ES2401685T3 - Pirimidil ciclopentano hidroxilado como inhibidor de la proteína quinasa AKT - Google Patents

Abstract

Compuesto de fórmula I:**Fórmula**

Description

Pirimidil ciclopentano hidroxilado como inhibidor de la proteína quinasa AKT.

[0001] La presente invención se refiere a un nuevo inhibidor de serina/treonina proteína quinasas (por ejemplo, AKT y quinasas relacionadas), composiciones farmacéuticas que contienen el inhibidor, y métodos para la preparación de este inhibidor. El inhibidor es útil, por ejemplo, para el tratamiento de enfermedades hiperproliferativas, tales como cáncer e inflamación, en mamíferos.

[0002] Las proteína quinasas (PK) son enzimas que catalizan la fosforilación de grupos hidroxilo en residuos de tirosina, serina y treonina de proteínas mediante la transferencia del fosfato terminal (gamma) del ATP. A través de los mecanismos de transducción de señales, estas enzimas modulan el crecimiento, la diferenciación y la proliferación celular, es decir, prácticamente todos los aspectos de la vida celular de una manera u otra dependen de la actividad de PK (Hardie, G. y Hanks, S. (1995) The Protein Kinase Facts Book. I and II, Academic Press, San Diego, CA). Además, la actividad anormal de PK se ha relacionado con un huésped de trastornos, que van desde enfermedades relativamente no mortales, tales como la psoriasis, a enfermedades extremadamente virulentas, tales como el glioblastoma (cáncer de cerebro). Las proteína quinasas son una clase de dianas importantes para la modulación terapéutica (Cohen, P. (2002) Nature Rev. Drug Discovery 1:309).

[0003] De manera significativa, la fosforilación y/o expresión atípica de proteínas se ha descrito a menudo como uno de los efectos causales de la proliferación celular anormal, metástasis y supervivencia celular en el cáncer. La regulación y/o expresión anormal de varias quinasas, incluyendo Akt, VEGF, ILK, ROCK, p70S6K, Bcl, PKA, PKC, Raf, Src, PDK1, ErbB2, MEK, IKK, Cdk, EGFR, BAD, CHK1, CHK2 y GSK3, entre muchas otras, se ha implicado específicamente en el cáncer.

[0004] Las proteína quinasas incluyen dos clases: proteína tirosina quinasas (PTK) y serina-treonina quinasas (STK). Las enzimas proteína quinasa B/Akt son un grupo de serina/treonina quinasas que se sobreexpresan en una variedad de tumores humanos. Una de las dianas mejor caracterizadas de los productos lipídicos PI3K es la serina/treonina proteína quinasa de 57 kD, Akt, cascada debajo de PI3K en el mecanismo de transducción de señales (Hemmings, B.A. (1997) Science 275:628; Hay N. (2005) Cancer Cell 8:179-183). Akt es el homólogo humano del protooncogén v-akt del retrovirus de transformación aguda AKT8. Debido a su alta homología de secuencia a las proteína quinasas A y C, Akt también se denomina Proteína quinasa B (PKB) y relacionada con A y C (RAC). Se sabe que existen tres isoformas de Akt, a saber Akt1, Akt2 y At3, que muestran una homología global del 80% (Staal, S.P. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. 84:5034; Nakatani, K. (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 257:906; Li et al (2002) Current Topics in Med. Chem. 2:939-971; WO 2005/113762). Las isoformas de Akt comparten una organización común de dominios que consiste en un dominio de homología “pleckstrin” en el extremo N-terminal, un dominio catalítico de quinasa, y una región reguladora corta en el extremo C-terminal. Además, tanto Akt2 como Akt3 muestran variantes de corte y empalme. Tras el reclutamiento en la membrana celular por PtdInd(3,4,5)P3, Akt es fosforilada (activada) por PDK1 en T308, T309 y T305 para las isoformas Akt1 (PKBa), Akt2 (PKB�) Y Akt3 (PKBy), respectivamente, y en S473, S474 y S472 para las isoformas Akt1, Akt2 y Akt3, respectivamente. Dicha fosforilación tiene lugar por una quinasa aún desconocida (supuestamente denominada PDK2), aunque PDK1 (Balendran, A., (1999) Curr. Biol. 9:393), autofosforilación (Toker, A. (2000) J. Biol. Chem. 275:8271) y quinasa unida a integrina (ILK) (Delcommenne, M. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95:11211) se han implicado en este proceso. La activación de Akt requiere su fosforilación en el residuo Ser 473 en el motivo hidrófobo C-terminal (Brodbeck et al (1999) J. Biol. Chem. 274:9133-9136; Coffer et al (1991) Eur. J. Biochem. 201:475-481; Alessi et al (1997) Curr. Biol. 7:261-269). Aunque la monofosforilación de Akt activa la quinasa, se requiere la bis(fosforilación) para la actividad quinasa máxima.

[0005] Se cree que Akt reivindica su efecto en el cáncer mediante la supresión de la apoptosis y el aumento de la angiogénesis y la proliferación (Toker et al. (2006) Cancer Res. 66(8):3963-3966). La Akt se sobreexpresa en muchas formas de cáncer humano, incluyendo, pero sin limitación, colon (Zinda et al (2001) Clin. Cancer Res. 7:2475), ovario (Cheng et al (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:9267), cerebro (Haas Kogan et al (1998) Curr. Biol. 8:1195), pulmón (Brognard et al (2001) Cancer Res. 61:3986), pancreático (Bellacosa et al (1995) Int. J. Cancer 64:280-285; Cheng et al (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. 93:3636-3641), próstata (Graff et al (2000) J. Biol. Chem. 275:24500) y carcinomas gástricos (Staal et al (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:5034-5037).

[0006] Se ha explorado el mecanismo de PI3K/Akt/diana en mamífero de rapamicina (mTOR) para la terapia con inhibidores de molécula pequeña dirigidos (Georgakis, G. y Younes, A. (2006) Expert Rev. Anticancer Ther. 6(1):131-140; Granville et al (2006) Clin. Cancer Res. 12(3):679-689). La inhibición de la señalización de PI3K/Akt induce la apoptosis e inhibe el crecimiento de células tumorales que presentan niveles elevados de Akt (Kim et al (2005) Current Opinion in Investig. Drugs 6(12):1250-1258; Luo et al (2005) Molecular Cancer Ther. 4(6):977-986).

[0007] El desarrollo de inhibidores de quinasas que reconocen mecanismos regulados de manera anormal y que finalmente dan lugar a una enfermedad es de gran interés ético y comercial para la comunidad médica y farmacéutica. Un compuesto que inhibe (1) el reclutamiento de Akt en la membrana celular, (2) la activación por PDK1 o PDK2, (3) la fosforilación de sustrato, o (4) una de las dianas cascada debajo de Akt podría ser un agente anticanceroso valioso, ya sea como terapia por sí sola o conjuntamente con otros procedimientos aceptados.

[0008] La publicación de la solicitud de patente de Estados Unidos da a conocer, entre otras cosas, un conjunto de compuestos que actúan como inhibidores de AKT. Se dice que los compuestos son útiles en el tratamiento de enfermedades hiperproliferativas, tales como el cáncer.

CARACTERÍSTICAS DE LA INVENCIÓN

[0009] La presente invención da a conocer un Nuevo compuesto que inhibe las proteína quinasas AKT. El compuesto de la presente invención es útil como agente terapéutico para enfermedades y patología que se pueden tratar mediante la inhibición de proteína quinasas AKT.

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

[0011] La presente invención también da a conocer composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0012] En un aspecto adicional, la presente invención da a conocer un método de tratamiento de enfermedades o patologías médicas en un mamífero mediado por proteína quinasas AKT, que comprende administrar a dicho mamífero un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en una cantidad eficaz para tratar o prevenir dicho trastorno. Las patologías mediadas por la proteína quinasa AKT que se pueden tratar según los métodos de la presente invención incluyen, pero sin limitación, enfermedades y trastornos inflamatorios, hiperproliferativos, cardiovasculares, neurodegenerativos, ginecológicos y dermatológicos.

[0013] En un aspecto adicional, la presente invención da a conocer un método de inhibición de la producción de proteínas quinasas AKT en un mamífero, que comprende administrar a dicho mamífero un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en una cantidad eficaz para inhibir la producción de una proteína quinasa AKT.

[0014] En un aspecto adicional, la presente invención da a conocer métodos de inhibición de la actividad de proteína quinasas AKT, que comprende poner en contacto dicha quinasa con un compuesto de fórmula I.

[0015] El compuesto de la invención se puede utilizar de manera ventajosa en combinación con otros agentes terapéuticos conocidos. Por consiguiente, la presente invención también da a conocer composiciones farmacéuticas que comprende un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un segundo agente terapéutico.

[0016] La presente invención también da conocer el compuesto de fórmula I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo para utilizar como medicamento en el tratamiento de patologías mediadas por proteína quinasa AKT.

[0017] Un aspecto adicional de la presente invención es la utilización de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para terapia. En una realización, la terapia comprende el tratamiento de una patología mediada por proteína quinasa AKT.

[0018] La presente invención da a conocer además kits para el tratamiento de una enfermedad o trastorno mediados por proteína quinasa AKT, comprendiendo dicho kit un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, un recipiente, y opcionalmente un prospecto o etiqueta que indica un tratamiento. Los kits pueden comprender además un segundo compuesto o formulación que comprende un segundo agente farmacéutico para el tratamiento de dicha enfermedad o trastorno.

[0019] Un aspecto adicional de la presente invención da a conocer la utilización de un compuesto de fórmula I en el tratamiento de una enfermedad hiperproliferativa. En un aspecto adicional de la presente invención la enfermedad hiperproliferativa es cáncer.

[0020] La presente invención incluye además métodos de preparación, métodos de separación y métodos de purificación del compuesto de la presente invención.

[0021] Las ventajas adicionales y nuevas características de la presente invención se establecerán, en parte, en la descripción siguiente y, en parte, serán evidentes por lo expertos en la materia tras examinar la siguiente memoria o se pueden aprender mediante la práctica de la invención. Las ventajas de la presente invención se pueden realizar y conseguir mediante las instrumentalidades, combinaciones, composiciones y métodos particularmente señalados en las reivindicaciones adjuntas.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

[0022] A continuación se hará referencia en detalle a ciertas realizaciones de la presente invención, ejemplos de los cuales se ilustran en las estructuras y fórmulas que se acompañan. Aunque la invención se describirá conjuntamente con las realizaciones indicadas, se entenderá que no se pretende limitar la invención a estas realizaciones. Por el contrario, la presente invención pretende cubrir todas las alternativas, modificaciones y equivalentes que se pueden incluir en el alcance de la presente invención tal como se define en las reivindicaciones. Un experto en la materia reconocerá muchos métodos y materiales similares o equivalentes a los aquí descritos, que se podría utilizar en la práctica de la presente invención. La presente invención no se limita, de ningún modo, a los métodos y materiales descritos. En el caso de que una o más de la bibliografía incorporada y materiales similares difieran o contradigan la presente solicitud, incluyendo, pero sin limitación, términos definidos, utilización d términos, técnicas descritas o similares, prevalece la presente solicitud.

DEFINICIONES

[0023] El término “un/una” tal se utiliza aquí significa uno/a o más.

[0024] Tal como se utiliza aquí, los términos “compuesto de la presente invención”, “compuesto de la invención” y “compuesto de fórmula I” incluye el compuesto de fórmula I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

[0025] La frase “cantidad eficaz” significa una cantidad de compuesto que, cuando se administra a un mamífero con necesidad de dicho tratamiento, es suficiente para (i) tratar o prevenir una enfermedad, patología o trastorno concreto mediada por la actividad de una o más proteína quinasas AKT, tirosina quinasas, serina/treonina quinasas adicionales, y/o quinasas de especificidad dual, (ii) atenuar, mejorar o eliminar uno o más síntomas de la enfermedad, patología o trastorno concreto, o (iii) evitar o retrasar la aparición de uno o más síntomas de la enfermedad, patología o trastorno concreto aquí descrito. En el caso del cáncer, una cantidad eficaz del fármaco puede reducir el número de células cancerosas; reducir el tamaño del tumor; inhibir (es decir, ralentizar en cierto grado y preferiblemente detener) la infiltración de células cancerosas en órganos periféricos; inhibir (es decir, ralentizar en cierto grado y preferiblemente detener) la metástasis tumoral; inhibir, en cierto grado,el crecimiento del tumor; y/o aliviar, en cierto grado, uno o más síntomas asociados con el cáncer. Siempre que el fármaco pueda evitar el crecimiento y/o eliminar células cancerosas existentes, puede ser citostático y/o citotóxico. Para la terapia del cáncer, la eficacia se puede medir, por ejemplo, mediante la evaluación del tiempo hasta la progresión de la enfermedad (TTP) y/o determinar la velocidad de respuesta (RR).

[0026] "Tratar" pretende significar por lo menos la mitigación de una condición patológica en un mamífero, tal como un humano, que está afectado, por lo menos en parte, por la actividad de una o más proteína quinasas AKT, tirosina quinasas, serina/treonina quinasas adicionales, y/o quinasas de especificidad dual. Los términos “tratar” y “tratamiento” se refieren al tratamiento terapéutico y a medidas profilácticas o preventivas, en que el objetivo es prevenir o ralentizar (disminuir) un cambio o trastorno fisiológico no deseado. Para los objetivos de la presente invención, los resultados clínicos beneficiosos o deseados incluyen, pero sin limitación, el alivio de los síntomas, la disminución del grado de la enfermedad, estado estabilizado (es decir, sin empeoramiento) de la enfermedad, retraso o ralentización de la progresión de la enfermedad, mejora o paliamiento del estado de la enfermedad, y remisión (ya sea parcial o total), ya sea detectable o no detectable. “Tratamiento” también puede significar prolongar la supervivencia en comparación con la supervivencia esperada si no recibe tratamiento. Los que tienen necesidad del tratamiento incluyen los que ya presentan la patología o el trastorno, así como aquellos que están predispuestos a tener la condición patológica, pero que aún no han sido diagnosticados que la tienen; modular y/o inhibir la condición patológica. Los términos “tratar” o “tratamiento” comprenden tanto el tratamiento preventivo, es decir profiláctico, como paliativo.

