CN1681392A - 具有木聚糖分解活性的家族8酶在焙烤中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明描述了通过加入面包或面团改良剂来改良面团和/或焙烤制品特性的方法，所述改良剂含有属于糖苷水解酶家族8的具有木聚糖分解活性的酶。优选的酶是来自Pseudoal teromonas haloplanktis嗜冷木聚糖酶和来自Bacillus halodurans C－125的嗜温木聚糖酶Y。

Description

具有木聚糖分解活性的家族8酶在焙烤中的应用
发明领域
本发明涉及改良焙烤产品的方法和组合物，包括至少一种来自糖苷水解酶家族8的具有木聚糖分解活性的酶。本发明实施方案中所述的具有木聚糖分解活性的酶的特征还在于水解过程中构型转换存在的事实。本发明特定实施方案中所述的具有木聚糖分解活性的酶是来自Pseudoalteromonas haloplanktis的嗜冷木聚糖酶或来自Bacillushalodurans的嗜温木聚糖酶。
发明背景
木聚糖是形成存在于植物生物质中半纤维素主要部分的杂多糖。这些多糖的主链是β1-4连接的吡喃木糖残基链。许多不同的侧基可以连接至这些残基上，如乙酰基，阿拉伯糖和葡糖醛酸(glucuronosyl)残基。酚类化合物如阿魏酸或羟基肉桂酸也通过酯结合参与例如木聚糖链交联中或木聚糖与木质素链之间的连接中。
内切木聚糖酶(或内β-1，4-木聚糖酶)特异性水解半纤维素的主链。有时，侧基通过位阻可能掩蔽主链。不同木聚糖酶的活性已经得到了描述。它们对其底物的特异性互不相同。一些对不溶的阿拉伯木聚糖更有活性。产生的低聚物长度也依赖于所考虑的木聚糖酶类型。
基于序列同源性、结构和机械特征，已经将糖苷水解酶(以前称为纤维素酶家族D)分类为91个家族( http：//afmb.cnrs-mrs.fr/CAZY/)。因为蛋白质的折叠比其序列更保守，一些家族可以分组为“系(clans)”(Henrissat B.1991，Biochem.J.Vol.280，p 309)。内β-1，4-木聚糖酶通常分类于家族10(以前家族F)和11(以前家族G)，并发现其pI和分子量常常具有逆相关。家族10木聚糖酶(EXs10)较大，较复杂，而家族11木聚糖酶(EXs11)较小。况且两个家族在结构和催化特性上存在显著差异。EXs10呈现为(α/β)8桶折叠，具有约40％的α螺旋结构并属于GH-A系(Dominguez等，1995，Nat.Struct.Biol.Vol.2，p569)，而EXs11呈现为β-胶折叠构型，具有约3-5％的α螺旋结构并属于GH-C系(Trrnen等，1994，EMBO J.Vol.13，p2498)。和EXs11相比较，EXs10具有较小的底物结合位点和较低的底物特异性，常常具有内切葡聚糖酶活性并产生较小的寡聚糖，EXs11对未取代的木聚糖具有较高的亲和力(Biely等，1997，J.Biotechnol.Vol.57，p151)。迄今鉴定的两个家族的所有木聚糖酶水解后都保持糖苷氧的端基异构构型，其中两个谷氨酸作为催化残余物(Jeffries，1997，Curr.Opin.Biotechnol.Vol.7，p337)。
木聚糖酶用于各种工业领域中如纸浆、造纸、饲料和焙烤工业。其他应用在于果汁和啤酒部分。木聚糖酶还可以用于小麦分离过程中。观察到的技术效果，尤其是，提高了纸浆的漂白率、降低了饲料的粘度或改变了面团的特性。
许多年来木聚糖酶(也称为半纤维素酶或戊聚糖酶)在焙烤中的使用是公知的。这些改良面团的酶可以提高面团的机械加工性和稳定性以及烘烤膨胀和面包瓤(crumb)结构。酶的其他作用是较大的面包体积和较软的面包瓤。
木聚糖酶在面包制作中的作用机理仍然没有得到清楚地阐明。小麦粉中含有约3至4％的戊聚糖。这些戊聚糖可以吸收大量的水(高达30％)。该水的吸收有助于面团的特性以及成品的质量。通过戊聚糖酶将戊聚糖部分水解成水溶性的短链低聚糖，增加了水结合容量。戊聚糖和面粉的谷蛋白部分存在强烈相互作用形成网状物(network)。戊聚糖酶可以帮助松弛这些强硬的网状物并因此使酵母形成的二氧化碳来更好地膨胀面团。
许多类型的半纤维素酶制剂已经用作焙烤活性配料且是商业上可获得的。它们是使用各种微生物作为酶源通过微生物发酵来制得。这些酶中的一些也可以通过基因修饰微生物来生产。所有证明的木聚糖酶的使用对于焙烤产品的体积度具有正面效果，涉及如此前所定义的属于糖苷水解酶家族10或家族11的木聚糖酶。
用于焙烤的木聚糖酶实例是来自枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)和黑曲霉(Aspergillus niger)的木聚糖酶。
存在多种评价酶制剂中木聚糖酶活性的方法。这样的木聚糖酶活性测定方法的实例是木聚糖中还原糖释放的测定(Miller G.L.1959，Anal.Chem.Vol.31，p426)或修饰底物中有色化合物释放的测定(例如来自Megazyme的AzoWAX或Xylazyme AX)。然而，没有发现各种酶制剂中木聚糖分解活性和焙烤效果之间的直接相关性。对于单个酶一定程度上可以观察到剂量相关的结果，但是相同量的两个不同来源的木聚糖酶在面团或面包中没有给出相同的结果。数个原因可以来解释这一点：底物特异性的差别，最佳温度和pH的差别，...
