CN1698901A

CN1698901A - 以壳聚糖及其衍生物作为药物载体负载丹参提取物

Info

Publication number: CN1698901A
Application number: CN 200510078739
Authority: CN
Inventors: 蒋斯扬
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2005-06-15
Filing date: 2005-06-15
Publication date: 2005-11-23

Abstract

本发明属于制药领域，具体涉及一类以壳聚糖及其衍生物或海藻酸钠作为药物载体负载丹参提取物的新型药物组合物及其方法，这类新型载体包括用壳聚糖或海藻酸钠制备载药小球，用壳聚糖的羧甲基衍生物和壳聚糖的季铵盐衍生物作为丹参酮类药物载体，用壳聚糖接枝聚乙二醇或既接枝亲水基又接枝疏水基而获得的水凝胶作为丹参活性成分的载体，用壳聚糖既引入亲水基和又引入疏水基制备的高分子胶束或壳聚糖只引入疏水基制备的胶束作为丹参活性成分的载体，这些载体还包括壳聚糖衍生物胶束的类似物如壳聚糖衍生物高分子囊泡，壳聚糖衍生物高分子表面活性剂，该发明的目的是为了用壳聚糖及其衍生物实现对丹参活性提取物的增溶和控制释放，并实现药剂和药物的药效协同效应。

Description

以壳聚糖及其衍生物作为药物载体负载丹参提取物

技术领域

本发明属于制药技术领域，具体地讲，涉及以壳聚糖及其衍生物或海藻酸钠作为控制释放丹参提取物的载体，尤其是通过壳聚糖接枝疏水链获得水溶性的高分子胶束，再负载丹参提取物，达到对丹参提取物的控制释放的目的。

技术背景

丹参是我国的一种传统中药，在临床上广泛应用于治疗心血管疾病、中风、慢性迁延性肝炎、肾脏疾患、感染性疾病等。丹参的活性成分包括脂溶性的二萜醌类化合物和水溶性的酚酸类化合物。二萜醌类化合物是丹参脂溶性的主要药效成分，常统称为丹参酮类化合物，它们具有显著的降血压、降血脂作用，从而达到抗动脉粥样硬化的效果，此外还有抗肿瘤、抗氧化、抗菌消炎等作用。然而丹参酮是脂溶性物质，存在的最大用药障碍是难溶于水，生物利用度低，造成制剂和应用上的困难。1978年，钱名坤等将丹参酮II A磺化并制成钠盐，大大提高了丹参酮的水溶性，并制成针剂用于静脉注射，但由于丹参酮II A磺酸钠水溶性过大，注入体内后迅速随尿液和粪便排出，药效得不到应有的发挥。近年来，如何解决丹参酮类药物的水溶性困难一直处在不断研究和探索之中，目前我国已经公布了几十个专利，然而这些解决方案都有不甚理想之处，还有很多地方需要完善和改进，譬如中国专利CN01141436通过环糊精包合增溶丹参酮，然而环糊精自身在水中的溶解度低，增溶作用有限。此外研究发现，在水溶液中，溶解的环糊精类物质对制剂中的药物或其他成分能产生象酶一样的催化作用，这样会加速被包合物的分解(Rainer H Muller等《现代给药系统的理论和实践》，人民军医出版社，2004)，而丹参酮是活性位点多且活性强的物质，并不稳定。