[0027] Tal como se utiliza aquí, el término “mamífero” se refiere a un animal se sangre caliente que tiene o presenta el riesgo de desarrollar una enfermedad aquí descrita e incluye, pero sin limitación, cobayas, perros, gatos, ratones, hámsteres y primates, incluyendo humanos.

[0028] Un "agente quimioterapéutico" es un compuesto químico útil en el tratamiento de cáncer, independientemente del mecanismo de acción. Los agentes quimioterapéuticos incluyen compuestos utilizados en “terapia dirigida” y quimioterapia convencional.

[0029] Entre los ejemplos de agentes quimioterapéuticos se incluyen Erlotinib (TARCEVA®, Genentech/OSI Pharm.), Bortezomib (VELCADE®, Millennium Pharm.), Fulvestrant (FASLODEX®, AstraZeneca), Sutent (SU11248, Pfizer), Letrozole (FEMARA®, Novartis), mesilato de Imatinib (GLEEVEC®, Novartis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), Oxaliplatino (Eloxatin®, Sanofi), 5-FU (5-fluorouracilo), Leucovorina, Rapamicina (Sirolimus, RAPAMUNE®, Wyeth), Lapatinib (TYKERB®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), Lonafarnib (SCH 66336), Sorafenib (BAY43-9006, Bayer Labs), Irinotecan (CAMPTOSAR®, Pfizer) y Gefitinib (IRESSA®, AstraZeneca), AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), agentes alquilantes como tiopea y ciclofosfamida CYTOXAN®; sulfonatos de alquilo como busulfán, improsulfán y piposulfán; aziridinas como benzodopa, carboquona, meturedopa y uredopa; etileniminas y metilamelaminas incluyendo altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida, trietilentiofosforamida y trimetilomelamina; acetogeninas (especialmente bulatacina y bulatacinona); una camptotecina (incluyendo el análogo sintético topotecán); briostatina; calistatina; CC-1065 (incluyendo sus análogos sintéticos adozelesina, carzelesina y bizelesina); criptoficinas (especialmente criptoficina 1 y criptoficina 8); dolastatina; duocarmicina (incluyendo los análogos sintéticos KW-2189 y CB1-TM1); eleuterobina, pancratistatina, una sarcodictina, espongistatina, mostazas nitrogenadas como clorambucilo, clornafacina, clorofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, clorhidrato del óxido de mecloretamina, melfalán, novembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostaza de uracilo; nitrosoureas como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina y ranimustina; antibióticos como los antibióticos de enedina (por ejemplo, caliqueamicina, especialmente caliqueamicina gamma I y caliqueamicina omega II (Agnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33:183-186 (1994)); dinemicina, incluyendo dinemicina A; bisfofonatos, como clodronato; una esperamicina; así como el cromóforo neocarzinostatina y cromóforos cromoproteínas de antibióticos de enedina relacionados), aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubicina, 6-diazo-5-oxoL-norleucina, doxorrubicina (AdriamycinTM), (morfolin-doxorrubicina, cianomorfolino-doxorrubicina, 2-pirrolindoxorrubicina y desoxidoxorrubicina), epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicinas como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, porfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorubicina; antimetabolitos como metotrexato y 5-fluorouracilo (5-FU); análogos de ácido fólico como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos de purina como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; andrógenos como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; antiadrenales como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; ácido fólico relleno como ácido frolínico; aceglatona; glucósido de aldofosfamida; ácido aminolevulínico; eniluracilo, amsacrina; bestrabucilo; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; elfornitina; acetato de eliptinio; una epotilona; etoglucido; nitrato de galio; hidroxiurea; lentinano; lonidamina; maitansinoides como maitansina y ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidanmol; nitracrina; pentostatina; fenamet; pirarrubicina; losoxantrona, ácido podofilínico; 2-etilhidrazida, procarbazina; PSK®; complejo de polisacáridos (JHS Natural Products, Eugene, OR); razoxano; rizoxina; sizofirano; espirogermanio; ácido tenuazónico; triaziquona; 2,2',2"-triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente la toxina T-2, verracurina A, roridina A y anguidina); uretano; vindesina, dacarbazina; manomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobromano; gacitosina; arabinósido ("Ara-C"); ciclofosfamida, tiotepa; taxoides, por ejemplo, TAXOL® (paclitaxel, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), ABRAXANE™ (sin cremóforos), formulaciones de nanopartículas diseñadas con albúmina de paclitaxel (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois), y TAXOTERE® (docetaxel, Rhône-Poulenc Rorer, Antony, Francia); clorambucilo; GemzarTM (gemcitabina); 6-tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; análogos de platino como cisplatino y carboplatino; vinblastina; etopósido (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona; vincristina, NAVELBINETM (vinorelbina); novantrona; tenipósido, edatrexato, daunomicina; aminopterina; capecitabina (XELODA®), ibandronato; CPT-11, inhibidor de la topoisomerasa RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); retinoides como el ácido retinoico, y sales, ácidos y derivados farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los anteriores.

[0030] También se incluyen en la definición de “agente quimioterapéutico” (i) agentes antihormonales que actúan regulando o inhibiendo la acción de hormonas, como antiestrógenos y moduladores selectivos de los receptores de estrógenos (SERMs), incluyendo, por ejemplo, tamoxifeno (incluyendo NOLVADEX®; citrato de tamoxifeno), raloxifeno, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifeno, LY117018, onapristona, y FARESTON® (citrato de toremifina); (ii) inhibidores de la aromatasa que inhiben la enzima aromatasa que regula la producción de estrógenos en las glándulas adrenales, tales como, por ejemplo, 4(5)-imidazoles, aminoglutetimida, MEGASE® (acetato de megestrol), AROMASIN® (exemestano; Pfizer), formestanie, fadrozol, RIVISOR® (vorozol), FEMARA® (letrozol; Novartis), y ARIMIDEX® (anastrozol; AstraZeneca); (iii) antiandrógenos, tales como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida, y goserelina; así como troxacitabina (un análogo de nucleósido citosina de 1,3-dioxolano);

(iv) inhibidores de proteína quinasa; (v) inhibidores de lípido quinasa; (vi) oligonucleótidos antisentido, particularmente los que inhiben la expresión de genes en mecanismos de señalización implicados en la proliferación celular aberrante, tal como, por ejemplo, PKC-alfa, Ralf y H-Ras; (vii) ribozimas, tales como inhibidores de la expresión de VEGF (por ejemplo, ANGIOZYME®) e inhibidores de la expresión de HER2; (viii) vacunas, tales como vacunas para terapia génica, por ejemplo, ALLOVECTIN®, LEUVECTIN®, y VAXID®; PROLEUKIN® rIL-2; un inhibidor de topoisomerasa 1, tal como LURTOTECAN®; ABARELIX® rmRH; (ix) agentes antiangiogénicos, tales como bevacizumab (AVASTIN ®, Genentech); (x) sales, ácidos y derivados farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los anteriores.

[0031] También se incuyen en la definición de “agente quimioterapéutico” los anticuerpos terapéuticos, tales como alemtuzumab (Campath), bevacizumab (AVASTIN®, Genentech); cetuximab (ERBITUX®, Imclone); panitumumab (VECTIBIX®, Amgen), rituximab (RITUXAN®, Genentech/Biogen Idec), pertuzumab (OMNITARG®, 2C4, Genentech), trastuzumab (HERCEPTIN®, Genentech), tositumomab (Bexxar, Corixia), y el conjugado del anticuerpo fármaco, gemtuzumab ozogamicina (MILOTARG®, Wyeth).

[0032] Los anticuerpos monoclonales humanizados con potencial terapéutico como agentes quimioterapéuticos en combinación con los inhibidores de PI3K de la invención incluyen: alemtuzumab, apolizumab, aselizumab, atlizumab, bapineuzumab, bevacizumab, bivatuzumab mertansina, cantuzumab mertansina, cedelizumab, certolizumab pegol, cidfusituzumab, cidtuzumab, daclizumab, eculizumab, efalizumab, epratuzumab, erlizumab, felvizumab, fontolizumab, gemtuzumab ozogamicina, inotuzumab ozogamicina, ipilimumab, labetuzumab, lintuzumab, matuzumab, mepolizumab, motavizumab, motovizumab, natalizumab, nimotuzumab, nolovizumab, numavizumab, ocrelizumab, omalizumab, palivizumab, pascolizumab, pecfusituzumab, pectuzumab, pertuzumab, pexelizumab, ralivizumab, ranibizumab, reslivizumab, reslizumab, resyvizumab, rovelizumab, ruplizumab, sibrotuzumab, siplizumab, sontuzumab, tacatuzumab tetraxetan, tadocizumab, talizumab, tefibazumab, tocilizumab, toralizumab, trastuzumab, tucotuzumab celmoleuquina, tucusituzumab, umavizumab, urtoxazumab, y visilizumab.

INHIBIDORES DE AKT

[0033] El compuesto de formula I de la invención es útil para inhibir las proteína quinasas AKT. Este compuesto tiene utilidad como agente terapéutico para enfermedades que se pueden tratar mediante la inhibición del mecanismo de señalización de la proteína quinasa AKT y los mecanismos de receptores serina/treonina quinasa.

[0034] In particular, se halló que los compuestos de fórmula I que tienen un 7-hidroxi en la ciclopenta[d]pirimidina eran por lo menos 50 veces más selectivos por AKT frente a la proteína quinasa A (PKA). Por ejemplo, por lo menos 100 veces, y como ejemplo adicional, por lo menos 150 veces más selectivos para AKT frente a PKA. La selectividad sobre PKA es deseable, ya que la PKA está implicada en muchos procesos celulares importantes para la función normal y la fisiología de muchos tipos de células. Adicionalmente, no se cree que la inhibición de PKA contribuya a los efectos antiproliferativos y proapoptóticos de la inhibición de AKT. De este modo, la inhibición de PKA podría conducir a casos adversos no asociados con la inhibición de AKT sin contribuir a las ventajas de inhibición de AKT para modificar la enfermedad.

[0035] El compuesto de formula I también puede ser útil como inhibidor de tirosina quinasas, así como serian y treonina quinasas, además de AKT.

[0036] En general, un aspecto de la presente invención incluye el compuesto de fórmula I: y sales farmacéuticamente aceptables.

[0037] El compuesto de fórmula I incluye sales farmacéuticamente aceptables del compuesto.

[0038] La frase "farmacéuticamente aceptable" indica que la sustancia o composición es compatible químicamente y/o toxicológicamente con los otros ingredientes que comprenden una formulación, y/o el mamífero tratado con las mismas.

[0039] Adicionalmente, el compuesto de la invención puede formar una sal. Entre los ejemplos de sales se incluyen aquellas sales preparadas mediante la reacción de los compuestos de la presente invención con un ácido mineral u orgánico o una base inorgánica, incluyendo dichas sales, pero sin limitación, sulfatos, pirosulfatos, bisulfatos, sulfitos, bisulfitos, fosfatos, monohidrogenofosfatos, dihidrogenofosfatos, metafosfatos, pirofosfatos, cloruros, bromuros, yoduros, acetatos, propionatos, decanoatos, caprilatos, acrilatos, formiatos, isobutiratos, caproatos, heptanoatos, propiolatos, oxalatos, malonatos, succinatos, suberatos, sebacatos, fumaratos, maleatos, butin-1,4dioatos, hexin-1,6-dioatos, benzoatos, clorobenzoatos, metilbenzoatos, dinitrobenzoatos, hidroxibenzoatos, metoxibenzoatos, ftalatos, sulfonatos, xilenosulfonatos, fenilacetatos, fenilpropionatos, fenilbutiratos, citratos, lactatos, y-hidroxibutiratos, glicolatos, tartratos, metanosulfonatos, propanosulfonatos, naftaleno-1-sulfonatos, naftaleno-2-sulfonatos, y mandelatos. Dado que un único compuesto de la presente invención puede incluir más de un grupo ácido o básico, los compuestos de la presente invención pueden incluir mono, di o trisales en un único compuesto.

[0040] En ciertas realizaciones, la sal es una “sal farmacéuticamente aceptable” que, a menos que se indique lo contrario, incluye sales que mantienen la eficacia biológica del correspondiente ácido o base libre del compuesto especificado y no son biológicamente o de otro modo no deseables.

[0041] El compuesto de formula I también incluye otras sales que no necesariamente son sales farmacéuticamente aceptables y que pueden ser útiles como intermedios para la preparación y/o purificación del compuesto de fórmula I y/o para la separación del compuesto de fórmula I.

[0042] La presente invención también comprende compuestos marcados isotópicamente de la presente invención que son idénticos a los mencionados aquí, pero por el hecho de que uno o más átomos son sustituidos por un átomo que tiene una masa atómica o número de masa diferente de la masa atómica o el número de masa hallado normalmente en la naturaleza. Todos los isótopos de cualquier átomo o elemento concreto especificado se contemplan en el alcance de los compuestos de la invención, y sus usos. Los isótopos de ejemplo que se pueden incorporar en compuestos de la presente invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, azufre, flúor, cloro y yodo, tales como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 32P, 33P, 35S, 18F, 36Cl, 123I y 125I. Ciertos compuestos marcados isotópicamente de la presente invención (por ejemplo, aquellos marcados con 3H y 14C) son útiles en ensayos de distribución en tejidos de compuestos y/o sustratos. Los isótopos tritiados (es decir, 3H) y carbono-14 (es decir, 14C) son útiles por su facilidad de preparación y detectabilidad. Además, la sustitución por isótopos más pesados, tales como deuterio (es decir, 2H) puede aportar ciertas ventajas terapéuticas resultantes de una mayor estabilidad metabólica (por ejemplo, semivida in vivo incrementada o requisitos de dosificación reducidas) y, por tanto, pueden ser preferibles en algunas circunstancias. Los isótopos que emiten positrones, tales como 15O, 13N, 11C y 18F, son útiles para estudios de tomografía de emisión de positrones (PET) para examinar la ocupación de receptores de sustrato. Los compuestos marcados isotópicamente de la presente invención se pueden preparar en general mediante los siguientes procedimientos análogos a los descritos en los esquemas y/o en los ejemplos siguientes de la presente invención, mediante la sustitución de un reactivo marcado isotópicamente por un reactivo marcado no isotópicamente.

