na₂CO₃(aq)(660μL)、Pd(PPh₃)₄(4mg，0.0033mmol)在含有1.0∶1.3 EtOH/H₂O(1.4mL)的DME(2.4mL)中的混合物置于微波试管中，脱气5分钟。然后将试管密封，在110℃下用微波(CEM Discover)照射20分钟。将粗反应混合物用二氯甲烷(10mL)稀释，用饱和NaHCO₃溶液洗涤(3×20mL)。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤，在真空中浓缩，得到粗的固体，然后经过快速色谱进一步纯化(100％二氯甲烷)，得到所需纯产物(91mg)，为浅黄色固体。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ2.25(3H，s)，4.42(2H，br s)，7.39(3H，m)，7.50(2H，m)，7.97(1H，s)，8.12(1H，s).MS(ES+)：m/e＝229，(ES-)：m/e＝227.

实施例29

5-硝基-7-苯基-1H-吲唑：向3-甲基-5-硝基-联苯-2-基胺(91mg，0.39mmol)在预先加热的冰乙酸(4mL)中的溶液以逐滴方式加入0.44M亚硝酸钠溶液(1mL)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。在真空中浓缩粗产物，将残余物重新溶于EtOAc(20mL)，用饱和NaHCO₃(2×20mL)和盐水(1×20mL)洗涤。分离有机层，干燥(MgSO₄)，过滤，在真空中浓缩，得到所需产物(67mg)，为黄色粉末。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.50(1H，m)，7.58(2H，m)，7.69(2H，m)，8.33(2H，m)，8.75(1H，s)，10.55(br s).MS(ES+)：m/e＝240，(ES-)：m/e＝238.

实施例30

2-(3-氯-2，6-二氟苯基)-3-氰基丙酸甲基酯：在0℃氮下，将丁基锂(4.1mL 2.5M己烷溶液，10.3mmol)加入到二异丙胺(1.4mL，10.3mmol)的THF(15mL)溶液中。15分钟后，将反应混合物冷却至-78℃，加入3-氯-2，6-二氟苯基乙酸甲基酯(2.15g，9.8mm0l)的THF(15mL)溶液。30分钟后，向反应混合物迅速加入碘乙腈(3.5mL，49mmol)。使反应混合物温热至0℃，加入氯化铵溶液(10mL，饱和水溶液)。浓缩反应混合物，使残余物在EtOAc与盐水之间分配。水相用EtOAc萃取，合并有机相，经硫酸镁干燥，然后浓缩，得到黑色的油。粗产物经过柱色谱纯化(二氧化硅，25％EtOAc-汽油至EtOAc)，得到标题化合物，为淡黄色油(1.51g，59％)；¹H NMR(400MHz，DMSO)δ3.06(1H，dd)，3.19(1H，dd)，3.67(3H，s)，4.64(1H，dd)，7.29(1H，t)，7.70(1H，m).

实施例31

4-氨基-2-(3-氯-2，6-二氟苯基)-丁酸甲基酯盐酸盐：在氮下，向2-(3-氯-2，6-二氟苯基)-3-氰基丙酸甲基酯(784mg，3.0mmol)与浓盐酸(0.63mL，7.55mmol)的MeOH(5mL)溶液加入二氧化铂(69mg，0.3mmol)。将反应混合物脱气(5x真空循环)，用氢代替氮气氛(5x真空循环)。将混合物搅拌3.5小时，然后通过C盐垫过滤，用MeOH洗涤。浓缩滤液，无需进一步纯化即可用于下一步。

实施例32

4-叔丁基羰基氨基-2-(3-氯-2，6-二氟苯基)-丁酸：将4-氨基-2-(3-氯-2，6-二氟苯基)-丁酸甲基酯盐酸盐(685mg，2.28mmol)溶于8M盐酸溶液(10mL)，将混合物在回流下加热过夜。使混合物冷却至室温，然后浓缩。将残余物溶于碳酸氢钠(1.2g，11.4mmol)的水(15mL)溶液，加入THF(15mL)。将混合物冷却至0℃，加入二碳酸二叔丁基酯(648mg，2.97mmol)。使反应混合物温热至室温，搅拌5.5小时，然后浓缩。用水稀释后，混合物用乙醚萃取，然后将水相用2M HCl酸化至pH 4.5。经过酸化的水相用EtOAc萃取(x3)，合并萃取液，干燥(硫酸镁)，浓缩，残余物经过色谱纯化(二氧化硅，5％MeOH-DCM)，得到标题化合物，为蜡(512mg，两步收率65％)；MS(ES-)m/e＝348.

