CN1723885A - 注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂、制备方法及其质量控制技术 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种注射用二乙酰氨乙二胺制剂、制备方法及其质量控制技术，制剂由二乙酰氨乙酸乙二胺、注射用水配制成注射液剂或冻干粉剂。注射用二乙酰氨乙酸乙二胺经临床应用不但对各种原因引起的出血，均有较好疗效。同时还能预防各种原因出血。

Description

注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂、制备方法及其质量控制技术

技术领域

本发明公布的是一种止血药的制备方法及质量控制技术，具体来说是注射用二乙酰氨乙二胺的制备方法及质量控制技术。

背景技术

人体内大约有5000毫升血液，当各种原因导致的出血量超过全身血容量的15％(约750毫升)时，患者就会出现头晕、软弱无力、口渴、肢体湿冷及血压偏低。当出血超过全身总血量的30％～50％(约1500～2500毫升)即可产生休克，表现为烦躁不安或神志不清、四肢湿冷、呼吸困难、血压减低(收缩压低于80毫米汞柱)、脉搏快而弱，如不及时给予治疗，将严重威胁患者的生命。在各种原因(劳动损伤、疾病、手术、创伤)引起出血时，及时应用药物止血是重要的措施之一。二乙酰氨乙酸乙二胺是临床应用安全有效的止血药，其作用机理为：(1)抑制纤溶酶原不能激活为纤溶酶，从而抑制纤维蛋白的溶解，产生止血作用。(2)促进血小板释放活性物质，增强血小板的聚集性和粘附性，缩短凝血时间，产生止血作用。(3)增强毛细血管抵抗力，降低毛细血管的通透性，从而减少出血。二乙酰氨乙酸乙二胺通过影响凝血过程各个环节产生止血作用，从而比以往单一作用的止血药更迅速、疗效更确切，可用于预防和治疗各种原因引起的出血。

发明内容

注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂，其特征在于按以下比例配制：

    二乙酰氨乙酸乙二胺          150~200g(按C₁₀H₂₂N₄0₆ 100％计)

    注射用水                    2000ml。

所述的注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂的制备方法，其特征在于：称取二乙酰氨乙酸乙二胺150~200g，至无菌容器中，加注射用水1000ml，搅拌溶解，加入活性炭吸附杂质，用0.45μm微孔滤膜装置过滤脱炭，补加注射用水至2000ml，再用灭菌的0.22μm微孔滤膜装置过滤，滤液分装即得注射液剂；将滤液低温冷冻干燥，得冻于粉制剂。

所述的制备方法，其特征在于：称取二乙酰氨乙酸乙二胺200g，至无菌容器中，加注射用水1000ml，搅拌溶解，加入0.25～0.1g活性炭，搅拌30分钟，用0.45μm微孔滤膜装置过滤脱炭，补加注射用水至2000ml，再用灭菌的0.22μm微孔滤膜装置过滤，滤液检查合格后分装即得注射液剂；将滤液低温冷冻干燥，采用一次升华干燥法，在药品冷冻干燥机内进行，将预先处理好的制品溶液在干燥室内预冷冻，预冻温度为-25℃～-45℃，预冻时间为2～6小时，同时将冷藏室内温度下降至-50℃，启动真空泵，待真空度达到10mmHg以下后，缓缓打开阀门，当干燥室内真空度达0.1mmHg以下关闭冷冻机，缓缓加温至-20℃，维持此温度20～30小时，待水份蒸发余烬，缓缓升温，在40℃转入再干燥，再干燥时间为3～10小时，整个干燥过程总用时为25～46小时，即得冻干制剂。

所述的制备方法，其特征在于：称取二乙酰氨乙酸乙二胺200g，至无菌容器中，加注射用水1000ml，搅拌溶解，加入0.25～0.1g活性炭，搅拌30分钟，用0.45μm微孔滤膜装置过滤脱炭，补加注射用水至2000ml，再用灭菌的0.22μm微孔滤膜装置过滤，滤液检查合格后分装即得注射液剂；将滤液低温冷冻干燥，采用一次升华干燥法，将预先处理好的制品溶液在干燥室内预冷冻，预冻温度为-30℃～-40℃，预冻时间为4～5小时，同时将冷藏室内温度下降至-50℃，启动真空泵，待真空度达到10mmHg以下后，缓缓打开阀门，当干燥室内真空度达0.1mmHg以下关闭冷冻机，缓缓加温至-20℃，维持此温度23～28小时，待水份蒸发余烬(含水量降至8％以下)，缓缓升温，在40℃转入再干燥，再干燥时间为5～8小时，整个干燥过程总用时为32～41小时，即得冻干制剂。

