CN106474170B - 一种刺五加组合物、制剂及其检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种刺五加组合物、含其制剂及其检测方法。所述的刺五加组合物中含有刺五加总苷31‑167mg/g、总黄酮11‑199mg/g、总糖224‑736mg/g和总无机盐20‑173mg/g。所述的检测方法包括对(1)总苷、(2)总糖、(3)总黄酮、(4)总无机阳离子、(5)总无机阴离子、(6)总固体的检测。本发明提供的刺五加组合物和注射液中成分更加平衡，在降血糖、降血脂等方面具有明显效果，且其药效相对现有技术更好；毒性相对更小，相对更加安全。

Description

一种刺五加组合物、制剂及其检测方法
技术领域
本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种刺五加组合物、含其制剂及其检测方法。
背景技术
刺五加(拉丁学名：Eleutherococcus senticosus)，别名:刺拐棒、坎拐棒子、一百针、老虎潦、五加参、俄国参、西伯利亚人参，落叶灌木，主要分布于亚洲东北部，西伯利亚一带。其根部和根状茎可入药，具有益气健脾、补肾安神、活血化瘀的功效，《本草纲目》记载刺五加能“补力益精，明目下气”，能“补五劳七伤，久服轻身耐老”，常用于治疗脾肾阳虚、体虚乏力、食欲不振、腰膝酸痛、失眠多梦。现代医学研究也表明，刺五加具有抗恶性疟疾、抗病毒、抗肿瘤、降血糖、降血脂和止痛杀菌等多种药理作用和临床应用。
根据文献报道，刺五加中的总苷类物质、总黄酮类物质和总糖类物质为其主要活性成分。
目前，刺五加总苷经分离鉴定主要有其中形式，分别为胡萝卜苷(刺五加苷A)、紫丁香苷(刺五加苷B)、7-羟基-6,8-二甲基香豆精葡萄糖苷(刺五加苷B1)、乙基半乳糖苷(刺五加苷C)、紫丁香树脂酚二糖苷(刺五加苷D和E)，此外还有刺五加苷F和G等。随着技术不断提高，还从刺五加中分离得到以齐墩果酸为配基的五加苷I、K、L、M等，齐墩果酸被认为是我国目前首次从植物中发掘出来的治疗急性黄疽性肝炎和慢性病毒性肝炎较理想的药物。
刺五加总黄酮也是刺五加重要的活性成分之一，主要由槲皮素-3-O-半乳糖、槲皮素-3-O-鼠李糖、槲皮素和芦丁等组成。经研究，刺五加总黄酮具有抗心肌缺血、能扩张血管、增加冠状动脉血流量、改善心电图、降低心肌耗氧量、抗异位心律、降低血压、镇静安神和抗菌消炎的药理活性。
研究表明，刺五加总糖为免疫活性成分之一，主要为碱性多糖和水溶性多糖。现代药理学研究表明，刺五加多糖具有较强的抗肿瘤作用，尤其是对小鼠S180肉瘤和人白血病粒细胞K562作用显著；另一方面，刺五加多糖可以促进T细胞、B细胞、NK细胞等细胞因子的产生；再一方面，刺五加多糖还具有较强的抗氧化活性。
国内外对传统中药刺五加的化学成分进行了大量研究，分离得到了大量有效成分。同时，也公开了多种刺五加提取物、组合物及其制剂。
例如，中国专利申请201210533220公开了一种刺五加提取物及其制备与应用，该提取物中多糖含量为50wt％～80wt％；中国专利申请201210049755公开了一种刺五加组合物，含其制剂及其检测方法，每克该组合物中含有总黄酮50-120毫克、紫丁香苷12.5-30毫克和刺五加苷E4-15毫克；中国专利申请201010165556公开了一种刺五加提取物及其药物组合物，以及该提取物在制备老年痴呆药物中的应用；中国专利申请201410508745公开了一种低毒的刺五加注射液及其制备方法，其含有以下活性成分：含总黄酮1.8-5.5mg/ml、紫丁香苷0.13-0.70mg/ml和刺五加苷E 0.06-0.34mg/ml，钾离子的数量≤800μg/ml。
由于中药制剂中成分复杂，既有活性物质也有其他杂质甚至存在毒性物质和过敏原，因此经常出现一类过敏反应为主的药物不良反应。刺五加也不例外，现有的刺五加组合物或其制剂成分复杂，相对不够明确，一方面使得实际活性成分不能更有效地发挥作用；另一方面，刺五加注射液不良反应案例频频出现，说明其毒性和致敏性还有待进一步降低；再一方面由于其中的主要大类活性成分的组成并不明确，在质量控制上也存在隐患。而目前公开的刺五加提取物或组合物及其制剂并未能很好的解决上述问题。
目前，现有的对刺五加制剂中主要活性成分进行检测的方法主要为高效液相色谱法及其改进方法。该方法耗时长、样品前处理过程复杂、检测过程繁复并且对仪器的要求较高。当面临大批量检测时，该方法很难在有效时间中完成检测，也就难以及时地向生产部门提供检测数据。
中药中成分复杂，通常是几种活性成分协同发挥作用。目前的刺五加提取物在提取时通常采用水提和有机溶剂提取为主。提取过程中并不注重样品前处理，煎煮时间和煎煮方式单一，一定程度使得刺五加中各种有效成分不能更加彻底的溶出，导致提取物中有效成分含量低或不均衡，甚至造成杂质含量高。
例如中国专利申请201010165556公开了一种刺五加提取物，其通过如下方法制备获得：将刺五加切成碎片，加水煎煮，合并煎液，减压浓缩，加入乙醇至醇含量为70-75％，静置滤过，回收乙醇后加水稀释至生药重量的3-6倍，用石灰乳调pH值至10.0-12.0，静置4小时以上，再用硫酸将pH值调至5.0-6.0，静置过滤，浓缩，加入乙醇至醇含量为80-85％，静置过滤，离心，浓缩干燥，即得。该方法中醇沉前仅进行如下处理：刺五加切成碎片，加水煎煮，合并煎液，减压浓缩，刺五加中的活性成分，尤其是总糖类不能被充分提出，并且无机盐杂质残留相对较多。
而为了较少杂质，现有技术常采用增加醇沉次数以及利用树脂进行吸附等方式处理刺五加提取物，然而增加醇沉次数或利用树脂吸附往往会使得其中的活性成分也随之流失，使得制备的刺五加提取物及其利用其制备的制剂中活性成分含量较低。例如中国专利申请201410508745公开了一种低毒的刺五加注射液及其制备方法，其中刺五加提取物的制备方法包括：(1)提取、(2)第一次醇沉、(3)石硫法处理、(4)大孔树脂吸附、(5)二次醇沉、(6)热压机超滤。该方法采用两次醇沉以及大孔吸附树脂去除杂质，但同时也造成了活性成分的流失，
发明内容
本发明的一个目的是提供一种刺五加组合物，所述的刺五加组合物中含有刺五加总苷31-167mg/g、总黄酮11-199mg/g、总糖224-736mg/g和总无机盐20-173mg/g。
优选地，所述的刺五加组合物中含有刺五加总苷80-142mg/g、总黄酮79-161mg/g、总糖342-692mg/g和总无机盐20-49mg/g。
更优选地，所述的刺五加组合物中含有刺五加总苷82-115mg/g、总黄酮91-168mg/g、总糖394-628mg/g和总无机盐20-25mg/g。
