CN1872148A - 一种治疗心脑血管疾病的注射用丹红冻干粉的制备方法及检测方法 - Google Patents

Abstract

一种治疗心脑血管疾病的注射用丹红冻干粉的制备方法及检测方法，涉及注射用丹红冻干粉的制备工艺。原注射液使用的是水溶性部分，且原质量标准中的制法中无纯化过程，不能除去大部分杂质，产品质量控制难度大，制剂质量低，另外原剂型注射液的稳定性差，不利于运输、贮存。本发明提供了一种科学规范的的提取工艺，使有效成份更加有效的提取出来。参照丹参类注射液传统提取纯化工艺，采用水提醇沉法，对红花进行水提正交设计、丹参水提正交设计，最终确定红花温浸、丹参煎煮，合并二者提取液浓缩进行醇沉纯化，对浓缩液的相对密度、醇沉浓度等进行了优化选择，并用丹酚酸B、丹参素钠、原儿茶醛、红花黄色素进行了多指标综合评价各参数的选择，生产出来的产品质量高，稳定性好。

Description

一种治疗心脑血管疾病的注射用丹红冻干粉的制备方法及检测方法

[技术领域]

本发明涉及中药的制备工艺技术领域，具体涉及注射用丹红冻干粉的制备工艺

[背景技术]

丹红注射液是由丹参、红花组成，现代药理分析丹参含有丹参酮、丹参酚、维生素E等物质，具有入心包，通心窍，活血化淤作用。红花为菊科植物红花的干燥花，是我国传统中药材，其性味辛温亦入心经，能扩张冠状动脉，增加冠状动脉血流量，并能降低心肌耗氧量，被现代医学广泛用于治疗心血管系统疾病中。该配方科学合理，符合中医理论，二药合用能起到活血通络、化淤溶栓的药理作用。临床上主要用于瘀血闭阻所致的胸痹及中风、冠心病、心绞痛、心肌梗塞、缺血性脑病、脑血栓及肺心病所瘀诸症。丹红注射液临床使用多年，安全可靠，取得了较满意的临床疗效。

原剂型注射液中丹参稀醇提，药渣与红花温浸，提取液冷藏沉淀得注射液。由于该注射液使用的是水溶性部分，且原质量标准中的制法中无纯化过程，不能除去大部分杂质，产品质量控制难度大，制剂质量低，另外原剂型注射液的稳定性差，不利于运输、贮存。

[发明内容]

本发明的目的是提供一种有效成分提取较充分、产品质量好、产品稳定性较好的一种治疗心脑血管疾病的注射用丹红冻干粉的制备方法。

本发明的技术方案如下：一种治疗心脑血管疾病的注射用丹红冻干粉的制备方法，包括

丹参、红花二味药材分开提取，水提醇沉法制备注射用丹红原液和注射用丹红冻干粉的制备：

一、丹参水提：取丹参，加水6～10倍量(重量比)，煎煮2～4次，每次1～2小时，合并煎液，滤过；

二、红花水提：取红花加水15～25倍量(重量比)，70℃～90℃温浸2～3次，每次1～2小时，合并煎液，滤过；

三、水提醇沉法制备注射用丹红原液：合并丹参和红花的水提滤液，减压浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃)的清膏，加入乙醇使含醇量达60％～70％，冷藏18～30小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.15～1.20(60℃)的清膏，再加入乙醇使含醇量达70％～75％，冷藏18～30小时，滤过，用30％～50％氢氧化钠溶液调节pH值至7.0～8.0，冷藏8～16小时，滤过，滤液回收乙醇，加入注射用水至每1ml含生药0.5g～1.5g，冷藏8～16小时，滤过，滤液浓缩至每1ml含生药2.5g～3.0g，用盐酸调节PH值至2.0～4.0，冷藏42～52小时，滤过，用20％～30％氢氧化钠溶液调节pH值至6.0～7.0，作为注射用丹红的原液；

注射用丹红原液质量控制：(1)相对密度为1.13～1.38；(2)指纹图谱按国家药典会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统与标准图谱比较，相似度不得低于0.95；3)每1ml含丹参以丹参素钠(C₉H₉O₅Na)、原儿茶醛(C₇H₆O₃)、丹酚酸B(C₃₆H₃₀O₁₆)的总量计不少于8.75mg；(4)每1ml含红花以羟基红花黄色素A(C₂₇H₃₀O₁₅)计不少于0.5m；

