CN105078906A - 一种含尿激酶的药物冻干制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种含尿激酶的药物冻干制剂及其制备方法，其原料含有以下成分：尿激酶，L-精氨酸，甘露醇和注射用水。所述药物冻干制剂辅料选用L-精氨酸对尿激酶稳定性起到保护作用，提高了产品的质量；选用辅料甘露醇则为冻干赋形剂，利于冻干成形。所述制备方法缩短冻干时间，可使尿激酶尽快脱离非干燥状态，将冻干时间由22小时以上缩短至13-15小时，从而使尿激酶的稳定性进一步得到保证；且降低了生产成本，节能环保。本发明提供的含尿激酶的药物冻干制剂符合国家药品标准的规定；经六个月稳定性加速实验，各项指标均符合国家药品标准的要求。

Description

一种含尿激酶的药物冻干制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种含尿激酶的药物冻干制剂的制备方法。

背景技术

1、概述尿激酶，其活性成份来源于新鲜人尿中提取的一种能激活纤维蛋白溶酶原的酶。它是由高分子量尿激酶(Mw54000)和低分子量尿激酶(Mw33000)组成的混合物。

1.1药理毒理：本品直接作用于内源性纤维蛋白溶解系统，能催化裂解纤溶酶原成纤溶酶，后者不仅能降解纤维蛋白凝块，亦能降解血循环中的纤维蛋白原、凝血因子Ⅴ和凝血因子Ⅷ等，从而发挥溶栓作用。本品对新形成的血栓起效快、效果好。本品还能提高血管ADP酶活性，抑制ADP诱导的血小板聚集，预防血栓形成。本品在静脉滴注后，患者体内纤溶酶活性明显提高；停药几小时后，纤溶酶活性恢复原水平。但血浆纤维蛋白或纤维蛋白原水平的降低，以及它们的降解产物的增加可持续12-24小时。本品显示溶栓效应与药物剂量、给药的时间窗明显的相关性。本品毒性很低，小鼠静脉注射半数致死量大于100万国际单位/公斤体重。亦无明显抗原性，致畸性、致癌性和致突变性。临床应用罕有过敏反应报道。但是，鉴于本品增加纤溶酶活性，降低血循环中的未结合型纤溶酶原和与纤维蛋白结合的纤溶酶原，可能出现严重的出血危险。

1.2药代动力学：本品在人体内药代动力学特点尚未完全阐明。本品静脉给予后经肝脏快速清除，血浆半衰期≤20分钟。少量药物经胆汁和尿液排出。肝硬化等肝功能受损患者其半衰期延长。

1.3适应症：本品主要用于血栓栓塞性疾病的溶栓治疗。包括急性广泛性肺栓塞、胸痛6-12小时内的冠状动脉栓塞和心肌梗死、症状短于3-6小时的急性期脑血管栓塞、视网膜动脉栓塞和其他外周动脉栓塞症状严重的骼-股静脉血栓形成者。也用于人工心瓣手术后预防血栓形成，保持血管插管和胸腔及心包腔引流管的通畅等。溶栓的疗效均需后继的肝素抗凝加以维持。

1.4制剂与规格：注射用尿激酶冻干制剂为尿激酶加适宜冻干保护剂的无菌冻干品，为白色或类白色的冻干块状或粉状物。通用名称：注射用尿激酶；英文名称：UrokinaseforInjection。

1.5贮藏：遮光，密闭，在10℃以下保存。

2、注射用尿激酶工艺技术现状

尿激酶冻干制剂的生产流程为：药液配制—灌装半加塞—冷冻干燥、压塞—轧盖—目检—包装。现有的生产工艺如下：

2.1处方组成：尿激酶；人血白蛋白；甘露醇；右旋糖酐；氯化钠；注射用水加至1000-2000ml。

2.2药液配制：称取处方量甘露醇、右旋糖酐、氯化钠溶解于总配制量50％的注射用水中，用pH调节剂调节pH值4.5～7.0，(pH调节剂为:5％NaOH溶液或5％的HCl溶液)。加处方量尿激酶搅拌溶解，加配制量0.05％的活性炭室温搅拌30分钟，过滤至澄明，用除菌滤器过滤后备用。