所述的总无机盐指总无机阳离子和总无机阴离子的总和。
在一些优选的实施方案中，本发明所述的刺五加组合物中刺五加苷B占刺五加总苷的15-26％。
在另一些优选的实施方案中，本发明所述的刺五加组合物中刺五加苷E占刺五加总苷的6-30％。
在另一些优选的实施方案中，本发明所述的刺五加组合物中刺五加苷E占刺五加总苷的6-30％，并且刺五加苷B占刺五加总苷的15-26％。
本发明的另一个目的是提供所述的刺五加组合物的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤：
(1)、前处理：将刺五加清洗粉碎后，加水煎煮2-3次后，加入与水等体积的冰，待冷却至室温后，继续煎煮1次，再加入与水等体积的冰，待冷却至室温后，继续煎煮1次，合并煎液得液体A；
(2)、石硫法处理：待液体A冷却至40℃以下时，向其中加入重量百分比为20％的石灰乳调pH值至10.0-12.0，静置16-24小时，再用硫酸将pH值调至5.0-6.0，搅拌均匀后，静置16-30小时，滤取上清液，将上清液减压浓缩成在80℃测定相对密度为1.10-1.20的浓缩膏；
(3)、醇沉：当步骤(2)获得的浓缩膏温度降至25-40℃时，边搅拌边加入体积浓度为95％以上的乙醇至浓缩膏中乙醇浓度达到70-85％，搅拌均匀后，静置16-40小时后，滤取上清液，在乙醇加入过程中维持浓缩膏温度在25-40℃；
(4)、浓缩：将步骤(3)获得的上清液减压浓缩成在80℃测定相对密度为1.10-1.20的浓缩膏，既得。
所述的制备方法步骤(1)中每次煎煮加入6-10倍量水；优选为8-10倍量水；进一步优选为9-10倍量水。
所述的制备方法步骤(1)中每次煎煮时间为2-5小时；优选为3-5小时；进一步优选为3.5-4.5小时。
所述的制备方法步骤(1)中使用到的水，包括制备冰所用到的水包括但不限于：饮用水、纯化水或注射用水。
所述的制备方法步骤(2)中液体A冷却温度优选为冷却至35℃以下；进一步优选为冷却至30℃以下；更进一步优选为28℃以下；再进一步优选为25℃。
所述的制备方法步骤(2)中第一次静置时间优选为16-22小时；进一步优选为18-22小时；更进一步优选为18-20小时。
所述的制备方法步骤(2)中第二次静置时间优选为18-30小时；进一步优选为20-30小时；更进一步优选为26-30小时。
所述的制备方法步骤(3)中加入乙醇的浓度优选为96％以上；进一步优选为97％以上；更进一步优选为99％以上。
所述的制备方法步骤(3)中在乙醇加入过程中维持浓缩膏温度优选在28-36℃；进一步优选为30-35℃；更进一步优选为32-34℃。
所述的制备方法步骤(3)中静置时间优选为20-38小时；进一步优选为24-36小时；更进一步优选为28-34小时。
如未特别说明，本发明中涉及到的乙醇的浓度均指其体积浓度。
如未特别说明，本发明中涉及到冰可使用饮用水、纯化水或注射用水制作。
本发明的再一个目的是提供含有所述的刺五加组合物的制剂。
所述的制剂由本发明所述的刺五加组合物或由本发明所述的刺五加组合物和药学上可接受的辅料组成。
所述的制剂为注射液、冻干粉针剂、颗粒剂、丸剂、片剂、喷雾剂、糖浆剂、胶囊剂或合剂。
所述的辅料包括但不限于填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、润湿剂、溶剂、表面活性剂或矫味剂中的一种或几种。
所述的填充剂包括但不限于淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素或葡萄糖中的一种或几种。
所述的粘合剂包括但不限于纤维素衍生物、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种。
所述的崩解剂包括但不限于微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基纤维素或交联羧甲基纤维素钠中的一种或几种。
所述的润滑剂包括但不限于硬脂酸、聚乙二醇、碳酸钙、碳酸氢钠、微粉硅胶、滑石粉或硬脂酸镁中的一种或几种。
所述的助悬剂包括但不限于微粉硅胶、蜂蜡、纤维素、固态聚乙二醇中的一种或几种。
所述的润湿剂包括但不限于甘油、吐温-80、乙氧基氢化蓖麻油或卵磷脂中的一种或几种。
所述的溶剂包括但不限于乙醇、液态聚乙二醇、异丙醇、吐温-80、甘油、丙二醇或植物油，所述的植物油选自大豆油、蓖麻油、花生油、调和油中的一种或几种。
所述的表面活性剂包括但不限于十二烷基苯磺酸钠、硬脂酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、脂肪酸山梨坦或聚山梨酯(吐温)中的一种或几种。
所述的甜味剂包括但不限于自阿斯巴甜、蔗糖素、香精、柠檬酸或糖精钠中的一种或几种。
本发明提供的刺五加制剂中，所述的注射液中总固体的含量为16.7-71.9mg/mL。
所述的注射液中总固体的含量为，按规格划分如下：
每支20mL：35.1-71.9mg/mL；
每瓶250mL：16.7-36.4mg/mL。优选地，所述的注射液中总固体的含量为，按规格划分如下：
每支20mL：42.9-65.8mg/mL；
每瓶250mL：22.3-28.9mg/mL。
所述的注射液含有：刺五加总苷1.4-7.2mg/mL、总黄酮1.5-7.1mg/mL、总糖10.2-50.7mg/mL、总无机阳离子0.1-2.9mg/mL和总无机阴离子0.1-3.2mg/mL。
所述的注射液含有，按规格划分如下：
每支20mL：刺五加总苷2.9-7.2mg/mL、总黄酮4.6-7.1mg/mL、总糖14.4-50.7mg/mL、总无机阳离子0.1-2.7mg/mL和总无机阴离子0.1-1.5mg/mL；
每瓶250mL：刺五加总苷1.4-3.0mg/mL、总黄酮1.5-4.7mg/mL、总糖10.2-16.9mg/mL、总无机阳离子2.2-2.9mg/mL和总无机阴离子1.4-3.2mg/mL。
优选地，所述的注射液含有，按规格划分如下：
每支20mL：刺五加总苷3.8-6.4mg/mL、总黄酮5.3-6.0mg/mL、总糖17.3-41.1mg/mL、总无机阳离子0.8-2.6mg/mL和总无机阴离子0.1-1.4mg/mL；
每瓶250mL：刺五加总苷1.7-1.9mg/mL、总黄酮1.9-2.1mg/mL、总糖8.3-14.5mg/mL、总无机阳离子2.4-2.8mg/mL和总无机阴离子2.7-3.1mg/mL。
所述的刺五加组合物和注射液中，总无机阳离子包含Na+、K+、Ca2+和Mg2+。
