CN117487154A - 一种丹参酮衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种丹参酮衍生物及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN117487154A
CN117487154A CN202311440027.8A CN202311440027A CN117487154A CN 117487154 A CN117487154 A CN 117487154A CN 202311440027 A CN202311440027 A CN 202311440027A CN 117487154 A CN117487154 A CN 117487154A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cryptotanshinone
mpeg
tanshinone
derivative
acne
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202311440027.8A
Other languages
English (en)
Inventor
刘忠
陈剑晖
王浩宇
徐加明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shenzhen Yusu Biotechnology Co ltd
Jinan University
Original Assignee
Shenzhen Yusu Biotechnology Co ltd
Jinan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shenzhen Yusu Biotechnology Co ltd, Jinan University filed Critical Shenzhen Yusu Biotechnology Co ltd
Priority to CN202311440027.8A priority Critical patent/CN117487154A/zh
Publication of CN117487154A publication Critical patent/CN117487154A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C08G65/331—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing oxygen
    • C08G65/3311—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing oxygen containing a hydroxy group
    • C08G65/3318—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing oxygen containing a hydroxy group heterocyclic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/84—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds obtained by reactions otherwise than those involving only carbon-carbon unsaturated bonds
    • A61K8/86—Polyethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/10—Anti-acne agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A61Q17/005—Antimicrobial preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/007—Preparations for dry skin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明提供一种丹参酮衍生物及其制备方法和应用。本发明通过将亲水无毒的mPEG引入丹参酮，制备mPEG修饰的丹参酮衍生物，有效的解决了天然隐丹参酮水溶性低，稳定性低的主要缺陷。另一方面本发明所制备的亲水性丹参酮衍生物具有质量稳定、功效确定的特点，在化妆品中添加适量的亲水性丹参酮衍生物可解决皮脂分泌过度、毛囊角化、毛孔堵塞、痤疮相关菌感染、油脂降解等问题，达到了抑菌、祛痘、控油的功效，修护皮肤的屏障功能，使皮肤保持年轻健康状态。

Description

一种丹参酮衍生物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及精细化工产品技术领域，具体涉及一种丹参酮衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
痤疮又称青春痘、“粉刺”，是一种主要发生于人颜面、胸背等皮脂腺发达部位的慢性炎症性皮肤病，常见于青春期，全国约85％的青少年均会受其影响，可形成粉刺、丘疹、脓疱、结节、囊肿甚至瘢痕等多种损害，虽然不会危及生命，但易给患者正常生活包括心理和生理等带来极大的负面影响。