实施例33

2-(2，4-二氯苯基)-戊烷二酸5-叔丁基酯1-甲基酯：在0℃氮下，将叔丁醇钾(767mg，6.85mmol)加入到3，4-二氯苯基乙酸甲基酯(15g，68mmol)的THF(100mL)溶液中。15分钟后，将所得黄色溶液冷却至-78℃，历经10分钟加入丙烯酸叔丁基酯(11.0mL，75mmol)。使反应混合物达到室温，搅拌过夜。将混合物浓缩，在EtOAc与饱和氯化铵溶液之间分配。水相用EtOAc萃取，合并有机相，用盐水洗涤，干燥(硫酸镁)，浓缩为黄色的油。经过柱色谱纯化(二氧化硅，5％乙醚-汽油)，得到标题化合物，为淡黄色油(15.5g，65％)。

实施例34

4-叔丁氧羰基氨基-2-(3，4-二氯苯基)-丁酸甲基酯：在0℃氮下，将2-(2，4-二氯苯基)-戊烷二酸5-叔丁基酯1-甲基酯(13g，45mmol)溶于甲苯(130mL)。加入叠氮化二苯基磷酰(10.6mL，49mmol)和三乙胺(6.8mL，49mmol)，使混合物历经3小时温热至室温。另外2小时后，浓缩反应混合物，将残余物溶于EtOAc。将有机相用1w/w％柠檬酸溶液和盐水洗涤，然后经硫酸镁干燥。在30℃下浓缩，得到酰基叠氮化物，为黄色的油，立即在室温下溶于叔丁醇(130mL)。加入四氯化锡(0.31mL，2.68mmol)，将混合物在80℃下加热45分钟，在此期间有氮气放出。一旦冷却至室温，加入饱和碳酸氢钠溶液(30mL)，浓缩反应混合物。残余物用EtOAc萃取(x3)，合并萃取液，用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，浓缩为黄色的油。经过柱色谱纯化(二氧化硅，20％EtOAc-汽油)，得到标题化合物，为无色的油(12.8g，79％)；MS(ES-)m/e＝360.

实施例35

4-叔丁氧羰基氨基-2-(3，4-二氯苯基)-丁酸：在0℃下，向4-叔丁氧羰基氨基-2-(3，4-二氯苯基)-丁酸甲基酯(12.3g，34mmol)的THF(80mL)/水(20mL)溶液加入氢氧化锂(1.63g，68mmol)。使反应混合物温热至室温，搅拌过夜。浓缩反应混合物，残余物用水稀释。用EtOAc萃取后，向水相加入2M盐酸水溶液酸化至pH 5。水相用EtOAc萃取，萃取液经硫酸镁干燥。浓缩得到标题化合物，为淡褐色泡沫(11.54g，98％)；¹H NMR(400MHz，DMSO)δ1.35(9H，s)，1.74-1.81(1H，m)，2.03-2.10(1H，m)，2.81(2H，m)，3.61(1H，t)，6.86(1H，m)，7.28(1H，dd)，7.54(1H，dd)，7.59(1H，d)，12.60(1H，brs)；MS(ES-)m/e＝346.

实施例36

(3，4-二氯-苯基)-琥珀酸4-叔丁基酯1-甲基酯：在0℃下，将2.5M正丁基锂的己烷溶液(37.5mL，0.094mol)以逐滴方式加入到二异丙胺(14.45mL，0.103mol)的四氢呋喃(300mL)溶液中。将溶液在0℃下搅拌20分钟。然后将混合物冷却至-70℃，经由套管滴加(3，4-二氯-苯基)-乙酸甲基酯(20.54g，0.094mol)的四氢呋喃(50mL)溶液。将反应混合物在-70℃下搅拌30分钟。此后，以逐滴方式加入溴乙酸叔丁基酯(45.42mL，0.281mol)。除去冷却浴，使反应混合物温热至室温。将反应混合物用饱和NH₄Cl溶液(100mL)猝灭。在真空中部分除去THF，混合物用EtOAc萃取(3×200mL)。合并有机萃取液，用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，在真空中浓缩。粗混合物经过硅胶柱色谱纯化，使用汽油∶乙醚(9∶1)作为洗脱剂，得到标题化合物，收率92％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ1.34(9H，s)，2.65(1H，dd)，2.98(1H，dd)，3.60(3H，s)，4.08(1H，m)，7.31(1H，m)，7.58-7.62(2H，m)；MS(ES+)：m/e＝333.2(5％)；MS(ES-)：m/e＝331.2(100％)，333.2(65％)，335.2(10％).

实施例37

2-(3，4-二氯-苯基)-琥珀酸1-甲基酯：将三氟乙酸(100mL)加入到2-(3，4-二氯-苯基)-琥珀酸4-叔丁基酯1-甲基酯(23.64g，0.071mol)与二氯甲烷(100mL)的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌3小时，然后在真空中浓缩。将粗混合物在真空下保持若干小时，然后无需进一步纯化即可用于下一步。NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ2.66(1H，dd)，3.01(1H，dd)，3.59(3H，s)，4.08(1H，m)，7.30(1H，m)，7.56-7.61(2H，m)；MS(ES+)：m/e＝277.1(100％)，279.1(65％)，281.0(10％)；MS(ES-)：m/e＝275.1(50％)，277.1(30％)，279.1(5％).

