CN1626227A

CN1626227A - 一种丹参红花冻干粉针剂及其制备方法

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Publication number: CN1626227A
Application number: CN 200410058503
Authority: CN
Inventors: 张正生
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2004-08-16
Filing date: 2004-08-16
Publication date: 2005-06-15
Anticipated expiration: 2024-08-16
Also published as: CN1278703C

Abstract

本发明涉及一种由丹参和红花组成的丹红冻干粉针剂及其制备工艺，本发明工艺在用水加热提取时，加入了水溶性抗氧化剂，防止了有效成分的氧化分解，并采用高速离心、大孔吸附树脂柱吸附等手段精制、纯化，进一步采用中空纤维柱超滤，提高了本发明注射用冻干粉针剂的疗效和质量，适宜于工业化生产。

Description

一种丹参红花冻干粉针剂及其制备方法

所属技术领域

本发明属中药制药技术领域，具体涉及一种由丹参和红花组成的中药丹红注射液和注射用冻干粉针剂及其制备工艺。

背景技术

丹参为传统中药，临床上广泛用于心脑血管系统方面的疾病治疗，其主要活性成分为水溶性丹酚酸类成分，包括丹酚酸A～C、迷迭香酸及其甲酯、丹参素、原儿茶醛、原儿茶酸等化学成分，具有抗血小板聚集、抗血栓形成、改善微循环、抗氧化损伤等作用，因此能多途径发挥作用起到保护心肌和心脑血管系统的作用。国内对丹参水溶性成分的研究均采用水加热提取后过大孔树脂，然后再过聚酰胺柱的方法，或先过聚酰胺柱，再过大孔树脂柱的方法，不仅成本高、周期长，而且得率低。中国专利CN98111076、CN02160771、CN02155004均采用上述方法。丹酚酸为多元酚结构，易被氧化降解，不易长时间受热，上述诸方法要么直接用水加热煎煮，要么在100℃以下浸渍，存在着有效成分易氧化分解或提取不完全的缺点。

红花为中药中活血化瘀的代表性药，其提取物具有抗心肌缺血、抗血小板激活因子、抗炎等多方面的心脑血管药理活性。多年来，国内外对红花进行了大量研究，发现其含有的红花总黄色素为其主要活性成分。目前，国内对红花总黄色素的提取制备也采用水提取，过大孔树脂柱，然后再过聚酰胺柱的精制方法制备，如中国专利CN02133563、CN99123731等。

以丹参和红花组方的丹红注射液在临床上对冠心病、心绞痛、脑血管病等多种疾病具有较好的疗效。现行部颁标准采用稀醇提丹参后，醇提后的药渣再与红花共水提的方法，纯化效果不好，有效成分的含量不高，制成的注射液水针剂既不稳定，也不便于运输，因此，其理想剂型为冻干粉针剂。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，根据丹参和红花中有效成分受热易氧化分解的特点，对丹参和红花分别采用含有抗氧化剂的水溶液提取的方案，较好的解决了上述问题，且其工艺简单、成本低，适宜于工业化生产；另外，分别根据丹参和红花中所含有效成分理化特点，采用不同的方法对其进行精制纯化。对红花、丹参提取液采用高速离心后，分别上大孔吸附树脂柱，先用水洗去杂质，再分别用低浓度的醇洗脱，得到其有效部位，对有效部位再进一步采用有机溶剂萃取。分别得到丹参总酚酸和红花总黄色素后，将二者用适量注射用水溶解，过截留分子量为3000的中空纤维柱超滤，可以除去热原和大分子鞣质，并能显著提高注射液的澄明度。

本发明通过以下技术方案实现：

(1)取丹参药材，粉碎成粗粉，用含有0.1％-0.3％抗氧剂水溶液(抗氧剂可以是亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠或者维生素C中任一种)加热煎煮提取3-5次，每次60～90min，合并提取液并高速离心(10000～20000r/min)，离心液用酸液调pH值至2-4，冷藏，滤过，滤液加到已处理好的大孔吸树脂柱上，先用2-5倍量树脂柱体积的水洗去杂质，再用20％-50％的乙醇3-5倍量洗脱，收集20％-50％的乙醇洗脱液，减压回收溶剂至药液与生药量之比为1∶1-2，用水饱和的正丁醇或醋酸乙酯进行萃取，萃取液减压回收溶剂至干，即得丹参总酚酸类成分。

