CN1681392B - 具有木聚糖分解活性的家族8酶在焙烤中的应用 - Google Patents

具有木聚糖分解活性的家族8酶在焙烤中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN1681392B
CN1681392B CN038216833A CN03821683A CN1681392B CN 1681392 B CN1681392 B CN 1681392B CN 038216833 A CN038216833 A CN 038216833A CN 03821683 A CN03821683 A CN 03821683A CN 1681392 B CN1681392 B CN 1681392B
Authority
CN
China
Prior art keywords
enzyme
zytase
family
bread
baked product
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
CN038216833A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1681392A (zh
Inventor
A·杜特朗
J·乔里斯
B·格诺特
T·道弗林
T·克林斯
A·霍由克斯
G·非勒
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Puratos NV
Original Assignee
Puratos NV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Puratos NV filed Critical Puratos NV
Publication of CN1681392A publication Critical patent/CN1681392A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1681392B publication Critical patent/CN1681392B/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D8/00—Methods for preparing or baking dough
    • A21D8/02—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking
    • A21D8/04—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking treating dough with microorganisms or enzymes
    • A21D8/042—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking treating dough with microorganisms or enzymes with enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D2/00—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking
    • A21D2/08—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking by adding organic substances
    • A21D2/24—Organic nitrogen compounds
    • A21D2/26—Proteins
    • A21D2/267—Microbial proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2477—Hemicellulases not provided in a preceding group
    • C12N9/248—Xylanases
    • C12N9/2482—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01008—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)

Abstract

本发明描述了通过加入面包或面团改良剂来改良面团和/或焙烤制品特性的方法，所述改良剂含有属于糖苷水解酶家族8的具有木聚糖分解活性的酶。优选的酶是来自Pseudoalteromonas haloplanktis嗜冷木聚糖酶和来自Bacillus halodurans C-125的嗜温木聚糖酶Y。