实施例38

3-叔丁氧羰基氨基-2-(3，4-二氯-苯基)-丙酸甲基酯：在0℃下，向2-(3，4-二氯-苯基)-琥珀酸1-甲基酯(0.071mol)的甲苯(200mL)溶液连续加入叠氮化二苯基磷酰(16.82mL，0.078mol)和三乙胺(14.83mL，0.106mol)。将混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物用1％柠檬酸(100mL)稀释，用EtOAc萃取(3×150mL)。合并有机萃取液，用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，在真空中浓缩。将所得油溶于叔丁醇(200mL)。加入氯化锡(IV)(0.5mL，0.004mol)，将混合起加热至80℃达1小时(N₂放出)。将反应混合物冷却至室温，用饱和NaHCO₃溶液猝灭。在真空中除去叔丁醇，混合物用EtOAc萃取(3×150mL)。合并有机萃取液，用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，在真空中浓缩。粗混合物经过硅胶柱色谱纯化，使用汽油∶EtOAc(9∶1)作为洗脱剂，得到标题化合物(17.35g)，收率70％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ1.31(9H，s)，3.25-3.40(1H，m)，3.41-3.52(1H，m)，3.61(3H，s)，3.90(1H，t)，6.95(1H，t)，7.26(1H，m)，7.52(1H，s)，7.60(1H，d)；MS(ES+)：m/e＝348.2(7％)；MS(ES-)：m/e＝457.2(100％)，459.2(70％)，461.2(15％).

实施例39

3-叔丁氧羰基氨基-2-(3，4-二氯-苯基)-丙酸：向3-叔丁氧羰基氨基-2-(3，4-二氯-苯基)-丙酸甲基酯(17.11g，0.049mol)的四氢呋喃-水(各200mL)溶液加入氢氧化锂(1.18g，0.049mol)。将反应混合物在室温下搅拌6小时。在真空中除去THF，用2M盐酸调节pH至pH 4。水相用EtOAc萃取(3×100mL)。合并有机相，干燥(MgSO₄)，在真空中浓缩。得到标题化合物，为泡沫，收率89％(14.67g)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ1.30(9H，s)，3.22-3.35(1H，m)，3.35-3.50(1H，m)，3.76(1H，t)，6.84(1H，t)，7.24(1H，m)，7.48(1H，s)，7.58(1H，d)，12.85(1H，s)；MS(ES+)：m/e＝334.2(8％)；MS(ES-)：m/e＝332.2(100％)，334.1(65％)，336.1(10％).

实施例40

我们已经制备了其他式I化合物，方法基本上与实施例1至39所述那些相似。这些化合物的特征数据总结在下表5中，包括HPLC、LC/MS(观测)和¹H NMR数据。

¹H NMR数据总结在下表5中，其中¹H NMR数据是在400MHz下、在氘代DMSO中获得的，另有指示除外，并且发现与结构一致。化合物编号对应于表1中所列举的化合物编号。

表5：所选择的式I化合物的特征数据

实施例41

我们已经制备了其他式I化合物，方法基本上与实施例1至39所述那些和一般合成流程I-XV相似。这些化合物的特征数据总结在下表6中，包括HPLC、LC/MS(观测)、IR和¹H NMR数据。

¹H NMR数据总结在下表6中，其中¹H NMR数据是在400MHz下、在氘代DMSO中获得的，另有指示除外，并且发现与结构一致。化合物编号对应于表1中所列举的化合物编号。

表6：所选择的式I化合物的特征数据

实施例42

我们已经制备了其他式I化合物，方法基本上与实施例1至39所述那些和一般合成流程I-VII相似。这些化合物的特征数据总结在下表7中，包括HPLC、LC/MS(观测)、IR和¹H NMR数据。

¹H NMR数据总结在下表7中，其中¹H NMR数据是在400MHz下、在氘代DMSO中获得的，另有指示除外，并且发现与结构一致。化合物编号对应于表1中所列举的化合物编号。

表7：所选择的式I化合物的特征数据

实施例43

AKT-3抑制测定法

利用标准的偶联酶测定法，根据抑制AKT的能力筛选化合物(Foxet al.，Protein Sci.，(1998)7，2249)。测定是在100mM HEPES 7.5、10mM MgCl₂、25mM NaCl、1mM DTT与3％DMSO的混合物中进行的。测定中的最终底物浓度为170μM ATP(Sigma Chemicals)和200μM肽(RPRAATF，American Peptide，Sunnyvale，CA)。测定是在30℃和45nM AKT下进行的。偶联酶系统组分的最终浓度为2.5mM磷酸烯醇丙酮酸、300μM NADH、30μM/mL丙酮酸激酶和10μg/mL乳酸脱氢酶。

制备测定储备缓冲溶液，含有上面所列举的全部试剂，AKT、DTT和目的供试化合物除外。将55μL储备溶液置于96孔平板中，继之以加入含有供试化合物的2μL 1mM DMSO储备溶液(最终化合物浓度为30μM)。将平板在30℃下预培育约10分钟，加入10μL酶(最终浓度为45nM)和1mM DTT引发反应。利用Molecular DevicesSpectraMax Plus平板读数器获得反应速率，读取时间15分钟，温度30℃。将相对于含有测定混合物和DMSO而没有供试化合物的标准孔而言显示50％以上抑制作用的化合物进行滴定，以测定IC₅₀值。

下列化合物显示对Akt-3具有小于1μM之间的K_i值(化合物编号对应于表1所列举的化合物编号)：I-59、I-60、I-61、I-62、I-64、I-67、I-70、I-73、I-74、I-97至I-106、I-108至I-110、I-112、I-115至I-122、I-124至I-127、I-129至I-136、I-138至I-141、I-141至I-145、I-147、I-149、I-153、I-155、I-160至I-175、I-177至I-189、I-193至I-210、I-212至I-227、I-231至I-234、I-242、I-243、I-245、I-247、I-251至I-254、I-256至1-258、I-1005、I-1006、I-1014、I-1022、I-1043至I-1047、I-1049和I-1054。