最值得关注的是发展新的酶制剂，如面包改良剂组合物或试剂，具有新的或改良的特性。这些特性之一是木聚糖部分尽可能地小(根据在焙烤中获得特别的结果所需酶的重量)。
来自南极地区细菌Pseudoalteromonas haloplanktis的木聚糖酶最近已经得到了描述(Collins，T.等2002.A novel Family 8xylanase：functional and physico-chemical characterisation(新的家族8木聚糖酶：功能和物理化学性能的描述)J.Biol.Chem.Vol.277-38，p35133；Collins，T.等.2003，Activity，stability andflexibility in glycosidases adapted to extreme thermalenvironments(适应极端热环境糖苷酶的活性、稳定性和适应性)J.Mol.Biol.Vol.328，p419；Van Petegem F.等2002.Crystallization and preliminary X-ray analysis of a xylanasefrom the psychrophile Pseudoalteromonas haloplanktis(来自嗜冷菌Pseudoalteromonas haloplanktis的木聚糖酶结晶和初步的X射线分析)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr.Vol.58(Pt9)，p1494-6)。该酶是典型的嗜冷酶并在低温呈现出高催化活性。其和家族10或11木聚糖酶不是同源，但是和糖苷水解酶家族8(以前称为家族D)成员具有20至30％的同一性，该家族主要包括内切葡聚糖酶也包括地衣多糖酶和脱乙酰壳多糖酶。此外，使用InterPRO扫描研究程序(InterPro Scan search program)(Zdobnov和Apweiler，2001，Bioinformatics Vol.17，p847)对印痕(PRINTS)的指纹图谱扫描(FingerPRINTScan)显示了所分析20个家族8酶的分离序列中含有严格保守的糖基水解酶家族8指纹图谱和家族8残基。
和EXs10和EXs11相反，该家族8木聚糖酶(Exs8)具有高pH和高分子量。结构和催化特性不同于EXs10也不同于EXs11。Exs8呈现(α/α)6桶折叠，具有13个α螺旋和13个β链，并属于GH-M系(Van Petegem等，2003，The structure of a cold-adapted family8 xylanase at 1.3 A resolution(冷适应家族8木聚糖酶在1.3A分辨率的结构)。Structural adaptations to cold andinvestigation of the active site(对冷的结构适应和活性位点的研究).J.Biol.Chem.Vol.278(9)，p7531-9)。这些酶没有内切葡聚糖酶、脱乙酰壳多糖酶或地衣多糖酶活性并表现出和EXs11功能上相似，对长链木低聚糖更有活性。
与其他已知的保持构型的EXs10和EXs11相比，家族8糖水解酶(Fierobe等，1993.Eur.J.Biochem.Vol.217，p557；http：//afmb.cnrs-mrs.fr/CAZY/)趋向于水解水解后具有糖苷氧端基异构构型的转换的底物，其中一个谷氨酸和一个天冬氨酸作为催化残基。这已经得到了显示例如来自Pseudoalteromonas haloplanktis的嗜冷木聚糖酶(Van Petegem等，2003，J.Biol.Chem.，Vol.278(9)，p7531-9；Collins，T.等2002.A novel family 8 xylanase：functional and physico-chemical characterization(新的家族8木聚糖酶：功能和物理化学性能的描述)。J.Biol.Chem.Vol.277(38)，p35133)。属于糖苷水解酶家族8的其它木聚糖酶已经得到描述(Yoon，K-H.，1998，Molecular cloning of a Bacillus sp.KK-1 xylanasegene and characterization of the gene product(Bacillus sp.KK-1木聚糖酶基因的分子克隆和基因产物的特征)。Biochem.Mol.Biol.International.45(2)，p.337；Bacillus halodurans C-125木聚糖酶Y GenBank/GenPeptTM登录号BAB05824)。这些木聚糖酶显示了它们以及和如Collins等所描述的Pseudoalteromonas haloplanktis木聚糖酶(2002，参见以上)之间的序列同源性。
属于糖苷水解酶家族8的酶目录在( http：//afmb.cnrs-mrs.fr/CAZY/)上定时更新。
发明目的
本发明的目的是提供新的酶制剂如面包改良剂组合物。
本发明进一步的目的是提供通过使用这样的酶制剂获得改良焙烤制品的新方法。
发明概述
令人惊讶地发现当在面团混合过程中将其加入时，具有木聚糖分解活性并属于糖苷水解酶家族8的酶对面团特性或焙烤制品特性具有正面效果。
还令人惊讶地发现当在面团混合过程中将其加入时，具有木聚糖酶活性并水解伴随端基异构构型转换的酶对面团特性或焙烤制品特性具有正面效果。
进一步令人惊讶地发现上述酶的使用增大了面包的体积。
还发现一些这样具有木聚糖分解活性来自糖苷水解酶家族8 EXs8的酶的使用，与目前已知木聚糖酶相比较可以使用较少的酶达到相同的面团特性或焙烤制品特性。
如上所述本发明特定实施方案涉及来自糖苷水解酶家族8具有木聚糖分解活性的酶及其在焙烤工业中的应用。
本发明特别的实施方案涉及来自Pseudoalteromonashaloplanktis的嗜冷家族8木聚糖酶和来自Bacillus halodurans的嗜温家族8木聚糖酶Y。这些酶是水解伴随端基异构构型转换的木聚糖酶。
优选的木聚糖酶是那些从Pseudoalteromonas haloplanktisTAH 3a和Bacillus halodurans C-125菌株获得的或那些从合适宿主中表达的相应基因获得的。
优选地，在面团混合过程中将包含至少一种本发明酶的面包改良组合物加入。
所述的面包改良组合物可以进一步含有选自其它酶、乳化剂、氧化剂、奶粉、脂肪、糖、氨基酸、盐、蛋白质(谷蛋白、纤维素结合位点)或其混合物的其它面包改良剂。
所述其它酶可以选自α-淀粉酶、β-淀粉酶、麦芽糖淀粉酶、其它木聚糖酶、蛋白酶、葡糖氧化酶、氧化还原酶、葡聚糖酶、纤维素酶、谷氨酰胺转移酶、异构酶、脂肪酶、磷脂酶、果胶酶或其混合物。
所述α-淀粉酶优选是从米曲霉(Aspergillus oryzae)获得的。
根据本发明的具有木聚糖分解活性的酶可以以细胞提取物、无细胞提取物或纯化蛋白的形式用于所述面包改良组合物中。
本发明的酶可以和其它成分混合并以干粉或颗粒的形式，尤其是无粉尘的颗粒，或以液体的形式来使用，优选和一种或多种稳定剂如多元醇、糖、有机酸或糖醇混合。
本发明的另一方面涉及当使用本发明酶时获得的或可获得的焙烤制品。
本发明的另一方面涉及含有至少一种本发明酶的面包改良组合物。
仍然本发明的另一方面涉及提高焙烤制品块体积的方法，包括在所述焙烤制品面团混合过程中，将足够量的选自糖苷水解酶家族8的木聚糖酶的具有木聚糖分解活性的酶或者水解伴随端基异构构型转换具有木聚糖分解活性的酶加入的步骤。在面团或焙烤制品中可以使用上述酶的任何组合或混合物用于上述任何目的。
附图简述
图1表示了Pseudoalteromonas haloplanktis木聚糖酶TAH3a的量的增加对比利时硬卷(Belgium hard rolls)体积的影响。
图2显示了各种木聚糖酶样品SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(酶的装载量与焙烤中的使用量成比例，所有酶相同比例系数)。