所述的制备方法，其特征在于：称取二乙酰氨乙酸乙二胺200g，至无菌容器中，加注射用水1000ml，搅拌溶解，加入0.5g活性炭，搅拌30分钟，用0.45μm微孔滤膜装置过滤脱炭，补加注射用水至2000ml，再用灭菌的0.22μm微孔滤膜装置过滤，滤液检查合格后分装即得注射液剂；将滤液低温冷冻干燥采用一次升华干燥法，将预先处理好的制品溶液在于燥室内预冷冻，预冻温度为-40℃，预冻时间为5小时，同时将冷藏室内温度下降至-50℃，启动真空泵，待真空度达到10mmHg以下后，缓缓打开阀门，当干燥室内真空度达0.1mmHg以下关闭冷冻机，缓缓加温至-20℃，维持此温度25小时，待水份蒸发余烬(含水量降至8％以下)，缓缓升温，在40℃转入再干燥，再干燥时间为5小时，整个干燥过程总用时为35小时，即得冻干制剂。

注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂的质量控制技术，其特征在于通过以下方法进行鉴别和测量：

【鉴别】

(1)取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂适量(约相当于二乙酰氨乙酸乙二胺10mg)，加碘化钾试液1滴与4％碘酸钾溶液0.5ml，置水浴中加热1分钟，冷却，加入淀粉指示液1～4滴，溶液显蓝色；

(2)取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂适量(约相当于二乙酰氨乙酸乙二胺10mg)，加饱和丙二醇制盐酸羟胺1ml，小火加热煮沸3分钟，冷却后加三氯化铁试液1滴，溶液显棕红色；

(3)取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂适量(约相当于二乙酰氨乙酸乙二胺10mg)，加茚三酮试液加热煮沸2分钟，溶液显棕色；

【检查】

溶液的澄清度和颜色

取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂5瓶，分别用水2ml溶解后，溶液应澄清；如显浑浊，与1号浊度标准液(中国药典2000年版二部附录IX B)比较，均不得更浓；如显色，与黄色或黄绿色2号标准比色液(中国药典2000年版二部附录IX A第一法)比较，均不得更深；

干燥失重

取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过5.0％(中国药典2000年版附录VIII L)；

酸度

取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂适量，加水制成每1ml中含0.1g的溶液，依法测定(中国药典2000年版二部附录VI H)，pH值应为5.0～6.5；

无菌

取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂，分别加灭菌水2ml溶解，依法检查(中国药典2000年版附录XI H)，应符合规定；

细菌内毒素

取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂，依法检查(中国药典2000年版二部附录XI E)，每1mg中含内毒素量应小于0.125EU；

其他  应符合注射剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版附录I B)；

【含量测定】

精密量取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂适量(约相当于二乙酰氨乙酸乙二胺0.2g)，加水2ml溶解后，加对麝香草酚酞指示液显中性的吡啶20ml，加麝香草酚酞指示液数滴，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定；每1ml氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于14.72mg的C₁₀H₂₂N₄O₆。

本发明制备冻干粉制剂在药品冷冻干燥机内进行，药品冷冻干燥机主要由干燥箱、真空系统、制冷系统、冷阱系统、加热系统、加盖系统、自动控制系统等几大部分成。此外，大中型冷冻干燥机还常有蒸气灭菌系统(SIP)、在位清洗系统(CIP)。

制冷系统分别为冷冻干燥箱和冷阱系统提供冷源。目前采用的单级制冷压缩循环的板层制冷温度约在-35℃～-40℃之间，冷阱温度在-50℃左右；双级制冷压缩循环的板层制冷温度在-45℃～-50℃之间，冷阱温度在-65℃左右；复叠式制冷循环的板层制冷温度在-55℃～-60℃之间，冷阱温度在-75℃左右。

冷冻干燥机的控制主要是对制冷机、真空机组、加热功率的起停及温度的控制，对真空度、温度的测定、监控、以及自动保护、报警装置等。采用全自动控制或微电脑控制的冻干机都能显示各主要部件的工作状态，显示干燥箱内搁板和药品的温度、真空度、捕水器温度，都能进行参数设定、修改和实时显示。

