CN1709228A - 姜黄素固体分散体及其制备方法与应用 - Google Patents
姜黄素固体分散体及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1709228A CN1709228A CN 200510035060 CN200510035060A CN1709228A CN 1709228 A CN1709228 A CN 1709228A CN 200510035060 CN200510035060 CN 200510035060 CN 200510035060 A CN200510035060 A CN 200510035060A CN 1709228 A CN1709228 A CN 1709228A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- curcumin
- group
- solid dispersion
- preparation
- polyvinylpyrrolidone
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明公开了姜黄素固体分散体及其制备方法与应用。本发明将姜黄素和聚乙烯吡咯烷酮按质量比1∶4～1∶15溶于有机溶剂(如无水乙醇、丙醇、异丙醇、乙酸乙酯等)，于减压蒸馏55－ 95℃下除去大部分乙醇至成糊状，迅速倒入不锈钢盘中，在60－90℃下真空烘箱烘干，用粉碎机粉碎，得到姜黄素固体分散体。本发明的姜黄素固体分散体水溶性好，生物利用度高，在制备用于治疗胃溃疡、镇咳、祛痰和抗炎的药物或保健品中有着重要的应用。
Description
技术领域
本发明涉及药物组合物领域，具体的说涉及姜黄素固体分散体及其制备方法与应用。
背景技术
现代药理研究表明姜黄中主要有效成分为姜黄素(curcumin，Cur)，具有抗炎、降血脂、抗癌、抗氧化等多方面药理作用。虽然姜黄素具有广泛的药理学作用，但极难溶于水，同时生物利用度极低，大大局限了其应用于实验研究及临床开发。给大鼠口服1g·kg-1姜黄素，约75％自粪便排出，而尿中只有痕量的姜黄素，测定血中姜黄素含量和胆汁排泄结果表明肠吸收不好；动物药理实验给予姜黄素的方式采用腹腔注射，需0.5％二甲基亚砜溶解溶解，而且溶液不稳定，表明由于姜黄素的水溶性差及其口服吸收差、生物利用度低，限制其合理应用在人体患者。有报道将姜黄素与大分子物质形成复合物以提高其水溶性，如明胶、多糖和蛋白、以及羟丙基-β-环糊精等。但复合物制备过程缓慢，并且姜黄素在碱性溶液中容易降解，在pH7.4的磷酸盐缓冲液中，25μmol·L-1的姜黄素很快降解，其426nm的吸收值5min后降低到约50％，10min后只剩10％，最后溶液是无色的。故本发明利用聚乙烯吡咯烷酮，采用固体分散技术分散姜黄素，以提高其溶解度880倍(比使用羟丙基-β-环糊精提高150倍要高)，同时可提高体外溶出速度及生物利用度。
发明内容
本发明的目的是针对上述姜黄素的水溶性低、吸收差问题，提供一种水溶性好，生物利用度高的姜黄素固体分散体。
本发明的另一个目的是提供上述姜黄素固体分散体的制备方法。
本发明的另一个目的是提供上述姜黄素固体分散体在制备用于治疗胃溃疡、镇咳、祛痰和抗炎的药物或保健品中的应用。
本发明采用固体分散技术，利用聚乙烯吡咯烷酮(PVP-k30)作为载体，制备姜黄素固体分散体。本发明的姜黄素固体分散体，包括姜黄素和聚乙烯吡咯烷酮，质量比为1∶4～1∶15，将姜黄素和聚乙烯吡咯烷酮按比例溶于有机溶剂，于减压蒸馏55～95℃下除去大部分有机溶剂至成糊状，迅速倒如入不锈钢盘中在60～90℃下真空烘箱烘干，用粉碎机粉碎得到姜黄素固体分散体。
上述有机溶剂为无水乙醇、丙醇、异丙醇或乙酸乙酯。
Cur-PVPk30的固体分散体是这样形成的：在饱和Cur-PVPk30的溶剂系统中，蒸发溶剂，Cur浓度逐渐达到溶解度，并进而越过溶解度成为过饱和溶液，过饱和程度会逐渐增强。在这一过程中，一定浓度的PVPk30有效抑制姜黄素晶核的形成和晶体的长大。挥干溶剂后就得到了Cur-PVPk30所形成的固体分散物。
差示扫描量热分析结果提示，固体分散物中姜黄素不是以结晶方式存在，而是以分子状态分散在PVP-k30载体中；X-射线粉末衍射分析进一步说明在固体分散物中，Cur晶体消失，而以无定型或者分子形式分散于无定型的PVP-k30中，从而达到高度分散状态，这种分散与PVP-k30的量有关。姜黄素固体分散体中姜黄素与PVP-k30的质量比一般为(1∶4)～(1∶15)，常用比例为(1∶6)～(1∶12)，最常用剂量为(1∶7)～(1∶10)。
固体分散法改善姜黄素的溶出机制：(1)姜黄素在固体分散体中以无定型形式存在，大大增加了其溶解时的表面积；(2)Cur分子中的酚羟基与PVPk30分子中的羰基形成氢键，一方面使相对较小的姜黄素分子以无定型状态进入PVP大分子，另一方面，氢键的形成并没有改变PVP易溶于水的性质，所以使得难溶的姜黄素分子通过氢键分散于PVP大分子中使其变得容易溶解。对于一定分子量的PVP每个PVP分子能结合的药物分子数量是一定的，难溶的姜黄素往往具有一定的晶体状态，PVP的用量不足以结合一定量的姜黄素而使姜黄素仍以结晶状态为主，溶解度变化不大。所以PVP必须达到一定含量才能使药物表现为无定型分散体系，其溶解度才能明显增加，才能达到快速溶解的目的。(3)固体分散体中的姜黄素处于高能态，即为过饱和溶液，极易重新聚集成大颗粒，而PVPk30的围绕有效的防止这种积聚。
姜黄素固体分散体可与普通常规的药剂填充剂配合，经常规方法而制得；可根据需要制成适当的剂型，如针剂、输液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、糖浆剂或栓剂等。通常以口服方式使用，当然也可以采用其它给药方式；其每天使用剂量一般为约0.001～200000毫克，成年人常用量为每天0.002～80000毫克，最常用剂量为0.01～30000毫克。每天一次或分数次使用。本发明制备的姜黄素固体分散体在制备用于治疗胃溃疡、镇咳、祛痰和抗炎的药物或保健品中有着重要的应用。
本发明的有益效果：本发明以PVP-k30为载体，采用溶剂法制备姜黄素固体分散体显著提高了姜黄素的溶出速率以及溶解度、生物利用度。当姜黄素与PVP-k30质量比为1∶10时，其溶出度高达90％，溶解度是姜黄素原药的882倍。所制备的姜黄素固体分散体在制备用于治疗胃溃疡、镇咳、祛痰和抗炎的药物或保健品中有着重要的应用。同时，本发明的姜黄素固体分散体制备方法简单，成本低。
附图说明
图1为姜黄素粉末、PM及SD的差示扫描量热图谱；
图2为姜黄素粉末及其PM的X射线粉末衍射图谱；
图3为姜黄素粉末以及SD的X射线粉末衍射图谱；
图4为姜黄素标准曲线；
图5为姜黄素及其PM体外溶出度曲线图；
图6为姜黄素及其SD体外溶出度曲线图；
图7为大鼠血浆中姜黄素的HPLC色谱图；
图8为姜黄素血浆标准曲线；
图9为姜黄素固体分散体大鼠体内药时曲线。
其中，在图1中，A：姜黄素；B：聚乙烯吡咯烷酮k30；C：姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30固体分散体(1∶2)；D：姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 SD(1∶4)；E：姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 SD(1∶6)；F：姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 SD(1∶8)；G：姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 SD(1∶10)；H：姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 PM(1∶8)；I：姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 PM(1∶10)。
在图2中，A：聚乙烯吡咯烷酮k30；B：姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 PM(1∶2)；C：姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 PM(1∶4)；D：姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 PM(1∶6)；E：姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 PM(1∶8)；F：姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30PM(1∶10)；G：姜黄素。