泳道1：分子量标记
泳道2-5：分别处理0.333kg(2，4)和0.166kg(3，5)小麦粉所需的Pseudoalteromonas haloplanktis木聚糖酶(2-3)和Bacillushalodurans木聚糖酶(4-5)的量。
图3A和B表示了Pseudoalteromonas haloplanktis(A)的木聚糖酶基因的核苷酸序列和相应木聚糖酶(B)。
图4表示了来自Bacillus halodurans菌株C-125的木聚糖酶Y。
通过参考附图将在以下的实施例和实施方案中进一步详细描述本发明。特定实施方案和实施例不是以任何方式来限制所要求的本发明范围。
发明详述
本发明尤其涉及具有木聚糖分解活性的家族8酶用于焙烤中来提高特别是块体积。所述酶可以具有其它活性，但是必须是木聚糖分解活性以致该酶适于本发明目的。
A.根据本发明的一些优选酶的制备
来自糖苷水解酶家族8的具有木聚糖分解活性的酶可以从多种来源获得(参见例如 http：//afmb.cnrs-mrs.fr/CAZY/用于综述)。一些酶已经在科学文献上得到了描述，且因此可以使用相应出版物中所描述的技术来获得。以下，将较详细地描述根据本发明的一些优选酶的制备。
A.1.来自Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a的木聚糖酶
来自Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a的木聚糖酶已经得到Collins T.等的描述(2002.A novel Family 8 xylanase：functional and physico-chemical characterisation(新的家族8木聚糖酶：功能和物理化学性能的描述)。J.Biol.Chem.Vol.277(38)，p35133)。Collins等描述了通过带有克隆于表达质粒中Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a木聚糖酶基因的大肠杆菌(Escherichia coli)重组菌株的液体培养物来制备。
Pseudoalteromonas haloplanktis木聚糖酶基因的核苷酸序列是可得的，以及相应的氨基酸序列也是可得的(EMBL登录号AJ427921，引入序列作为参考，图3A-B，SEQ ID NO：6-7)。该酶具有46000Da的分子量，约9.5的等电点，35℃的最佳温度和5.3至8的最佳pH。其是真木聚糖酶，延长温育后木聚糖水解的主要反应产物是木丙糖和木四糖。
通过首先在适于表达酶的培养基中培养野生型或重组菌株，然后是一个或数个纯化步骤如但不限于离心、细胞分裂、微滤、超滤、沉淀、液相色谱、冻干，...可以获得该酶的粗制或纯化制剂。
A.2.来自Bacillus halodurans C-125的木聚糖酶Y
来自Bacillus halodurans菌株C-125(ATCCCBAA-125)的家族8木聚糖酶Y的序列是可得的，如GenBank/GenPeptTM登录号BAB05824(引入序列作为参考，图4，SEQ ID NO：8)。作为Bacillushalodurans菌株C-125全部基因组序列的部分，相应的DNA序列是可得的(登录号AP001514，引入序列作为参考)。
通过首先在适于表达木聚糖酶的培养基中/上培养菌株，然后是一个或数个纯化步骤如但不限于离心、细胞分裂、微滤、超滤、沉淀、液相色谱、冻干，...可以获得来自Bacillus halodurans C-125的木聚糖酶。
或者，通过首先使用公知技术如PCR扩增、和载体连接并转化微生物宿主来克隆相应基因可以获得来自Bacillus halodurans C-125的木聚糖酶。该步骤以后，木聚糖酶可以优选在合适的宿主中表达，通过将基因放置在适当控制序列如但不限制于启动子和终止子的控制下并将该DNA构建体插入允许该基因表达的细胞中。
本发明特定实施方案中，木聚糖酶基因将在所述细胞中超表达。
然而，本发明不受限于上述酶而是延及具有木聚糖分解活性属于糖苷水解酶家族8的其它酶。这些酶是通过微生物和非微生物活细胞如但不限于植物或动物来生产的。酶可以从活细胞培养物和/或样品中直接获得，或者可以通过重组菌株或宿主细胞来生产。编码目的酶的基因可以是合成基因。
“重组菌株”或通过“重组宿主细胞”是指具有引入所述具有木聚糖分解活性属于糖苷水解酶家族8酶的核苷酸序列的菌株。
优选，重组宿主细胞选自微生物界，优选细菌或真菌，包括酵母，以及更优选为芽孢杆菌(Bacillus)。
优选，所述重组菌株能够过表达所述核苷酸序列并优选允许所述木聚糖酶高产量。
根据本发明生产的具有木聚糖分解活性的酶可以直接用于本发明所述的目的和/或可以经过一个或多个纯化或(更多的)培养步骤。本发明特别实施方案中，酶可以以纯化形式使用。
用于根据本发明的酶的可能制备方法包括特别是从摇瓶或发酵罐中的重组或非重组微生物培养物中制备或纯化，从固定化培养物中制备或纯化，从活细胞(植物，...)中提取和/或纯化。
B.酶的应用
根据本发明具有木聚糖分解活性的纯化或非纯化酶尤其适于用作面包改良剂。面包改良剂是可以改善或提高结构、香味、保鲜效果、柔软度、保存时面包瓤柔软度、新鲜度、面团机械加工性、成品体积的产品。优选，所述具有木聚糖分解活性的酶改善面团的加工和/或提高了焙烤成品的体积度。“焙烤产品”包括从面团制得的任何产品，尤其是酵母发酵的焙烤产品。从任何类型的面粉或粗粉(meal)(例如，基于小麦、黑麦、大麦、燕麦，或玉米)获得面团。优选，面团是由小麦或包括小麦的混合物制得的。
本发明的一方面是显示属于家族8具有木聚糖分解活性的酶可以有利地用于面包改良剂配方中。
本发明进一步的实施方案中，显示了属于糖苷水解酶家族8的具有木聚糖分解活性的酶增大了焙烤产品的块体积。
本发明进一步的实施方案中，显示了具有木聚糖分解活性的家族8酶在焙烤中获得特别效果时所需量显著低于使用商业上可获得酶时通常使用的量。
更进一方面，本发明涉及所述具有木聚糖分解活性的酶和其它酶一起的加成效果，尤其是和α-淀粉酶，优选来自米曲霉(Aspergillusoryzae)的α-淀粉酶。所述具有木聚糖分解活性的酶可以和其它如但不限于酶、乳化剂、氧化剂、奶粉、脂肪、糖、氨基酸、盐、蛋白质(谷蛋白、纤维素结合位点)的面包改良剂组合使用，这样的改良剂是本领域普通技术人员公知的。酶的实例包括但不限于α-淀粉酶、β-淀粉酶、麦芽糖淀粉酶、木聚糖酶、蛋白酶、葡糖氧化酶、氧化还原酶、葡聚糖酶、纤维素酶、谷氨酰胺转移酶、异构酶、脂肪酶、磷脂酶、果胶酶，等等。
根据本发明具有木聚糖分解活性的酶可以在数种形式下使用。表达酶的细胞，如酵母、真菌、Archea细菌和细菌，可以直接用于加工中。所述酶可以以细胞提取物、无细胞提取物(即，已经接受一个或多个分裂、离心和/或提取步骤的宿主细胞部分)或以纯化蛋白来使用。任何上述形式可以和上述形式下的另一个酶组合使用。根据建立的方法，所述的细胞、细胞提取物、无细胞提取物或酶可以和不同的成分混合，例如，以干粉或颗粒的形式，尤其是无粉尘的颗粒，以液体的形式，例如和稳定剂如多元醇、糖、有机酸、糖醇混合。
实施例
实施例1：Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a木聚糖酶的制备
如所述的(Collins等，2002，参见以上)从含有相应基因DNA载体转化的重组大肠杆菌(Escherichia coli)菌株的液体培养物中获得Pseudoalteromonas haloplanktis的木聚糖酶。
实施例2：来自Bacillus halodurans C-125的木聚糖酶的制备细菌菌株和培养条件
Bacillus halodurans C-125(ATCC BAA-125)在添加10g/l桦木木聚糖(Sigma)碱性芽孢杆菌培养基(10g/l葡萄糖，5g/l酵母提取物(Difco)，10g/l细菌用胰蛋白胨(Difco)，1g/l K2HPO4，0.2g/lMgSO4，10g/l Na2CO3)中在37℃培养72小时。在18000g 4℃离心1小时后，将上清液通过用80％的硫酸胺沉淀来浓缩并在20mM pH8.0的MOPS中重悬浮。这部分表示了将用于焙烤试验的粗制提取部分。