四、注射用丹红冻干粉的制备：向注射用丹红的原液中加入甘露醇，溶解，加0.1％(g/ml)活性炭，搅拌10～20分钟，滤过，滤液加注射用水制成每1ml含生药2～4g，含甘露醇0.06g～0.13g，混匀；经除菌过滤(0.22μm滤膜过滤)，无菌条件下灌装；将灌装药液置降温至-40℃～-50℃的冻干箱中，预冻3～6小时，冷凝器温度-45℃～-55℃，抽真空至10Pa，-15℃～-30℃第一次升华20～40小时，至水层消失；25℃～35℃第二次升华10～20小时，抽真空压塞，轧盖，合格品按包装要求进行外包装，即得；

注射用丹红质量控制：(1)指纹图谱按国家药典会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统与标准图谱比较，相似度不得低于0.95；(2)每瓶含丹参以丹参素钠(C₉H₉O₅Na)、原儿茶醛(C₇H₆O₃)、丹酚酸B(C₃₆H₃₀O₁₆)的总量计，不少于70mg；(3)每瓶含红花以羟基红花黄色素A(C₂₇H₃₀O₁₅)计，不少于4.0mg；(4)每瓶含水溶性总酚酸以丹参素钠(C₉H₉O₅Na)计，不少于0.24g。

注射用丹红原液的测定方法：

相对密度：取本品溶液，依法测定(中国药典2005年版一部附录VII A)，应控制在1.13～1.38；

指纹图谱：

1、色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱：0～60分钟，乙腈从0％上升为35％；检测波长为238nm；柱温：25℃；流速1ml/min。理论板数按原儿茶醛峰计算应不低于3000；

2、参照物溶液的制备  取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24小时的丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B、羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含85μg、13μg、440μg、25μg的溶液，即得；

3、供试品溶液的制备  取本品1ml，置25ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

4、测定法  分别精密吸取供试品溶液与参照物溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，按国家药典会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统与标准图谱比较，相似度不得低于0.95。

丹参含量的测定：

1、色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相(梯度洗脱：0～60分钟，乙腈从0％上升至35％)；检测波长为280nm；柱温：25℃；理论板数按原儿茶醛峰计算应不低于3000；

2、对照品溶液的制备  取丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含85μg、13μg、440μg的溶液，即得；

3、供试品溶液的制备  取本品1ml，置25ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

4、测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

含丹参以丹参素钠(C₉H₉O₅Na)、原儿茶醛(C₇H₆O₃)、丹酚酸B(C₃₆H₃₀O₁₆)的总量计，每1ml不得少于8.75mg。

红花含量的测定：

1、色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相(梯度洗脱：0～60分钟，乙腈从0％上升至35％)；检测波长为403nm；柱温：25℃；理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000；

2、对照品溶液的制备：取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml约含25μg的溶液，即得；

3、供试品溶液的制备：取本品1ml，置25ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

4、测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

含红花以羟基红花黄色素A(C₂₇H₃₀O₁₅)计，每1ml不得少于0.5mg。

注射用丹红冻干粉的测定：

指纹图谱：

1、色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱：0～60分钟，乙腈从0％上升为35％；检测波长为238nm；柱温：25℃；流速1ml/min。理论板数按原儿茶醛峰计算应不低于3000；

2、参照物溶液的制备：取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24小时的丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B、羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含85μg、13μg、440μg、25μg的溶液，即得；

3、供试品溶液的制备：取本品约0.2g，精密称定，置25ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

4、测定法：分别精密吸取供试品溶液与参照物溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，按国家药典会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统与标准图谱比较，相似度不得低于0.95。

注射用丹红冻干粉中丹参含量的测定：

1、色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相(梯度洗脱：0～60分钟，乙腈从0％上升至35％)；检测波长为280nm；柱温：25℃；理论板数按原儿茶醛峰计算应不低于3000；

2、对照品溶液的制备：取丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含85μg、13μg、440μg的溶液，即得；

3、供试品溶液的制备：取本品约0.2g，精密称定，置25ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

4、测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

每瓶含丹参以丹参素钠(C₉H₉O₅Na)、原儿茶醛(C₇H₆O₃)、丹酚酸B(C₃₆H₃₀O₁₆)的总量计，不得少于70mg。

注射用丹红冻干粉中红花含量测定：

1、色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相(梯度洗脱：0～60分钟，乙腈从0％上升至35％)；检测波长为403nm；柱温：25℃；理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000；