SÍNTESIS DE COMPUESTOS DE FÓRMULA I

[0043] El compuesto de la presente invención se puede sintetizar mediante rutas sintéticas que incluyen procesos análogos a los expertos en sector químico, particularmente a la vista de la descripción aquí contenida. Los materiales de partida en general están disponibles de fuentes comerciales, tales como Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI) o se preparan fácilmente utilizando métodos conocidos por los expertos en la materia (por ejemplo, preparados mediante métodos descritos en general en Louis F. Fieser y Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-19, Wiley, N.Y. (1967-1999 ed.), o Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin, incluyendo suplementos).

[0044] Para una descripción más detallada de las etapas de reacción individuales, véase la sección de ejemplos siguiente. Los expertos en la materia entenderán que se pueden utilizar otras rutas sintéticas para sintetizar el compuesto de la invención. Aunque en los ejemplos se representan materiales de partida y reactivos de ejemplo que se describen a continuación, se pueden sustituir fácilmente por otros materiales de partida y reactivos para proporcionar un conjunto de derivados y/o condiciones de reacción. Además, muchos de los compuestos preparados mediante los métodos descritos a continuación se pueden modificar adicionalmente en base a esta descripción utilizando química convencional conocida por los expertos en la materia.

[0045] En la preparación del compuesto de fórmula I, puede ser necesaria la protección de funcionalidades remotas (por ejemplo, aminas primarias o secundarias), etc.) de intermedios. La necesidad de dicha protección variará dependiendo de la naturaleza de la funcionalidad remota y las condiciones de los métodos de preparación. Los grupos protectores de amina adecuados (NHPg) incluyen acetilo, trifluoroacetilo, t-butoxicarbonilo (BOC), benciloxicarbonilo (CBz) y 9-fluorenilmetilenoxicarbonilo (Fmoc). La necesidad de dicha protección se determina fácilmente por un experto en la materia. Para una descripción general de grupos protectores y su utilización, véase

T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.

MÉTODOS DE SEPARACIÓN

[0046] En cualquiera de los métodos sintéticos para la preparación del compuesto de fórmula I, puede ser ventajoso separar los productos de reacción entre sí y/o de los materiales de partida. Los productos deseados de cada etapa o serie de etapas se separan y/o purifican hasta el grado deseado de homogeneidad mediante las técnicas habituales en el sector. Normalmente dichas separaciones implican la extracción multifase, la cristalización a partir de un disolvente o mezcla de disolventes, la destilación, la sublimación o la cromatografía. La cromatografía puede implicar cualquier conjunto de métodos, que incluyen, por ejemplo: fase inversa y fase normal; exclusión de tamaño; intercambio iónico; métodos y aparatos de cromatografía líquida a alta, media y baja presión; analítica a escala pequeña; de lecho en movimiento simulado (“SMB”) y cromatografía en capa fina o gruesa preparativa, así como técnicas de cromatografía de capa fina y flash a pequeña escala.

[0047] Otra clase de métodos de separación implica el tratamiento de una mezcla de reacción con un reactivo seleccionado para unirse o, de otro modo, poderse separar de un producto deseado, material de partida no reaccionado,, reacción por producto, o similares. Dichos reactivos incluyen adsorbentes o absorbentes, tales como carbón activado, tamices moleculares, medios de intercambio iónico, o similares. Alternativamente, los reactivos pueden ser ácidos en el caso de un material básico, bases en el caso de un material ácido, reactivos de unión, tales como anticuerpos, proteínas de unión, quelantes selectivos, tales como éteres corona, reactivos de extracción líquido/líquido ("LIX"), o similares.

[0048] La selección de métodos apropiados de separación depende de la naturaleza de los materiales implicados. Por ejemplo, l punto de ebullición y el peso molecular en destilación y sublimación, presencia o ausencia de grupos funcionales polares en cromatografía, estabilidad de materiales en medio ácido y básico en extracción multifase, y similares. Un experto en la materia aplicará técnicas que más probablemente conseguirán la separación deseada.

[0049] Las mezclas diastereoméricas se pueden separar en sus diastereómeros individuales en base a sus diferencias fisicoquímicas mediante métodos conocidos por los expertos en la materia, tales como mediante cromatografía y/o cristalización fraccionada. Los enantiómeros se pueden separar mediante la conversión de la mezcla enantiomérica en una mezcla diastereomérica mediante la reacción con un compuesto ópticamente activo apropiado (por ejemplo, auxiliar quiral, tal como un alcohol o cloruro de ácido de Mosher quiral), la separación de los diastereómeros y la conversión (por ejemplo, hidrolizando) de los diastereómeros individuales en los correspondientes enantiómeros puros. Además, algunos de los compuestos de la presente invención pueden ser atropisómeros (por ejemplo, biarilos sustituidos) y se consideran como parte de la presente invención. Los enantiómeros también se pueden separar mediante la utilización de una columna HPLC quiral.

[0050] Se puede obtener un único estereoisómero, por ejemplo, un enantiómero, sustancialmente libre de su estereoisómero mediante la separación de la mezcla racémica utilizando un método, tal como la formación de diastereómeros utilizando agentes de separación ópticamente activos (Eliel, E. y Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds," John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994; Lochmuller, C. H., J. Chromatogr., (1975) 113(3):283-302). Las mezclas racémicas de compuestos quirales de la invención se pueden separar y aislar mediante cualquier método adecuado, que incluye: (1) formación de sales diastereoméricas iónicas con compuestos quirales y separación mediante cristalización fraccionada u otros métodos, (2) formación de compuestos diastereoméricos con reactivos derivatizantes quirales, separación de los diastereómeros y conversión en los estereoisómeros puros, y (3) separación de los estereoisómeros sustancialmente puros o enriquecidos directamente bajo condiciones quirales. Véase: "Drug Stereochemistry, Analytical Methods and Pharmacology," Irving W. Wainer, Ed., Marcel Dekker, Inc., New York (1993).

[0051] Bajo el método (1), las sales diastereoméricas se pueden formar mediante la reacción de bases quirales enantioméricamente puras, tales como brucina, quinina, efedrina, estricnina, a -metil-�-feniletilamina (anfetamina), y similares, con compuestos asimétricos que tiene una función ácida, tales como ácido carboxílico y ácido sulfónico. Se pueden inducir la separación de sales diastereoméricas mediante cristalización fraccionada o cromatografía iónica. Para la separación de los isómeros ópticos de compuestos amino, la adición de ácidos carboxílicos o sulfónicos quirales, tales como ácido alcanforsulfónico, ácido tartárico, ácido mandélico, o ácido láctico puede dar lugar a la formación de las sales diastereoméricas.

[0052] Alternativamente, mediante el método (2), el sustrato a separar se hace reaccionar con un enantiómero de un compuesto quiral para formar una pareja diastereomérica (E. y Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., 1994, p. 322). Los compuestos diastereoméricos se pueden formar mediante la reacción de compuestos asimétricos con reactivos derivatizantes quirales enantioméricamente puros, tales como derivados de metilo, seguido de la separación de los diastereómeros y la hidrólisis para producir en enantiómero puro o enriquecido. Un método de determinación de pureza óptica implica producir ésteres quirales, tales como éster de mentilo, por ejemplo, (-)cloroformiato de mentilo en presencia de base, o éster de Mosher, acetato de -metoxi-a

a (trifluorometil)fenilo (Jacob III. J. Org. Chem., (1982) 47:4165), de la mezcla racémica, y analizar el espectro 1H RMN por la presencia de los dos enantiómeros o diastereómeros atropisoméricos. Los diastereómeros estables de compuestos atropisoméricos se pueden separar y aislar mediante cromatografía normal y de fase inversa siguiendo los métodos de separación de naftil-isoquinolinas atropisoméricas (WO 96/15111). Mediante el método (3), se puede separar una mezcla racémica de dos enantiómeros mediante cromatografía utilizando una fase estacionaria quiral ("Chiral Liquid Chromatography" (1989) W. J. Lough, Ed., Chapman and Hall, New York; Okamoto, J. of Chromatogr., (1990) 513:375-378). Los enantiómeros enriquecidos o purificados se pueden distinguir mediante métodos utilizados para distinguir otras moléculas quirales con átomos de carbono asimétricos, tales como la rotación óptica y el dicroismo circular.

MÉTODOS DE TRATAMIENTO CON EL COMPUESTO DE FÓRMULA I

[0053] El compuesto de la presente invención se puede utilizar como agente profiláctico o terapéutico para tratar enfermedades o trastornos mediados por la modulación o la regulación de proteína quinasas AKT, tirosina quinasas, serina/treonina quinasas adicionales, y/o quinasas de especificidad dual. Las patologías mediadas por proteína quinasa AKT que se pueden tratar según lo métodos de la presente invención incluyen, sin limitación, enfermedades y trastornos inflamatorios, cardiovasculares hiperproliferativos, neurodegenerativos, ginecológicos y dermatológicos.

[0054] En una realización, dicha composición farmacéutica es para el tratamiento de trastornos hiperproliferativos, que incluyen cánceres de las siguientes categorías: (1) cardiaco: sarcoma (angiosarcoma, fibrosarcoma, rabdomiosarcoma, liposarcoma), mixoma, rabdomioma, fibroma, lipoma y teratoma; (2) pulmón: carcinoma broncogénico (célula escamosa, célula pequeña no diferenciada, célula grande no diferenciada, adenocarcinoma), carcinoma alveolar (bronquial), adenoma bronquial, sarcoma, linfoma, hamartoma condromatoso, mesotelioma, de pulmón de célula no pequeña, de pulmón de célula pequeña; (3) gastrointestinal: esófago (carcinoma de célula escamosa, adenocarcinoma, leiomiosarcoma, linfoma), estómago (carcinoma, linfoma, leiomiosarcoma), páncreas (adenocarcinoma ductal, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, tumores carcinoides, vipoma), intestino delgado (adenocarcinoma, linfoma, tumores carcinoides, sarcoma de Karposi, leiomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma), intestino grueso (adenocarcinoma, adenoma tubular, adenoma velloso, hamartoma, leiomioma); (4) tracto genitourinario: riñón (adenocarcinoma, tumor de Wilm [nefroblastoma], linfoma, leucemia), vejiga y uretra (carcinoma de célula escamosa, carcinoma de célula transicional, adenocarcinoma), próstata (adenocarcinoma, sarcoma), testículos (seminoma, teratoma, carcinoma embrional, teratocarcinoma, coriocarcinoma, sarcoma, carcinoma de células intersticiales, fibroma, fibroadenoma, tumores adenomatoides, lipoma); (5) hígado: hepatoma (carcinoma hepatocelular), colangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiosarcoma, adenoma hepatocelular, hemangioma; (6) hueso: sarcoma osteogénico (osteosarcoma), fibrosarcoma, histiocitoma fibroso maligno, condrosarcoma, sarcoma de Ewing, linfoma maligno (sarcoma de células de retículo), mieloma múltiple, cordoma de tumores de células gigantes malignas, osteocrondroma (exostosis osteocartilaginoso), condroma benigno, condroblastoma, condromixofibroma, osteoma osteoide y tumores de células gigantes; (7) sistema nervioso: cráneo (osteoma, hemangioma, granuloma, xantoma, osteitis deformans), meninges (meningioma, meningiosarcoma, gliomatosis), cerebro (astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma [pinealoma], glioblastoma multifonn. oligodendroglioma, schwannoma, retinoblastoma, tumores congénitos), neurofibroma de la médula espinal, meningioma, glioma, sarcoma); (8) ginecológico: útero (carcinoma de endometrio), cuello del útero (carcinoma cervical, displasia cervical pretumoral), ovarios (carcinoma de ovario [cistadenocarcinoma seroso, cistadenocarcinoma mucinoso, carcinoma no clasificado], tumores de células granulosa-tecal, tumores de células de Sertoli-Leydig, disgerminoma, teratoma maligno), vulva (carcinoma de célula escamosa, carcinoma intraepitelial, adenocarcinoma, fibrosarcoma, melanoma), vagina (carcinoma de células claras, carcinoma de célula escamosa, sarcoma botrioide (rabdomiosarcoma embrionatio), trompas de Falopio (carcinoma);

(9) hematológico: sangre (leucemia mieloide [aguda y crónica], leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crónica, enfermedades mieloproliferativas, mieloma múltiple, síndrome mielodisplásico), enfermedad de Hodgkin, enfermedad de no Hodgkin [linfoma maligno]; (10) piel: melanoma avanzado, melanoma maligno, carcinoma de células basales, carcinoma de célula escamosa, sarcoma de Karposi, nevus displásicos, lipoma, angioma, dermatofibroma, queloides, psoriasis; (11) glándulas adrenales: neuroblastoma; (12) mama: mama metastásica; adenocarcinoma de mama; (13) Colon; (14) cavidad oral; (15) leucemia de células pilosas; (16) cabeza y cuello; (17) y otros que incluyen enfermedad metastásica refractaria, sarcoma de Kaposi; síndrome de Bannayan-Zonana; y enfermedad de Cowden o enfermedad de Lhermitte-Duclos, entre otros tipos de trastornos hiperproliferativos.