下列化合物显示对AKT-3具有1.0至10.0μM的K_i值(化合物编号对应于表1所列举的化合物编号)：I-5、I-16、I-35、I-40、I-43、I-48至I-51、I-53至I-56、I-58、I-63、I-68、I-71、I-72、I-76、I-77、I-78、I-83、I-85、I-107、I-111、I-113、I-114、I-123、I-128、I-137、I-142、I-150至I-152、I-154、I-156至I-159、I-176、I-191、I-192、I-235、I-236、I-241、I-250、I-255、I-259、I-1017、I-1018、I-1023、I-1028、I-1038、I-1039、I-1041、I-1048、I-1050至I-1052、I-1055和I-1056。

下列化合物显示对AKT-3具有10.0至20.0μM之间的K_i值(化合物编号对应于表1所列举的化合物编号)：I-2、I-37、I-52、I-65、I-66、I-79、I-82、I-94、I-95、I-146、I-190、I-1040、I-1053和I-1057。

实施例44

PDK-1抑制测定法

利用放射性磷酸盐结合测定法，根据抑制PDK-1的能力筛选化合物(Pitt and Lee，J.Biomol.Screen.，(1996)1，47)。测定是在100mMHEPES(pH 7.5)、10mM MgCl₂、25mM NaCl、2mM DTT的混合物中进行的。测定中的最终底物浓度为40μM ATP(Sigma Chemicals)和65μM肽(PDKtide，Upstate，Lake Placid，NY)。测定是在30℃和25nMPDK-1下进行的，并且在～27.5nCi/μL[γ-³²P]ATP(AmershamPharmacia Biotech，Amersham，UK)的存在下。制备测定储备缓冲溶液，含有上面所列举的全部试剂，ATP和目的供试化合物除外。将15μL储备溶液置于96孔平板中，继之以加入含有供试化合物的1μL 0.5mMDMSO储备溶液(最终化合物浓度为25μM，最终DMSO浓度为5％)。将平板在30℃下预培育约10分钟，加入4μL ATP(最终浓度为40μM)引发反应。

10分钟后加入100μL 100mM磷酸、0.01％吐温-20终止反应。将磷酸纤维素96孔平板(Millipore，Cat no.MAPHNOB50)用100μL100mM磷酸、0.01％吐温-20预处理，然后加入反应混合物(100μL)。使斑点浸泡至少5分钟，然后洗涤(4×200μL 100mM磷酸，0.01％吐温-20)。干燥后，向小孔加入20μL Optiphase“SuperMix”液体闪烁鸡尾酒试剂(Perkin Elmer)，然后进行闪烁计数(1450Microbeta LiquidScintillation Counter，Wallac)。

将相对于含有测定混合物和DMSO而没有供试化合物的标准孔而言显示50％以上抑制作用的化合物进行滴定，以测定IC₅₀值。

下列化合物显示对PDK-1具有小于1μM的K_i值(化合物编号对应于表1所列举的化合物编号)：I-100、I-106、I-109、I-110、I-117、I-119、I-120、I-121、I-123、I-125、I-126、I-127、I-130、I-132、I-136、I-138、I-139、I-141、I-162、I-165、I-167、I-168、I-169、I-171、I-172、I-173、I-174、I-179、I-181、I-182、I-189、I-193、I-194、I-195、I-197、I-198、I-206、I-207、I-230、I-231、I-234至I-238、I-240、I-241、I-242、I-248至I-251、I-253、I-259至I-265、I-272、I-1006、I-1022、I-1023、I-1026、I-1027、I-1028、I-1032、I-1034、I-1035、I-1041、I-1043至I-1046、I-1048、I-1049、I-1052、I-1053、I-1056和I-1057。

下列化合物显示对PDK-1具有1μM至3μM之间的K_i值(化合物编号对应于表1所列举的化合物编号)：I-98、I-101、I-107、I-112、I-115、I-118、I-122、I-124、I-129、I-137、I-140、I-147、I-158、I-160、I-164、I-166、I-170、I-175、I-176、I-177、I-180、I-185、I-186、I-187、I-188、I-199、I-108、I-212、I-213、I-225、I-228、I-233、I-239、I-1000、I-1005、I-1007、I-1018、I-1036、I-1038、I-1040、I-1054和I-1055。

下列化合物显示对PDK-1具有大于3μM的K_i值(化合物编号对应于表1所列举的化合物编号)：I-16、I-33、I-54、I-99、I-102、I-105、I-111、I-113、I-114、I-128、I-131、I-133、I-134、I-135、I-142、I-145、I-148、I-150、I-153、I-154、I-155、I-156、I-159、I-161、I-163、I-178、I-183、I-184、I-190、I-191、I-196、I-200、I-201至I-204、I-222、I-226、I-227、I-229、I-232、I-233、I-247、I-254、I-257、I-258、I-1000、I-1014至I-1021、I-1024、I-1025、I-1029、I-1030、I-1031、I-1033、I-1037、I-1039、I-1039、I-1042、I-1047、I-1050、I-1051和I-1054。