壳聚糖(chitosan)是为人们所熟悉的优良药物载体，其化学名为聚-1，4-β-葡萄糖胺，来源于虾蟹外壳中的几丁质(俗称甲壳素，甲壳质，chitin)脱去大部分或全部氨基上的乙酰基，是自然界中储量仅次于纤维素的第二大天然高分子可再生资源，来源极其丰富，价格便宜，由于存在良好的生物可降解性、生物相容性和无毒副作用，已在医药领域中得到深入的研究和广泛的应用。因壳聚糖及其衍生物具有生物活性的多样性使其成为具有多种功能的药物辅料，成为极有前景的新型药剂，按照它们应用的目的不同大致可分为缓/控释剂、吸收剂、助溶剂、黏附剂、增效剂等。具体说，壳聚糖具有良好的成摸性能，容易形成凝胶，又因其表面带正电荷，容易与海藻酸钠或三聚磷酸钠等通过离子交联形成微球，从而可作为缓释骨架片剂、颗粒剂、丸剂、缓释微球(囊)、缓释包衣、胶囊的辅料；壳聚糖及其衍生物可作为某些难溶药物(例如灰黄霉素)的助溶剂，增加药物的溶解度，利于药物的吸收，提高其生物利用度。此外，壳聚糖及其衍生物还有一些独特的生物活性，譬如具有抗菌性、抗肿瘤性、免疫调节活性，具有对胆固醇代谢的调节作用(侯春林等《几丁质和医学》，上海科学技术出版社，2001)，壳聚糖的部分生物功能与丹参活性成分的药效相似，尤其是对胆固醇代谢的调节作用，使壳聚糖及其衍生物对脂肪肝、肥胖病、动脉粥样硬化等疾病的治疗产生积极影响，使其有希望应用于临床和医疗保健造福于人类。壳聚糖及其衍生物对胆固醇代谢的调节机理初步研究如下：由于能部分切断胆汁的肝肠循环，以及携带正电荷的壳聚糖可与携带负电荷的脂类物质相结合，从而降低血液中胆固醇的水平，抑制动脉粥样班块的扩大和脂肪肝的形成。

近年来，用生物可降解的高分子胶束(polymer micelles)负载疏水药物引起了药学界的极大兴趣。高分子胶束通常是有既含有亲水链又含有疏水链的两亲性高分子在溶液中通过自组装(self-assembly)形成粒径为几个到几百个纳米的纳米颗粒(nanoparticle)，它具有疏水性的内核用以包裹或负载脂溶性药物，亲水链段围绕在疏水核外形成亲水外壳。最近，Lee，K.Y等人通过壳聚糖接枝脱氧胆汁酸制备了水溶性的高分子胶束(Macromolecules31(1998)：378-383；Langmuir 14(1998)：2329-2332)，Chen，X.G等人通过壳聚糖接枝亚麻酸酰基制备了水溶性壳高分子胶束(J.Agric.Food Chem.51(2003)：3135-3139)，由于胆汁酸和亚麻酸都是很特殊的脂肪酸，原料稀少，价格昂贵，如果能用普通的脂肪酸或卤代烃为原料与壳聚糖反应制备水容性胶束，则壳聚糖衍生物胶束才有可能作为一种新型药剂实现在制药工业上的应用。但是，通常情况下壳聚糖接枝普通的长链疏水酰基后，所得的产物是不溶于水的，Hirano，S等报道了壳聚糖通过与酸酐反应接枝7个碳原子以下的疏水性酰基是溶于水的，但从8个碳开始，引入多碳原子疏水酰基的衍生物均不溶于水(Macromol.Biosci.3(2003)：629-631)。而包括Wang and Engberts等在内的许多研究小组都报道了通过接枝侧链疏水基的碳原子个数至少不低于8个时，所得的两亲性衍生物才有通过自组装形成胶束的可能(Int.J.Pharm.224(2001)：185-199)。至于接疏水性烷基的情况，王爱勤等报道了碳原子数目少于8个的卤代烃与壳聚糖反应产物可溶于水，卤代烃碳原子个数更高的接枝产物则不溶于水(功能高分子学报11(1998)：83-86)。本发明通过改进反应条件，在壳聚糖上引入碳原子个数超过8个的疏水性酰基或烷基所得产物能溶于水，并能通过自组装形成纳米粒径的高分子胶束，这些胶束既能通过疏水性内核的自聚集作用(self-aggregation)包裹脂溶性的丹参酮类化合物，也能因壳聚糖主链上的氨基和羟基与丹参提取物中的酚酸类成分存在较强氢键作用，从而使这类酚酸类物质也容易负载在壳聚糖高分子胶束上。

发明内容

本发明的目的是把丹参活性成分负载在壳聚糖及其衍生物上，增加丹参脂溶性成分的溶解度，延长丹参活性成分的释放时间，利于活性成分的吸收，提高其生物利用度，并利用作为药剂的壳聚糖及其衍生物具有与丹参提取物部分相似的药效，达到提高药物的协同效应的目的，尤其是希望通过把丹参提取物负载在水溶性的壳聚糖衍生物纳米胶束的疏水核中，实现生物体对丹参脂溶性成分的充分吸收和利用。