所述的刺五加组合物和注射液中，总无机阴离子包含Cl-、SO4 2-和NO3 -。
所述的注射液的制备方法包括以下步骤：
取本发明所述的刺五加组合物，加注射用水稀释为每1mL含总黄酮10-20mg，搅拌均匀后，3000-5000rpm离心2-10分钟，取上清液，调节上清液pH值至4.0-5.5，搅拌均匀，得到药液A；将药液A经115-121℃灭菌20-30分钟后，于4℃静置冷藏12小时以上，冷藏后的上清液经过滤后得到的滤液为药液B；将药液B经115-121℃灭菌30-40分钟后，于4℃静置冷藏12-36小时，得到药液C；向药液C中加入医用活性炭后，于70-85℃下处理10-30分钟，过滤脱碳，得到药液D；采用0.22μm滤膜对药液D进行两次过滤，得到药液E；调节药液E的pH值至5.0-6.5，测定其中总黄酮的含量后，加注射用水至全量，滤过，灌封，116℃灭菌40分钟，即得。
本发明所述的注射液的制备方法中，医用活性炭的平均粒径为2-5μm；优选为3-4μm。
本发明所述的注射液的制备方法中，医用活性炭的加入量为0.4-0.6％；优选为0.4-0.5％。
如未特别说明，本发明中所述的“过滤”或“滤取”所使用的滤膜为0.45μm滤膜。
如未特别说明，本发明中所述的调节pH值使用盐酸或氢氧化钠。
本发明的又一个目的是提供所述的刺五加组合物和注射液的含量检测方法，所述的检测方法包括：
(1)、总苷：以紫丁香苷为对照品，依照分光光度法在265nm波长处测定吸收度，计算刺五加注射液中总苷的含量；
(2)、总糖：以葡萄糖为对照品，依照分光光度法在490nm波长处测定吸收度，计算刺五加注射液中总糖的含量；
(3)、总黄酮：以芦丁为对照品，依照分光光度法在510nm波长处测定吸收度，计算刺五加注射液中总黄酮的含量；
(4)、总无机阳离子：分别以钠、钾、钙、镁为对照品，采用火焰法测定注射液中Na+、K+、Ca2+和Mg2+的含量，测定条件如下：
(5)、总无机阴离子：分别以氯离子、硫酸根、硝酸根离子作为对照品，依照离子色谱法测定刺五加注射液中Cl-、SO4 2-和NO3 -的含量，测定条件如下：
色谱柱：IonPac AG15(4×50mm)和IonPac AS15(4×250mm)；
淋洗液：KOH溶液；
流速：每分钟1.0mL；
进样量：25μL；
检测方式：抑制电导检测；
梯度淋洗条件如下：
时间(分钟) 淋洗液
0 8mM KOH
26 50mM KOH
26.2 8mM KOH
30 8mM KOH
(6)、总固体：蒸发干燥后，称量计算总固体含量。
本发明的在一个目的是提供所述的刺五加组合物或制剂在制备治疗高血脂、高血糖或生殖系统疾病，及其相关疾病的药物中的应用。其中所述的生殖系统疾病为男性不育症。
本发明的有益效果：
(1)、本发明提供的刺五加组合物和注射液中成分更加平衡，总黄酮、刺五加总苷、总糖和总无机盐成分明确，含量更加均衡，在降血糖、降血脂等方面具有明显效果，且其药效相对现有技术更好。
(2)、本发明提供的刺五加组合物和注射液中主要大类活性成分的组成相对更加明确，经小鼠试验和β-氨基己糖苷酶试验证明，本发明提供的刺五加组合物和注射液引起的类过敏反应为1-3例/100只小鼠，而现有技术的刺五加组合物、提取物以及注射液引起的类过敏反应为4-15例/100只小鼠。因此，本发明提供的刺五加组合物和注射液毒性相对更小，相对更加安全。
(3)、本发明提供的刺五加组合物的制备方法在前处理中多次加入冰，使得刺五加中的大类活性成分更加容易渗出，得到的制成品中大类活性成分含量更高且含量更加均衡，同时其中的杂质相对更少，其安全性更高。
(4)、本发明提供的刺五加组合物和注射液中主要大类活性成组成明确，相对更加易于质量控制，减少了其质量控制上的安全隐患。
(5)、本发明提供的刺五加组合物的制备方法制得的刺五加组合物中大类活性成分含量相对更高，其中总黄酮含量可高达199mg/g、刺五加苷E可高达约50mg/g、刺五加苷B可高达约43mg/g、总糖可高达约736mg/g；均明显高于现有技术
(6)、本发明提供的注射液的含量检测方法在对其中大类活性成分检测时全部使用分光光度法即可完成，操作简单快速，对设备要求低。而现有技术通常采用高效液相色谱法，对仪器设备要求高，且操作过程复杂、耗时长。在面对大批量检测时，本发明提供的检测方法相对更加方便易行，为刺五加制剂的制备、流通、使用等过程中的质量控制提供了便利手段。
具体实施方式
以下实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。对所公开的实施例的下述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例中，而是可以应用于符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的更宽的范围。
除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。
实施例1一种刺五加组合物及其制备方法和含量测定
1、制备方法：
(1)、前处理：将1000g刺五加清洗粉碎后，加6倍体积纯化水煎煮2小时后，分离煎液；再加6倍体积纯化水煎煮2小时后，分离煎液；然后加入6倍体积的的冰，待冷却至室温后，煎煮2小时后，分离煎液；再加入6倍体积的冰，待冷却至室温后，煎煮2小时后，分离煎液；合并煎液得液体A；
(2)、石硫法处理：待液体A冷却至40℃以下时，向其中加入重量百分比为20％的石灰乳调pH值至10.0，静置16小时，再用硫酸将pH值调至5.0，搅拌均匀后，静置16小时，滤取上清液，将上清液减压浓缩成在80℃测定相对密度为1.10的浓缩膏；
(3)、醇沉：当步骤(2)获得的浓缩膏温度降至25℃时，边搅拌边加入体积浓度为96％的乙醇至浓缩膏中乙醇浓度达到70％，搅拌均匀后，静置16小时后，滤取上清液，在乙醇加入过程中维持浓缩膏温度在25℃；
(4)、浓缩：将步骤(3)获得的上清液减压浓缩成在80℃测定相对密度为1.10的浓缩膏，既得。
2、含量测定：
含量测定方法中使用的水均为纯化水。
(1)、总苷：
仪器：T6型紫外可见分光光度计，购自北京普析通用仪器有限公司；MettlerXS105型电子天平，购自Mettler Toledo公司。
试剂：色谱纯甲醇，购自Merk公司。
对照品：刺五加苷B(紫丁香苷)，批号为130504，HPLC纯度为99.25％，购自上海融禾医药科技发展有限公司。
测定方法：