2.3冷冻干燥：取上述精滤液，按每瓶1ml分装于2ml管制瓶中，管制瓶置冷冻干燥机制品室板层，预冻2小时至-40℃保温4小时，开启捕水器制冷开关，于保温结束后，开启真空泵，当真空泵读数降至20帕以下时，逐渐升高板层温度至-5℃，保温8小时，升温至0℃继续保温3小时，当制品温度与板层温度接近时，继续升高板层温度至30℃并保温5小时以上，当制品温度与板层温度再次接近时结束冻干，真空落盖、压塞、包装。

3、现有工艺存在的问题

3.1尿激酶为生化药物，在水溶液中稳定性较差，由于尿激酶冻干制剂在生产过程中，先要配制成水溶液，再经过灌装到冷冻干燥结束前，尿激酶处于非干燥状态，产品质量不稳定：

3.2在药液配制过程中，活性炭在原料、辅料全部溶解后的药液中加入，在过滤脱炭的同时，尿激酶也有部分被吸附，从而使含量降低。

3.3采用5％HCl溶液或5％NaOH溶液为pH调节剂，药液pH值与产品冻干后再复溶的pH值差别较大。且在强酸HCl或强碱NaOH溶液中，多肽生化药物稳定性受影响，易引起含量降低。

3.4在冷冻干燥过程中冻干时间超过22小时，冻干时间越长，尿激酶处于非干燥状态时间越长，产品质量越不稳定；同时冻干时间越长，能耗越大，生产成本越高。

中国专利公开号CN1730098A，公开了一种含活性尿激酶原的组合物、其冻干方法及冻干制剂，所述尿激酶原组合物，含有适量的尿激酶原、赋形剂(糖类和/或多元醇，选自甘露醇、蔗糖、海藻糖、甘露醇、乳糖、葡萄糖、山梨醇、麦芽糖中的一种或几种)、缓冲溶液(磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液)和盐类(氯化钠)，还包括保护剂(白蛋白)。该组合物的冷冻干燥方法包括以下步骤：i)取所述组合物，放入预先降温至-35℃～-45℃的冻干机，预冻2-4h；ii)然后开始抽真空，升温至-25℃～-35℃；iii)当容器内水分基本升华后进行第二次升温，使其温度上升至-25℃～-35℃，稳定后保持0.5h～1.5h。

发明内容

本发明的目的是提供一种含尿激酶的药物冻干制剂及其制备方法。本发明要解决的技术问题如下：1)传统方法制备尿激酶冻干制剂时，经过配制、冷冻干燥过程后含量下降，达到5％以上；2)传统方法采用5％HCl溶液或5％NaOH溶液为pH调节剂，冻干前药液的pH值与冻干后复溶药液的pH值差别较大，且易引起含量降低；3)传统方法冻干时间过长，尿激酶处于非干燥状态时间长，产品质量不稳定，同时能耗大，生产成本高。

本发明第一方面是提供一种含尿激酶的药物冻干制剂，其原料含有以下成分：尿激酶，L-精氨酸，甘露醇和注射用水。

具体地，以10000支计，所述含尿激酶的药物冻干制剂，其原料含有以下成分：尿激酶1亿-250亿单位，L-精氨酸5-20mg，甘露醇100-300g，注射用水加至10000-30000ml。

优选地，以10000支计，所述含尿激酶的药物冻干制剂，其原料含有以下成分：尿激酶10亿-150亿单位，L-精氨酸10-15mg，甘露醇150-200g，注射用水加至10000-30000ml。

进一步优选地，以10000支计，所述含尿激酶的药物冻干制剂，其原料含有以下成分：尿激酶25亿-50亿单位，L-精氨酸10-15mg，甘露醇150-200g，注射用水加至10000-20000ml。