[0055] El compuesto y métodos de la presente invención también se pueden utilizar para tratar enfermedades y patologías, tales como artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad de Chron, angiofibroma, enfermedades oculares (por ejemplo, vascularización retinal, retinopatía diabética, degeneración macular relacionada con la edad, degeneración macular, etc.), esclerosis múltiple, obesidad, enfermedad de Alzheimer, restenosis, enfermedades autoinmunes, alergia, asma, endometriosis, aterosclerosis, estenosis de injerto de vena, estenosis perianastomásica de injerto protésico, hiperplasia de próstata, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, psoriasis, inhibición de daño neurológico debido a la reparación de tejido, formación de tejido cicatrizante (y puede ayudar en la curación de heridas), esclerosis múltiple, enfermedad intestinal inflamatoria, infecciones, particularmente infecciones bacterianas, virales, retrovirales o parásitas (mediante el incremento de la apoptosis), enfermedad pulmonar, neoplasma, enfermedad de Parkinson, rechazo de transplante (como inmunosupresor), choque séptico, etc.

[0056] Por consiguiente, otro aspecto de la presente invención da a conocer un método de tratamiento de enfermedades o patologías médicas en un mamífero mediadas por proteína quinasas AKT, que comprende administrar a dicho mamífero un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en una cantidad eficaz para tratar o prevenir dicho trastorno.

[0057] La cantidad del compuesto de fórmula I que corresponderá a dicha cantidad variará dependiendo de factores, tales como el compuesto concreto, la enfermedad y su gravedad, la identidad (por ejemplo, el peso) del mamífero en necesidad del tratamiento, pero, sin embargo, se puede determinar de forma rutinaria por un experto en la materia.

[0058] La presente invención también da a conocer el compuesto de fórmula I para utilizar en el tratamiento de patologías mediadas por la proteína quinasa AKT.

[0059] Un aspecto adicional de la presente invención es la utilización del compuesto de fórmula I en la preparación de un medicamento para terapia, tal como para el tratamiento o prevención de patologías mediadas por la proteína quinasa AKT.

TERAPIA DE COMBINACIÓN

[0060] El compuesto de la presente invención se puede utilizar en combinación con uno o más fármacos adicionales, tales como los descritos a continuación. La dosis del segundo fármaco se puede seleccionar aproximadamente en base a una dosis clínicamente empleada. La proporción del compuesto de la presente invención y el segundo fármaco se pueden determinar de manera apropiada según el sujeto de administración, la ruta de administración, la enfermedad diana, la condición clínica, la combinación, y otros factores. En los casos en que el sujeto de administración es un humano, por ejemplo, el segundo fármaco se pude utilizar en una cantidad de 0,01 a 100 partes en peso por parte en peso del compuesto de la presente invención.

[0061] El segundo compuesto de la formulación de combinación farmacéutica o régimen de dosificación presenta preferiblemente actividades complementarias al compuesto de la presente invención, de manera que no se afectan de manera adversa entre sí. Dichos fármacos están presentes de manera adecuada en combinación en cantidades que son eficaces para el objetivo pretendido. Por consiguiente, otro aspecto de la presente invención proporciona una composición que comprende un compuesto de la presente invención en combinación con un segundo fármaco, tal como el descrito aquí.

[0062] El compuesto de la presente invención y el fármaco o fármacos farmacéuticamente activo adicionales se pueden administrar juntos en una composición farmacéutica unitaria o por separado y, cuando se administran por separado, esto puede tener lugar de manera simultánea o secuencia en cualquier orden. Dicha administración secuencia puede estar próxima en el tiempo o remota en el tiempo. Las cantidades del compuesto de la presente invención y el segundo fármaco o fármacos y los puntos de tiempo relativos de la administración se seleccionarán a efectos de conseguir el efecto terapéutico combinado deseado.

[0063] La terapia de combinación puede proporcionar “sinergia” y resultar “sinérgica”, es decir, el efecto conseguido cuando se utilizan juntos los principios activos es mayor que la suma de los efectos que resultan de utilizar los compuestos por separado. Un efecto sinérgico se puede conseguir cuando los principios activos: (1) se coformulan y administran o liberan de forma simultánea en una formulación de dosificación unitaria combinada; (2) se liberan como formulaciones separada con alternancia o en paralelo; o (3) mediante alguna otra pauta. Cuando se liberan en una terapia de alternancia, el efecto sinérgico se puede conseguir cuando los compuestos se administran o liberan de manera secuencia, por ejemplo, mediante diferentes inyecciones en jeringas separadas. En general, durante la terapia de alternancia, se administra de manera secuencia una dosis eficaz de cada principio activo , es decir, en serie, mientras que en terapia de combinación, las dosis eficaces de dos o más principios activos se administran juntas.

RUTAS DE ADMINISTRACIÓN

[0064] El compuesto de la presente invención se puede administrar mediante cualquier ruta apropiada a la patología a tratar. Las rutas adecuadas incluyen oral, oral, parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa, intraarterial, intradérmica, intratecal y epidural), transdérmica, rectal, nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), vaginal, intraperitoneal, intrapulmonar e intranasal. Se entenderá que la ruta preferida puede variar con, por ejemplo, la patología del receptor. Cuando el compuesto se administrar de forma oral, se puede formular como una pastilla, cápsula, comprimido, etc. con un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable. Cuando el compuesto se administra de forma parenteral, se puede formular con un vehículo parenteral farmacéuticamentre aceptable y en una forma inyectable de dosificación unitaria, tal como se detalla a continuación.

FORMULACIONES FARMACÉUTICAS

[0065] A efectos de utilizar el compuesto de la presente invención para el tratamiento terapéutico (incluyendo el tratamiento profiláctico) de mamíferos, incluyendo humanos, normalmente se formula según la práctica farmacéutica estándar como una composición farmacéutica. Según este aspecto de la invención, se da a conocer una composición farmacéutica que comprende el compuesto de la presente invención. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende el compuesto de fórmula I en asociación con un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable.

[0066] Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se formulan, dosifican y administran de una manera, es decir, cantidades, concentraciones, pautas, evoluciones, vehículos y ruta de administración, consistente con las buenas prácticas médicas. Entre los factores a considerar en este contexto se incluyen el trastorno particular a tratar, el mamífero particular a tratar, la condición clínica del paciente, la causa del trastorno, el sitio de liberación del agente, el método de administración, la pauta de administración, y otros factores conocidos por los profesionales médicos. La cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto a administrar estará gobernada por dicha consideración y es la cantidad mínima necesaria para prevenir, mejorar o tratar el trastorno. El compuesto de la presente invención se formula habitualmente en formas de dosificación farmacéutica para proporcionar una dosificación fácilmente controlable del fármaco y para permitir la complacencia del paciente con el régimen prescrito.

[0067] La composición para utilizar en la presente invención es preferiblemente estéril. En particular, las formulaciones a utilizar para la administración in vivo deben ser estériles. Dicha esterilización se consigue fácilmente, por ejemplo, mediante filtración a través de membranas de filtración estériles. El compuesto normalmente se puede almacenar como una composición sólida, una formulación liofilizada o como una solución acuosa.

[0068] Las formulaciones farmacéuticas de los compuestos de la presente invención se pueden preparar para varias rutas y tipos de administración. Por ejemplo, un compuesto de la presente invención que tiene el grado de pureza deseado se puede mezclar opcionalmente con diluyentes, portadores, excipientes o estabilizantes farmacéuticamente aceptables (Remington’s Pharmaceutical Sciences (1980) 16ª edición, Osol, A. Ed.), en forma de una formulación liofilizada, un polvo triturado, o una solución acuosa. La formulación se puede fabricar mediante la mezcla a temperatura ambiente al pH apropiado y en el grado de pureza deseado, con portadores fisiológicamente aceptables, es decir, portadores que son no tóxicos a los receptores en las dosis y concentraciones empleadas. El pH de la formulación depende principalmente del uso particular y de la concentración del compuesto, pero puede variar de aproximadamente 3 a aproximadamente 8. La formulación en tampón acetato a pH 5 es una realización adecuada. Las formulaciones se pueden preparar utilizando procedimientos de disolución y mezclado convencionales. Por ejemplo, la sustancia del fármaco general (es decir, el compuesto de la presente invención o la forma estabilizada del compuesto (por ejemplo, complejo con un derivado de ciclodextrina u otro agente de complejación conocido) se disuelve en un disolvente adecuado en presencia de uno o más excipientes.

[0069] El portador, diluyente o excipiente concreto utilizado dependerá de los medios y el objetivo para el cual se aplica el compuesto de la presente invención. Los disolventes se seleccionan generalmente en base a disolventes reconocidos por los expertos en la materia como seguros (GRAS) para ser administrados a un mamífero. En general, los disolventes seguros son disolventes acuosos no tóxicos, tales como agua y otros disolventes no tóxicos que son solubles o miscibles en agua. Los disolventes acuosos adecuados incluyen agua, etanol, propilenglicol, polietilenglicoles (por ejemplo, PEG 400, PEG 300), etc. y mezclas de los mismos. Los diluyente, portadores o excipientes aceptables no han de ser tóxicos para el receptor a las dosis y concentraciones empleadas, e incluyen tampones como el fosfato, el citrato y otros ácidos orgánicos; antioxidantes incluyendo el ácido ascórbico y la metionina; conservantes (tales como el cloruro de octadecildimetilbenzil amonio, el cloruro de hexametonio; el cloruro de benzalconio, el cloruro de bencetonio; el alcohol fenólico, butílico o benzílico; los alquil parabenos tales como el metil o propil parabeno; el catecol; el resorcinol; el ciclohexanol; el 3-pentanol; y m-cresol); polipéptidos de bajo peso molecular (menos de aproximadamente 10 residuos); proteínas, tales como la albúmina sérica, la gelatina,

o las inmunoglobulinas; los polímeros hidrofílicos tales como al polivinilpirrolidona; los aminoácidos como la glicina, la glutamina, la asparragina, la histidina, la arginina, o la lisina; monosacáridos, disacáridos, y otros carbohidratos incluyendo la glucosa, la manosa, o las dextrinas; agentes quelantes tales como el EDTA; azúcares como la sacarosa, el manitol, la trehalosa o el sorbitol; contraiones formadores de sales tales como el sodio; complejos metálicos (por ejemplo, el complejos de proteína-Zn); y/o tensoactivos no iónicos tales como TWEENTM, PLURONICSTM o el polietilenglicol (PEG). Las formulaciones también pueden incluir uno o más agentes estabilizantes, tensoactivos, agentes humectantes, agentes lubricantes, emulsionantes, agentes de suspensión, conservantes, antioxidantes, agentes de opacidad, agentes deslizantes, ayudantes de procesamiento, colorantes, edulcorantes, agentes perfumantes, agentes saborizantes y otros aditivos conocidos por proporcionar una presentación elegante del fármaco (es decir, un compuesto de la presente invención o composición farmacéutica del mismo) o que ayudan en la fabricación del producto farmacéutico (es decir, medicamento). Los principios farmacéuticos activos pueden también encapsularse en microcápsulas preparadas, por ejemplo, mediante técnicas de coacervación o por polimerización interfacial, por ejemplo, hidroximetilcelulosa o microcápsulas de gelatina y microcápsulas de poli-(metilmetacrilato), respectivamente, en sistemas coloidales de liberación de fármacos (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nanopartículas y nanocápsulas) o en macroemulsiones. Tales técnicas se describen en Remington’s Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. ed. (1980). Un "liposoma" es una pequeña vesícula compuesta de varios tipos de lípidos, fosfolípidos y/o tensoactivos que resulta útil para la liberación de un fármaco (tal como el compuesto de fórmula I y, opcionalmente, un agente terapéutico) a un mamífero. Los componentes del liposoma están dispuestos generalmente en una formación de bicapa, de manera similar a las membranas biológicas.

[0070] Se pueden preparar preparaciones de liberación controlada de compuestos de la presente invención. Entre los ejemplos adecuados de preparaciones de liberación controlada se incluyen matrices semipermeables de polímeros sólidos hidrofóbicos que contienen el compuesto de fórmula I, cuyas matrices están en forma de artículos con formas determinadas, por ejemplo, películas o microcápsulas. Entre los ejemplos de matrices de liberación controlada se incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, poli(2-hidroxietil-metacrilato), o poli(vinilalcohol)), poliláctidos (patente de Estados Unidos 3.773.919), copolímeros de ácido L-glutámico y gamma-etil-L-glutamato, etileno-acetato de vinilo no degradable, copolímeros de ácido láctico-ácido glicólico degradables tales como el LUPRON DEPOTTM (microesferas inyectables compuestas de un copolímero de ácido láctico-ácido glicólico y acetato de leuprolide), y ácido poli-D-(-)3-hidroxibutírico.

[0071] Las composiciones farmacéuticas del compuesto de la presente invención puede estar en forma de una preparación inyectable estéril, tal como una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión se puede formular según la técnica conocida utilizando los agentes de dispersión o humectantes adecuados y los agentes de suspensión que se han mencionado anteriormente. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente parenteralmente aceptable no tóxico, tal como una solución de 1,3-butanodiol, o prepararse como un polvo liofilizado. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden utilizar están agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro sódico. Además, se pueden utilizar de manera convencional aceites fijados estériles como disolvente o medio de suspensión. Para este objetivo, se puede utilizar aceite fijado blando que incluye mono o diglicéridos sintéticos. Además, se pueden utilizar asimismo ácidos grasos, tales como ácido oleico, en la preparación de inyectables.

[0072] Las formulaciones adecuadas para la administración parenteral incluyen soluciones de inyección estéril acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, tampones, agentes bacteriostáticos y solutos que hacen que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor pretendido; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes.

[0073] Las composiciones de la presente invención también pueden estar en forma adecuada para utilización oral (por ejemplo, comprimidos, pastillas, cápsulas blandas o duras, suspensiones acuosas u oleosas, emulsiones, polvos o gránulos dispersables, jarabes o elixires), para uso tópico (por ejemplo, como cremas, pomadas, geles o soluciones o suspensiones acuosas u oleosas), para administración mediante inhalación (por ejemplo, como un polvo finamente dividido o un aerosol líquido), para la administración mediante insuflación (por ejemplo, como un polvo finamente dividido).

