CN1786023A - 灵芝多糖肽标准品及其制备方法与应用 - Google Patents

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CN1786023A CN 200510019176 CN200510019176A CN1786023A CN 1786023 A CN1786023 A CN 1786023A CN 200510019176 CN200510019176 CN 200510019176 CN 200510019176 A CN200510019176 A CN 200510019176A CN 1786023 A CN1786023 A CN 1786023A
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王赛贞
林志彬
刘梅英
李宝棣
林树钱
刘斌
曹琦珍
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FUZHOU IBIOO PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY RESEARCH INSTITUTE
LVGU PHARMACEUTICAL CO Ltd XI'AN
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LVGU PHARMACEUTICAL CO Ltd XI'AN
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Abstract

本发明提供了一种多糖肽标准品及其制备方法与应用。所说的多糖肽标准品以灵芝(Ganoderma lucidum)为原料母体提取液，将其浓缩，离心，透析而截留高分子量的多糖肽GL－PP，而后将高分子量多糖肽GL－PP进一步分离、纯化而得到。所述的灵芝多糖肽标准品可用于测定灵芝或灵芝孢子的产品多糖肽含量，从而提高灵芝产品的质量。

Description

灵芝多糖肽标准品及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及一种灵芝多糖肽标准品。同时，本发明还涉及一种灵芝多糖肽标准品的制备方法及其在灵芝或灵芝孢子制品中含量测定的应用。
背景技术
现有技术普遍认为灵芝、灵芝孢子产品中多糖含量的测定以葡萄糖为标准品。其采用硫酸蒽酮溶液，紫外分光光度法测定，含灵芝多糖以无水葡萄糖(C6H12O6)计，而忽视有药用价值的多糖肽活性成分的含量。特别是灵芝精粉生产工艺过程中，往往在灵芝提取液中加入淀粉，或其它淀粉类辅料，使该法无法排除干扰，造成灵芝产品的多糖含量偏高的问题，从而影响了灵芝产品的质量提高。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足之处，而提供一种可用于检测灵芝和灵芝孢子产品中多糖肽含量、从而可提高灵芝产品质量的灵芝多糖肽标准品。
本发明的另一个目的在于提供一种制备灵芝多糖肽标准品的制备方法。
本发明的目还在于提供一种灵芝多糖肽标准品在检查灵芝产品质量中的应用。
本发明提供了一种灵芝多糖肽标准品，该灵芝多糖肽GL-PPT标准品由下述法制备获得：首先是获得含有高分子量的多糖肽溶液(其制备的详细方法请参见申请人的另一份专利文件—申请号：200410014681.3)其是以灵芝为原料进行水提取，将提取液浓缩离心，用无水乙醇沉淀，沉淀用水溶解，透析，截留(Gamoderma LucidumPolysaccharide Peptide简称GL-PP)。再通过进一步分离与纯化，而得到在毛细管电泳中呈多糖对称峰的灵芝多糖肽GL-PPT标准品，其具有下述的理化及生物性质：
1.形状：浅褐色至褐色粉末状
2.分子量：相对分子质量(Mr)为20万～40万
3.灵芝多糖与肽结合不分离，其结构中的单糖主要以β-型糖苷键连接，另有少数量以α-糖苷键连接
4.多糖肽的糖链和肽链的连接性质为O-糖苷键连接。在温和条件下的稀碱水解，可以把与肽链上丝氨酸或苏氨酸的羟基相连的单糖或链水解下来。