实施例45

ROCK抑制测定法

利用标准的偶联酶测定法，根据抑制ROCK的能力筛选化合物(Fox et al.(1998)，Protein Sci.，7，2249)。反应是在100mM HEPES pH7.5、10mM MgCl₂、25mM NaCl、1mM DTT与1.5％DMSO的混合物中进行的。测定中的最终底物浓度为13μM ATP(Sigma Chemicals)和200μM肽(KKRNRTLSV，American Peptide，Sunnyvale，CA)。测定是在30℃和200nM ROCK下进行的。偶联酶系统组分的最终浓度为2.5mM磷酸烯醇丙酮酸、400μM NADH、30μg/mL丙酮酸激酶和10μg/mL乳酸脱氢酶。

制备测定储备缓冲溶液，含有上面所列举的全部试剂，ROCK、DTT和目的供试化合物除外。将56μL供试反应物置于384孔平板中，继之以加入含有供试化合物的1μL 2mM DMSO储备溶液(最终化合物浓度为30μM)。将平板在30℃下预培育约10分钟，加入10μL酶(最终浓度为100nM)引发反应。利用BioRad Ultramark平板读数器(Hercules，CA)获得反应速率，读取时间5分钟，温度30℃。将相对于含有DMSO而没有化合物的标准孔而言显示＞50％抑制作用的化合物进行滴定，利用相似方案测定IC₅₀值。

下列化合物显示对ROCK具有小于1μM的K_i值(化合物编号对应于表1所列举的化合物编号)：I-5、I-6、I-8、I-20、I-25、I-35、I-54、I-69、I-98、I-99、I-100、I-103至I-107、I-109、I-110、I-120、I-123、I-125、I-126、I-129、I-132、I-137、I-136、I-141、I-142、I-144、I-145、I-153、I-1002、I-1005、I-1006、I-1007、I-1008和I-1018。

下列化合物显示对ROCK具有1μM至3μM之间的K_i值(化合物编号对应于表1所列举的化合物编号)：I-4、I-7、I-9、I-24、I-26、I-27、I-31至I-34、I-38和I-41。

下列化合物显示对ROCK具有大于3μM的K_i值(化合物编号对应于表1所列举的化合物编号)：I-12、I-13、I-15、I-16、I-23、I-28、I-29、I-30、I-102、I-118、I-139、I-140、I-1003、I-1014和I-1019。

实施例46

PKA抑制测定法

利用标准的偶联酶测定法，根据抑制PKA的能力筛选化合物(Foxet al.(1998)，Protein Sci.，7，2249)。反应是在100mM HEPES 7.5、10mM MgCl₂、25mM NaCl、1mM DTT与3％DMSO的混合物中进行的。测定中的最终底物浓度为50μM ATP(Sigma Chemicals)和80μM肽(Kemptide，American Peptide，Sunnyvale，CA)。测定是在30℃和18nM PKA下进行的。偶联酶系统组分的最终浓度为2.5mM磷酸烯醇丙酮酸、300μM NADH、30μg/mL丙酮酸激酶和10μg/mL乳酸脱氢酶。

制备测定储备缓冲溶液，含有上面所列举的全部试剂，ATP和目的供试化合物除外。将55μL储备溶液置于96孔平板中，继之以加入含有供试化合物系列稀释液的2μL DMSO储备溶液(通常开始于5μM的最终浓度)。将平板在30℃下预培育约10分钟，加入5μLATP(最终浓度为50μM)引发反应。利用Molecular Devices SpectraMax Plus平板读数器测定最初反应速率，读取时间15分钟。利用Prism软件包，从非线性回归分析计算IC₅₀和K_i数据(GraphPad Prism version 3.0afor Macintosh，GraphPad Software，San Diego California，USA)。

下列化合物显示对PKA具有小于1μM的K_i值(化合物编号对应于表1所列举的化合物编号)：I-2、I-35、I-40、I-43、I-48、I-51、I-52、I-54、I-55、I-56、I-59、I60、I-67、I-69、I-73、I-76至I-78、I-85、I-93、I-97、I-98至I-110、I-113、I-116至I-136、I-138至I-141、I-143至I-145、I-147、I-149、I-153、I-155至I-169、I-172、I-174、I-175、I-177至I-189、I-193至I-201、I-203至I-210、I-226、I-227、I-230至I-237、I-240、I-242至I-247、I-249、I-252、I-254、I-260、I-261、I-263、I-1006、I-1022、I-1023、I-1026、I-1028、I-1033、I-1034、I-1039、I-1041、I-1043和I-1044。