[0074] Los excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados para una formulación de comprimido incluyen, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como lactosa, carbonato sódico, fosfato cálcico o carbonato cálcico, agentes de granulación y disgregación, tales como almidón de maíz o ácido algénico; agentes de unión, tales como almidón; agentes lubricantes, tales como estearato de magnesio, ácido esteárico o talco; agentes conservantes, tales como phidroxibenzoato de etilo o propilo y antioxidantes, tales como ácido ascórbico. Las formulaciones de comprimidos pueden ser no recubiertas o recubiertas para modificar su disgregación y la posterior absorción del principio activo en el tracto gastrointestinal o para mejorar su estabilidad y/o apariencia, en cualquier caso, utilizando agentes de recubrimiento convencionales y procedimientos conocidos en la técnica.

[0075] Las composiciones para uso oral pueden estar en forma de cápsulas de gelatina dura en que el principio activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina blanda en que el principio activo se mezcla con agua o un aceite, tal como aceite de cacahuete, parafina líquida o aceite de oliva.

[0076] Las suspensiones acuosas contienen en general el principio activo en forma de polvo fino junto con uno o más agentes de suspensión, tales como carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinil-pirrolidona, goma tragacanto y goma acacia; agentes de dispersión o humectantes, tales como lecitina o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos (por ejemplo, estearato de polioxietileno), o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo, heptadecaetilenoxicetanol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y un hexitol, tal como monooleato de sorbitol polioxietilenado, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo, monooleato de sorbitán polietilenado. Las suspensiones acuosas también pueden contener uno o más conservantes (tales como p-hidroxibenzoato de etilo o propilo), antioxidantes (tales como ácido ascórbico), agentes colorantes, agentes aromatizantes y/o agentes edulcorantes (tales como sacarosa, sacarina o aspartamo).

[0077] Las suspensiones oleosas pueden ser formuladas mediante la suspensión del principio activo en un aceite vegetal (tal como aceite de cacahuete, aceite de oliva, aceite de sésamo o aceite de coco) o en un aceite mineral (tal como parafina líquida). Las suspensiones oleosas también pueden contener un agente espesante, tal como cera de abeja, parafina dura o alcohol cetílico. Se pueden añadir agentes edulcorantes, tales como los indicados anteriormente y agentes aromatizantes para proporcionar una preparación oral apetecible. Estas composiciones se pueden conservar mediante la adición de un antioxidante, tal como ácido ascórbico.

[0078] Los polvos y gránulos dispersables adecuados para la preparación de una suspensión acuosa mediante la adición de agua contienen en general el principio activo junto con un agente dispersante o humectante, agente de suspensión y uno o más conservantes. Los agentes de dispersión o humectantes adecuados se ejemplifican por los mencionados ya anteriormente. Excipientes adicionales, tales como agentes edulcorantes, aromatizantes y colorantes, también pueden estar presentes.

[0079] Las composiciones farmacéuticas de la presente invención también pueden estar en forma de emulsiones de aceite en agua. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal, tal como aceite de oliva o aceite de cacahuete, o un aceite mineral, tal como, por ejemplo, parafina líquida o una mezcla de cualquiera de éstos. Los agentes emulsionantes adecuados pueden ser, por ejemplo, gomas naturales, tales como goma acacia o goma tragacanto, fosfátidos naturales, tales como soja, lecitina, ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol (por ejemplo, monooleato de sorbitán) y productos de condensación de dichos ésteres parciales con óxido de etileno, tales como monooleato de sorbitán polioxietilenado. Las emulsiones también pueden contener agentes edulcorantes, aromatizantes y conservantes.

[0080] Los jarabes y elixires se pueden formular con agentes edulcorantes, tales como glicerol, propilenglicol, sorbitol, aspartamo o sacarosa y también pueden contener un emoliente, conservante, agente aromatizante y/o colorante.

[0081] Las formulaciones en supositorio se pueden preparar mediante la mezcla del principio activo con un excipiente no irritante adecuado que es sólido a temperaturas ordinarias, pero líquido a la temperatura rectal y, por tanto, se fundirá en el recto para liberar el fármaco. Los excipientes adecuados incluyen, por ejemplo, manteca de cacao y polietilenglicoles. Las formulaciones adecuadas para administración vaginal se pueden presentar como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones en pulverizadores que contienen, además del principio activo, dichos portadores conocidos en la técnica por ser apropiados.

[0082] Las formulaciones tópicas, tales como cremas, pomadas, geles y soluciones o suspensiones acuosas u oleosas, se pueden obtener, en general, mediante la formulación de un principio activo con un vehículo o diluyente convencionales aceptable tópicamente, utilizando procedimientos convencionales conocidos en el sector.

[0083] Las composiciones para la administración transdérmica pueden estar en forma de los parches transdérmicos de la piel que son conocidos por los expertos en la materia.

[0084] Las formulaciones adecuadas para la administración intrapulmonar o nasal tienen un tamaño de partícula de, por ejemplo, en el intervalo de 0,1 a 500 micras (incluyendo tamaños de partícula en el intervalo entre 0,1 y 500 micras en incrementos de micras, tales como 0,5, 1, 30 micras, 35 micras, etc.) que se administran mediante inhalación rápida a través de las fosas nasales o mediante inhalación a través de la boca para alcanzar los sacos alveolares. Las formulaciones adecuadas incluyen soluciones acuosas u oleosas del principio activo. Las formulaciones adecuadas para la administración en aerosol o polvo seco se pueden preparar según métodos convencionales y se pueden liberar con otros agentes terapéuticos, tales como compuestos utilizados hasta ahora en el tratamiento o la profilaxis de trastornos descritos a continuación.

[0085] La composición (o formulación) farmacéutica para aplicación se puede envasar de varias maneras dependiendo del método utilizado para la administración del fármaco. Por ejemplo, un artículo para distribución puede incluir un recipiente que tiene depositado en el mismo la formulación farmacéutica en una forma apropiada. Los recipientes adecuados son conocidos por los expertos en la materia e incluyen materiales, tales como botellas (plástico y vidrio), bolsitas, ampollas, bolas de plástico, cilindros metálicos, y similares. El recipiente puede incluir también un ensamblaje de seguridad para evitar el acceso indiscreto al contenido del envase. Además, el recipiente tiene depositado en el mismo una etiqueta que describe el contenido del recipiente. La etiqueta también puede incluir avisos apropiados. Las formulaciones también se pueden envasar en recipientes de dosis única o multidosis, por ejemplo, ampollas y viales sellados, y se pueden almacenar en una condición liofilizada que requiere sólo la adición del portador líquido estéril, por ejemplo, agua, para inyección inmediatamente antes de su uso. Las soluciones y suspensiones de inyecciones extemporáneas se preparan a partir de polvos estériles, gránulos y comprimidos del tipo descrito anteriormente. Las formulaciones de dosificación unitaria preferidas son aquella que contienen una dosis diaria o subdosis diaria unitaria, tal como se indica en la presente invención, o una fracción apropiada de la misma, del principio activo.

[0086] La presente invención da a conocer también composiciones veterinarias que comprenden por lo menos un principio activo definido anteriormente junto con un portador veterinario correspondiente. Los portadores veterinarios son materiales útiles para el objetivo de administrar la composición y pueden ser materiales sólidos, líquidos o gaseosos que, de otro modo, son inertes o aceptables en el sector de veterinaria y son compatibles con el principio activo. Estas composiciones veterinarias se pueden administrar por ruta parenteral, oral, o mediante cualquier otra ruta deseada.

[0087] La cantidad del compuesto de la presente invención que se combina con uno o más excipientes para producir una forma de dosificación única necesariamente variará dependiendo del sujeto tratado, la gravedad del trastorno o patología, la velocidad de administración, la disposición del compuesto y la discreción del médico. En una realización, una cantidad adecuada de un compuesto de la presente invención se administra a un mamífero con necesidad del mismo. La administración en una realización tiene lugar en una cantidad entre aproximadamente 0,001 mg/kg de peso corporal y aproximadamente 60 mg/kg de peso corporal por día. En otra realización, la administración tiene lugar en una cantidad entre 0,5 mg/kg de peso corporal y aproximadamente 40 mg/kg de peso corporal por día. En algunos casos, los niveles de dosificación por debajo del límite inferior del intervalo anterior pueden ser más que adecuados, mientras que en otros casos se pueden utilizar incluso dosis más grandes sin causar ningún efecto secundario dañino, siempre que dichas dosis más grandes se dividan primero en varias dosis pequeñas para la administración a lo largo del día. Para más información sobre las rutas de administración y las pautas de dosificación, véase el capítulo 25.3 en el volumen 5 de Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990, que se incorpora específicamente por referencia.

ARTÍCULOS DE FABRICACIÓN

[0088] En otra realización de la presente invención, se da conocer un artículo de fabricación, o “kit”, que contiene materiales útiles para el tratamiento de los trastornos descritos anteriormente. En una realización, el kit comprende un recipiente que comprende el compuesto de la presente invención. Entre los recipientes adecuados se incluyen, por ejemplo, botellas, viales, jeringas, blísters, etc. El recipiente puede estar formado de una variedad de materiales, tales como vidrio o plástico. El recipiente puede contener un compuesto de la presente invención o una formulación del mismo que es eficaz para el tratamiento de la patología y puede tener un puerto de acceso estéril (por ejemplo, el recipiente puede ser una bolsa o vial de solución intravenosa que tiene un tapón penetrable por una aguja de inyección hipodérmica).

[0089] El kit puede comprender además una etiqueta o prospecto en o asociado con el recipiente. El término “prospecto” se utiliza para referirse a instrucciones incluidas normalmente en envases comerciales de productos terapéuticos, que contienen información sobre las indicaciones, uso, dosificación, administración, contraindicaciones y/o avisos referentes a la utilización de dichos productos terapéuticos. En una realización, la etiqueta o prospecto indica que la composición que comprende el compuesto de la presente invención se puede utilizar para tratar un trastorno mediada, por ejemplo, por quinasa AKT. La etiqueta o prospecto también pueden indicar que la composición se puede utilizar para tratar otros trastornos.

[0090] En ciertas realizaciones, los kits son adecuados para la liberación de formas orales sólidas del compuesto de la presente invención, tales como comprimidos o cápsulas. Dicho kit incluye preferiblemente un conjunto de dosis unitarias. Dichos kits pueden incluir una tarjeta que tiene las dosis orientadas en el orden del uso pretendido. Un ejemplo de dicho kit es un “paquete de blíster”. Los paquetes de blíster son conocidos en la industria del empaquetamiento y se utilizan ampliamente para envasar formas de dosificación unitaria farmacéuticas. Si se desea, se puede proporcionar una ayuda para la memoria, por ejemplo, en forma de números, letras u otras marcas o con un calendario insertado, que designan los días en la pauta de tratamiento en que se pueden administrar las dosis,

[0091] Según otra realización, un kit puede comprender (a) un primer recipiente con el compuesto de la presente invención contenido en el mismo; y (b) un segundo recipiente con una segunda formulación farmacéutica contenida en el mismo, en el que la segunda formulación farmacéutica comprende un segundo compuesto útil para el tratamiento de un trastorno mediado por quinasa AKT. Alternativamente, o adicionalmente, el kit puede comprender además un tercer recipiente que comprende un tampón farmacéuticamente aceptable, tal como agua bacteriostática para inyección (BWFI), solución salina tamponada con fosfato, solución de Ringer y solución de dextrosa. Puede incluir también otros materiales deseables desde un punto de vista comercial y del usuario, incluyendo otros tampones, diluyentes, filtros, agujas y jeringas.

[0092] El kit puede comprender además directrices para la administración del compuesto de la presente invención y, si está presente, la segunda formulación farmacéutica. Por ejemplo, si el kit comprende una primera composición que comprende el compuesto de la presente invención y una segunda composición farmacéutica, el kit puede comprender además directrices para la administración simultánea, secuencial o separada de la primera y segunda composiciones farmacéuticas a un paciente con necesidad de las mismas.

[0093] En ciertas otras realizaciones en las que el kit comprende una composición de la presente invención y un segundo agente terapéutico, el kit puede comprender un recipiente para contener las composiciones separadas, tales como una botella dividida o un paquete de aluminio dividido, aunque, las composiciones separadas también pueden contenerse en un recipiente único no dividido. En ciertas realizaciones, el kit comprende directrices para la administración de los componentes separados. La forma del kit es particularmente ventajosa cuando los componentes separados se administran preferiblemente en formas de dosificación diferentes (por ejemplo, oral y parenteral), se administran a intervalos de dosificación diferentes, o cuando la titulación de los componentes individuales de la combinación es deseada por el profesional médico.

[0094] Por consiguiente, un aspecto adicional de la presente invención da a conocer un kit para tratar un trastorno o enfermedad mediados por quinasa Akt, en el que dicho kit comprende a) una primera composición farmacéutica que comprende el compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y b) instrucciones para el uso.

[0095] En ciertas realizaciones, el kit comprende además (c) una segunda composición farmacéutica, en el que la segunda composición farmacéutica comprende un segundo compuesto adecuado para el tratamiento de un trastorno

o enfermedad mediados por quinasa Akt. En cierta realización que comprende una segunda composición farmacéutica, el kit comprende además instrucciones para la administración simultánea, secuencial, o separada de dichas primera y segunda composiciones farmacéuticas a un paciente con necesidad de las mismas. En ciertas realizaciones, dicha primera y segunda composiciones farmacéuticas están contenidas en recipientes separados. En otras realizaciones, dicha primera y segunda composiciones farmacéuticas están contenidas en el mismo recipiente.

[0096] Aunque el compuesto de fórmula I es principalmente valioso como agente terapéutico para utilizar en mamíferos, también es útil cuando se requiere para controla proteína quinasas AKT, tirosina quinasas, serina/treonina quinasas adicionales, y/o quinasas de especificidad dual. De este modo, es útil como estándar farmacológico para utilizar en el desarrollo de nuevas pruebas biológicas y en la búsqueda de nuevos agentes farmacológicos.