木聚糖酶Y基因的克隆和表达
从上述改良碱性芽孢杆菌培养基中37℃培养16小时的培养物中用Wizard基因组DNA纯化试剂盒(Genomic DNA Purification kit)(Promega)提取并纯化基因组DNA。基于公开的序列(GenBank/GenPeptTM登录号AP001514)，使用VENT聚合酶(BiolabsInc，Bervely，MA，USA)和正义引物5’-GGG CATATGAAGAAAACGACAGAAGGTG-3’，SEQ ID NO：1，含有Nde I位点(下滑线的)以及反义引物5’-GG CTCGAGCTAGTGTTCCTCTTCTTG-3’，SEQ ID NO：2，含有Xho I位点(下滑线的)和终止密码子(斜体)来进行全部木聚糖酶Y基因的PCR扩增。
3分钟95℃初始变性后，使用Progene仪器(Techne Cambridge，UK)进行25个循环扩增。每个循环包括95℃变性1分钟，52℃杂交30秒，以及72℃延伸1.5分钟。
使用提供者推荐的程序，将PCR产物克隆进PCRScript Amp SK(+)载体中(Stratagene)，并用来转化Epicurian Coli XL10-GoldKan超感受态细胞。蓝白选择选择了载有PCR片段的白色克隆。将纯化的质粒制剂(Nucleospin质粒，Macherey-Nagel)在ALF DNA测序仪上测序(Pharmacia Biotech)。使用通用引物T7和RP以及以下的引物进行插入片段的测序。
5’-GTGCGGACTGAAGGAATGTC-3’，SEQ ID NO：3
5’-GTATGGTCCATCAACAGAGG-3’，SEQ ID NO：4
5’-GATGGCACTAAAAACTCCTGG-3’.SEQ ID NO：5
所得的序列和可以从GenBank/genPeptTM登录号AP001514检索到的公开序列相同。
因此然后将克隆进PCRScript Amp SK(+)的木聚糖酶Y基因用NdeI和Xho I来切除，并连接进入pET 22b(+)克隆载体中(Novagen)。将所得到的重组质粒转化大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)细胞(Stratagene)。
来自Bacillus halodurans C-125的重组家族8木聚糖酶Y的生产
将15ml预培养(37℃)5小时的带有木聚糖酶基因的大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)细胞在10000g离心1分钟，将沉淀重悬浮于3升摇瓶中的900ml含有200μg/ml氨苄青霉素的Terrific培养液中(12g/l细菌用胰蛋白胨(Difco)，24g/l酵母提取物(Difco)，4ml/l甘油，12.54g/l K2HPO4，2.31g/l KH2PO4)。将培养物在37℃250rpm培养直至550nm吸收达到3-4，于是用1mM异丙基-1-硫-β-吡喃半乳糖苷诱导酶表达。接着进一步在37℃培养15小时后，通过在18000g 4℃离心30分钟来收集细胞，重悬浮于含有10mM NaCl的50mM BICINE中，在预冷的细胞破碎器(Constant Systems Ltd.，Warwick，UK)中以28Kpsi破碎并在40,000g离心30分钟。
重组Bacillus halodurans C-125家族8木聚糖酶的生产。
通过10,000g离心1分钟来收集预培养(37℃)5小时的带有木聚糖酶基因的大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)细胞并用来接种5升(每升培养物15ml预培养物)含有200μg/ml氨卡青霉素的Terrific培养液(ng/l细菌用胰蛋白胨(Difco)，24g/l酵母提取物(Difco)，4ml/l甘油，12.54g/l K2HPO4，2.31g/l KH2PO4)。将培养物在37℃ 250rpm培养直至550nm吸收达到3-4，于是用1mM异丙基-1-硫-β-吡喃半乳糖苷诱导酶表达。接着进一步在37℃培养4小时后通过在18000g 4℃离心20分钟来收集细胞，重悬浮于20mM的MOPS(Sigma)中，在预冷的细胞破碎器(Constant Systems Ltd.)中以28Kpsi破碎并在40,000g离心30分钟。通过用0.2％硫酸鱼精蛋白(Calbiochem)处理并在40,000g离心30分钟来移出染色体DNA。然后加入25单位的benzonase(Merck，Darmstadt，Germany)并将溶液用于焙烤试验中。
实施例3：Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a木聚糖酶在比利 时硬卷焙烤中的效果
进行焙烤试验来证明Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a木聚糖酶在焙烤中的正面效果。通过与不含有该酶的对照相比较的面包体积增大来评价正面效果。
在比利时每天大量生产的比利时硬卷中测试木聚糖酶。所述的程序是同行面包师公知的且使用来自其他供应商的设备可以获得相同结果对本领域技术人员是显而易见的。
所用的配料成分列于以下的表1中：
                                             表1
配料成分(g) 配方1 配方2 配方3 配方4 配方5
面粉(Surbi-Molens van Deinze) 1500 1500 1500 1500 1500
水 915 915 915 915 915
鲜酵母(Bruggeman-Belgium) 90 90 90 90 90
氯化钠 30 30 30 30 30
Multec Data HP 20(Beldem-Belgium) 3.9 3.9 3.9 3.9 3.9
抗坏血酸 0.12 0.12 0.12 0.12 0.12
Pseudoalter.Haloplanktis木聚糖酶(单位(1)/100kg面粉) 0 25 50 100 200
(1)：一单位Pseudoalteromonas.Haloplanktis木聚糖酶定义为在30℃和pH 4.5从桦木木聚糖释放1μmole还原糖(表示为木糖)所需的酶量(Nelson-Somogyi方法)。
将配料成分在Diosna SP24搅拌机中低速混合2分钟和高速混合8分钟。形成的面团以及静置和醒发温度都是25℃。在25℃静置15分钟后，将面团手工再加工并再静置10分钟。然后，制成2kg面团块并醒发10分钟.将2kg面团块使用Eberhardt Optimat来分割并定制。获得66gr.左右的面团块。再5分钟静置后，将生面团通过压制切开并接受最后的醒发阶段70分钟。在用蒸汽MIWE CondoTM烤炉中230℃焙烤面团块(Michael Wenz-Arnstein-Germany)。使用常用的油菜籽位移方法(rapeseed displacement method)来测量6个卷的体积。
结果列于以下表2中：
        表2
 木聚糖酶单位  卷体积(ml)
 0  2325
 25  2675
 50  2875
 100  2950
 200  3100
木聚糖酶效果的图示显示于图1中。
这些结果显示了Pseudoalteromonas haloplanktis的木聚糖酶对面包体积具有正面效果。
实施例4：焙烤中木聚糖酶使用量的比较
获得实施例3中所述的比利时硬卷体积试验相同效果所需的木聚糖酶相对量已经通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳得到比较。
测试的木聚糖酶和各自在焙烤中的使用量如下：
-来自Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a的木聚糖酶(30 P.Haloplanktis单位/100kg面粉)