(2)取红花，粉碎成粗粉，用含有0.1％-0.3％抗氧剂的水溶液(抗氧剂可以是亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠或者维生素C中任一种)加热煎煮提取3-5次，每次60～90min，合并提取液，提取液高速离心(10000～20000r/min)，离心液加到已处理好的大孔吸树脂柱上，先用2-5倍量树脂柱体积的水洗去杂质，再用20％-50％的乙醇3-5倍量洗脱，收集20％-50％的乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，即得红花总黄色素类成分。

(3)分别取丹参总丹酚酸和红花总黄色素，加注射用水溶解，使每1ml的药液相当于1g生药，过截留分子量为3000的中空纤维柱超滤，超滤液加5％-8％的注射用冻干赋形剂，搅拌加热至沸，用0.1％的活性炭煮沸15min，趁热滤过，滤液以0.22μm的微孔滤膜滤过，灌装于西林瓶，冷冻干燥，轧盖，即得本发明的丹红冻干粉针。

下面通过药理实验对本发明的有益效果作进一步的说明

实验一：不同提取方法对丹参素和红花黄色素得率的影响.

1.不同提取方法对丹参素得率的影响

丹参传统提取方法是采用水煎煮3次，每次2小时；本发明方法采用含有0.1％-0.3％抗氧剂的水溶液煎煮4次，每次1.5小时。精密称取丹参2份，每份10克。1份采用传统提取方法，每次加入10倍量水，提取3次，每次提取液过滤后，定容至200ml；另1份采用本发明方法提取，每次加入10倍量含有0.1％亚硫酸氢钠的水溶液，煎煮1.5小时，每次提取液过滤后，定容至200ml。参照陈彦等方法(江苏中医药.2003年24卷6期)，采用高效液相色谱法测定，结果见表1。

表1 不同提取方法对丹参素得率的影响

传统水提取法次数丹参素含量(mg/g) 累积含量(mg/g)	本发明提取法次数丹参素含量(mg/g) 累积含量(mg/g)
传统水提取法次数丹参素含量(mg/g) 累积含量(mg/g)	本发明提取法次数丹参素含量(mg/g) 累积含量(mg/g)	1 1.6728 1.6728	1 2.0364 2.0364^*
2 1.0321 2.7049	2 1.1437 3.1801^*	1 1.6728 1.6728	1 2.0364 2.0364^*
2 1.0321 2.7049	2 1.1437 3.1801^*	3 0.4137 3.1186	3 0.7253 3.9054^*
	4 0.3482 4.2536^**	3 0.4137 3.1186	3 0.7253 3.9054^*

^*p＜0.05 ^**p＜0.01

2.不同提取方法对红花总黄色素得率的影响

红花黄色素传统提取方法是采用50-100倍量水煎煮3次，每次2小时；本发明提取方法是采用50-100倍量含0.1％-0.3％抗氧剂的水溶液煎煮3次，每次1.5小时。

精密称取红花6份，每份1.0克。3份采用传统提取方法，每次加入100ml水，提取3次，提取液过滤，合并3次滤液，定容至300ml；另3份采用本发明方法提取，每次加入100ml含有0.1％维生素C的水溶液，煎煮1.5小时，提取液过滤，合并3次滤液，定容至300ml。参照祝明等方法(中药材.2000年23卷8期)方法，采用高效液相色谱法测定，结果见表2。

表2 不同提取方法对红花总黄色素得率的影响

传统提取方法样品号实测量(mg/g)	本发明提取方法样品号实测量(mg/g)
传统提取方法样品号实测量(mg/g)	本发明提取方法样品号实测量(mg/g)	1 8.3254	1 8.8647
2 7.9637	2 9.0346	1 8.3254	1 8.8647
2 7.9637	2 9.0346	3 8.1452	3 9.1085