在图3中，A：聚乙烯吡咯烷酮k30；B：姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 SD(1∶2)；C：姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 SD(1∶4)；D：姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 SD(1∶6)；E：姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 SD(1∶8)；F：姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30SD(1∶10)；G：姜黄素。
在图5中，
姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 PM(1∶10)；
姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 PM(1∶8)；
姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 PM(1∶6)；
姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 PM(1∶4)；
在图6中，
姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 SD(1∶10)；
姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 SD(1∶8)；
姜黄素-聚乙烯吡咯烷酮-k30 SD(1∶6)；
姜黄素。
在图7中，A：空白血浆；B：含姜黄素及内标的标准血清；C：给药后的样品血清；1：雌二醇样品锋；2：姜黄素样品峰。
具体实施方式
实施例1固体分散体的制备及其溶解度、溶出度的测定。
1.1药品、试剂和仪器 姜黄素(天津市光复精细化工研究所)；聚乙烯吡咯烷酮k30(Polyvinylpyrrolidone k30，海南南杭药业有限公司)；无水乙醇(天津市百世化工有限公司)；以上试剂均为分析纯。RCZ-8A智能药物溶出仪(天津大学精密仪器厂)；UV-2102 PC型紫外分光光度计(UNICO仪器有限公司)；DSC-204型差示扫描量热仪(德国Netzsch公司)；D/Max-IIIA型X-射线粉末(多晶)衍射仪(日本理学电机)。
1.2物理混合物和固体分散体的制备 物理混合物(physical mixture，PM)：姜黄素和PVP-k30分别过80目筛，然后精密称定，配成1∶2(w/w)、1∶4、1∶6、1∶8、1∶10的混合物，充分混匀即得物理混合物。固体分散体(solid dispersion，SD)：选用无水乙醇作溶剂，用溶剂法制备。将一定比例的姜黄素和PVP-k30溶于适量乙醇，于65℃下除去大部分的乙醇至成糊状，迅速倒如入不锈钢盘中在80℃下真空烘箱烘干，用粉碎机粉碎。制成质量比分别为1∶2、1∶4、1∶6、1∶8、1∶10的姜黄素固体分散体。
差示扫描量热实验(DSC) 工作条件：空铝钳锅为参比物，另一铝锅中放入约5mg样，扫描速度10℃·min-1，扫范围0～240℃，绘制姜黄素原料粉末、PM及SD的DSC曲线图。
X-射线粉末衍射实验 工作条件：铜靶；高压强度40KV；管流20mA；发散、散射和接受狭缝分别1°，1°，0.3mm；测速4°/min；扫描范围3°～60°(2θ)。绘制姜黄素原料粉末、PM及SD的X-射线粉末衍射曲线图。
1.3溶出度以及溶解度的测定
分析方法的建立 检测波长的确定：分别称取姜黄素和PVP-k30适量，用含2％浓HCl(w/w)、10％乙醇(V/V)的蒸馏水(以溶液A表示)配制成适宜浓度的溶液，并以该溶液为空白对照，于200～600nm范围内进行扫描。结果表明姜黄素在428nm处有最大吸收峰：而PVP-k30在此处对姜黄素的测定无干扰。因此，选定428nm作为测定波长。标准曲线：精密称取姜黄素适量，用A溶液配制成系列浓度的标准溶液，于428nm处测定吸收度，以浓度(C)对吸收度(A)进行线性回归。
PM和SD溶出度的测定 取姜黄素368.4mg、含有姜黄素368.4mg的PM和SD样品进行溶出度试验。每组样品平行测定5份，按中国药典2000版第二法进行。溶出介质为1000mL的A溶液，温度37±0.5℃，转速100±1r/min。分别在5、10、15、30、45、60、90min取样5mL并补入相同体积的溶液A，样品经0.8μm微孔滤膜过滤。取续滤液稀释后于428nm处测定吸收度，计算姜黄素的溶出度。溶出曲线见图。精密度试验：在溶出度测定试验完成后，重复测定同一份90min释放液的吸收度5次，结果吸收度的RSD＝0.383％。稳定性试验：在溶出度测定试验完成后，以90min释放液的吸收度为起点，每隔1h测定1次，其吸收度RSD＝1.286％(n＝3)。
PM和SD的溶解度测定 分别将过量的Cur、PM和SD加至盛有适量溶液A的具塞锥形瓶中，于25℃、100r/min振摇。同温静置，间隔一定的时间取样，测定姜黄素的浓度。
结果
固体分散体的制备
成功制备了PVP-Cur比例为10∶1、8∶1、6∶1、4∶1、2∶1的固体分散体。PVPk30为无定形物，熔点高(200℃以上分解)，可用溶剂法制成固体分散体，干燥品较易粉碎。
差示扫描量热分析
DSC曲线见图1，PVP-k30与姜黄素分别在74.6、187℃有吸收峰，制成的固体分散体其吸热峰均较纯辅料和Cur结晶的吸热峰前移，表明载体与Cur形成了低共熔物。Cur和PVP-k30的物理混合物(1∶8、1∶10)的Cur吸热峰部分消失，但是不完全。Cur和PVP-k30固体分散物的DSC曲线上Cur的吸热峰明显前移(1∶2、1∶4)或完全消失(1∶6、1∶8、1∶10)。
X-射线粉末衍射分析
如图2、3所示。Cur在3°～60°间有强衍射峰。PVP-k30属于无定型物，不具有晶体衍射峰。Cur和PVP-k30的物理混合物(1∶10)的X射线衍射图中仍出现晶体衍射峰，但是该衍射峰已经被PVP-k30的衍射宽带所掩盖和重叠，可能与样品中Cur所占比例较小有关。X射线衍射图中显示Cur-PVPk30比例为1∶6时Cur的结晶衍射峰即已不明显，且随着PVPK30比例的加大，图谱越来越接近PVP-k30衍射图谱，Cur的衍射峰消失得更加明显。
固体分散体系对体外溶出的影响
如图4所示，标准曲线方程C＝0.2974A+0.0011，r＝0.999，线性范围：0.025～0.1667×10-4mol/L。
体外溶出度结果如图5、6所示，各种比例的固体分散体的溶出度均高于原料，Cur与PVP-k30比例为1∶8、1∶10的SD在5min的溶出度即超过80％；比例为1∶6的SD在90min内的溶出度未到50％，而比例为1∶4以下的SD，在90min的溶出度未过10％。各比例Cur与PVP-k30的PM在90min的溶出度均未到5％。可见，固体分散体系大大增加了药物的体外释放速率，并且随着SD中载体比例的增加，增溶作用更明显。
固体分散体系对溶解度的影响
如表1所示，由于PVP-k30是水溶性高分子，与水完全互溶，姜黄素SD以及PM的溶解度实际上是姜黄素的溶解度。本文以姜黄素SD、PM不再溶解时测得的浓度为其溶解度。在过量Cur、SD、PM中加入适量的溶液A并充分振摇30min后，测得在相同的取样时间下，姜黄素溶解度随SD、PM中PVPk30比例的增大而增大，与姜黄素原料相比其溶解度显著增加(P＜0.001)。相同处方配比下，PM溶解度小于SD溶解度；Cur溶解度稳定在0.006至0.007mg·mL-1，SD(1∶10)中姜黄素溶解度在0.5h时高达6.088mg·mL-1，与同一时间下姜黄素溶解度相比，提高了880倍以上。
表1姜黄素PM体外溶出度实验(
x±SD，n＝5)
时间 溶出百分率(％)
(min) Cur PM(1∶2) PM(1∶4) PM(1∶6) PM(1∶8) PM(1∶10)
5 0.55±0.1 0.55±0.15 0.67±0.17 0.77±0.16 1.65±0.19 2.85±0.20
10 0.58±0.12 0.58±0.12 0.88±0.20 1.06±0.25 1.95±0.15 3.04±0.11
15 0.73±0.17 0.91±0.30 1.09±0.22 1.39±0.26 2.63±0.20 3.17±0.13
