CN1625391A - 包含环胞菌素的缓释药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种环胞菌素缓释药物组合物。具体而言，本发明设计基本上含有生物可降解聚合物、包封在该聚合物中的环胞菌素及释放调节剂的含环胞菌素的缓释药物组合物，其中环胞菌素与释放调节剂包封于生物可降解聚合物中，并且释放调节剂为至少一种选自以下组中的成分：亲水性释放调节剂、亲脂性释放调节剂。

Description

包含环胞菌素的缓释药物组合物

技术领域

本发明涉及一种包含环胞菌素的缓释药物组合物。

背景技术

迄今为止，对环胞菌素临床研究的主要领域是其作为免疫抑制剂的应用，特别是应用于接受器官移植的患者，比如心脏、肺、心肺联合、肝、肾、胰、骨髓、皮肤、角膜移植，特别是同种异体器官移植。在此领域，环胞菌素的应用取得了非凡的成功。

与此同时，重点在于环胞菌素在治疗各种自身免疫病和炎症，特别是由包括关节炎和风湿病中的自身免疫成分在内的病因学因素引起的上述症状时的适用性。文献广泛公开了许多有关环胞菌素在体外试验、动物模型试验及临床试验的报道及结果。推荐应用或已经应用环胞菌素治疗的特定的自身免疫疾病包括自身免疫性溶血性疾病(例如包括溶血性贫血、再生障碍性贫血、正红血球性贫血及特发性血小板减少等)、全身性红斑狼疮、多软骨炎、硬皮病、韦格纳肉芽肿病、皮肌炎、慢性活动性肝炎、重症肌无力、牛皮癣、史蒂文斯-约翰逊综合症、特发性口炎性腹泻、自身免疫性炎性肠疾病(例如包括溃疡性结肠炎、局限性回肠炎等)、内分泌性眼病、格雷夫斯病、结节病、多发性硬化症、原发性胆汁性肝硬变、青少年糖尿病(I型真性糖尿病)、葡萄膜炎(前部和后部)、干燥性角结膜炎、春季角膜结膜炎、间质性肺纤维化、牛皮癣关节炎、肾小球肾炎(伴随或不伴随肾病综合症，如特发性肾病综合症、轻微损害性肾病综合症)。环胞菌素的进一步研究介绍了其潜在的作为抗寄生物药，特别是抗原虫药的应用，并推荐其用于疟疾、球胞子菌感染及血吸虫病的治疗。最近，环胞菌素还用于逆转或消除肿瘤对抗癌瘤药物的耐药性等。

尽管环胞菌素具有低生物利用度的严重缺点，但它仍是迄今为止应用最为广泛的一种免疫抑制剂。应用后，占吸收总量10～27％的环胞菌素被肝脏的首过效应消除。其分布半衰期为0.7～1.7小时，消除半衰期为6.2～23.9小时。上述药物动力学参数显示，随胆酸分泌水平、病人情况及所移植器官种类的不同，环胞菌素个体差异较大。环胞菌素还具有肾脏副作用，如降低肾小球滤过率、提高近端肾小管重吸收等。有报道指出，由于其高血药浓度，导致30％服用环胞菌素的患者出现肾毒性副作用。因此，环胞菌素被划分为需要对患者的血药浓度进行周期性治疗药物监测的药物。

由于环胞菌素具下述特殊性质，如溶解度非常低、生物利用度低、吸收程度个体差异大、剂量单位高和治疗指数狭窄，还由于接受环胞菌素治疗的患者的病症不稳定的事实，很难确定最佳药物剂量方案来维持恒定有效血药浓度在可以同时避免排异反应及副作用的水平以挽救接受器官移植患者的生命。因为环胞菌素的生物利用度低且易变，根据剂型调整其日剂量对于获得希望的血药浓度是必须的，同时还必须对其血药浓度进行监测。目前，环胞菌素的剂量是在分析患者在器官移植前服用环胞菌素后的血药浓度图所获得的资料的基础上确定的。将来，随着医疗技术的发展与知识的进步，器官移植手术数量将稳步上升并因此导致环胞菌素等免疫抑制剂应用的增加。用以分析环胞菌素血药浓度图以确定个体每日剂量以及用于术后治疗药物监测的医疗费用也将随之增加。并且，随着病人数量的增加，医疗保健的条件可能会有所下降。