痤疮的发病机制十分复杂，多项研究发现其与内分泌因素(特别是雄激素)、痤疮丙酸杆菌感染与定植、炎症反应等多种因素有关。目前对痤疮的治疗以维A酸类、抗雄激素类与抗生素类物质等外用医药品为主，单独使用或联合使用均能取得较好的效果，但是维A酸会增加皮肤的光敏感性，还会使皮肤发红，甚至有致畸风险；抗雄激素类物质不良反应更多，长期使用会引发高胰岛素血症等副作用；抗生素类物质容易引发微生物耐药性，使症状加重且迁延难治。相比于现有的外用医药品，开发新的绿色健康无毒地以天然成分为主导的具抗菌和祛痘功效的成分，并用于皮肤健康与美容的化妆品或护肤品，可能在抗菌和祛痘方面更有疗效和副作用上的优势，也更易被消费者所接受。
隐丹参酮(CPT)是一种著名的二萜醌，是中药丹参的主要脂溶性提取物，具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种活性，已有一些研发机构将之应用于功效化妆品领域，取得了不错的效果。但由于隐丹参酮在水中溶解度很低，在光照和加热等条件下又容易分解变质，致使其生物利用度很低，大大限制和削弱了其在化妆品、护肤品领域抗菌、祛痘以及修复等方面的巨大应用潜力。
发明内容
本发明的目的是提出一种丹参酮衍生物及其制备方法和应用，通过将亲水无毒的mPEG引入丹参酮，制备mPEG修饰的丹参酮衍生物，有效的解决了天然隐丹参酮水溶性低，稳定性低的主要缺陷。在化妆品中添加适量的亲水性隐丹参酮衍生物可解决皮脂分泌过度、毛囊角化、毛孔堵塞、痤疮相关菌感染、油脂降解等问题，达到了抑菌、祛痘、控油的功效，修护皮肤的屏障功能，使皮肤保持年轻健康状态。
为达到以上技术目的，本申请采用的技术方案如下：
第一方面，本发明提供一种丹参酮衍生物，是将mPEG活化酯接枝到丹参酮形成，所述mPEG活化酯是mPEG与琥珀酰亚胺琥珀酸酯形成的酯。
优选地，所述丹参酮选自隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA、二氢丹参酮I中的至少一种；和/或，所述mPEG的分子量为1000-8000，优选为5000-6000。
优选地，所述mPEG活化酯是甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯。
第二方面，本发明提供所述的隐丹参酮衍生物的制备方法，包括：
S1.将丹参酮在溶剂中溶解，加入mPEG活化酯和水，加热混合；
S2.将混合物进行固液分离，分离液冷冻干燥获得粗品；
S3.粗品采用所述溶剂重溶后再次进行固液分离，分离液冷冻干燥后，得到隐丹参酮衍生物。
优选地，所述溶剂采用可与水混溶的有机溶剂，进一步优选地，选自丙酮、乙腈、乙醇、乙醇和水混合溶剂中的至少一种。
优选地，所述步骤S1中，mPEG活化酯摩尔数与丹参酮摩尔数的比例为5-35％，优选为20-25％；水的加入量为所述溶剂的2-4倍。
优选地，所述步骤S1中，加热混合的控制参数为：温度50～80℃，进一步优选60～65℃；搅拌速度500～2000rpm，进一步优选为1000～1200rpm；混合时间5～20h，进一步优选为10～14h。
优选地，所述步骤S3中，固液分离方式为透析，进一步优选地，透析袋的MWCO＝5000～8000；更为优选地，采用两次透析，第一次透析时间为48～50h；所述混合物进行一次透析后采用所述溶剂重溶，进行第二次透析，第二次透析时间为48～50h。
第三方面，本发明提供所述的丹参酮衍生物在制备抗菌和/或祛痘和/或修护产品上的应用，所述产品为化妆品或者药物。
第四方面，本发明提供一种化妆品或者药物，包括所述的丹参酮衍生物，所述化妆品或者药物至少具有抗菌、祛痘、修护功能中的一种。
本发明通过将亲水无毒的mPEG引入丹参酮，制备mPEG修饰的丹参酮衍生物，有效的解决了天然隐丹参酮水溶性低，稳定性低的主要缺陷。另一方面本发明所制备的亲水性丹参酮衍生物具有质量稳定、功效确定的特点，在化妆品中添加适量的亲水性丹参酮衍生物可解决皮脂分泌过度、毛囊角化、毛孔堵塞、痤疮相关菌感染、油脂降解等问题，达到了抑菌、祛痘、控油的功效，修护皮肤的屏障功能，使皮肤保持年轻健康状态。实验测试表明：该亲水性mPEG化隐丹参酮的产率为60％-70％，接枝率为15％-20％，并且接枝前后的丹参酮在水中的溶解度由0.86mg/ml提升到18.41mg/ml。此外，由于亲水性PEG化丹参酮由于在分子链中引入了亲水集团，其吸湿保湿性较单纯丹参酮明显增强，性能直追透明质酸而明显优于甘油对照品。mPEG-隐丹参酮粒径分别分布在100nm～150nm之间，mPEG-隐丹参酮的Zeta电位与未修饰的隐丹参酮相比，有了明显的提高，从原来的+2.66±1.22mV上升至+8.92±3.59mV之间，稳定性显著升高。细胞实验表明，该亲水性mPEG化隐丹参酮在所测定的浓度范围内均对HaCaT细胞的毒性极小或无毒性。功效检测表明：该亲水性mPEG化隐丹参酮衍生物的抗菌、祛痘及修护功效。
附图说明
图1是隐丹参酮与其亲水性mPEG化隐丹参酮衍生物吸湿率对比图；
图2是隐丹参酮与其亲水性mPEG化隐丹参酮衍生物保湿率对比图；
图3是本发明实施例1-3及对比例1-3mPEG化隐丹参酮衍生物对HaCaT细胞毒性结果；
图4是本发明实施例1-3及对比例1-3mPEG化隐丹参酮衍生物对痤疮丙酸杆菌抑菌实验结果；
图5是本发明实施例1-3及对比例1-3mPEG化隐丹参酮衍生物对亚油酸氧化抑制试验结果；
图6是本发明实施例1-3及对比例1-3mPEG化隐丹参酮衍生物对炎性因子IL-1α基因表达量的影响；
图7是本发明实施例1-3及对比例1-3mPEG化隐丹参酮衍生物对炎性因子COX-2基因表达量的影响；