本发明运用壳聚糖及其衍生物增溶或负载丹参提取物的方法主要分为三类。第一类是用壳聚糖或海藻酸钠制备的小球或微球负载药物。方法是先把壳聚糖溶解在稀酸溶液中，加入丹参提取物固体或提取物的有机溶液，分散均匀后，滴入稀碱溶液固化形成载药小球，或滴入表面带负电荷的三聚磷酸钠或海藻酸钠或羧甲基纤维素的水溶液，通过离子交联形成载药小球，冷冻干燥得产品，可用于口服，相似的方法包括把丹参提取物分散在海藻酸钠的水溶液中，用钙离子交联，得载药小球。

第二类方法是用壳聚糖改性制备水凝胶(hydrogel)后再负载丹参提取物。其中一类水凝胶是在水溶性的壳聚糖衍生物(如羟乙基壳聚糖，glycol chitosan)上引入长链疏水基(如软脂酰基、硬脂酰基等)而制备的，其原理是通过疏水性基非共价交联而获得水凝胶，制备方法可参见Martin，L.等人的方法(Eur.J.Pharm.Biopharm.55(2003)：35-45.J.controlled release80(2002)：87-100)。若是为了应用的需要，可在壳聚糖上既引入长链疏水基又引入季铵盐(提高抗菌能力)，或羧甲基(提高保湿功能)等功能基团，若是为了增加水溶性，获得水溶性较大的水凝胶(在水中实际上是一中黏度较大的溶液)，也可以只引入季铵盐或羧甲基。另一类壳聚糖水凝胶是通过在壳聚糖的主链上接枝亲水链聚乙二醇(PEG)而获得的，接枝的方法文献报道了很多，本发明设计的一种较经济的方法是通过甲氧基封端的聚乙二醇(mPEG)与丁二酸酐反应引入活性羧基，再与亚硫酰氯反应，把末端羧基变成酰氯后，再与壳聚糖反应，主要产物是在壳聚糖的氨基上引入聚乙二醇。水凝胶负载丹参提取物的方法如下，把丹参提取物固体或有机溶液分散在水凝胶溶液中，冷冻干燥得到载药粉末。

第三类方法是用壳聚糖衍生物高分子纳米胶束增溶或负载丹参提取物。壳聚糖衍生物高分子胶束又分为两大类，一类是通过在壳聚糖上既引入疏水基(如疏水性烷基或酰基)又引入亲水基如磷酸基(carbohydrate polymers 51(2003)：425-429)、羧甲基等，这类物质的性质与亲水基和疏水基的取代度有很大关系，若取代度控制不好，容易变成水凝胶(hydrogels)、囊泡(vesicles or polysoap)、高分子表面活性剂(polymeric surfactant)，Uchegbu，I.F领导的研究小组有相当多的报道(Inter.J.Pharm.224(2001)：185-199.Polymer 45(2004)：837-841.)，若合成产物得到的是上述非高分子胶束物质(以没有确定的临界胶束浓度界定)，它们对丹参酮类药物也有增溶和负载作用，只是增溶和负载能力比高分子胶束要弱很多。另一类方法是由本发明提出的在壳聚糖上只引入疏水性烷基或酰基，而获得粒径较小，胶束结构紧密，临界聚集浓度(CAC，critical aggregate concentration)低的壳聚糖衍生物高分子胶束，众所周知，CAC数值越小，胶束在低浓度越稳定。这类胶束的合成基本方法是把溶胀的壳聚糖均匀分散在液体分散相中，滴加由疏水性脂肪酸或芳香酸制备的酸酐或酰卤，或滴加含疏水基团的卤代烃，40℃～100℃下温和反应2h～24h。该方法简便经济，而得到的壳聚糖高分子胶束性能最佳，载药量(loading capacity)大，药物释放时间长，是负载丹参提取物的理想载体。以壳聚糖衍生物高分子胶束负载丹参提取物的方法如下，先把丹参酮类药物的固体粉末溶解在有机溶剂中或直接用提取了丹参活性成分的有机溶液，该溶剂是丹参酮类药物的良溶剂，该溶剂在水中又有一定的溶解性，能微溶于水或与水混溶，通常是甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、N，N-二甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、乙醚、二氯甲烷、三氯甲烷中的一种或几种混合，但不局限于这些，再往溶解了丹参提取物的有机溶剂中添加能在水中形成胶束的壳聚糖衍生物，均匀搅拌的同时，缓慢加入有机溶剂量数倍或数十倍的水，随着丹参酮类物质缓慢地沉淀析出和壳聚糖衍生物缓慢溶解形成高分子胶束的同时，一部分沉淀析出的丹参酮类药物被裹进和富集在胶束的疏水核中，继续搅拌，使全部液体混合均匀，冷冻干燥、喷雾干燥或常温减压干燥，挥发除去所有水分和有机溶剂，得到粉末或丝状的药物组合物固体，用有机溶剂淋洗3～5次除去附在粉末或丝状组合物固体表面的疏水药物，再减压干燥得负载了丹参提取物的高分子胶束固体粉剂，其溶于水得透明溶液，载药的胶束粒径为10～300nm(TEM测定的结果)。

