CN1616096A - 减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗培养方法 - Google Patents
减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1616096A CN1616096A CNA2004100407211A CN200410040721A CN1616096A CN 1616096 A CN1616096 A CN 1616096A CN A2004100407211 A CNA2004100407211 A CN A2004100407211A CN 200410040721 A CN200410040721 A CN 200410040721A CN 1616096 A CN1616096 A CN 1616096A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- culture
- cultivated
- culture fluid
- ratio
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 title claims abstract description 14
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 title 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 47
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 25
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 17
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 15
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 15
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 claims description 17
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 10
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 10
- 229960001539 poliomyelitis vaccine Drugs 0.000 claims description 9
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 8
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 8
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 claims description 8
- 239000012930 cell culture fluid Substances 0.000 claims description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 abstract description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 abstract 2
- 229940062042 oxygen 50 % Drugs 0.000 description 4
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 2
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 2
- 241000274177 Juniperus sabina Species 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 229940062054 oxygen 30 % Drugs 0.000 description 2
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 2
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000012549 training Methods 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 208000033952 Paralysis flaccid Diseases 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 208000028331 flaccid paralysis Diseases 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 206010025482 malaise Diseases 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 229940063746 oxygen 20 % Drugs 0.000 description 1
- 229940062044 oxygen 40 % Drugs 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供一种减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗培养方法,采用Vero细胞、脊髓灰质炎减毒株病毒,在发酵罐中进行培养,通过细胞培养规模的三级放大,使细胞培养面积相当于21000个1升玻璃瓶静置培养的面积,且细胞产量是常规1升瓶静置培养的21000倍,常规10升转瓶培养的2100倍,既减少了培养空间,又降低了培养液用量,同时也减少了劳动力投入,短时间内即可实现大规模制备细胞及病毒液,满足脊髓灰质炎灭活疫苗对大量病毒抗原的需求。另用本发明生产的病毒液制备成疫苗后,质量稳定可靠,安全性及免疫原性良好,经检定全部符合国家生物制品规程的要求。
Description
技术领域
本发明涉及脊髓灰质炎灭活疫苗的培养方法,属于医学生物技术领域。
背景技术