[0097] La actividad del compuesto de la presente invención se puede analizar por las proteína quinasas AKT,, tirosina quinasas, serina/treonina quinasas adicionales, y/o quinasas de especificidad dual in vitro, in vivo, o en una línea celular. Los ensayos in vitro incluyen determinar la inhibición de la actividad quinasa. Ensayos in vitro alternativos cuantifican la capacidad del inhibidor de unirse a quinasas y se puede medir mediante radiomarcaje del inhibidor antes de la unión, el aislamiento del complejo inhibidor/quinasa y la determinación de la cantidad de radiomarcador unido, o mediante el desarrollo de un experimento de competición en el que se incuban nuevos inhibidores con radioligandos conocidos. Estos y otros ensayos in vitro y de cultivo celular son conocidos por los expertos en la materia.

[0098] Aunque la presente invención se ha descrito e ilustrado con un cierto grado de particularidad, se entiende que la presente memoria se ha realizado sólo a modo de ejemplo, y que los expertos en la materia pueden recurrir a numerosos cambios en la combinación disposición de las partes sin salir del espíritu y el alcance de la presente invención tal como se reivindica posteriormente.

EJEMPLO BIOLÓGICO

Ensayo de quinasa AKT-1

[0099] La actividad del compuestos descrito en la presente invención se puede determinar mediante el siguiente ensayo de quinasas, que mide la fosforilación de un péptido marcado fluorescentemente por AKT-1 activa recombinante humana de longitud completa mediante polarización fluorescente utilizando kit IMAP disponible comercialmente.

[0100] Los materiales de ensayos se obtienen de un kit IMAP AKT Assay Bulk Kit, producto #R8059, de Molecular Devices, Sunnyvale, CA. Los materiales del kit incluyen un tampón de reacción IMAP (5x). Un tampón de reacción IMAP contenía 10 mM Tris-HCl, pH 7,2, 10 mM MgCl2, BSA al 0,1%, NaN3 al 0,05%. Normalmente se añade DTT hasta una concentración final de 1 mM inmediatamente antes de su uso. También se incluye tampón de unión IMAP (5x), y reactivo de unión IMAP. La solución de unión se prepara como una dilución 1:400 del reactivo de unión IMAP en un tampón de unión IMAP.

[0101] El sustrato AKT marcado con fluoresceína (Crosstide) tiene la secuencia (Fl)-GRPRTSSFAEG. Una solución madre de 20 mM está formada en un tampón de reacción IMAP.

[0102] Las placas utilizadas incluían un Costar 3657 (382 pocillos fabricados de polipropileno y que tiene una base en forma de V blanca) que se utiliza para la dilución del compuesto y para la preparación de la mezcla compuesto-ATP. La placa de ensayo es un Packard ProxiPlate™-384 F.

[0103] La AKT-1 utilizada está formada de AKT-1 recombinante humana de longitud completa que está activada con PDK1 y MAP quinasa 2.

[0104] Para realizar el ensayo, se preparan soluciones madre de compuestos a 10 mM en dimetilsulfóxido ("DMSO"). Las soluciones madre y el compuesto de control se diluyen en serie 1:2 nueve veces en DMSO (10 !L de compuesto

+ 10 !L de DMSO) para dar serie de dilución de 50 veces sobre el intervalo de dosificación deseado. A continuación, se transfieren alícuotas de 2,1 !L de los compuestos en DMSO a una placa Costar 3657 que contenía 50 !L de ATP 10,4 !M en tampón de reacción IMAP (1x) que contenía DTT 1 mM. Después de mezclar con intensidad, se transfieren alícuotas de 2,5 !L a una placa ProxiPlate™-384 F.

[0105] El ensayo se inicia mediante la adición de alícuotas de 2,5 !L de una solución que contenía 200 nM de sustrato peptídico marcado con fluorescente y AKT-1 4 nM. La placa se centrífuga durante 1 minuto a 1000 g y se incuba durante 60 minutos a temperatura ambiente. A continuación, la reacción se detiene mediante la adición de 15 !L de solución de unión, se centrifuga de nuevo y se incuba durante 30 minutos adicionales a temperatura ambiente antes de leer en un contador Victor 1420 Multilabel HTS Counter configurado para medir la polarización de la fluorescencia.

[0106] El compuesto del ejemplo 1 se analizó en el ensayo anterior y se halló que tenía una IC50 inferior a 500 nM.

EJEMPLO PREPARATIVO

[0107] A efectos de ilustrar la presente invención, se incluye el siguiente ejemplo. Sin embargo, debe entenderse que este ejemplo no limita la presente invención y sólo pretende sugerir un método de realización de la presente invención. Los expertos en la materia reconocerán que las reacciones químicas descritas se pueden adaptar fácilmente a métodos alternativos para la preparación del compuesto de la presente invención y se estima que se encuentran dentro del alcance de la presente invención. Por ejemplo, la síntesis del compuesto de la presente invención se puede preparar de manera satisfactoria mediante modificaciones evidentes para los expertos en la materia, por ejemplo, mediante la protección apropiada de grupos de interferencia, mediante la utilización de otros reactivos adecuados conocidos en la técnica diferentes de los descritos, y/o mediante la realización de modificaciones de rutina de las condiciones de reacción. Alternativamente, se reconocerá que otras reacciones conocidas en la técnica tendrán la aplicabilidad para preparar el compuesto de la presente invención.

[0108] En el ejemplo descrito a continuación, a menos que se indique lo contrario, todas las temperaturas se establecen grados Celsius. Los reactivos se adquieren de proveedores comerciales, tales como Aldrich Chemical Company, Lancaster, TCI o Maybridge, y se utilizaron sin purificación adicional a menos que se indique lo contrario. Se adquirieron el tetrahidrofurano ("THF"), diclorometano ("DCM"), tolueno, y dioxano de Aldrich en botellas selladas Sure y se utilizaron como se recibieron.

[0109] Las reacciones indicadas a continuación se realizaron en general bajo una presión positiva de nitrógeno o argón o con un tubo de secado (a menos que se indique lo contrario) en disolventes anhidros y a los matraces de reacción se les ajustó habitualmente un septo de goma para la introducción de sustratos y reactivos a través de una jeringa. Los objetos de vidrio se secaron en un horno y/o se secaron con calor.

[0110] Los espectros de 1H RMN se registraron en un instrumento Varian que operaba a 400 MHz. Los espectros de 1H-RMN se obtuvieron como soluciones de CDCl3, CD3OD, D2O o d6-DMSO (indicados en ppm), utilizando tetrametilsilano (0,00 ppm) o disolvente residual (CDCl3: 7,25 ppm; CD3OD: 3,31 ppm; D2O: 4,79 ppm; d6-DMSO: 2,50 ppm) como patrón de referencia. Cuando se indican multiplicidad de picos, se utilizan las siguientes abreviaturas: s (singlete), d (doblete), t (triplete), m (multiplete), br (banda ancha), dd (doblete de dobletes), dt (doblete de tripletes). Las constantes de acoplamiento, cuando se proporciona, se indican en Hertz (Hz).

Ejemplo 1

[0111]

(S)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3((1R,4S)-4-metoxiciclohexilamino) propan-1-ona

10 [0112]

[0113] Etapa 1: Se enfrió hasta -78°C pulegenato de etilo (130 g, 662 mmol) en acetato de etilo ("EtOAc"; 900 mL)

utilizando un baño de hielo-isopropanol. Esta mezcla se sometió a ozonólisis hasta que la mezcla de reacción se

volvió de color violeta. En este punto, cesó la generación de ozono y la mezcla de reacción se extrajo del baño de

hielo seco. Se burbujeó oxígeno a través de la mezcla de reacción hasta que se volvió amarilla. La mezcla de 15 reacción se concentró al vacío, y el residuo resultante se disolvió en ácido acético glacial (400 mL). La solución se

enfrió hasta 0°C, y se añadió poco a poco polvo de Zn (65 g, 993 mmol) durante 30 minutos. A continuación, se dejó

agitar la mezcla de reacción durante 2 horas, en cuyo punto la mezcla de reacción se filtró a través de una

almohadilla de celite para eliminar el polvo de zinc. El ácido acético se neutralizó hasta un pH de 7 con NaOH y

NaHCO3 acuosos y se extrajo con éter (3 X 800 mL). Las fases orgánicas combinadas se secaron con solución 20 acuosa saturada de cloruro sódico, MgSO4 y se concentraron para producir 2-metil-5-oxociclopentanocarboxilato de

(2R)-etilo como un líquido (107 g, 95%).

[0114] Etapa 2: Se añadió KOH (8,3 g, 147,9 mmol) en agua (60 mL) a una solución de una mezcla de 2-metil- 5oxociclopentanocarboxilato de (2R)-etilo (20 g, 117,5 mmol) y tiourea (9,2 g, 120,9 mmol) en etanol (100 mL). La mezcla se puso a reflujo durante 10 horas. Después de enfriamiento, se extrajo el disolvente. El residuo resultante 25 se neutralizó con HCl concentrado (12 mL) a 0°C y a continuación se extrajo con DCM (3 X 150 mL). Se extrajo el

disolvente, y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía de gel de sílice, eluyendo con hexano/acetato de etilo (2:1) para producir (R)-2-mercapto-5-metil-6,7-dihidro-5Hciclopenta[d]pirimidin-4-ol (12 g, 56%). MS (APCI+) [M+H] +183.

5 [0115] Etapa 3: Se añadió Nickel Raney (15 g) y NH4OH (20 mL) a una suspensión de (R)-2-mercapto-5-metil-6,7dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-ol (12 g, 65,8 mmol) en agua destilada (100 mL). La mezcla se puso a reflujo durante 3 horas y a continuación se filtró. El filtrado se concentró para producir (R)-5-metil-6,7-dihidro-5Hciclopenta[d]pirimidin-4-ol (9,89 g, 99%). MS (APCI+) [M+H] +151.

10 [0116] Las etapas 4 y 5 describen una síntesis alternativa de of (R)-5-metil-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin4-ol, a partir de 2-metil-5-oxociclopentanocarboxilato de (R)-etilo.

[0117] Etapa 4: Se añadió acetato de amonio (240 g, 3114 mmol) a una solución de 2-metil-5oxociclopentanocarboxilato de (R)-etilo (106,0 g, 622,8 mmol) en MeOH (1,2 L). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno durante 20 horas, y la reacción se completó tal como se determina mediante 15 TLC y HPLC. La mezcla de reacción se concentró para eliminar el MeOH. El residuo resultante se disolvió en DCM, se lavó con H2O (2 veces), solución acuosa saturada de cloruro sódico (1 vez), se secó (Na2SO4), se filtró y se concentró para producir 2-amino-5-metilciclopent-1-encarboxilato de (R)-etilo (102 g, 97% de rendimiento) como un

aceite. LC/MS (APCI+) m/z 170 [M+H]+.

[0118] Etapa 5: Se calentó una solución que contenía 2-amino-5-metilciclopent-1-encarboxilato de (R)-etilo (161,6 g,

20 955 mmol) y formiato de amonio (90,3 g, 1433 mmol) en formamida (303,5 mL, 7640 mmol) hasta una temperatura interna de 150°C y se agitó durante 17 horas. La mezcla de reacción se enfrió y se transfirió a un matraz de cuello único de 2 L. A continuación, se extrajo el exceso de formamidina mediante destilación a vacío elevado. Una vez se detuvo la salida de formamidina, el aceite restante en el recipiente en reposo se disolvió en DCM y se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro sódico (3 X 200 mL). Los lavados de la fase acuosa combinados se extrajeron

25 con DCM. Los extractos orgánicos combinados se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron. El aceite resultante se disolvió en DCM mínimo, y esta solución se añadió utilizando un embudo separador a una solución agitada de éter (aproximadamente 5 volúmenes de éter frente a la concentración de DCM), provocando que se formara algo de precipitado. Este precipitado se extrajo mediante filtración a través de un embudo de vidrio fritado que se enjuagó con éter y se desechó. El filtrado se concentró, y la trituración a partir de éter se repitió dos veces

30 más. A continuación, el producto se secó en una línea de vacío elevado para producir (R)-5-metil-6,7-dihidro-5Hciclopenta[d]pirimidin-4-ol (93,23 g, 65,0% de rendimiento) como un sólido pastoso. LC/MS (APCI-) m/z 149,2.

[0119] Etapa 6: Se añadió lentamente POCl3 puro (463,9 mL, 5067 mmol) mediante un embudo de adición a una solución a 0°C de (R)-5-metil-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-ol (152,2 g, 1013 mmol) en DCE (1,2 L). Después de completar la adición, la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y a continuación se calentó a reflujo bajo agitación durante 70 minutos. La reacción se completó según se determina mediante HPLC. La 5 mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, y el exceso de POCl3 se desactivó en 4 partes de la siguiente manera: la mezcla de reacción se transfirió a un embudo separador y se hizo gotear en un vaso de prcipitados que contenía hielo y una solución saturada de NaHCO3 en un baño de hielo. Una vez se completó la adición de cada parte de la mezcla de reacción, la mezcla desactivada se agitó 30 minutos para asegurar la destrucción completa de POCl3 antes de transferirse al embudo separador. La mezcla se transfirió al embudo 10 separador y se extrajo con DCM (2 veces). Los extractos combinados se secaron (Na2SO4), se filtraron y concentraron. El crudo se purificó en gel de sílice de la siguiente manera: se emulsionó gel de sílice (1 kg) en hexano:acetato de etilo 9:1 en un embudo de vidrio fritado de 3 L, la sílice se fijó al vacío y se tapó con arena. El crudo se cargó con una mezcla de DCM/hexano y el compuesto se eluyó utilizando kitasatos de 1 L al vacío. Se eluyeron primero subproductos de Rf elevado, a continuación (R)-4-cloro-5-metil-6,7-dihidro15 5Hciclopenta[d]pirimidina (104,4 g, 61,09% de rendimiento) como un aceite. Se añadieron trietilamina (93,0 mL, 534 mmol) y piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (34,8 g, 187 mmol) a una solución de (R)-4-cloro-5-metil-6,7-dihidro5H-ciclopenta[d]pirimidina (30,0 g, 178 mmol) en n-BuOH (250 mL). La mezcla de reacción se calentó a reflujo bajo nitrógeno y se agitó durante la noche (17 horas), después de lo cual se concentró en un rotavapor. El aceite resultante se disolvió en DCM, se lavó con H2O, se secó (Na2SO4), se filtró y se concentró. El aceite resultante se

20 purificó en gel de sílice eluyendo primero con hexanos:acetato de etilo 2:1 hasta que se eluyó el producto de forma pura, a continuación un gradiente 1:1 a 1:5 de DCM:acetato de etilo para producir 4-(5-metil-6,7-dihidro-5Hciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de (R)-tertbutilo (42,0 g, 74,1% de rendimiento) como polvo. LC/MS (APCI+) m/z 319,1 [M+H]+.