-来自枯草杆菌(Bacillus subtilis)的木聚糖酶(Belase B210(BELDEM S.A.，Belgium)-3g/100kg面粉)。
将对应于处理0.333kg和0.166kg面粉并导致相同体积增加所需量的酶，上样于12％Tris-HCl的用于SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的预制凝胶中“Ready Gel”(BIO-RAD，Hercules，CA，USA)，并根据制造商的程序在“Mini Protean II”(BIO-RAD)仪器上运行。使用标准规程用Coomassie蓝染色蛋白质。
染色凝胶的图像显示于图2中。
从图像中可以看出在焙烤中所需的Pseudoalteromonashaloplanktis TAH3a的木聚糖酶的量显著低于其他。
实施例5：Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a大聚糖酶在阿 根廷面包中的效果
以实施例3中使用的另一个配方进行焙烤试验来证明家族8木聚糖酶在焙烤中的正面效果，如在阿根廷面包中。与不含有该酶的对照相比较，通过面包体积的增大和切开面包表面的宽度来评价正面效果。
本发明的酶在需要长时间醒发(20℃17小时)的典型长面包的阿根廷面包中进行测试。所述程序是同行面包师公知的，且使用来自其他供应商的设备可以获得相同结果对本领域普通技术人员是显而易见的。
所用的配料成分列于以下的表3中：
                                         表3
配料成分(g) 配方1 配方2 配方3 配方4
面粉(Surbi-Molens van Deinze-Belgium) 1500 1500 1500 1500
水 810 810 810 810
新鲜酵母(Bruggeman-Belgium) 5.25 5.25 5.25 5.25
氯化钠 30 30 30 30
标准改良剂(1)(Puratos-Belgium) 22.5 22.5 22.5 22.5
Bel’ase B210(Beldem-Belgium)(210单位/g) 0 0.15 0 0
纯化的Pseudoalteromonas.haloplanktis TAH3a木聚糖酶(单位(2)/100kg面粉) 0 0 25 50
(1)使用的标准改良剂包括：真菌α淀粉酶(Fungamyl 75.000，Novozymes)1g/100kg面粉，维生素C 10g，偶氮甲酰胺2g/100kg面粉。这是标准改良剂的实例。添加的绝对和相对量可以根据小麦粉和加工的局部调整而改变。
(2)一单位木聚糖酶定义为在30℃和pH 4.5从桦木木聚糖释放1μmole还原糖(表示为木糖)所需的酶量(Nelson-Somogyi方法)。
将配料成分在Diosna SP24搅拌机中低速混合2分钟和高速混合7分钟。静置过程中最终的面团的温度为25℃，而在醒发过程中为20℃。25℃静置20分钟后，将面团用手工再加工并在20℃醒发过程中静置17小时。然后，制成2kg面团块并醒发10分钟。使用BertrandR8/L8(+/-30cm)来分割和定制0.35kg的面团块，并接受最后的醒发阶段17小时。在用蒸汽的MIWE CondoTM烤炉中210℃焙烤面团块30分钟(Michael Wenz-Arnstein-Germany)。使用常用的油菜籽位移方法来测量阿根廷面包的体积。
结果列于以下的表4中：
                                 表4
配方  样品  木聚糖酶单位  面包体积(ml)  切开宽度(mm)
1  0  1675  19
2  Bel’aseB210  2100  1900  27
3  TAH3a  25  1900  34
4  TAH3a  50  1925  30
这些结果表明家族8木聚糖酶对较低温(即，20℃)长时间醒发制成的面包具有正面效果。在此所用商业酶(Bel’ase B210，参见以上)的量比实施例3中所述比利时硬卷所需的最佳量要高出3倍，而家族8木聚糖酶所需的量保持未改变。还存在最佳化切开宽度所需的酶浓度和最佳化体积提高所需酶浓度之间的差异。
实施例6：本发明各种酶对其他酶在焙烤中的效果比较
进行焙烤试验来证明属于糖苷水解酶家族8具有木聚糖分解活性的各种酶在焙烤中的正面效果。和不含有这些酶的对照以及和商业酶制剂(Bel’ase B210，参见以上)相比较，通过面包体积增加来评价正面效果。
如实施例1中所述制备和纯化Pseudoalteromonas.haloplanktis TAH3a木聚糖酶。如实施例2所述从重组大肠杆菌(Escherichia coli)菌株来制备Bacillus halodurans C-125木聚糖酶Y。
用来评价两个酶性能的方法是100g面粉制备的面团组成的小焙烤试验。
所述的程序对本领域普通技术人员是公知的，且使用另一个供应商的设备可以获得相同效果是显而易见的。
所用的配料成分列于以下的表5中
                                              表5
配料成分(g) 配方1 配方2 配方3 配方4 配方5 配方6 配方7
面粉(Surbi-Molens van Deinze) 100 100 100 100 100 100 100
水 57 57 57 57 57 57 57
鲜酵母(Bruggeman-Belgium) 5 5 5 5 5 5 5
氯化钠 2 2 2 2 2 2 2
葡萄糖 2 2 2 2 2 2 2
抗坏血酸(g/100kg面粉) 4 4 4 4 4 4 4
Bel’ase B210(Beldem-Belgium)(单位(1)/100kg面粉) 0 630 1050 0 0 0 0
纯化的Pseudoalteromonashaloplanktis TAH3a木聚糖酶(单位(1)/100kg面粉) 0 0 0 25 50 0 0
Bacillus halodurans C-125重组木聚糖酶(单位(1)/100kg面粉) 0 0 0 0 0 6000 12000
(1)一单位木聚糖酶定义为在30℃和pH 4.5从桦木木聚糖释放1μmole还原糖(表示为木糖)所需的酶量(Nelson-Somogyi方法)。
将配料在National搅拌机中混合4.5分钟。称重150g面团块并在塑料盒中25℃静置20分钟。将面团手工再加工并再静置20分钟。最终的醒发时间是36℃50分钟。然后将面团块在225℃焙烤20分钟。使用常用的油菜籽位移方法来测量面包体积。
结果列于以下的表6中：
                         表6
  配方   样品   木聚糖酶单位/100kg面粉   面包体积(ml)
  1   0   650
  2   Bel’ase B210   630   680
  3   Bel’ase B210   1050   705
  4   TAH3a   25   690
  5   TAH3a   50   760
  6   C-125   6000   725
  7   C-125   12000   725
这些结果显示了本发明酶的正面效果不受限于Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a木聚糖酶。其他属于糖苷水解酶家族8具有木聚糖分解活性的酶也能够提高面包的特性(在此证明的为Bacillus halodurans C-125木聚糖酶，其他结果未显示)。
                                序列表
<110>PURATOS N.V.
<120>具有木聚糖分解活性的家族8酶在焙烤中的应用
<130>P.PURA.19/WO
<160>8
<170>PatentIn version 3.2
<210>1
<211>28
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>正义引物