对照品溶液的制备：取刺五加苷B对照品约10mg，精密称定，置25mL量瓶中，加25％甲醇适量使溶解，加25％甲醇至刻度，摇匀；精密量取1mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；再精密量取3mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得，每1mL对照品溶液中含刺五加苷B 0.012mg。
供试品溶液的制备：称取制备得到的刺五加组合物，使用9倍体积甲醇将制备得到的刺五加组合物溶解后，精密量取0.5mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，再精密量取0.5mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定：分别取对照品溶液及供试品溶液，以甲醇为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录附录ⅤA)，在265nm波长处测定吸光度，计算其中总苷类物质(以刺五加苷B计)的含量(单位为mg/mL)，根据其质量即可换算出刺五加组合物中总苷类物质的含量。
(2)、总糖：
仪器：T6型紫外可见分光光度计，购自北京普析通用仪器有限公司；MettlerXS105型电子天平，购自Mettler Toledo公司。
试剂：苯酚(GC纯度≥99％)，购自上海晶纯实业有限公司；浓硫酸(分析纯)，购自衢州巨化试剂有限公司。
对照品：葡萄糖，批号E1330031，GC纯度≥99.5％，购自上海晶纯实业有限公司。
测定方法：
对照品溶液的制备：取葡萄糖对照品约10mg，精密称定，置50mL量瓶中，加水适量使溶解，加水至刻度，摇匀，即得对照品储备液，每1mL对照品储备液中含葡萄糖0.2mg；精密量取对照品储备液1mL、2mL、3mL、4mL与4.5mL，分别置10mL量瓶中，各加水至刻度，摇匀，即得系列浓度对照品溶液。
标准曲线的制备：各精密量取系列浓度对照品溶液1mL，分别置10mL具塞试管中，各加6％苯酚溶液1mL，再加入5mL的浓硫酸，摇匀，沸水浴放置20分钟，取出，置冰水浴放置20分钟。以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录附录ⅤA)，在490nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线。
供试品溶液的制备：称取制备得到的刺五加组合物，使用9倍体积甲醇将制备得到的刺五加组合物溶解后，精密量取0.5mL，置10mL量瓶中，加水至刻度，摇匀；精密量取0.5mL置10mL量瓶中，加水至刻度，摇匀；即得。
测定：精密量取供试品溶液1mL，置10mL具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“各加6％苯酚溶液1ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量(mg)，计算其中总糖(以葡萄糖计)的含量(单位为mg/mL)，根据其质量即可换算出刺五加组合物中总糖类物质的含量。
(3)、总黄酮：
仪器：T6型紫外可见分光光度计，购自北京普析通用仪器有限公司；MettlerXS105型电子天平，购自Mettler Toledo公司。
试剂：亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、无水乙醇均为分析纯。
对照品：芦丁，批号130829，或140629，纯度为>99.0％，购自上海融禾医药科技发展有限公司。
测定方法：
对照品溶液的制备：取芦丁对照品约10mg，精密称定，置50mL量瓶中，加60％乙醇适量，置80℃水浴中加热使溶解，放冷，加60％乙醇至刻度，摇匀；精密量取25mL，置50mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得，每1mL对照品溶液中含芦丁0.1mg。
标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1mL、2mL、3mL、4mL与5mL，分别置10mL量瓶中，各加5％亚硝酸钠溶液0.3mL，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.3mL，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠溶液(1mol/L)4mL，再加30％乙醇至刻度，摇匀，放置10分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录附录ⅤA)，在510nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定：称取制备得到的刺五加组合物，使用9倍体积甲醇将制备得到的刺五加组合物溶解后，精密量取1mL，置10mL量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“各加5％亚硝酸钠溶液0.3mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出其中含芦丁的重量(mg)，根据其质量即可换算出刺五加组合物中总黄酮类物质的含量。本品含总黄酮类物质以芦丁(C27H30O16)计，应为标示量的90.0％-110.0％。
(4)、总无机阳离子：
仪器：HITACHI 180-50型原子吸收分光光度计，购自日本日立公司。
对照品溶液的制备：取K，Na，Ca，Mg储备液用超纯水稀释制成高、低2种浓度的对照品溶液。
供试品溶液的制备：取刺五加组合物，用去离子水稀释500-1000倍，摇匀，即得。
测定：取对照品溶液和供试品溶液采用火焰法测定供试品溶液中K，Na，Ca，Mg的含量，计算4种离子的总量(mg/mL)。测试参数及对照品溶液浓度如下：
参数 Na<sup>+</sup> K<sup>+</sup> Ca<sup>2+</sup> Mg<sup>2+</sup>
波长(nm) 285.2 422.7 589.0 766.5
灯电流(mA) 7.5 7.5 10.0 10.0
狭缝(nm) 2.6 2.6 0.4 2.6
燃烧头高度 7.5 12.5 7.5 7.5
空气流量(L/min) 9.4 9.4 9.4 9.4
乙炔气流量(L/min) 2.0 2.6 2.2 2.3
标准品浓度系列(mg/L) 0,1,2 0,10,20 0,10,20 0,10,20
(5)、总无机阴离子：
仪器：ICS-2000型离子色谱仪。