Description

具有木聚糖分解活性的家族8酶在焙烤中的应用
发明领域
本发明涉及改良焙烤产品的方法和组合物，包括至少一种来自糖苷水解酶家族8的具有木聚糖分解活性的酶。本发明实施方案中所述的具有木聚糖分解活性的酶的特征还在于水解过程中构型转换存在的事实。本发明特定实施方案中所述的具有木聚糖分解活性的酶是来自Pseudoalteromonas haloplanktis的嗜冷木聚糖酶或来自Bacillushalodurans的嗜温木聚糖酶。
发明背景
木聚糖是形成存在于植物生物质中半纤维素主要部分的杂多糖。这些多糖的主链是β1-4连接的吡喃木糖残基链。许多不同的侧基可以连接至这些残基上，如乙酰基，阿拉伯糖和葡糖醛酸(glucuronosyl)残基。酚类化合物如阿魏酸或羟基肉桂酸也通过酯结合参与例如木聚糖链交联中或木聚糖与木质素链之间的连接中。
内切木聚糖酶(或内β-1，4-木聚糖酶)特异性水解半纤维素的主链。有时，侧基通过位阻可能掩蔽主链。不同木聚糖酶的活性已经得到了描述。它们对其底物的特异性互不相同。一些对不溶的阿拉伯木聚糖更有活性。产生的低聚物长度也依赖于所考虑的木聚糖酶类型。
基于序列同源性、结构和机械特征，已经将糖苷水解酶(以前称为纤维素酶家族D)分类为91个家族(http://afmb.cnrs-mrs.fr/CAZY/)。因为蛋白质的折叠比其序列更保守，一些家族可以分组为“系(clans)”(Henrissat B.1991，Biochem.J.Vol.280，p 309)。内β-1，4-木聚糖酶通常分类于家族10(以前家族F)和11(以前家族G)，并发现其pI和分子量常常具有逆相关。家族10木聚糖酶(EXs10)较大，较复杂，而家族11木聚糖酶(EXs11)较小。况且两个家族在结构和催化特性上存在显著差异。EXs10呈现为(α/β)8桶折叠，具有约40％的α螺旋结构并属于GH-A系(Dominguez等，1995，Nat.Struct.Biol.Vol.2，p569)，而EXs11呈现为β-胶折叠构型，具有约3-5％的α螺旋结构并属于GH-C系(等，1994，EMBO J.Vol.13，p2498)。和EXs11相比较，EXs10具有较小的底物结合位点和较低的底物特异性，常常具有内切葡聚糖酶活性并产生较小的寡聚糖，EXs11对未取代的木聚糖具有较高的亲和力(Biely等，1997，J.Biotechnol.Vol.57，p151)。迄今鉴定的两个家族的所有木聚糖酶水解后都保持糖苷氧的端基异构构型，其中两个谷氨酸作为催化残余物(Jeffries，1997，Curr.Opin.Biotechnol.Vol.7，p337)。
木聚糖酶用于各种工业领域中如纸浆、造纸、饲料和焙烤工业。其他应用在于果汁和啤酒部分。木聚糖酶还可以用于小麦分离过程中。观察到的技术效果，尤其是，提高了纸浆的漂白率、降低了饲料的粘度或改变了面团的特性。
许多年来木聚糖酶(也称为半纤维素酶或戊聚糖酶)在焙烤中的使用是公知的。这些改良面团的酶可以提高面团的机械加工性和稳定性以及烘烤膨胀和面包瓤(crumb)结构。酶的其他作用是较大的面包体积和较软的面包瓤。
木聚糖酶在面包制作中的作用机理仍然没有得到清楚地阐明。小麦粉中含有约3至4％的戊聚糖。这些戊聚糖可以吸收大量的水(高达30％)。该水的吸收有助于面团的特性以及成品的质量。通过戊聚糖酶将戊聚糖部分水解成水溶性的短链低聚糖，增加了水结合容量。戊聚糖和面粉的谷蛋白部分存在强烈相互作用形成网状物(network)。戊聚糖酶可以帮助松弛这些强硬的网状物并因此使酵母形成的二氧化碳来更好地膨胀面团。
许多类型的半纤维素酶制剂已经用作焙烤活性配料且是商业上可获得的。它们是使用各种微生物作为酶源通过微生物发酵来制得。这些酶中的一些也可以通过基因修饰微生物来生产。所有证明的木聚糖酶的使用对于焙烤产品的体积度具有正面效果，涉及如此前所定义的属于糖苷水解酶家族10或家族11的木聚糖酶。
用于焙烤的木聚糖酶实例是来自枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)和黑曲霉(Aspergillus niger)的木聚糖酶。
存在多种评价酶制剂中木聚糖酶活性的方法。这样的木聚糖酶活性测定方法的实例是木聚糖中还原糖释放的测定(Miller G.L.1959，Anal.Chem.Vol.31，p426)或修饰底物中有色化合物释放的测定(例如来自Megazyme的AzoWAX或Xylazyme AX)。然而，没有发现各种酶制剂中木聚糖分解活性和焙烤效果之间的直接相关性。对于单个酶一定程度上可以观察到剂量相关的结果，但是相同量的两个不同来源的木聚糖酶在面团或面包中没有给出相同的结果。数个原因可以来解释这一点：底物特异性的差别，最佳温度和pH的差别，...
最值得关注的是发展新的酶制剂，如面包改良剂组合物或试剂，具有新的或改良的特性。这些特性之一是木聚糖部分尽可能地小(根据在焙烤中获得特别的结果所需酶的重量)。
来自南极地区细菌Pseudoalteromonas haloplanktis的木聚糖酶最近已经得到了描述(Collins，T.等2002.A novel Family 8xylanase：functional and physico-chemical characterisation(新的家族8木聚糖酶：功能和物理化学性能的描述)J.Biol.Chem.Vol.277-38，p35133；Collins，T.等.2003，Activity，stability andflexibility in glycosidases adapted to extreme thermalenvironments(适应极端热环境糖苷酶的活性、稳定性和适应性)J.Mol.Biol.Vol.328，p419；Van Petegem F.等2002.Crystallization and preliminary X-ray analysis of a xylanasefrom the psychrophile Pseudoalteromonas haloplanktis(来自嗜冷菌Pseudoalteromonas haloplanktis的木聚糖酶结晶和初步的X射线分析)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr.Vol.58(Pt9)，p1494-6)。该酶是典型的嗜冷酶并在低温呈现出高催化活性。其和家族10或11木聚糖酶不是同源，但是和糖苷水解酶家族8(以前称为家族D)成员具有20至30％的同一性，该家族主要包括内切葡聚糖酶也包括地衣多糖酶和脱乙酰壳多糖酶。此外，使用InterPRO扫描研究程序(InterPro Scan search program)(Zdobnov和Apweiler，2001，Bioinformatics Vol.17，p847)对印痕(PRINTS)的指纹图谱扫描(FingerPRINTScan)显示了所分析20个家族8酶的分离序列中含有严格保守的糖基水解酶家族8指纹图谱和家族8残基。
和EXs10和EXs11相反，该家族8木聚糖酶(Exs8)具有高pH和高分子量。结构和催化特性不同于EXs10也不同于EXs11。Exs8呈现(α/α)6桶折叠，具有13个α螺旋和13个β链，并属于GH-M系(Van Petegem等，2003，The structure of a cold-adapted family8 xylanase at 1.3 A resolution(冷适应家族8木聚糖酶在1.3A分辨率的结构)。Structural adaptations to cold andinvestigation of the active site(对冷的结构适应和活性位点的研究).J.Biol.Chem.Vol.278(9)，p7531-9)。这些酶没有内切葡聚糖酶、脱乙酰壳多糖酶或地衣多糖酶活性并表现出和EXs11功能上相似，对长链木低聚糖更有活性。
与其他已知的保持构型的EXs10和EXs11相比，家族8糖水解酶(Fierobe等，1993.Eur.J.Biochem.Vol.217，p557；http://afmb.cnrs-mrs.fr/CAZY/)趋向于水解水解后具有糖苷氧端基异构构型的转换的底物，其中一个谷氨酸和一个天冬氨酸作为催化残基。这已经得到了显示例如来自Pseudoalteromonas haloplanktis的嗜冷木聚糖酶(Van Petegem等，2003，J.Biol.Chem.，Vol.278(9)，p7531-9；Collins，T.等2002.A novel family 8 xylanase：functional and physico-chemical characterization(新的家族8木聚糖酶：功能和物理化学性能的描述)。J.Biol.Chem.Vol.277(38)，p35133)。属于糖苷水解酶家族8的其它木聚糖酶已经得到描述(Yoon，K-H.，1998，Molecular cloning of a Bacillus sp.KK-1 xylanasegene and characterization of the gene product(Bacillus sp.KK-1木聚糖酶基因的分子克隆和基因产物的特征)。Biochem.Mol.Biol.International.45(2)，p.337；Bacillus halodurans C-125木聚糖酶Y GenBank/GenPeptTM登录号BAB05824)。这些木聚糖酶显示了它们以及和如Collins等所描述的Pseudoalteromonas haloplanktis木聚糖酶(2002，参见以上)之间的序列同源性。