2、对照品溶液的制备：取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml约含25μg的溶液，即得；

3、供试品溶液的制备：取本品约0.2g，精密称定，置25ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

4、测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

每瓶含红花以羟基红花黄色素A(C₂₇H₃₀O₁₅)计，不得少于4.0mg。

注射用丹红冻干粉中水溶性总酚酸含量的测定：

1、对照品溶液的制备：取丹参素钠对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含45μg的溶液，摇匀，即得；

2、供试品溶液的制备：取本品约0.2g，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得；

3、测定法：分别取对照品溶液与供试品溶液，照紫外可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在280nm的波长处测定吸收度，计算，即得；

每瓶含水溶性总酚酸以丹参素钠(C₉H₉O₅Na)计，不得少于0.24g。

本发明注射用丹红的制备方法提供了一种科学规范的的提取工艺，使有效成份更加有效的提取出来。参照丹参类注射液传统提取纯化工艺，采用水提醇沉法，对红花进行水提正交设计、丹参水提正交设计，最终确定红花温浸、丹参煎煮，合并二者提取液浓缩进行醇沉纯化，对浓缩液的相对密度、醇沉浓度等进行了优化选择，并用丹酚酸B、丹参素钠、原儿茶醛、红花黄色素进行了多指标综合评价各参数的选择，生产出来的产品质量高，稳定性好。

通过浙江省医学科学院进行主要药效学试验、一般药理试验、急性毒性试验、大鼠长期毒性试验、犬长期毒性试验、血管、肌肉刺激试验、过敏试验、溶血试验等系列试验。表明我公司生产的注射用丹红安全性、有效性得到了可靠保证。

主要药效学试验结果表明：注射用丹红能明显制冠状动脉结扎引起的心肌缺血和梗死范围，使不同方法引起小鼠和大鼠脑缺血程度明显降低，降低脑血管阻力增加脑血流量，提高动物耐缺氧能力、改善血液流变性、抑制血小板聚集、扩张血管等，提示注射用丹红对缺血性心、脑血管疾病具有明显的治疗作用。

一般药理试验表明：注射用丹红20g/kg对小鼠中枢神经系统有一定的抑制作用，而10g/kg和5g/kg对小鼠对中枢神经系统无明显影响，4g/kg和2g/kg对家犬呼吸和循环系统均无明显不良影响。

急性毒性试验结果表明：注射用丹红推荐临床最大剂量为滴注60g生药/人/天，相当于1.0g/kg。小鼠尾静脉注射最大给药量160g生药/kg，是推荐临床大剂量的160倍。大鼠腹腔注射最大给药量240g生药/kg，是推荐临床大剂量的240倍。

大鼠长期毒性试验结果表明：注射用丹红推荐临床最大剂量的15倍(15g/kg)连续3个月腹腔注射给药对大鼠无明显的不良影响。

犬长期毒性试验表明：注射用丹红30、15和7.5g/kg给Beagle犬连续静脉滴注给药13周(3个月)，对犬的一般状况、体温、凝血时间、血常规、尿常规、心电图和血清生化主要指标等均无明显不良影响；犬主要脏器巨检和组织病理学检查均未发现与用药有关的异常变化。提示注射用丹红30g/kg连续静脉滴注3个月对Beagle犬无明显的毒副作用。

血管刺激试验表明：注射用丹红(1g/ml)按5ml/kg(剂量为5g/kg)给家兔耳缘静脉注射，1天1次，连续3天，经肉眼观察及组织病理学检查，血管及周围组织无异常发现，提示注射用丹红对血管无刺激性。

肌肉刺激试验表明：注射用丹红按0.5ml/kg(剂量为2g/kg)给家兔肌肉注射1次，经肉眼观察及组织病理学检查，肌肉组织均无异常发现，提示注射用丹红对肌肉无刺激性。

过敏试验表明：注射用丹红(4g/ml)0.5ml/只，隔日1次给豚鼠腹腔注射3次致敏，在首次注射后第14天和21天，以4倍致敏剂量耳静脉注射激发，结果豚鼠无明显过敏反应出现。

被动皮肤过敏试验表明：注射用丹红2g/只和0.5g/只两个剂量隔日1次给豚鼠腹腔注射致敏，共5次，致敏豚鼠血清不引起正常豚鼠被动皮肤过敏反应。

溶血试验表明：注射用丹红(终浓度0.08-0.40g/ml)与兔红细胞生理盐水混悬液温浴不产生溶血反应，也不引起红细凝聚。

[附图说明]

附图是注射用丹红原液和注射用丹红冻干粉的标准指纹图谱。

附图中横坐标为保留时间(分钟)，纵坐标为电平响应值(mV或mAU)。

附图中有9个标注*的峰为注射用丹红原液和注射用丹红冻干粉标准指纹图谱的主要成份峰。其保留时间分别约为14.5分钟、19.5分钟、26.1分钟、39.7分钟、43.8分钟、44.9分钟、47.3分钟、47.9分钟、49.4分钟。

[具体实施方式]

一种治疗心脑血管疾病的注射用丹红冻干粉的制备方法，包括

丹参、红花二味药材分开提取，水提醇沉法制备注射用丹红原液和注射用丹红冻干粉的制备：

1、丹参15kg加水8倍量，煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，滤过；

2、红花5kg加水20倍量，80℃温浸两次，每次1小时，滤过；

3、合并上述滤液，减压浓缩至相对密度为1.15(60℃)的清膏，加入乙醇使含醇量达70％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.20(60℃)的清膏，再加入乙醇使含醇量达75％，冷藏24小时，滤过，用40％氢氧化钠溶液调节pH值至7.5，冷藏18小时，滤过，滤液回收乙醇，加入注射用水至20升，冷藏20小时，滤过，滤液浓缩至每1ml含生药2.8g，用盐酸调节PH值至3.0，冷藏48小时，滤过，用20％氢氧化钠溶液调节pH值至6.5，作为注射用丹红的原液。

4、向注射用丹红的原液中加入甘露醇，溶解，加0.1％(g/ml)活性炭，搅拌10分钟，滤过，滤液加注射用水制成每1ml含生药2.5g，含甘露醇0.08g，混匀；经除菌过滤(0.22μm滤膜过滤)，无菌条件下灌装。

5、将灌装药液置降温至-50℃的冻干箱中，预冻4小时，冷凝器温度-53℃，抽真空至10Pa，-25℃第一次升华约30小时，至水层消失；30℃第二次升华约15小时，抽真空压塞，轧盖，合格品按包装要求进行外包装，即得。

Claims (8)

1、一种治疗心脑血管疾病的注射用丹红冻干粉的制备方法，包括

丹参、红花二味药材分开提取，水提醇沉法制备注射用丹红原液和注射用丹红冻干粉的制备：

(1)丹参水提：取丹参，加水6～10倍量(重量比)，煎煮2～4次，每次1～2小时，合并煎液，滤过；

(2)红花水提：取红花加水15～25倍量(重量比)，70℃～90℃温浸2～3次，每次1～2小时，合并煎液，滤过；

(3)水提醇沉法制备注射用丹红原液：合并丹参和红花的水提滤液，减压浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃)的清膏，加入乙醇使含醇量达60％～70％，冷藏18～30小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.15～1.20(60℃)的清膏，再加入乙醇使含醇量达70％～75％，冷藏18～30小时，滤过，用30％～50％氢氧化钠溶液调节pH值至7.0～8.0，冷藏8～16小时，滤过，滤液回收乙醇，加入注射用水至每1ml含生药0.5g～1.5g，冷藏8～16小时，滤过，滤液浓缩至每1ml含生药2.5g～3.0g，用盐酸调节PH值至2.0～4.0，冷藏42～52小时，滤过，用20％～30％氢氧化钠溶液调节pH值至6.0～7.0，作为注射用丹红的原液；

注射用丹红原液质量控制：(1)相对密度为1.13～1.38；(2)指纹图谱按国家药典会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统与标准图谱比较，相似度不得低于0.95；3)每1ml含丹参以丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B的总量计不少于8.75mg；(4)每1ml含红花以羟基红花黄色素A计不少于0.5m；

(4)注射用丹红冻干粉的制备：向注射用丹红的原液中加入甘露醇，溶解，加0.1％(g/ml)活性炭，搅拌10～20分钟，滤过，滤液加注射用水制成每1ml含生药2～4g，含甘露醇0.06g～0.13g，混匀；经0.22μm滤膜过滤除菌，无菌条件下灌装；将灌装药液置降温至-40℃～-50℃的冻干箱中，预冻3～6小时，冷凝器温度-45℃～-55℃，抽真空至10Pa，-15℃～-30℃第一次升华20～40小时，至水层消失；25℃～35℃第二次升华10～20小时，抽真空压塞，轧盖，合格品按包装要求进行外包装，即得；

注射用丹红质量控制：(1)指纹图谱按国家药典会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统与标准图谱比较，相似度不得低于0.95；(2)每瓶含丹参以丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B的总量计，不少于70mg；(3)每瓶含红花以羟基红花黄色素A计，不少于4.0mg；(4)每瓶含水溶性总酚酸以丹参素钠计，不少于0.24g。

2、注射用丹红原液的测定方法：

相对密度：取本品溶液，依法测定中国药典2005年版一部附录VIIA，应控制在1.13～1.38；

指纹图谱：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱：0～60分钟，乙腈从0％上升为35％；检测波长为238nm；柱温：25℃；流速1ml/min。理论板数按原儿茶醛峰计算应不低于3000；

(2)参照物溶液的制备：取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24小时的丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B、羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含85μg、13μg、440μg、25μg的溶液，即得；

(3)供试品溶液的制备：取本品1ml，置25ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

(4)测定法：分别精密吸取供试品溶液与参照物溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，按国家药典会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统与标准图谱比较，相似度不得低于0.95。

3、注射用丹红原液中丹参含量的测定方法：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱：0～60分钟，乙腈从0％上升至35％；检测波长为280nm；柱温：25℃；理论板数按原儿茶醛峰计算应不低于3000；

(2)对照品溶液的制备：取丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含85μg、13μg、440μg的溶液，即得；

(3)供试品溶液的制备：取本品1ml，置25ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

含丹参以丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B的总量计，每1ml不得少于8.75mg。

4、注射用丹红原液中红花含量的测定方法：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱：0～60分钟，乙腈从0％上升至35％；检测波长为403nm；柱温：25℃；理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000；

(2)、对照品溶液的制备：取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml约含25μg的溶液，即得；

(3)、供试品溶液的制备：取本品1ml，置25ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

含红花以羟基红花黄色素A计，每1ml不得少于0.5mg。

5、注射用丹红冻干粉指纹图谱的测定方法：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱：0～60分钟，乙腈从0％上升为35％；检测波长为238nm；柱温：25℃；流速1ml/min；理论板数按原儿茶醛峰计算应不低于3000；

(2)参照物溶液的制备：取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24小时的丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B、羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含85μg、13μg、440μg、25μg的溶液，即得；

(3)供试品溶液的制备：取本品约0.2g，精密称定，置25ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

(4)测定法：分别精密吸取供试品溶液与参照物溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，按国家药典会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统与标准图谱比较，相似度不得低于0.95。

6、注射用丹红冻干粉中丹参含量的测定方法：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱：0～60分钟，乙腈从0％上升至35％；检测波长为280nm；柱温：25℃；理论板数按原儿茶醛峰计算应不低于3000；

(2)对照品溶液的制备：取丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含85μg、13μg、440μg的溶液，即得；

(3)供试品溶液的制备：取本品约0.2g，精密称定，置25ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

每瓶含丹参以丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B的总量计，不得少于70mg。

7、注射用丹红冻干粉中红花含量的测定方法：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱：0～60分钟，乙腈从0％上升至35％；检测波长为403nm；柱温：25℃；理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000；

(2)对照品溶液的制备：取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml约含25μg的溶液，即得；

(3)供试品溶液的制备：取本品约0.2g，精密称定，置25ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

每瓶含红花以羟基红花黄色素A计，不得少于4.0mg。

8、注射用丹红冻干粉中水溶性总酚酸含量的测定方法：

(1)对照品溶液的制备：取丹参素钠对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含45μg的溶液，摇匀，即得；

(2)、供试品溶液的制备：取本品约0.2g，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得；

(3)测定法：分别取对照品溶液与供试品溶液，按照《中国药典2005年版一部附录VA》紫外可见分光光度法，在280nm的波长处测定吸收度，计算，即得；

每瓶含水溶性总酚酸以丹参素钠计，不得少于0.24g。

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