一、本发明设计的壳聚糖高分子胶束的制备方法与合成路线示意图如下：

1.通过壳聚糖与酸酐反应

先用脂肪酸或芳香酸通过分子间脱水而得到酸酐，把被极性溶剂溶胀的壳聚糖分散在有机溶剂中，搅拌的同时滴加酸酐，40～70℃保温反应2～24h，反应结束后加丙酮沉淀，过滤，滤饼依次用丙酮、乙醚洗涤3～5次，除尽脂肪酸或芳香酸及过量的酸酐，40～60℃真空干燥得产品。

合成路线图解如下：

其中R为疏水性烷基

2.通过壳聚糖与酰卤反应

先用脂肪酸或芳香酸与亚硫酰氯，三氯化磷，五氯化磷，三溴化磷，五溴化磷中的一种反应制得酰卤，把被极性溶剂溶胀的壳聚糖均匀分散在有机溶剂中，搅拌的同时滴加酰卤，40～70℃保温反应5～24h，反应结束后加丙酮沉淀，过滤，滤饼依次用丙酮、乙醚洗涤3～5次，除尽脂肪酸或芳香酸及过量的酰卤，40～60℃真空干燥得产品。

合成路线图解如下：

其中R为疏水性烷基

3.通过壳聚糖与卤代烃反应

被极性溶剂溶胀的壳聚糖均匀分散在有机溶剂中，保持弱碱性，使PH值为8～11，搅拌的同时滴加卤代烃，40～70℃保温反应5～24h，反应结束后加丙酮沉淀，过滤，滤饼依次用丙酮，乙醚洗涤3～5次，除尽过量卤代烃，40～60℃真空干燥得水溶性的N-烷基化壳聚糖产品。

合成路线图解如下：

其中R为疏水性烷基

二、壳聚糖衍生物载药材料的生物安全性说明

壳聚糖本身的生物安全性早已经过实验和临床验证，作为药物的包覆材料应用很普遍，烷基化的衍生物中国专利CN03112981做了安全性验证，王爱勤等还报道了烷基化衍生物有优良的抗凝血性(功能高分子学报11(1998)：83-86)。Kuen Yong Lee等报道了酰基化壳聚糖有良好的血液相容性和生物可降解性(Biomaterials 16(1995)：1211-1216)，Dong-Won Lee等也报道了酰基化壳聚糖纳米粒子有优良的血液相容性(Carbohydrate polymer 58(2004)：371-377)。故由本发明制备的N-烷基化壳聚糖和N-酰基化壳聚糖附载丹参提取物后，除可用作口服药物的包覆材料外，因其能在水中形成纳米胶束，还可用于肌肉和血液注射的剂型。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明做进一步说明，它不限制本发明，本发明的范围由权利要求限定。

实施例1

丹参提取物的乙醇溶液

取西藏林芝地区产丹参1Kg干燥粉碎，用二氧化碳超临界萃取得65g浆状浸膏，从中取10g加500mL 95％乙醇配成丹参提取物乙醇溶液，密封在带磨口玻璃塞的棕色玻璃瓶中备用，据文献混合提取物中大概含13个天然活性成分，分别是：丹参酮II A，隐丹参酮，丹参酸甲酸，丹参酮I，二氢丹参酮I，丹参新醌甲，丹参新醌乙，丹参新醌丙，羟基醌，次甲丹参醌，1，2-二氢丹参醌，丹参内酯，弥罗汉酚。