30 0.97±0.27 1.59±0.29 1.74±0.26 2.65±0.18 3.29±0.15 3.79±0.15
45 1.62±0.26 2.25±0.32 2.13±0.28 2.77±0.35 3.76±0.17 3.90±0.12
60 2.16±0.27 2.36±0.29 2.22±0.21 2.94±0.19 3.79±0.16 3.93±0.15
90 2.36±0.34 2.39±0.33 2.39±0.23 3.03±0.22 3.88±0.19 4.15±0.16
表2姜黄素及其SD体外溶出度数据(
x±SD，n＝5)
时间 溶出百分率(％)
(min) Cur SD(1∶2) SD(1∶4) SD(1∶6) SD(1∶8) SD(1∶10)
5 0.55±0.15 0.32±0.17 1.04±0.20 17.35±2.67 75.70±3.57 81.32±2.46
10 0.58±0.12 1.43±0.19 4.59±0.33 20.39±2.36 80.52±3.11 81.50±2.95
15 0.73±0.17 3.49±0.24 5.23±0.30 22.62±2.10 85.43±2.45 84.00±3.18
30 0.97±0.27 3.74±0.29 6.36±0.28 39.21±3.30 85.96±3.02 86.05±2.97
45 1.62±0.26 3.85±0.23 6.62±0.25 41.00±3.04 86.94±2.23 87.03±2.16
60 2.16±0.27 3.90±0.22 7.55±0.27 42.25±1.97 87.30±2.70 87.57±2.16
90 2.36±0.34 3.99±0.16 7.55±0.21 41.98±2.25 87.84±2.23 88.19±2.36
差示扫描量热分析结果提示，固体分散物中姜黄素不是以结晶方式存在，而是以分子状态分散在PVP-k30载体中；X-射线粉末衍射分析进一步说明在固体分散物中，Cur晶体消失，而以无定型或者分子形式分散于无定型的PVP-k30中，从而达到高度分散状态，这种分散与PVP-k30的量有关。
从研究结果及固体分散体的制备情况看，我们认为Cur-PVPk30的固体分散体是这样形成的：在饱和Cur-PVPk30的溶剂系统中，蒸发溶剂，Cur浓度逐渐达到溶解度，并进而越过溶解度成为过饱和溶液，过饱和程度会逐渐增强。在这一过程中，一定浓度的PVPk30有效抑制姜黄素晶核的形成和晶体的长大。挥干溶剂后就得到了Cur-PVPk30所形成的固体分散物。
通过比较研究，确定姜黄素固体分散体、物理混合物的溶出速率以及溶解度与药物原粉间差异均有显著性。姜黄素固体分散体及其物理混合物的体外释药速率以及溶解度较原料药均有明显增加，但二者增溶机理不同。物理混合物加快药物溶出，是由于水溶性载体增加了药物的湿润性之故；而固体分散法能显著改善其溶出的机制包括：(1)姜黄素在固体分散体中以无定型形式存在，大大增加了其溶解时的表面积；(2)Cur分子中的酚羟基与PVPk30分子中的羰基形成氢键，一方面使相对较小的姜黄素分子以无定型状态进入PVP大分子，另一方面，氢键的形成并没有改变PVP易溶于水的性质，所以使得难溶的姜黄素分子通过氢键分散于PVP大分子中使其变得容易溶解。对于一定分子量的PVP每个PVP分子能结合的药物分子数量是一定的，难溶的姜黄素往往具有一定的晶体状态，PVP的用量不足以结合一定量的姜黄素而使姜黄素仍以结晶状态为主，溶解度变化不大。所以PVP必须达到一定含量才能使药物表现为无定型分散体系，其溶解度才能明显增加，才能达到快速溶解的目的。(3)固体分散体中的姜黄素处于高能态，即为过饱和溶液，极易重新聚集成大颗粒，而PVPk30的围绕有效的防止这种积聚。
由表1可见，姜黄素PM以及SD溶液中姜黄素溶解度随着放置时间的延长而下降，24h后溶解度基本不变。这是由于姜黄素本身为水不溶性物质，其SD、PM加入到A液中所形成的是不稳定的过饱和溶液，随着姜黄素的不断沉淀，其浓度下降直至达到溶解平衡。
结论
以PVP-k30为载体，采用溶剂法制备Cur固体分散体显著提高了Cur的溶出速率以及溶解度，当Cur与PVP-k30质量比为1∶10时，其溶出度高达90％；溶解度是姜黄素原药的882倍。
实施例2 姜黄素固体分散体大鼠体内药代动力学的研究
2.1药品、试剂和仪器Wistar纯系大鼠(SPF级)，由第一军医大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK(粤)2002-009，粤监证字：2004A068，姜黄素，分析纯，天津市光复精细化工研究所；姜黄素固体分散体以及物理混合物(Cur与PVP-k30质量比为1∶8)，本实验室制备；乙酸乙酯，分析纯，广州化学试剂厂；雌二醇，分析纯，海南南杭药业有限公司；乙腈，HPLC级，德国Merk公司；甲醇，HPLC级，美国Fisher公司；冰醋酸，分析纯，广州化学试剂厂；纯水；氮气，高纯氮，广州气体有限公司。
2.2姜黄素血药浓度的测定
2.2.1标准溶液的配制：
用甲醇配制100μg/mL的姜黄素标准贮备液；内标雌二醇配成45μg/mL的甲醇溶液。以上溶液均储藏在棕色瓶内、4℃冷藏备用。
2.2.2测试条件(色谱条件)
选择固定相为Kromasil C18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)，流动相为甲醇∶水∶乙腈∶冰醋酸(23∶36∶41∶5，V/V)，双波长检测(姜黄素和内标的检测波长分别为428nm、280nm)，流速为1.0mL/min，柱温35℃。
2.2.3血浆样品预处理
精密吸取0.2mL血浆样品于具塞的5mL玻璃离心管中，加入10μL内标溶液(雌二醇45μg/mL)，涡旋震荡30s，然后加入1.5mL乙酸乙酯溶液2000r/min涡旋振荡萃取90s，3000rmp离心10min。取上清于另一玻璃离心管中；沉淀物用上述步骤再行萃取，合并上清夜，氮气吹干，残渣用甲醇100μL溶解，离心取20μL上清液作HPLC进样分析。
2.2.4线性范围
在5mL玻璃离心管中加入大鼠空白血浆1mL，再加入已稀释的姜黄素贮备液使姜黄素终浓度分别为30、50、200、400、600、800ng/mL，取出上述样品0.2mL于另一离心管并加入10μL内标贮备液(雌二醇45μg/mL)，按“2.2.3”样品处理方法进行操作、测定，每个浓度测试5次，以姜黄素与内标的峰面积比(Y)姜黄素血浆浓度(X)作图，得标准曲线方程。
2.2.5方法鉴定
2.2.5.1方法专属性
通过比较空白大鼠血浆、含姜黄素和内标的空白血浆以及姜黄素给药后所取血浆样品(含内标)色谱图的比较来研究测试方法的专属性。
2.2.5.2方法(加样)回收率
按照制备标准工作曲线的方法制成低、中、高(150、300、600ng/mL)三个浓度的姜黄素血浆样品，取出上述样品0.2mL按样品处理方法进行操作、测定，每个样品重复检测5次，检出量与加入量的比值为方法回收率。
2.2.5.3提取回收率
按照制备标准工作曲线的方法制成低、中、高(150、300、600ng/mL)三个浓度的姜黄素血浆样品，取出上述样品0.2mL按样品处理方法进行操作、测定；另配制相同终浓度的姜黄素甲醇溶液0.2mL，直接测定，每个样品重复检测5次。记萃取样与内标峰面积之比为A1，标准样与内标峰面积之比为A2，A1比A2即为提取回收率。
2.2.5.4精密度
按照制备标准曲线的方法制成低、中、高(150、300、600ng/mL)三个浓度的姜黄素血浆样品，按“2.2.3”样品处理方法进行操作、测定。
日内精密度：一天内重复测定5次。
日间精密度：每天测定一次，连续测定5天。
2.2.5.5灵敏度
取信噪比为3(即姜黄素峰高与噪音之比)，测得最低检测限以及最低检测浓度。
2.3药代动力学试验的给药方法设计及血样采集
选取健康、雄性Wistar大鼠，体重为300±10g，随机分成9组，每组3只。禁食12h，按含姜黄素100、200、400mg/kg(无特别说明，以下剂量均表示姜黄素实际含量)的给药剂量对大鼠用CMC-Na混悬的姜黄素，物理混合物以及固体分散体分别进行灌胃，给药后于0.25、0.50、0.75、1.0、1.5、2、3、4、6、8、10h自大鼠眼眶后静脉丛取血0.5mL，收集于加有肝素钠的离心管内，3000r/min离心10min，分离得血浆，取血浆0.2mL，按“2.2.3”样品处理方法进行操作，测定。以给药时间为横坐标，以姜黄素的血药浓度为纵坐标制备药-时曲线。
2.4实验结果
2.4.1方法特异性
在上述流动相及色谱条件下，姜黄素以及内标与血浆中的内源性物质分离良好，无杂质峰干扰。雌二醇以及姜黄素的保留时间分别为3.70min、4.70min。
2.4.2方法(加样)回收率