5.经毛细管电泳测多糖呈对称峰，因此说明该标准品是纯的：(见图1)
6.红外光谱(IR)：红外光谱(IR)，通过400-4000cm-1扫描，GL-PPT组分分析表明，具有多糖吸收峰，分别为3385cm-1，2931cm-1，1647cm-1，1385cm-1和1074cm-1等多糖吸收峰，其中3385cm-1为强宽峰分子中羟基形成多种氢键所致的强吸收峰，在(891±7)cm-1处有吸收峰，这表明该糖肽具β-D葡萄糖苷键(见图2)。
7.1H-核磁共振谱(1HNMR)：多糖的信号多数在δ4.0-5.5ppm范围，β型的多糖小于5.0ppm。灵芝多糖肽δ4.21ppm处具有宽的异头碳信号，说明这是D-葡萄糖残基的构象(见图3)。
8.13C-核磁共振谱(13C NMR)：灵芝多糖肽化学位移103.8→70.2ppm，表明有β-(1→6)；103.8→86.7ppm，表明有β-(1→3)；103.8-80.1ppm，表明有β-(1→4)存在，β-(1→4)连接还有δ81.0处的信号；103-105ppm为甘露糖和杂多糖等单糖构型和构象(见图4)
9.灵芝多糖肽中糖与肽连接性质：在温和条件下，用稀碱水解，可以把与肽链上丝氨酸或苏氨酸的羟基相连的单糖或链水解下来，说明灵芝多糖肽中糖与肽为O-糖苷键连接。(见图5.1，5.2)
一般认为灵芝主要活性成分为灵芝多糖，由于现有技术中还没有意识到灵芝多糖与肽牢固结合存在的现实。自然不可能把它作为检测与控制它的质量指标。本发明首先确定该化合物存在，提取该化合物做药理实验，证明它是活性成分后，又寻找应用这个化合物GL-PPT来鉴别与控制灵芝产品的质量方法，从而可提高被测产品的的质量。这种以多糖肽为标准品，在现有灵芝多糖的研究中未见记载。
现有技术中从灵芝提取的多糖有白色和淡黄色，分子量有高有低之分，一般在近万到十几万范围内，而本发明所获得多糖肽，从颜色上从淡褐色至褐色，分子量都比现有的多糖高。
本发明提供了一种制造灵芝多糖肽GL-PPT标准品的方法，该方法包括下述顺序的步骤：
(1)以灵芝为原料母体提取液，浓缩、离心、透析、截留而获得的含有高分子量多糖肽(GL-PP)，用浓度为1％的灵芝多糖肽GL-PP溶液，在不断搅拌中缓慢加入或无水乙醇、或甲醇、或丙酮至原体积的一半、静置过夜，用3000-4000r/min离心，得GL-PP-1沉淀，再用或无水乙醇、或丙酮、或乙醚、或者它们的混合物洗涤该沉淀，并冷藏干燥。
(2)取步骤1所得的1％GL-PP-1溶液，3℃-5℃冷藏12个小时以上，次日对此溶液进行离心、弃去沉淀，取清液加2～4倍量无水乙醇或甲醇或丙酮沉淀，离心灵芝多糖肽，再用或无水乙醇、或丙酮、或乙醚、或者它们的混合物洗涤该沉淀，冷藏干燥，得GL-PP-2灵芝多糖肽。
(3)取GL-PP-2，加1∶20水溶解，3℃-5℃冷藏12个小时以上，次日过DEAE-纤维素柱分离，分别用水，0.1mol/LNaCl和0.5mol/LNaCl及1mol/L NaCl先后洗脱，收集0.5mol/L NaCl洗脱部分，流水透析12～48h，蒸馏水透析4～12h，袋内液浓缩，冷冻干燥，得浅褐色至褐色粉末状物质为灵芝多糖肽GL-PPT标准品。
在制造方法步骤2中的离心优选转速12000r/min离心10～40分钟。
当需要进一步提高标准品GL-PPT的纯度时，可重复上述的第3步骤。
本发明提供了一种灵芝多糖肽GL-PPT标准品在测定灵芝或灵芝孢子产品质量中的应用。
本发明灵芝多糖肽GL-PPT标准品在测定灵芝药材活性成分-灵芝多糖肽中的应用，以灵芝多糖肽计，灵芝药材多糖肽不得少于0.15％。
本发明灵芝多糖肽GL-PPT标准品在测定药准字《双灵固本散》中的应用，其质量应控制以灵芝多糖肽计，2g不得少于0.05g。
附图说明
图1为灵芝多糖肽的多糖毛细管电泳图
图2为GL-PPT红外光谱图
图3为GL-PPT 1H核磁共振图
图4为GL-PPT 13C核磁共振图
图5.1为稀碱水解前紫外光谱扫描图
图5.2为稀碱水解后紫外光谱扫描图
图6为灵芝多糖肽紫外光谱扫描图
图7为灵芝多糖肽标准曲线图
具体实施方式
通过下面给出的本发明的具体实施例以及比较实施例可以进一步清楚地了解本发明。但它们不是对本发明的限定。
实施例1
(一)制造灵芝多糖肽GL-PPT标准品的方法