更优选地，以10000支计，所述含尿激酶的药物冻干制剂，其原料含有以下成分：尿激酶50亿单位，L-精氨酸15mg，甘露醇200g，注射用水加至20000ml。

本发明第二方面是提供上述含尿激酶的药物冻干制剂的制备方法，该方法包括以下步骤：

1)取处方量的甘露醇，加入注射用水溶解，加活性炭，煮沸，保温，过滤脱炭，得溶液①；

2)在所述溶液①中加入处方量的L-精氨酸，搅拌得溶液②；

3)取处方量的尿激酶原粉，加入注射用水溶解，得溶液③；

4)合并所述溶液②、溶液③，再用注射用水补足体积至总量，调pH值至4.5～7.0，经微孔滤器除菌过滤后，分装；

5)冷冻干燥。

上述方法中：

步骤1)中所述注射用水量以使甘露醇充分溶解为宜，例如注射用水用量为甘露醇重量的10-50倍；一般活性炭用量为溶解甘露醇后所得药液重量的1‰-5‰，较佳的活性炭用量为2‰；一般煮沸后保温10-30分钟，优选保温15分钟。

步骤3)中优选所述注射用水温度小于25℃；一般所述注射用水用量为注射用水总量的1/30-1/5，优选1/10。

步骤4)中优选所述注射用水温度小于25℃；所述调pH值的pH调节剂为磷酸溶液或磷酸钠溶液，优选为5％磷酸溶液或5％磷酸钠溶液；所述微孔滤器孔径优选0.22μm-0.45μm。

所述分装可分装于管制瓶中，一般可按每瓶1ml药液分装于2ml管制瓶中、2ml药液分装于5ml管制瓶中、3ml药液分装于10ml管制瓶中；分装后将所述管制瓶置冷冻干燥机制品室板层，待冷冻干燥。

所述步骤5)冷冻干燥工艺具体为：

(1)预冻：首先将冷凝器温度预降至-45℃以下，产品进箱后在1小时内将板层温度快速降至-35℃以下，保持低温状态1.5小时；

(2)一次干燥：开启真空泵，保持真空度10Pa以下，1小时升温至0℃，保温3-4小时，进行一次干燥；

(3)二次干燥：制品一次干燥后，1小时将板层升温至12℃，真空度控制在10-15Pa，保温1-2小时；再升温1小时至30℃，保温3.5小时，冻干总时间13-15小时。

冻干过程中，检查板层温度、制品温度、冷凝器温度等，冻干结束后，进行液压加塞，轧盖，目检，包装。

如无特别说明，本发明所述pH调节剂出现的“％”含义为质量体积比；例如“5％磷酸溶液”是指“质量体积浓度5％的磷酸溶液”。

本发明所述冷冻干燥工艺通过提高预冻速度、快速将中间产品冻结至共晶点以下、缩短了冻干时间，使尿激酶尽快脱离非干燥状态，可以使尿激酶的稳定性得到保证。本发明通过改进冻干工艺，将冻干时间由22小时以上缩短至13-15小时。

本发明提供的含尿激酶的药物冻干制剂具有以下优点：

所述含尿激酶的药物冻干制剂辅料选用L-精氨酸对尿激酶稳定性起到保护作用，可保证产品的质量；辅料甘露醇则为冻干赋形剂，利于冻干成形。

本发明提供的含尿激酶的药物冻干制剂的制备方法具有以下优点：

1)将甘露醇溶液先经活性炭处理后再加入尿激酶，避免了尿激酶因活性炭吸附而引起的含量降低问题。

2)pH调节剂选用5％磷酸或5％磷酸钠溶液，可使药液pH值与产品冻干后再复溶的药液pH值保持一致，从而使产品质量更稳定。

3)缩短冻干时间可使尿激酶尽快脱离非干燥状态，本发明采用的冻干工艺，将冻干时间由22小时以上缩短至13-15小时，从而使尿激酶的稳定性进一步得到保证。

4)由于缩短冻干时间，降低能耗30％左右，同时在不增加硬件投入的情况下，可提高生产产能约30％，降低了生产成本，节能环保。

本发明提供的含尿激酶的药物冻干制剂符合国家药品标准的规定；经六个月稳定性加速实验，各项指标均符合国家药品标准的要求。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