图8是本发明实施例1-3及对比例1-3mPEG化隐丹参酮衍生物对炎性因子NF-KB基因表达量的影响；
图9是本发明实施例1在化妆品中的应用对人脸痘痘影响的典型VISIA案例，其中，图a为16号志愿者0天VISIA图，图b为16号志愿者化妆品施用7天后VISIA图，图c为23号志愿者0天VISIA图，图d为23号志愿者化妆品施用7天后VISIA图。
具体实施方式
本发明实施例采用的mPEG活化酯为单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯(mPEG-Su-COONSu)，购自上海芃硕生物科技有限公司。
在本发明的描述中，需要说明的是，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面结合附图和具体的实施例对本发明做进一步详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
实施例1
本实施例提供了一种具抗菌、祛痘、修护功效的隐丹参酮衍生物的制备方法，采用mPEG-琥珀酰亚胺琥珀酸酯法合成mPEG-隐丹参酮，通过将mPEG活化酯接枝到隐丹参酮上，得到亲水性mPEG化隐丹参酮衍生物，具体包括以下步骤：
S1.精密称取10mg隐丹参酮，用10mL丙酮溶液充分搅拌溶解；
S2.加入聚乙二醇活化产物mPEG-Su-COONSu，并保证使mPEG-Su-COONSu摩尔数与隐丹参酮摩尔数的比例为20％(本发明称为投料比)；
S3.再加入约30mL水于65℃恒温箱中1000rpm/min搅拌12小时；
S4.12h后，所得产物装入透析袋(MWCO＝5000～8000)透析48小时以上再冷冻干燥，得桔红色棉絮状固体；
S5.所得固体用二氯甲烷洗三次，不溶物再用丙酮溶液溶解，置透析袋中透析48h以上；
S6.透析后液体进行冷冻干燥，称重，即得mPEG化隐丹参酮衍生物，得率为65.15％，接枝率为19.98％。
1.对该mPEG化隐丹参酮衍生物进行保湿、抗菌、痤疮、皮肤修护相关的功效检测；
具体地，取适量mPEG化隐丹参酮衍生物，进行吸水保湿、多种细菌/真菌抑菌抗菌实验、痤疮丙酸杆菌抑菌试验、人角质形成细胞增殖实验、亚油酸抗氧化试验以及炎症因子及炎症介质检测等细胞实验，检测评估该亲水性mPEG化隐丹参酮衍生物的吸水保湿、抗菌、祛痘及修护功效；
2.分析实验数据，筛选外观无沉淀无絮状物无异味以及抗菌、祛痘、修护相关功效表现突出的组合物加入化妆品精华液、精华素、精华霜等基础配方中，制成具祛痘修护功效的亲水性mPEG化隐丹参酮衍生物可作敷用化妆品祛痘修护精华液、祛痘修护乳液、祛痘修护爽肤水、祛痘修护面霜、祛痘修护面膜的添加物的任意一种。
实施例2
本实施例与实施例1的不同点在于，S2中，mPEG-Su-COONSu摩尔数与隐丹参酮摩尔数的比例为10％，其它部分均于实施例1相同。得率为30.36％，接枝率为16.69％。
实施例3
本实施例与实施例1的不同点在于，S2中，mPEG-Su-COONSu摩尔数与隐丹参酮摩尔数的比例为30％，其它部分均于实施例1相同。得率为59.69％，接枝率为18.25％。
对比例1
本对比例与实施例1的不同点在于，省去步骤S1(即不加隐丹参酮)，其它部分均与实施例1相同(产物是甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯)。
对比例2
本对比例与实施例1的不同点在于，省去步骤S2(即不加聚乙二醇活化产物mPEG-Su-COONSu)，其它部分均于实施例1相同(产物为隐丹参酮)。
对比例3
本对比例与实施例1的不同点在于，只操作S1中，精密称取10mg隐丹参酮，其它部分均省去(产物为隐丹参酮)。
功效测试对实施例1-3、对比例1-3中组合物进行如下性状和功效测试：
1.mPEG-隐丹参酮的产率
实施例1～3的产率结果表明，实施例1的收率相对较好，因此本发明以隐丹参酮合成20％投料比的mPEG化隐丹参酮(即实施例1的方式)，进行了5批次平行实验，结果表明，产率在60％-70％之间波动，综合实施例2和3的结果，mPEG化隐丹参酮的产率为30～60％。
2.mPEG-隐丹参酮接枝率的测定
采用两相体系分光光度法测定mPEG-隐丹参酮中游离mPEG的含量间接测定产物的接枝率。
(1)0.1mol/L硫氰酸铁胺溶液配制：0.01molFeC13·6H20和0.04molNH4SCN溶于水中，用水稀释至100m1；
(2)取3ml 0.1mol/L硫氰酸铁胺溶液置于10ml具塞塑料离心管中，再先后精密吸取6ml三氯甲烷和1ml样品溶液(空白对照组以1ml空白溶剂作参比)于上述双相体系的离心管中；
(3)将上述两相体系振荡30min后，3000rpm离心10min，吸取下层的三氯甲烷层于510nm测定吸光度值；
(4)标准曲线的制备：配置一系列标准溶液，按上述方法测定吸光度值，以吸光度值A对mPEG浓度C(mg/ml)进行线性回归。
同样，将前述实施例1及其5批次平行实验结果进行接枝率测定，接枝率约为20％-25％，综合实施例2和3的结果，接枝率在15～25％。
3.mPEG-隐丹参酮水溶性的测定
(1)分别精密称取0.1g经过40℃真空干燥的丹参酮及20％投料比的mPEG-隐丹参酮于10ml的纯水中；
(2)将上述混悬液于37℃恒温下搅拌24h，达到平衡；
(3)将混悬液抽滤，滤液冷冻干燥后称重，计算mPEG-隐丹参酮在水中的溶解度。
本发明制得的mPEG-隐丹参酮的的水溶性，在水中的溶解度也由未修饰的隐丹参酮0.86mg/ml提升到18.41mg/ml，有了18倍左右的增长。
4.mPEG-隐丹参酮吸湿性和保湿性测定
