CN1500517A - 一种治疗慢性肾炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗慢性肾炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。该组合物由黄芪、茯苓、淫羊藿、僵蚕、全蝎、泽泻、石韦、青风藤组成。该中药组合物制备时对不同组分采用渗漉、煎煮醇缩制成干颗粒的方法，达到使有效药物成分的充分发挥，同时本发明还提供了对该组合物采用成分鉴别、含量测定的质量控制方法。本组合物在治疗慢性肾炎上具有效果稳定、显著，无明显毒副作用的特点。

Description

一种治疗慢性肾炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法

发明领域

本发明涉及一种中药组合物，特别涉及用于治疗慢性肾炎的中药组合物，同时涉及该组合物的制备方法和质量标准。

背景技术

慢性肾小球肾炎(简称慢性肾炎，CGN)，是由多种原因、多种病理类型组成原发于肾小球的一组疾病。临床特点为病程长，可以有一段时间的无症状期，呈缓慢进行性病程。尿常规检查有不同程度的蛋白尿，尿沉渣镜检常可见到红细胞，大多数患者有程度不等的高血压和肾功能损害，治疗困难，预后较差，它起病潜隐，临床表现可轻可重或时轻时重，但总的说来，是不停顿地逐渐发展至肾功能衰竭，而危及生命。

按照全国中医肾病专业委员会制定的慢性肾炎辨证分型标准，在统计了200例慢性肾炎的证型中，脾肾气虚证有96例，占48％：气阴两虚证有77例，占38.5％；  肝肾阴虚证有23例，占11.5％；脾肾阳虚证有4例，占2％。脾肾气虚证是慢性肾炎最常见的证型，开发治疗慢性肾炎脾肾气虚证的新药，对于提高慢性肾炎治疗效果有积极意义。

目前西药在治疗慢性肾炎上没有很好的办法，中医中药在治疗慢性肾炎上有其独特的效果，但在《国家基本用药目录》中治疗慢性肾炎脾肾气虚证的类似中成药仅有肾炎四味片和肾炎消肿片。肾炎四味片，其效果一般。肾炎消肿片由于疗效不理想，市场上近二年已没有销售。因此，临床医生需要、患者治疗需要、市场供销需要尽快开发出治疗慢性肾炎脾肾气虚证有效且无副作用的中成药。

发明内容

本发明的一个目的在于公开一种新的治疗慢性肾炎的中药组合物；本发明的另一个目的在于公开一种新的治疗慢性肾炎的中药组合物的制备方法；本发明的第三个目的在于公开一种新的治疗慢性肾炎的中药组合物的质量控制方法。

本发明药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)：

黄芪700-1000重量份        茯苓300-500重量份

淫羊藿100-300重量份       僵蚕200-500重量份

全蝎30-50重量份           泽泻100-300重量份

石韦300-600重量份         青风藤700-1000重量份

本发明药物组合物的原料药黄芪优选生黄芪；本发明药物组合物制剂每0.35g，相当于原药材3.48g。

本药物组合物的制备方法：

1.青风藤粉碎成粗粉，在有盖容器中将药材和1-2倍量PH值为8.0～9.0的70-85％的乙醇浸渍6～8小时，取出、分层，将润湿的药材松紧适度地装于渗漉筒中，药材装填好后，先打开浸液出口，再添加6-10倍量PH值为8.0～9.0的70-85％的乙醇，按每公斤药材每分钟1～3ml的速度进行渗漉，收集渗漉液，渗漉液的PH值为弱碱性；渗漉液于75～80℃的条件下回收乙醇，再浓缩至80℃下相对密度为1.20-1.35，即得青风藤浓缩液；

2.黄芪、茯苓、淫羊藿，加7-9倍量水煎煮2-3次，每次1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，每毫升相当于原药材2g，离心，得离心液，再浓缩至80℃下相对密度为1.20-1.35，得黄芪、茯苓、淫羊藿浓缩液；

3.僵蚕、全蝎粉碎成粗粉，加10-14倍量75-85％的乙醇照《中华人民共和国药典》2000年版一部附录IO流浸膏剂与浸膏剂下的方法渗漉，收集渗漉液，75～80℃的条件下回收乙醇，浓缩至80℃下相对密度为1.20-1.35，即得僵蚕、全蝎浓缩液；

4.石韦、泽泻一起加5-7倍量水煎煮2次，每次1-2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至适量，加90-96％的乙醇，使含醇量达65-80％，充分搅拌，e静置10-14小时，取上清液，在75～80℃的条件下回收乙醇，再浓缩至80℃相对密度为1.20-1.35，即得石韦、泽泻浓缩液；

5.将浓缩液青风藤浓缩液和僵蚕、全蝎浓缩液混和，得混合物A；

6.将黄芪(生)、茯苓、淫羊藿浓缩液和石韦、泽泻浓缩液混和，得混合物B；

7.将上述两种A、B混合物混合得本发明药物组合物，该药物组合物，经过常规工序直接或加入药学上可接受的赋型剂制成临床可接受的剂型，如片剂、口服液体制剂、胶囊、颗粒剂。

本组合物制成药剂的质量控制方法包括鉴别和/或含量测定。

鉴别方法包括下列方法中的一种和/或几种：

(a).取本组合物制剂3.5g，加甲醇40-60ml，置水浴上加热回流1.5-3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水9-12ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇提取1-3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤两次，每次20-40ml，弃去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1.5-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以12-14∶5-7∶1.5-3的氯仿-甲醇-水在9-11℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酚乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(b).取本组合物制剂3.5g，，加60-80％乙醇40-60ml，加热回流0.5-1.5小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水9-11ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取1-3次，每次15-25ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤1-3次，每次20-40ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以9-11∶0.5-1.5∶0.5-1.5∶0.5-1.5醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(c).取本组合物制剂5.3g，加乙醚20-35ml，加热回流0.5-1.5小时，滤过，滤液挥干，残渣加环乙烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取茯苓对照药材8g，加乙醚30-50ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液4μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以石油醚30-60℃下，80-90∶14-16∶0.5-1.5的石油醚-丙酮-醋酸乙酯为展开剂，预饱和10-20分钟，展开，取出，晾干，置紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(d).取本组合物制剂1.8g，加乙醇14-18ml，超声处理25-35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6-8∶1-3∶0.5-1.5的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试剂；供试品色谱中，在与对照晶色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定方法包括下列方法中的一种和/或几种：

(a).黄芪甲苷，取本组合物制剂，研细，取细粉3g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，冷浸过夜，置水浴上加热回流提取至无色，提取液回收甲醇并浓缩至于，残渣加水10-20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3-5次，每次15-30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤1-3次，每次40-60ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加水5～7ml微热使溶解，放冷，通过吸附树脂柱，以水40-60ml洗脱，弃去水液，再用30-60％乙醇洗脱，弃去30-60％乙醇洗脱液，继用60-80％乙醇100-140ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至2ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液4μl，对照晶溶液2μl与6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以12-14∶5-7∶1-3的氯仿-甲醇-水在8-12℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法进行扫描，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得本品每0.35g含黄芪以黄芪甲苷(C₄₁H₆₈O₁₄)计不得少于0.18mg；

(b).淫羊藿苷：色谱条件与系统适应性实验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以25-40∶60-80的乙腈-水为流动相，检测波长260-280nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备，精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得对照品溶液；供试品溶液的制备，取本组合物3.5g，研细，取0.5g，精密称定，加60-80％乙醇25ml，超声处理0.5-2小时，滤过，滤渣用适量60-80％乙醇洗涤，收集滤液与洗涤液，置水浴上蒸于，残渣加水8-12ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2-4次，每次15-25ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤1-3次，每次15-25ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，作为供试品溶液；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得本品每0.35g含淫羊藿以淫羊藿苷(C₃₃H₄₀O₁₅)计不得少于0.20mg。

本组合物在治疗慢性肾炎气虚证中，可显著降低血肌酐、血尿素氮，升高血浆白蛋白，降低胆固醇和甘油三酯，有明显的利尿作用，极大地改善病人的临床症状，具有标本兼治的特点，并且无毒、无任何副作用。