如表3所示，高、中、低三个浓度的加样回收率在97％至103％之间，RSD在6.08以内，效果良好，符合生物样品分析的要求。
表3姜黄素方法(加样)回收率
姜黄素加入量 检出量 回收率 平均回收率 RSD
(ng/mL) (ng/mL) (％) (％) (％)
150.57 100.38
156.99 104.66
150 159.42 106.28 102.59±2.70 2.63
154.11 102.74
148.36 98.91
300.81 100.27
339.53 113.18
300 304.57 101.52 101.63±6.18 6.08
294.39 98.13
285.10 95.03
568.31 94.72
580.70 96.78
600 626.94 104.49 97.17±3.97 4.09
556.80 92.80
582.47 97.08
2.4.3绝对回收率
如表4所示，高、中、低三个浓度的提取回收率分别为77.38％、80.13％、84.89％，RSD分别是8.0％、9.95％、9.65％，都小于10％，效果良好，符合生物样品分析的要求。
表4姜黄素血浆中的绝对回收率
萃取样与内 标准样与内
姜黄素加入 绝对回收率 平均回收率 RSD
标峰面积比 标峰面积比
量(ng/mL) (％) (％) (％)
(A1) (A2)
0.696 0.772 90.16
0.576 0.742 77.63
150 0.684 0.772 88.60 84.89±8.19 9.65
0.586 0.617 94.98
0.483 0.661 73.07
1.242 1.641 75.69
1.492 1.579 94.49
300 1.254 1.74 72.07 80.13±7.97 9.95
1.333 1.762 75.65
1.6 1.934 82.73
2.481 3.164 78.41
2.571 3.197 80.42
600 3.06 3.586 85.33 77.38±6.19 8.0
2.462 3.233 76.15
1.996 2.953 66.58
2.4.4精密度、灵敏度
日内日间的精密度如表5所示，日内日间的RSD值都小于6.63％，效果教好，符合生物样品分析要求。最低检测限：0.8ng，最低检测浓度：20ng/mL。
表5姜黄素血药浓度日内、日间差异(n＝5)
姜黄素加入量 日内差异 日间差异
(ng/mL) 测出量 RSD(％) 测出量 RSD(％)
150 151.81±7.01 4.62 155.44±10.30 6.63
300 306.03±14.68 4.80 309.83±18.56 5.99
600 602.65±19.30 3.20 615.97±27.80 4.51
2.4.5线性关系
如表6所示，在30～800ng/mL浓度范围内线性关系良好，回归方程为：Y＝221.26X±25.116(r＝0.9989)，回归曲线如图8所示。
表6姜黄素血浆线性精密度
浓度(ng/mL) 检测次数(n)
x±SD RSD(％)
30 5 0.08±0.013 16.3
50 5 0.1106±0.008 7.23
200 5 0.699±0.079 11.3
400 5 1.695±0.151 8.91
600 5 2.677±0.146 5.45
800 5 3.458±0.110 3.18
采用建立的分析方法用来检测大鼠血浆中姜黄素的浓度，专属性强，灵敏度高，当给口服给予CMC-Na姜黄素混悬液以及姜黄素物理混合物后，0-4h内大鼠血浆中姜黄素的量小于最低检测限(20ng/mL)；给予姜黄素固体分散体后，0-10h可检测到血浆中姜黄素的存在，药时曲线经3P97程序拟合，结果符合二室模型，三个给药剂量(100、200、400mg/kg)的药时曲线如图9所示，参数分别如表7、8、9所示。姜黄素血药达峰时间均在45min左右，血药峰值分别为74.558、110.174、193.665ng/mL。生物利用度分别为514.646、609.111、1028.627ng/mL·h。
表7姜黄素固体分散体大鼠给药后的主要药代动力学参数(100mg/kg，n＝3)
(100mg/kg，n＝3)
参数/单位 数值(
x±SD)
Tmax/h 0.718±0.069
Cmax/ng/mL 74.588±2.287
A/ng/mL 33.704±44.240
B/ng/mL 56.782±46.571
α/l/h 1.362±1.481
β/l/h 0.152±0.045
V/F(c)/L/kg 1.165±0.044
T1/2α/h 0.862±2.390
T1/2β/h 4.837±1.396
K21/l/h 1.315±1.513
K10/l/h 0.173±0.045
K12/l/h 0.026±0.045
AUC/ng/mL·h 514.646±101.163
CLs/L(kg·h) 0.200±0.044
表8姜黄素固体分散体大鼠给药后的主要药代动力学参数(200mg/kg，n＝3)
参数/单位 数值(
x±SD)
Tmax/ h 0.803±0.093
Cmax/ng/mL 110.174±7.474
A/ng/mL 220.224±48.725
B/ng/mL 76.072±16.885
α/l/h 1.093±0.162
β/l/h 0140±0.026
V/F(c)/L/kg 1.098±0.102
T1/2α/h 0.643±0.088
T1/2β/h 5.067±0.986
K21/l/h 0.509±0.105
K10/l/h 0.300±0.017
K12/l/h 0.424±0.104
AUC/ng/mL·h 609.111±26.713
CLs/L/(kg·h) 0.329±0.014
表9姜黄素固体分散体大鼠给药后的主要药代动力学参数(400mg/kg，n＝3)
参数/单位 数值(
x±SD)
Tmax/h 0.678±0.217
Cmax/ng/mL 193.665±10.400
A/ng/mL 985.771±124.109
B/ng/mL 84.890±28.815
α/l/h 1.554±0.746
β/l/h 0.104±0.041
V/F(c)/L/kg 1.023±0.038
T1/2α/h 0.498±0.187
T1/2β/h 7.658±3.767
K21/l/h 0.428±0.280
K10/l/h 0.386±0.061
K12/l/h 0.861±0.449
AUC/ng/mL·h 1028.627±161.403
CLs/L/(kg·h) 0.395±0.057
灌胃给予姜黄素CMC-Na混悬液，姜黄素PVP-k30物理混合物后0.25-4小时都无法在血浆中测到姜黄素原形药物，或者说其血药浓度低于最低检测限(20ng/mL)，可能是由于CMC-Na混悬液，姜黄素PVP-k30物理混合物在大鼠体内吸收差，大部分以原药形式排出体外。并有报道给大鼠口服1g/kg姜黄素，约75％自粪便排出；这些都说明姜黄素吸收差限制了其生物利用度。而给予姜黄素固体分散体后，由实验结果得知，其生物利用度相对提高，经检验属二室模型。低、中、高浓度的姜黄素血药达峰时间均在45min左右，血药峰值分别为74.558、110.174、193.665ng/mL，生物利用度分别为514.646、609.111、1028.627ng/mL·h。表明固体分散体提高了姜黄素的口服吸收以及生物利用度。药物的口服生物利用度是由多种原因决定的，其中之一就是药物在胃肠的分解，而药物的胃肠分解又是由其溶出度以及溶解度决定的。姜黄素PVP-k30固体分散体正是通过提高姜黄素的溶出度以及溶解度而达到提高生物利用度的目的。
3姜黄素固体分散体对实验性胃溃疡的药效学研究
3.1药品与试剂
姜黄素，分析纯，天津市光复精细化工研究所；姜黄素固体分散体(Cur与PVP-k30质量比为1∶8)，若无特别说明，以下所用给药剂量都为实际姜黄素含量，制备方法与实施例1相同；盐酸雷尼替丁，中诺药业有限公司，国药准字：H19994029，生产批号：04075001；利血平注射液，广东邦民制药厂有限公司，国药准字：H44021982生产批号：040620；醋酸，分析纯，广州化学试剂厂；甲醛，分析纯，广州化学试剂厂；氢氧化钠，分析纯，汕头市光华化学厂；草酸，分析纯，兴塔化工厂；酚酞，广州化学试剂厂；内皮素免疫分析药盒，北京市福瑞生物工程公司，生产批号：20050401；一氧化氮检测试剂盒，生产批号：20050325，南京建成生物工程研究所；胃蛋白酶检测试剂盒，生产批号：20050325，南京建成生物工程研究所。
Sprague-Dawley(SD)大鼠，由广东省医学实验动物中心提供，合格证号：SCXK(粤)2003-0002，粤监证字：2004A021。