准确称取干燥至恒重的mPEG-隐丹参酮及对照物样品隐丹参酮、透明质酸1.0g于表面皿中，置于相对湿度为86％干燥器(饱和硫酸铵溶液，存放于25℃恒温水浴中)吸湿84h，每隔12h称取其质量，计算吸湿率。
将上诉吸湿后的样品称重后，继续放入干燥器中密封(取出相对湿度为86％的饱和硫酸铵溶液)，放置72h，每隔12h称取其质量，并计算保湿率。
结果如图1、2显示：透明质酸(HA)以及隐丹参酮都具有一定的吸湿、保湿性能。但经过改性后的mPEG-隐丹参酮衍生物由于在分子链中引入了亲水集团，其吸湿保湿性较单纯隐丹参酮明显增强，性能直追透明质酸而明显优于甘油对照品。但由于隐丹参酮价格便宜，因此可望成为一种新型的保湿剂，用以替代价格昂贵的透明质酸，在化妆品产业中具有广泛的应用前景。
5.mPEG-隐丹参酮颗粒粒径分布和Zeta电位的测定
准确称取干燥至恒重的mPEG-隐丹参酮衍生物及对照物样品隐丹参酮，取200μl用三蒸水稀释30倍；将待测液倒入比色皿中，水浴超声分散1min，于马尔文粒度分析仪检测；用粒度分析软件检测粒径大小及多分散性；用Zeta电位分析软件检测颗粒表面Zeta电位；数据输出，结果进行分析，如表1所示。
表1mPEG-隐丹参酮粒径分布和平均Zeta电位(x±s，n＝5)
*p<0.01；**p<0.01
通过马尔文粒度分析仪检测，mPEG-隐丹参酮粒径分布在100nm～150nm之间。从表1中可以发现，隐丹参酮颗粒的粒径分别分布在130nm～190nm之间，而mPEG-隐丹参酮粒径分别分布在100nm～150nm之间。mPEG-隐丹参酮颗粒的平均粒径与未修饰的隐丹参酮相比，平均粒径相对较小，且分布范围变窄，这可能是由于在隐丹参酮侧链引入mPEG后增加了一定的空间位阻，令形成的颗粒之间不容易相互聚集造成的，因而形成粒径更小，更稳定的纳米颗粒。
Zeta电位分析结果见表1，通过比较可以发现mPEG-隐丹参酮的Zeta电位与未修饰的隐丹参酮相比，有了明显的提高，从原来的+2.66±1.22mV上升至+8.92±3.59mV之间。这可能是由于未修饰的隐丹参酮由于之间的静电作用，颗粒之间相互聚集，因而使Zeta电位降低并趋向于0。而在隐丹参酮中枝接引入mPEG后，增加了分子间的空间位阻，使颗粒之间不像未修饰前那样容易相互靠近聚集，因此总体的Zeta电位与未修饰前相比有了一定的提高，而这种提高有利用颗粒之间的分散，稳定性也相对较好。
6.mPEG-隐丹参酮衍生物HaCaT细胞毒性试验
试验方法：取对数生长期HaCaT细胞，用胰酶消化，离心(1500rpm，3min)，计数，以1×104cells/孔密度接种于96孔板，每孔100μL细胞悬液。铺板24h后，加入含有不同浓度实施例1-3、对比例1-3中mPEG化隐丹参酮衍生物的DMEM完全培养基，以DMEM完全培养基作为空白对照，每个浓度设置3个复孔，48h后每孔加入10μL CCK8，孵育2h后，以630nm为参比波长，在450nm处测定吸光度，记录测定结果，具体试验结果见表2。
式中：样品组的吸光度为AS,450nm-AS,630nm；空白组的吸光度为A0,450nm-A0,630nm。
表2不同浓度试验样品对HaCaT细胞毒性的影响对比(mean，n＝3)
由表2可知，本发明实施例1-3和对比例1-3制得的mPEG化隐丹参酮衍生物在所测定的体积分数浓度下(5-20％)，对HaCaT细胞活率均有不同程度的促进作用；10％体积分数浓度下促进作用最强，在20％体积分数浓度下，对HaCaT细胞活率相比10％体积分数浓度下促进作用略有下降。根据欧盟国家实验室化妆品毒性的判定标准，本发明所制得的mPEG化隐丹参酮衍生物在所测定的浓度范围内均对HaCaT细胞的毒性极小或无毒性。
7.mPEG-隐丹参酮衍生物HaCaT细胞增殖试验
试验方法：分别取上述实施例1-3及对比例1-3制得的mPEG化隐丹参酮衍生物用DMEM基础培养基稀释至10％(v/v)，作为受检溶液。将对数生长期的HaCaT细胞以1×105cells/mL，100μL/孔接种于96孔细胞培养板中，于37℃在5％的CO2培养箱中培养24h；弃去旧的培养基，用PBS溶液清洗一遍，然后向每孔细胞溶液中分别加入受检溶液100μL，阳性对照组加入胎牛血清(20％FBS)，空白组加入等体积DMEM基础培养基，置于37℃恒温中培养48h；每孔加入10μL CCK8溶液，于37℃恒温避光孵育2h；以630nm为参比波长，在450nm处测定吸光度，记录测定结果，具体试验结果见图3。
式中：样品组的吸光度为As,450nm-As,630nm；空白组的吸光度为A0,450nm-A0,630nm。
由图3可知，10％浓度的实施例1-3及对比例1-3制得的mPEG化隐丹参酮衍生物均对HaCaT细胞无毒；实施例1-3对HaCaT细胞增殖具有显著的促进作用，且实施例1mPEG化隐丹参酮衍生物的促增殖效果最为显著，和阳性对照组20％胎牛血清不差上下，对比例1-3对HaCaT细胞增殖效果较弱或几乎没有增殖效果，和空白组效果相当。
8.采用琼脂打孔扩散法测定mPEG-隐丹参酮衍生物抑菌活性
实验方法：在已接种(涂布均匀)菌种的培养基上打孔若干并在其中加入待测的实施例1制得的mPEG化隐丹参酮衍生物样品水溶液，质量浓度为20％，以生理盐水(NS)和同样浓度的PEG5000水溶液作为阴性对照，50μg/mL浓度的氨苄青霉素(Amp+)溶液作为阳性对照，培养一段时间后，量取抑菌圈直径作为比较抑菌活性的检测指标。所用菌株包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、表皮葡萄球菌、绿脓杆菌等。37或30℃，涂板培养24-72h后抑菌圈实验结果如下表3：