因此，迫切需要新的具有高生物利用度并且可以避免个体差异维持恒定血药浓度的剂型。

事实上，曾经有过提高环胞菌素生物利用度的尝试，结果造成了环胞菌素剂型的优化。这些尝试主要集中于使环胞菌素增溶的方法。这些方法的代表性的例子是应用脂质体、微球、以及由普通植物油及表面活性剂组成的混合溶剂系统，应用吸附络合物、包合络合物及固体分散体等形成粉末组合物，及其他种种剂型。它们主要为用于口服给药的剂型。

通过改变剂型以提高环胞菌素生物利用度的最重要的尝试之一是第5,342,625号美国专利。这项技术公开了一种包含三相系统的微乳预浓缩物，即(1)水相成分、(2)油相成分和(3)表面活性剂。此组合物包含乙醇作为基本成分且提供了用水稀释后平均粒径小于100nm的水包油型微乳。同传统剂型相比，表面积的增大提高了环胞菌素的生物利用度。第5,342,625号美国专利记载了将可用于体内的微乳处方(第5,342,625号美国专利组合物I)同之前第4,388,307号美国专利中报道的基于乙醇与油类的常规剂型(组合物X)在健康志愿者中进行的比较。组合物I同组合物X(其生物利用度设为100％)相比，相对生物利用度达到149.0％(±48)。尽管组合物I的平均AUC值比组合物X高40％，但由于其20％的偏差太大而不能实际应用于药物的制备。

第5,641,745号美国专利公开了一种环胞菌素包封于生物可降解聚合物内的微球。此微球可于8小时内释放所包封环胞菌素总量的80％以上，因此可以最大限度增加环胞菌素在小肠的吸收。这项技术以最大限度地在环胞菌素的主要吸收部位—上端小肠释放所包封药物的方法来提高生物利用度。但是，对于此制剂，其能在8小时内释放药物总量80％以上的现象被认为是由于微球型制剂典型的药物在起始时的突释，而不是由于生物可降解聚合物对释放的调节。同样，此制剂释放量随聚合物内聚丙交酯量的不同而变化。但其原因被认为是由于环胞菌素的形态，即无定形和晶体，随聚合物种类不同的而不同，从而导致环胞菌素溶解度的不同，而并非是由于生物可降解聚合物对环胞菌素的控释作用。在实际中，起始8小时释放后的试验时间内并未观察到更多的药物释放。

因此，尽管上述类型的剂型适用于制备在靶向器官(小肠上端)完成释放的口服制剂，但并不适用于需要在较长时间段内持续释放药物的控释制剂。并且，很难预料口服给药后药物的长期释放。环胞菌素低且不一致的吸收水平是口服给药时的个体差异造成的，因此人们预期用口服之外的其他途径给药能够克服上述问题。

目前，可以买到环胞菌素的注射剂。但由于其中含有可能引起过敏反应的聚氧乙烯蓖麻油衍生物作为增溶剂，因而限制其只能应用于不能口服给药的患者。为解决上述问题，第5,527,537号美国专利公开了一种不含聚氧乙烯蓖麻油衍生物的静注给药的包含环胞菌素的药物组合物。因为环胞菌素需要长期应用，应每天都给药的静注制剂并非一种口服制剂的良好替代品。

最近，几名科研人员研制了一种用聚丙交酯或聚(丙交酯—共—乙交酯)制备的可以长时间持续释放环胞菌素的生物可降解微球并报道了他们的成果。据报道，此环胞菌素微球在早期体外释药迅速，在之后的4周内最多缓释释药50％(Int.J.Pharmaceut.99(1993)263-273)。即便使用用于调节药物释放趋势通常使用的改变粒径的方法进行调节，也只能增加起始的突释而不能提高药物的释放速率。相信是由于环胞菌素与聚(丙交酯—共—乙交酯)间在释放后期相互作用的事实限制了释放。体外释放后期几乎不再释药的现象在疏水性药物及亲水性蛋白质药物中常见。考虑到聚合物的生物可降解特性，很难在体内完全重现其体外释放趋势。无论如何，4周内少于50％的释放速率都显示需要促进其更多的释放。