NIH纯系小鼠，由广东省医学实验动物中心提供，合格证号：SCXK(粤)2003-0002，粤监证字：2004A018。
3.2.1姜黄素固体分散体对乙酸烧灼诱导大鼠胃溃疡模型作用
选择健康SD大鼠60只，雌雄各半，体重200±10g，实验前大鼠禁食不禁水24h，其中50只30mg/kg戊巴比妥钠麻醉(剩余10只作正常对照组，雌雄各半)，无菌条件于剑突下2cm处打开腹腔，将内径5mm、长30mm的玻璃管垂直放于胃体部浆膜面上，向管内加入乙酸0.02mL，1min后用棉签蘸出乙酸，用无菌生理盐水冲洗两次，逢合切口。随机分成5组，每组10只(雌雄各半)，即：模型组，姜黄素低、中、高剂量组，雷尼替丁组，模型组每天灌胃给予PVP-k30辅料720mg/kg，姜黄素低、中、高剂量组每天分别灌胃给予含姜黄素10、30、90mg/kg的固体分散体(若无特别说明，以下所用剂量都为实际姜黄素含量)，雷尼替丁组每天灌胃给予雷尼替丁27mg/kg，正常对照组每天给予等体积的生理盐水，连续给药14d，第15d禁食不禁水24h后，眼眶静脉丛取血3mL，其中2mL注入含10％EDTA-Na230μL和抑肽酶的试管中，混匀，4℃，3000rmp离心10min，分离血浆，-20℃保存待测；余下1mL注入玻璃管中，室温静置一段时间后分离血清，-20℃保存待测。血清NO和血浆ET测定按说明书操作。
脱颈椎处死大鼠，打开腹腔结扎幽门贲门取胃，向胃中注入4％甲醛溶液5mL，固定30min后沿胃大弯剪开，将胃外翻，洗去食物残渣。溃疡成圆形或椭圆形，测量溃疡处的最长径和最短径，以他们的均值作为溃疡指数[79]。在各组间进行统计比较，按公式5-1计算溃疡抑制率。
3.2.2姜黄素固体分散体对大鼠幽门结扎胃溃疡模型的作用
选择健康SD大鼠50只，雌雄各半，体重200±10g，随机分成5组，每组10只(雌雄各半)，即：模型组，姜黄素低、中、高剂量组，雷尼替丁组，模型组每天灌胃给予PVP-k30辅料720mg/kg，姜黄素低、中、高剂量组每天分别灌胃给予含姜黄素10、30、90mg/kg的固体分散体，雷尼替丁组每天灌胃给予雷尼替丁27mg/kg。实验前3d开始给药，实验前大鼠禁食不禁水36h，30mg/kg戊巴比妥钠麻醉下无菌操作，施幽门结扎术，术后禁食禁水，16h后解剖，收集胃液，离心测量胃液含量；胃经4％甲醛溶液固定30min后，观察溃疡情况并记录溃疡指数，溃疡指数评分按Adami等方法略加修改，分为六级[80-81]。0级：无病变；I级：出血，糜烂或发生糜烂点(≤1mm)；II级：1～5个小溃疡(＞1mm，≤3mm)；III级：6个以上小溃疡或1个大溃疡(＞3mm)；IV级：11个以上小溃疡或2个大溃疡(＞3mm)；V级：2个以上大溃疡。在各组间进行统计比较，溃疡抑制率按公式5-2计算。
测量胃液量的胃液经离心，取1mL稀释至10mL，用0.01mol/L NaOH液滴定其酸度；胃蛋白酶活性的测定按说明书操作。
3.2.3姜黄素固体分散体对利血平诱导小鼠胃溃疡模型的作用
选择健康NIH小鼠，雌雄各半，体重20±1g，随机分成5组，每组10只(雌雄各半)，即：模型组，姜黄素低、中、高剂量组，雷尼替丁组，模型组每天灌胃给予PVP-k30辅料720mg/kg，姜黄素低、中、高剂量组每天分别灌胃给予含姜黄素10、30、90mg/kg的固体分散体，雷尼替丁组每天灌胃给予雷尼替丁27mg/kg。实验前3d开始给药，第4d给药后开始禁食24h，第5d给药后1h，皮下注射利血平10mg/kg；6小时后脱颈椎处死，取胃、4％甲醛固定，计数腺胃部出现的溃疡点数作为溃疡指数。溃疡抑制率按公式5-2计算。胃粘膜损伤评定方法：无损伤粘膜0分，点状损伤≥1mm，1点为0.2分，2点为0.4分；条状损伤1条为1分，2条为2分，依次类推。
3.3.1姜黄素固体分散体对乙酸烧灼性胃溃疡的保护作用
3.3.1.1姜黄素固体分散体对溃疡指数的影响
结果如表10所示，与模型组相比，姜黄素中、高剂量组以及雷尼替丁组溃疡指数均降低(p＜0.01)，姜黄素低剂量给药组对胃溃疡指数虽有降低趋势，但p＞0.05。结果表明，姜黄素固体分散体中、高剂量对该模型胃溃疡具有显著的抑制作用。
表10姜黄素SD对乙酸烧灼性胃溃疡的作用(
x±SD，n＝10)
组别 剂量(mg/kg) 溃疡指数 愈合率(％)
模型组(给予辅料) 720 5.87±0.48
姜黄素低剂量组 10 5.35±0.77 8.86
姜黄素中剂量组 30 4.59±0.96** 21.81
姜黄素高剂量组 90 3.33±0.93** 43.27
雷尼替丁组 27 2.40±0.23** 59.07
与模型组比较，**p＜0.01
3.3.1.2姜黄素固体分散体对血清NO与血浆ET含量的影响
结果如表11所示，模型组大鼠血清NO水平明显下降，血浆ET水平明显升高，与模型组比较，姜黄素高剂量给药组以及雷尼替丁组的血清NO水平显著升高(p＜0.01)，血浆ET显著降低(p＜0.05)。
表11姜黄素SD对各组血清NO和血浆ET含量的影响(
x±SD，n＝10)
组别 剂量(mg/kg) 血清NO(μmol/mL) 血浆ET(pg/mL)
正常对照组 - 54.75±15.54 63.05±23.80
模型组(给予辅料) 720 23.63±5.73 163.65±63.84
姜黄素低剂量组 10 26.63±7.17 157.57±57.28
姜黄素中剂量组 30 29.75±5.90* 135.12±36.62
姜黄素高剂量组 90 39.63±12.73** 104.22±63.84*
雷尼替丁组 27 49.13±16.57** 97.97±27.93*
与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01
3.3.2姜黄素固体分散体对幽门结扎胃溃疡的保护作用
3.3.2.1姜黄素固体分散体对溃疡指数的影响
结果如表12所示，与模型组相比，姜黄素高剂量给药组以及雷尼替丁组的溃疡指数均降低(p＜0.01)，姜黄素中剂量给药组对胃溃疡指数也有降低作用(p＜0.05)，但姜黄素低剂量给药组对胃溃疡指数无显著变化。结果表明，姜黄素固体分散体对该模型胃溃疡具有显著的抑制作用。
表12姜黄素SD体对幽门结扎胃溃疡的作用(
x±SD，n＝10)
组别 剂量(mg/kg) 溃疡指数 愈合率(％)
模型组(给予辅料) 720 4.25±0.71 -
姜黄素低剂量组 10 4.13±0.64 2.82
姜黄素中剂量组 30 3.75±0.46 11.76
姜黄素高剂量组 90 2.38±0.74** 44.00
雷尼替丁组 27 1.63±0.52** 61.65
与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01
3.3.2.2姜黄素固体分散体对胃液含量，胃液酸度以及胃蛋白酶活性的影响结果如表13所示，与模型组相比，姜黄素中、高剂量给药组以及雷尼替丁组对胃液含量、胃酸分泌及胃蛋白酶活性均具有显著的抑制作用(p＜0.05，p＜0.01)；并且姜黄素低剂量给药组对胃蛋白酶活性也有显著的抑制作用(p＜0.05)。
表13姜黄素SD对各组胃液含量，胃液酸度以及胃蛋白酶活性的影响(
x±SD，n＝10)
剂量 胃液量 胃液酸度 胃蛋白酶活性
组别
(mg/kg) (mL) (mmol/L) (U/mL)
模型组(给予辅料) 720 14.61±1.80 87.70±9.84 408.63±41.75**
姜黄素低剂量组 10 13.70±1.26 82.19±9.48 372.13±38.12
姜黄素中剂量组 30 12.68±1.46* 77.62±8.34* 358.13±37.44*
姜黄素高剂量组 90 9.99±0.79** 65.77±8.19** 292.13±41.93**
雷尼替丁组 27 7.63±1.29** 55.66±10.46** 254.88±42.37**
与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01
3.3.3.1姜黄素固体分散体对溃疡指数的影响
结果如表14所示，与模型组相比，姜黄素中、高剂量给药组以及雷尼替丁组的溃疡指数均降低(p＜0.01)，结果表明，姜黄素固体分散体对该模型胃溃疡具有显著的抑制作用。
表14姜黄素SD对利血平诱导的胃溃疡的作用(
x±SD，n＝10)
组别 剂量(mg/kg) 溃疡指数 愈合率(％)
模型组(给予辅料) 720 5.13±0.59 -
姜黄素低剂量组 10 4.68±0.50 8.77
姜黄素中剂量组 30 3.88±0.40** 24.37
姜黄素高剂量组 90 3.03±0.64** 40.94
雷尼替丁组 27 2.23±0.52** 56.53
与模型对照组比较，**p＜0.01
4.姜黄素固体分散体的镇咳、祛痰和抗炎作用
实验药品、试剂、动物
Sprague-Dawley，SD大鼠，SPF级，由广东省医学实验动物中心提供，合格证号：SCXK(粤)2003-0002，粤监证字2004A021。NIH纯系小鼠，SPF级，由广东省医学实验动物中心提供，合格证号：SCXK(粤)2003-0002，粤监证字2004A018。昆明小鼠，SPF级，由广东省医学实验动物中心提供，合格证号：SCXK(粤)2003-0002，粤监证字2004A019。
阳性对照药：地塞米松片，广东华南制药厂，国药准字：H44024469，批号：040301。阳性对照药：京都念慈庵蜜炼川贝枇杷膏，京都念慈庵总厂有限公司，医药产品注册号：ZC2002010(ZC2002009，ZC2002008)，批号：Y140495(G240317，G341119)。姜黄素，分析纯，天津市光复精细化工研究所；姜黄素固体分散体(Cur与PVP-k30质量比为1∶8)，若无特别说明，以下所用姜黄素固体分散体给药剂量都为实际姜黄素含量，制备方法与实施例1相同。
4.1.1小鼠氨水引咳实验
选取健康NIH小鼠70只，体重18-22g，雄性，随机分为7组，分别为空白对照组、地塞米松组、念慈庵组、姜黄素固体分散体四个给药剂量组(0.043、0.130、0.39和1.170g·Kg-1)，每组10只小鼠。灌胃给药，每天一次，连续给药7d。于末次给药后30min，将每只小鼠置于250ml的广口瓶中，广口瓶中预先加入吸有75μl氨水的棉球，观察并记录小鼠的咳嗽潜伏期(由放入瓶中至产生咳嗽所需的时间)和2min内小鼠咳嗽的次数(典型咳嗽是小鼠腹肌收缩，同时张大嘴，有咳声)。实验结果进行统计学处理并比较组间差异。
3.1.2小鼠气管酚红排泄实验
3.1.2.1酚红标准曲线的制作
用分析天平准确称取酚红，加5％NaHCO3，配制成浓度为100μg·ml-1的储备液，然后顺次稀释成浓度为0.1、0.3、0.5、0.7、1、3、5和10μg·ml-1的酚红溶液，以5％NaHCO3溶液作为空白对照，用546nm波长下测OD值，以酚红的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，制作标准曲线。
3.1.2.2检测方法
选取健康雄性昆明种小鼠105只，体重18～22g，随机分为7组，分别为空白对照组、地塞米松组、念慈庵组、姜黄素固体分散体给药剂量组(43、130、390、1170mg·Kg-1)每组15只小鼠。灌胃给药，每天一次，连续给药7d。末次给药30min后，腹腔注射5％酚红溶液，0.1ml/10g。注射30min后将小鼠处死，背位固定，分离气管，取一段气管(长1cm)放入装有1ml生理盐水的试管中，振荡30min，将冲洗液吸入试管内，加1mol·L-1 NaOH，0.1ml，使其呈碱性，将酚红标准管在546nm处比色，通过酚红标准曲线折算出酚红浓度(由于部分酚红可由呼吸道粘液腺分泌到气管腺内)。实验结果进行统计学处理并比较组间差异。
3.1.3小鼠耳肿胀实验
选取健康雄性昆明种小鼠105只，体重18～22g，随机分为7组，分别为空白对照组、地塞米松组、念慈庵组、姜黄素固体分散体给药剂量组(43、130、390、1170mg·Kg-1)，每组15只小鼠。灌胃给药，每天一次，连续给药7d。于末次给药30min后在小鼠右耳的前后两面涂布致炎剂二甲苯(浓度为100％)0.05ml/只，左耳不做任何处理，致使小鼠右耳发炎。30min后处死小鼠，剪下双耳用8mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重，每鼠右耳片重量减去左耳片重量即为肿胀度，计算耳肿胀度并进行统计学处理并比较组间差异。
耳肿胀度＝右耳片重量-左耳片重量
肿胀抑制率＝(对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)÷对照组平均肿胀度×100％
3.1.4大鼠足肿胀实验
选取体重健康的雄性SD大鼠70只，体重180-200g，随机分成7组，分别为空白对照组、地塞米松组、念慈庵组、姜黄素固体分散体给药剂量组(30、90、270和810mg·Kg-1)，每组10只大鼠。每天灌胃给药，每天一次，连续7d。末次给药0.5h后测定大鼠右足体积一次。测量足体积采用毛细管放大测量法：取三通开关一只，一端与20ml玻璃注射器相连，另一端与5ml刻度移液管相接，中间连一导尿管，内盛满了滴加酚红的水溶液。通过三通开关使液体凹面与注射器上标记的刻度线相平，液体充满导尿管并超过移液管的最低刻度线，读得此时移液管上的刻度，用记号笔在大鼠后肢踝关节周围做上标记线，试验者将大鼠后肢拉直，放入玻璃注射器，使大鼠踝关节标记线与注射器上标记的刻度相平，通过调节三通开关使注射器与移液管相通，液体由注射器流入移液管，移液管内液面升高。用眼注视注射器内液面，控制三通开关，当注射器内液面与标记的刻度线相平时立即旋转三通开关，使注射器与移液管内液体不再流动。读得此时移液管上的刻度，记录，两次刻度之差即为测量时大鼠的足体积。除正常组外，每组均注射角叉菜致炎。给药后，试验者将大鼠后肢拉直，把实验前现配的1％角叉菜胶(准确称取1.0g溶于100ml生理盐水)用26号针头注射器先自足趾中部皮下向上然后调转针头向下注射0.05ml。分别于注射角叉菜后0.5h、1.0h、2.0h、4.0h、6.0h测定大鼠踝关节容积的变化(即足肿胀度)，观察到达高峰时间和消退时间，计算足肿胀度并进行统计学处理并比较组间差异。
肿胀度(ml)＝致炎后右足的体积-实验前右足的体积
3.1.5大鼠棉球肉芽肿实验
选取体重健康的雄性SD大鼠70只，体重180-200g，随机分成7组，分别为空白对照组、地塞米松组、念慈庵组、姜黄素固体分散体给药剂量组(30、90、270和810mg·Kg-1)，每组10只大鼠。大鼠在乙醚浅麻醉下腹部去毛并用75％酒精和碘酒消毒。在腹部正中做一个切口，将两个灭菌棉球(每个棉球重20mg，高压灭菌，各加入氨苄青霉素每个1mg/0.1ml，50℃烘箱烤干)分别植入大鼠两侧腋窝皮下(或两侧腹股沟皮下)，将切口缝合后用75％酒精和碘酒消毒。于手术后当天开始灌胃给药，每天一次，连续14d。15d颈椎脱臼处死，剥离并取出棉球肉芽组织，然后在60℃烘箱内烘12h后称干重，相比各组肉芽肿胀重量。
实验结果进行统计学处理并比较组间差异。
4.1姜黄素固体分散体的平喘、祛痰和抗炎实验结果
4.1.1小鼠氨水引咳实验
姜黄素固体分散体43、130、390、1170mg·Kg-1剂量组与空白对照组相比，能显著延长小鼠的咳嗽潜伏期，使咳嗽次数明显减少，与空白对照组相比具有显著性差异(P＜0.05)，而地塞米松对咳嗽潜伏的延长作用与空白对照组相比无显著性差异(P＞0.05)，但有延长的趋势，能够显著性的减少小鼠的咳嗽次数(P＜0.05)。姜黄素固体分散体43、130、390、1170mg·Kg-1剂量组与地塞米松组以及念慈庵组相比，止咳效果无显著性差异(P＞0.05)，各个剂量之间的镇咳作用差异不大(见表15)。
表15姜黄素固体分散体对氨水致咳小鼠的影响(
x±s，n＝10)
组别 剂量 咳嗽潜伏期 咳嗽次数
(mg·Kg-1) (s) (n)
空白对照组 -- 26.8±7.9 32.2±21.0
地塞米松组 1.55 31.2±20.3 14.±10.2*
念慈庵组 5800 38.8±16.5* 13.6±7.3*
姜黄素固体分 38.4±10.5*△■14.5±5.2*△■
43
散体组
130 38.3±11.5*△■12.4±7.6*△■
390 39.7±14.3*△■13.6±6.7*△■
1170 37.2±14.3*△■15.6±5.3*△■
与空白对照组相比，*P＜0.05；与地塞米松组相比，△P＞0.05；与念慈庵组相比，■P＞0.05。
4.1.2小鼠气管酚红排泄实验
酚红的标准曲线为：y＝0.1306x-0.0061，(r＝0.9995)。与空白对照组比，姜黄素固体分散体130、390、1170g·Kg-1组和地塞米松组、念慈庵组均能够显著性地增加小鼠气管酚红的排泄量(P＜0.05)，与念慈庵组、地塞米松组相比，姜黄素固体分散体130、390、1170mg·Kg-1组对小鼠气管酚红排泄量无显著性差异(P＞0.05)，其中姜黄素固体分散体1170mg·Kg-1组效果最佳(见表16)。
表16姜黄素固体分散体对酚红排泄量的影响(
x±s，n＝15)
组别 剂量 酚红浓度
(mg·Kg-1) (ug·ml-1)
空白对照组 - 0.21±0.10
地塞米松组 1.55 0.33±0.11
念慈庵组 5800 0.26±0.06*
姜黄素固体分散体组 43 0.28±0.12△■
130 0.29±0.07*△■
390 0.33±0.09**△■