1.将以灵芝为原料母体提取液，浓缩、离心、透析、截留而获得的含有高分子量的灵芝多糖肽。取浓度为1％的灵芝多糖肽GL-PP溶液，在不断搅拌中缓慢加入无水乙醇至原体积的一半、静置过夜，用4000r/min离心20分钟，得GL-PP-1沉淀，分别用乙醇、丙酮、乙醚洗涤该沉淀，并冷藏干燥。
灵芝多糖肽(GL-PP)溶液是经由下述方法制备而成的：(详细的请参见申请人的另一份中国专利申请：2004100146813)
1)、挑选段木或袋栽灵芝，将灵芝干品子实体清洁后，烘干，用粗颗粒粉碎机破碎成10-20目左右的烟丝状物质。
2)、称取300克的已经粉碎的烟丝状灵芝，用95％的乙醇3000-4000毫升回流3小时，回收乙醇，干燥灵芝丝状物。采用灵芝丝状物∶热水＝1∶15的比例对灵芝丝状物进行热水回流提取3次，时间分别为2.5小时、2小时、1小时，合并过滤后的水提取液。
3)、在60-90℃的温度下浓缩水提取液至原体积的十分之一，再用速度为3000-4000r/min，时间为15-30min的离心机进行离心分离，将上清液浓缩至相当于每毫升含灵芝生药量1克为标准。
4)、用三倍量的95％乙醇沉淀浓缩液，搅拌，冷藏静置得第一沉淀物。将第一沉淀物溶于适量的蒸馏水，将此溶液用2-3倍量的无水乙醇或甲醇或丙酮沉淀，搅拌，冷藏静置24小时得第二沉淀物，将第二沉淀物再离心冷藏干燥得多糖肽粗制品。
5)、将4)糖肽溶于蒸馏水，放置于透析袋内，逆流透析48小时得透析液，将透析液在60-90℃下浓缩，离心而得浓缩液。
6)、用三倍量于浓缩液的无水乙醇处理浓缩液，得多糖肽沉淀，将多糖肽沉淀用无水乙醇，丙酮和乙醚各洗涤3次，用速度为3000-4000r/min，时间为10-20min的离心机进行离心分离，弃上清液，取沉淀物于冷藏干燥即得灵芝多糖肽(GL-PP)，该灵芝多糖肽的重均分子量MW在45万-54万之间，多糖肽呈黄褐色至褐色粉末状，其多糖组成为鼠李糖、木糖、果糖、半乳糖、葡萄糖，且各糖摩尔比为0.549∶3.614∶3.167∶0.556∶6.89。
2.取步骤1所得的1％GL-PP-1溶液，冷藏过夜，次日用12000r/min离心20分钟，弃去沉淀，取清液加3倍量无水乙醇沉淀多糖肽，分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤沉淀，冷藏干燥，得GL-PP-2多糖肽。
3.取GL-PP-2，加1∶20水溶解，冷藏过夜，次日过DEAE-纤维素柱分离，分别用水，0.1mol/L NaCl和0.5m0l/L NaCl及1mol/L NaCl先后洗脱，收集0.5mol/L NaCl洗脱部分，流水透析16h，蒸馏水透析4h，袋内液浓缩，冷冻干燥，得浅褐色至褐色粉末物质为标准品GL-PPT。
该标准品在检糖的同时又检肽，证明糖肽不分离。通过分离、纯化所得GL-PPT多糖肽中多糖，经毛细管电泳(CE)测定其多糖呈对称峰，说明该标准品是纯的。
(二)以GL-PPT作为标准品检测灵芝产品的方法
1.检测条件试验
1.1波长的选择：以0.25％GL-PPT在紫外分光光度计上扫描(900～450nm)，其最大吸收峰处在761.50nm上，吸收值为0.509。因此，检测吸收波长选择为760nm(见图6)。
1.2供试液的制备
1.2.1灵芝供试液的制备：准确称取粉碎的灵芝子实体5g置于100mL锥形瓶中，加入20倍体积蒸馏水，60℃下超声30min，冷却后过滤，得滤液①。滤渣再加入10倍体积蒸馏水，60℃下超声20min，冷却后过滤，得滤液②。滤渣再加入10倍体积蒸馏水，60℃下超声20min，冷却后过滤，得滤液③。合并①②③滤液，蒸发浓缩，4000rpm离心20分钟，定容100mL。精确量取定容液4mL，加12mL无水乙醇，10000rpm离心10min，沉淀加水溶解，定容于10mL。
1.2.2《双灵固本散》供试液的制备：随机抽取《双灵固本散》产品5～10袋，撤开混匀，按四分法逐级缩分2g左右，准确称取1g置于小烧杯中，加少许水混匀，移入100ml容量瓶，60℃超声溶解10分钟，冷却后，加水稀释至刻度。摇匀，过滤。精确量取4ml，加12ml无水乙醇搅匀，10000rpm离心10分钟，沉淀加水溶解并定容至10ml。
1.3制备供试液的条件试验
1.3.1超声时间的选择：
  序号   条件   结果(g/2g)
  123456   60℃水浴15min60℃超声5min60℃超声10min60℃超声15min60℃超声20min60℃超声30min   0.0710.0790.0830.0840.0850.089
1.3.2离心时间的选择：
  序号   离心时间(分钟)   结果(g/2g)
  123   102030   0.0820.0840.082
1.3.3用无水乙醇沉淀多糖肽时间的选择：
  序号   沉淀时间(小时)   结果(g/2g)
  1234   立即离心0.51.02.0   0.0700.0760.0710.071
  56   3.04.0   0.0730.071
结论：由上述试验结果可知，制备供试液的最佳条件为：在60℃超声10min，过滤后，滤液可立即离心，离心时间为10min。
2 检测方法(分光光度法)
2.1 供试液的制备
2.1.1灵芝供试液的制备：准确称取粉碎的灵芝子实体5g置于100mL锥形瓶中，加入20倍体积蒸馏水，60℃下超声30min，冷却后过滤，得滤液①。滤渣再加入10倍体积蒸馏水，60℃下超声20min，冷却后过滤，得滤液②。滤渣再加入10倍体积蒸馏水，60℃下超声20min，冷却后过滤，得滤液③。合并①②③滤液，蒸发浓缩，4000rpm离心20分钟，定容100mL。精确量取定容液4mL，加12mL无水乙醇，10000rpm离心10min，沉淀加水溶解，定容于10mL。
2.1.2《双灵固本散》供试液的制备：随机抽取《双灵固本散》产品5～10袋，撤开混匀，按四分法逐级缩分2g左右，准确称取1g置于小烧杯中，加少许水混匀，移入100ml容量瓶，60℃超声溶解10分钟，冷却后，加水稀释至刻度。摇匀，过滤。精确量取4ml，加12ml无水乙醇搅匀，10000rpm离心10分钟，沉淀加水溶解并定容至10ml。
2.2 改良Lowry法：
2.2.1原理：Lowry反应是双缩脲方法的发展，第一步涉及到在碱性溶液中铜-蛋白质复合物的形成，然后这个复合物还原磷钼酸-磷钨酸试剂(Folin氏试剂)，产生深蓝色(钼蓝和钨蓝混合物)。
2.2.2方法特点：
A.0.25％GL-PPT光谱扫描结果表明，其最大吸收峰处于760nm，故检测波长做了修改(原方法中检测波长为500nm)。
B.原方法中在加入(Folin氏试剂)后，于20～25℃保温30分钟，进行比色，其结果稳定性较差。经过反复实验结果表明，当加入Folin氏试剂后，于60℃保温30分钟，再进行比色，其结果稳定。
2.2.3操作方法
A.样品测定
取1mL供试液(约含20-250μg多肽)，加入5mL试剂甲，混匀，于20～25℃放置10分钟。再加入0.5mL试剂乙(Folin氏试剂)，立即振摇均匀，在60℃保温30分钟，然后于760nm处比色。以1mL水代替供试液做空白对照。
B.标准曲线的绘制
精确称取GL-PPT12.5mg，用70℃热水溶解，并定溶50ml。分别吸取0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL GL-PPT标品溶液(250μg/mL)，用水补足到1mL，然后按样品测定方法进行操作，测定光吸收值。以GL-PPT浓度为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线，作为定量的依据(见图7)。
C.Folin-酚试剂的配置(均用分析纯试剂)
试剂甲：由下述4种溶液配制。(1)4％碳酸钠(Na2CO3)溶液；(2)0.2mol/L氢氧化钠溶液；(3)1％硫酸铜溶液(CuSO4·2H2O)溶液；(4)2％酒石酸钾钠溶液(或酒石酸钾、酒石酸钠)。在使用前，将(1)与(2)等体积混和配成碳酸钠-氢氧化钠溶液，将(3)与(4)等体积配成硫酸铜-酒石酸钾钠溶液。然后将这两种溶液按50∶1的比例混合，即为Folin-酚试剂甲。该试剂只能用一天，过期失效。试剂乙(Folin氏试剂)：购于SIGMA公司产品。
3 试验结果
3.1 紫外光谱扫描图(见图6)。