T.Urata等研究了通过添加各种脂肪酸酯的方法来改善环胞菌素的体外释药并证实了通过添加上述物质提高体外释药的可能性(J.Controlled Release 58(1999)133-141)。他们写到，亲脂性环胞菌素主要溶解在脂肪酸酯中，将脂肪酸酯分散在聚丙交酯中，溶解的药物通过脂肪酸酯形成的水通道被释放。除具有18个碳的硬脂酸乙酯外，所有用于上述研究的脂肪酸酯在室温下都是液体。可由于硬脂酸乙酯的熔点为33～35℃，在37℃——同时是人体及体外释放试验时的温度——时也会变为液体。也就是说，既然只有溶解在液相中的环胞菌素可以随时间释放，所以只要制剂中的脂肪酸酯占制剂总量的30％或更高，环胞菌素在其中可充分溶解时就可达到提高释放速率的目的。他们用聚丙交酯或聚(丙交酯—共—乙交酯)以溶剂挥发法制备微球，但其中存在一个问题。当所含液相占总量30％或更高时，该液相在制备过程中容易挥发，从而使得难以确保在重复试验中每次都能包封所需量的脂肪酸酯。这意味着溶解在脂肪酸酯中的环胞菌素的包封率可能会受到影响，导致难以得到组成均一的微球。同样，根据其机制，要提高释放需要相对大量的脂肪酸酯，而这必然成为在生物可降解聚合物微球中包封环胞菌素的限制因素。根据研究结果，实际可以包封的环胞菌素的量不足20％。考虑到环胞菌素的剂量较大，包封的药物较少的事实提示其难以作为缓释制剂应用。应用于人类所需的环胞菌素的日剂量为60mg/60kg到120mg/60kg。假设药物含量为20％，则仅以维持一周所需的环胞菌素微球计算，所要服用的微球的量为2.1～4.2克。这给应用于人体带来了问题。至于注射给药，这虽然是一种方便的给药途径，但由于上述制剂的剂量太大而不适合以注射剂的形式应用。并且，由于含有大量的脂肪酸酯而其药学上的可接受性尚未确定，因此不能排除引起局部刺激和坏死等副作用的可能。

因此，本发明的目的是研制出一种基于新观念的环胞菌素制剂，其能够最小化在口服给药中由生物利用度不相同和个体差异可能引起的副作用、降低预监测带来的医疗支出、提高病人顺应性和能够建立可靠的给药方案。也就是说，本发明的目的是提供一种可注射的环胞菌素制剂，特别是能够通过持续几天甚至几周持续释药从而调整、维持血药浓度几天甚至几周在有效范围内的含环胞菌素的缓释药物组合物。

发明内容

在此处所用的“环胞菌素”一词系指环胞菌素A及具有相似物理性质的环胞菌素A的类似物。

本发明涉及一种包含环胞菌素的缓释药物组合物。更具体而言，本发明涉及一种包含环胞菌素的缓释药物组合物，其基本上包含生物可降解聚合物、包封在该聚合物内的环胞菌素及释放调节剂，其中环胞菌素及释放调节剂包封于生物可降解聚合物中，且释放调节剂为至少一种选自以下组中的成分：亲水性释放调节剂、亲脂性释放调节剂。

上述生物可降解聚合物、上述环胞菌素及上述释放调节剂可制备微球或纳米球。

本发明的药物组合物中，环胞菌素、生物可降解聚合物及释放调节剂的量各自优选为15～70％、25～80％及0.01～20％，更优选为25～60％、35～70％及0.1～10％。

应用于本发明组合物中的生物可降解聚合物可以是任何可用于注射或埋植的生物可降解聚合物，优选为选自以下组中的羧基酸如：聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚(丙交酯—共—乙交酯)(PLGA)、聚β-羟基丁酸(PHB)、聚己内酯、聚酸酐、聚原酸酯、聚氨基甲酸酯、聚丁酸、聚戊酸及聚丙交酯己内酯，及其衍生物、共聚物和混合物。

本发明的发明人发现可通过使用能够阻止环胞菌素同生物可降解聚合物之间相互作用但能够促进环胞菌素从生物可降解聚合物中释放的释放调节剂来调节环胞菌素注射后在体内的释放，从而完成了本发明。