试剂：氯离子、硫酸根、硝酸根标准品溶液购于国家钢铁材料测试中心钢铁研究总院。
对照品溶液的制备：精密量取氯离子、硫酸根、硝酸根标准品溶液，用去离子水稀释制成含6mg/L氯离子、5mg/L硫酸根、5mg/L硝酸根的对照品溶液。
供试品溶液的制备：取刺五加组合物，用去离子水稀释500-1000倍，摇匀，稀释液过C18柱，收集洗脱液，用滤膜过滤，取续滤液即得。
测定：分别以氯离子、硫酸根、硝酸根离子作为对照品，依照离子色谱法测定刺五加注射液中Cl-、SO4 2-和NO3 -的含量，测定条件如下：
色谱柱：IonPac AG15(4×50mm)和IonPac AS15(4×250mm)；
淋洗液：KOH溶液；
流速：每分钟1.0mL；
进样量：25μL；
检测方式：抑制电导检测；
梯度淋洗条件如下：
时间(分钟) 淋洗液
0 8mM KOH
26 50mM KOH
26.2 8mM KOH
30 8mM KOH
3、含量测定结果：
刺五加总苷(mg/g) 30.9
总黄酮(mg/g) 11.2
总糖(mg/g) 224.4
总无机阳离子(mg/g) 6.9
总无机阴离子(mg/g) 17.6
实施例2一种刺五加组合物及其制备方法和含量测定
1、制备方法：
(1)、前处理：将1000g刺五加清洗粉碎后，
加10倍体积纯化水煎煮3.5小时后，分离煎液；再加10倍体积纯化水煎煮3.5小时后，分离煎液；再加10倍体积纯化水煎煮3.5小时后，分离煎液；然后加入10倍体积的的冰，待冷却至室温后，煎煮3.5小时后，分离煎液；再加入10倍体积的的冰，待冷却至室温后，煎煮3.5小时后，分离煎液；合并煎液得液体A；
(2)、石硫法处理：待液体A冷却至28℃以下时，向其中加入重量百分比为20％的石灰乳调pH值至12.0，静置20小时，再用硫酸将pH值调至6.0，搅拌均匀后，静置30小时，滤取上清液，将上清液减压浓缩成在80℃测定相对密度为1.10的浓缩膏；
(3)、醇沉：当步骤(2)获得的浓缩膏温度降至40℃时，边搅拌边加入体积浓度为97％的乙醇至浓缩膏中乙醇浓度达到85％，搅拌均匀后，静置34小时后，滤取上清液，在乙醇加入过程中维持浓缩膏温度在40℃；
(4)、浓缩：将步骤(3)获得的上清液减压浓缩成在80℃测定相对密度为1.10的浓缩膏，既得。
2、含量测定：同实施例1。
3、含量测定结果：
刺五加总苷(mg/g) 141.9
总黄酮(mg/g) 161.3
总糖(mg/g) 692.1
总无机阳离子(mg/g) 3.1
总无机阴离子(mg/g) 16.8
实施例3一种刺五加组合物及其制备方法和含量测定
1、制备方法
(1)、前处理：将1000g刺五加清洗粉碎后，加8倍体积纯化水煎煮5小时后，分离煎液；再加8倍体积纯化水煎煮5小时后，分离煎液；然后加入8倍体积的的冰，待冷却至室温后，煎煮5小时后，分离煎液；再加入8倍体积的的冰，待冷却至室温后，煎煮5小时后，分离煎液；合并煎液得液体A；
(2)、石硫法处理：待液体A冷却至35℃以下时，向其中加入重量百分比为20％的石灰乳调pH值至10.0，静置24小时，再用硫酸将pH值调至5.5，搅拌均匀后，静置30小时，滤取上清液，将上清液减压浓缩成在80℃测定相对密度为1.20的浓缩膏；
(3)、醇沉：当步骤(2)获得的浓缩膏温度降至28℃时，边搅拌边加入体积浓度为99％的乙醇至浓缩膏中乙醇浓度达到82％，搅拌均匀后，静置40小时后，滤取上清液，在乙醇加入过程中维持浓缩膏温度在28℃；
(4)、浓缩：将步骤(3)获得的上清液减压浓缩成在80℃测定相对密度为1.15的浓缩膏，既得。
2、含量测定：同实施例1。
3、含量测定结果：
刺五加总苷(mg/g) 114.6.
总黄酮(mg/g) 168.4
总糖(mg/g) 393.9
总无机阳离子(mg/g) 57.1
总无机阴离子(mg/g) 116.8
实施例4一种刺五加组合物及其制备方法和含量测定
1、制备方法：
(1)、前处理：将1000g刺五加清洗粉碎后，加7倍体积纯化水煎煮2.5小时后，分离煎液；再加7倍体积纯化水煎煮2.5小时后，分离煎液；然后加入7倍体积的的冰，待冷却至室温后，煎煮2.5小时后，分离煎液；再加入7倍体积的的冰，待冷却至室温后，煎煮2.5小时后，分离煎液；合并煎液得液体A；
(2)、石硫法处理：待液体A冷却至35℃以下时，向其中加入重量百分比为20％的石灰乳调pH值至11.5，静置22小时，再用硫酸将pH值调至5.5，搅拌均匀后，静置26小时，滤取上清液，将上清液减压浓缩成在80℃测定相对密度为1.10的浓缩膏；
(3)、醇沉：当步骤(2)获得的浓缩膏温度降至30℃时，边搅拌边加入体积浓度为99％的乙醇至浓缩膏中乙醇浓度达到73％，搅拌均匀后，静置30小时后，滤取上清液，在乙醇加入过程中维持浓缩膏温度在30℃；
(4)、浓缩：将步骤(3)获得的上清液减压浓缩成在80℃测定相对密度为1.15的浓缩膏，既得。
2、含量测定：同实施例1。
3、含量测定结果：
刺五加总苷(mg/g) 126.7
总黄酮(mg/g) 164.2
总糖(mg/g) 451.9
总无机阳离子(mg/g) 10.5
总无机阴离子(mg/g) 27.6
实施例5一种刺五加组合物及其制备方法和含量测定
1、制备方法：
(1)、前处理：将1000g刺五加清洗粉碎后，加9倍体积纯化水煎煮4小时后，分离煎液；再加9倍体积纯化水煎煮4小时后，分离煎液；然后加入9倍体积的的冰，待冷却至室温后，煎煮4小时后，分离煎液；再加入9倍体积的的冰，待冷却至室温后，煎煮4小时后，分离煎液；合并煎液得液体A；
(2)、石硫法处理：待液体A冷却至25℃以下时，向其中加入重量百分比为20％的石灰乳调pH值至11.0，静置18小时，再用硫酸将pH值调至5.5，搅拌均匀后，静置28小时，滤取上清液，将上清液减压浓缩成在80℃测定相对密度为1.20的浓缩膏；
(3)、醇沉：当步骤(2)获得的浓缩膏温度降至33℃时，边搅拌边加入体积浓度为99％的乙醇至浓缩膏中乙醇浓度达到80％，搅拌均匀后，静置30小时后，滤取上清液，在乙醇加入过程中维持浓缩膏温度在33℃；
(4)、浓缩：将步骤(3)获得的上清液减压浓缩成在80℃测定相对密度为1.20的浓缩膏，既得。
2、含量测定：同实施例1。
3、含量测定结果：
刺五加总苷(mg/g) 167.4
总黄酮(mg/g) 197.9
总糖(mg/g) 736.1
总无机阳离子(mg/g) 17.3
总无机阴离子(mg/g) 31.4
实施例6一种刺五加注射液及其制备方法和含量测定
1、制备方法：