3.2 标准曲线图：标准曲线用计算回归方程为r相关系数r为0.99957；线性范围在50～500μg/ml，其呈良好线性关系。(见图7)
3.3 稳定性试验(见表1)：
  样品ID   浓度(μg/ml)   显色后放置时间(h)   RSD(％)
  040901040401040504   174.934176.146177.078177.336177.965178.745154.826155.636156.030156.712156.977158.531175.199175.965176.624176.662177.518178.965   00.51.01.52.04.000.51.01.52.04.000.51.01.52.04.0   0.760.820.74
                                              表1：稳定性试验
由表1可见检测结果稳定，精确称取样品1g，按样品测定方法进行显色测定，每隔30分钟再测一次，持续2小时。连续测定三个样品，其RSD在0.74-0.82之间。将2小时内测定稳定的样品，延长至4小时，再度检测，依然稳定(见稳定性试验)。
3.4精密度试验(见表2)：
  样品ID   浓度μg/ml   RSD(％)
  040605040503040704   138.064138.263138.332138.385138.232152.383152.215152.620152.337152.368149.775149.201148.803149.079149.025   0.090.100.24
                                                        表2：精密度实验
由表2可见，精密度高，将待测液分别连续进样5次，RSD在0.09-0.24之间(n＝3)
3.5重现性实验(见表3)：
  样品ID   浓度μg/ml   RSD(％)
  040701040505040506   180.291175.639176.881176.730174.298180.443173.949173.919180.556177.79172.43569.59070.76070.40170.806   1.261.861.46
                                            表3：重现性实验
3.6回收率实验(见表4)
  原试样测定量(μg)   原试样加入标准物质后测定量(μg)   加入标准物质量(μg)   回收率(％)   平均回收率(％)   RSD(％)
  203.966197.150201.084201.012204.148   454.220450.014459.332459.332453.150   250250250250250   100.10101.15103.30103.3399.60 101.50 1.73
                                                     表4：回收率实验
结论：据上述试验结果表明，用GL-PPT作为标准品，检测《双灵固本散》中灵芝多糖肽含量的方法，其稳定性、精密度、回收率和重现性均符合要求，RSD分别为0.74-0.82％、0.09-0.10％、1.73％、1.26-1.86％。
(三)灵芝药材及其制品的多糖肽含量测定
1 GL-PPT用于灵芝药材活性成分多糖肽的检测，以多糖肽计，不得少于0.15％。
2 对于测定药准字《双灵固本散》质量标准应控制以多糖肽计，2g不得少于0.05g。
附20批《双灵固本散》多糖肽含量检测结果
  批号   结果(g/2g)   批号   结果(g/2g)
  031206040401040506040403040504040406040502021101040402040501   0.0770.0770.0700.0600.0880.0710.0800.0630.0610.077   040605040601040602040503040901040505040701040704040703040706   0.0680.0830.0700.0760.0880.0890.0890.0740.0850.084