本发明组合物所应用的释放调节剂可为至少一种选自以下组中的成分：亲水性释放调节剂、亲脂性释放调节剂。优选地，亲水性释放调节剂可同亲脂性释放调节剂适当地相互结合使用以保证药物在体内以恒定速率持续释放。

可应用于本发明的亲水性释放调节剂包括如聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、甘油一油酸、脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚乙烯醇、泊洛沙姆、聚乙二醇、甘油棕榈硬脂酸酯、苯甲酸苄酯、油酸乙酯、α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、羟丙基β-环糊精等。

亲水性释放调节剂包括亲水性基团如羟基、酯、环氧乙烷、环氧丙烷等，而且是药物学上可接受的，但不携带电荷。它们可以通过在微球内部产生适宜的小孔而引发药物释放初期的起始药物释放。即，它们并不影响环胞菌素的溶解度，而是在微球结构中形成适宜的小孔，因此它们并不会导致过度的起始药物释放。用于引发起始释放的亲水性释放调节剂的种类和用量可以根据所用生物可降解聚合物及亲脂性释放调节剂的类型而改变。

可用于本发明的亲脂性释放调节剂包括例如可药用的天然油如(大)豆油、棉子油、芝麻油、花生油、低芥酸菜籽油、玉米油、椰子油、菜籽油、可可油等。它们可以通过减少据信为主要的阻止药物后期释放的原因即环胞菌素与生物可降解聚合物之间的相互作用从而使得药物在后期持续释放。这些天然油可在环胞菌素及生物可降解聚合物间产生缓冲作用，从而阻止疏水性相互作用导致的后期释放障碍。同样，它们对人体无害且现在广泛用于注射剂中。亲脂性释放调节剂的种类及用量可以根据所用的生物可降解聚合物及亲水性释放调节剂的种类而改变。

亲水性和亲脂性释放调节剂可以单独或至少两种结合使用以有效调节包封于生物可降解聚合物内的环胞菌素的释放。

本发明组合物可用于注射或埋植给药。具体而言，注射法包括皮下注射、肌肉注射等。同样，其可行的剂型实例中包括了如注射液、注射前需重新分散于注射液中的粉末等的注射用及埋植用剂型。

因此，本发明组合物可以根据制备前述实际应用的剂型的要求进一步包含赋形剂、稳定剂、pH调节剂、等渗调节剂等。

本发明组合物可用冷冻干燥、蒸发干燥、喷雾干燥、真空干燥等方法制备。本发明中环胞菌素微球的生产可为下列方法：用通常应用的适宜的搅拌器进行W/O单乳剂的溶剂挥发及溶剂萃取或喷雾干燥。制备具有所需释放控制效果的本发明组合物，要点在于应在相对温和的条件下短时间内生产微球。

本发明组合物可由环胞菌素的缓释而在7～28天内维持100～500ng/ml的环胞菌素血药浓度。

本发明组合物在均一地维持有效药物浓度时无环胞菌素血药浓度临时增高的现象，从而减少了药物的毒性。此临时增高现象通常在其他制剂口服后随之出现。同样由于本发明组合物无吸收率个体差异，从而使得血药浓度的预测成为可能。因此，有可能可以省略不必要的为确定环胞菌素制剂剂量的药物管理程序及用以治疗药物监测(TDM)的血药浓度分析。并且，由于本组合物可以几天甚至几周内恒速释放药物，可预期其能够减少每天服药的不便从而提高病人对治疗的顺应性。

【环胞菌素释放度试验】

发明人证实，在环胞菌素微球制剂体外释放试验中，当释放介质的组成改变时，其体外释放趋势也随之改变。根据此结果，考虑到本发明目标剂型并非用于口服(而用于注射或埋植)，可以预计由传统方法得到的体外释放趋势可能并不反映本发明剂型的体内释放趋势。因此，发明人建立了适用于本发明组合物的体外释放试验条件，通过对体外释放趋势的分析筛选了候选组合物并将其应用于大鼠，并在血药浓度分析结果的基础上完成本发明。