[0120] Etapa 7: Se añadió poco a poco ácido m-cloroperbenzoico ("m-CPBA"; 23,9 g, 107 mmol) con un máximo del

25 77% en sólidos a una solución a 0°C de 4-(5-metil-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de (R)-tert-butilo (20,0 g, 62,8 mmol) en CHCl3 (310 mL). La mezcla de reacción se agitó durante 5 minutos, a continuación se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 90 minutos adicionales. El HPLC pareció similar después de 7,5 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta 0°C, y a continuación se añadieron NaHCO3 (13,2 g, 157 mmol) y otros 0,5 equivalentes de m-CPBA. La mezcla de reacción se agitó durante la noche (14

30 horas). La mezcla de reacción se enfrió hasta 0°C, y se añadieron gota a gota mediante un embudo de adición una solución de Na2S2O3 (29,8 g, 188 mmol) en H2O (50 mL). Continuación se añadió una solución de Na2CO3 (24,6 g, 232 mmol) en H2O (70 mL) mediante un embudo de adición (la mezcla se vuelve homogénea). La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos, y a continuación la mezcla se extrajo con CHCl3 (3 X 150 mL). Los extractos combinados se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron para producir (R)-4-(4-(tert-butoxicarbonil)piperazin

35 1-il)-5-metil-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidina 1-óxido (21,0 g, 100%). LC/MS (APCI+) m/z 335,1 [M+H]+.

[0121] Etapa 8: Se añadió Ac2O (77,0 mL, 816 mmol) a (R)-4-(4-(tert-butoxicarbonil)piperazin-1-il)-5-metil-6,7dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin 1-óxido (21,0 g, 62,8 mmol). La mezcla de reacción se calentó bajo nitrógeno en un baño de arena a 90°C y se agitó durante 100 minutos. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, y se extrajo el exceso de anhídrido acético mediante evaporación con rotavapor. El aceite resultante se disolvió en DCM, que a continuación se vertió con precaución en Na2CO3 saturado en hielo. La mezcla se extrajo con DCM, y los extractos combinados se secaron (Na2SO4), filtraron y concentraron para producir 4-(7-acetoxi-5-metil-6,7dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de (5R)-tert-butilo (23,6 g, 100%) como una espuma. LC/MS (APCI+) m/z 377,1 [M+H]+.

[0122] Etapa 9: Se añadió LiOH-H2O (6,58 g, 157 mmol) a una solución a 0°C de 4-(7-acetoxi-5-metil-6,7-dihidro-5H

10 ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de (5R)-tert-butilo (23,6 g, 62,69 mmol) en 2:1 THF:H2O (320 mL). La mezcla de reacción se agitó durante 10 minutos, y a continuación se calentó hasta temperatura ambiente. El LC/MS parecía el mismo a las 3 horas y 4,5 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta 0°C, y a continuación se le añadió NH4Cl saturado a la mezcla. La mezcla se agitó durante 5 minutos, y la mayoría del THF se extrajo mediante evaporación con rotavapor. La mezcla se extrajo con EtOAc (3 X 250 mL), y los extractos combinados se secaron

15 (Na2SO4), filtraron y concentraron. El crudo se paso por cromatografía flash en Biotage 65M:4:1 DCM:acetato de etilo, a continuación gradiente hasta 1:1 a 1:4 DCM:acetato de etilo. Una vez el producto se estaba eluyendo, entonces se pasó acetato de etilo por la columna. A continuación DCM:MeOH 30:1 eluyó el resto del producto (8,83 g). Las fracciones mezcladas se volvieron a pasar por cromatografía flash con Biotage 40M utilizando las mismas condiciones para producir otra parte (2,99 g), que produjo un rendimiento combinado de 4-(7-hidroxi-5-metil-6,7

20 dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de (5R)-tert-butilo (11,82 g, 56,38% de rendimiento) como una espuma. LC/MS (APCI+) m/z 335,1 [M+H]+.

[0123] Etapa 10: Se añadió gota a gota una solución de DMSO (5,45 mL, 76,8 mmol) en DCM (50 mL) mediante un

embudo de adición a una solución a -78°C de cloruro de oxalilo (3,35 mL, 38,4 mmol) en DCM (150 mL). La mezcla 25 de reacción se agitó durante 35 minutos, y a continuación se añadió lentamente una solución de 4-(7-hidroxi-5-metil

6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de (5R)-tertbutilo (9,17 g, 27,4 mmol) en DCM (80

mL) mediante un embudo de adición. La mezcla de reacción se agitó otra 1 hora a -78°C, después de lo cual se

añadió a la mezcla trietilamina pura (18,0 mL, 129 mmol). A continuación, la mezcla de reacción se dejó calentar

hasta temperatura ambiente, y a continuación se agitó durante 30 minutes. Se añadió H2O. La mezcla se extrajo con 30 DCM (3 X 200 mL), y los extractos combinados se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío. El crudo

se purificó en gel de sílice (Biotage 65M): por la la columna se pasó con aproximadamente 800 mL DCM:EtOAc 4:1,

a continuación un gradiente hasta DCM:acetato de etilo 1:1 hasta la elución del producto, a continuación

DCM:EtOAc 1:4 eluyó el producto para producir 4-(5-metil-7-oxo-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4

il)piperazina-1-carboxilato de (R)-tert-butilo (7,5 g, 82,3% de rendimiento) como una espuma. La espuma se 35 concentró a partir de DCM/hexanos (3 X), que también produjo una espuma. HPLC >95% área. LC/MS (APCI+) m/z

333 [M+H]+.

[0124] Etapa 11: Se añadieron trietilamina (4,33 mL, 31,1 mmol; desgaseada con nitrógeno 30 minutos antes de su uso) y ácido fórmico (1,36 mL, 36,1 mmol; desgaseado con nitrógeno 30 minutos antes de su uso) a una solución de 4-(5-metil-7-oxo-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de (R)-tert-butilo (9,75 g, 29,3 mmol) en DCM (210 mL; desgaseado con nitrógeno 30 minutos antes de su uso). La mezcla se agitó durante 5 5 minutos, y a continuación se añadió un catalizador de Ru (0,0933 g, 0,147 mmol). La mezcla de reacción se agitó bajo una presión positiva de nitrógeno durante la noche (18 horas). La mezcla de reacción se concentró a sequedad y se secó a vacío elevado. El material impuro se pasó por una Biotage 65M cargada con 500 mL de DCM:acetato de etilo 1:1, a continuación DCM:acetato de etilo 1:4 hasta el producto (2ª mancha), a continuación gradiente hasta acetato de etilo puro, a continuación DCM:MeOH 25:1 eluyó el resto del producto. Las fracciones se combinaron y

10 se concentraron mediante evaporación con rotavapor. El residuo se concentró de nuevo a partir DCM/hexanos para producir una mezcla de 4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (principal) y 4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1carboxilato de tert-butilo (menor) (9,35 g, 95,3% de rendimiento) como una espuma. LC/MS (APCI+) m/z 335 [M+H]+. 1H RMN (CDCl3) mostró un 88% de diastereoselectividad mediante la integración de metilcarbinol.

15 [0125] Etapa 12: Se añadió cloruro de 4-Nitrobenzoilo (4,27 g, 23,0 mmol) a una solución a 0°C de 4-((5R,7R)-7hidroxi-5-metil-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (7,0 g, 20,9 mmol) y trietilamina (4,38 mL, 31,4 mmol) en DCM (110 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche, después de lo cual se añadió NaHCO3 saturado. La mezcla se agitó 10 minutos, y a continuación se extrajo con DCM. Los extractos combinados se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron. El crudo se pasó

20 por Biotage 65M (crudo cargado con hexanos:acetato de etilo 3:1, a continuación 4-((5F,7R)-5-metil-7-(4nitrobenzoiloxi)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo eluido con hexanos:acetato de etilo 2:1 y algunas fracciones mezcladas). A continuación, se eluyó 4-((5R,7S)-5-metil-7-(4nitrobenzoiloxi)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo utilizando hexanos:acetato de etilo 1:2. Las fracciones con producto se concentraron mediante evaporación con rotavapor para

25 producir 4-((5R,7R)-5-metil-7-(4-nitrobenzoiloxi)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (8,55 g, 84,5% de rendimiento) como una espuma. LC/MS (APCI+) m/z 484 [M+H]+. 1H RMN (CDCl3) muestra un diastereómero único). Las fracciones con el otro diastereómero se concentraron mediante evaporación con rotavapor para producir 4-((5R,7S)-5-metil-7-(4-nitrobenzoiloxi)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (0,356 g, 3,52% de rendimiento) como una espuma. LC/MS (APCI+) m/z 484 [M+H]+.

[0126] La etapa 13 describe una preparación alternativa de 4-((5R,7S)-5-metil-7-(4-nitrobenzoiloxi)-6,7-dihidro-5Hciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo y 4-((5R, 7R)-5-metil-7-(4-nitrobenzoiloxi)-6,7-dihidro5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo a partir de 4-(7-hidroxi-5-metil-6,7-dihidro-5Hciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de (5R)-tert-butilo (Etapa 9).

[0127] Etapa 13: Se añadió cloruro de 4-nitrobenzoilo (15,78 g, 85,03 mmol) a una solución a 0°C de 4-(7-hidroxi-5metil-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de (R)-tert-butilo (25,85 g, 77,30 mmol) y NEt3 10 (11,73 g, 16,16 mL, 115,9 mmol) en DCM (400 mL). La mezcla de reacción se agitó durante 5 minutos. A continuación, la mezcla se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante la noche (17 horas), tras lo cual se añadió NaHCO3 saturado. La mezcla de reacción se agitó durante 10 minutos y se transfirió a un embudo separador. Las fases orgánicas se recogieron y los extractos acuosos se lavaron con DCM (2 X). Los extractor orgánicos combinados se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron. El crudo se pasó por sílice cargado con 15 hexanos:acetato de etilo 7:1 (gradiente hexanos:acetato de etilo 5:1 a hexanos:acetato de etilo 2:1 a hexanos:acetato de etilo 1:1). Se aislaron algunas fracciones puras de 4-((SR,7R)-5-metil-7-(4-nitrobenzoiloxi)-6,7dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo, algunas fracciones puras de 4-((5R7S)-5metil-7-(4-nitrobenzoiloxi)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo y algunas fracciones mixtas. Las fracciones mixtas se volvieron a pasar por columna y se combinaron con el material aislado

20 previamente para producir 4-((5R,7R)-5-metil-7-(4-nitrobenzoiloxi)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (14,27 g, 38%) y 4-((5R,7S)-5-metil-7-(4-nitrobenzoiloxi)-6,7-dihidro-5Hciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (12,58 g, 34%). Se ha observado que la utilización de cloruro de 4-bromobenzoilo ofrece una separación ligeramente mejor de los isómeros.

[0128] Etapa 14: Se añadió LiOH-H2O (0,499 g, 11,9 mmol) a una solución a 0°C de 4-((5R,7R)-5-metil-7-(4

25 nitrobenzoiloxi)-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (2,30 g, 4,76 mmol) en THF:H2O 2:1 (40 mL). La mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. Se extrajo el THF mediante evaporación con rotavapor. A continuación, se añadió NaHCO3 saturado, y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. Los extractos combinados se lavaron (1 vez) con NaHCO3 saturado, se secaron (Na2SO4), se filtraron, y concentraron para producir 4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (1,59 g, 100,0% de rendimiento) como una espuma. El HPLC después de la purificación del producto produjo un área de pureza superior al 98%. LC/MS (APCI+) m/z 335 [M+H]+.

[0129] Etapa 15: Se añadió HCl 4M/dioxano (11,2 mL, 44,9 mmol) a una solución de 4-((SR,7R)-7-hidroxi-5-metil

5 6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de tert-butilo (0,600 g, 1,79 mmol) en dioxano (15 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno durante la noche (20 horas). La mezcla se concentró hasta sequedad y se secó en una línea de vacío elevado. El crudo se suspendió en éter, se sonicó y se agitó durante 5 minutos. Los sólidos se aislaron mediante filtración a través de un embudo de vidrio fritado con presión de nitrógeno, se enjuagó con éter, se secó bajo presión de nitrógeno, y se secó adicionalmente en una línea

10 de vacío elevado para producir diclorhidrato de (5R, 7R)-5-metil-4-(piperazin-1-il)-6,7-dihidro-5H

[0130] Etapa 16: Se añadió cloruro de trimetilacetilo (1,68 g, 13,9 mmol) a una solución de ácido 2-(4-cloro-3fluorofenil)acético (2,50 g, 13,3 mmol) y TEA (d. 0,726; 2,00 mL, 14,3 mmol) en THF anhidro (100 mL) a 0°C y se agitó a temperatura ambiente. En un matraz separado, se añadió n-BuLi (6,424 mL, 14,58 mmol) a (R)-415 benziloxazolidin-2-ona (2,47 g, 13,9 mmol) en THF anhidro (100 mL) a -78°C. La mezcla de reacción se agitó durante 20 minutos a -78°C, y a continuación se añadió gota a gota la solución de (R)-4-benziloxazolidin-2-ona a la solución de anhídrido mixto a 0°C. La mezcla de reacción se dejó agitar durante la noche a temperatura ambiente. La reacción se detuvo con agua (100 mL) y se diluyó con acetato de etilo (100 mL). Las fases se separaron, y los extractos orgánicos se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron (MgSO4) y se

20 concentraron hasta un residuo. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía flash para producir (R)-4benzil-3-(2-(4-cloro-3-fluorofenil)acetil)oxazolidin-2-ona (2,79 g, 8,02 mmol, 60,5% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 7.37 (t, J= 8.2Hz, 1H), 7.33-7.26 (m, 3H), 7.18-7.12 (m, 3H), 7.07 (d, J= 8.2Hz, 1H), 4.73-4.65 (m, 1H), 4.33-4.18 (m, 4H), 3.27 (dd, J1 = 3.5Hz, J2= 13.3Hz, ,1H), 2.77 (dd, J1 = 9.4Hz, J2= 13.7Hz, 1H).