<400>1
gggcatatga agaaaacgac agaaggtg                                        28
<210>2
<211>26
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>反义引物
<400>2
ggctcgagct agtgttcctc  ttcttg                                         26
<210>3
<211>20
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>测序引物
<400>3
gtgcggactg aaggaatgtc                                                 20
<210>4
<211>20
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>测序引物
<400>4
gtatggtcca tcaacagagg                                                 20
<210>5
<211>21
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>测序引物
<400>5
gatggcacta aaaactcctg g                                               21
<210>6
<211>1281
<212>DNA
<213>Pseudoalteromonas haloplanktis
<220>
<221>misc_特征
<223>Pseudoalteromonas haloplanktis的木聚糖酶基因(EMBL登录号AJ427921)
<400>6
atgaaagtat tttttaaaat aacaacttta ttgttaatac taataagcta tcaatcactt      60
gctgcattta ataataaccc atcgagtgta ggcgcctaca gttcagggac ataccgtaac     120
ctcgcacaag aaatgggtaa aacaaatata cagcaaaagg tgaatagtac ttttgacaat     180
atgtttggct ataacaacac acaacaactt tactacccgt acaccgaaaa cggtgtttat     240
aaagcacact acataaaagc aattaaccca gacgaaggcg acgatataag aacagaaggg     300
caatcgtggg gaatgaccgc cgctgtcatg cttaataaac aagaagaatt tgataaccta     360
tggcgctttg caaaagcgta tcaaaaaaat ccagacaatc accctgatgc taaaaaacaa     420
ggcgtttacg cgtggaaact aaagcttaat caaaacggct ttgtttataa agtggatgag     480
ggccccgctc ccgatggcga agagtacttt gcgtttgcac tacttaatgc ctctgctcgt     540
tgggggaatt cgggtgagtt taactactac aacgatgcca ttaccatgtt aaacacaatt     600
aaaaataagc tgatggaaaa ccaaataatc cgcttttcac cttacattga taacctaaca     660
gacccttctt accatatacc tgcgttttac gactactttg caaataacgt aactaaccaa     720
gcagacaaaa attactggcg acaagtagcc acaaaaagta gaaccttact taaaaaccat     780
tttacaaaag taagtggtag cccgcattgg aacttaccta catttttatc gcgcttagat     840
ggcagccctg ttattggcta catttttaac ggccaagcaa acccaggtca atggtatgaa     900
tttgatgcat ggcgcgtaat tatgaatgtg ggtttagacg cgcatttaat gggtgctcaa     960
gcgtggcata aaagtgcagt taataaagca ctgggctttt taagttatgc aaaaacaaac    1020
aacagtaaaa actgttacga gcaagtgtat tcgtacggtg gagcgcaaaa cagaggctgt    1080
gcaggcgaag gtcaaaaagc cgcgaatgca gtagcgttac ttgcttcaac aaatgctggg    1140
caagcaaatg agttttttaa cgaattttgg tctttatcgc aaccaacggg tgactaccgt    1200
tactataatg gttcgttata tatgttagct atgctgcatg tatcgggcaa ttttaagttt    1260
tataacaaca cgtttaatta a                                              1281
<210>7
<211>426
<212>PRT
<213>Pseudoal teromonas haloplanktis
<220>
<221>misc_特征
<223>Pseudoalteromonas haloplanktis的木聚糖酶(EMBL登录号AJ427921)
<400>7
Met Lys Val Phe Phe Lys Ile Thr Thr Leu Leu Leu Ile Leu Ile Ser
1               5                   10                  15
Tyr Gln Ser Leu Ala Ala Phe Asn Asn Asn Pro Ser Ser Val Gly Ala
            20                  25                  30
Tyr Ser Ser Gly Thr Tyr Arg Asn Leu Ala Gln Glu Met Gly Lys Thr
        35                  40                  45
Asn Ile Gln Gln Lys Val Asn Ser Thr Phe Asp Asn Met Phe Gly Tyr
    50                  55                  60
Asn Asn Thr Gln Gln Leu Tyr Tyr Pro Tyr Thr Glu Asn Gly Val Tyr
65                  70                  75                   80
Lys Ala His Tyr Ile Lys Ala Ile Asn Pro Asp Glu Gly Asp Asp Ile
                85                  90                  95
Arg Thr Glu Gly Gln Ser Trp Gly Met Thr Ala Ala Val Met Leu Asn
            100                 105                 110