属于糖苷水解酶家族8的酶目录在(http://afmb.cnrs-mrs.fr/CAZY/)上定时更新。
发明目的
本发明的目的是提供新的酶制剂如面包改良剂组合物。
本发明进一步的目的是提供通过使用这样的酶制剂获得改良焙烤制品的新方法。
发明概述
令人惊讶地发现当在面团混合过程中将其加入时，具有木聚糖分解活性并属于糖苷水解酶家族8的酶对面团特性或焙烤制品特性具有正面效果。
还令人惊讶地发现当在面团混合过程中将其加入时，具有木聚糖酶活性并水解伴随端基异构构型转换的酶对面团特性或焙烤制品特性具有正面效果。
进一步令人惊讶地发现上述酶的使用增大了面包的体积。
还发现一些这样具有木聚糖分解活性来自糖苷水解酶家族8EXs8的酶的使用，与目前已知木聚糖酶相比较可以使用较少的酶达到相同的面团特性或焙烤制品特性。
如上所述本发明特定实施方案涉及来自糖苷水解酶家族8具有木聚糖分解活性的酶及其在焙烤工业中的应用。
本发明特别的实施方案涉及来自Pseudoalteromonashaloplanktis的嗜冷家族8木聚糖酶和来自Bacillus halodurans的嗜温家族8木聚糖酶Y。这些酶是水解伴随端基异构构型转换的木聚糖酶。
优选的木聚糖酶是那些从Pseudoalteromonas haloplanktisTAH3a和Bacillus halodurans C-125菌株获得的或那些从合适宿主中表达的相应基因获得的。
优选地，在面团混合过程中将包含至少一种本发明酶的面包改良组合物加入。
所述的面包改良组合物可以进一步含有选自其它酶、乳化剂、氧化剂、奶粉、脂肪、糖、氨基酸、盐、蛋白质(谷蛋白、纤维素结合位点)或其混合物的其它面包改良剂。
所述其它酶可以选自α-淀粉酶、β-淀粉酶、麦芽糖淀粉酶、其它木聚糖酶、蛋白酶、葡糖氧化酶、氧化还原酶、葡聚糖酶、纤维素酶、谷氨酰胺转移酶、异构酶、脂肪酶、磷脂酶、果胶酶或其混合物。
所述α-淀粉酶优选是从米曲霉(Aspergillus oryzae)获得的。
根据本发明的具有木聚糖分解活性的酶可以以细胞提取物、无细胞提取物或纯化蛋白的形式用于所述面包改良组合物中。
本发明的酶可以和其它成分混合并以干粉或颗粒的形式，尤其是无粉尘的颗粒，或以液体的形式来使用，优选和一种或多种稳定剂如多元醇、糖、有机酸或糖醇混合。
本发明的另一方面涉及当使用本发明酶时获得的或可获得的焙烤制品。
本发明的另一方面涉及含有至少一种本发明酶的面包改良组合物。
仍然本发明的另一方面涉及提高焙烤制品块体积的方法，包括在所述焙烤制品面团混合过程中，将足够量的选自糖苷水解酶家族8的木聚糖酶的具有木聚糖分解活性的酶或者水解伴随端基异构构型转换具有木聚糖分解活性的酶加入的步骤。在面团或焙烤制品中可以使用上述酶的任何组合或混合物用于上述任何目的。
附图简述
图1表示了Pseudoalteromonas haloplanktis木聚糖酶TAH3a的量的增加对比利时硬卷(Belgium hard rolls)体积的影响。
图2显示了各种木聚糖酶样品SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(酶的装载量与焙烤中的使用量成比例，所有酶相同比例系数)。
泳道1：分子量标记
泳道2-5：分别处理0.333kg(2，4)和0.166kg(3，5)小麦粉所需的Pseudoalteromonas haloplanktis木聚糖酶(2-3)和Bacillushalodurans木聚糖酶(4-5)的量。
图3A和B表示了Pseudoalteromonas haloplanktis(A)的木聚糖酶基因的核苷酸序列和相应木聚糖酶(B)。
图4表示了来自Bacillus halodurans菌株C-125的木聚糖酶Y。
通过参考附图将在以下的实施例和实施方案中进一步详细描述本发明。特定实施方案和实施例不是以任何方式来限制所要求的本发明范围。
发明详述
本发明尤其涉及具有木聚糖分解活性的家族8酶用于焙烤中来提高特别是块体积。所述酶可以具有其它活性，但是必须是木聚糖分解活性以致该酶适于本发明目的。
A.根据本发明的一些优选酶的制备
来自糖苷水解酶家族8的具有木聚糖分解活性的酶可以从多种来源获得(参见例如http://afmb.cnrs-mrs.fr/CAZY/用于综述)。一些酶已经在科学文献上得到了描述，且因此可以使用相应出版物中所描述的技术来获得。以下，将较详细地描述根据本发明的一些优选酶的制备。
A.1.来自Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a的木聚糖酶
来自Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a的木聚糖酶已经得到Collins T.等的描述(2002.A novel Family 8 xylanase：functional and physico-chemical characterisation(新的家族8木聚糖酶：功能和物理化学性能的描述)。J.Biol.Chem.Vol.277(38)，p35133)。Collins等描述了通过带有克隆于表达质粒中Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a木聚糖酶基因的大肠杆菌(Escherichia coli)重组菌株的液体培养物来制备。
Pseudoalteromonas haloplanktis木聚糖酶基因的核苷酸序列是可得的，以及相应的氨基酸序列也是可得的(EMBL登录号AJ427921，引入序列作为参考，图3A-B，SEQ ID NO：6-7)。该酶具有46000Da的分子量，约9.5的等电点，35℃的最佳温度和5.3至8的最佳pH。其是真木聚糖酶，延长温育后木聚糖水解的主要反应产物是木丙糖和木四糖。
通过首先在适于表达酶的培养基中培养野生型或重组菌株，然后是一个或数个纯化步骤如但不限于离心、细胞分裂、微滤、超滤、沉淀、液相色谱、冻干，...可以获得该酶的粗制或纯化制剂。
A.2.来自Bacillus halodurans C-125的木聚糖酶Y
来自Bacillus halodurans菌株C-125(ATCCCBAA-125)的家族8木聚糖酶Y的序列是可得的，如GenBank/GenPeptTM登录号BAB05824(引入序列作为参考，图4，SEQ ID NO：8)。作为Bacillushalodurans菌株C-125全部基因组序列的部分，相应的DNA序列是可得的(登录号AP001514，引入序列作为参考)。
通过首先在适于表达木聚糖酶的培养基中/上培养菌株，然后是一个或数个纯化步骤如但不限于离心、细胞分裂、微滤、超滤、沉淀、液相色谱、冻干，...可以获得来自Bacillus halodurans C-125的木聚糖酶。
或者，通过首先使用公知技术如PCR扩增、和载体连接并转化微生物宿主来克隆相应基因可以获得来自Bacillus halodurans C-125的木聚糖酶。该步骤以后，木聚糖酶可以优选在合适的宿主中表达，通过将基因放置在适当控制序列如但不限制于启动子和终止子的控制下并将该DNA构建体插入允许该基因表达的细胞中。
本发明特定实施方案中，木聚糖酶基因将在所述细胞中超表达。
然而，本发明不受限于上述酶而是延及具有木聚糖分解活性属于糖苷水解酶家族8的其它酶。这些酶是通过微生物和非微生物活细胞如但不限于植物或动物来生产的。酶可以从活细胞培养物和/或样品中直接获得，或者可以通过重组菌株或宿主细胞来生产。编码目的酶的基因可以是合成基因。
“重组菌株”或通过“重组宿主细胞”是指具有引入所述具有木聚糖分解活性属于糖苷水解酶家族8酶的核苷酸序列的菌株。
优选，重组宿主细胞选自微生物界，优选细菌或真菌，包括酵母，以及更优选为芽孢杆菌(Bacillus)。
优选，所述重组菌株能够过表达所述核苷酸序列并优选允许所述木聚糖酶高产量。
根据本发明生产的具有木聚糖分解活性的酶可以直接用于本发明所述的目的和/或可以经过一个或多个纯化或(更多的)培养步骤。本发明特别实施方案中，酶可以以纯化形式使用。
用于根据本发明的酶的可能制备方法包括特别是从摇瓶或发酵罐中的重组或非重组微生物培养物中制备或纯化，从固定化培养物中制备或纯化，从活细胞(植物，...)中提取和/或纯化。
B.酶的应用
根据本发明具有木聚糖分解活性的纯化或非纯化酶尤其适于用作面包改良剂。面包改良剂是可以改善或提高结构、香味、保鲜效果、柔软度、保存时面包瓤柔软度、新鲜度、面团机械加工性、成品体积的产品。优选，所述具有木聚糖分解活性的酶改善面团的加工和/或提高了焙烤成品的体积度。“焙烤产品”包括从面团制得的任何产品，尤其是酵母发酵的焙烤产品。从任何类型的面粉或粗粉(meal)(例如，基于小麦、黑麦、大麦、燕麦，或玉米)获得面团。优选，面团是由小麦或包括小麦的混合物制得的。
本发明的一方面是显示属于家族8具有木聚糖分解活性的酶可以有利地用于面包改良剂配方中。