[0131] Etapa 17: Se suspendió clorhidrato de (1r,4r)-4-aminociclohexanol (6,67 g, 44 mmol) en DCM (100 mL). A

25 continuación se añadió la base de Huning (15 mL), seguido de la adición de 4-dimetilaminopiridina ("DMAP") catalítica. La mezcla de reacción se agitó durante 5 minutos, y a continuación se añadió poco a poco Boc2O (10,2 g, 47 mmol) durante 10 minutos. A continuación, se dejó agitar la mezcla de reacción durante la noche a temperatura ambiente. La reacción se detuvo mediante la adición de HCl 1N y se dejó agitar durante 10 minutos. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se lavó con DCM (2 veces). A continuación, los extractos orgánicos combinados

30 se secaron con una solución acuosa saturada de cloruro sódico y MgSO4 y se concentraron. El residuo resultante se suspendió en hexanos (extracción del exceso de Boc2O) y se filtró. El material deseado se obtuvo como un (1r,4r)-4hidroxiciclohexilcarbamato de tert-butilo sólido (5,1 g, 54% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 4.35 (br s, 1H), 3.65-3.52 (m, 1H), 3.43 (br s, 1H), 1.99 (triplete aparente, J1 = 17.2Hz, J2= 12.1Hz, 4H), 1.49-1.30 (m, 12H), 1.4-1.08 (m, 2H).

5 [0132] Etapa 18: Se añadió NEt3 (d. 0,726; 4,95 mL, 35,5 mmol) a temperatura ambiente a una solución de (1r,4r)-4hidroxiciclohexilcarbamato de tert-butilo (5,1 g, 23,7 mmol) en DCM (100 mL) y se agitó como una suspensión. La mezcla de reacción se agitó durante 10 minutos seguido de la adición de trifluorometanosulfonato de tertbutildimetilsililo (6,52 mL, 26,1 mmol), tras lo cual la mezcla de reacción se volvió como una solución homogénea y se agitó durante 2 horas. La mezcla de reacción se diluyó con (50 mL) y las fases se separaron. Las fases orgánicas

10 se lavaron con HCl 1N (2 X 50 mL), se secaron (MgSO4) y se concentraron hasta un sólido. El sólido se purificó mediante cromatografía flash (5% acetato de etilo/hexanos) para producir (1r,4r)-4-(tertbutildimetilsililoxi)ciclohexilcarbamato de tert-butilo (6,54 g, 19,8 mmol, 83,8% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 4.34 (br s, 1H), 3.61-3.50 (m, 1H), 3.4 (br s, 1H), 1.97 (d, J= 12.9Hz, 2H), 1.82 (d, J= 13.7Hz, 2H), 1.44 (s,

15 [0133] Etapa 19: Se enfrió hasta -78°C una solución de (1r,4r)-4-(tertbutildimetilsililoxi)ciclohexilcarbamato de tertbutilo (1,00 g, 3,03 mmol) en THF anhidro (50 mL). A continuación, se añadió n-BuLi (1,27 mL, 3,19 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 20 minutos con calentamiento hasta -40°C. A continuación, se añadió de forma rápida y gota a gota clorometil metil éter (d=1,060; 0,254 mL, 3,34 mmol). Se extrajo el baño frío, y la mezcla de reacción se agitó con calentamiento bajo nitrógeno. La reacción se detuvo con agua, y el trabajo final extractivo y la

20 purificación mediante cromatografía flash (acetato de etilo al 5%/hexanos) produjeron (1r,4r)-4-(tertbutildimetilsililoxi)ciclohexil(metoximetil)carbamato de tert-butilo (0,957 g, 2,36 mmol, 84% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 4.69 (br s, 1H), 3.85-3.47 (m, 1H), 3.27 (s, 3H), 1.90 (d, J= 10.5Hz, 2H), 1.79 (d, J= 12.9Hz, 2H), 1.67-1.50 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.46-1.30 (m, 4H), 0.88 (s, 9H), 0.04 (s, 6H).

[0134] Etapa 20: Se añadió fluoruro de tetrabutilamonio (8,94 mL, 8,94 mmol) a una solución de (1r,4r)-4-(tert

25 butildimetilsililoxi)ciclohexilcarbamato de tert-butilo (1,97 g, 5,96 mmol) en THF (50 mL) y se calentó hasta 40°C durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con agua (100 mL) y acetato de etilo (100 mL). A continuación, se separaron las capaz, y los extractos orgánicos se secaron (MgSO4) y concentraron hasta un aceite. El aceite se purificó mediante cromatografía flash (25% acetato de etilo/hexanos) para producir (1r,4r)-4hidroxiciclohexil(metoximetil)carbamato de tert-butilo (1,32 g, 5,09 mmol, 85% de rendimiento).

[0135] Etapa 21: Se añadió NaH (60% en aceite; 0,563 g, 14,07 mmol) a una solución de (1r,4r)-4hidroxiciclohexil(metoximetil)carbamato de tert-butilo (3,65 g, 14,07 mmol) en THF (50 mL) y se calentó hasta 40°C. Se añadió yoduro de metilo (0,878 mL, 14,07 mmol) a la solución caliente en agitación y se calentó hasta 60°C durante la noche. La reacción se detuvo con agua (100 mL) y se diluyó con acetato de etilo (100 mL). A continuación, se separaron las capas. Los extractos orgánicos se secaron (MgSO4) y concentraron. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía flash (10% acetato de etilo/hexanos) para producir (1r,4r)-4metoxiciclohexil(metoximetil)carbamato de tert-butilo (3,51 g, 12,8 mmol, 91 % de rendimiento).

10 [0136] Etapa 22: Se añadió TiCl4 (0,207 g, 1,09 mmol) a una solución enfriada a -78°C de (R)-4-benzil-3-(2-(4-cloro3-fluorofenil)acetil)oxazolidin-2-ona (0,362 g, 1,04 mmol) y (1r,4r)-4-metoxiciclohexil(metoximetil) carbamato (0,55 g, 2,01 mmol) en DCM seco (20 mL). Se añadió diisopropiletilamina ("DIEA"; d 0,742; 0,199 mL, 1,15 mmol) a esta solución en agitación fría. La mezcla de reacción se agitó durante 15 minutos a -78°C y a continuación se calentó hasta -10°C y se agitó durante 3 horas. La reacción se detuvo con NH4Cl. La reacción se diluyó con DCM (50 mL) y

15 agua (50 mL). A continuación, se separaron las fases. La fase acuosa se extrajo con DCM (25 mL), se secó (MgSO4) y se concentró hasta un aceite. El aceite se purificó mediante cromatografía en columna (10% Et2O/hexanos hasta 30% Et2O/hexanos para producir (S)-3-((R)-4-benzil-2-oxooxazolidin-3-il)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-3-oxopropil((1r,4S)4-metoxiciclohexil)carbamato de tert-butilo (0,610 g, 1,04 mmol, 99,5% de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 7.38-7.28 (m, 4H), 7.25-7.15 (m, 3H), 7.10 (d, J= 8.6Hz, 1H), 4.65-4.56 (m, 1H), 4.15-4.03 (m, 2H), 3.60-3.36 (m,

20 2H), 3.31 (s, 3H), 3.15-2.95 (m, 1H), 2.12-1.97 (m, 3H), 1.69-1.57 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.46-1.37 (m, 3H), 1.37-1.07 (m, 4H).

[0137] Etapa 23: Se añadió H2O2 (0,294 mL, 3,06 mmol) a una solución de LiOH-H2O (0,0855 g, 2,04 mmol) en THF/agua (2:1, 83 mL). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. La solución se enfrió hasta 0°C y se trató con una solución de (S)-3-((R)-4-benzil-2-oxooxazolidin-3-il)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-3oxopropil((1r,4S)-4-metoxiciclohexil)carbamato de tert-butilo (0,600 g, 1,019 mmol) en THF (10 mL). La mezcla de 5 reacción se agitó a 0°C durante 2 horas y a continuación se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se enfrió hasta 0°C y se trató con Na2SO3 1M (10 mL) y se agitó durante 10 minutos. A continuación, la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 10 minutos. La mezcla de reacción se concentró y se extrajo con acetato de etilo (2 X 20mL). La parte acuosa se acidificó con HSO4 (s) hasta un pH de aproximadamente 1 a aproximadamente 2 y a continuación se extrajo con

10 DCM (2 X 20 mL). Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron (MgSO4) y se concentraron. El residuo resultante proporcionó el ácido (S)-3-(tert-butoxicarbonil((1r,4S)-4-metoxiciclohexil)amino)-2-(4-cloro-3fluorofenil)propanoico (0,312 g, 0,726 mmol, 71% de rendimiento). LC/MS>95% de pureza, tiempo de retención = 3,25 minutes, (APCI+) m/z = 430 [M+H] +.

[0138] Etapa 24: Se añadieron diclorhidrato de (5R,7R)-5-metil-4-(piperazin-1-il)-6,7-dihidro-5H

15 ciclopenta[d]pirimidin-7-ol (0,236 g, 0,768 mmol), hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’tetrametiluronio ("HATU"; 0,265 g, 0,698 mmol) y colidina (0,369 mL, 2,79 mmol) a una solución de ácido (S)-3-(tertbutoxicarbonil((1r,4S)-4-metoxiciclohexil)amino)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)propanoico (0,300 g, 0,698 mmol) en DCM/DMF (15 mL, 2:1), y la mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se separó entre agua (20 mL) y DCM (50 mL), y se separaron las fases. La fase orgánica se lavó con agua

20 (2 X 10 mL). La fase acuosa se retroextrajo con DCM (25 mL), se secó (MgSO4) y se concentró hasta un aceite. El aceite se purificó mediante cromatografía en columna (5% MeOH/DCM) para producir (S)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-3(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-oxopropil ((1r,4S)-4metoxiciclohexil)carbamato de tert-butilo (0,394 g, 0,610 mmol, 87,4% de rendimiento). LC/MS > 95% de pureza, tiempo de retención = 3,83 minutos, (APCI+) m/z = 646.

[0139] Etapa 25: Se añadió HCl 4 N en dioxano (4 mL, 16 mmol) a una solución de (S)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-3-(4((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-oxopropil((1r,4S)-4metoxiciclohexil)carbamato de tert-butilo (0,370 g, 0,573 mmol) en DCM (10 mL), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. El contenido de la mezcla de reacción se añadió gota a gota a una mezcla

5 agitada de forma vigorosa de Et2O/hexano (75 mL, 3:1) produciendo un sólido como partículas finas. Las partículas se filtraron y se secaron para producir diclorhidrato de (S)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-((1r,4S)-4-etoxiciclohexilamino)propan1-ona (0,325 g, 0,525 mmol, 91,7% de rendimiento). LC/MS > 95% de pureza, tiempo de retención = 2,52 minutos, (APCI+) m/z = 546.

10 [0140] La descripción anterior se considera como ilustrativa sólo de los principios de la invención. Además, dado que serán fácilmente evidentes numerosas modificaciones y cambios para los expertos en la materia, no se desea limitar la invención a la construcción exacta y el proceso mostrado descrito anteriormente. Por consiguiente, todas las modificaciones y equivalentes adecuados se pueden considerar en el alcance de la presente invención tal como se

15 define por las siguientes reivindicaciones.

[0141] Las palabras "comprender" , "que comprende", "incluir", “que incluye” e “incluye”, cuando se utilizan en esta memoria y en las siguientes reivindicaciones, pretenden especificar la presencia de características, números enteros, componentes o etapas indicadas, pero no excluyen la presencia o adición de una o más de otras

20 características, números enteros, componentes, etapas o grupos.

Claims (11)

1. REIVINDICACIONES

   1. Compuesto de fórmula I:

2. 2.

   (S)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-dihidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)5 3-((1R,4S)-4-metoxiciclohexilamino) propan-1-ona.

3. 3. Composición farmacéutica que comprende un compuesto según las reivindicaciones 1 ó 2.

4. 4.

   Compuesto, según las reivindicaciones 1 ó 2, para utilizar como medicamento en el tratamiento de patologías 10 mediadas por proteína quinasa AKT.

5. 5. Compuesto, según la reivindicación 4, para utilizar como medicamento, en el que dicha enfermedad o trastorno es una enfermedad o trastorno inflamatorio, hiperproliferativo, cardiovascular, neurodegenerativo, ginecológico o dermatológico.
6. 6. Compuesto, según la reivindicación 1 ó 2, para utilizar en la inhibición de la producción de proteína quinasa AKT en un mamífero.

7. 7.

   Compuesto, según la reivindicación 1 ó 2, para utilizar en la inhibición de la actividad de proteína quinasa AKT en 20 un mamífero.

8. 8. Utilización de un compuesto, según la reivindicación 1 ó 2,en la fabricación de un medicamento para terapia.

9. 9.

   Compuesto, según la reivindicación 1 ó 2, para utilizar en el tratamiento de una enfermedad hiperproliferativa. 25

10. 10.

    Compuesto, según la reivindicación 1 ó 2, para utilizar en el tratamiento del cáncer.

11. 11.

    Kit para tratar una patología mediada por proteína quinasa AKT, en el que dicho kit comprende:

    30 a) una primera composición farmacéutica que comprende un compuesto según la reivindicación 1 ó 2; y b) opcionalmente las instrucciones para su uso.