Lys Gln Glu Glu Phe Asp Asn Leu Trp Arg Phe Ala Lys Ala Tyr Gln
        115                 120                 125
Lys Asn Pro Asp Asn His Pro Asp Ala Lys Lys Gln Gly Val Tyr Ala
    130                 135                 140
Trp Lys Leu Lys Leu Asn Gln Asn Gly Phe Val Tyr Lys Val Asp Glu
145                 150                 155                 160
Gly Pro Ala Pro Asp Gly Glu Glu Tyr Phe Ala Phe Ala Leu Leu Asn
                165                 170                 175
Ala Ser Ala Arg Trp Gly Asn Ser Gly Glu Phe Asn Tyr Tyr Asn Asp
            180                 185                 190
Ala Ile Thr Met Leu Asn Thr Ile Lys Asn Lys Leu Met Glu Asn Gln
        195                 200                 205
Ile Ile Arg Phe Ser Pro Tyr Ile Asp Asn Leu Thr Asp Pro Ser Tyr
    210                 215                 220
His Ile Pro Ala Phe Tyr Asp Tyr Phe Ala Asn Asn Val Thr Asn Gln
225                 230                 235                 240
Ala Asp Lys Asn Tyr Trp Arg Gln Val Ala Thr Lys Ser Arg Thr Leu
                245                 250                 255
Leu Lys Asn His Phe Thr Lys Val Ser Gly Ser Pro His Trp Asn Leu
            260                  265                270
Pro Thr Phe Leu Ser Arg Leu Asp Gly Ser Pro Val Ile Gly Tyr Ile
        275                 280                 285
Phe Asn Gly Gln Ala Asn Pro Gly Gln Trp Tyr Glu Phe Asp Ala Trp
    290                 295                 300
Arg Val Ile Mer Asn Val Gly Leu Asp Ala His Leu Met Gly Ala Gln
305                 310                 315                 320
Ala Trp His Lys Ser Ala Val Asn Lys Ala Leu Gly Phe Leu Ser Tyr
                325                 330                 335
Ala Lys Thr Asn Asn Ser Lys Asn Cys Tyr Glu Gln Val Tyr Ser Tyr
            340                 345                 350
Gly Gly Ala Gln Asn Arg Gly Cys Ala Gly Glu Gly Gln Lys Ala Ala
        355                 360                 365
Asn Ala Val Ala Leu Leu Ala Ser Thr Asn Ala Gly Gln Ala Asn Glu
    370                 375                 380
Phe Phe Asn Glu Phe Trp Ser Leu Ser Gln Pro Thr Gly Asp Tyr Arg
385                 390                 395                 400
Tyr Tyr Asn Gly Ser Leu Tyr Met Leu Ala Met Leu His Val Ser Gly
                405                 410                 415
Asn Phe Lys Phe Tyr Asn Asn Thr Phe Asn
            420                 425
<210>8
<211>388
<212>PRT
<213>嗜碱芽孢杆菌(Bacillus halodurans)
<220>
<221>misc_特征
<223>嗜碱芽孢杆菌菌株C-125的木聚糖酶Y
     (GenBank/GenPeptTM登录号BAB05824)
<400>8
Met Lys Lys Thr Thr Glu Gly Ala Phe Tyr Thr Arg Glu Tyr Arg Asn
1               5                   10                  15
Leu Phe Lys Glu Phe Gly Tyr Ser Glu Ala Glu Ile Gln Glu Arg Val
            20                  25                  30
Lys Asp Thr Trp Glu Gln Leu Phe Gly Asp Asn Pro Glu Thr Lys Ile
        35                  40                  45
Tyr Tyr Glu Val Gly Asp Asp Leu Gly Tyr Leu Leu Asp Thr Gly Asn
    50                  55                  60
Leu Asp Val Arg Thr Glu Gly Met Ser Tyr Gly Met Met Met Ala Val
65                  70                  75                   80
Gln Met Asp Arg Lys Asp Ile Phe Asp Arg Ile Trp Asn Trp Thr Met
                85                  90                  95
Lys Asn Met Tyr Met Thr Glu Gly Val His Ala Gly Tyr Phe Ala Trp
            100                 105                 110
Ser Cys Gln Pro Asp Gly Thr Lys Asn Ser Trp Gly Pro Ala Pro Asp
        115                 120                 125
Gly Glu Glu Tyr Phe Ala Leu Ala Leu Phe Phe Ala Ser His Arg Trp
    130                 135                 140
Gly Asp Gly Asp Glu Gln Pro Phe Asn Tyr Ser Glu Gln Ala Arg Lys
145                 150                 155                 160
Leu Leu His Thr Cys Val His Asn Gly Glu Gly Gly Pro Gly His Pro
                165                 170                 175
Met Trp Asn Arg Asp Asn Lys Leu Ile Lys Phe Ile Pro Glu Val Glu
            180                 185                 190
Phe Ser Asp Pro Ser Tyr His Leu Pro His Phe Tyr Glu Leu Phe Ser
        195                 200                 205
Leu Trp Ala Asn Glu Glu Asp Arg Val Phe Trp Lys Glu Ala Ala Glu
    210                 215                 220
Ala Ser Arg Glu Tyr Leu Lys Ile Ala Cys His Pro Glu Thr Gly Leu
225                 230                 235                 240
Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Tyr Asp Gly Thr Pro Asn Asp Glu Lys Gly
                245                 250                 255
Tyr Gly His Phe Phe Ser Asp Ser Tyr Arg Val Ala Ala Asn Ile Gly
            260                 265                 270
Leu Asp Ala Glu Trp Phe Gly Gly Ser Glu Trp Ser Ala Glu Glu Ile
        275                 280                 285
Asn Lys Ile Gln Ala Phe Phe Ala Asp Lys Glu Pro Glu Asp Tyr Arg
    290                 295                 300
Arg Tyr Lys Ile Asp Gly Glu Pro Phe Glu Glu Lys Ser Leu His Pro
305                 310                 315                 320
Val Gly Leu Ile Ala Thr Asn Ala Met Gly Ser Leu Ala Ser Val Asp
                325                 330             335
Gly Pro Tyr Ala Lys Ala Asn Val Asp Leu Phe Trp Asn Thr Pro Val
            340                 345             350
Arg Thr Gly Asn Arg Arg Tyr Tyr Asp Asn Cys Leu Tyr Leu Phe Ala
        355                 360             365
Met Leu Ala Leu Ser Gly Asn Phe Lys Ile Trp Phe Pro Glu Gly Gln
    370                 375             380
Glu Glu Glu His
385

Claims (22)

1.制备焙烤产品的方法，所述方法包括将面包改良组合物加入所述焙烤产品的面团中的步骤，所述面包改良组合物包含至少一种选自糖苷水解酶家族8的具有木聚糖分解活性的酶。
2.权利要求1的方法，其中所述酶水解伴随构型转换。
3.权利要求1或2的方法，其中所述的酶是从Pseudoalteromonashaloplanktis菌株获得的木聚糖酶。
4.权利要求3的方法，其中所述的Pseudoalteromonashaloplanktis菌株是Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a。
5.权利要求1或2的方法，其中所述的酶是从Bacillushalodurans菌株获得的木聚糖酶。
6.权利要求5的方法，其中所述的Bacillus halodurans菌株是Bacillus halodurans C-125。
7.在前任一权利要求的方法，其中所述的面包改良组合物是面团混合过程中加入的。
8.在前任一权利要求的方法，其中所述的面包改良组合物进一步包含另一面包改良剂，其选自其它酶、乳化剂、氧化剂、奶粉、脂肪、糖、氨基酸、盐、蛋白质(谷蛋白、纤维素结合位点)或其混合物。
9.权利要求8的方法，其中所述的其他酶选自α-淀粉酶、β-淀粉酶、麦芽糖淀粉酶、其它木聚糖酶、蛋白酶、葡糖氧化酶、氧化还原酶、葡聚糖酶、纤维素酶、谷氨酰胺转移酶、异构酶、脂肪酶、磷脂酶、果胶酶或其混合物。
10.权利要求9的方法，其中所述α-淀粉酶是从米曲霉(Aspergillus oryzae)获得的α-淀粉酶。
11.在前任一权利要求的方法，其中所述的具有木聚糖分解活性的酶是以细胞提取物、无细胞提取物或以纯化蛋白存在。
12.在前任一权利要求的方法，其中所述的具有木聚糖分解活性的酶是以干粉或颗粒的形式，尤其是无粉尘颗粒，或以液体的形式和其他配料成分混合，优选和一种或多种稳定剂如多元醇、糖、有机酸或糖醇混合。
13.通过在前任一权利要求的方法可获得的焙烤产品。
14.权利要求13的焙烤产品，是具有增加的切开宽度的阿根廷面包。
15.增加焙烤产品的块体积的方法，包括在所述焙烤产品的面团混合过程中，将足够量的选自糖苷水解酶家族8木聚糖酶的具有木聚糖分解活性的酶加入的步骤。
16.增加焙烤产品块体积或增加焙烤产品表面切开宽度的方法，包括在所述焙烤产品的面团混合过程中，将足够量的选自糖苷水解酶家族8木聚糖酶、水解伴随构型转换的家族8糖苷水解酶和/或其组合的具有木聚糖分解活性的酶加入的步骤。
17.用于增加焙烤产品块体积或增加焙烤产品表面切开宽度的面包改良剂组合物，特征在于其包含至少一种选自糖苷水解酶家族8的具有木聚糖分解活性的酶。
18.权利要求17的面包改良剂组合物，其中所述酶水解伴随构型转换。
19.权利要求17或18的面包改良剂组合物，其中所述的酶是从Pseudoalteromonas haloplanktis菌株获得的木聚糖酶。
20.权利要求19的面包改良剂组合物，其中所述的Pseudoalteromonas haloplanktis菌株是Pseudoalteromonashaloplanktis TAH3a。
21.权利要求17或18的面包改良剂组合物，其中所述的酶是从Bacillus halodurans菌株获得的木聚糖酶。
22.权利要求21的面包改良剂组合物，其中所述的Bacillushalodurans菌株是Bacillus halodurans C-125。
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