表3不同浓度试验样品对细菌、真菌抑菌圈直径(mm,x±s，n＝3)
在3个供试浓度下(20/10/5％)，6株供试菌株均表现出明显的抑制作用。真菌白色念珠菌对20％mPEG-隐丹参酮衍生物最敏感,其抑菌圈直径超过17毫米；mPEG-隐丹参酮衍生物对3种细菌金黄色葡萄球菌、大肠杆菌以及表皮葡萄球菌对比阳性药氨苄青霉素(50ng/mL)均具有明显的抗菌抑菌效果。此外，mPEG-隐丹参酮衍生物对上述菌株的抑制作用具有一定的剂量依赖性。
9.mPEG-隐丹参酮痤疮丙酸杆菌抑菌试验
试验方法：分别取上述实施例1-3及对比例1-3制得的mPEG化隐丹参酮衍生物用BHI培养基稀释至10％(v/v)，作为受检样品溶液。将对数生长期的痤疮丙酸杆菌以1×106cells/mL，100μL/孔接种于96孔细胞培养板中，再加入100μL各受试样品溶液；阳性对照组：每孔加入100μL克痤丙酮凝胶溶液，则其终浓度为100mg/mL，空白对照组：每孔加入100μLBHI培养基，密封好后，将96孔板放入厌氧盒中，放入一次性厌氧袋，于37℃恒温细菌培养箱中厌氧培养48h；然后将96孔板从培养箱中取出，观察各孔状态，阳性孔显示清亮，阴性孔显示混浊。检测96孔板的OD600，根据吸光度判断各孔体系内菌含量。
由图4可知，实施例1-3的抑菌效果明显高于对比例1-3。对比例1去掉了隐丹参酮，对比例2去掉了mPEG5000，隐丹参酮据文献报道具有一定的抗菌效果，mPEG5000抗菌效果比较弱，均和我们的实验结果非常一致；对比例3只有隐丹参酮，没有明显的抗菌效果；mPEG化隐丹参酮衍生物抑制痤疮丙酸杆菌的能力得到了显著的加强，从结果来看对痤疮丙酸杆菌起到一定的抑制作用。
10.mPEG-隐丹参酮抗亚油酸过氧化实验
试验方法：将上述实施例1-3及对比例1-3制得的mPEG化隐丹参酮衍生物以及阳性对照α-生育酚(VE，0.2mg/mL)用磷酸盐缓冲液稀释，得到10％(v/v)浓度的受检样品溶液。分别取100μL和100μL 20mM亚油酸溶液混匀，密封后于37℃避光孵育72小时，每个样品设置3个复孔；分别从每孔中取出5μL反应液，加入96孔板中，依次加入150μL 75％乙醇、10μL3.94M硫氰酸铵、30μL 0.02M氯化亚铁，然后立即将96孔板放入酶标仪中，振荡混匀反应3min，以75％乙醇为参比检测OD500。计算亚油酸氧化抑制率：亚油酸氧化抑制率(％)＝(1-(A样品﹣A参比)/(A空白对照﹣A参比)×100％，以受检样品浓度为横坐标，抑制率为纵坐标，采用数据处理软件(prism)进行数据分析，绘图并得出标准偏差。
具体测试结果见图5。由图5可知，实施例1-3及对比例2获得的产物相比空白组对亚油酸氧化能力均具有一定的抑制作用。实施例1的抑制作用最大，说明通过本发明制得的组合物具有一定的控油作用。
11.mPEG-隐丹参酮衍生物炎症因子表达检测
试验方法：分别取上述实施例1-3及对比例1-3制得的mPEG化隐丹参酮衍生物用DMEM基础培养基稀释至10％(v/v)作为受检溶液；然后进行如下操作：取生长状态良好的RAW264.7细胞以1×106cells/mL的密度，2mL/孔铺6孔板培养16h后，更换为同体积含各受检样品的培养基，1h后加入LPS诱导6h；以DMEM完全培养基作为空白对照，80μM地塞米松作为阳性对照；提取RNA，立即进行炎症因子ELISA(COX-2，IL-1α，NF-KB)检测，检测步骤参照试剂盒说明书。采用2^-ΔΔCT法进行数据处理，具体试验结果参见图6-8。
由图6-8可知，10％浓度的本发明实施例1-3及对比例1-3制得的mPEG化隐丹参酮衍生物不同程度上抑制了炎症相关基因(COX-2，IL-1α，NF-KB)的表达，且实施例1制得的mPEG化隐丹参酮衍生物的抗炎效果最为显著。可见，本发明实施例1制得的mPEG化隐丹参酮衍生物能够抑制炎症相关基因的表达，进而发挥其祛痘功效。
综合上述功效评测结果，选取实施例1所述的mPEG化隐丹参酮衍生物，按10％的添加量加入化妆品基础配方，制成具祛痘修护功效的祛痘修护精华液、祛痘修护乳液、祛痘修护爽肤水、祛痘修护面霜、祛痘修护面膜的添加物的任意一种，所制得的具祛痘修护功效的精华液化妆品，进行人体安全性及祛痘修护功效测试。
(1)人体斑贴试验
试验方法：选取志愿者40-50名，填写自愿知情同意受试书，将按照实施例1方法获得的受试样品，按10％的质量含量添加到化妆品基础配方中制成精华液，获得的精华液组成为：水81％、甘油4％、对羟基苯乙酮0.5％、1，2-己二醇0.5％、1，3-丁二醇4％、mPEG化隐丹参酮衍生物10％。然后取精华液约0.020～0.025ml涂于斑试器小室中，外用专用胶带贴敷于受试者背部或前臂曲侧，24小时后除去斑试器，如有剩余样品用纸巾轻轻擦去，分别于去除斑试器后0.5小时、24小时、48小时观察皮肤反应，按《化妆品安全技术规范》(2015)中皮肤反应分级标准记录其结果。
实验试验结果显示：人体皮肤斑贴实验结果显示，45人中0例出现1级及以上反应，说明实施例1mPEG化隐丹参酮衍生物添加到化妆品中具有令人满意的安全性。
(2)祛痘效果人脸检测实验