在筛选不同释放介质以确定最优微球体外释放条件的试验中，发明人发现含有聚山梨醇酯80，即吐温80的释放介质最有效。根据AAPS PharmSciTech 2001：2(1)中文章2所报道，当吐温80的浓度提高20倍时，由于吐温80的胶束化作用环胞菌素的溶解度增大了60～160倍。因此，可以通过在0.025～0.1％范围内调整在含有0.01％叠氮化钠的pH7.5的磷酸钠缓冲盐介质中吐温80的浓度来控制微球所包封环胞菌素的溶解度，进而调节其体外释放趋势。将10mg包封了环胞菌素并由冻干制得的微球分散于含有0.1％(W/V)吐温80和0.01％叠氮化钠的pH7.5的磷酸钠缓冲盐溶液中，然后用于体外释放试验。用于测定释放量的试管垂直或平行于震动方向置于定向震动着的37℃水浴中。在释放试验的装置中观察到试管垂直或平行于震动的方向放置导致环胞菌素释放曲线的不同。特别地，当试管平行于震动方向置于水浴中时，由于介质迅速移动微球并不沉降而是依然以独立的粒子形式存在。因此，水通道可以相对迅速地形成，微球中包封的环胞菌素可由疏水性微球的水通道中迅速溶出。另一方面，当试管垂直于震动方向置于水浴中时，微球的重量导致微球由于重力作用沉降并凝聚。环胞菌素的释放缓慢，相信这是由于凝聚的微球沉在试管底部，因此微球内部难以形成水通道。并且，相信还是由于环胞菌素需要从这样的凝聚物中释放所导致的。

本发明中，为预测环胞菌素体内释放趋势，通过在0.025～0.1％范围内改变体外释放介质中的吐温80的浓度，建立了模拟微球在给药后的体内环境的系统，并应用于本研究。

附图说明

读完下面结合附图所作的详细叙述，本发明所要达到的上述目的及其他特征和优点将更加明显。其中：

图1为实施例5所制备微球的扫描电镜图；

图2显示了体外释放试验中环胞菌素从对照例1(◆)及实施例1(△)、2(▲)、3(●)、4(□)和5(■)所制备微球中释放的结果。在体外释放试验中，释放介质中加入了吐温80(图2a中浓度为0.025％，图2b中浓度为0.05％)，试管垂直于震动方向放置；及

图3是SD大鼠皮下注射对照例1(◆)及实施例3(●)和5(■)中制备的微球后环胞菌素的血药浓度—时间曲线图。

具体实施方式

现在，将在下述实施例的基础上对本发明加以详细叙述。但应知道本发明绝不局限于此。

实施例

实施例1-5和对照例1

以PLGA 5015为生物可降解聚合物制备微球——溶剂挥发法

以下述表1所列配方，通过W/O单乳剂溶剂挥发法制备微球。

表1.以PLGA 5015为生物可降解聚合物制备微球的处方

	对照例1(CyA-PLGA)	实例1(RP5)	实施例2(RP10)	实施例3(RP2S2)	实施例4(RP5S5)	实施例5(RP10s10)
							环胞菌素	160mg	160mg	160mg	160mg	160mg	160mg
聚(丙交酯—共—乙交酯)PLGA 5015	240mg	220mg	200mg	224mg	200mg	160mg
							泊洛沙姆188	-	20mg	40mg	8mg	20mg	40mg
芝麻油	-	-	-	8mg	20mg	40mg

在对照例1及实施例1-5中，应用了分子量为15000(丙交酯∶乙交酯＝50∶50)的聚(丙交酯—共—乙交酯)(PLGA)【PLGA 5015，WakoPure Chemical Industry，Japan】。

将直径45mm、高30mm的桨叶固定于直径70mm、高105mm的圆柱体容器底部，该容器在圆柱侧壁表面每隔120度有一厚10mm隔板的圆柱体容器底部，由此设计出一种搅拌装置并用于微球的制备。

环胞菌素、聚(丙交酯—共—乙交酯)、泊洛沙姆188及芝麻油各自按照表1所示称定，加入适宜尺寸的有盖容器中。4ml二氯甲烷加入容器中，将容器密封，然后搅拌至内容物全部溶解形成油性溶液(溶液1)。将150ml含0.3％乙烯醇和0.3％吐温80的水性溶液(溶液2)加入到容器中制备微球，接着将溶液1在1000rpm搅拌下加入到溶液2中，继续1000rpm搅拌30分钟至形成O/W乳液。所得乳液继续在300rpm下搅拌1小时以固化微球。经固化的微球通过0.22微米醋酸纤维素膜过滤分离，用蒸馏水洗涤3次，冷冻干燥24小时。至此，完成了对照例1和实施例1-5的制备。上述所有步骤都在净化台上操作，并保持尽可能高的无菌度。