下面实验例用于进一步说明本发明。下列材料与仪器适用于各实验例。

1药物

本组合物制剂(健肾片干粉)，由江苏康缘药业股份公司提供，批号010310。每克干粉含生药9.94克，成人日用量为42g/60Kg。临用前用蒸馏水配制成0.14g/ml、0.28g/ml、0.56g/ml三种浓度的混悬液(均按生药量计算)。肾炎四味片，荆州市制药厂(原湖北沙市制药厂)出品，ZZ-4326一鄂卫药准字(1981)第001544号，批号：991002，规格：每片0.36克，成人日用量8.64g/60Kg。该药主要成分为胡枝子、黄芪、黄芩、石韦。将该药粉碎过120目筛，加蒸馏水配制成0.05g/ml浓度的肾炎四味片混悬液(均按生药量计算)。  嘌吟霉素(Puromycin，造模药物)：Sigma化学公司，批号10278。

2主要试剂

无水乙二胺，上海试剂一厂，批号：000210；碳化二亚胺，美国Sigma公司，批号：1531H；牛血清白蛋白，美国Amresc。公司，批号：051 7H：弗氏不完全佐剂，Gibco公司，批号：1079128：生理盐水，南京小营制药厂，批号：000823；肌酐液体试剂(碱性苦味酸法)，北京中生生物工程高技术公司，批号：000406；尿素试剂盒(尿素酶法)，北京中生生物工程高技术公司，批号：000401；白蛋白液体试剂盒(溴甲酚绿法)，北京中生生物工程高技术公司，批号：990908；胆固醇试剂盒(CHOD-PAP法)，北京中生生物工程高技术公司，批号：000502；甘油三酯试剂盒(GPO-PAP法)，北京中生生物工程高技术公司，批号：000510；尿蛋白试剂盒(化学比色法)，英国RANDOX公司，批号：3971H；羊抗鼠免疫荧光抗体(FITC)IgG，北京中山生物技术有限公司，批号：45501；兔抗人免疫荧光抗体(FITC)C3补体，北京中山生物技术有限公司，批号：038(101)。

3主要仪器

REVCO-80℃超低温冰箱，MILLIPORE纯水净化系统，TGL-16G台式高速离心机，DKB-8A型电热恒温水槽(上海精密实验设备有限公司)，HG75-3A型电热恒温两用箱(南京实验仪器厂)，LDZ5-2型离心机(北京医用离心机厂)。筒形大白鼠固定器(江苏省张家港市医用生理器械厂)。SHANDON冷冻切片机，AO荧光显微镜，JEM-1200EX透射电镜。

4动物

雄性健康Wistar大鼠，清洁级，体重180±20克，购自中国科学院上海实验动物中心，合格证：中科院动管会003号。

5饲料

饲料为南京江浦实验动物饲料厂生产的标准大鼠全价颗粒饲料。

6实验条件

实验过程中大鼠自由摄食、饮水，室内温度控制在18～24℃，相对湿度保持在40-70％。工作照度为150～300Lux，尽夜明暗交替时间(h)：10/14。

7统计方法

采用最小显著差法(LSD法)和方差分析法(F检验)进行统计分析。

实验例1：本发明药物组合物制成的片剂(健肾片)对阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)所致大鼠膜性肾病的影响

1.分组及用药剂量

正常对照组：雄性Wistar大鼠10只，灌服蒸馏水3ml，每日一次。灌胃1小时后尾静脉注射生理盐水1ml，隔日一次。

模型对照组：雄性Wistar大鼠10只，灌服蒸馏水3ml，每日一次。灌胃1小时后尾静脉注射C-BSA4mg，将C-BSA用生理盐水配制成4mg/ml浓度的溶液尾静脉注射，隔日一次，肾炎四味片对照组：雄性Wistar大鼠10只，每日用药剂量0.79g/Kg，相当于人体用药量的5.5倍，以0.05g/ml的肾炎四味片混悬液灌胃，每日一次。灌胃1小时后尾静脉注射C-BSA4mg，将C-BSA用生理盐水配制成4mg/ml浓度的溶液尾静脉注射，隔日一次。健肾片低剂量组：雄性Wistar大鼠10只，每日用药剂量2.1g/Kg，相当于人体用药量的3倍，制成0.14g/ml健肾片混悬液灌胃，每日一次。灌胃1小时后尾静脉注射C-BSA4mg，将C-BSA用生理盐水配制成4mg/ml浓度的溶液尾静脉注射，隔日一次。

健肾片中剂量组：雄性Wistar大鼠10只，每日用药剂量4.2g/Kg，相当于人体用药量的6倍，以0.28g/ml的健肾片混悬液灌胃，每日一次。灌胃1小时后尾静脉注射C-BSA4mg，将C-BSA用生理盐水配制成4mg/ml浓度的溶液尾静脉注射，隔日一次。

健肾片高剂量组：雄性Wistar大鼠10只，每日用药剂量8.4g/Kg，相当于人体用药量的12倍，以0.56g/ml健肾片混悬液灌胃，每日一次。灌胃后1小时尾静脉注射C-BSA4mg，将C-BSA用生理盐水配制成4mg/ml浓度的溶液尾静脉注射，隔日一次。

大鼠用药量均按文献方法换算。健肾片治疗组剂距比1∶2∶4。

1.2、给药时间：连续给药4周。

1.3、检测指标

1.4.1用药前及用药2周、4周分别收集24小时尿标本，测定尿量，检测24小时尿蛋白定量(UTP)、24小时尿肌酐(Ucr)。

1.4.2用药2周、4周分别眼眶静脉丛采血检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)、胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)。

1.4.3用药结束后每组随机取5只大鼠新鲜肾组织做免疫荧光检查。

1.4.4每组按从小到大编号顺序取2份，肾组织标本分别进行邢染色、PAS染色、PAM染色、Masson染色做光镜检查，并做超薄切片进行电镜检查。

2结果

2.1一般状况及尿量变化

表1健肾片对C-BSA所致膜性肾病大鼠体重的影响(g，X±S)

组别	剂量(g/Kg体重)	给药前体重	给药后体重
							1周	2周	3周	4周
			正常对照组	-	219.5±20.77	234.5±20.34					249.0±19.83	265.0±20.55	279.5±19.92
模型对照组	-	221.5±14.54					225.0±15.47	231.0±15.24	238.1±14.87*	244.4±14.00*
			肾炎四味片组	1.33	219.0±20.25	228.0±20.03					238.5±19.01	249.0±19.69	258.5±22.37
健肾片I组	2.1	221.0±14.30					226.5±15.10	233.0±16.70	240.0±15.81*	251.5±15.64*
			健肾片II组	4.2	220.5±17.55	227.5±19.18					237.0±20.58	248.5±20.96	262.0±23.59
健肾片III组	8.4	218.5±19.73					227.0±20.03	238.0±21.11	252.5±21.25	268.5±21.86Δ

与正常对照组比较：*p＜0.05。

与模型对照组比较：P＜0.05。

表2健肾片对C-BSA所致膜性肾病大鼠尿量的影响(ml/24h，±S)

组别            剂量         给药前         给药后2周         4周

                (g/Kg体重)

正常对照组      -            7.40±3.99     8.63±3.21        7.31±3.90

                             (10)           (10)              (10)

模型对照组      -            7.35±1.85     13.47±6.58^**    5.81±2.82

                             (10)           (10)              (8)

肾炎四味片组    1.33         7.34±1.15     8.15±3.47^ΔΔ      10.52±8.00^Δ

                             (10)           (10)              (10)

健肾片I组       2.1          7.30±1.20     17.30±16.50^Δ     17.29±12.84^ΔΔ

                             (10)           (10)              (10)

健肾片II组      4.2          7.47±2.87     15.16±9.44       11.19±4.26^ΔΔ

                             (10)           (10)              (10)

健肾片III组     8.4          7.36±2.62     10.80±6.62       12.28±6.86^ΔΔ

                             (10)           (10)              (10)

与正常对照组比较：*p＜0.05，**p＜0.01。

与模型对照组比较：ΔP＜0.05，ΔP＜0.01。

()内为动物数。

造模各组大鼠，造模后均出现精神不振，反应迟钝，喜拱背扎堆，毛发欠光泽，饮食减少，活动量少，体重增长缓慢，大便稀溏等。模型对照组大鼠有的出现腹胀大，会阴部水肿，有的处死时剖腹可见有大量腹水。治疗组与模型对照组相比程度要轻，一般状况要好于模型对照组。治疗组体重增加高于模型对照组，健肾片III组体重明显高于模型对照组，P＜0.05。造模后，模型对照组大鼠尿量先增加后减少，给药4周后，健肾片I、II、III组尿量明显大于模型对照组，P＜0.01。

实验过程中，模型对照组大鼠死亡2只。其中1只因采血不慎致失血过多而死亡，另1只死亡大鼠肤色苍白，形体瘦弱，死亡后解剖见腹腔有大量腹水，肾脏及其它脏器未见明显异常。

2.2 24小时尿蛋白定量的变化

结果见表3。

表3健肾片对C-BSA所致膜性肾病大鼠24小时尿蛋白的影响(mg/24h，X±S)

组别          剂量        给药前        给药后2周         4周

              (g/Kg体重)

正常对照组    -           3.57±2.07    5.73±2.03        8.20±3.65

                          (10)          (10)              (10)

模型对照组    -           3.87±2.36    58.74±39.6^**    266.4±103.3^**

                          (10)          (10)              (8)

肾炎四味组    1.33        3.65±1.48    39.83±22.31^ΔΔ   70.6424.62^ΔΔ

                          (10)          (10)              (10)

健肾片I组     2.1         3.82±1.99    33.97±15.2^ΔΔ    47.51±24.23^ΔΔ

                          (10)          (10)              (10)

健肾片II组    4.2         3.36±1.08    31.03±6.30^ΔΔ    42.01±12.74^ΔΔ

                          (10)          (10)              (10)

健肾片III组    8.4        3.79±1.36    26.39±11.83^ΔΔ   29.60±11.06^ΔΔ

                          (10)          (10)              (10)

与正常对照组比较：  *P＜0.01。

与模型对照组比较：ΔΔP＜0.01。

()内为动物数。

造模后，大鼠尿蛋白明显升高，模型组与正常组比较P＜0.01。健肾片I、II、III组组尿蛋白明显低于模型对照组(P＜0.01)。给药2周时即起效，4周非常明显。

2.3血肌酐和尿素氮的变化

表4健肾片对C-BSA所致膜性肾病大鼠血肌酐和尿素氮的影响(X±S)

组别           剂量         Scr(μmmol/L)                 BUN(mmol/L)

               (g/Kg体重)   2周            4周            2周             4周

正常对照组     -            105±2.11      102±8.01      4.33±0.73      4.14±1.51

                            (10)           (10)           (10)            (10)

模型对照组     -            144±39.26^**  125±7.5^**    9.62±4.01^*    10.5±2.98^**

                            (10)           (8)            (10)            (8)

肾炎四味片组   1.33         115±11.1^ΔΔ   119±10.9      7.52±1.75^ΔΔ    6.51±1.38^ΔΔ

                            (10)           (10)           (10)            (10)

健肾片I组      2.1          130±28.5^Δ     123±14.4      7.80±1.25^Δ      6.66±0.85^ΔΔ

                            (10)           (10)           (10)            (10)

健肾片II组     4.2          122±8.65^ΔΔ   115±8.09^ΔΔ   7.01±1.56^Δ      6.40±1.17^ΔΔ

                            (10)           (10)           (10)            (10)

健肾片III组    8.4          115±9.03^ΔΔ   115±9.03^ΔΔ   6.38±1.14^Δ      5.52±2.41^ΔΔ

                            (10)           (10)           (10)            (10)

与正常对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01。

与模型对照组比较：ΔP＜0.05，ΔΔ＜0.01

()内为动物数。

表4表明，大鼠造模后血肌酐、尿素氮升高，健肾片组两者数值低于模型组。给药4周后，健肾片II、III组血肌酐明显低于模型组(P＜0.01)，健肾片I、II、III组血尿素氮含量低于模型组(P＜0.01)。

2.4血浆白蛋白的变化

表5健肾片对C-BSA所致膜性肾病大鼠血浆白蛋白的影响(g/L X±S)

组别          剂量        2周             4周

              (g/Kg体重)

正常对照组    -           36.4±0.52      38.3±0.82

                          (10)            (10)

模型对照组    -           29.6±1.35^**   29.0±1.51^**

                          (10)            (8)

肾炎四味片组  1.33        35.3±6.4^ΔΔ     2.8±1.81^ΔΔ

                          (10)            (10)

健肾片I组     2.1         32.3±1.49^Δ      32.0±1.05^Δ

                          (10)            (10)

健肾片II组    4.2         34.3±5.26^ΔΔ    32.1±0.74^Δ

                          (10)            (10)

健肾片III组   8.4         36.4±7.43^ΔΔ    33.4±1.65^ΔΔ

                          (10)            (10)

与正常对照组比较：**P＜0.01。

与模型对照组比较：ΔP＜0.05。ΔP＜0.01。()内为动物数。

从表5可以看出，大鼠造模后血浆白蛋白下降，模型组与正常组比较差异显著(P＜0.01)。给药2周、4周时，健肾片I、II、II工组血浆白蛋白均明显高于模型组(P＜0.05、0.01)。

2.5胆固醇与甘油三酯的变化

表6健肾片对C-BSA所致膜性肾病大鼠胆固醇、甘油三酯的影响(mmol/L，X±S)

组别          剂量         CHO                             TG

              (g/Kg体重)   2周             4周             2周             4周

正常对照组    -            1.89±0.10      1.45±0.10      1.15±0.14      2.06±0.21

                           (10)            (10)            (10)            (10)

模型对照组    -            3.25±0.51^**   4.42±0.74^**   2.76±0.66^**   4.04±1.65^**

                           (10)            (8)             (10)            (8)

肾炎四味片组  1.33         1.57±0.57^ΔΔ   2.51±0.34^ΔΔ   1.26±0.51^ΔΔ   2.09±0.38^ΔΔ

                           (10)            (10)            (10)            (10)

健肾片I组     2.1          1.20±0.36^ΔΔ   2.15±0.18^ΔΔ   1.21±0.40^ΔΔ   65±0.47^ΔΔ

                           (10)            (10)            (10)            (10)

健肾片II组    4.2          1.62±0.40^ΔΔ   2.16±0.26^ΔΔ   0.88±0.35^ΔΔ   50±0.50^ΔΔ

                           (10)            (10)            (10)            (10)

健肾片III组   8.4          1.31±0.41^ΔΔ   2.02±0.32^ΔΔ   1.12±0.67^ΔΔ   33±0.22^ΔΔ

                           (10)            (10)            (10)            (10)

与正常对照组比较：*P＜0.05，*P＜0.01。

与模型对照组比较：ΔΔP＜0.01。()内为动物数。

从表6可知，造模后模型组大鼠胆固醇、甘油三酯均升高，与正常组比较P＜0.01。给药4周后，健肾片I、II、III组CHO、TG均明显低于模型组(P＜0.01)。

2.6尿肌酐、内生肌酐清除率的变化

表7健肾片对C-BSA所致膜性肾病大鼠Ucr、Ccr的影响(X±S)

组别            剂量       Ucr(μmol/L)                                      Ccr(ml/24h)

              (g/Kg体重)   给药前          给药后2周        4周              给药后2周      4周

正常对照组     -           5634±1579      3976±1279       4215±1940       298±67        241±64.4

                           (10)            (10)             (10)             (10)           (10)

模型对照组     -           5717±2336      3350±1755^*     3631±1251^*     245±29.3^*   149±49^*

                           (10)            (10)             (8)              (10)           (8)

肾炎四味片组   1.33        5027±1898      3992±1440^ΔΔ     5158±2939^ΔΔ      268±141       307±94

                           (10)            (10)             (10)             (10)           (10)

健肾片I组      2.1         5091±1739      3513±1852       3801±2592       286±99.6      310±92.1

                           (10)            (10)             (10)             (10)           (10)

健肾片II组     4.2         5947±1653      4269±2572^ΔΔ    4187±1635^Δ00   357±95.2^ΔΔ   363±50.5^ΔΔ

                           (10)            (10)             (10)             (10)           (10)

健肾片III组    8.4         5023±1572      4888±2434^ΔΔ    4887±2709^ΔΔ      362±96.8^ΔΔ   388±40.4^ΔΔ

                           (10)            (10)             (10)             (10)           (10)

与正常对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01。

与模型对照组比较：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。 ()内为动物数。

由表7可知，造模后大鼠Ucr、Ccr下降，与正常组比较P＜0.05。给药4周后，健肾片II、III组Ucr、Ccr较模型对照组升高，P＜0.05、0.01。

2.7病理形态学改变

2.7.1免疫荧光检查

在荧光显微镜下放大400倍观察，记录荧光强度，并用柯达400(27定)胶卷摄片，曝光指数设定为800，测定自动曝光时间(秒)。每个标本分别测定5个肾小球，求出平均值。结果见下表。

表8 4周时大鼠肾组织免疫荧光曝光时间的比较(秒，X±S)

组别          剂量         IgG               C₃

              (g/Kg体重)

模型对照组    -            0.76±0.06        1.43±0.83

肾炎四味片组  1.33         1.85±0.40        4.76±1.69^Δ

健肾片I组     2.1          5.98±0.58^Δ         6.92±1.10^Δ

健肾片II组    4.2          10.25±0.97^Δ       11.19±1.56^Δ

健肾片III组   8.4          15.84±1.97^ΔΔ     21.35±2.19^ΔΔ

与模型对照组比较：  P＜0.05。  AAP＜0.01。

正常对照组：在荧光显微镜下，肾小球毛细血管壁无IgG、C3沉积。

模型对照组：IgG、C3沿肾小球毛细血管壁呈耀眼的弥漫性的细颗粒状沉积，荧光强度为+++～++++。放大400倍摄片时自动曝光时间最短。

肾炎四味片组：IgG、C3沿肾小球毛细血管壁呈细颗粒状沉积，荧光强度为++～+++。摄片时自动曝光时间较模型组延长。见图3-4。

健肾片I组：IgG、C3沿肾小球毛细备管壁呈细颗粒状沉积，荧光强度++～+++，自动曝光时间较模型对照组延长，P＜0.05。见图5-6。

健肾片II组：IgG、C3沿肾小球毛细血管壁呈细颗粒状沉积，荧光强度+～++，亮度较模型组明显减弱，自动曝光时间较模型对照组延长，P＜0.05。健肾片III组：IgG、C3沿肾小球毛细血管壁似乎可见有细颗粒状沉积，荧光强度±～+，自动曝光时间明显延长，与模型对照组比较P＜0.01。

2.7.2光镜检查

参照章友康[2]等方法测量肾小球直径和肾小球内细胞数。光镜下放大400倍，肾小球直径为每张切片中5个最大肾小球直、横径的平均值，肾小球细胞数为每张切片中5个最大肾小球细胞数的平均值。结果见下表。

表9 4周时大鼠肾小球直径和肾小球细胞数的比较(X±S)

组别           剂量         肾小球直径       肾小球细胞数

               (g/Kg体重)   (μm)            (个/肾小球)

正常对照组      -           89.10±3.12      43.50±5.81

模型对照组      -           107.21±6.34^*   76.47±6.20^*

肾炎四味片组   1.33         103.54±5.79     59.20±7.24

健肾片I组      2.1          105.46±7.01     62.32±8.15

健肾片II组     4.2          97.50±6.03      56.78±5.38

健肾片III组    8.4          92.14±6.40^Δ      51.54±4.36^Δ

与正常对照组比较：*P＜0.05。

与模型对照组比较：ΔP＜0.05。

正常对照组：HE染色肾小球结构正常分布均匀，肾小球毛细血管袢开放，基底膜无增厚，上皮细胞足突形态正常，系膜细胞及基质无增殖，肾小球直径为89.10±3.12llm，肾小球细胞数为43.50±5.81个/肾小球，肾小管、间质无异常。PAS、PAM、Masson染色无异常。

模型对照组：在HE、PAS、PAM、MASSON染色下，肾小球体积增大，细胞数增加，肾小球直径为107.21±6.34llm，肾小球细胞数为76.47±6.20个/肾小球，与正常组比较P＜0.05。基质增多，基底膜无明显增厚现象。

肾炎四味片组、健肾片I、I.I、III组：肾小球体积增大，细胞数略增多，健肾片III组肾小球直径为92.14±6.40lim，肾小球细胞数为51.54±4.36个/肾小球，与模型对照组比较P＜0.05。基底膜无明显增厚。

2.7.3电镜检查

正常对照组：肾小球细血管袢开放，内皮细胞分布均匀，基底膜厚度100～150，无增厚，无电子致密物沉积，三层结构清晰，上皮细胞无肿胀，足突清晰无融合，系膜区无扩大，未见系膜细胞增生基质增多。见图17-18。

模型对照组：肾小球毛细血管基底膜较正常组增厚，厚度为200～300，上皮细胞下见少量电子致密物沉积，上皮细胞广泛足突融合，有明显的假绒毛样改变。

肾炎四味片组：肾小球毛细血管基底膜无明显增厚，上皮细胞下无电子致密物沉积，上皮细胞足突融合、有假绒毛样改变。见图23-24。

健肾片工组：肾小球毛血血管基底膜无明显增厚，上皮细胞足突融合，假绒毛样改变仍存在，未见电子致密物沉积。健肾片II组：肾小球毛细血管基底膜无明显增厚，未见电子致密物沉积，上皮细胞足突融合，有假绒毛样改变。

健肾片III组：肾小球超微结构接近正常，肾小球毛细血管壁基底膜无增厚，无电子致密物沉积，上皮细胞足突融合及假绒毛样改变明显减轻。

3试验结论

用C-BSA制作大鼠MN模型已被广泛用于药理药效学研究。由于抗原的理化或免疫学特性，可预先种植或结合于肾小球，后来在肾脏原位形成IC，最后导致肾炎的产生。^[2]本实验用C-BSA复制大鼠膜性肾病模型，与文献报道变化一致。采用健肾片干粉高、中、低剂量组灌服MN大鼠连续4周，结果表明：健肾片I、II、III组对大鼠删的尿蛋白有明显的降低作用，并能降低血肌酐、尿素氮，提高内生肌酐消除率，升高血浆白蛋白，降低胆固醇、甘油三酯，且具有明显的利尿作用。肾脏组织学观察提示，健肾片I、II、III剂量组能减轻删大鼠肾小球毛细血管基底膜的增厚和C3、IgG的沉积的荧光反应，及上皮电子致密物的沉积，健肾片组病理损害明显轻于模型对照组。

实验例2：对嘌呤霉素所致大鼠微小病变型肾病的影响

1、分组及用药剂量

同实验例1。

1.3给药时间

从第一次注射嘌吟霉素起，连续给药4周。

1.4检测指标

1.4.1用药前及用药2周、4周分别收集24小时尿标本，测定尿量，检测24小时尿蛋白定量(UTP)、24小时尿肌酐(Ucr)。

1.4.2用药2周、4周分别眼眶静脉丛采血检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)、胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)。

1.4.3每组按从小到大编号顺序取2份，肾组织标本分别进行邢染色、PAS染色、PAM染色、Masson染色做光镜检查，并做超薄切片进行电镜检查。

病理组织学检查由江苏省中医院病理科、南京军区总院病理科电镜室承担。

2结果

2.1一般状况及尿量变化

表10  健肾片对嘌呤霉素所致微小病变型肾病大鼠体重的影响(g，X±S)