试验方法：挑选脸部有痤疮、红肿、皮脂分泌过度、毛囊角化、毛孔堵塞、痤疮相关菌感染、油脂降解等问题的志愿者35名，男女各半，年龄20～60岁，填写自愿知情同意受试书，然后用洁面产品清洁面部，在温度21±1℃，50±10％ RH的实验室中静坐至少20min，保持放松；研究人员对受试者进行痤疮等级评估和粉刺、丘疹、闭口数量计数，用VISIA、Corneometer CM825和TMHex仪器对受试者的受试部位进行相关D7指标的测定，计作基础值；使用按照实施例1方法获得的产品，并按照本小节(1)人体斑贴试验中的培养配制精华液，受试者连续使用7天，早晚洁面后各一次，7天后，受试者回访，工作人员检查受试者产品使用情况并回收剩余产品；受试者第二次用洁面产品清洁面部，在温度21±1℃，50±10％RH的实验室中静坐至少20min，保持放松,受试者在休息期间完成产品使用问卷；研究人员第二次对受试者进行痤疮等级评估和粉刺、丘疹、闭口数量计数，第二次操作VISIA、Corneometer CM825和TMHex仪器对受试者的受试部位进行相关D7指标的测定；分析数据，得出结论。
具体测试结果见表4。由表4可知，使用含实施例1的mPEG化隐丹参酮衍生物的产品7天后改善率可达约13％(根据产品使用后测量值均值-产品使用前基础值均值获得)。
表4痘痘处红区面积占比检测结果
通过表4的数据可见，受试者在使用产品7天后痘痘处红区面积较比使用前有了明显改善。此外，图9还提供了16号志愿者和23号志愿者0天和7天的VISIA图，显示出两位受试者在使用前后的明显变化。
总之，本发明所述的具祛痘修护功效的组合物的活性强，无毒无刺激性，具有显著的祛痘、抗氧化和抗炎效果，且能够显著促进细胞增殖；在化妆品中的应用方法，化妆品中添加适量的祛痘修护功效的组合物可修护肌肤屏障，有效解决皮脂分泌过度、毛囊角化、毛孔堵塞、痤疮相关菌感染、油脂降解等问题，达到了抑菌、消炎、控油的功效。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种丹参酮衍生物，其特征在于，是将mPEG活化酯接枝到丹参酮形成，所述mPEG活化酯是mPEG与琥珀酰亚胺琥珀酸酯形成的酯。
2.根据权利要求1所述的一种隐丹参酮衍生物，其特征在于，所述丹参酮选自隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA、二氢丹参酮I中的至少一种；和/或，所述mPEG的分子量为1000-8000，优选为5000-6000。
3.根据权利要求1或2所述的一种隐丹参酮衍生物，其特征在于，所述mPEG活化酯是甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯。
4.权利要求1～3任一项所述的隐丹参酮衍生物的制备方法，其特征在于，包括：
S1.将丹参酮在溶剂中溶解，加入mPEG活化酯和水，加热混合；
S2.将混合物进行固液分离，分离液冷冻干燥获得粗品；
S3.粗品采用所述溶剂重溶后再次进行固液分离，分离液冷冻干燥后，得到隐丹参酮衍生物。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述溶剂采用可与水混溶的有机溶剂，优选地，选自丙酮、乙腈、乙醇、乙醇和水混合溶剂中的至少一种。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，mPEG活化酯摩尔数与丹参酮摩尔数的比例为5-35％，优选为20-25％；水的加入量为所述溶剂的2-4倍。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，加热混合的控制参数为：温度50～80℃，优选60～65℃；搅拌速度500～2000rpm，优选为1000～1200rpm；混合时间5～20h，优选为10～14h。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中，固液分离方式为透析，优选地，透析袋的MWCO＝5000～8000；进一步优选地，采用两次透析，第一次透析时间为48～50h；所述混合物进行一次透析后采用所述溶剂重溶，进行第二次透析，第二次透析时间为48～50h。
9.权利要求1～3任一项所述的丹参酮衍生物在制备抗菌和/或祛痘和/或修护产品上的应用，所述产品为化妆品或者药物。
10.一种化妆品或者药物，包括权利要求1～3任一项所述的丹参酮衍生物，所述化妆品或者药物至少具有抗菌、祛痘、修护功能中的一种。
CN202311440027.8A 2023-10-31 2023-10-31 一种丹参酮衍生物及其制备方法和应用 Pending CN117487154A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202311440027.8A CN117487154A (zh) 2023-10-31 2023-10-31 一种丹参酮衍生物及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202311440027.8A CN117487154A (zh) 2023-10-31 2023-10-31 一种丹参酮衍生物及其制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117487154A true CN117487154A (zh) 2024-02-02

Family

ID=89679371

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202311440027.8A Pending CN117487154A (zh) 2023-10-31 2023-10-31 一种丹参酮衍生物及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN117487154A (zh)

Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1391889A (zh) * 2002-07-02 2003-01-22 罗厚蔚 丹参酮纳米制剂及其制备方法
CN101518510A (zh) * 2009-03-30 2009-09-02 江西中医学院 丹参酮胶束的制备方法
CN102492014A (zh) * 2011-12-21 2012-06-13 浙江大学 一种丹参酮ⅱa琥珀酸酚酯衍生物的制备方法
CN102688151A (zh) * 2012-06-05 2012-09-26 东南大学 丹参酮微乳液及其制备方法
WO2012173382A2 (ko) * 2011-06-17 2012-12-20 (주)아모레퍼시픽 탄시논ⅱａ를 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물
CN104546734A (zh) * 2014-12-19 2015-04-29 沈祥春 一种丹参酮ⅱa微球制剂的制备方法
CN105037484A (zh) * 2015-06-22 2015-11-11 石家庄学院 一种含有聚乙二醇基的丹参酮iia衍生物及其制备和应用
CN106810593A (zh) * 2016-12-26 2017-06-09 郑州大学 一种丹参酮类化合物17位酯化衍生物及其制备工艺和应用
CN107663224A (zh) * 2016-07-28 2018-02-06 西藏那菲药业有限公司 丹参酮iia衍生物及其制备方法
CN108815530A (zh) * 2018-06-28 2018-11-16 广东省中医院（广州中医药大学第二附属医院、广州中医药大学第二临床医学院、广东省中医药科学院） 一种丹参酮ⅱa的纳米载体及其应用
CN110092902A (zh) * 2016-06-22 2019-08-06 中国药科大学 一种丹参酮ⅱa高分子化合物及其制备和应用
CN113402372A (zh) * 2021-06-10 2021-09-17 广州中大南沙科技创新产业园有限公司 一种隐丹参酮衍生物及其制备方法和降脂抗肥胖的应用
CN113546011A (zh) * 2021-02-26 2021-10-26 云南柏脉生物科技有限公司昆明分公司 一种含丹参酮复合祛痘制剂及制备方法

Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1391889A (zh) * 2002-07-02 2003-01-22 罗厚蔚 丹参酮纳米制剂及其制备方法
CN101518510A (zh) * 2009-03-30 2009-09-02 江西中医学院 丹参酮胶束的制备方法
WO2012173382A2 (ko) * 2011-06-17 2012-12-20 (주)아모레퍼시픽 탄시논ⅱａ를 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물
CN102492014A (zh) * 2011-12-21 2012-06-13 浙江大学 一种丹参酮ⅱa琥珀酸酚酯衍生物的制备方法
CN102688151A (zh) * 2012-06-05 2012-09-26 东南大学 丹参酮微乳液及其制备方法
CN104546734A (zh) * 2014-12-19 2015-04-29 沈祥春 一种丹参酮ⅱa微球制剂的制备方法
CN105037484A (zh) * 2015-06-22 2015-11-11 石家庄学院 一种含有聚乙二醇基的丹参酮iia衍生物及其制备和应用
CN110092902A (zh) * 2016-06-22 2019-08-06 中国药科大学 一种丹参酮ⅱa高分子化合物及其制备和应用
CN107663224A (zh) * 2016-07-28 2018-02-06 西藏那菲药业有限公司 丹参酮iia衍生物及其制备方法
CN106810593A (zh) * 2016-12-26 2017-06-09 郑州大学 一种丹参酮类化合物17位酯化衍生物及其制备工艺和应用
CN108815530A (zh) * 2018-06-28 2018-11-16 广东省中医院（广州中医药大学第二附属医院、广州中医药大学第二临床医学院、广东省中医药科学院） 一种丹参酮ⅱa的纳米载体及其应用
CN113546011A (zh) * 2021-02-26 2021-10-26 云南柏脉生物科技有限公司昆明分公司 一种含丹参酮复合祛痘制剂及制备方法
CN113402372A (zh) * 2021-06-10 2021-09-17 广州中大南沙科技创新产业园有限公司 一种隐丹参酮衍生物及其制备方法和降脂抗肥胖的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ozkan et al. Protective effect of the grape seed proanthocyanidin extract in a rat model of contrast-induced nephropathy
RU2420265C2 (ru) Защитная и регенерирующая композиция
Allaw et al. Innovative strategies to treat skin wounds with mangiferin: Fabrication of transfersomes modified with glycols and mucin