实施例6-10和对照例2

以PLGA 5015为生物可降解聚合物制备微球——超声法

这些例子中所使用的溶液1及溶液2与实施例1-5中所使用的相同。将溶液1加入到溶液2中。所得混悬液立刻以70mW功率超声3分钟，接着用磁力搅拌器在700rpm下搅拌2小时以固化微球。固化的微球通过0.22微米醋酸纤维素膜过滤分离，用蒸馏水洗涤3次，冷冻干燥24小时。上述所有步骤都在净化台上操作，并保持尽可能高的无菌度。

试验例1：微球的扫描电镜观察

图1显示了实施例5所制备微球的扫描电镜图。这证明了即使加入20％释放调节剂后，粒径小于30微米的均一微球仍可方便地通过本发明的方法制备。

试验例2：环胞菌素在微球中的包封率

本例中，发明人利用了甲醇的物理化学性质，即它可以很好地溶解环胞菌素同时却不能溶解环胞菌素的生物可降解聚合物载体如聚(丙交酯—共—乙交酯)、聚丙交酯等。该方法可以方便地、准确地测定高环胞菌素包封量的微球中所包封的环胞菌素的量，是一种有效的方法。

将10mg含高比例环胞菌素(30～60％)的微球分散于50ml甲醇中。将此分散液超声一小时使被包封的环胞菌素得以迅速、完全的提取。用反相高压液相色谱在215nm检测波长下分析甲醇中所提取的环胞菌素。同样，为证实包封于微球中的环胞菌素被完全提取，将变为凝胶的生物可降解聚合物用核磁共振色谱法测定。

对照例1和实施例1-5所制备微球中环胞菌素的包封率如表2所示。结果显示在对照例1和实施例1-5中，至少95％环胞菌素被完全包封于微球中。包封率以如下方程计算(n＝3)：

包封率(％)＝(10mg微球中的环胞菌素含量/4mg)×100

(4mg：环胞菌素的理论载药量)

表2 微球的包封率

	对照例1(CyA-PLGA)	实施例1(RP5)	实施例2(RP10)	实施例3(RP2S2)	实施例4(RP5S5)	实施例5(RP10s10)
							包封率	99％(±2)	105％(±2)	103％(±2)	95％(±4)	98％(±5)	102％(±3)

试验例3：环胞菌素微球的体外释放度试验

将10mg冷冻干燥所得的环胞菌素微球分散于含有0.025～0.1％(W/V)吐温80和0.01％叠氮化钠的pH7.5的磷酸钠缓冲溶液中，然后用于体外释放试验。用于测定释放量的试管与震动方向成直角置于定向震动着的37℃水浴中。

为测定环胞菌素的释放量，将试管在3000rpm速度下间隔固定时间离心15分钟，取上清液50ml，迅速向试管中加入等量新鲜介质。利用从上清液中得到的释放介质，通过反相高效液相色谱法测定环胞菌素释放量及稳定性，其中紫外检测器波长为215nm。反相高效液相色谱系统如下所述：Waters 510HPLC泵系统，连接Waters 484紫外监测器，柱温保持在70℃，流动相为乙腈与水的混合溶液(80∶20)。所用色谱柱为Phenomenex Column-Luna，RP-18(4.6×250mm，粒径5微米，美国)。

查看图2a与图2b所示的体外药物释放曲线，在吐温浓度为0.025％条件下，试验的第三天时，含有释放调节剂的实施例1-5的组合物比不含释放调节剂的对照例1的组合物环胞菌素释放量有15％的差异。可是并未明确显示由于释放调节剂含量不同而导致的释放趋势的差异。并且，在第三天后再也不曾观察到环胞菌素释放量的提高。另一方面，当吐温80的浓度增高到0.05％时，在第三天时可观察到由于释放调节剂含量不同而导致的释放趋势差异最大达到40％。本发明中，选择吐温80浓度为0.05％作为体外释放介质应用于处方的筛选。