1170 0.38±0.13**△■
与空白对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01；与地塞米松组相比，△P＞0.05；与念慈庵组相比，■P＞0.05。
4.1.3小鼠耳肿胀实验
姜黄素固体分散体390、1170mg·Kg-1给药剂量和阳性对照药均能显著性减轻二甲苯引起的小鼠耳肿胀程度(P＜0.05)，其中地塞米松组和1170mg·Kg-1姜黄素固体分散体组效果最好(P＜0.01)；与地塞米松组相比，1170mg·Kg-1姜黄素固体分散体组无显著性差异(P＜0.05)；与念慈庵组相比，42、130、390mg·Kg-1姜黄素固体分散体组无显著性差异(P＞0.05)，而1170mg·Kg-1姜黄素固体分散体组与念慈庵组相比具有显著性差异(P＜0.05)(见表17)。
表17黄素固体分散体对小鼠耳肿胀的影响(
x±s，n＝15)
组别 剂量 肿胀度
(mg·Kg-1) (mg)
空白对照组 - 19.7±4.0
地塞米松组 1.55 10.9±4.2***
念慈庵组 5800 15.7±4.3*
姜黄素固体分散体组 43 17.9±4.5▲■
130 16.6±4.3▲■
390 15.6±5.4*▲■
1170 11.7±5.6***△□
与空白对照组相比，*P＜0.05，***P＜0.001；与地塞米松组相比，▲P＜0.05；与念慈庵组相比，□P＜0.05，■P＞0.05。
4.1.4大鼠足肿胀实验
注射角叉菜胶后，大鼠足趾在20min后开始肿胀，在4h后肿胀程度最明显。30、90、270、810mg·Kg-1姜黄素固体分散体和阳性对照药在不同时间显著性的抑制角叉菜胶引起大鼠足肿胀的程度(P＜0.05)，其中地塞米松的抗炎效果最好(P＜0.01)。姜黄素固体分散体8.1g·Kg-1与念慈庵组相比，无显著性差异(P＞0.05)(见表18。
表18姜黄素固体分散体对大鼠足肿胀的影响(
x±s，n＝10)
| 组别 | 剂量(mg·Kg-1) | 不同时间足肿胀程度(ml) | ||||
| 0.5h | 1.0h | 2.0h | 4.0h | 6.0h | ||
| 空白对照组地塞米松组念慈庵组姜黄素固体分散体组 | -1.0554003090210810 | 0.39±0.210.14±0.12***0.15±0.13**△0.22±0.18*0.14±0.11**△0.15±0.06**△0.18±0.09**△ | 0.47±0.260.18±0.10***0.23±0.15*0.25±0.230.37±0.140.35±0.160.38±0.16 | 0.67±0.330.16±0.09***0.43±230.37±0.23*0.40±0.22*0.43±0.220.49±0.17■ | 0.81±0.340.15±0.10***0.43±0.26**0.40±22**0.56±0.140.53±0.290.56±0.18*■ | 0.72±0.360.18±0.10***0.41±0.26*0.26±0.19***0.38±0.22*0.25±0.17**0.33±0.16** |
与空白对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；与地塞米松组相比△P＞0.05；与念慈庵组相比■P＞0.05。
4.1.5大鼠棉球肉芽肿实验
植入棉球后，大鼠伤口愈合良好。连续给药14d后，空白对照组大鼠腋下肉芽肿非常明显，给予30、90、270、810mg·Kg-1姜黄素固体分散体能够明显抑制棉球肉芽肿的增生(P＜0.01)，而且抑制效果与阳性药念慈庵、地塞米松组相比无显著性差异(P＞0.05)。说明姜黄素固体分散体各剂量组均能有效的抑制肉芽肿的形成，具有抗慢性炎症的作用(见表19)。
表19姜黄素固体分散体对大鼠棉球肉芽肿的影响(
x±s)
剂量 动物数 肉芽肿重量
组别
(mg·Kg-1) (n) (mg)
空白对照组 - 10 105.3±39.2
地塞米松组 1.05 10 43.3±5.2**
念慈庵组 5400 10 48.2±5.3**
姜黄素固体分散体 10 51.0±6.0**△■
组 30
90 10 50.2±6.3**△■
210 10 46.9±3.6**△■
810 10 45.4±6.3**△■
与空白对照组相比，**P＜0.01；与地塞米松组相比，△P＞0.05；与念慈庵组相比，■P＞0.05。
Claims (6)
1、一种姜黄素固体分散体的制备方法，其特征在于将姜黄素和聚乙烯吡咯烷酮按质量比1∶4～1∶15溶于有机溶剂，于55～95℃下减压蒸馏除去大部分有机溶剂至成糊状，然后在60～90℃下真空烘箱烘干，粉碎，得到姜黄素固体分散体。
2、如权利要求1所述的制备方法，其特征在于姜黄素和聚乙烯吡咯烷酮的质量比为1∶6～1∶12。
3、如权利要求2所述的制备方法，其特征在于姜黄素和聚乙烯吡咯烷酮的质量比为1∶7～1∶10。
4、如权利要求1或2或3所述的制备方法，其特征在于所述有机溶剂为无水乙醇、丙醇、异丙醇或乙酸乙酯。
5、一种姜黄素固体分散体，其特征在于由权利要求1所述的制备方法制备而成。
6、权利要求5所述的姜黄素固体分散体在制备用于治疗胃溃疡、镇咳、祛痰和抗炎的药物或保健品中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2005100350608A CN100340238C (zh) | 2005-06-09 | 2005-06-09 | 姜黄素固体分散体及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2005100350608A CN100340238C (zh) | 2005-06-09 | 2005-06-09 | 姜黄素固体分散体及其制备方法与应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1709228A true CN1709228A (zh) | 2005-12-21 |
| CN100340238C CN100340238C (zh) | 2007-10-03 |
Family
ID=35705561
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNB2005100350608A Active CN100340238C (zh) | 2005-06-09 | 2005-06-09 | 姜黄素固体分散体及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN100340238C (zh) |
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009079902A1 (fr) * | 2007-12-14 | 2009-07-02 | Sun Yat-Sen University | Élaboration et utilisation de composé de curcumine et zinc et sa dispersion solide |
| CN1895239B (zh) * | 2006-06-20 | 2010-05-12 | 中国人民解放军第二军医大学 | 一种姜黄素制剂及其制备方法 |
| CN101081213B (zh) * | 2007-06-26 | 2010-10-06 | 中山大学 | 丁二酸(5-雄甾烯-17-酮-3β-羟基)二酯固体分散体及其制备方法与应用 |
| CN102652741A (zh) * | 2012-05-15 | 2012-09-05 | 中国人民解放军总医院 | 姜黄素在制备治疗脑缺血再灌注损伤药物中的应用 |
| CN102670574A (zh) * | 2012-05-15 | 2012-09-19 | 中国人民解放军总医院 | 姜黄素在制备治疗肠缺血再灌注损伤药物中的应用 |
| CN103054006A (zh) * | 2012-12-25 | 2013-04-24 | 上海染料研究所有限公司 | 一种高浓度水溶性姜黄色素的制备方法 |
| CN103237458A (zh) * | 2010-10-14 | 2013-08-07 | 雅培股份有限两合公司 | 类姜黄素固体分散体制剂 |
| CN103271393A (zh) * | 2013-04-09 | 2013-09-04 | 广东工业大学 | 一种姜黄素和沙棘组成的保健饮料及其制备方法 |
| CN104739751A (zh) * | 2013-12-26 | 2015-07-01 | 四川省中医药科学院 | 一种四氢姜黄素固体分散体及其制备方法 |