下列化合物显示对PKA具有1μM至5μM的K_i值(化合物编号对应于表1所列举的化合物编号)：I-6、I-24、I-84、I-92、I-202和I-1053。

实施例47

p70S6K抑制测定法

在Upstate Biotechnology利用放射性磷酸盐结合测定法，根据抑制p70S6K的能力筛选化合物(Pitt and Lee，J.Biomol.Screen.，(1996)1，47)。测定是在8mM MOPS(pH 7.0)、10mM乙酸镁、0.2mM EDTA的混合物中进行的。测定中的最终底物浓度为15μM ATP(SigmaChemicals)和100μM肽(KKRNRTLTV，Upstate Ltd.，Dundee，UK)。测定是在30℃下进行的，并且在p70S6K(5-10mU，Upstate Ltd.，Dundee，UK)和[γ-³³P]ATP(比活性约500cpm/pmol，AmershamPharmacia Biotech，Amersham，UK)的存在下。制备测定储备缓冲溶液，含有上面所列举的全部试剂，ATP和目的供试化合物除外。将15μL储备溶液置于96孔平板中，继之以加入含有供试化合物的1μL40μM或8μM DMSO储备溶液，一式两份(最终化合物浓度分别为2μM或0.4μM，最终DMSO浓度为5％)。将平板在30℃下预培育约10分钟，加入4μL ATP(最终浓度为15μM)引发反应。

10分钟后加入5μL3％磷酸溶液终止反应。将磷酸纤维素96孔平板(Millipore，Cat no.MAPHNOB50)用100μL 100mM磷酸、0.01％吐温-20预处理，然后加入反应混合物(20μL)。使斑点浸泡至少5分钟，然后洗涤(4×200μL 100mM磷酸，0.01％吐温-20)。干燥后，向小孔加入20μL Optiphase“SuperMix”液体闪烁鸡尾酒试剂(Perkin Elmer)，然后进行闪烁计数(1450 Microbeta Liquid Scintillation Counter，Wallac)。

与含有测定混合物和DMSO而没有供试化合物的标准小孔比较p70S6K活性，计算化合物在2μM和0.4μM下的百分比抑制。

将相对标准孔而言显示高抑制作用的化合物进行滴定，以测定IC₅₀值。

尽管我们已经描述了本发明的大量实施方式，不过显然可以改变我们的基本实施例，以提供其他采用本发明化合物和方法的实施方式。因此，将被领会到的是本发明的范围是由权利要求所限定的，而不是仅代表实例的具体实施方式。

Claims

1.式I’化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制(a)患者或(b)生物样本中AKT、PKA、PDK1、p70S6K或ROCK激酶的药物中的用途：

其中：

R¹选自卤素、N(R⁴)₂、T-R或T’-Ar；

T选自价键或C_1-6亚烷基链，其中T的至多两个亚甲基单位可选地和独立地被-N(R)-、-N(R)C(O)-或-C(O)-代替；

T’是C_1-6亚烷基链，其中T’的至多两个亚甲基单位可选地和独立地被-N(R)-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-C(O)-或-SO₂-代替；

每个R独立地选自氢或可选被苯基取代的C_1-6脂族基团；

R²选自Q-Ar、或Q-C(R)(Q-Ar)R³，其中：

R和R³可选地构成6元饱和的环，所述环具有1个氮杂原子；

每个Q独立地选自价键或C_1-4亚烷基链；

每个Ar独立地是可选被取代的环，选自5-7元饱和或完全不饱和的单环，所述环具有0-1个独立选自氮、氧或硫的杂原子，或者9-10元部分不饱和或完全不饱和的二环，所述环具有0-2个独立选自氮或氧的杂原子；所述Ar可选地被下列取代基取代：卤素、CN、NO₂、R^o、OR^o、N(R^o)₂、S(C_1-6烷基)、S(卤代C_1-6烷基)、NHC(O)R、OCH₂(Ph)、氧代、苯基、-CH₂(Ph)、O(Ph)、CH₂-吗啉-4-基、CH₂哌啶-1-基、CH₂-咪唑-1-基、CH₂-哌嗪-1-基、SO₂(C_1-6烷基)、C(O)OR、C(O)NH₂、CO(C_1-6烷基)、四唑、或C(O)Ph；

R^o是H或C_1-6烷基，其中所述烷基可选被卤素取代；具有0-2个选自O、N或S的杂原子的5-6元杂环；或C_1-6脂族基团，其中所述C_1-6脂族基团可选被卤素、NH₂、NH(C_1-4脂族基团)、N(C_1-4脂族基团)₂、COOH或苯基取代；

R³选自R’、Ar¹、Q-OR⁵、Q-OC(O)R⁵、Q-CONHR⁵、Q-N(R⁴)₂、N(R)(Q-Ar)、N(R)C(O)Q-N(R⁴)₂或N(R)Q-N(R⁴)₂；

R’是可选被下列基团取代的C_1-6脂族基团：氧代、OR^o、N(OR^o)₂、CH₂(Ph)、或具有1-2个选自O、N或S的杂原子的5-6元杂环；

每个R⁴独立地选自R、COR⁵、CO₂R⁵、CON(R⁵)₂；

每个R⁵独立地选自R；

V¹选自氮或C(R⁶)；V²和V³为C(R⁶)；

每个R⁶独立地选自R、Ar¹或卤素；

每个Ar¹独立地选自可选被卤素取代的苯基；

其条件是：

若V¹、V²和V³各自是CH，R¹是氢，则R²是Q-C(R)(Q-Ar)R³，其中R³不是R’或Q-OC(O)R⁵。

2.根据权利要求1的用途，其中：

R¹选自卤素、N(R⁴)₂或可选被取代的C_1-6脂族基团；

R²选自Q-Ar，其中：

R和R³可选地构成6元饱和的环，所述环具有1个氮杂原子；

Ar是可选被取代的环，选自5-6元饱和或完全不饱和的单环，所述环具有0-1个独立选自氮、氧或硫的杂原子，或者9-10元部分不饱和或完全不饱和的二环，所述环具有0-2个独立选自氮或氧的杂原子。