本发明进一步的实施方案中，显示了属于糖苷水解酶家族8的具有木聚糖分解活性的酶增大了焙烤产品的块体积。
本发明进一步的实施方案中，显示了具有木聚糖分解活性的家族8酶在焙烤中获得特别效果时所需量显著低于使用商业上可获得酶时通常使用的量。
更进一方面，本发明涉及所述具有木聚糖分解活性的酶和其它酶一起的加成效果，尤其是和α-淀粉酶，优选来自米曲霉(Aspergillusoryzae)的α-淀粉酶。所述具有木聚糖分解活性的酶可以和其它如但不限于酶、乳化剂、氧化剂、奶粉、脂肪、糖、氨基酸、盐、蛋白质(谷蛋白、纤维素结合位点)的面包改良剂组合使用，这样的改良剂是本领域普通技术人员公知的。酶的实例包括但不限于α-淀粉酶、β-淀粉酶、麦芽糖淀粉酶、木聚糖酶、蛋白酶、葡糖氧化酶、氧化还原酶、葡聚糖酶、纤维素酶、谷氨酰胺转移酶、异构酶、脂肪酶、磷脂酶、果胶酶，等等。
根据本发明具有木聚糖分解活性的酶可以在数种形式下使用。表达酶的细胞，如酵母、真菌、Archea细菌和细菌，可以直接用于加工中。所述酶可以以细胞提取物、无细胞提取物(即，已经接受一个或多个分裂、离心和/或提取步骤的宿主细胞部分)或以纯化蛋白来使用。任何上述形式可以和上述形式下的另一个酶组合使用。根据建立的方法，所述的细胞、细胞提取物、无细胞提取物或酶可以和不同的成分混合，例如，以干粉或颗粒的形式，尤其是无粉尘的颗粒，以液体的形式，例如和稳定剂如多元醇、糖、有机酸、糖醇混合。
实施例
实施例1：Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a木聚糖酶的制备
如所述的(Collins等，2002，参见以上)从含有相应基因DNA载体转化的重组大肠杆菌(Escherichia coli)菌株的液体培养物中获得Pseudoalteromonas haloplanktis的木聚糖酶。
实施例2：来自Bacillus halodurans C-125的木聚糖酶的制备
细菌菌株和培养条件
Bacillus halodurans C-125(ATCC BAA-125)在添加10g/l桦木木聚糖(Sigma)碱性芽孢杆菌培养基(10g/l葡萄糖，5g/l酵母提取物(Difco)，10g/l细菌用胰蛋白胨(Difco)，1g/l K2HPO4，0.2g/lMgSO4，10g/l Na2CO3)中在37℃培养72小时。在18000g 4℃离心1小时后，将上清液通过用80％的硫酸胺沉淀来浓缩并在20mM pH8.0的MOPS中重悬浮。这部分表示了将用于焙烤试验的粗制提取部分。木聚糖酶Y基因的克隆和表达
从上述改良碱性芽孢杆菌培养基中37℃培养16小时的培养物中用Wizard
Figure G03821683319960402D000111
基因组DNA纯化试剂盒(Genomic DNA Purification kit)(Promega)提取并纯化基因组DNA。基于公开的序列(GenBank/GenPeptTM登录号AP001514)，使用VENT聚合酶(BiolabsInc，Bervely，MA，USA)和正义引物5’-GGGCATATGAAGAAAACGACAGAAGGTG-3’，SEQ ID NO：1，含有Nde I位点(下滑线的)以及反义引物5’-GGCTCGAGCTAGTGTTCCTCTTCTTG-3’，SEQ ID NO：2，含有XhoI位点(下滑线的)和终止密码子(斜体)来进行全部木聚糖酶Y基因的PCR扩增。
3分钟95℃初始变性后，使用Progene仪器(Techne Cambridge，UK)进行25个循环扩增。每个循环包括95℃变性1分钟，52℃杂交30秒，以及72℃延伸1.5分钟。
使用提供者推荐的程序，将PCR产物克隆进PCRScript Amp SK(+)载体中(Stratagene)，并用来转化Epicurian Coli XL10-Gold
Figure G03821683319960402D000112
Kan超感受态细胞。蓝白选择选择了载有PCR片段的白色克隆。将纯化的质粒制剂(Nucleospin质粒，Macherey-Nagel)在ALF DNA测序仪上测序(Pharmacia Biotech)。使用通用引物T7和RP以及以下的引物进行插入片段的测序。
5’-GTGCGGACTGAAGGAATGTC-3’，SEQ ID NO：3
5’-GTATGGTCCATCAACAGAGG-3’，SEQ ID NO：4
5’-GATGGCACTAAAAACTCCTGG-3’.SEQ ID NO：5
所得的序列和可以从GenBank/genPeptTM登录号AP001514检索到的公开序列相同。
因此然后将克隆进PCRScript Amp SK(+)的木聚糖酶Y基因用NdeI和Xho I来切除，并连接进入pET 22b(+)克隆载体中(Novagen)。将所得到的重组质粒转化大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)细胞(Stratagene)。
来自Bacillus halodurans C-125的重组家族8木聚糖酶Y的生产
将15ml预培养(37℃)5小时的带有木聚糖酶基因的大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)细胞在10000g离心1分钟，将沉淀重悬浮于3升摇瓶中的900ml含有200μg/ml氨苄青霉素的Terrific培养液中(12g/l细菌用胰蛋白胨(Difco)，24g/l酵母提取物(Difco)，4ml/l甘油，12.54g/l K2HPO4，2.31g/l KH2PO4)。将培养物在37℃250rpm培养直至550nm吸收达到3-4，于是用1mM异丙基-1-硫-β-吡喃半乳糖苷诱导酶表达。接着进一步在37℃培养15小时后，通过在18000g 4℃离心30分钟来收集细胞，重悬浮于含有10mM NaCl的50mM BICINE中，在预冷的细胞破碎器(Constant Systems Ltd.，Warwick，UK)中以28Kpsi破碎并在40,000g离心30分钟。
重组Bacillus halodurans C-125家族8木聚糖酶的生产。
通过10,000g离心1分钟来收集预培养(37℃)5小时的带有木聚糖酶基因的大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)细胞并用来接种5升(每升培养物15ml预培养物)含有200μg/ml氨卡青霉素的Terrific培养液(ng/l细菌用胰蛋白胨(Difco)，24g/l酵母提取物(Difco)，4ml/l甘油，12.54g/l K2HPO4，2.31g/l KH2PO4)。将培养物在37℃250rpm培养直至550nm吸收达到3-4，于是用1mM异丙基-1-硫-β-吡喃半乳糖苷诱导酶表达。接着进一步在37℃培养4小时后通过在18000g 4℃离心20分钟来收集细胞，重悬浮于20mM的MOPS(Sigma)中，在预冷的细胞破碎器(Constant Systems Ltd.)中以28Kpsi破碎并在40,000g离心30分钟。通过用0.2％硫酸鱼精蛋白(Calbiochem)处理并在40,000g离心30分钟来移出染色体DNA。然后加入25单位的benzonase(Merck，Darmstadt，Germany)并将溶液用于焙烤试验中。
实施例3：Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a木聚糖酶在比利 时硬卷焙烤中的效果
进行焙烤试验来证明Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a木聚糖酶在焙烤中的正面效果。通过与不含有该酶的对照相比较的面包体积增大来评价正面效果。
在比利时每天大量生产的比利时硬卷中测试木聚糖酶。所述的程序是同行面包师公知的且使用来自其他供应商的设备可以获得相同结果对本领域技术人员是显而易见的。
所用的配料成分列于以下的表1中：
表1
  配料成分(g)   配方1   配方2   配方3   配方4   配方5
  面粉(Surbi-Molens van Deinze)   1500   1500   1500   1500   1500
  水   915   915   915   915   915
  鲜酵母(Bruggeman-Belgium)   90   90   90   90   90
  氯化钠   30   30   30   30   30
  Multec Data HP 20(Beldem-Belgium)   3.9   3.9   3.9   3.9   3.9
  抗坏血酸   0.12   0.12   0.12   0.12   0.12
  Pseudoalter.Haloplanktis木聚糖酶(单位(1)/100kg面粉)   0   25   50   100   200
(1)：一单位Pseudoalteromonas.Haloplanktis木聚糖酶定义为在30℃和pH 4.5从桦木木聚糖释放1μmole还原糖(表示为木糖)所需的酶量(Nelson-Somogyi方法)。