本发明所述原料尿激酶是指尿激酶原粉，可由现有技术制备得到；也可以外购，例如南京南大药业有限责任公司出品的尿激酶原粉。

实施例1含尿激酶的药物冻干制剂及其制备方法

1、原料：尿激酶1亿单位；L-精氨酸5mg；甘露醇100g；注射用水加至10000ml。

2、制备方法：将处方量的甘露醇于不锈钢桶中，加入5000ml的注射用水溶解，加入溶解甘露醇后所得药液重量的2‰活性炭，煮沸，保温15分钟后，过滤脱炭，得溶液①。在溶液①中加入处方量L-精氨酸，搅拌得溶液②。取处方量的尿激酶原粉，加25℃以下的冷注射用水1000毫升溶解得溶液③。将溶液②、溶液③缓慢倒入配料罐中，再用25℃以下的冷注射用水补足体积至总量，调pH值6.8(pH调节剂为5％磷酸溶液)，经0.22μm孔径除菌滤器过滤至贮罐，检验合格后，按每瓶1ml药液分装于2ml管制瓶中，管制瓶置冷冻干燥机制品室板层，待冷冻干燥。冷冻干燥工艺如下：

(1)预冻：首先将冷凝器温度预降至-45℃以下，产品进箱后在1小时内将板层温度快速降至-35℃以下，保持低温状态1.5小时。

(2)一次干燥：开启真空泵，保持真空度10Pa以下，1小时升温至0℃，保温3小时，进行一次干燥。

(3)二次干燥：制品一次干燥后，1小时将板层升温至12℃，真空度控制在10-15Pa，保温1小时，再升温1小时至30℃，保温3.5小时；冻干总时间13小时。

冻干过程中，检查板层温度、制品温度、冷凝器温度等，冻干结束后，进行液压加塞，轧盖(将冻干压塞好的中间产品送至轧盖机进行轧盖)，目检(逐瓶检查，装量差异大、松盖、翘塞、药中有异物等，拣出另放入盘中，并统计数量)，包装。包装：10瓶/盒×100盒/件。本实施例1产品批号111216；产量10000瓶。检测方法：见2010版中国药典二部，检验结果见下表1。

表1

实施例2含尿激酶的药物冻干制剂及其制备方法

1、原料：尿激酶10亿单位；L-精氨酸10mg；甘露醇150g；注射用水加至20000ml。

2、制备方法：将处方量的甘露醇于不锈钢桶中，加入10000ml的注射用水溶解，加入溶解甘露醇后所得药液重量的2‰活性炭，煮沸，保温15分钟后，过滤脱炭，得溶液①。在溶液①中加入处方量L-精氨酸，搅拌得溶液②。取处方量的尿激酶原粉，加25℃以下的冷注射用水1000毫升溶解得溶液③。将溶液②、溶液③缓慢倒入配料罐中，再用25℃以下的冷注射用水补足体积至总量，调pH值6.8(pH调节剂为5％磷酸钠溶液)，经0.22μm孔径除菌滤器过滤至贮罐，检验合格后，按每瓶2ml药液分装于5ml管制瓶中，管制瓶置冷冻干燥机制品室板层，待冷冻干燥。冷冻干燥工艺如下：

(1)预冻：首先将冷凝器温度预降至-45℃以下，产品进箱后在1小时内将板层温度快速降至-35℃以下，保持低温状态1.5小时。

(2)一次干燥：开启真空泵，保持真空度10Pa以下，1小时升温至0℃，保温3.5小时，进行一次干燥。

(3)二次干燥：制品一次干燥后，1小时将板层升温至12℃，真空度控制在10-15Pa，保温1.5小时，再升温1小时至30℃，保温3.5小时；冻干总时间14小时。

冻干过程中，检查板层温度、制品温度、冷凝器温度等，冻干结束后，进行液压加塞，轧盖(将冻干压塞好的中间产品送至轧盖机进行轧盖)，目检(逐瓶检查，装量差异大、松盖、翘塞、药中有异物等，拣出另放入盘中，并统计数量)，包装。包装规格：10瓶/盒×50盒/件。本实施例产品批号111217；产量10000瓶。检测方法：见2010版中国药典二部，检验结果见下表2。

表2

实施例3含尿激酶的药物冻干制剂及其制备方法

1、原料：尿激酶25亿单位；L-精氨酸10mg；甘露醇150g；注射用水加至20000ml。

2、制备方法：将处方量的甘露醇于不锈钢桶中，加入10000ml的注射用水溶解，加入溶解甘露醇后所得药液重量2‰的活性炭，煮沸，保温15分钟后，过滤脱炭，得溶液①。在溶液①中加入处方量L-精氨酸，搅拌得溶液②。取处方量的尿激酶原粉，加25℃以下的冷注射用水1000毫升溶解得溶液③。将溶液②、溶液③缓慢倒入配料罐中，再用25℃以下的冷注射用水补足体积至总量，调pH值6.6(pH调节剂为5％磷酸钠溶液)，经0.22μm孔径除菌滤器过滤至贮罐，半成品检验合格后，按每瓶2ml药液分装于5ml管制瓶中，管制瓶置冷冻干燥机制品室板层，待冷冻干燥。冷冻干燥工艺如下：

(1)预冻：首先将冷凝器温度预降至-45℃以下，产品进箱后在1小时内将板层温度快速降至-35℃以下，保持低温状态1.5小时。

(2)一次干燥：开启真空泵，保持真空度10Pa以下，1小时升温至0℃，保温3.5小时，进行一次干燥。

(3)二次干燥：制品一次干燥后，1小时将板层升温至12℃，真空度控制在10-15Pa，保温1.5小时，再升温1小时至30℃，保温3.5小时；冻干总时间14小时。

冻干过程中，检查板层温度、制品温度、冷凝器温度等，冻干结束后，进行液压加塞，轧盖(将冻干压塞好的中间产品送至轧盖机进行轧盖)，目检(逐瓶检查，装量差异大、松盖、翘塞、药中有异物等，拣出另放入盘中，并统计数量)，包装。包装规格：10瓶/盒×50盒/件。本实施例产品批号111218；产量10000瓶。检测方法：见2010版中国药典二部，检验结果见下表3。

表3

实施例4含尿激酶的药物冻干制剂及其制备方法

1、原料：尿激酶50亿单位；L-精氨酸15mg；甘露醇200g；注射用水加至20000ml。

2、制备方法：将处方量的甘露醇于不锈钢桶中，加入10000ml的注射用水溶解，加入溶解甘露醇后所得药液重量2‰的活性炭，煮沸，保温15分钟后，过滤脱炭，得溶液①。在溶液①中加入处方量L-精氨酸，搅拌得溶液②。取处方量的尿激酶原粉，加25℃以下的冷注射用水1000毫升溶解得溶液③。将溶液②、溶液③缓慢倒入配料罐中，再用25℃以下的冷注射用水补足体积至总量，调pH值6.8(pH调节剂为5％磷酸钠溶液)，经0.22μm孔径除菌滤器过滤至贮罐，检验合格后，按每瓶2ml药液分装于5ml管制瓶中，管制瓶置冷冻干燥机制品室板层，待冷冻干燥。冷冻干燥工艺如下：

(1)预冻：首先将冷凝器温度预降至-45℃以下，产品进箱后在1小时内将板层温度快速降至-35℃以下，保持低温状态1.5小时。

(2)一次干燥：开启真空泵，保持真空度10Pa以下，1小时升温至0℃，保温3.5小时，进行一次干燥。

(3)二次干燥：制品一次干燥后，1小时将板层升温至12℃，真空度控制在10-15Pa，保温1.5小时，再升温1小时至30℃，保温3.5小时；冻干总时间14小时。

冻干过程中，检查板层温度、制品温度、冷凝器温度等，冻干结束后，进行液压加塞，轧盖(将冻干压塞好的中间产品送至轧盖机进行轧盖)，目检(逐瓶检查，装量差异大、松盖、翘塞、药中有异物等，拣出另放入盘中，并统计数量)，包装。包装规格：10瓶/盒×50盒/件。本实施例产品批号111219；产量10000瓶。检测方法：见2010版中国药典二部，检验结果见下表4。

表4

实施例5含尿激酶的药物冻干制剂及其制备方法

1、原料：尿激酶150亿单位；L-精氨酸20mg；甘露醇300g；注射用水加至30000ml。

2制备方法：将处方量的甘露醇于不锈钢桶中，加入15000ml的注射用水溶解，加入溶解甘露醇后所得药液重量2‰的活性炭，煮沸，保温15分钟后，过滤脱炭，得溶液①。在溶液①中加入处方量L-精氨酸，搅拌得溶液②。取处方量的尿激酶原粉，加25℃以下的冷注射用水1000毫升溶解得溶液③。将溶液②、溶液③缓慢倒入配料罐中，再用25℃以下的冷注射用水补足体积至总量，调pH值6.9(pH调节剂为5％磷酸溶液)，经0.22μm孔径除菌滤器过滤至贮罐，半成品检验合格后，按每瓶3ml分装于10ml管制瓶中，管制瓶置冷冻干燥机制品室板层，待冷冻干燥。冷冻干燥工艺如下：

(1)预冻：首先将冷凝器温度预降至-45℃以下，产品进箱后在1小时内将板层温度快速降至-35℃以下，保持低温状态1.5小时。

(2)一次干燥：开启真空泵，保持真空度10Pa以下，1小时升温至0℃，保温4小时，进行一次干燥。

(3)二次干燥：制品一次干燥后，1小时将板层升温至12℃，真空度控制在10-15Pa，保温2小时，再升温1小时至30℃，保温3.5小时；冻干总时间15小时。

冻干过程中，检查板层温度、制品温度、冷凝器温度等，冻干结束后，进行液压加塞，轧盖(将冻干压塞好的中间产品送至轧盖机进行轧盖)，目检(逐瓶检查，装量差异大、松盖、翘塞、药中有异物等，拣出另放入盘中，并统计数量)，包装。包装规格：10瓶/盒×30盒/件。本实施例产品批号111220；产量10000瓶。检测方法：见2010版中国药典二部，检验结果见下表5。

表5

实施例6含尿激酶的药物冻干制剂及其制备方法

1、原料：尿激酶250亿单位；L-精氨酸20mg；甘露醇300g；注射用水加至30000ml。

2、制备方法：将处方量的甘露醇于不锈钢桶中，加入15000ml的注射用水溶解，加入溶解甘露醇后所得药液重量2‰的活性炭，煮沸，保温15分钟后，过滤脱炭，得溶液①。在溶液①中加入处方量L-精氨酸，搅拌得溶液②。取处方量的尿激酶原粉，加25℃以下的冷注射用水1000毫升溶解得溶液③。将溶液②、溶液③缓慢倒入配料罐中，再用25℃以下的冷注射用水补足体积至总量，调pH值4.5～7.0(pH调节剂为5％磷酸钠溶液)，经0.22μm孔径除菌滤器过滤至贮罐，半成品检验合格后，按每瓶3ml分装于10ml管制瓶中，管制瓶置冷冻干燥机制品室板层，待冷冻干燥。冷冻干燥工艺如下：

(1)预冻：首先将冷凝器温度预降至-45℃以下，产品进箱后在1小时内将板层温度快速降至-35℃以下，保持低温状态1.5小时。

(2)一次干燥：开启真空泵，保持真空度10Pa以下，1小时升温至0℃，保温4小时，进行一次干燥。

(3)二次干燥：制品一次干燥后，1小时将板层升温至12℃，真空度控制在10-15Pa，保温2小时，再升温1小时至30℃，保温3.5小时；冻干总时间15小时。

冻干过程中，检查板层温度、制品温度、冷凝器温度等，冻干结束后，进行液压加塞，轧盖(将冻干压塞好的中间产品送至轧盖机进行轧盖)，目检(逐瓶检查，装量差异大、松盖、翘塞、药中有异物等，拣出另放入盘中，并统计数量)，包装。包装规格：10瓶/盒×30盒/件。本实施例产品批号111221；产量10000瓶。检测方法：见2010版中国药典二部，检验结果见下表6。

表6

实施例7含尿激酶的药物冻干制剂及其制备方法

1、原料：尿激酶50亿单位，L-精氨酸15mg，甘露醇200g，注射用水加至20000ml。

2、制备方法：同实施例1。

本实施例产品批号110305；产量10000瓶。包装规格：10瓶/盒×30盒/件。

实施例8含尿激酶的药物冻干制剂及其制备方法

1、原料：同实施例7。

2、制备方法：同实施例2。

本实施例产品批号110307；产量10000瓶。包装规格：10瓶/盒×30盒/件。

实施例9含尿激酶的药物冻干制剂及其制备方法

1、原料：同实施例7。

2、制备方法：同实施例3。

本实施例产品批号110309；产量10000瓶。包装规格：10瓶/盒×30盒/件。

对比例1含尿激酶的药物冻干制剂

与实施例1的区别仅在于制备方法不同，本对比例1的制备方法如下：药液配制，称取处方量甘露醇、L-精氨酸溶解于总配制量50％的注射用水中，用pH调节剂(5％HCl溶液)调节pH值6.8；加处方量尿激酶原粉搅拌溶解，加配制量0.2‰的活性炭室温搅拌30分钟，过滤至澄明，用除菌滤器过滤后备用。冷冻干燥，取上述精滤液，按每瓶1ml药液分装于2ml管制瓶中，管制瓶置冷冻干燥机制品室板层，预冻2小时至-40℃保温4小时，开启捕水器制冷开关，于保温结束后，开启真空泵，当真空泵读数降至20Pa以下时，逐渐升高板层温度至-5℃，保温8小时，升温至0℃继续保温3小时，当制品温度与板层温度接近时，继续升高板层温度至30℃并保温5小时以上，当制品温度与板层温度再次接近时结束冻干，真空落盖、压塞、包装。其中冻干总时间22小时。

对比例2含尿激酶的药物冻干制剂

与实施例2的区别仅在于不含L-精氨酸。

对比例3含尿激酶的药物冻干制剂

与实施例6的区别仅在于原料L-精氨酸用量为1mg。

对比例4含尿激酶原的药物冻干制剂

参考中国专利CN200410058006.0(公开号CN1730098A)实施例2的组成及制备方法制备的含尿激酶原的药物冻干制剂。

实验例1：稳定性实验

分别对实施例7-9及对比例1-4药物冻干制剂进行稳定性检测。

1、实验方法：将各待检样品置于温度40±2℃，湿度75±5％的条件下，进行时间为6个月稳定性加速实验，分别于0、1、3、6月取样、检测。检测指标为性状、酸碱度(即pH值)、干燥失重、可见异物、尿激酶含量五个项目。参照2010版中国药典二部进行检测。

2、实验结果：检验结果显示，实施例7-9产品该五个项目的指标无明显变化，均符合尿激酶冻干制剂的国家药品标准中的规定；表明本发明所述含尿激酶的药物冻干制剂稳定性较好。而对比例1-4药物冻干制剂稳定性较差。具体检验结果见下表7和表8。