3.根据权利要求1的用途，其中：

R¹选自卤素、N(R⁴)₂或T-R；

R²选自Q-C(R)(Q-Ar)R³，其中：

R和R³可选地构成6元饱和的环，所述环具有1个氮杂原子；

Ar是可选被取代的5-6元饱和或完全不饱和的单环，所述环具有0-1个独立选自氮、氧或硫的杂原子，或者可选被取代的9-10元部分不饱和或完全不饱和的二环，所述环具有0-2个独立选自氮或氧的杂原子；

R³选自Q-OR⁵、Q-N(R⁴)₂、Ar¹、N(R)C(O)Q-N(R⁴)₂或N(R)Q-N(R⁴)₂。

4.根据权利要求1的用途，其中：

R¹是T’-Ar，其中：

Ar是可选被取代的5-6元饱和或完全不饱和的单环，所述环具有0-1个独立选自氮、氧或硫的杂原子；

T’选自-NHC(O)-、-NH-、-NHCH₂-、-NHSO₂-、-CH₂NH-、-C≡C-、-CH₂-或-CH₂CH₂-。

5.根据权利要求4的用途，其中：

R²是Q-C(R)(Q-Ar)R³，其中：

R和R³可选地构成6元饱和的环，所述环具有1个氮杂原子；

R³是R’、Q-OR⁵、Q-N(R⁴)₂、Ar¹、N(R)C(O)Q-N(R⁴)₂或N(R)Q-N(R⁴)₂。

6.根据权利要求3或5的用途，其中所述化合物具有式III或IV：

或其药学上可接受的盐。

7.根据权利要求1的用途，其中所述化合物具有式V：

或其药学上可接受的盐。

8.式IIa化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R¹选自卤素、N(R⁴)₂或T-R；

每个R独立地选自氢或可选被苯基取代的C_1-6脂族基团；

R²是Q-C(R)(Q-Ar)R³，其中：

R和R³可选地构成6元饱和的环，所述环具有1个氮杂原子；

每个Q独立地选自价键或C_1-4亚烷基链；

每个Ar独立地是可选被取代的环，选自5-7元饱和或完全不饱和的单环，所述环具有0-1个独立选自氮、氧或硫的杂原子，或者9-10元部分不饱和或完全不饱和的二环，所述环具有0-2个独立选自氮或氧的杂原子；其中所述Ar可选地被下列取代基取代：卤素、CN、NO₂、R^o、OR^o、N(R^o)₂、S(C_1-6烷基)、S(卤代C_1-6烷基)、NHC(O)R、OCH₂(Ph)、氧代、苯基、-CH₂(Ph)、O(Ph)、CH₂-吗啉-4-基、CH₂-哌啶-1-基、CH₂-咪唑-1-基、CH₂-哌嗪-1-基、SO₂(C_1-6烷基)、C(O)OR、C(O)NH₂、CO(C_1-6烷基)、四唑、或C(O)Ph；

R’是可选被取代的C_1-6脂族基团；

每个R⁴独立地选自R、COR、CO₂R、CON(R)₂；

每个R⁵独立地选自R；

V¹选自氮或C(R⁶)；V²和V³为C(R⁶)；

每个R⁶独立地选自R、Ar¹或卤素；

每个Ar¹独立地选自可选被卤素取代的苯基；

其条件是：

若V¹、V²和V³各自是CH并且R¹是氢，则R³不是R’或Q-OC(O)R⁵。

9.根据权利要求8的化合物，其中：

R¹选自卤素、N(R⁴)₂或可选被取代的C_1-6脂族基团；

R²是Q-C(R)(Q-Ar)R³，其中：

R和R³可选地构成6元饱和的环，所述环具有0-1个独立选自氮、氧或硫的杂原子；

R³选自R’、Q-OR⁵、Q-N(R⁴)₂、Ar¹、N(R)C(O)Q-N(R⁴)₂或N(R)Q-N(R⁴)₂；

Ar是可选被取代的5-6元饱和或完全不饱和的单环，所述环具有0-1个独立选自氮、氧或硫的杂原子，或者可选被取代的9-10元部分不饱和或完全不饱和的二环，所述环具有0-2个独立选自氮或氧的杂原子。

10.根据权利要求9的化合物，其中：

R¹选自氯、溴、氟、NH₂、NHMe、NHEt、NH-环己基、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、乙炔基或叔丁基；

R³选自CH₂OH、OH、NH₂、CH₂NH₂、CH₂NHMe、CH₂N(Me)₂、CH₂CH₂NH₂、CH₂CH₂NHMe、CH₂CH₂N(Me)₂、CH₂CH₂NH₂、NHCO₂叔丁基、苯基、环戊基、甲基、乙基、异丙基、环丙基、NH(CH₂)₃NH₂、NH(CH₂)₂NH₂、CH₂C(Me)₂NH₂、CH₂C(Me)₂CHMe、NH(CH₂)₂NHEt、NHCH₂吡啶基、NHC(O)CH₂NH₂或NHCH₂-咪唑-4-基。