药品冷冻干燥机必须执行GMP规范标准，实现高度无菌化、无尘化，达到高度可靠、安全、维护简便。为此药品冷冻干燥机往往采用蒸气灭菌系统(SIP)以保证灭菌彻底、无死角。同时辅以在位清洗系统(CIP)，对干燥室、冷凝器、主阀及管道进行就地清洗预设排液坡度，保证无液体滞留。同时具有应对停电、停水、误操作的保护措施，一旦出现故障，可以对药品实行保护；实现冻干机操作运行的计算机控制，具有停电停水三对策系统，可以多路联锁自动报警。

药理研究

1、抑制纤溶酶原激活物，使纤溶酶原不能激活为纤溶酶，从而抑制纤维蛋白的溶解，产生止血作用。

2、促进血小板释放活性物质，增强血小板的聚集性和粘附性，缩短凝血时间，产生止血作用。

3、增强毛细血管抵抗力，降低毛细血管的通透性，从而减少出血。

特殊安全性实验

1、注射用二乙酰氨乙酸乙二胺家兔肌肉注射未见明显刺激反应。

2、注射用二乙酰氨乙酸乙二胺家兔静脉滴注对血管无明显刺激作用。

3、注射用二乙酰氨乙酸乙二胺未引起豚鼠过敏反应。

4、注射用二乙酰氨乙酸乙二胺未引起溶血和凝集反应。

毒理研究

注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂小白鼠静脉注射的LD₅₀为683.3mg/kg，说明注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂安全，毒性低。

临床研究

二乙酰氨乙酸乙二胺经临床应用不但对各种原因引起的出血，均有较好疗效。同时还能预防各种原因出血。主要用于以下几种出血：

(1)消化道出血：大剂量注射二乙酰氨乙酸乙二胺能迅速有效治疗急性大量出血，且能解决患者在危及情况下口服用药困难的难题。二乙酰氨乙酸乙二胺不仅对急性上消化道出血能迅速止血，小剂量的应用二乙酰氨乙酸乙二胺对慢性消化道出血有确切疗效。

(2)眼出血：眼出血包括眼睑出血、结膜出血、角膜(内)出血、眼眶出血、视神经出血、前房出血、玻璃状体出血、虹膜出血、睫状体出血、脉络膜出血、视网膜出血等。因出血部位和性质不同，可出现视力障碍、复视、疼痛、羞明等不同症状。治疗上，病因治疗的同时，配合二乙酰氨乙酸乙二胺疗效较好。

(3)鼻出血：又称鼻衄，为耳鼻咽喉科常见疾病。有报道对46例(30例双侧，16例单侧，共计76侧)鼻息肉手术患者术后应用二乙酰氨乙酸乙二胺静脉滴注，结果显效59侧，有效15侧，总有效率97.37％。

(4)妇科出血：临床上极为常见，约占妇科门诊、住院病例的1/3。妇科出血性疾病发病率高，严重影响妇女身体健康。二乙酰氨乙酸乙二胺与凝血酶原作用形成凝血酶，同时可以增强毛细血管抵抗力，降低毛细血管通透性，故注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂适用于妇科止血。

(5)颅脑出血：脑出血的早期死亡率很高，约有半数病人于发病数日内死亡，幸存者中多数留有不同程度的后遗症。因此脑出血应积极运用止血药治疗，及时注射二乙酰氨乙酸乙二胺预后较好。

(6)其它：对手术渗血、泌尿道出血均有良好疗效。

不良反应

可能出现的不良反应有头昏、心率减慢、乏力、皮肤麻木、发热感，口干、呕吐、恶心等。大多能自行消失或停药后能消失。

附图说明

附图为本发明工艺流程图。

具体实施方式：

1、处方：

    二乙酰氨乙酸乙二胺          200g(按C₁₀H₂₂N₄O₆ 100％计)

    注射用水                    2000ml

                            制成1000瓶

2、制法：

称取二乙酰氨乙酸乙二胺200g，至无菌容器中，加注射用水1000ml，搅拌溶解，加入0.5g活性炭，搅拌30分钟，用微孔滤膜(0.45μm)装置过滤脱炭，补加注射用水至足量(2000ml)，再用灭菌的微孔滤膜(0.22μm)装置过滤，滤液检查合格后分装于10ml的管制抗生素玻璃瓶中，每瓶灌装2ml，低温冷冻干燥35小时，封盖即可。

本工艺采用一次升华干燥法，在药品冷冻干燥机内，将预先处理好的制品溶液在干燥室内预冷冻至-45℃，同时将冷藏室内温度下降至-50℃，启动真空泵，待真空度达到10mmHg以下后，缓缓打开阀门，当干燥室内真空度达0.1mmHg以下关闭冷冻机，缓缓加温至-20℃，待水份蒸发余烬，缓缓升温，根据实验注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂40℃稳定，因此在40℃转入再干燥，整个干燥过程35小时。

质量标准控制方法：

注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂为二乙酰氨乙酸乙二胺的无菌冻干品。含二乙酰氨乙酸乙二胺(C₁₀H₂₂N₄O₆)应为标示量的90.0％～110.0％。

【性状】注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂为白色或类白色的疏松块状物或粉末。

【鉴别】(1)取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂适量(约相当于二乙酰氨乙酸乙二胺10mg)，加碘化钾试液1滴与4％碘酸钾溶液0.5ml，置水浴中加热1分钟，冷却，加入淀粉指示液1～4滴，溶液显蓝色。

(2)取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂适量(约相当于二乙酰氨乙酸乙二胺10mg)，加饱和丙二醇制盐酸羟胺1ml，小火加热煮沸3分钟，冷却后加三氯化铁试液1滴，溶液显棕红色。

(3)取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂适量(约相当于二乙酰氨乙酸乙二胺10mg)，加茚三酮试液加热煮沸2分钟，溶液显棕色。

【检查】溶液的澄清度和颜色  取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂5瓶，分别用水2ml溶解后，溶液应澄清；如显浑浊，与1号浊度标准液(中国药典2000年版二部附录IX B)比较，均不得更浓；如显色，与黄色或黄绿色2号标准比色液(中国药典2000年版二部附录IX A第一法)比较，均不得更深。

干燥失重  取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过5.0％(中国药典2000年版附录VIII L)。

酸度  取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂适量，加水制成每1ml中含0.1g的溶液，依法测定(中国药典2000年版二部附录VI H)，pH值应为5.0～6.5。

无菌  取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂，分别加灭菌水2ml溶解，依法检查(中国药典2000年版附录XI H)，应符合规定。

细菌内毒素  取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂，依法检查(中国药典2000年版二部附录XI E)，每1mg中含内毒素量应小于0.125EU。

其他  应符合注射剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版附录I B)。

【含量测定】精密量取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂适量(约相当于二乙酰氨乙酸乙二胺0.2g)，加水2ml溶解后，加对麝香草酚酞指示液显中性的吡啶20ml，加麝香草酚酞指示液数滴，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于14.72mg的C₁₀H₂₂N₄O₆。

【类别】止血药。

【规格】0.2g

【贮藏】遮光，密闭，在阴凉处保存。

【有效期】暂定2年

Claims (6)

1、注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂，其特征在于按以下比例配制：

二乙酰氨乙酸乙二胺           150~200g(按C₁₀H₂₂N₄O₆ 100％计)

注射用水                     2000ml。

2、根据权利要求1所述的注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂的制备方法，其特征在于：称取二乙酰氨乙酸乙二胺150~200g，至无菌容器中，加注射用水1000ml，搅拌溶解，加入活性炭吸附杂质，用0.45μm微孔滤膜装置过滤脱炭，补加注射用水至2000ml，再用灭菌的0.22μm微孔滤膜装置过滤，滤液分装即得注射液剂；将滤液低温冷冻干燥，得冻干粉制剂。

3、根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：称取二乙酰氨乙酸乙二胺200g，至无菌容器中，加注射用水1000ml，搅拌溶解，加入0.25～0.1g活性炭，搅拌30分钟，用0.45μm微孔滤膜装置过滤脱炭，补加注射用水至2000ml，再用灭菌的0.22μm微孔滤膜装置过滤，滤液检查合格后分装即得注射液剂；将滤液低温冷冻干燥，采用一次升华干燥法，在药品冷冻干燥机内进行，将预先处理好的制品溶液在干燥室内预冷冻，预冻温度为-25℃～-45℃，预冻时间为2～6小时，同时将冷藏室内温度下降至-50℃，启动真空泵，待真空度达到10mmHg以下后，缓缓打开阀门，当干燥室内真空度达0.1mmHg以下关闭冷冻机，缓缓加温至-20℃，维持此温度20～30小时，待水份蒸发余烬，缓缓升温，在40℃转入再干燥，再干燥时间为3～10小时，整个干燥过程总用时为25～46小时，即得冻干制剂。

4、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：称取二乙酰氨乙酸乙二胺200g，至无菌容器中，加注射用水1000ml，搅拌溶解，加入0.25～0.1g活性炭，搅拌30分钟，用0.45μm微孔滤膜装置过滤脱炭，补加注射用水至2000ml，再用灭菌的0.22μm微孔滤膜装置过滤，滤液检查合格后分装即得注射液剂；将滤液低温冷冻干燥，采用一次升华干燥法，将预先处理好的制品溶液在干燥室内预冷冻，预冻温度为-30℃～-40℃，预冻时间为4～5小时，同时将冷藏室内温度下降至-50℃，启动真空泵，待真空度达到10mmHg以下后，缓缓打开阀门，当干燥室内真空度达0.1mmHg以下关闭冷冻机，缓缓加温至-20℃，维持此温度23～28小时，待水份蒸发余烬(含水量降至8％以下)，缓缓升温，在40℃转入再干燥，再干燥时间为5～8小时，整个干燥过程总用时为32～41小时，即得冻干制剂。

5、根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：称取二乙酰氨乙酸乙二胺200g，至无菌容器中，加注射用水1000ml，搅拌溶解，加入0.5g活性炭，搅拌30分钟，用0.45μm微孔滤膜装置过滤脱炭，补加注射用水至2000ml，再用灭菌的0.22μm微孔滤膜装置过滤，滤液检查合格后分装即得注射液剂；将滤液低温冷冻干燥采用一次升华干燥法，将预先处理好的制品溶液在干燥室内预冷冻，预冻温度为-40℃，预冻时间为5小时，同时将冷藏室内温度下降至-50℃，启动真空泵，待真空度达到10mmHg以下后，缓缓打开阀门，当干燥室内真空度达0.1mmHg以下关闭冷冻机，缓缓加温至-20℃，维持此温度25小时，待水份蒸发余烬(含水量降至8％以下)，缓缓升温，在40℃转入再干燥，再干燥时间为5小时，整个干燥过程总用时为35小时，即得冻干制剂。

6、注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂的质量控制技术，其特征在于通过以下方法进行鉴别和测量：

【鉴别】

(1)取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂适量(约相当于二乙酰氨乙酸乙二胺10mg)，加碘化钾试液1滴与4％碘酸钾溶液0.5ml，置水浴中加热1分钟，冷却，加入淀粉指示液1～4滴，溶液显蓝色；

(2)取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂适量(约相当于二乙酰氨乙酸乙二胺10mg)，加饱和丙二醇制盐酸羟胺1ml，小火加热煮沸3分钟，冷却后加三氯化铁试液1滴，溶液显棕红色；

(3)取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂适量(约相当于二乙酰氨乙酸乙二胺10mg)，加茚三酮试液加热煮沸2分钟，溶液显棕色；

【检查】

溶液的澄清度和颜色

取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂5瓶，分别用水2ml溶解后，溶液应澄清；如显浑浊，与1号浊度标准液(中国药典2000年版二部附录IX B)比较，均不得更浓；如显色，与黄色或黄绿色2号标准比色液(中国药典2000年版二部附录IX A第一法)比较，均不得更深；

干燥失重

取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过5.0％(中国药典2000年版附录VIII L)；

酸度

取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂适量，加水制成每1ml中含0.1g的溶液，依法测定(中国药典2000年版二部附录VI H)，pH值应为5.0～6.5；

无菌

取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂，分别加灭菌水2ml溶解，依法检查(中国药典2000年版附录XI H)，应符合规定；

细菌内毒素

取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂，依法检查(中国药典2000年版二部附录XI E)，每1mg中含内毒素量应小于0.125EU；

其他应符合注射剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版附录I B)；

【含量测定】

精密量取注射用二乙酰氨乙酸乙二胺制剂适量(约相当于二乙酰氨乙酸乙二胺0.2g)，加水2ml溶解后，加对麝香草酚酞指示液显中性的吡啶20ml，加麝香草酚酞指示液数滴，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定；每1ml氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于14.72mg的C₁₀H₂₂N₄O₆。

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