取本发明实施例1制备的刺五加组合物，加注射用水稀释为每1mL含总黄酮10mg，搅拌均匀后，3000rpm离心10分钟，取上清液，调节上清液pH值至4.0，搅拌均匀，得到药液A；将药液A经115℃灭菌30分钟后，于4℃静置冷藏12小时以上，冷藏后的上清液经过滤后得到的滤液为药液B；将药液B经121℃灭菌30分钟后，于4℃静置冷藏12小时，得到药液C；向药液C中加入重量百分比为0.6％的平均粒径为2μm的医用活性炭后，于70℃下处理30分钟，过滤脱碳，得到药液D；采用0.22μm滤膜对药液D进行两次过滤，得到药液E；调节药液E的pH值至5.0，测定其中总黄酮的含量后，加注射用水至全量，滤过，灌封，116℃灭菌40分钟，即得，灌封为两种规格：每支20mL和每支250mL。
2、含量测定：基本同实施例1
区别在于：
(1)、总苷：
供试品溶液制备：精密量取刺五加注射液0.5mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，再精密量取0.5mL(20mL规格)、1.3mL(250mL规格)，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
(2)、总糖：
供试品溶液制备：精密量取刺五加注射液0.5mL，置10mL量瓶中，加水至刻度，摇匀；精密量取0.5mL(20mL规格)、1.0ml(250mL规格)，置10mL量瓶中，加水至刻度，摇匀；即得。
(3)、总黄酮：
测定：精密量刺五加注射液，用30％乙醇制成每1mL约含总黄酮类物质0.3mg的溶液。精密量取1mL，置10mL量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“各加5％亚硝酸钠溶液0.3mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量(mg)，计算，即得。
(4)、总无机阳离子：
供试品溶液制备：取刺五加注射液，用去离子水稀释50-100倍，摇匀，即得。
(5)、总无机阴离子：
供试品溶液的制备：精密量取刺五加注射液0.1mL，用去离子水稀释至10mL，摇匀，稀释液过C18柱，收集洗脱液，用滤膜过滤，取续滤液即得。
其余步骤同本发明实施例1
3、含量测定结果：
每支20mL规格：
刺五加总苷(mg/mL) 2.9
总黄酮(mg/mL) 4.6
总糖(mg/mL) 17.3
总无机阳离子(mg/mL) 2.6
总无机阴离子(mg/mL) 1.5
实施例7一种刺五加注射液及其制备方法和含量测定
1、制备方法：
取本发明实施例2制备的刺五加组合物，加注射用水稀释为每1mL含总黄酮20mg，搅拌均匀后，5000rpm离心2分钟，取上清液，调节上清液pH值至5.5，搅拌均匀，得到药液A；将药液A经121℃灭菌20分钟后，于4℃静置冷藏12小时以上，冷藏后的上清液经过滤后得到的滤液为药液B；将药液B经115℃灭菌40分钟后，于4℃静置冷藏36小时，得到药液C；向药液C中加入重量百分比为0.4％的平均粒径为5μm的医用活性炭后，于85℃下处理10分钟，过滤脱碳，得到药液D；采用0.22μm滤膜对药液D进行两次过滤，得到药液E；调节药液E的pH值至6.5，测定其中总黄酮的含量后，加注射用水至全量，滤过，灌封，116℃灭菌40分钟，即得，灌封为两种规格：每支20mL和每支250mL。
2、含量测定：同实施例6
3、含量测定结果：
每支250mL规格：
刺五加总苷(mg/mL) 3.0
总黄酮(mg/mL) 1.5
总糖(mg/mL) 16.9
总无机阳离子(mg/mL) 2.4
总无机阴离子(mg/mL) 3.2
实施例8一种刺五加注射液及其制备方法和含量测定
取本发明实施例3制备的刺五加组合物，加注射用水稀释为每1mL含总黄酮15mg，搅拌均匀后，4000rpm离心5分钟，取上清液，调节上清液pH值至5.0，搅拌均匀，得到药液A；将药液A经121℃灭菌20分钟后，于4℃静置冷藏12小时以上，冷藏后的上清液经过滤后得到的滤液为药液B；将药液B经115℃灭菌40分钟后，于4℃静置冷藏24小时，得到药液C；向药液C中加入重量百分比为0.4％的平均粒径为3μm的医用活性炭后，于80℃下处理20分钟，过滤脱碳，得到药液D；采用0.22μm滤膜对药液D进行两次过滤，得到药液E；调节药液E的pH值至6.5，测定其中总黄酮的含量后，加注射用水至全量，滤过，灌封，116℃灭菌40分钟，即得，灌封为两种规格：每支20mL和每支250mL。
2、含量测定：同实施例6
3、含量测定结果：
每支20mL规格：
刺五加总苷(mg/mL) 6.4
总黄酮(mg/mL) 6.0
总糖(mg/mL) 41.1
总无机阳离子(mg/mL) 2.7
总无机阴离子(mg/mL) 1.4
实施例9一种刺五加注射液及其制备方法和含量测定
取本发明实施例4制备的刺五加组合物，加注射用水稀释为每1mL含总黄酮12mg，搅拌均匀后，3500rpm离心4分钟，取上清液，调节上清液pH值至5.5，搅拌均匀，得到药液A；将药液A经121℃灭菌20分钟后，于4℃静置冷藏12小时以上，冷藏后的上清液经过滤后得到的滤液为药液B；将药液B经115℃灭菌40分钟后，于4℃静置冷藏20小时，得到药液C；向药液C中加入重量百分比为0.4％的平均粒径为5μm的医用活性炭后，于75℃下处理15分钟，过滤脱碳，得到药液D；采用0.22μm滤膜对药液D进行两次过滤，得到药液E；调节药液E的pH值至6.5，测定其中总黄酮的含量后，加注射用水至全量，滤过，灌封，116℃灭菌40分钟，即得，灌封为两种规格：每支20mL和每支250mL。
2、含量测定：同实施例6
3、含量测定结果：
每支250mL规格：
刺五加总苷(mg/mL) 1.4
总黄酮(mg/mL) 4.7
总糖(mg/mL) 10.2
总无机阳离子(mg/mL) 2.9
总无机阴离子(mg/mL) 1.4
实施例10一种刺五加注射液及其制备方法和含量测定
取本发明实施例5制备的刺五加组合物，加注射用水稀释为每1mL含总黄酮18mg，搅拌均匀后，4500rpm离心7分钟，取上清液，调节上清液pH值至5.5，搅拌均匀，得到药液A；将药液A经121℃灭菌20分钟后，于4℃静置冷藏12小时以上，冷藏后的上清液经过滤后得到的滤液为药液B；将药液B经115℃灭菌40分钟后，于4℃静置冷藏32小时，得到药液C；向药液C中加入重量百分比为0.5％的平均粒径为4μm的医用活性炭后，于80℃下处理25分钟，过滤脱碳，得到药液D；采用0.22μm滤膜对药液D进行两次过滤，得到药液E；调节药液E的pH值至6.5，测定其中总黄酮的含量后，加注射用水至全量，滤过，灌封，116℃灭菌40分钟，即得，灌封为两种规格：每支20mL和每支250mL。
2、含量测定：同实施例6
3、含量测定结果：
每支20mL规格：
刺五加总苷(mg/mL) 7.2
总黄酮(mg/mL) 7.1
总糖(mg/mL) 50.7
总无机阳离子(mg/mL) 0.1
总无机阴离子(mg/mL) 0.1
对比例1一种刺五加提取物
中国专利申请201210533220公开的方法及制备的刺五加提取物。
对比例2一种刺五加注射液
中国专利申请201210049755中实施例6公开的刺五加注射液。
对比例3一种刺五加注射液
中国专利申请201010165556中实施例5公开的刺五加注射液。
对比例4一种刺五加注射液
中国专利申请201410508745中实施例4公开的刺五加注射液。
对比例5
一种刺五加组合物及其制备方法和含量测定
制备方法基本同本发明实施例5，区别在于：
(1)、前处理：将1000g刺五加清洗粉碎后，加9倍体积纯化水煎煮4小时后，分离煎液；再加9倍体积纯化水煎煮4小时后，分离煎液；合并煎液得液体A。
含量测定方法同实施例5
含量测定结果：
刺五加总苷(mg/g) 35.1
总黄酮(mg/g) 13.9
总糖(mg/g) 146.8
总无机阳离子(mg/g) 29.2
总无机阴离子(mg/g) 67.4
根据含量可看出，去掉加冰步骤后，制备的刺五加组合物中的大类成分含量明显降低，且无机盐杂质增多。
对比例6一种刺五加组合物
中国专利申请201210049755中实施例2公开的刺五加组合物。
对比例7一种刺五加提取物
中国专利申请201010165556中实施例2公开的刺五加提取物。
实验例1对高血脂症的影响
志愿者：共160人，清晨空腹血脂符合下列标准之一：甘油三酯(TG)≥1.70mmol/L；总胆固醇(TC)≥5.20mmol/L。有严重内分泌、肝肾疾病及家族性纯合子高胆固醇血症，近3个月内发生过心脑血管病，难以控制的高血压患者除外。200例患者中，男88例，女72例，年龄42-69岁，平均年龄51岁。
试验方法：志愿者随机分为4组，每组40人，男女比例随机。实施例1组40人，男23人，女17人，施用本发明实施例6的刺五加注射液；对比例2组40人，男20人，女20人，施用对比例2的刺五加注射液；对比例3组40人，男24人，女16人，施用对比例3的刺五加注射液；对比例4组40人，男21人，女19人，施用对比例4的刺五加注射液。施用方法为：分别取100mL，加入到5％葡萄糖注射液250mL中，静脉滴注，每天1次，连续10天为一个疗程，停药5天后再用下一个疗程，连续使用三个疗程。
结果测定：血脂测定方法为：治疗结束后测定血脂水平，取血前1晚禁止饮酒及高脂饮食，空腹12小时以上取静脉血，及时分离血清。疗效评定标准：按卫生部1998年颁发的心血管药物临床研究指导原则进行判定。采用SPSS11.0统计软件处理数据。
有效判定：TC下降达10％-20％，TG下降达20％-40％，HDL-C上升0.18-0.26mmol/L。
试验结果：治疗前后血脂变化见下表：
由试验结果可知本发明实施例1在降低总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、甘油三酯(TG)上以及提高高密度脂蛋白(HDL-C)上的效果明显优于对比例2-4；实施例1组对TC、TG、HDL-C治疗的总有效率为95.7％，对比例2-4组的总有效率分别为90.1％、85.6％、87.0％。本发明其他实施例与实施例6有相同或相似的效果。因此，本发明提供的刺五加组合物对高血脂症的效果明显优于现有技术。
实验例2对高血糖的影响
实验动物：昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄各半。
实验试剂：四氧嘧啶，购自Sigma公司。
实验分组：空白对照组、模型组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例4组、实施例5组、对比例1组、对比例6组、对比例7组。
试验方法：
(1)模型制备：将四氧嘧啶用生理盐水配成2％水溶液(现用现配)。取昆明种小鼠，雌雄各半，按四氧嘧啶溶液50mg/kg的剂量，对禁食12小时后的小鼠进行尾静脉注射。连续饲养3天后，禁食12小时，眼眶采血，分离血清，测定空腹血糖，以血糖大于14mmol/L作为糖尿病模型小鼠。
(2)分组给药：取糖尿病模型小鼠90只，雌雄各半，随机分为9组，每组10只，分别为模型组、实施例1-5组、对比例1、6、7组；另取重量相近正常昆明种小鼠10只，雌雄各半，作为空白对照组。实施例1-5组、对比例1、6、7分别灌胃给予实施例1-4的刺五加组合物、对比例1、6、7的提取物或组合物，剂量均为1.0g生药量/kg体重，模型组和空白对照组分别按照15mL/kg体重灌胃给予同体积的生理盐水。连续灌胃15天，每天观察小鼠外貌特征的改变。试验结束后对试验动物禁食12小时，眼眶静脉丛采血，测定空腹血糖。
试验结果：
(1)外貌：在试验结束后，四氧嘧啶模型组动物有明显多饮、多尿、体型消瘦、毛发失去光泽、蜷卧弓背没精神等现象。而空白对照组动物精神状况良好，毛发光泽，生长发育正常。实施例1-5组动物外貌特征得到显著改善，对比例1、6、7组动物外貌特征有所改善，但效果不如实施例1-5组明显，实施例1-5组效果改善明显程度从大到小依次是：实施例5、实施例4、实施例3、实施例1、实施例2。
(2)血糖变化：
组别 血糖值
空白对照组 6.46±0.59
模型组 19.87±1.30
实施例1组 13.05±0.69
实施例2组 13.82±0.95
实施例3组 12.98±0.94
实施例4组 12.25±0.77
实施例5组 11.29±0.61
对比例1组 16.45±0.82
对比例6组 14.01±0.99
对比例7组 17.95±1.02
由试验结果可知本发明提供的刺五加组合物对高血糖模型小鼠的血糖值的降低效果明显优于现有技术。
实验例3对小鼠睾丸的影响
实验动物：昆明种小鼠，体重18-22g，雄性。
实验分组：空白对照组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例4组、实施例5组、对比例1组、对比例2组、对比例3组、对比例4组。
试验方法：实施例1-5组分别给予本发明实施例6-10的刺五加注射液，对比例1组给予用生理盐水稀释过的刺五加提取物溶液，对比例2-4组分别给予对比例2-4的注射液，各组给药剂量均为0.2mL。空白对照组给予等体积的生理盐水。每日腹腔注射一次，连续给药30天，于末次给药次日经颈椎脱臼处死小鼠，称体重，剖取双侧睾丸并称重，随机将每组动物左侧或右侧睾丸作常规石蜡切片，H.E染色后作镜检观察。
试验结果：
(1)对睾丸重量的影响：
本发明实施例1-5组小鼠睾丸重量分别增加了
实施例1-5组小鼠睾丸重量分别增加了39.1％、43.4％、52.2％、47.8％、56.5％；对比例1-4组小鼠睾丸重量分别增加了17.4％、30.4％、21.7％、26.1％。
(2)对小鼠睾丸曲细精管直径的影响
组别 曲细精管直径
空白对照组 87.9±5.1
实施例1组 119.3±6.2
实施例2组 116.8±6.5
实施例3组 112.6±6.0
实施例4组 114.5±5.9
实施例5组 121.7±6.1
对比例1组 104.6±5.4
对比例2组 109.3±5.9
对比例3组 103.7±5.5
对比例4组 106.4±5.1
实施例1-5组小鼠睾丸曲细精管直径分别增加35.7％、32.9％、28.1％、30.3％、38.5％；对比例1-45组小鼠睾丸曲细精管直径分别增加19.0％、24.3％、18.0％、21.0％。光镜下观察小鼠睾丸切片，各组曲细精管的组织结构均正常，均有正常精子产生。实施例1-5组的曲细精管比对比例1-4组更粗，管壁生精细胞的层数更多。因此，本发明提供的刺五加组合物在不孕不育治疗方面的效果优于现有技术。
以上所述仅为本发明的部分对比例和部分较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种刺五加组合物，其特征在于：所述的刺五加组合物中含有刺五加总苷31-167mg/g、总黄酮11-199mg/g、总糖224-736mg/g和总无机盐20-173mg/g；所述的刺五加组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)、前处理：将刺五加清洗粉碎后，加水煎煮2-3次后，加入与水等体积的冰，待冷却至室温后，继续煎煮1次，再加入与水等体积的冰，待冷却至室温后，继续煎煮1次，合并煎液得液体A；
(2)、石硫法处理：待液体A冷却至40℃以下时，向其中加入重量百分比为20％的石灰乳调pH值至10.0-12.0，静置16-24小时，再用硫酸将pH值调至5.0-6.0，搅拌均匀后，静置16-30小时，滤取上清液，将上清液减压浓缩成在80℃测定相对密度为1.10-1.20的浓缩膏；
(3)、醇沉：当步骤(2)获得的浓缩膏温度降至25-40℃时，边搅拌边加入体积浓度为95％以上的乙醇至浓缩膏中乙醇浓度达到70-85％，搅拌均匀后，静置16-40小时后，滤取上清液，在乙醇加入过程中维持浓缩膏温度在25-40℃；
(4)、浓缩：将步骤(3)获得的上清液减压浓缩成在80℃测定相对密度为1.10-1.20的浓缩膏，即得。
2.如权利要求1所述的刺五加组合物，其特征在于，所述的刺五加组合物中含有刺五加总苷80-142mg/g、总黄酮79-161mg/g、总糖342-692mg/g和总无机盐20-49mg/g。
3.如权利要求1所述的刺五加组合物，其特征在于，所述的刺五加组合物中含有刺五加总苷82-115mg/g、总黄酮91-168mg/g、总糖394-628mg/g和总无机盐20-25mg/g。
4.一种含有权利要求1-3任意一项所述的刺五加组合物的制剂，其特征在于：所述的制剂由权利要求1-3任意一项所述的刺五加组合物制成，或由权利要求1-3任意一项所述的刺五加组合物和药学上可接受的辅料制成。
5.如权利要求4所述的制剂，其特征在于：所述的制剂为注射液、冻干粉针剂、颗粒剂、丸剂、片剂、喷雾剂、糖浆剂、胶囊剂或合剂。
6.如权利要求5所述的制剂，其特征在于：所述的注射液含有，按规格划分如下：
每支20mL：刺五加总苷2.9-7.2mg/mL、总黄酮4.6-7.1mg/mL、总糖14.4-50.7mg/mL、总无机阳离子0.1-2.7mg/mL和总无机阴离子0.1-1.5mg/mL；
每瓶250mL：刺五加总苷1.4-3.0mg/mL、总黄酮1.5-4.7mg/mL、总糖10.2-16.9mg/mL、总无机阳离子2.2-2.9mg/mL和总无机阴离子1.4-3.2mg/mL。
7.一种制备权利要求6所述的制剂的方法，其特征在于：所述的方法包括以下步骤：取所述的刺五加组合物，加注射用水稀释为每1mL含总黄酮10-20mg，搅拌均匀后，3000-5000rpm离心2-10分钟，取上清液，调节上清液pH值至4.0-5.5，搅拌均匀，得到药液A；将药液A经115-121℃灭菌20-30分钟后，于4℃静置冷藏12小时以上，冷藏后的上清液经过滤后得到的滤液为药液B；将药液B经115-121℃灭菌30-40分钟后，于4℃静置冷藏12-36小时，得到药液C；向药液C中加入医用活性炭后，于70-85℃下处理10-30分钟，过滤脱碳，得到药液D；采用0.22μm滤膜对药液D进行两次过滤，得到药液E；调节药液E的pH值至5.0-6.5，测定其中总黄酮的含量后，加注射用水至全量，滤过，灌封，116℃灭菌40分钟，即得。
8.一种权利要求1-3任意一项所述的刺五加组合物或权利要求6所述的制剂的含量检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：
(1)、总苷：以紫丁香苷为对照品，依照分光光度法在265nm波长处测定吸收度，计算刺五加注射液中总苷的含量；
(2)、总糖：以葡萄糖为对照品，依照分光光度法在490nm波长处测定吸收度，计算刺五加注射液中总糖的含量；
(3)、总黄酮：以芦丁为对照品，依照分光光度法在510nm波长处测定吸收度，计算刺五加注射液中总黄酮的含量；
(4)、总无机阳离子：分别以钠、钾、钙、镁为对照品，采用火焰法测定注射液中Na+、K+、Ca2+和Mg2+的含量，测定条件如下：
(5)、总无机阴离子：分别以氯离子、硫酸根、硝酸根离子作为对照品，依照离子色谱法测定刺五加注射液中Cl-、SO4 2-和的含量，测定条件如下：
色谱柱：IonPac AG15(4×50mm)和IonPac AS15(4×250mm)；
淋洗液：K0H溶液；
流速:每分钟1.0mL；
进样量：25μL；
检测方式:抑制电导检测；
梯度淋洗条件如下:
时间(分钟) 淋洗液 0 8mM KOH 26 50mM KOH 26.2 8mM KOH 30 8mM KOH
(6)、总固体：蒸发干燥后，称量计算总固体含量。
9.权利要求1-3任意一项所述的刺五加组合物或权利要求4-6任意一项所述的制剂在制备治疗高血脂、高血糖或生殖系统疾病的药物中的应用。
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