Claims (9)

1.灵芝多糖肽GL-PPT标准品，其特征在于：以灵芝(Ganodermalucidum)为原料母体提取液，将其浓缩，离心，透析而截留高分子量的多糖肽GL-PP，而后将高分子量多糖肽GL-PP进一步分离、纯化而得到的灵芝多糖肽GL-PPT标准品，其具有下述的理化性质：
(1)形状：浅褐色至褐色粉末状
(2)分子量：相对分子质量(Mr)为20万～40万
(3)灵芝多糖与肽结合不分离，其结构中的单糖主要以β-(1→3)(1→6)(1→4)聚糖肽，另有少量以α-糖苷键连接存在。
(4)多糖肽的糖链和肽链连接性质为0-糖苷键连接。在温和条件下的稀碱水解，可以把与肽链上丝氨酸或苏氨酸的羟基相连的单糖或链水解下来。
(5)灵芝多糖肽GL-PPT标准品，其多糖在毛细管电泳(CE)中呈对称峰。
2.根据权利要求1所述的灵芝多糖肽GL-PPT标准品，其特征在于：红外光谱(IR)，用KBr压片400-4000cm-1扫描，GL-PPT组分分析表明，具有多糖吸收峰，分别为3385cm-1，2931cm-1，1647cm-1，1385cm-1和1074cm-1等多糖吸收峰，其中3385cm-1为强宽峰分子中羟基形成多种氢键所致的强吸收峰，在(891±7)cm-1处有吸收峰，这表明该糖肽具β-D葡萄糖苷键。
3.根据权利要求1所述的灵芝多糖肽GL-PPT标准品，其特征在于：1H核磁共振谱(1HNMR)：多糖的信号多数在δ4.0-5.5ppm范围，β型的多糖小于5.0ppm。灵芝多糖肽δ4.21ppm处具有宽的异头碳信号，说明这是D-葡萄糖残基的构象。
4.根据权利要求1所述的灵芝多糖肽GL-PPT标准品，其特征在核磁共振谱(13C NMR)多糖肽化学位移103.8→70.2ppm，表明有β-(1→6)；103.8→86.7ppm，表明有β-(1→3)；103.8-80.1ppm，表明有β-(1→4)；103-105ppm为甘露糖和杂多糖构型。
5.一种制造权利要求1所述的灵芝多糖肽GL-PPT标准品的方法，其特征在于：以灵芝(Ganoderma lucidum)为原料母体提取液，将其浓缩，离心、透析而截留高分子量的多糖肽GL-PP，而后将高分子量多糖肽GL-PP进一步分离、纯化为灵芝多糖肽GL-PPT标准品，所述的灵芝多糖肽标准品通过下述步骤制备：
(1)将以灵芝为原料母体提取液，浓缩、离心、透析、截留而获得的含有高分子量多糖肽(GL-PP)，用浓度为1％的灵芝多糖肽GL-PP溶液，在不断搅拌中缓慢加入或无水乙醇、或甲醇、或丙酮至原体积的一半、静置过夜，用3000-4000r/min离心，得GL-PP-1沉淀，再用或无水乙醇、或丙酮、或乙醚、或者它们的混合物洗涤该沉淀，并冷藏干燥。
(2)取步骤1所得的1％GL-PP-1溶液，3℃-5℃冷藏12个小时以上，次日对此溶液进行离心、弃去沉淀，取清液加2～4倍量无水乙醇或甲醇或丙酮沉淀，离心灵芝多糖肽，再用或无水乙醇、或丙酮、或乙醚、或者它们的混合物洗涤该沉淀，冷藏干燥，得GL-PP-2灵芝多糖肽。
(3)取GL-PP-2，加1∶20水溶解，3℃-5℃冷藏12个小时以上，次日过DEAE-纤维素柱分离，分别用水，0.1mol/LNaCl和0.5mol/LNaCl及1mol/L NaCl先后洗脱，收集0.5mol/LNaCl洗脱部分，流水透析12～48h，蒸馏水透析4～12h，袋内液浓缩，冷冻干燥，得浅褐色至褐色粉末状物质为灵芝多糖肽GL-PPT标准品。
6.根据权利要求5所述的灵芝多糖肽GL-PPT标准品的制备方法，其特征在于：所述的步骤2中的离心为转速12000r/min离心10～40分钟。
7.根据权利要求1所述的灵芝多糖肽GL-PPT标准品在测定灵芝或灵芝孢子的产品质量中的应用。
8.根据权利要求7所述的灵芝多糖肽GL-PPT标准品在测定灵芝药材活性成分-灵芝多糖肽中的应用，以灵芝多糖肽计，灵芝药材多糖肽不得少于0.15％。
9.根据权利要求7所述的灵芝多糖肽GL-PPT标准品在测定药准字《双灵固本散》中的应用，其质量应控制以多糖肽计，2g不得少于0.05g。
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