实施例2

碱液固化壳聚糖负载丹参提取物小球的制备

取粘均分子量为10万，脱乙酰度为90％的壳聚糖2.0g溶于600mL2％的稀醋酸中，加入50mL实施例1配置的丹参提取物的乙醇溶液，搅拌分散均匀，用细嘴滴管缓慢滴入1000mL1.5％的NaOH溶液中，滴加的同时小心搅拌，过滤得载药微球，冷冻干燥，扫描电镜观察得2～10um的小球。

实施例3

三聚磷酸钠交联壳聚糖小球负载丹参提取物

取粘均分子量为10万，脱乙酰度为90％的壳聚糖2.0g溶于600mL 2％的稀醋酸中，加入1.0g明胶混合均匀，加入50mL实施例1配置的丹参提取物的乙醇溶液，搅拌分散均匀，通过7号针头滴入1.0％三聚磷酸钠交联离子溶液中，调pH值到6左右，交联30-40分钟，过滤分出载药小球，蒸馏水洗，常温真空干燥，扫描电镜观察得15～30um的小球。

实施例4

钙离子交联海藻酸钠小球负载丹参酮类药物

取低黏度的海藻酸钠溶于蒸馏水配成3％的溶液20mL，加入2mL 5.0％(W/V)丹参酮II A的乙醇溶液，搅拌均匀，通过7号针头把上述混合液滴入500mL1.0％的CaCl₂水溶液中固化3h，过滤收集小球，蒸馏水洗多次，常温真空干燥，扫描电镜观察得30～50um的小球。

实施例5

以壳聚糖接枝聚乙二醇获得的水凝胶负载丹参提取物

取Mn＝2000的甲氧基封端的聚乙二醇(mPEG)22g，置三口瓶中加热到60C熔融，搅拌的同时，分批投入0.9g丁二酸酐反应3h后，降温到50℃，缓慢滴加0.8mL SOCl₂反应1h得末端活化了的聚乙二醇中间产物，减压蒸馏除去过量的SOCl₂。取4g粘均分子量为19万，脱乙酰度为95％的壳聚糖置200mL异丙醇中，分批投入上述制备的聚乙二醇中间产物，60℃搅拌回流6h后结束反应，趁热过滤，分次倒入20mL乙醇洗涤滤渣5次，除去未接枝的聚乙二醇，40℃真空干燥备用。取上述聚糖衍生物2g溶于50mL蒸馏水，得粘稠的水凝胶，加入实施例1制备的丹参提取物的乙醇溶液10mL，搅拌分散均匀，冷冻干燥，得负载了丹参提取物的壳聚糖衍生物粉末。

实施例6

以羧甲基壳聚糖负载丹参提取物

取3.2g粘均分子量为19万，脱乙酰度为95％的壳聚糖置200mL异丙醇中，磁力搅拌下分批加入0.9g氯乙酸，50℃反应1h后倾入丙酮中，过滤，滤渣依次用乙醇和丙酮洗涤数次，40℃真空干燥得羧甲基壳聚糖产品。取上述羧甲基壳聚糖2.0g溶于100mL蒸馏水中，加入实施例1制备的丹参提取物的乙醇溶液20mL，搅拌分散均匀，冷冻干燥，得负载了丹参提取物的羧甲基壳聚糖固体粉末。

实施例7

以壳聚糖引入长链疏水烷基和羧甲基的衍生物为载体负载丹参酮类药物

取3.2g粘均分子量为19万，脱乙酰度为95％的壳聚糖以水溶胀后，置200mL异丙醇中，升温至60℃，磁力搅拌下，分批加入n-十四烷基溴2.3g保温回流6h，再投入0.5g氯乙酸保温回流1h，将反应混合物倾入丙酮中，过滤，滤渣依次用乙醇和丙酮洗涤数次，40℃真空干燥，获得接枝长链疏水烷基和羧甲基的壳聚糖衍生物固体，其溶于水为水凝胶。取上述固体2.0g溶于100mL蒸馏水中，加入10mL5％(W/V)的丹参酮II A的乙醇溶液，搅拌分散均匀，冷冻干燥，得负载了丹参酮类药物的壳聚糖衍生物水凝胶固体。

实施例8

以壳聚糖引入长链疏水酰基和季铵盐的衍生物为载体负载丹参酮类药物

取粘均分子量为10万，脱乙酰度为90％的壳聚糖1.61g溶于150mL 2％的稀醋酸中，加入350mL甲醇，升温至50℃，缓慢滴加4.1g月桂酸酐(0.01mol(C₁₂H₂₅CO)₂O)的甲醇溶液，反应12h，将反应混合物倾入丙酮中，过滤，滤渣依次用乙醇和丙酮洗涤数次，40℃真空干燥，元素分析得N-月桂酰壳聚糖的取代度为16％(定义为100个吡喃塘环中引入月桂酰基的个数)。取上述N-月桂酰壳聚糖1.0g分散在80mL异丙醇中，加入0.12g NaOH，3.0g CH₃I，0.15g NaI在40℃下反应4h后，过滤，滤渣依次用无水乙醇，乙酸乙酯洗涤数次，再转入透析袋中在流水中透析24h，冷冻干燥，元素分析最终产物的季铵盐取代度为4.2％(在100个壳聚糖所有氨基中，季铵盐占4.2个)。取上述最终产物0.5g溶于40mL蒸馏水，加入8mL5％(W/V)的丹参酮II A的乙醇溶液，搅拌分散均匀，冷冻干燥，得负载了丹参酮类药物的壳聚糖衍生物水凝胶固体。

实施例9

以N-正辛酰壳聚糖为原料制备高分子胶束

取7.2g正辛酸置三口瓶中，滴入8mL醋酸酐，120℃下不断蒸出醋酸，得到正辛酸酐。取粘均分子量为19万，脱乙酰度为95％的壳聚糖1.5g用水溶胀后沥干，转入三口瓶，加入100mL DMSO(二甲基亚砜)，油浴加热到60℃，滴加上述制备的正辛酸酐，保温下搅拌反应10h，停止反应后趁热过滤，滤饼依次用丙酮、乙醚洗3～5次，40℃真空干燥得产品N-正辛酰壳聚糖。产物易溶于水和DMSO，并能在水中自聚集形成胶束，用酸碱滴定和元素分析测得其取代度(定义为100个吡喃塘环中引入脂肪酰基的个数，以下相同)为46％。

实施例10

以N-软脂酰为原料制备高分子胶束

取5.0g软脂酸置三口瓶中，滴入6mL醋酸酐，120℃下不断蒸出醋酸，得到软脂酸酐。取粘均分子量为19万，脱乙酰度为95％的壳聚糖用水溶胀后沥干，转入三口瓶，加100mLDMSO，油浴加热到60℃，滴加上述制备的软脂酸酐，保温下搅拌反应10h，停止反应后趁热过滤，滤饼依次用丙酮、乙醚洗3～5次，40℃真空干燥得产品N-软脂酰壳聚糖。产物易溶于水和DMSO，并能在水中自聚集形成胶束，用酸碱滴定和元素分析测得其取代度为23％，

实施例11

以N-硬脂酰壳聚糖为原料制备高分子胶束

取7.0g硬脂酸置三口瓶中，油浴加热到55℃，磁力搅拌同时滴加3.0mL亚硫酰氯，保温反应0.5h，减压蒸馏除尽过量的亚硫酰氯，制得的硬脂酸酰氯加入20mL乙醚转入滴液漏斗中备用。取粘均分子量为19万，脱乙酰度为95％的壳聚糖1.5g用水溶胀后沥干，转入三口瓶，加100mLDMSO、2mL吡啶，油浴加热到60℃，滴加硬脂酸酰氯，保温下搅拌反应10h，停止反应后趁热过滤，滤饼依次用丙酮、乙醚洗3～5次，40℃真空干燥得产品N-硬脂酰壳聚糖。产物易溶于水和DMSO，并能在水中自聚集形成胶束，用酸碱滴定和元素分析测得其取代度为37％。

红外谱图显示酰化反应后壳聚糖原料在1574cm^-1处(氨基的N-H弯曲振动)的峰消失，而出现1633cm^-1(酰胺的羰基峰)和1521cm^-1的峰(仲酰氨的N-H弯曲振动)。¹H-MNR(氘代DMSO溶剂中)峰的归宿：δ_0.85＝CH₃(硬脂酰的甲基)，δ_1.23＝CH₂(硬脂酰的亚甲基)，δ_1.49＝CH₂(硬脂酰链中被羰基屏蔽的β位亚甲基)，δ_1.85＝CH₂(硬脂酰链中被羰基屏蔽的α位亚甲基氢)，δ_2.08＝CH₃(乙酰基)，δ_2.72-2.88属于壳聚糖吡喃糖环上2号氢，分别对应N-酰基化吡喃糖环上2号的氢，和带自由氨基的吡喃糖环上2号氢(参见文献carbohydrate research324(2000)：268-274)，δ_3.34--3.71归属于壳聚糖吡喃糖环上3，4，5，6，6’号氢，δ_4.95-5.44分别对应带自由氨基壳聚糖吡喃糖环上和N-酰基化吡喃糖环上的1号氢，δ_7.93--8.54为酰胺上的N-H。

实施例12

通过用卤代烃制备N-烷基化壳聚糖

取粘均分子量为19万，脱乙酰度为95％的壳聚糖1.5g被水溶胀后沥干，均匀分散在100mL DMSO，2mL吡啶中，加热到55℃，搅拌的同时滴加10g十六烷基溴，保温反应6h结束反应过滤，滤饼用丙酮，乙醚等洗涤3～5次，60℃真空干燥得产品得到N-十六烷基壳聚糖。产物易溶于水并能在水中自聚集形成胶束，用酸碱滴定和元素分析测定其取代度为21％。

实施例13

N-硬脂酰壳聚糖(取代度为37％)胶束性质：

(1)利用芘做分子探针，检测其荧光光谱，芘的激发谱图显示，随着水溶液中N-硬脂酰壳聚糖浓度的增大，芘的(0，0)峰从334nm迁移到338nm，并测得其临界胶束浓度(cac)为2.28×10^-3mg/mL；

(2)透视电镜显示其在水中自组装成90nm左右的微球。

[3]动态激光散射测得其流体力学半径(Rh)为141nm。

实施例14

用N-硬脂酰壳聚糖(取代度为37％)负载丹参酮类药物

取103.6mg丹参酮II A溶于10mL乙醇，加入0.605gN-硬脂酰壳聚糖，在磁力搅拌下，缓慢加入50mL水，N-硬脂酰壳聚糖在逐渐溶解的过程中自聚集形成高分子胶束，伴随着丹参酮II A不断沉淀析出的同时一部分丹参酮II A被裹进N-硬脂酰壳聚糖形成的胶束中，将溶液过滤，滤渣为没有被包裹而以沉淀析出的丹参酮II A，将其回收并干燥，滤液冷冻干燥，得到载了丹参酮II A的药物组合物固体，再每次用10mL丙酮淋洗药物组合物固体2～3次，洗脱附在组合物固体表面的丹参酮II A并回收干燥，和前面的析出的丹参酮II A一并称重，得28.3mg，则间接计算得出组合物的载药量(负载药物重量/组合物重量)为11.1％。

实施例15

N-硬脂酰壳聚糖胶束(取代度为37％)负载丹参酮II A(载药量为11.1％)的释放规律

取实施例14的负载了参酮II A硬脂酰壳聚糖干燥固体粉末100.7mg，转入羊肠半透膜袋中，加磷酸缓冲溶液(pH＝7.2的PBS溶液添加2％的乙醇)20mL，载药固体粉末完全溶解得透明溶液，将整个羊肠半透膜袋浸入盛了60mL PBS溶液(添加2％的乙醇)的带塞玻璃容器中，整个玻璃容器置于37℃恒温水浴摇床中，隔时取半透膜外的溶液，用紫外光度计测268nm处的吸光度，用标准曲线换算其析出丹参酮II A的量。经测定，其体外释放规律如下：刚开始有少量爆释后，基本呈缓慢恒速释放，直到22h后释放速度突然加快，此时释放了载药总量的33％，快速释放持续了7h，此时总共释放了载药总量的62％，此后释放速度又慢下来，当释放到45h时，释放的量占载药总量的84％。

Claims

1.一类以壳聚糖及其衍生物或海藻酸钠作为药物载体负载丹参提取物的组合物及其制备方法，其特征在于，用壳聚糖及其衍生物或海藻酸钠作为丹参提取物的载体，达到对丹参提取物的增溶和控制释放效果。

2.根据权利要求1所述的以壳聚糖及其衍生物或海藻酸钠作为药物载体负载丹参提取物的组合物及其制备方法，其特征在于，先把丹参提取物分散在壳聚糖或海藻酸钠的水溶液中，再固化成纳米或纳米级颗粒以上大小的载药小球。

3.根据权利要求2所述的以壳聚糖及其衍生物或海藻酸钠作为药物载体负载丹参提取物的组合物及其制备方法，其特征在于，先把壳聚糖溶解在稀酸水溶液中，再加入丹参提取物的固体粉末或丹参提取物的有机溶液搅拌分散均匀后，滴加到稀碱溶液或海藻酸钠或三聚磷酸钠溶液中，固化成载药小球。

4.根据权利要求1所述的以壳聚糖及其衍生物或海藻酸钠作为药物载体负载丹参提取物的组合物及其制备方法，其特征在于，把丹参提取物均匀分散到壳聚糖接枝聚乙二醇或既引入亲水基又引入疏水基所得到的水凝胶溶液中，直接用于临床，或冷冻干燥为固体或再通过化学或物理方法交联固化后再用于临床。

5.根据权利要求1所述的以壳聚糖及其衍生物或海藻酸钠作为药物载体负载丹参提取物的组合物及其制备方法，其特征在于，对壳聚糖进行改性所引入的基团中包括季铵盐或末端带羧基的基团譬如羧甲基、羧丙酰基，该衍生物可以是只含上述两种基团的一种或同时再包含其他基团，再与丹参提取物复配。

6.根据权利要求1所述的以壳聚糖及其衍生物或海藻酸钠作为药物载体负载丹参提取物的组合物及其制备方法，其特征在于，用壳聚糖衍生物高分子胶束或胶束类似物譬如壳聚糖衍生物高分子囊泡、壳聚糖衍生物高分子表面活性剂、壳聚糖衍生物高分子水凝胶来增溶或负载丹参提取物。

7.根据权利要求6所述的以壳聚糖及其衍生物或海藻酸钠作为药物载体负载丹参提取物的组合物及其制备方法，其特征在于，用于负载丹参提取物的高分子胶束或胶束类似物譬如高分子囊泡、高分子表面活性剂、高分子水凝胶是由壳聚糖既引入亲水基又引入疏水基而制备的，或仅只接枝疏水基而制备的，得到的载药复合物可制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、针剂、乳膏剂、外用贴剂、喷粉剂、洗液。

8.根据权利要求7所述的以壳聚糖及其衍生物或海藻酸钠作为药物载体负载丹参提取物的组合物及其制备方法，其特征在于，用于负载丹参提取物的高分子胶束是由壳聚糖仅仅只引入疏水性的酰基或烷基制备的。

9.根据权利要求8所述的以壳聚糖及其衍生物或海藻酸钠作为药物载体负载丹参提取物的组合物及其制备方法，其特征在于，用于负载丹参提取物的水溶性壳聚糖衍生物高分胶束是通过壳聚糖与卤代烃反应在壳聚糖分子上接枝碳原子个数不低于八个的疏水烷基而制备的，或由壳聚糖与七个碳原子以上并除亚麻酸(linolenic acid)以外的疏水性脂肪酸或芳香酸的酸酐或酰卤反应在壳聚糖分子中引入疏水酰基而制备的。

10.根据权利要求6所述的以壳聚糖及其衍生物或海藻酸钠作为药物载体负载丹参提取物的组合物及其制备方法，其特征在于，用壳聚糖衍生物高分子胶束或胶束类似物负载丹参提取物的载药方法如下，先把丹参提取物溶在有机溶剂中再加入能形成高分子胶束的壳聚糖衍生物固体粉末，不断搅拌的同时缓慢加入蒸馏水，等壳聚糖衍生物固体粉末完全溶解，并挥发除去绝大部分溶解丹参提取物的有机溶剂后，过滤，将滤液冷冻干燥，得到负载了丹参提取物的壳聚糖衍生物高分子胶束冻干剂，可用于口服给药或喷粉给药或再溶于蒸馏水用于针剂给药。