11.根据权利要求8的化合物，其中：

R¹是氢；

R²是Q-C(R)(Q-Ar)R³，其中：

R和R³可选地构成6元饱和的环，所述环具有1个独立选自氮的杂原子；

R³选自Q-OR⁵、Q-N(R⁴)₂、Ar¹、N(R)C(O)Q-N(R⁴)₂或N(R)Q-N(R⁴)₂；

12.根据权利要求11的化合物，其中：

R³选自OH、NH₂、CH₂NH₂、CH₂NHMe、CH₂N(Me)₂、CH₂CH₂NH₂、CH₂CH₂NHMe、CH₂CH₂N(Me)₂、NHCO₂叔丁基、苯基、NH(CH₂)₃NH₂、CH₂C(Me)₂NH₂、CH₂C(Me)₂CHMe、NH(CH₂)₂NH₂、NH(CH₂)₂NHEt、NHCH₂吡啶基、NHC(O)CH₂NH₃或NHCH₂-咪唑-4-基。

13.选自下组的化合物：

14.式IIb化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R¹是T-Ar；

T选自价键或C_1-6亚烷基链，其中T的至多两个亚甲基单位可选地和独立地被-N(R)-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-C(O)-或-SO₂-代替；

每个R独立地选自氢或可选被苯基取代的C_1-6脂族基团；

R²是Q-C(R)(Q-Ar)R³，其中：

R和R³可选地构成6元饱和的环，所述环具有1个氮杂原子；

每个Q独立地选自价键或C_1-4亚烷基链；

每个Ar独立地是可选被取代的环，选自5-7元饱和或完全不饱和的单环，所述环具有0-1个独立选自氮、氧或硫的杂原子，或者9-10元部分不饱和或完全不饱和的二环，所述环具有0-2个独立选自氮或氧的杂原子；其中所述Ar可选地被下列取代基取代：卤素、CN、NO₂、R^o、OR^o、N(R^o)₂、S(C_1-6烷基)、S(卤代C_1-6烷基)、NHC(O)R、OCH₂(Ph)、氧代、苯基、-CH₂(Ph)、O(Ph)、CH₂-吗啉-4-基、CH₂哌啶-1-基、CH₂-咪唑-1-基、CH₂-哌嗪-1-基、SO₂(C_1-6烷基)、C(O)OR、C(O)NH₂、CO(C_1-6烷基)、四唑、或C(O)Ph；

R’是可选被下列基团取代的C_1-6脂族基团：氧代或具有1-2个选自O、N或S的杂原子的5-6元杂环；

每个R⁴独立地选自R、COR⁵、CO₂R⁵、CON(R⁵)₂；

每个R⁵独立地选自R；

V¹选自氮或C(R⁶)；V²和V³为C(R⁶)；

每个R⁶独立地选自R、Ar¹或卤素；

每个Ar¹独立地选自可选被卤素取代的苯基；

其条件是：

15.根据权利要求14的化合物，其中：

R¹是T-Ar，其中：

T选自-NHC(O)-、-NH-、-NHCH₂-、-NHSO₂-、-CH₂NH-、-C≡C-、-CH₂-或-CH₂CH₂-；

Ar是可选被取代的5-6元芳基环，所述环具有0-1个独立选自氮、氧或硫的杂原子，或者可选被取代的9-10元芳基环，所述环具有0-2个独立选自氮或氧的杂原子；

R²是Q-C(R)(Q-Ar)R³，其中：

R³是R’、Q-OR⁵、Q-N(R⁴)₂、Ar¹、N(R)C(O)Q-N(R⁴)₂或N(R)Q-N(R⁴)₂；

每个Q独立地选自价键、-CH₂-或-CH₂CH₂-；

16.根据权利要求15的化合物，其中：

R³是CH₂OH、OH、NH₂、CH₂NH₂、CH₂NHMe、CH₂N(Me)₂、CH₂CH₂NH₂、CH₂CH₂NHMe、CH₂CH₂N(Me)₂、CH₂CH₂NH₂、NHCO₂叔丁基、苯基、环戊基、甲基、乙基、异丙基、环丙基、NH(CH₂)₃NH₂、NH(CH₂)₂NH₂、CH₂C(Me)₂NH₂、CH₂C(Me)₂CHMe、NH(CH₂)₂NHEt、NHCH₂吡啶基、NHC(O)CH₂NH₂和NHCH₂-咪唑-4-基。

17.根据权利要求14的化合物，其中：

T是价键；

R²是Q-C(R)(Q-Ar)R³，其中：

R³是Q-N(R⁴)₂、Ar¹、N(R)C(O)Q-N(R⁴)₂或N(R)Q-N(R⁴)₂；

18.根据权利要求17的化合物，其中：

R³是CH₂NHMe、CH₂N(Me)₂、CH₂CH₂NH₂、CH₂CH₂NHMe、CH₂CH₂N(Me)₂、CH₂C(Me)₂NH₂、CH₂C(Me)₂CHMe、NHCO₂(叔丁基)、苯基、NH(CH₂)₃NH₂、NH(CH₂)₂NH₂、NH(CH₂)₂NHEt、NHCH₂吡啶基、NHC(O)CH₂NH₃和NHCH₂-咪唑-4-基。

19.选自下组的化合物：