试验例4：环胞菌素微球的体内释放试验

在体内药物释放试验中，向200g雄性Spraque-Dawley大鼠皮下注射37.5mg/kg悬浮于注射用溶剂中的环胞菌素微球。该注射用溶剂为含有0.9氯化钠及0.1％吐温20的1.5％羧甲基纤维素钠的注射用蒸馏水溶液。氯化钠用于使注射液等渗以减轻注射部位的疼痛。羧甲基纤维素钠用作增稠剂，维持注射液的粘度在200-400cps以使微球可有效悬浮于注射液中，从而在注射过程中维持注射液为均一混悬状态，使得微球可在注射后滞留于注射部位附近。可应用任何可用于注射的、无毒的增稠剂，但必须保证所得注射液在上述粘度范围内。该注射用溶液在应用前灭菌。应用前将环胞菌素微球以50mg/ml浓度混悬，然后按照根据大鼠体重计算的剂量对大鼠注射。此处应用22号针头。白鼠血液中环胞菌素的的浓度用单克隆全血分析法(TDx系统，Abbott Lab.，USA)与荧光偏振免疫分析法(FPIA)对全血进行分析可得。

给药含环胞菌素的微球后，结果显示由于释放调节剂的用量不同，环胞菌素的血药浓度也有相当大的不同(图3)。不含释放调节剂的一组血药浓度维持在100ng/ml左右，低于有效血药浓度(对照例1◆)。另一方面，含有释放调节剂的实施例3(●)和5(■)显示出基本上维持了高得多的血药浓度。

此外还观察到在含有泊洛沙姆188和芝麻油各10％为释放调节剂的实施例5具有最高的血药浓度，为500ng/ml或更高；而释放调节剂含量调整到2％的实施例3(RP2S2)则维持有效且恒定的血药浓度在150ng～350ng/ml。这些结果提示，血药浓度可由释放调节剂的含量进行调节。释放调节剂的种类及用量可根据所用生物可降解聚合物的种类及环胞菌素的含量而改变。

工业应用

根据本发明所制备的高浓度环胞菌素缓释微球可在几天甚至几周内将所有包封于微球内的环胞菌素以恒定速率释放，同时维持环胞菌素制剂所需的治疗有效浓度，并且有可能减少由于口服生物利用度差异可能带来的副作用，从而降低预监测带来的医疗费用，提高病人对治疗的顺应性。

Claims (10)

1.一种包含环胞菌素的缓释药物组合物，其含有生物可降解聚合物、包封在该聚合物中的环胞菌素和释放调节剂，其中环胞菌素和释放调节剂包封于上述生物可降解聚合物中且上述释放调节剂包含至少一种选自以下组中的成分：亲水性释放调节剂、亲脂性释放调节剂。

2.如权利要求1所述的组合物，其中所述生物可降解聚合物、所述环胞菌素和所述释放调节剂构成微球或纳米球。

3.如权利要求1所述的组合物，其中环胞菌素、生物可降解聚合物和释放调节剂的含量各自为15～70％、25～80％和0.01～20％。

4.如权利要求3所述的组合物，其中环胞菌素、生物可降解聚合物和释放调节剂的含量各自为25～60％、35～70％和0.1～10％。

5.如权利要求1所述组合物，其中生物可降解聚合物选自含有下类聚合物的组中：聚丙交酯和聚乙交酯；聚(丙交酯-共-乙交酯)、聚β-羟基丁酸、聚己内酯、聚酸酐、聚原酸酯、聚氨基甲酸酯、聚丁酸、聚戊酸及聚丙交酯己内酯，及其衍生物、共聚物和混合物。

6.如权利要求1所述的组合物，其中亲水性释放调节剂为至少一种选自以下组中的成分：聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、甘油一油酸酯、脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚乙烯醇、泊洛沙姆、聚乙二醇、甘油棕榈硬脂酸酯、苯甲酸苄酯、油酸乙酯、α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、羟丙基β-环糊精。

7.如权利要求1所述的组合物，其中亲脂性释放调节剂为至少一种选自以下组中的成分：豆油、棉子油、芝麻油、花生油、低芥酸菜籽油、玉米油、椰子油、菜籽油和可可油。

8.如权利要求1所述的组合物，其中该组合物为注射制剂。

9.如权利要求1所述的组合物，其中该组合物为埋植制剂。

10.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物在7到28天内维持血液中环胞菌素浓度在100～500ng/ml以达到缓释效果。

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