将二种提取方法3个样品实测量相加后比较，可以看到本发明方法的红花总黄色素得率较传统提取方法的提高了10.5％。

实验二：本发明的丹红冻干粉针剂、丹红注射液对大鼠血液流变学的影响

一、实验材料

SD大白鼠：由第一军医大学实验动物中心提供，60只，体重200±20g，雄性。肾上腺素，上海生物化学制药厂；丹红注射液，三江制药有限公司生产；丹红冻干粉针制剂(丹红冻干粉针制剂20mg与丹红注射液1ml所含生药量相当)，广东天之骄药物开发有限公司实验室提供；丹参注射液，正大天晴制药有限公司。

二、实验方法

大鼠60只随机分6组：A正常对照组(生理盐水组)、B血淤模型组、C丹红注射剂组0.15ml/kg、D丹红注射剂组0.3ml/kg、E丹红冻干粉针剂组1.5mg/kg、F丹红冻干粉针剂组3mg/kg、G阳性对照丹参注射液组0.3ml/kg。每日1次，连续im给药7d，末次给药后30min，除对照组用0.9％NS外，其余各组均皮下注射0.1％肾上腺素(0.9mg/kg)，30min后将大鼠放入冰水中冷浴8min，间隔2h后再注射等量肾上腺素，制备血淤模型。腹主动脉取血5ml，肝素抗凝，测定10s^-1、40s^-1、200s^-1全血粘度、血浆比粘度、红细胞压积。实验室温度控制在(20±1)℃。

三、实验结果

与正常组相比，血淤模型组低、中、高切率的全血粘度、血浆比粘度、纤维蛋白原、红细胞压积均明显升高(P＜0.01)，说明模型可靠。与模型组相比，丹红冻干粉针剂及注射液组，阳性对照丹参注射液组均能明显改善血液流变学指标(P＜0.05)；丹红冻干粉针剂组疗效优于注射液组，实验结果见表3。

表3 丹红注射制剂对急性血淤模型大鼠血液流变学的影响(x±s，n＝10)

气血粘度

组血浆红细

剂量 10

别 40s^-1 200s^-1 比粘度胞压积

s^-1

20.87 6.91 1.45 0.42

A - 11.44±2.73

±5.16 ±1.02 ±0.10 ±0.03

38.25 8.29 1.85 0.48

B - 16.65±2.43^*

±9.04^* ±0.59^* ±0.05^* ±0.03^*

21.64 6.48 1.68 0.39

C 1.5mg/kg 11.73±2.23^a

±5.26^a ±0.43^a ±0.04^a ±0.02^a

17.43 6.43 1.67 0.39

D 3mg/kg 9.81±1.33^a

±2.46^a ±0.53^a ±0.13^a ±0.03^a

28.36 7.57 1.70 0.40

E 0.15ml/kg 14.36±3.24

±9.47^a ±0.58^a ±0.14 ±0.02^a

23.76 6.98 1.68 0.39

F 0.3ml/kg 12.08±3.34^a

±4.82^a ±0.56^a ±0.07^a ±0.04^a

22.18 6.65 1.66 0.40

G 0.3ml/kg 11.25±2.09^a

±4.74^a ±0.78^a ±0.11^a ±0.04^a

注：^*与正常组比较P＜0.01，^a与模型组比较P＜0.05

具体实施方式

实施例一：规格10000瓶

(1)取丹参药材15000g，粉碎成粗粉，用含有0.1％亚硫酸氢钠水溶液加热煎煮提取3次，每次60min，合并提取液，以20000r/min高速离心，离心液用盐酸调pH值至2，冷藏，滤过，滤液加到已处理好的D₁₀₁大孔吸树脂柱上，先用2倍量树脂柱体积的水洗去杂质，再用30％的乙醇3倍量洗脱，收集30％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇至药液与生药量之比为1∶2，用醋酸乙酯萃取4次，萃取液合并后减压回收溶剂至干，即得丹参总酚酸类成分。

(2)取红花5000g，湿法粉碎，用含有0.1％的维生素C水溶液加热煎煮提取3次，每次60min，合并提取液，高速离心(20000r/min)，离心液加到已处理好的D-4020大孔吸树脂柱上，先用2倍量树脂柱体积的水洗去糖类等杂质，再用3倍于树脂柱体积的30％的乙醇洗脱，收集30％的乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，即得红花总黄色素类有效部位。

(3)分别取丹参总丹酚酸和红花总黄色素，加新制的注射用水溶解，使每1ml的药液相当于1g生药，过截留分子量为3000的中空纤维柱超滤，超滤液加6％(w/v)的注射用冻干赋形剂，搅拌加热至沸，加入0.1％的活性炭煮沸15min，趁热滤过，滤液以0.22μm的微孔滤膜滤过，灌装于西林瓶，冷冻干燥，轧盖，即得。

实施例二：规格1000瓶

(1)取丹参药材1500g，粉碎成粗粉，用含有0.1％焦亚硫酸钠水溶液加热煎煮提取3次，每次90min，合并提取液并高速离心(10000r/min)，离心液用盐酸调pH值至2.4，冷藏，滤过，滤液加于已处理好的AB-8型大孔吸树脂柱上，先用2倍量树脂柱体积的水洗脱，再用40％的乙醇4倍量洗脱，收集40％的乙醇洗脱液，减压回收至药液与生药量之比为1∶2，用水饱和的正丁醇萃取3次，萃取液减压回收溶剂至干，即得丹参总酚酸类成分。

(2)取红花500g，湿法粉碎，用含有0.1％亚硫酸氢钠的水溶液加热煎煮提取3次，每次90min，合并提取液，提取液高速离心(10000r/min)后加到已处理好的X-5型大孔吸树脂柱上，先用3倍量树脂柱体积的水洗去杂质，再用3倍量40-50％的乙醇洗脱，收集40-50％的乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，即得红花总黄色素类有效部位。

(3)分别取丹参总丹酚酸和红花总黄素，加新制的注射用水溶解，使每1ml的药液相当于1g生药，过截留分子量为3000的中空纤维柱超滤，超滤液加5％的注射用甘露醇，搅拌加热至沸，用0.1％的活性炭煮沸15min，趁热滤过，滤液以0.22μm的微孔滤膜滤过，灌装于西林瓶，冷冻干燥，轧盖，即得本发明的丹红冻干粉针。

实施例三：规格5000瓶

(1)取丹参药材7500g，粉碎成粗粉，用含有0.1％的维生素C水溶液加热煎煮提取4次，每次60min，合并提取液并高速离心(15000r/min)，离心液用酸液调pH值至2，冷藏，滤过，滤液加到已处理好的D₁₀₁大孔吸树脂柱上，先用2倍量树脂柱体积的水洗脱，弃去水洗脱液，再用3倍于树脂柱体积30％的乙醇洗脱，收集30％的乙醇洗脱液，减压回收溶剂至药液与生药量之比为1∶2，用醋酸乙酯萃取4次，萃取液减压回溶剂至干，即得丹参总酚酸类成分。

(2)取红花2500g，湿法粉碎后用含有0.1％的焦亚硫酸钠水溶液加热煎煮提取5次，每次60min，合并提取液，提取液高速离心(20000r/min)，离心液加到已处理好的D-3520型大孔吸树脂柱上，先用2倍量树脂柱体积的水洗去杂质，再用25％的乙醇5倍量洗脱，收集25％的乙醇洗脱液，低温减压回收溶剂至干，即得红花总黄色素类有效部位。

(3)分别取丹参总丹酚酸和红花总黄素，加注射用水溶解，使每1ml的药液相当于1g生药，过截留分子量为3000的中空纤维柱超滤，超滤液加8％的乳糖，搅拌加热至沸，用0.1％的活性炭煮沸15min，趁热滤过，滤液以0.22μm的微孔滤膜滤过，灌装于西林瓶，冷冻干燥，轧盖，即得本发明的丹红冻干粉针。

实施例四：规格20000瓶

(1)取丹参药材30000g，粉碎成粗粉，用含有0.1％的维生素C水溶液加热煎煮提取4次，每次60min，合并提取液并高速离心(10000r/min)，离心液用酸液调pH值至3，冷藏，滤过，滤液加到已处理好的D₁₀₁大孔吸树脂柱上，先用2倍量树脂柱体积的水洗脱，弃去水洗脱液，再用3倍于树脂柱体积30％的乙醇洗脱，收集30％的乙醇洗脱液，减压回收溶剂至药液与生药量之比为1∶2，用醋酸乙酯萃取4次，萃取液减压回溶剂至干，即得丹参总酚酸类成分。

(2)取红花10000g，湿法粉碎后用含有0.1％的焦亚硫酸钠水溶液加热煎煮提取5次，每次60min，合并提取液，提取液高速离心(10000r/min)，离心液加到已处理好的D-3520型大孔吸树脂柱上，先用2倍量树脂柱体积的水洗去杂质，再用25％的乙醇5倍量洗脱，收集25％的乙醇洗脱液，低温减压回收溶剂至干，即得红花总黄色素类有效部位。

Claims

1、一种丹参红花冻干粉针剂，其特征在于是由下述方法制备的：

(1)用含抗氧剂的水溶液提取；

(2)采用高速离心法分离提取液；

(3)用大孔树脂吸附精制；

(4)用溶剂萃取法进一步纯化；

(5)用超滤方法进一步精制；

(6)提取有效成分与冻干赋形剂混合。

2、根据权利要求1所述的一种丹参红花冻干粉针剂，其特征在于它包括以下步骤：

(1)取丹参药材，粉碎成粗粉，用含抗氧剂的水溶液加热煎煮提取3-5次，每次60～90min，合并提取液并高速离心，离心液用酸液调pH值至2-4，冷藏，滤过，滤液加到已处理好的大孔吸树脂柱上，先用2-5倍量树脂柱体积的水洗去杂质，再用20％-50％的乙醇3-5倍量洗脱，收集20％-50％的乙醇洗脱液，减压回收溶剂至药液与生药量之比为1∶1-2，用有机溶剂萃取3-5次，萃取液合并，减压回溶剂至干，即得丹参总酚酸类成分；

(2)取红花，粉碎成粗粉，用含抗氧剂的水溶液加热煎煮提取3-5次，每次60～90min，合并提取液，提取液高速离心，离心液加到已处理好的大孔吸树脂柱上，先用2-5倍量树脂柱体积的水洗去杂质，再用20％-50％的乙醇3-5倍量洗脱，收集20％-50％的乙醇洗脱液，减压回溶剂至干，即得红花总黄色素类成分；

(3)分别取丹参总丹酚酸和红花总黄素，加注射用水溶解，使每1ml的药液相当于1g生药，超滤，超滤液加5％-8％的注射用冻干赋形剂，搅拌加热至沸，用0.1-0.2％的活性炭煮沸15min，趁热滤过，滤液以微孔滤膜滤过，灌装于西林瓶，冷冻干燥，轧盖，即得。

3、根据权利要求1或2所述的粉针剂，其中含抗氧剂的水溶液中的抗氧剂是亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠或者维生素C中的一种，抗氧剂在水溶液中的含量为0.1％-0.3％。

4、根据权利要求1或2中所述的粉针剂，其中高速离心法分离提取液时的离心速度为10000～20000r/min。

5、权利要求1或2中所述的粉针剂，其中大孔吸附树脂是D₁₀₁，AB-8，D-4020，D-3520和X-5中的一种。

6、根据权利要求1或2所述的粉针剂，其中溶剂萃取时用于萃取的溶剂是乙酸乙酯，水饱和的正丁醇中的一种。

7、根据权利要求1或2所述的粉针剂，其中用于超滤的介质是截流分子量为3000的中空纤维柱和0.22μm的微孔滤膜。