组别          剂量         给药前体重                          给药后体重

              (g/Kg体重)                   1周             2周             3周             4周

正常对照组    -            199.0±14.87    212.5±16.71    228.0±17.98    244.5±16.91    262.5±18.45

模型对照组    -            200 5±14.62    204.5±15.54    210.0±16.50    216.0±18.23^*  226.5±20 69^*

肾炎四味片组  1.33         200.0±13.74    206.0±13.50    206.5±14.54    229.0±18.07    246.5±20.55

健肾片I组     2.1          199.5±16.41    204.0±18.38    211.5±18.57    221.5±20.56    233 5±22.49^*

健肾片II组    4.2          201.0±13.29    208.5±15.64    219.5±17.71    233.0±19.61    248.5±22.24

健肾片m组     8.4          198.5±15.64    205.5±16.95    217.5±18.61    234.0±22.09    251.5±24.16^Δ

与正常对照组比较：*p＜0.05。

与模型对照组比较：P＜0.05。

表11  健肾片对嘌呤霉素所致微小病变型肾病大鼠尿量的影响(ml/24h，X±S)

组别          剂量         给药前        给药后2周        4周

              (g/kg体重)

正常对照组    -            12.57±3.47   13.13±5.74      12.44±2.74

                           (10)          (10)             (10)

模型对照组    -            3.29±5.06    8.63±3.21^**    7.31±3.90^**

                           (10)          (10)             (10)

肾炎四味片组  1.33         13.02±4.95   8.58±4.69       9.65±3.53

                           (10)          (10)             (10)

健肾片I组     2.1          2.86±3.87    14.50±8.96^ΔΔ   13.22±4.68^ΔΔ

                           (10)          (10)             (10)

健肾片II组    4.2          13.85±4.24   12.48±3.02^Δ     12.95±3.02^ΔΔ

                           (10)          (10)             (10)

健肾片III组   8.4          12.73±3.62   10.25±4.98      9.38±3.46

                           (10)          (10)             (10)

与正常对照组比较：*p＜0.05，**P＜0.01

与模型对照组比较：P＜0.05，P＜0.01，()内为动物数。

造模大鼠腹腔注射嘌呤霉素后，出现饮食减少、大便稀溏，懒动，喜拱背扎堆，体重增长减慢等变化。各治疗组与模型对照组相比，程度要轻，体重增长高于模型对照组，其中健肾片工II组体重明显高于模型对照组，P＜0.05。造模后模型对照组大鼠尿量在2周、4周时均减少，与正常组比较P＜0.01。健肾片I、II组尿量在2周、4周时比模型对照组明显增加，P＜0.01，P＜0.05。

2.2 24小时尿蛋白定量的变化

表12健肾片对嘌吟霉素所致微小病变型肾病大鼠UTP的影响(mg/24h X±S)

组别          剂量          给药前         给药后2周      4周

              (g/Kg体重)

正常对照组    -             8.15±3.21     7.37±2.03     8.20±3.65

                            (10)           (10)           (10)

模型对照组    -             7.90±2.06     1783±288^**   1805±413^**

                            (10)           (10)           (10)

肾炎四味片组  1.33          7.69±2.64     781±204^ΔΔ      983±276^ΔΔ

                            (10)           (10)           (10)

健肾片I组     2.1           8.12±2.12     803±147^ΔΔ      1121±387^ΔΔ

                            (10)           (10)           (10)

健肾片II组    4.2           7.85±2.24     794±245^ΔΔ      811±319^ΔΔ

                            (10)           (10)           (10)

健肾片III组   8.4           7.86±2.33     431±67^ΔΔ       625±127^ΔΔ

                            (10)           (10)           (10)

与正常对照组比较：  *P＜0.01

与模型对照组比较：“P＜0.01，()内为动物数

从表12可以看出，造模后大鼠尿蛋白明显增加，2周、4周时模型组尿蛋白与正常组比较均有非常显著差异，P＜0.01。健肾片I、II、III组和肾炎四味片组2周、4周时尿蛋白均明显低于模型对照组，P＜0.01。

2.3血肌酐和尿素氮的变化

表13  健肾片对嘌呤霉素所致微小病变型肾病大鼠Scr和BUN的影响(X±S)

组别          剂量         Scr(μmmol/L)                  BUN(mmol/L)

              (g/Kg体重)   2周             4周            2周            4周

正常对照组    -            99±8.46        102±8.87      3.51±0.92     3.83±1.42

                           (10)            (10)           (10)           (10)

模型对照组    -            130±5.61^**    122±15.19^**  8.99±4.03^**  9.29±3.11^**

                           (10)            (8)            (10)           (10)

肾炎四味片组  1.33         105±4.67^ΔΔ     119±12.94     8.47±2.21     6.51±1.31^ΔΔ

                           (10)            (10)           (10)           (10)

健肾片I组     2.1          116±13.55^ΔΔ    121±15.52     7.62±±4.70   6.95±1.30^Δ

                           (10)            (10)           (10)           (10)

健肾片II组    4.2          103±4.04^ΔΔ     118±17.20     6.51±3.15^Δ     6.40±1.12^ΔΔ

                           (10)            (10)           (10)           (10)

健肾片III组   8.4          101±4.25^ΔΔ     117±8.47^Δ      8.30±2.56     6.93±1.87^Δ

                           (10)            (10)           (10)           (10)

与正常对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01

与模型对照组比较：P＜0.05，P＜0.01，()内为动物数。

表13说明，造模后模型组大鼠血肌酐、尿素氮升高，与正常组比较有非常显著差异，P＜0.01。各治疗组大鼠血肌酐、尿素氮较模型组降低。其中2周时健肾片I、II、III组和肾炎四味片组血肌酐明显低于模型对照组，P＜0.01，健肾片II组尿素氮低于模型组，P＜0.05；4周时健肾片I、II组血肌酐与模型组比较有显著差异，P＜0.05；4周时健肾片III组血肌酐与模型组比较有显著差异，P＜0.05，健肾片II组和肾炎四味片组尿素氮与模型组比较P＜0.01，健肾片I、III组尿素氮与模型组比较P＜0.05。

2.4血浆白蛋白的变化

结果见表14。

表14健肾片对嘌呤霉素所致微小病变型肾病大鼠ALB的影响(g/L，±S)

组别           剂量         2周              4周

               (g/Kg体重)

正常对照组     -            36.40±0.84      38.5±0.97^ΔΔ

                            (10)             (10)

模型对照组     -            33.26±0.23^**   32.5±0.44^**

                            (10)             (10)

肾炎四味片组   1.33         35.25±0.36^Δ      34.25±0.73

                            (10)             (10)

健肾片I组      2.1          34.40±0.73      33.05±0.12

                            (10)             (10)

健肾片II组     4.2          36.53±0.24^ΔΔ    36.97±0.23^ΔΔ

                            (10)             (10)

健肾片III组    8.4          36.01±0.52^ΔΔ    35.92±0.38^Δ

                            (10)             (10)

与正常对照组比较：  **P＜0.01

与模型对照组比较：^ΔP＜0.05，^ΔΔP＜0.01

表14显示，造模后模型组大鼠ALB明显下降，与正常组比较有非常显著差异，P＜0.01。健肾片II、III组较模型组升高，比较有显著差异和非常显著差异，P值分别＜0.05，＜0.01。

2.5胆固醇与甘油三酯的变化

表15健肾片对嘌呤霉素所致微小病变型肾病大鼠CHO、TG的影响(mmol/L，X±S)

组别           剂量                          CHO            TG

               (g/Kg体重)    2周             4周            2周            4周

正常对照组     -             1.97±0.16      1.46±0.10     1.14±0.19     2.14±0.34

                             (10)            (10)           (10)           (10)

模型对照组     -             2.91±1.00^**   3.06±2.06^**  1.67±0.70^*   2.79±0.69^*

                             (10)            (10)           (10)           (10)

肾炎四味片组   1.33          1.75±0.47^Δ      2.52±0.37     1.50±0.95     2.14±0.55^Δ

                             (10)            (10)           (10)           (10)

健肾片I组      2.1           2.00±0.99      2.67±0.67     1.56±0.98     2.25±1.22

                             (10)            (10)           (10)           (10)

健肾片II组     4.2           1.80±1.01^Δ      2.62±0.82     1.28±0.52^Δ     1.90±0.82^Δ

                             (10)            (10)           (10)           (10)

健肾片III组    8.4           1.65±0.65^Δ      2.29±0.61^Δ     1.28±0.78^Δ     1.46±0.50^ΔΔ

                             (10)           (10)            (10)           (10)

与正常对照组比较：*P＜0.05，**p＜0.01

与模型对照组比较：^ΔP＜0.05，^ΔΔP＜0.01，()内为动物数。

由表15可知，造模后模型组大鼠CHO、TG均升高，与正常组比较分别P＜0.01和P＜0.05。各治疗组CHO、TG较模型组降低，2周时健肾片II、III组CHO、TG与模型组比较P＜0.05；4周时健肾片II组TG与模型组比较P＜0.05，健肾片III组CHO、TG与模型组比较P＜0.05，P＜0.01。

2.6病理形态学改变

2.6.1光镜检查：

模型组：HE染色示近曲小管严重破坏，小管内皮损伤，小管上皮细胞有泡沫样变性，局部小管有坏死。PAS染色示肾小管刷状缘破坏明显。

肾炎四味片组，健肾片I、II、III剂量组：HE染色示肾组织已基本达到正常水平，PAS染色刷状缘修复比较明显。

2.6.2电镜检查：

模型组：肾小球基底膜外侧上皮细胞足突肿大，细胞质内空泡变性，溶酶体增多，间质细胞增多，近曲小管微绒毛受损伤，远曲小管刷状缘有病变。

肾炎四味片组，健肾片I、II、III剂量组：病理改变轻于模型组，上皮细胞足突基本正常，溶酶体仍多，但空泡变性减少，间质空隙增大，细胞减少，近曲小管内膜恢复正常，远曲小管微绒毛正常。见图33。健肾片I、II、III剂量组的病理改变又轻于肾炎四味片组。

2.6.3组织免疫检查：

光镜见模型组在破坏的肾小管内，有较多的补体C3；各治疗组随着肾小管组织的修复，补体C3大肾组织内在大减少，但修复的组织内仍见有补体C3。免疫电镜示模型组损伤绒毛区、管腔内有绒毛碎片，内含大量C3补体，而各治疗组损伤片断仍有，内含C3补体量减少。

3试验结论

现已发现在众多的动物肾病模型中，嘌吟霉素连续注射于大鼠可获得类似于人类的微小病变肾病。嘌呤霉素所致肾病的机理，多数学者认为是嘌呤霉素对肾，特别是对肾小球直接损害所致。在本次实验中用嘌呤霉素制作大鼠微小病变型肾病模型，与文献报道变化一致。采用健肾片干粉高、中、低剂量组灌服微小病变型肾病大鼠连续4周，结果表明：健肾片I、II、III组对大鼠微小病变型肾病的尿蛋白有显著的降低作用；并能降低血肌酐、尿素氮，升高血浆白蛋白，降低胆固醇、甘油三酯，且健肾片I、II组具有明显的利尿作用，与模型对照组对比P＜0.01。肾脏组织学检查提示：健肾片I、II、III剂量组能减轻肾小球基底膜外侧上皮细胞足突肿大，减少细胞质内的空泡变性，病理损害明显轻于模型对照组。

本发明下列实施例均能实现上述实验例的效果。

实施例1：

黄芪(生)875g    茯苓437.5g    淫羊藿233g    僵蚕350g

全蝎  43.7g     泽泻233g      石韦437.5g    青风藤875g

青风藤过20目筛粉碎成粗粉，在有盖容器中将药材和1.5倍量PH值为8.0～9.0的75％的乙醇浸渍6～8小时，取出、分层，将润湿的药材松紧适度地装于渗漉筒中，药材装填好后，先打开浸液出口，再添加8.5倍量PH值为8.0～9.0的75％的乙醇，按每公斤药材每分钟1～3ml的速度进行渗漉，收集渗漉液，渗漉液的PH值为弱碱性；渗漉液于75～80℃的条件下回收乙醇，再浓缩至80℃下相对密度为1.35，即得青风藤浓缩液；

黄芪(生)、茯苓、淫羊藿，加8倍量水煎煮2次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，每毫升相当于原药材2g，离心，得离心液，再浓缩至80℃下相对密度为1.35，得黄芪(生)、茯苓、淫羊藿浓缩液；

僵蚕、全蝎粉碎成粗粉，加12倍量80％的乙醇照《中华人民共和国药典》2000年版一部附录I0流浸膏剂与浸膏剂下的方法渗漉，收集渗漉液，75～80℃的条件下回收乙醇，浓缩至80℃下相对密度为1.25，即得僵蚕、全蝎浓缩液；

石韦、泽泻一起加6倍量水煎煮2次，每次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至适量，每毫升相当于原药材2g，加95％的乙醇，使含醇量达70％，充分搅拌，静置12小时，取上清液，在75～80℃的条件下回收乙醇，再浓缩至80℃相对密度为1.35，即得石韦、泽泻浓缩液；

将浓缩液青风藤浓缩液和僵蚕、全蝎浓缩液混和，湿法制粒，80℃风热干燥，得干颗粒；

将黄芪(生)、茯苓、淫羊藿浓缩液和石韦、泽泻浓缩液混和，加入10％药用糊精拌匀，80℃风热干燥，100目筛粉碎，加入5％的药用淀粉和1％的微晶纤维素，混匀，制粒，整粒，得干颗粒；

将两种颗粒和0.5％的药用硬脂酸镁混匀，压制成1000片，包薄膜衣，即得；每片重0.35g，相当于原药材3.48g。

实施例2：

黄芪(生)890g    茯苓422.5g    淫羊藿240g    僵蚕334g

全蝎 45.7g      泽泻240g      石韦422.5g    青风藤890g

制备方法：

青风藤过20目筛粉碎成粗粉，在有盖容器中将药材和1.5倍量PH值为8.0～9.0的78％的乙醇浸渍7～8小时，取出、分层，将润湿的药材松紧适度地装于渗漉筒中，药材装填好后，先打开浸液出口，再添加8.5倍量PH值为8.0～9.0的78％的乙醇，按每公斤药材每分钟1～3ml的速度进行渗漉，收集渗漉液，渗漉液的PH值为弱碱性；渗漉液于75～75℃的条件下回收乙醇，再浓缩至75℃下相对密度为1.35，即得青风藤浓缩液；

黄芪(生)、茯苓、淫羊藿，加8倍量水煎煮2次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，每毫升相当于原药材2g，离心，得离心液，再浓缩至80℃下相对密度为1.35，得黄芪(生)、茯苓、淫羊藿浓缩液；

僵蚕、全蝎粉碎成粗粉，加12倍量78％的乙醇照《中华人民共和国药典》2000年版一部附录IO流浸膏剂与浸膏剂下的方法渗漉，收集渗漉液，75～80℃的条件下回收乙醇，浓缩至75℃下相对密度为1.25，即得僵蚕、全蝎浓缩液；

石韦、泽泻一起加6倍量水煎煮2次，每次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至适量，每毫升相当于原药材2g，加95％的乙醇，使含醇量达70％，充分搅拌，静置12小时，取上清液，在75～80℃的条件下回收乙醇，再浓缩至75℃相对密度为1.35，即得石韦、泽泻浓缩液；

将浓缩液青风藤浓缩液和僵蚕、全蝎浓缩液混和，湿法制粒，75℃风热干燥，得干颗粒；

将黄芪(生)、茯苓、淫羊藿浓缩液和石韦、泽泻浓缩液混和，加入10％药用糊精拌匀，75℃风热干燥，100目筛粉碎，加入5％的药用淀粉和1％的微晶纤维素，混匀，制粒，整粒，得干颗粒；

将两种颗粒加常规赋型剂糊精适量，制成胶囊1000粒，即得组合物的胶囊，每粒装0.35g，相当于原药材3.48g。

实施例3：本组合物片剂的质量控制方法：

鉴别：(1)取本组合物制成的片剂10片，除去薄膜衣后，研细，加甲醇50ml，置水浴上加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤两次，每次30ml，弃去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酚乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(2)取本组合物制成的片剂10片，除去薄膜衣后，研细，加70％乙醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以10∶1∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(3)取本组合物制成的片剂15片，除去薄膜衣后，研细，加乙醚25ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加环乙烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取茯苓对照药材8g，加乙醚40ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液4μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以石油醚30-60℃下，84∶15∶1的石油醚-丙酮-醋酸乙酯为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(4)取本组合物制成的片剂5片，除去薄膜衣，研细，加乙醇15ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶2∶1的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试剂；供试品色谱中，在与对照晶色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：

(1)黄芪甲苷取本组合物制成的片剂20片，除去薄膜衣后，研细，取细粉39，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，冷浸过夜，置水浴上加热回流提取至无色，提取液回收甲醇并浓缩至于，残渣加水15ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次50ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加水5～7ml微热使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱，其内径1.5cm，长12cm，，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇100ml洗脱，弃去40％乙醇洗脱液，继用70％乙醇120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至2ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液4μl，对照晶溶液2μl与6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB薄层扫描法)进行扫描，波长：λs＝530nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得本品每片含黄芪以黄芪甲苷(C₄₁H₆₈O₁₄)计不得少于0.18mg；

(2)淫羊藿苷：色谱条件与系统适应性实验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以30∶70的乙腈-水为流动相，检测波长270nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备，精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得对照品溶液；供试品溶液的制备，取本组合物制成的片剂10片，除去薄膜衣后，研细，取0.5g，精密称定，加70％乙醇25ml，超声处理1小时，滤过，滤渣用适量70％乙醇洗涤，收集滤液与洗涤液，置水浴上蒸于，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，作为供试品溶液；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得本品每片含淫羊藿以淫羊藿苷(C₃₃H₄₀O₁₅)计不得少于0.20mg.

Claims (17)

1、一种治疗慢性肾炎的中药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的：

黄芪700-1000重量份        茯苓300-500重量份

淫羊藿100-300重量份       僵蚕200-500重量份

全蝎30-50重量份           泽泻100-300重量份

石韦300-600重量份         青风藤700-1000重量份

2、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的：

生黄芪875重量份           茯苓437.5重量份

淫羊藿233重量份           僵蚕350重量份

全蝎43.7重量份            泽泻233重量份

石韦437.5重量份           青风藤875重量份

3、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的：

生黄芪890重量份           茯苓422.5重量份

淫羊藿240重量份           僵蚕334重量份

全蝎45.7重量份            泽泻240重量份

石韦422.5重量份           青风藤890重量份

4.如权利要求1、2或3所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物还可加入赋型剂制成临床可接受的剂型。

5.如权利要求1、2或3所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

青风藤粉碎成粗粉，在有盖容器中将药材和1-2倍量PH值为8.0～9.0的70-85％的乙醇浸渍6～8小时，取出、分层，将润湿的药材松紧适度地装于渗漉筒中，药材装填好后，先打开浸液出口，再添加8.5倍量PH值为8.0～9.0的70-85％的乙醇，按每公斤药材每分钟1～3ml的速度进行渗漉，收集渗漉液，渗漉液的PH值为弱碱性；渗漉液于75～80℃的条件下回收乙醇，再浓缩至80℃下相对密度为1.20-1.35，即得青风藤浓缩液；

生黄芪、茯苓、淫羊藿，加7-9倍量水煎煮2-3次，每次1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，每毫升相当于原药材2g，离心，得离心液，再浓缩至80℃下相对密度为1.20-1.35，得黄芪、茯苓、淫羊藿浓缩液；

僵蚕、全蝎粉碎成粗粉，加10-14倍量75-85％的乙醇照流浸膏剂与浸膏剂下的方法渗漉，收集渗漉液，75～80℃的条件下回收乙醇，浓缩至80℃下相对密度为1.20-1.35，即得僵蚕、全蝎浓缩液；

石韦、泽泻一起加5-7倍量水煎煮2次，每次1-2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至适量，加90-96％的乙醇，使含醇量达65-80％，充分搅拌，静置10-14小时，取上清液，在75～80℃的条件下回收乙醇，再浓缩至80℃相对密度为1.20-1.35，即得石韦、泽泻浓缩液；

将浓缩液青风藤浓缩液和僵蚕、全蝎浓缩液混和，得混合物A；

将黄芪、茯苓、淫羊藿浓缩液和石韦、泽泻浓缩液混和，得混合物B；

将上述两种A、B混合物混合得本发明药物组合物，该药物组合物，经过常规工序直接或加入药学上可接受的赋型剂制成临床可接受的剂型。

6、如权利要求5所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：青风藤过20目筛粉碎成粗粉，在有盖容器中将药材和1.5倍量PH值为8.0～9.0的75％的乙醇浸渍6～8小时，取出、分层，将润湿的药材松紧适度地装于渗漉筒中，药材装填好后，先打开浸液出口，再添加8.5倍量PH值为8.0～9.0的75％的乙醇，按每公斤药材每分钟1～3ml的速度进行渗漉，收集渗漉液，渗漉液的PH值为弱碱性；渗漉液于75～80℃的条件下回收乙醇，再浓缩至80℃下相对密度为1.35，即得青风藤浓缩液；生黄芪、茯苓、淫羊藿，加8倍量水煎煮2次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，每毫升相当于原药材2g，离心，得离心液，再浓缩至80℃下相对密度为1.35，得黄芪(生)、茯苓、淫羊藿浓缩液；僵蚕、全蝎粉碎成粗粉，加12倍量80％的乙醇流浸膏剂与浸膏剂下的方法渗漉，收集渗漉液，75～80℃的条件下回收乙醇，浓缩至80℃下相对密度为1.25，即得僵蚕、全蝎浓缩液；石韦、泽泻一起加6倍量水煎煮2次，每次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至适量，每毫升相当于原药材2g，加95％的乙醇，使含醇量达70％，充分搅拌，静置12小时，取上清液，在75～80℃的条件下回收乙醇，再浓缩至80℃相对密度为1.35，即得石韦、泽泻浓缩液；将浓缩液青风藤浓缩液和僵蚕、全蝎浓缩液混和，湿法制粒，80℃风热干燥，得干颗粒；将黄芪(生)、茯苓、淫羊藿浓缩液和石韦、泽泻浓缩液混和，加入10％药用糊精拌匀，80℃风热干燥，100目筛粉碎，加入5％的药用淀粉和1％的微晶纤维素，混匀，制粒，整粒，得干颗粒；将两种颗粒和0.5％的药用硬脂酸镁混匀，压制成1000片，包薄膜衣，即得。

7、权利要求1、2或3所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种或几种：

a.取本组合物制剂3.5g，加甲醇40-60ml，置水浴上加热回流1.5-3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水9-12ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇提取1-3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤两次，每次20-40ml，弃去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1.5-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以12-14∶5-7∶1.5-3的氯仿-甲醇-水在9-11℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酚乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

b.取本组合物制剂3.5g，加60-80％乙醇40-60ml，加热回流0.5-1.5小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水9-11ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取1-3次，每次15-25ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤1-3次，每次20-40ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以9-11∶0.5-1.5∶0.5-1.5∶0.5-1.5醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

c.取本组合物制剂5.3g，加乙醚20-35ml，加热回流0.5-1.5小时，滤过，滤液挥干，残渣加环乙烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取茯苓对照药材8g，加乙醚30-50ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液4μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以石油醚30-60℃下，80-90∶14-16∶0.5-1.5的石油醚-丙酮-醋酸乙酯为展开剂，预饱和10-20分钟，展开，取出，晾干，置紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

d.取本组合物制剂1.8g，加乙醇14-18ml，超声处理25-35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6-8∶1-3∶0.5-1.5的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试剂；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

8、如利要求7所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种或几种：

a.取本组合物制剂3.5g，研细，加甲醇50ml，置水浴上加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤两次，每次30ml，弃去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酚乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

b.取本组合物制剂3.5g，除去薄膜衣后，研细，加70％乙醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以10∶1∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

c.取本组合物制剂5.3g，研细，加乙醚25ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加环乙烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取茯苓对照药材8g，加乙醚40ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液4μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以石油醚30-60℃下，84∶15∶1的石油醚-丙酮-醋酸乙酯为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

d.取本组合物制剂1.8g，研细，加乙醇15ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶2∶1的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试剂；供试品色谱中，在与对照晶色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

9、如利要求1、2或3所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定为包括如下测定方法中的一种或几种：

a.黄芪甲苷，取本组合物制剂，研细，取细粉3g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，冷浸过夜，置水浴上加热回流提取至无色，提取液回收甲醇并浓缩至于，残渣加水10-20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3-5次，每次15-30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤1-3次，每次40-60ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加水5～7ml微热使溶解，放冷，通过吸附树脂柱，以水40-60ml洗脱，弃去水液，再用30-60％乙醇洗脱，弃去30-60％乙醇洗脱液，继用60-80％乙醇100-140ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至2ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液4μl，对照晶溶液2μl与6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以12-14∶5-7∶1-3的氯仿-甲醇-水在8-12℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法进行扫描，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得本品每0.35g含黄芪以黄芪甲苷计不得少于0.18mg；

b.淫羊藿苷∶色谱条件与系统适应性实验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以25-40∶60-80的乙腈-水为流动相，检测波长260-280nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备，精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得对照品溶液；供试品溶液的制备，取本组合物制剂，研细，取0.5g，精密称定，加60-80％乙醇25ml，超声处理0.5-2小时，滤过，滤渣用适量60-80％乙醇洗涤，收集滤液与洗涤液，置水浴上蒸于，残渣加水8-12ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2-4次，每次15-25ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤1-3次，每次15-25ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，作为供试品溶液；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得本品每0.35g含淫羊藿以淫羊藿苷计不得少于0.20mg；

10、如利要求9所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定为包括如下测定方法中的一种或几种：

a.黄芪甲苷：取本组合物制成的片剂20片，除去薄膜衣后，研细，取细粉3g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，冷浸过夜，置水浴上加热回流提取至无色，提取液回收甲醇并浓缩至于，残渣加水15ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次50ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加水5～7ml微热使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱，其内径1.5cm，长12cm，，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇100ml洗脱，弃去40％乙醇洗脱液，继用70％乙醇120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至2ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液4μl，对照晶溶液2μl与6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法进行扫描，波长：λs＝530nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得本品每片含黄芪以黄芪甲苷计不得少于0.18mg；

b.淫羊藿苷：色谱条件与系统适应性实验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以30∶70的乙腈-水为流动相，检测波长270nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备，精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得对照品溶液；供试品溶液的制备，取本品10片，除去薄膜衣后，研细，取0.5g，精密称定，加70％乙醇25ml，超声处理1小时，滤过，滤渣用适量70％乙醇洗涤，收集滤液与洗涤液，置水浴上蒸于，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，作为供试品溶液；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得本品每片含淫羊藿以淫羊藿苷计不得少于0.20mg；

11、如权利要求1、2或3所述的药物组合物的质量控制方法包括如下步骤：

鉴别：取本组合物制剂3.5g，研细，加甲醇50ml，置水浴上加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤两次，每次30ml，弃去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酚乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

取本组合物制剂3.5g，除去薄膜衣后，研细，加70％乙醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以10∶1∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-丁酮一水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

取本组合物制剂5.3g，研细，加乙醚25ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加环乙烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取茯苓对照药材8g，加乙醚40ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液4μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以石油醚30-60℃下，84∶15∶1的石油醚-丙酮-醋酸乙酯为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

取本组合物制剂1.8g，研细，加乙醇15ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶2∶1的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试剂；供试品色谱中，在与对照晶色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：取本组合物制剂，研细，取细粉3g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，冷浸过夜，置水浴上加热回流提取至无色，提取液回收甲醇并浓缩至于，残渣加水10-20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3-5次，每次15-30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤1-3次，每次40-60ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加水5～7ml微热使溶解，放冷，通过吸附树脂柱，以水40-60ml洗脱，弃去水液，再用30-60％乙醇洗脱，弃去30-60％乙醇洗脱液，继用60-80％乙醇100-140ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至2ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液4μl，对照晶溶液2μl与6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以12-14∶5-7∶1-3的氯仿-甲醇-水在8-12℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法进行扫描，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得每0.35g含黄芪以黄芪甲苷计不得少于0.18mg；

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以25-40∶60-80的乙腈-水为流动相，检测波长260-280nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备，精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得对照品溶液；供试品溶液的制备，取本组合物制剂，研细，取0.5g，精密称定，加60-80％乙醇25ml，超声处理0.5-2小时，滤过，滤渣用适量60-80％乙醇洗涤，收集滤液与洗涤液，置水浴上蒸于，残渣加水8-12ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2-4次，每次15-25ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤1-3次，每次15-25ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，作为供试品溶液；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得每0.35g含淫羊藿以淫羊藿苷计不得少于0.20mg；

12、如权利要求11所述的药物组合物的质量控制方法包括如下步骤：

鉴别：取本组合物制成的片剂10片，除去薄膜衣后，研细，加甲醇50ml，置水浴上加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤两次，每次30ml，弃去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酚乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

取本组合物制成的片剂10片，除去薄膜衣后，研细，加70％乙醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以10∶1∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

取本组合物制成的片剂15片，除去薄膜衣后，研细，加乙醚25ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加环乙烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取茯苓对照药材8g，加乙醚40ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液4μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以石油醚30-60℃下，84∶15∶1的石油醚-丙酮-醋酸乙酯为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

取本组合物制成的片剂5片，除去薄膜衣，研细，加乙醇15ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶2∶1的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试剂；供试品色谱中，在与对照晶色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：

黄芪甲苷：取本组合物制成的片剂20片，除去薄膜衣后，研细，取细粉39，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，冷浸过夜，置水浴上加热回流提取至无色，提取液回收甲醇并浓缩至于，残渣加水15ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次50ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加水5～7ml微热使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱，其内径1.5cm，长12cm，，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇100ml洗脱，弃去40％乙醇洗脱液，继用70％乙醇120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至2ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液4μl，对照晶溶液2μl与6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法进行扫描，波长：λs＝530nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得本品每0.35g含黄芪以黄芪甲苷计不得少于0.18mg；

淫羊藿苷：色谱条件与系统适应性实验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以30∶70的乙腈-水为流动相，检测波长270nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备，精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得对照品溶液；供试品溶液的制备，取本组合物制成的片剂10片，除去薄膜衣后，研细，取0.5g，精密称定，加70％乙醇25ml，超声处理1小时，滤过，滤渣用适量70％乙醇洗涤，收集滤液与洗涤液，置水浴上蒸于，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，作为供试品溶液；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得本品每0.35g含淫羊藿以淫羊藿苷计不得少于0.20mg；

13、如权利要求1、2或3所述的药物组合物在制备治疗慢性肾炎的药物中的应用。

14、如权利要求13所述的应用，其特征在于所述治疗慢性肾炎是指显著降低尿蛋白。

15、如权利要求13所述的应用，其特征在于所述治疗慢性肾炎是指降低血肌酐、尿素氮，升高血浆白蛋白，降低胆固醇、甘油三酯。

16、如权利要求13所述的应用，其特征在于所述治疗慢性肾炎是指具有明显的利尿作用。

17、如权利要求13所述的应用，其特征在于所述治疗慢性肾炎是指减轻肾小球基底膜外侧上皮细胞足突肿大，减少细胞质内的空泡变性。