表7实施例7-9药物冻干制剂稳定性加速试验结果

表8对比例1-4药物冻干制剂稳定性加速试验结果

3、尿激酶含量稳定性分析

实施例7-9药物冻干制剂经六个月稳定性加速试验后检测留样样品，各项指标均符合国家药品标准，第6个月末样品的含量变化分别为2.63％、2.45％、2.48％，平均为(2.52±0.09)％，RSD＝3.57。进一步验证了本发明药物冻干制剂及制备方法的可靠性。

附件：

附件1：为实施例7-9三批产品全项检测结果，分别见下表9-11。结果显示该三批产品均符合国家药品标准。

表9实施例7产品全项检测结果(0月)

表10实施例8产品全项检测结果(0月)

表11实施例9产品全项检测结果(0月)

附件2：为实施例7-9三批产品经六个月稳定性加速试验后检测留样样品的全项检测结果，分别见下表12-14。结果显示该三批产品均符合国家药品标准。

表12实施例7产品全项检测结果(6个月)

表13实施例8产品全项检测结果(6个月)

表14实施例9产品全项检测结果(6个月)

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种含尿激酶的药物冻干制剂，其特征在于，其原料含有以下成分：尿激酶，L-精氨酸，甘露醇和注射用水。

2.根据权利要求1所述的药物冻干制剂，其特征在于，以10000支计，其原料含有以下成分：尿激酶1亿-250亿单位，L-精氨酸5-20mg，甘露醇100-300g，注射用水加至10000-30000ml。

3.根据权利要求1所述的药物冻干制剂，其特征在于，以10000支计，其原料含有以下成分：尿激酶10亿-150亿单位，L-精氨酸10-15mg，甘露醇150-200g，注射用水加至10000-30000ml。

4.根据权利要求1所述的药物冻干制剂，其特征在于，以10000支计，其原料含有以下成分：尿激酶25亿-50亿单位，L-精氨酸10-15mg，甘露醇150-200g，注射用水加至10000-20000ml。

5.根据权利要求1所述的药物冻干制剂，其特征在于，以10000支计，其原料含有以下成分：尿激酶50亿单位，L-精氨酸15mg，甘露醇200g，注射用水加至20000ml。

6.权利要求1-5任一项所述含尿激酶的药物冻干制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)取处方量的甘露醇，加入注射用水溶解，加活性炭，煮沸，保温，过滤脱炭，得溶液①；

2)在所述溶液①中加入处方量的L-精氨酸，搅拌得溶液②；

3)取处方量的尿激酶原粉，加入注射用水溶解，得溶液③；

4)合并所述溶液②、溶液③，再用注射用水补足体积至总量，调pH值至4.5～7.0，经微孔滤器除菌过滤后，分装；

5)冷冻干燥。

7.权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述冷冻干燥工艺具体为：

(1)预冻：首先将冷凝器温度预降至-45℃以下，产品进箱后在1小时内将板层温度快速降至-35℃以下，保持低温状态1.5小时；

(2)一次干燥：开启真空泵，保持真空度10Pa以下，1小时升温至0℃，保温3-4小时，进行一次干燥；

(3)二次干燥：制品一次干燥后，1小时将板层升温至12℃，真空度控制在10-15Pa，保温1-2小时；再升温1小时至30℃，保温3.5小时，冻干总时间13-15小时。

8.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述注射用水用量为甘露醇重量的10-50倍；所述活性炭用量为溶解甘露醇后所得药液重量的1‰-5‰，优选为2‰；所述煮沸后保温10-30分钟；优选保温15分钟。

9.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中所述注射用水温度小于25℃；所述注射用水用量为注射用水总量的1/30-1/5，优选1/10。

10.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，步骤4)中所述注射用水温度小于25℃；所述调pH值的pH调节剂为磷酸溶液或磷酸钠溶液，优选为5％磷酸溶液或5％磷酸钠溶液。