将配料成分在Diosna SP24搅拌机中低速混合2分钟和高速混合8分钟。形成的面团以及静置和醒发温度都是25℃。在25℃静置15分钟后，将面团手工再加工并再静置10分钟。然后，制成2kg面团块并醒发10分钟.将2kg面团块使用Eberhardt Optimat来分割并定制。获得66gr.左右的面团块。再5分钟静置后，将生面团通过压制切开并接受最后的醒发阶段70分钟。在用蒸汽MIWE CondoTM烤炉中230℃焙烤面团块(Michael Wenz-Arnstein-Germany)。使用常用的油菜籽位移方法(rapeseed displacement method)来测量6个卷的体积。
结果列于以下表2中：
表2
  木聚糖酶单位   卷体积(ml)
  0   2325
  25   2675
  50   2875
  100   2950
  200   3100
木聚糖酶效果的图示显示于图1中。
这些结果显示了Pseudoalteromonas haloplanktis的木聚糖酶对面包体积具有正面效果。
实施例4：焙烤中木聚糖酶使用量的比较
获得实施例3中所述的比利时硬卷体积试验相同效果所需的木聚糖酶相对量已经通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳得到比较。
测试的木聚糖酶和各自在焙烤中的使用量如下：
-来自Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a的木聚糖酶(30P.Haloplanktis单位/100kg面粉)
-来自枯草杆菌(Bacillus subtilis)的木聚糖酶(Belase B210(BELDEM S.A.，Belgium)-3g/100kg面粉)。
将对应于处理0.333kg和0.166kg面粉并导致相同体积增加所需量的酶，上样于12％Tris-HCl的用于SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的预制凝胶中“Ready Gel”(BIO-RAD，Hercules，CA，USA)，并根据制造商的程序在“Mini Protean II”(BIO-RAD)仪器上运行。使用标准规程用Coomassie蓝染色蛋白质。
染色凝胶的图像显示于图2中。
从图像中可以看出在焙烤中所需的Pseudoalteromonashaloplanktis TAH3a的木聚糖酶的量显著低于其他。
实施例5：Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a木聚糖酶在阿 根廷面包中的效果
以实施例3中使用的另一个配方进行焙烤试验来证明家族8木聚糖酶在焙烤中的正面效果，如在阿根廷面包中。与不含有该酶的对照相比较，通过面包体积的增大和切开面包表面的宽度来评价正面效果。
本发明的酶在需要长时间醒发(20℃17小时)的典型长面包的阿根廷面包中进行测试。所述程序是同行面包师公知的，且使用来自其他供应商的设备可以获得相同结果对本领域普通技术人员是显而易见的。
所用的配料成分列于以下的表3中：
表3
  配料成分(g)   配方1   配方2   配方3   配方4
  面粉(Surbi-Molens van Deinze-Belgium)   1500   1500   1500   1500
  水   810   810   810   810
  新鲜酵母(Bruggeman-Belgium)   5.25   5.25   5.25   5.25
  氯化钠   30   30   30   30
  标准改良剂(1)(Puratos-Belgium)   22.5   22.5   22.5   22.5
  Bel’ase B210(Beldem-Belgium)(210单位/g)   0   0.15   0   0
  纯化的Pseudoalteromonas.haloplanktis TAH3a木聚糖酶(单位(2)/100kg面粉)   0   0   25   50
(1)使用的标准改良剂包括：真菌α淀粉酶(Fungamyl 75.000，Novozymes)1g/100kg面粉，维生素C 10g，偶氮甲酰胺2g/100kg面粉。这是标准改良剂的实例。添加的绝对和相对量可以根据小麦粉和加工的局部调整而改变。
(2)一单位木聚糖酶定义为在30℃和pH 4.5从桦木木聚糖释放1μmole还原糖(表示为木糖)所需的酶量(Nelson-Somogyi方法)。
将配料成分在Diosna SP24搅拌机中低速混合2分钟和高速混合7分钟。静置过程中最终的面团的温度为25℃，而在醒发过程中为20℃。25℃静置20分钟后，将面团用手工再加工并在20℃醒发过程中静置17小时。然后，制成2kg面团块并醒发10分钟。使用BertrandR8/L8(+/-30cm)来分割和定制0.35kg的面团块，并接受最后的醒发阶段17小时。在用蒸汽的MIWE CondoTM烤炉中210℃焙烤面团块30分钟(Michael Wenz-Arnstein-Germany)。使用常用的油菜籽位移方法来测量阿根廷面包的体积。
结果列于以下的表4中：
表4
  配方   样品   木聚糖酶单位   面包体积(ml)   切开宽度(mm)
  1   0   1675   19
  2   Bel’aseB210   2100   1900   27
  配方   样品   木聚糖酶单位   面包体积(ml)   切开宽度(mm)
  3   TAH3a   25   1900   34
  4   TAH3a   50   1925   30
这些结果表明家族8木聚糖酶对较低温(即，20℃)长时间醒发制成的面包具有正面效果。在此所用商业酶(Bel’ase B210，参见以上)的量比实施例3中所述比利时硬卷所需的最佳量要高出3倍，而家族8木聚糖酶所需的量保持未改变。还存在最佳化切开宽度所需的酶浓度和最佳化体积提高所需酶浓度之间的差异。
实施例6：本发明各种酶对其他酶在焙烤中的效果比较
进行焙烤试验来证明属于糖苷水解酶家族8具有木聚糖分解活性的各种酶在焙烤中的正面效果。和不含有这些酶的对照以及和商业酶制剂(Bel’ase B210，参见以上)相比较，通过面包体积增加来评价正面效果。
如实施例1中所述制备和纯化Pseudoalteromonas.haloplanktis TAH3a木聚糖酶。如实施例2所述从重组大肠杆菌(Escherichia coli)菌株来制备Bacillus halodurans C-125木聚糖酶Y。
用来评价两个酶性能的方法是100g面粉制备的面团组成的小焙烤试验。
所述的程序对本领域普通技术人员是公知的，且使用另一个供应商的设备可以获得相同效果是显而易见的。
所用的配料成分列于以下的表5中
表5
  配料成分(g)  配方1  配方2   配方3  配方4  配方5  配方6  配方7
  面粉(Surbi-Molens van Deinze)  100  100   100  100  100  100  100
  水  57  57   57  57  57  57  57
  鲜酵母(Bruggeman-Belgium)  5  5   5  5  5  5  5
  氯化钠  2  2   2  2  2  2  2
  葡萄糖  2  2   2  2  2  2  2
  抗坏血酸(g/100kg面粉)  4  4   4  4  4  4  4
  Bel’ase B210(Beldem-Belgium)(单位(1)/100kg面粉)  0  630   1050  0  0  0  0
  配料成分(g)  配方1  配方2   配方3  配方4  配方5  配方6  配方7
  纯化的Pseudoalteromonashaloplanktis TAH3a木聚糖酶(单位(1)/100kg面粉)  0  0   0  25  50  0  0
  Bacillus halodurans C-125重组木聚糖酶(单位(1)/100kg面粉)  0  0   0  0  0  6000  12000
(1)一单位木聚糖酶定义为在30℃和pH 4.5从桦木木聚糖释放1μmole还原糖(表示为木糖)所需的酶量(Nelson-Somogyi方法)。
将配料在National搅拌机中混合4.5分钟。称重150g面团块并在塑料盒中25℃静置20分钟。将面团手工再加工并再静置20分钟。最终的醒发时间是36℃50分钟。然后将面团块在225℃焙烤20分钟。使用常用的油菜籽位移方法来测量面包体积。
结果列于以下的表6中：
表6
  配方   样品   木聚糖酶单位/100kg面粉   面包体积(ml)
  1   0   650
  2   Bel’ase B210   630   680
  3   Bel’ase B210   1050   705
  4   TAH3a   25   690
  5   TAH3a   50   760
  6   C-125   6000   725
  7   C-125   12000   725
这些结果显示了本发明酶的正面效果不受限于Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a木聚糖酶。其他属于糖苷水解酶家族8具有木聚糖分解活性的酶也能够提高面包的特性(在此证明的为Bacillus halodurans C-125木聚糖酶，其他结果未显示)。

Claims (22)

1.制备焙烤产品的方法，所述方法包括将面包改良组合物加入所述焙烤产品的面团中的步骤，所述面包改良组合物包含至少一种选自糖苷水解酶家族8的具有木聚糖分解活性的酶。
2.权利要求1的方法，其中所述酶水解伴随构型转换。
3.权利要求1或2的方法，其中所述的酶是从Pseudoalteromonashaloplanktis菌株获得的木聚糖酶。
4.权利要求3的方法，其中所述的Pseudoalteromonashaloplanktis菌株是Pseudoalteromonas haloplanktis TAH3a。
5.权利要求1或2的方法，其中所述的酶是从Bacillushalodurans菌株获得的木聚糖酶。
6.权利要求5的方法，其中所述的Bacillus halodurans菌株是Bacillus halodurans C-125。
7.在前任一权利要求的方法，其中所述的面包改良组合物是面团混合过程中加入的。
8.在前任一权利要求的方法，其中所述的面包改良组合物进一步包含另一面包改良剂，其选自其它酶、乳化剂、氧化剂、奶粉、脂肪、糖、氨基酸、盐、蛋白质(谷蛋白、纤维素结合位点)或其混合物。
9.权利要求8的方法，其中所述的其他酶选自α-淀粉酶、β-淀粉酶、麦芽糖淀粉酶、其它木聚糖酶、蛋白酶、葡糖氧化酶、氧化还原酶、葡聚糖酶、纤维素酶、谷氨酰胺转移酶、异构酶、脂肪酶、磷脂酶、果胶酶或其混合物。
10.权利要求9的方法，其中所述α-淀粉酶是从米曲霉(Aspergillus oryzae)获得的α-淀粉酶。
11.在前任一权利要求的方法，其中所述的具有木聚糖分解活性的酶是以细胞提取物、无细胞提取物或以纯化蛋白存在。
12.在前任一权利要求的方法，其中所述的具有木聚糖分解活性的酶是以干粉或颗粒的形式，尤其是无粉尘颗粒，或以液体的形式和其他配料成分混合，优选和一种或多种稳定剂如多元醇、糖、有机酸或糖醇混合。
13.通过在前任一权利要求的方法可获得的焙烤产品。
14.权利要求13的焙烤产品，是具有增加的切开宽度的阿根廷面包。
15.增加焙烤产品的块体积的方法，包括在所述焙烤产品的面团混合过程中，将足够量的选自糖苷水解酶家族8木聚糖酶的具有木聚糖分解活性的酶加入的步骤。
16.增加焙烤产品块体积或增加焙烤产品表面切开宽度的方法，包括在所述焙烤产品的面团混合过程中，将足够量的选自糖苷水解酶家族8木聚糖酶、水解伴随构型转换的家族8糖苷水解酶和/或其组合的具有木聚糖分解活性的酶加入的步骤。
17.用于增加焙烤产品块体积或增加焙烤产品表面切开宽度的面包改良剂组合物，特征在于其包含至少一种选自糖苷水解酶家族8的具有木聚糖分解活性的酶。
18.权利要求17的面包改良剂组合物，其中所述酶水解伴随构型转换。
19.权利要求17或18的面包改良剂组合物，其中所述的酶是从Pseudoalteromonas haloplanktis菌株获得的木聚糖酶。
20.权利要求19的面包改良剂组合物，其中所述的Pseudoalteromonas haloplanktis菌株是Pseudoalteromonashaloplanktis TAH3a。
21.权利要求17或18的面包改良剂组合物，其中所述的酶是从Bacillus halodurans菌株获得的木聚糖酶。
22.权利要求21的面包改良剂组合物，其中所述的Bacillushalodurans菌株是Bacillus halodurans C-125。
CN038216833A 2002-09-11 2003-09-11 具有木聚糖分解活性的家族8酶在焙烤中的应用 Expired - Lifetime CN1681392B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US41034502P 2002-09-11 2002-09-11
US60/410,345 2002-09-11
PCT/BE2003/000152 WO2004023879A1 (en) 2002-09-11 2003-09-11 Use of family 8 enzymes with xylanolytic activity in baking

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1681392A CN1681392A (zh) 2005-10-12
CN1681392B true CN1681392B (zh) 2010-06-09

Family

ID=31994115

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN038216833A Expired - Lifetime CN1681392B (zh) 2002-09-11 2003-09-11 具有木聚糖分解活性的家族8酶在焙烤中的应用

Country Status (15)

Country Link
US (2) US8192772B2 (zh)
EP (1) EP1549147B1 (zh)
JP (1) JP2005537806A (zh)
CN (1) CN1681392B (zh)
AT (1) ATE499006T1 (zh)
AU (1) AU2003264186A1 (zh)
BR (1) BRPI0314435B1 (zh)
CA (1) CA2498014C (zh)
DE (1) DE60336153D1 (zh)
DK (1) DK1549147T3 (zh)
EA (1) EA011452B1 (zh)
ES (1) ES2360942T3 (zh)
MX (1) MXPA05002751A (zh)
PT (1) PT1549147E (zh)
WO (1) WO2004023879A1 (zh)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT1549147E (pt) 2002-09-11 2011-05-31 Puratos Nv Utiliza??o de enzimas da fam?lia 8 com actividade xilanolit?ca na cozedura
WO2005077191A1 (en) * 2004-02-11 2005-08-25 Novozymes A/S Preparation of dough-based product
EP1574567A1 (en) * 2004-03-11 2005-09-14 Puratos Naamloze Vennootschap Novel xylanases and their use
EP1614354A1 (fr) * 2004-07-05 2006-01-11 LESAFFRE et Cie Procedes et produits de panification
EP2103219A1 (en) * 2008-03-10 2009-09-23 Novozymes A/S Dough with fructan and fructan-degrading enzyme
WO2012130969A1 (en) 2011-03-29 2012-10-04 Novozymes A/S Process for production of a baked product
JP5645023B2 (ja) * 2011-06-06 2014-12-24 愛媛県 大麦パンの製造方法、及び大麦パン
US9493763B2 (en) 2012-07-09 2016-11-15 University Of Calcutta Stabilized laccase enzyme and methods of making and using the same
JP6333722B2 (ja) * 2012-07-09 2018-05-30 Ｍｃフードスペシャリティーズ株式会社 食品物性改良剤
CN103651662B (zh) * 2012-09-10 2015-07-29 深圳市绿微康生物工程有限公司 面包保鲜酶制剂及其应用
US9790529B2 (en) 2013-08-09 2017-10-17 University Of Calcutta Psychrophilic enzymes compositions and methods for making and using same
MX2017002018A (es) * 2014-08-20 2017-05-23 Novozymes As Xilanasa de glucosido hidrolasa 5 (gh5) para la sequedad de la masa.
FR3034418B1 (fr) * 2015-04-03 2018-09-28 Roquette Freres Utilisation de combinaisons particulieres de carbohydrates pour stabiliser des proteines, et compositions proteiques contenant de telles combinaisons
CN109415710A (zh) * 2016-07-08 2019-03-01 诺维信公司 木聚糖酶变体和对其编码的多核苷酸
WO2020182879A1 (en) 2019-03-13 2020-09-17 Novozymes A/S Production of par-baked products with improved freshness employing combination of gh8 xylanase and phospholipase
AU2020450434A1 (en) 2020-05-29 2022-12-01 Novozymes A/S Pulse and/or legume protein-fortified doughs and baked goods comprising lipase
CN114457056B (zh) * 2022-01-25 2023-10-20 华南理工大学 一种盐乳芽孢杆菌木聚糖酶在改善面粉加工品质中的应用
CN114540326B (zh) * 2022-01-25 2023-11-03 华南理工大学 一种镰刀菌木聚糖酶在改善面粉加工品质中的应用
WO2024005093A1 (ja) 2022-06-28 2024-01-04 株式会社Mizkan Holdings でんぷん含有膨化組成物及びその製造方法、並びに、発酵組成物及びその製造方法
WO2024005099A1 (ja) 2022-06-28 2024-01-04 株式会社Mizkan Holdings でんぷん含有膨化組成物及びその製造方法、並びに、発酵組成物及びその製造方法、並びに発酵酵素処理組成物及びその製造方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1134726A (zh) * 1993-10-04 1996-10-30 诺沃挪第克公司 一种包含修饰酶的酶制剂
CN1246285A (zh) * 1999-08-10 2000-03-08 河南兴泰精细化工有限公司 一种馒头粉改良剂
CN1342197A (zh) * 1998-12-23 2002-03-27 丹尼斯科有限公司 蛋白质

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK104592D0 (da) * 1992-08-21 1992-08-21 Novo Nordisk As Fremgangsmaade
AU1945395A (en) 1994-03-02 1995-09-18 Novo Nordisk A/S Use of xylanase in baking
BE1008751A3 (fr) * 1994-07-26 1996-07-02 Solvay Xylanase, microorganismes la produisant, molecules d'adn, procedes de preparation de cette xylanase et utilisations de celle-ci.
AU5333396A (en) 1995-04-11 1996-10-30 Novo Nordisk A/S Bread-improving additive comprising a xylanolytic enzyme
WO2001070998A1 (en) * 2000-03-20 2001-09-27 Dsm N.V. Talaromyces emersonii beta-glucanases
WO2002019828A1 (en) 2000-09-08 2002-03-14 Novozymes A/S A dough composition comprising a lipid-encapsulated enzyme
US6764699B2 (en) * 2000-12-05 2004-07-20 Roberto Gonzalez Barrera Corn tortillas with improved texture retention using an enzyme blend in nixtamalized corn flour
US6982159B2 (en) * 2001-09-21 2006-01-03 Genencor International, Inc. Trichoderma β-glucosidase
US6537598B1 (en) 2001-09-27 2003-03-25 Micro-Tender Industries, Inc. Method for tenderizing raw beef
PT1549147E (pt) 2002-09-11 2011-05-31 Puratos Nv Utiliza??o de enzimas da fam?lia 8 com actividade xilanolit?ca na cozedura

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1134726A (zh) * 1993-10-04 1996-10-30 诺沃挪第克公司 一种包含修饰酶的酶制剂
CN1342197A (zh) * 1998-12-23 2002-03-27 丹尼斯科有限公司 蛋白质
CN1246285A (zh) * 1999-08-10 2000-03-08 河南兴泰精细化工有限公司 一种馒头粉改良剂

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
周素梅等.面包制作过程中戊聚糖酶的作用机理.无锡轻工业大学学报20 3.2001,20(3),275-279.
周素梅等.面包制作过程中戊聚糖酶的作用机理.无锡轻工业大学学报20 3.2001,20(3),275-279. *
朱非等.低温酶冷适应的分子机制及其在生物技术中的应用.微生物学报42 5.2002,42(5),640-644.
朱非等.低温酶冷适应的分子机制及其在生物技术中的应用.微生物学报42 5.2002,42(5),640-644. *

Also Published As

Publication number Publication date
ES2360942T3 (es) 2011-06-10
PT1549147E (pt) 2011-05-31
EA011452B1 (ru) 2009-04-28
CN1681392A (zh) 2005-10-12
JP2005537806A (ja) 2005-12-15
EA200500470A1 (ru) 2005-12-29
US8309336B2 (en) 2012-11-13
DK1549147T3 (da) 2011-05-09
ATE499006T1 (de) 2011-03-15
BRPI0314435B1 (pt) 2016-07-19
CA2498014C (en) 2011-11-29
CA2498014A1 (en) 2004-03-25
US8192772B2 (en) 2012-06-05
AU2003264186A1 (en) 2004-04-30
US20110039325A1 (en) 2011-02-17
BR0314435A (pt) 2005-07-19
DE60336153D1 (de) 2011-04-07
MXPA05002751A (es) 2005-06-03
WO2004023879A1 (en) 2004-03-25
US20070054011A1 (en) 2007-03-08
EP1549147B1 (en) 2011-02-23
EP1549147A1 (en) 2005-07-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8309336B2 (en) Family 8 enzymes with xylanolytic activity
Collins et al. Use of glycoside hydrolase family 8 xylanases in baking
EP1479765B1 (en) Enzymes with xylanase activity from aspergillus aculeatus
CA2399700C (en) Xylanase variants having altered sensitivity to xylanase inhibitors
HU215234B (hu) Eljárás gomba eredetű, xilanázaktivitással rendelkező polipeptidek rekombináns úton történő előállítására és felhasználására
CN102946739A (zh) 麸皮改性
US20080020088A1 (en) Novel Xylanases And Their Use
KR20110117663A (ko) 자일라나제 활성을 갖는 폴리펩타이드
US8361529B2 (en) Xylanase
WO1997043423A9 (en) Alpha-glucuronidases of aspergillus, production thereof and their uses
EP0904386A2 (en) alpha-GLUCURONIDASES OF ASPERGILLUS, PRODUCTION THEREOF AND THEIR USES
JP2009159993A (ja) 冷却生地形成のプロセス
US7998720B2 (en) Enzyme with xylanase activity
US20060040373A1 (en) Enzyme with xylanase activity
Srivastava et al. Cloning, characterization, and expression of xylanase gene from Bacillus lyticus in Escherichia coli and Bacillus subtilis
US20220087271A1 (en) Polypeptide with xylanase activity, nucleotide sequence encoding it, ingredient and process comprising said ingredient for preparing a food product
EP0815207A1 (en) Non-starch polysaccharide hydrolysing enzymes
WO2023083806A1 (en) Improved xylanases

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CI01 Publication of corrected invention patent application

Correction item: Claims|Sequence table

Correct: 2 4xiang|Supplementary sequence table

False: 2 2xiang|Missing sequence table

Number: 23

Volume: 26

CI03 Correction of invention patent

Correction item: Claims|Sequence table

Correct: 2 4xiang|Supplementary sequence table

False: 2 2xiang|Missing sequence table

Number: 22

Page: Description

Volume: 26

ERR Gazette correction

Free format text: CORRECT: CLAIMS; SEQUENCE LIST; FROM: ITEM 22; SEQUENCE LIST IS ABSENT TO: ITEM 24; SUPPLEMENTAL SEQUENCE LIST

C56 Change in the name or address of the patentee

Owner name: BEILEDAO CO., LTD.

Free format text: FORMER NAME: PURATOS NV.

CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: Belgium Groot bijgaarden

Patentee after: PURATOS N.V.

Address before: Belgium Groot bijgaarden

Patentee before: PURATOS N.V.

CX01 Expiry of patent term
CX01 Expiry of patent term

Granted publication date: 20100609