Schrader et al. Effects of glyceryl glucoside on AQP3 expression, barrier function and hydration of human skin
US20180044734A1 (en) Composition for diagnosing skin damage caused by fine dust, and composition comprising galangin as active ingredient
Nabavi et al. Biological activities of flavonoid-rich fraction of Eryngium caucasicum Trautv.
Risaliti et al. Hydroxyethyl cellulose hydrogel for skin delivery of khellin loaded in ascosomes: Characterization, in vitro/in vivo performance and acute toxicity
Erol et al. Tazarotene-loaded in situ gels for potential management of psoriasis: biocompatibility, anti-inflammatory and analgesic effect
Huo et al. Studies on the effect of a Fupenzi glycoprotein on the fibrillation of bovine serum albumin and its antioxidant activity
Astuti et al. Anti-inflammatory activity of mangosteen (Garcinia Mangostana Linn.) rind extract nanoemulgel and gel dosage forms
Šentjurc et al. Antioxidant activity of Sempervivum tectorum and its components
Gao et al. Various fractions of alcoholic extracts from dendrobium nobile functionalized antioxidation and antiaging in D-Galactose-induced aging mice
Kanlayavattanakul et al. Preparation and efficacy assessment of malva nut polysaccharide for skin hydrating products
WO2014170495A2 (fr) Utilisation de biomarqueurs de la barrière pour l&#39;évaluation de l&#39;efficacité d&#39;actifs
EP3386596B1 (en) Topical skin care compositions comprising myrsine africana extracts
Pallavi et al. Comparative evaluation of anti-biofilm and anti-adherence potential of plant extracts against Streptococcus mutans: A therapeutic approach for oral health
Cheng et al. Acid-base transformative HADLA micelles alleviate colitis by restoring adaptive immunity and gut microbiome
CN117487154A (zh) 一种丹参酮衍生物及其制备方法和应用
EP3108935A1 (en) Composition comprising scirpusin a and scirpusin b and anti-obesity potential thereof
JPH07126143A (ja) 化粧料
Samadi et al. Long‐term effects of two 24‐hour moisturizing products on skin barrier structure and function: A biometric and molecular study
JP3235919B2 (ja) 化粧料
CN112791038A (zh) 一种用于抗敏修复的化妆品组合物及其制备方法
Saraiva et al. Impact of Portuguese propolis on keratinocyte proliferation, migration and ROS protection: Significance for applications in skin products
Patil et al. Development and evaluation of transdermal gel of acyclovir using Nerolidol as penetration enhancer

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination