CN1634501A - 醒脑静注射剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有“清热泻火、凉血解毒、开窍醒脑”功效的醒脑静注射剂及其制备方法，该注射剂包括三种新剂型：纳米微乳剂型、亚纳米乳剂型以及脂质体剂型。与传统的醒脑静注射剂相比，具有功效成分明确、质量可控、用量小、起效快等优点。

Description

醒脑静注射剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种具有“清热泻火、凉血解毒、开窍醒脑”功效的醒脑静注射剂新剂型及其制备方法，更具体地说涉及这些制剂的纳米微乳剂型、亚纳米乳剂型以及脂质体剂型。

其特征在于：

纳米微乳剂型，它含有如下成分：麝香、冰片、郁金挥发油、姜黄素、栀子总甙、磷脂、胆固醇、甘油三酯；

亚纳米乳剂型，它含有如下成分：麝香、冰片、郁金挥发油、姜黄素、栀子总甙、磷脂、甘油三酯及甘油；

脂质体剂型，它含有如下成分：麝香、冰片、郁金挥发油、姜黄素、栀子总甙、磷脂、胆固醇。

以上三种新剂型根据制剂的要求，还可以含有1，2-丙二醇、poloxamer188、正十八烷基胺等其它注射用乳化剂；还可以含有稳定剂，稳定剂可以是油酸或其钠盐，胆酸或脱氧胆酸极其钠盐，在体系中的重量比为：0.1～1.5％。

与市售的醒脑静注射剂相比，这三种新剂型都具有功效成分明确、质量可控、用量少以及起效快等优点。

背景技术

醒脑静注射液是由麝香、冰片、栀子、郁金4味中药提取精制而成的一种新型中药制剂。它是由传统医学名方-安宫牛黄丸经减味而成，具有醒神止痉，清热凉血，行气活血，介毒止痛的作用。临床用于治疗脑血管意外，乙型脑炎，肺性脑病，心绞痛，酒精或药物中毒疗效较好。由于其疗效确切，目前已被卫生部确定为临床急救常用中成药品之一。

郁金含挥发油4.05-6.1％，含姜黄素0.3％，初步研究表明，郁金中的主要活性成分姜黄色素属二苯基庚烃类物质，其中主要含有酚性色素单体，名为姜黄素、脱甲氧基姜黄素和双脱甲氧基姜黄素，具有明确的抗血栓生成作用。

姜黄素具有多种药理作用，包括抗炎、抗氧化、抗凝、降血脂及抗动脉粥样硬化、抗肿瘤作用。这些药理活性已经在动物和人体实验中得到证实，而醒脑静注射液采用的工艺仅将郁金用水蒸气蒸馏，姜黄素几乎完全损失。

栀子为茜草科植物栀子GardeniajasmionidesEills的干燥成熟果实，性味苦寒，入心、肝、肺、胃、三焦，具有泻火除烦，清热利湿，凉血解毒，消肿止痛之功效。栀子的化学成分复杂，其中含有11种环烯醚萜苷类化合物，包括栀子苷、羟异栀子苷、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷酸、京尼平等。栀子苷是主要的环烯醚萜苷化合物，是栀子的重要有效成分。醒脑静注射液采用的工艺仅将栀子用水蒸气蒸馏，栀子苷几乎完全损失。

冰片主要含有龙脑、异龙脑、樟脑等成分有改善血脑屏障通透性的作用。

麝香是鹿科动物林麝、马麝和原麝成熟雄体香囊分泌物的干燥品。麝香是盛誉国内外的特产珍贵中药材和香料，疗效显著，香气芳烈，在我国已有两千多年的应用历史。《神农本草经》列为上品，《本草纲目》列于兽部第五十一卷，历代医药文献均有记载。《中华人民共和国药典》第一部收载。麝香具有开窍、醒神、活血通络、消肿止痛之功效，主治热病神昏、中风痰厥、气郁暴厥、中恶昏迷、经闭、心腹暴痛、痈肿瘰疬、痹痛麻木，疗一切虚损恶病。现代研究表明，麝香中枢神经系统、心脑血管系统等均有显著地影响。