| CN109481689A (zh) * | 2018-12-25 | 2019-03-19 | 广州白云山汉方现代药业有限公司 | 一种增强姜黄素水溶性的组合物及其制备方法 |
| CN109771379A (zh) * | 2019-03-06 | 2019-05-21 | 常州大学 | 一种姜黄素的碳酸钙固体分散及其制备方法 |
| CN109884236A (zh) * | 2019-03-01 | 2019-06-14 | 上海药明康德新药开发有限公司 | 姜黄素的高效液相检测方法 |
| CN110075071A (zh) * | 2019-05-22 | 2019-08-02 | 中北大学 | 一种姜黄素固体分散体的制备方法 |
| CN112870166A (zh) * | 2021-01-20 | 2021-06-01 | 中山大学 | 一种核丛青霉素固体分散体、制备方法及应用 |
-
2005
- 2005-06-09 CN CNB2005100350608A patent/CN100340238C/zh active Active
Cited By (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1895239B (zh) * | 2006-06-20 | 2010-05-12 | 中国人民解放军第二军医大学 | 一种姜黄素制剂及其制备方法 |
| CN101081213B (zh) * | 2007-06-26 | 2010-10-06 | 中山大学 | 丁二酸(5-雄甾烯-17-酮-3β-羟基)二酯固体分散体及其制备方法与应用 |
| US8759562B2 (en) | 2007-12-14 | 2014-06-24 | Xueting Mei | Preparative method and application of Zn(II)-curcumin complex and Zn(II)-curcumin solid dispersions |
| CN101205234B (zh) * | 2007-12-14 | 2010-12-29 | 中山大学 | 姜黄素-锌化合物及其固体分散体的制备方法与应用 |
| WO2009079902A1 (fr) * | 2007-12-14 | 2009-07-02 | Sun Yat-Sen University | Élaboration et utilisation de composé de curcumine et zinc et sa dispersion solide |
| CN103237458A (zh) * | 2010-10-14 | 2013-08-07 | 雅培股份有限两合公司 | 类姜黄素固体分散体制剂 |
| CN102652741A (zh) * | 2012-05-15 | 2012-09-05 | 中国人民解放军总医院 | 姜黄素在制备治疗脑缺血再灌注损伤药物中的应用 |
| CN102670574A (zh) * | 2012-05-15 | 2012-09-19 | 中国人民解放军总医院 | 姜黄素在制备治疗肠缺血再灌注损伤药物中的应用 |
| CN103054006A (zh) * | 2012-12-25 | 2013-04-24 | 上海染料研究所有限公司 | 一种高浓度水溶性姜黄色素的制备方法 |
| CN103271393A (zh) * | 2013-04-09 | 2013-09-04 | 广东工业大学 | 一种姜黄素和沙棘组成的保健饮料及其制备方法 |
| CN103271393B (zh) * | 2013-04-09 | 2014-08-13 | 广东工业大学 | 一种姜黄素和沙棘组成的保健饮料及其制备方法 |
| CN104739751A (zh) * | 2013-12-26 | 2015-07-01 | 四川省中医药科学院 | 一种四氢姜黄素固体分散体及其制备方法 |
| CN104739751B (zh) * | 2013-12-26 | 2018-11-20 | 四川省中医药科学院 | 一种四氢姜黄素固体分散体及其制备方法 |
| CN109481689A (zh) * | 2018-12-25 | 2019-03-19 | 广州白云山汉方现代药业有限公司 | 一种增强姜黄素水溶性的组合物及其制备方法 |
| CN109481689B (zh) * | 2018-12-25 | 2021-12-03 | 广州白云山汉方现代药业有限公司 | 一种增强姜黄素水溶性的组合物及其制备方法 |
| CN109884236A (zh) * | 2019-03-01 | 2019-06-14 | 上海药明康德新药开发有限公司 | 姜黄素的高效液相检测方法 |
| CN109771379A (zh) * | 2019-03-06 | 2019-05-21 | 常州大学 | 一种姜黄素的碳酸钙固体分散及其制备方法 |
| CN110075071A (zh) * | 2019-05-22 | 2019-08-02 | 中北大学 | 一种姜黄素固体分散体的制备方法 |
| CN112870166A (zh) * | 2021-01-20 | 2021-06-01 | 中山大学 | 一种核丛青霉素固体分散体、制备方法及应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN100340238C (zh) | 2007-10-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1709228A (zh) | 姜黄素固体分散体及其制备方法与应用 | |
| CN1748765A (zh) | 一种具有通便排毒、减肥降脂功能的组合物及制备方法 | |
| CN1569156A (zh) | 治疗心脑血管疾病的药物制剂及其制备方法和质量控制方法 | |
| CN1876039A (zh) | 治疗上呼吸道感染等疾病的药物制剂及制法和质控方法 | |
| CN1876028A (zh) | 治疗冠心病的脉平药物制剂及其制备方法和质量控制方法 | |
| CN1245198C (zh) | 一种治疗糖尿病的中药组合物及其制备方法 | |
| CN1559519A (zh) | 一种夏枯草提取物及其制备方法与用途 | |
| CN1772013A (zh) | 银杏达莫注射制剂的质量控制方法 | |
| CN1799591A (zh) | 一种血府逐瘀胶囊的制备方法及其质量标准 | |
| CN1957999A (zh) | 一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法 | |
| CN1923241A (zh) | 包括淫羊藿提取物、钩藤提取物、天麻素的药物组合物及其制备方法和应用 | |
| CN1899277A (zh) | 大黄酸或大黄酸类化合物的复合物、其制备方法及其在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用 | |
| CN100341492C (zh) | 一种参芪降糖软胶囊及其制备检测方法 | |
| CN1947747A (zh) | 由木犀草素和连翘制成的药物组合物及其制备方法和用途 | |
| CN101049293A (zh) | 乙酰半胱氨酸或其药用盐和细辛脑的药物组合物 | |
| CN1726928A (zh) | 一种治疗子宫肌瘤的药物组合物及其制备方法 | |
| CN101053566A (zh) | 乙酰半胱氨酸或其盐和抗感染药物的组合物 | |
| CN1947749A (zh) | 一种由头花蓼和茯苓制成的药物组合物 | |
| CN101032544A (zh) | 一种复方金银花有机酸药物组合物及其制剂制备方法 | |
| CN1500517A (zh) | 一种治疗慢性肾炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 | |
| CN1557352A (zh) | 菊苣水提取物的新用途 | |
| CN101028336A (zh) | 一种头花蓼和独一味的药物组合物 | |
| CN1957987A (zh) | 治疗感染性疾病的炎立消制剂及制备方法和质量控制方法 | |
| CN1533806A (zh) | 促肝细胞生长素注射液及制备方法和应用 | |
| CN1954870A (zh) | 一种由肿节风和白花蛇舌草制成的药物组合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |