CN104546734B - 一种丹参酮ⅱa微球制剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法。该方法是将丹参酮ⅡA和高分子聚合物溶于有机溶剂中，随后加到分散介质中，乳化并挥发有机溶媒，然后抽滤、洗涤、干燥，即得丹参酮ⅡA微球。本发明不仅大大提高了载药量和包封率，而且具有溶解性好、稳定性好、安全无毒、缓释性好、持续性好和高效性好的特点。
Description
技术领域
本发明涉及丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法，属于微球制剂领域。
背景技术
微球是指药物溶解或分散于高分子材料中形成的微小球状实体，球形或类球形。微球粒径范围一般为1～500μm，可以供注射、口服、滴鼻或皮下埋植给药使用，属于基质型骨架微粒，微球制剂作为一种新型给药技术，既能通过调节和控制药物的释放速度实现长效的目的，又能保护药物不受体内酶的影响而降解，掩盖药物的不良口味，减少给药次数和药物刺激，提高疗效和药物稳定性。例如亮丙瑞林微球缓释时间就长达6个月，改变原来每日给药的方式，大大减轻了病人的痛苦。这类剂型的开发，对于发展缓控释给药系统，具有重要的意义。
聚乳酸(PLA)及其共聚物是具有良好生物相容性和生物降解性的高分子聚合物，主要用作医用手术防粘连膜，注射用微胶囊、微球及埋植剂缓释制剂的辅料，可用作组织工程细胞培养的多孔支架，孔隙率、孔径和降解速率可调。PLA微球作为缓控释给药系统，可以控制微粒的大小、延长药物释放时间、降低毒副作用等。其分为左旋和外消旋两类。左旋聚乳酸(PLLA)也称为左旋聚丙交酯，属于聚酯家族。单个的乳酸分子中有一个羟基和一个羧基，多个乳酸分子在一起， -OH与别的分子的-COOH脱水缩合，-COOH与别的分子的-OH脱水缩合形成的聚合物。具有优良的力学强度并且降解时间长一般为3-3.5 年，有好的抗溶剂性。
外消旋聚乳酸与甲氧基聚乙二醇的二嵌段共聚物(mPEG-PDLLA) 是由亲水性链段mPEG和疏水链段PDLLA聚合而成，具有良好的生物降解性和生物相容性，亲水性链段伸展于水相，疏水性链段伸展于油相。更利于制备O/W的难溶性药物微球。
丹参酮ⅡA(tanshinone ⅡA)是唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎中提取的脂溶性菲醌化合物，具有显著扩张冠脉、减轻缺氧引起的心肌损伤、扩张血管、改善微循环障碍、降低氧化低密度脂蛋白(OXLDL)的生成、保护OXLDL引起的血管内皮细胞损伤等作用，对治疗冠心病、心绞痛、心律过速有显著疗效，并在临床广泛应用。临床用于治疗心血管病的中成药制剂，如片剂、胶囊、冲剂、针剂，但其存在着载药量和包封率不理想，不溶或微溶于水，生物利用度低，吸收较差的问题，这在一定程度上影响其疗效的发挥。且其生物半衰期短，需要增加给药次数，以达到相应的血药浓度，病人顺应性差。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法。本发明不仅大大提高了载药量和包封率，而且具有溶解性好、稳定性好、安全无毒、缓释性好、持续性好和高效性好的特点。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案如下：一种丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法，该方法是将丹参酮ⅡA和高分子聚合物溶于有机溶剂中，随后加到分散介质中，乳化并挥发有机溶媒，然后抽滤、洗涤、干燥，即得丹参酮ⅡA微球。
上述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法中，所述的高分子聚合物为PLLA或mPEG-PDLLA。
前述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法中，其制备方法具体如下；
(1)O相的制备：将10～40mg丹参酮ⅡA与50～100mg/mL高分子聚合物溶解于1～2.5mL有机溶剂中，涡旋混匀，配成O相，备用；
(2)W相的制备：将2～3mg/mL表面活性剂聚乙烯醇(PVA) 溶于100～500mL去离子水中，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在0-25℃温度下以800～1500rpm的转速匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以800～1500rpm的转速匀速搅拌，至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集，蒸馏水洗涤3次，干燥，干燥的方式为放入干燥器中室温干燥，或真空干燥，或冷冻干燥即得。
前述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法中，其制备方法具体如下；
(1)O相的制备：将10～40mg丹参酮ⅡA与50～100mg/mL PLLA溶解于1.5～2.5mL有机溶剂中，涡旋混匀，配成O相，备用；
(2)W相的制备：将2～3mg/mL表面活性剂PVA溶于100～500 mL去离子水中，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在0-25℃温度下以800～1500rpm的转速匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以800～1500rpm rpm的转速匀速搅拌，至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集，蒸馏水洗涤3次，干燥，即得。
前述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法中，其制备方法具体如下；
(1)O相的制备：将10～40mg丹参酮ⅡA与50～100mg/mL mPEG-PDLLA溶解于1～2mL有机溶剂中，涡旋混匀，配成O相，备用；
(2)W相的制备：将2～3mg/mL表面活性剂PVA溶于100～500 mL去离子水中，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在0-25℃温度下以800～1500rpm的转速匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以800～1500rpm rpm的转速匀速搅拌，至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集，蒸馏水洗涤3次，干燥，即得。
前述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法中，所述的有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮中的一种或一种以上的组合。
前述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法中，所述的步骤(3)乳剂的制备中，在4℃温度下以800～1500rpm的转速匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1、作为载体的高分子聚合物L-聚乳酸、单氧基聚乙二醇-D、 L-聚乳酸，以及作为稳定剂的PVA等成分，均对人体无毒，安全可靠，并且可以为人体所代谢。
2、本发明很好地解决了其溶解性、稳定性，延长了体内的作用时间，具有优越的缓释性、持续性和高效性，从而提高了疗效，降低了剂量。
3、本发明的微球制剂对心脑血管微循环障碍及治疗及抑制血管内血栓的形成起到了积极的作用。
4、本发明大大提高了载药量和包封率，工艺稳定，工艺重复性较好。
微球载药量和包封率的测定试验：
精密称取10mg微球样品，加入5mL二氯甲烷，涡旋10min， 3500rpm离心10min，重复上述操作3次，合并上清液，二氯甲烷定容至25mL,精密吸取2mL至25mL容量瓶中，DCM定容。以紫外分光光度法在波长269nm处检测吸光度A值。
将所测得的吸光度A值代入标准曲线方程中，求得药物含量测定值，计算溶液中的药物含量。根据测得的一定质量微球中的药物含量，按照下列公式计算微球的包封率和载药量：
载药量(％)＝(微球中药物的含量/微球的总质量)×100％
包封率(％)＝(微球中药物的含量/投药量)×100％
丹参酮ⅡA-PLLA微球的正交试验
在单因素试验的基础上，根据预试验结果，选取对微球质量影响较显著的四个因素，即投药量(A)，DCM体积(B)，PVA浓度(C)，外水相体积(D)设计安排实验，每号实验重复3次，按照L9(34)正交试验设计安排实验，因素与水平见表1。以载药量(S1)、包封率 (S2)和收率(S3)为考察指标，根据指标对微球质量贡献大小的差异分配不同的权重系数，即微球的载药量占40％，包封率占40％，收率占20％，再计算多个指标的加权求和值S(S＝40％×S1/Smax1+40％×S2/Smax2+20％×S3/Smax3)进行综合评价，优选高分子聚合物。
表1 因素水平表
表2 L9(34)正交试验结果
表3 方差分析表
从正交分析结果及方差分析表明，各因素对丹参酮ⅡA-PLLA微球质量的影响大小依次为A＞B＞D＞C。由于因素A，B，D对综合评分有极显著影响，综合考虑得出最佳处方为丹参酮ⅡA35mg，二氯甲烷 2mL，PVA浓度3％,外水相体积150mL。
工艺验证：
按试验结果得到的工艺进行验证，紫外分光光度法进行含量测定，得载药量为(24.33±1.5)％，包封率为(94.93±1.4)％，效果非常理想。
丹参酮ⅡA-mPEG-PLLA微球的单因素试验
采用乳化溶剂挥发法，进行单因素试验(投药量15、15、35、40mg，材料重量50、75、100mg/mL，PVA浓度2、2.5、3％，外水相体积100、150、200mL，搅拌速度800、1000、1300rpm)，基本条件为投药量35mg、材料重量150mg、PVA浓度2.5％，外水相体积 150mL、搅拌速度1000rpm，以其中一项为变量，固定其他条件进行微球的制备研究。
单因素试验结果表明，当投药量为28.93mg，材料重量为100mg，外水相为250ml，溶剂为DCM:ACE 1.6:0.4时，制备得到的微球载药量为22.21％，包封率大于等于82.94％。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但是所列实施例并非用于限制本发明。
实施例1：丹参酮ⅡA-PLLA微球的制备：
(1)O相的制备：将10mg丹参酮ⅡA与PLLA溶解于2mL二氯甲烷(DCM)中，制得PLLA浓度为75g/ml，涡旋混匀，配成O相，备用；
(2)W相的制备：将表面活性剂PVA溶于150mL去离子水中，制得PVA浓度为3mg/mL，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在4℃温度下以1000rpm的转速匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以1000rpm的转速匀速搅拌，至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集，蒸馏水洗涤3次，放入干燥器中室温干燥48小时，即得。
实施例2：丹参酮ⅡA-PLLA微球的制备：
(1)O相的制备：将35mg丹参酮ⅡA与75mg/mL PLLA溶解于 1mLDCM中，涡旋混匀，配成O相，备用；
(2)W相的制备：将PVA溶于150mL去离子水中，制得PVA浓度为3mg/mL，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在4℃温度下以800rpm的转速匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以1000rpm的转速匀速搅拌，至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集，蒸馏水洗涤3次，放入干燥器中室温干燥48小时，即得。
实施例3：丹参酮ⅡA微球制剂的制备:
(1)O相的制备：将35mg丹参酮ⅡA与75mg/mL PLLA溶解于 2mLDCM中，涡旋混匀，配成O相，备用；
(2)W相的制备：将PVA溶于150mL去离子水中，制得PVA浓度为3mg/mL，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在4℃温度下以1500rpm的转速匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以1500rpm的转速匀速搅拌，至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集，蒸馏水洗涤3次，放入干燥器中室温干燥48小时，即得。
实施例4：丹参酮ⅡA-mPEG-PDLLA微球的制备：
(1)O相的制备：将35mg丹参酮ⅡA与75mg/mL mPEG-PDLLA溶解于1mLDCM和1ml丙酮(ACE)中，涡旋混匀，配成O相，备用；
(2)W相的制备：将PVA溶于150mL去离子水中，制得PVA浓度为3mg/mL，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在4℃温度下以800rpm的转速匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以1000rpm的转速匀速搅拌，至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集，蒸馏水洗涤3次，放入干燥器中室温干燥48小时，即得。
实施例5：丹参酮ⅡA-mPEG-PDLLA微球的制备：
(1)O相的制备：将35mg丹参酮ⅡA与75mg/mL mPEG-PDLLA溶解于1.6mLDCM和0.4mlACE中，涡旋混匀，配成O相，备用；
(2)W相的制备：将PVA溶于150mL去离子水中，制得PVA浓度为3mg/mL，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在4℃温度下以800rpm的转速匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以1000rpm的转速匀速搅拌，至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集，蒸馏水洗涤3次，放入干燥器中室温干燥48小时，即得。
Claims (5)
1.丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法，其特征在于：该方法是将丹参酮ⅡA和高分子聚合物溶于有机溶剂中，随后加到分散介质中，乳化并挥发有机溶媒，然后抽滤、洗涤、干燥，即得丹参酮ⅡA微球；所述的高分子聚合物为PLLA或mPEG-PDLLA；其制备方法具体如下；
(1)O相的制备：将10～40mg丹参酮ⅡA与50～200mg/mL高分子聚合物溶解于1～2.5mL有机溶剂中，涡旋混匀，配成O相，备用；
(2)W相的制备：将2～3mg/mL表面活性剂聚乙烯醇溶于100～500mL去离子水中，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在0-25℃温度下以800～1500rpm的转速匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以800～1500rpm的转速匀速搅拌，至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集，蒸馏水洗涤3次，干燥，即得。
2.如权利要求1所述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法，其特征在于：其制备方法具体如下；
(1)O相的制备：将10～40mg丹参酮ⅡA与50～100mg/mL PLLA溶解于1.5～2.5mL有机溶剂中，涡旋混匀，配成O相，备用；
(2)W相的制备：将2～3mg/mL表面活性剂PVA溶于100～500mL去离子水中，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在0-25℃温度下以800～1500rpm的转速匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以800～1500rpm的转速匀速搅拌，至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集，蒸馏水洗涤3次，干燥，即得。
3.如权利要求1所述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法，其特征在于：其制备方法具体如下；
(1)O相的制备：将10～40mg丹参酮ⅡA与50～100mg/mL mPEG-PDLLA溶解于1～2mL有机溶剂中，涡旋混匀，配成O相，备用；
(2)W相的制备：将2～3mg/mL表面活性剂PVA溶于100～500mL去离子水中，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在0-25℃温度下以800～1500rpm的转速匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以800～1500rpm的转速匀速搅拌，至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集，蒸馏水洗涤3次，干燥，即得。
4.如权利要求1至3任一项所述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法，其特征在于：所述的有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮中的一种或一种以上的组合。
5.如权利要求4所述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法，其特征在于：所述的步骤(3)乳剂的制备中，在4℃温度下以800～1500rpm的转速匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂。
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