已上市的醒脑静注射液的制备方法为：麝香7.5g、冰片1.0g、郁金30g、栀子30g，取郁金、栀子加水约1500ml进行水蒸气蒸馏，收集蒸馏液1000ml；将麝香加入上述蒸馏液中，并加蒸馏水250ml进行蒸馏，收集蒸馏液1000ml，备用；取冰片，加入8g聚山梨酯80，研匀，加入蒸馏液中，混匀，加入注射用氯化钠8g，搅拌使溶解，混匀，放置，冷藏过夜，滤过，灌封，灭菌，既得。

静脉注射：每日用量为10ml～20ml，肌肉注射：每日用量为4ml～8ml。

发明内容

随着中药有效成分研究的深入，发现醒脑静注射液采用的工艺存在严重的缺陷，本发明经过工艺优选，选用了最佳的提取方法，将有效成分尽可能提取完全。本发明还采用了纳米微乳剂型、亚纳米乳剂型和脂质体剂型等靶向制剂，与传统的醒脑静注射剂相比，具有功效成分明确、质量可控、用量小、起效快等优点。

本发明制备的醒脑静注射液新剂型，静脉注射：每日用量为2ml～4ml，肌肉注射：每日用量为1ml～2ml。与传统的注射剂相比，用量大大减少。

纳米微乳剂型：

它含有如下成分：麝香、冰片、郁金挥发油、姜黄素、栀子总甙、磷脂、胆固醇、甘油三酯；各成分的重量比为：5.0～15.0∶1.0～2.0∶1.0～3.0∶0.05～0.25∶0.5～3.0∶1.0～20.0∶0.5～10.0∶5.0～20.0。

制备方法为：将处方量的冰片、郁金挥发油、姜黄素与精制大豆磷脂、正十八烷基胺、胆固醇、大豆油加热混合均质，制成澄明溶液，再加入处方量的麝香提取物水溶液和栀子总甙1.0g混合均匀，调节PH值为4.5～7.0，制成100ml，得到近乎澄明液体，经过微孔滤膜过滤，分装灭菌即得。

亚纳米乳剂型：

它含有如下成分：麝香、冰片、郁金挥发油、姜黄素、栀子总甙、磷脂、甘油三酯、甘油；各成分的重量比为：5.0～15.0∶1.0～2.0∶1.0～3.0∶0.05～0.25∶0.5～3.0∶1.2-3.5∶5.0-20.0∶1.0-3.0。

制备方法为：将处方量的冰片、郁金挥发油、姜黄素、稳定剂混合均匀，与精制大豆磷脂一起加入甘油三酯中，升温制成油相，将该油相加入到含甘油的麝香提取物水溶液中。然后高速搅拌，调节PH值为4.5-7.0，补充注射用水至处方量，再经过高压均质机处理，用激光粒度仪检测，粒径符合要求之后，再经过微孔滤膜过滤，分装灭菌即得。

脂质体剂型：

它含有如下成分：麝香、冰片、郁金挥发油、姜黄素、栀子总甙、磷脂、胆固醇。各成分的重量比为：5.0～15.0∶1.0～2.0∶1.0～3.0∶0.05～0.25∶0.5～3.0∶5.0-30.0∶2.0-10.0。

将处方量的郁金挥发油、姜黄素、磷脂和胆固醇以重量比进行混合，添加乙醚溶解该混合物，置于旋转蒸发仪上脱除乙醚成膜，添加适量的注射用水，然后超声处理，当粒径≤100nm以后，用磷酸二氢钠水溶液麝香提取物、调节PH，使PH值为4.5-6.5，再加入处方量的麝香提取物水溶液、冰片及栀子总甙，再经过微孔滤膜过滤，分装灭菌即得。

与市售的醒脑静注射剂相比，这三种新剂型都具有功效成分明确、质量可控、用量小、起效快等优点。

醒脑静注射剂制备方法包括有效部位的提取和新剂型的制备两个主要步骤：

姜黄挥发油和姜黄素的提取步骤为：

a.将郁金粉碎成粗粉(过20目筛)，采用真空精馏装置精馏，得郁金挥发油；

b.残渣放入超临界二氧化碳萃取装置的萃取釜中，用乙醇做夹带剂，萃取压力7～50Mpa，萃取温度30～80℃的超临界二氧化碳进行萃取干燥，萃取时间为1～5h。在解析压力1.5～8.0Mpa，解析温度20～80℃下，解析时间1～5h进行收集，干燥后，获得姜黄素粉末。

栀子总甙的提取步骤为：

a.取处方量的栀子粉碎成粗粉(过20目筛)，用1.0～4.0倍50～90％的乙醇浸润0.5～2.0小时后，均匀地装入渗漉器中，注入足量的乙醇，浸泡4h～8h后，开始进行渗漉，收集渗漉液，直至流出液接近无色为止。

b.减压回收乙醇，浓缩液至无醇味，加入水分至药材量的2～4倍，冷藏24～48小时，吸取上清液，下层滤过。

c.将所得滤液上树脂柱层析，先用水洗脱，用液相检测，待有栀子甙流出时，改用稀乙醇洗脱，收集洗脱液，减压蒸干既得栀子总甙。

麝香提取物的制备方法：

按处方量的麝香提取物，用适量热水温浸或注沸提取2～3次，至麝香酮提取完全。水提液合并过滤备用。

实施例一：纳米微乳的制备

将冰片1.0g、郁金挥发油0.5g、姜黄素0.08g与精制大豆磷脂2.0g、正十八烷基胺1.5g、胆固醇1.0g、大豆油5.0g加热混合均质，制成澄明溶液，再加入处方量的麝香提取物水溶液和栀子总甙1.0g混合均匀，调节PH值为4.5～7.0，制成100ml，得到近乎澄明液体，经过微孔滤膜过滤，分装灭菌即得。

实施例二：纳米微乳的制备

将冰片1.0g、郁金挥发油0.5g、姜黄素0.08g与精制大豆磷脂2.0g、1，2-丙二醇1.5g、胆固醇1.0g、大豆油5.0g加热混合均质，制成澄明溶液，再加入处方量的麝香提取物水溶液和栀子总甙1.0g混合均匀，均质处理，调节PH值为4.5～7.0，制成100ml，得到近乎澄明液体，经过微孔滤膜过滤，分装灭菌即得。

实施例三：亚纳米乳剂的制备

将冰片1.0g、郁金挥发油0.2g、姜黄素0.08g、油酸0.5g混合均匀，与精制大豆磷脂1.5g，一起加入到10g大豆油中，高速搅拌升温制成油相，将该油相加入到含2.0g甘油1.0g栀子总甙的麝香提取物水溶液中，调节PH值为4.5～7.0，制成100ml，再经过高压均质机处理，用激光粒度仪检测，粒径符合要求之后，再经过微孔滤膜过滤，分装灭菌即得。

实施例四：亚纳米乳剂的制备

将冰片1.0g、郁金挥发油0.2g、姜黄素0.08g、油酸0.5g混合均匀，与精制大豆磷脂1.0g，poloxamer188 1.0g一起加入到10g大豆油中，升温制成油相，将该油相加入到含2.0g甘油1.0g栀子总甙的麝香提取物水溶液中，调节PH值为4.5～7.0，制成100ml，再经过高压均质机处理，用激光粒度仪检测，粒径符合要求之后，再经过微孔滤膜过滤，分装灭菌即得。

实施例五：脂质体的制备

将冰片1.0g、郁金挥发油0.2g、姜黄素0.08g、精制大豆磷脂2.5g以及胆固醇0.8g添加乙醚溶解该混合物，置于旋转蒸发仪上脱除乙醚成膜，添加适量的注射用水，然后超声处理，当粒径≤100nm以后，用磷酸二氢钠水溶液、调节PH，使PH值为4.5-6.5，再加入处方量的麝香提取物水溶液、栀子总甙1.0g混合均匀，制成100ml，经过微孔滤膜过滤，分装灭菌即得。

醒脑静注射剂中各主要成分的含量测定方法：

取醒脑静注射剂10mg，用甲醇稀释至含固形物0.2mg/ml的溶液，作为供试品溶液，进样量：20μL。

1、麝香提取物酮的含量测定方法

1.1 色谱条件

C18反相柱(10μm)46mm×150mm，流动相∶乙腈水(90∶10)，流速：0.8mL·min-1，检测波长：254nm，灵敏度：0.1AUFS

1.2 衍生物的制备

取2，4二硝基苯肼1g，加入无水乙醇15mL、醋酸乙酯15mL和浓盐酸1mL，加热至澄清。称取麝香提取物酮100mg，加入上述2，4二硝基苯肼盐酸溶液5mL，于60℃水浴加热30min，抽去溶剂，用乙醇重结晶两次，得2，4二硝基苯腙衍生物标准品。

1.3 对照品溶液的制备

精密称取2，4二硝基苯腙衍生物标准品0.01026g置10mL量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。2.1.4供试品溶液制备精密移取醒脑静注射液20mL，置于分液漏斗中，用石油醚20mL分4次提取，合并提取液，较低温度下自然挥干，向挥干后的残渣中加入过量的2，4二硝基苯肼盐酸溶液1.0mL，水浴60℃加热30min，至反应完全后，抽干溶剂，将残渣溶于50mL乙腈中即得。

2、栀子甙的含量测定方法

2.1 色谱条件：C18反相柱(10μm)4 6mm×150mm，流动相乙腈0.1％磷酸(13∶87)，流速1.0ml/min，λs＝230nm，柱温30℃，柱压6860kPa，检测灵敏度01AUFS。

2.2 对照品溶液的制备

分别取干燥至恒重的栀子甙约2mg，精密称定，同置10ml容量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，使成含栀子甙0.196mg/ml。

2.3 冰片的含量测定

2.3.1色谱条件：PEG 20M Chromosorb WHP 2m×2m(ID)不锈钢柱，氢火焰检测器，柱温140℃，汽化室温度210℃，检测室温度200℃，进样量1μL，载气：氮气20mL·min-1；燃气：氢气40mL·min-1；助燃气：空气500mL·min-1。

2.3.2 制备内标溶液：精密称取内标萘50mg，置于25mL量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，即成为内标溶液。

2.3.3 制备标准品溶液：精密称取冰片对照品37.5mg，置于25mL量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，即成为标准品溶液。

醒脑静注射液新剂型对全脑缺血再灌注大鼠脑组织氨基酸类神经递质的影响

芳香开窍药具有中枢兴奋作用，在临床上对意识障碍有很好的醒神作用。现代研究表明，兴奋性氨基酸EAA参与脑的缺氧缺血性损伤，在缺氧、缺血所致急性神经元损伤中起着关键性作用，缺氧缺血后脑细胞外液EAA可明显升高。

本发明的注射液能迅速透过血脑屏障并直接作用于中枢神经系统，可降低脑缺血时的兴奋性神经递质Asp和升高抑制性神经递质GABA、Gly，以对抗兴奋性氨基酸的毒性，从而保护脑缺血后继发神经元的损伤，对抗缺血性脑损害，还具有抗惊厥及脑水肿的作用。

动物分组及给药方法

SD大鼠，雌雄不拘，体重250～300g，随机分为假手术组、模型组、纳米微乳剂组、亚纳米乳剂组、脂质体组、注射剂组六个组，每组8只。各组大鼠用药量按体表面积公式计算，给予纳米微乳剂组、亚纳米乳剂组、脂质体组和注射剂组1ml/kg.d，假手术组及模型组注射生理盐水1ml/kg.d，各组在造模后给药，连续给药60min后，进行手术。

模型制备方法

采用pulsinellide法4vo法，按3ml/kg的剂量予大鼠10％水合氯醛行腹腔麻醉，麻醉后大鼠俯卧在手术台上，在颈后第一、第二颈椎上切口，分离肌肉，暴露第一颈椎两侧翼小孔，用电凝笔烧闭双侧椎动脉，造成永久性关闭；置大鼠于仰卧位，分离双侧颈总动脉，用微动脉夹夹闭双侧颈总动脉45min，开放动脉夹，再灌注6h，然后断头处死。假手术组，分离椎动脉及颈总动脉，不行椎动脉凝闭和颈总动脉夹闭，余手术过程相同。

标本的制备

动物于再灌注后断头处死，手术取大鼠大脑，迅速置于冰盘上取右侧脑自额极至枕叶分为4、7、G、I等分，迅速取G、I脑片，准确称重后，按每50mg组织加入1ml甲醇匀浆，2000g，4℃离心30分钟，收集上清液。残渣再用甲醇同法提取两次，合并3次提取的上清液。提取液置沸水浴上蒸去甲醇，在余下的残留物中准确加入80％乙醇5ml，超声波处理30min，2000g，4℃离心30分钟，收集上清用于检测脑组织氨基酸类神经递质。

统计学分析：

各组数值以 x±s表示，组间比较采用spss10.0软件包进行单因素的方差分析，显著性水平取α＝0.05或0.01。

        各组脑组织氨基酸类神经递质的含量(μmol/g) x±s

组别        N/例      Glu            Asp          GABA          Gly

假手术组      8    3.79±0.96   3.09 ±1.06   10.89±3.26    2.21±0.61

模型组        8    5.85±0.76   5.81 ±0.87   10.57±4.53    3.25±0.56

微乳剂组      8    5.07±1.92   4.71±1.09^*  16.07±2.76^* 4.57±0.56^*

亚纳米乳剂组  8    4.90±0.95   4.21±1.73^*  15.87±3.54^* 4.37±1.09^*

脂质体组      8    5.10±1.05   4.38±1.56^*  15.32±3.90^* 4.88±0.76^*

注射液组      8    5.65±1.41   4.01±1.33    14.80±2.64    3.87±0.96^*

注：与假手术组比较，*P＜0.01

结果：大鼠脑组织缺血45min，再灌注6h后，模型组Glu、Asp含量较假手术组显著升高(P＜0.01)，乳剂组和注射液组Asp含量量显著低于模型组(P＜0.01)而与假手术组接近(P＞0.01)。Glu含量无统计学意义。新剂型组和注射液组GABA、Gly含量显著低于模型组(P＜0.01)。因此，芳香开窍药可通过降低缺血区脑组织中的Asp，提高GABA、Gly的含量以对抗兴奋性氨基酸的毒性，从而保护脑缺血后继发神经元的损伤。

Claims (6)

1、一种具有“清热泻火、凉血解毒、开窍醒脑”功效的醒脑静注射剂及其制备方法，其特征在于该注射剂包括以下三种新剂型：

a：纳米微乳剂型，它含有如下成分：麝香、冰片、郁金挥发油、姜黄素、栀子总甙、磷脂、胆固醇、甘油三酯；各成分的重量比为：5.0～15.0∶1.0～2.0∶1.0～3.0∶0.05～0.25∶0.5～3.0∶1.0～20.0∶0.5～10.0∶5.0～20.0。

b：亚纳米乳剂型，它含有如下成分：麝香、冰片、郁金挥发油、姜黄素、栀子总甙、磷脂、甘油三酯、甘油；各成分的重量比为：5.0～15.0∶1.0～2.0∶1.0～3.0∶0.05～0.25∶0.5～3.0∶1.2-3.5∶5.0-20.0∶1.0-3.0。

c：脂质体剂型，它含有如下成分：麝香、冰片、郁金挥发油、姜黄素、栀子总甙、磷脂、胆固醇。各成分的重量比为：5.0～15.0∶1.0～2.0∶1.0～3.0∶0.05～0.25∶0.5～3.0∶5.0-30.0∶2.0-10.0。

2、根据权利要求1中的郁金挥发油和姜黄素，提取方法为：

a.将郁金粉碎成粗粉(过20目筛)，采用真空精馏装置精馏，得郁金挥发油；

b.残渣放入超临界二氧化碳萃取装置的萃取釜中，用乙醇做夹带剂，萃取压力7～50Mpa，萃取温度30～80℃的超临界二氧化碳进行萃取干燥，萃取时间为1～5h。在解析压力1.5～8.0Mpa，解析温度20～80℃下，解析时间1～5h进行收集，干燥后，获得姜黄素粉末。

3、根据权利要求1中的栀子总甙，提取方法为：

a.取处方量的栀子粉碎成粗粉，用1.0～4.0倍量50～90％的乙醇浸润0.5～2.0小时后，均匀地装入渗漉器中，注入足量的乙醇，浸泡4h～8h后，开始进行渗漉，收集渗漉液，直至流出液接近无色为止。

b.减压回收乙醇，浓缩液至无醇味，加入水分至药材量的2～4倍，冷藏24～48小时，吸取上清液，下层滤过。

c.将所得滤液上树脂柱层析，先用水洗脱，用液相检测，待有栀子甙流出时，改用稀乙醇洗脱，收集洗脱液，减压蒸干既得栀子总甙。

4、根据权利要求3中的树脂，是指以苯乙烯为骨架的大孔树脂，型号包括D101、AB-8、D301R、D296以及D396型。

5、根据权利要求1中的新剂型，还可以含有稳定剂，稳定剂可以是油酸或其钠盐，胆酸或脱氧胆酸极其钠盐，在体系中的重量比为：0.1-1.5％。

6、根据权利要求1中的新剂型，还可以含有1，2-丙二醇、poloxamer188、正十八烷基胺等注射用乳化剂，在体系中的重量比为：3.0-20.0％。