脊髓灰质炎是由脊髓灰质炎病毒I、II、III型引起的传播广泛且危害极大的急性传染病。临床症状引起肌肉特别是肢体松弛性麻痹,多发生于小儿,因此又称为“小儿麻痹症”。在疫苗问世前,该病在全世界范围内流行,在我国的发病率为3.18/10万。50年代中后期,美国的两位科学家Dr.Salk和Dr.Sabin先后成功研制出脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)和口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV),给人们预防和消灭脊髓灰质炎提供了有力武器。实践证明这两种疫苗都是安全有效的。我国自1960年开始生产OPV供全国儿童服用,到目前为止总计供应了40多亿人份的三价OPV,取得了辉煌的成绩。1995年我国已消灭了由本土野毒株引起的脊髓灰质炎。早期制造的IPV由于受到生产工艺的限制,抗原含量低,免疫效果不理想。80年代后,因采用现代化的大规模培养细胞和病毒的方法——微载体培养法,制备出了抗原含量高的增效IPV,其免疫效果可与OPV相媲美。
随着全世界消灭脊髓灰质炎进程的推进,口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)相关病例(VAPP)和由该疫苗衍生出的脊髓灰质炎病毒(VDPV)所引起的病例正受到人们的重视,如2000年在多美尼加和海地,2001年在菲律宾以及2002年在马达加斯加发生了疫苗衍生株引起的麻痺病例,此外疫苗病毒毒株在免疫缺陷的人体内可长期存在。为此,一些发达国家开始改变疫苗使用方案,采取先用IPV再用OPV的方案,进而过渡到仅使用IPV的方案,因为脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)能够免疫苗相关病例。然而根据野毒株生产IPV的经验,制造IPV较OPV需要更大的抗原量,单剂量病毒用量比OPV大100倍,因此,采用常规的细胞培养方法,细胞产量和病毒产量远远不能满足大规模生产减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗的需要,因此,有必要研制脊髓灰质炎减毒株病毒在微载体上的培养技术,以满足我国儿童的需要,并根除脊髓灰质炎。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能大规模生产减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗,且性能稳定、安全可靠的疫苗培养方法。
本发明是这样实现的:一种减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗培养方法,其特征在于它经过下列工艺步骤:
1、三级放大细胞培养:
a、首先对细胞种子进行离心清洗,按最低需求培养液(MEM)∶Vero细胞种子=500-1000∶1的比例,接种到5-10升小容量发酵罐中进行细胞培养,控制培养温度35-37℃,pH7.0-7.4,溶解氧30-50%,并于培养第三天开始灌流,灌流量按细胞生长情况由1升/天最终增加到5升/天,培养5-7天,使细胞增殖至1-3×106个细胞/毫升,进行胰酶消化;
b、将a步骤胰酶消化过的细胞悬液,按最低需求培养液(MEM)∶Vero细胞种子=500-1000∶1的比例,接种于50-85升中容量发酵罐中培养,控制培养温度35-37℃,pH7.0-7.4,溶解氧30-50%,在再循环培养液体积为50-100升条件下,于第三天开始进行再循环培养,培养5-7天,使细胞密度达1-3×106个细胞/毫升,进行胰酶消化;
c、将b步骤胰酶消化过的细胞悬液,按最低需求培养液(MEM)∶Vero细胞种子=500-1000∶1的比例,接种于300-550升大容量发酵罐中培养,控制培养温度35-37℃,pH7.0-7.4,溶解氧30-50%,培养5-7天,使细胞密度为1-3×106个细胞/毫升;
2、病毒培养:收获c步骤的细胞培养液,用M199洗细胞一次,加入M199培养液,按病毒∶细胞=0.01-0.1∶1的比例,接种脊髓灰质炎减毒株病毒,进行病毒培养,控制培养温度32-34℃,pH7.0-7.4,溶解氧20-30%,培养48-96小时,收获病毒液。
本发明具有下列优点和效果:本发明采用Vero细胞、脊髓灰质炎减毒株病毒(I、II型Sabin株和III型Pfizer株),在发酵罐中用Cytodex I型微载体进行培养,通过小容量、中容量和大容量细胞培养规模的三级放大,细胞培养面积相当于21000个1升玻璃瓶静置培养的面积,或者相当于2100个转瓶的细胞培养面积(结果见表1),细胞产量是常规1升瓶静置培养的21000倍,常规10升转瓶培养的2100倍,减少了培养空间,培养液用量仅是常规培养用量的8.3%(结果见表2),同时也减少了劳动力投入,短时间内即可实现大规模制备细胞及病毒液,满足脊髓灰质炎灭活疫苗对大量病毒抗原的需求,用本发明生产的病毒液制备成疫苗后,质量稳定可靠,安全性及免疫原性良好,经检定全部符合国家生物制品规程的要求(结果见表3)。用本发明生产病毒液制备的疫苗,经25℃和37℃放置两周,以及4℃长期存放后,检测疫苗热稳定性,结果表明该疫苗稳定性良好,其有效期可达两年以上(结果见表4及表5)。
表1.微载体与常规培养法单个容器的细胞培养面积比较
培养容器
面积比
培养方 培养液
大小 培养面积 微载体培养/常
法 体积
类型 (升) (cm2) 规培养
(升)
微载体 发酵罐 550 350 4.2×106
静置培 玻璃瓶 1 0.2 2×102
21000
转瓶培 玻璃瓶 10 2.0 2×103
表2.微载体与常规培养法的培养液用量及细胞产量比较
培养液 细胞**
培养方法 用量比 产量比
用量(升)* 细胞产量(个)
微载体/常规 微载体/常规
微载体 350 0.083 5.25×1011
静置培养 4200 2.5×107 21000
转瓶培养 4200 2.5×108 2100
*三种培养方法相同培养面积的培养液用量
**以单个培养容器计算
从表1及表2的结果可以看出,本发明的生产工艺稳定,重复性好,能够满足Sabin-IPV疫苗生产对培养工艺的要求。
表3 两批Sabin IPV成品检定结果
项目 SI 20021101 SI 20021201
外观 橙红色透明液体 橙红色透明液体
表4 减毒株IPV25℃和37℃和热稳定性试验结果
(D抗原回收率%*)
批号 型别 25℃3周 37℃1周 37℃2周
SI001001 I 95 90 75
SI002001 II 100 100 100
SI003001 III 100 95 86
SI001002 I 85 80 53
SI002001 II 100 100 100
SI003002 III 93 93 71
*4℃DAg含量作为100%
表5 减毒株IPV4℃稳定性试验结果
DAgU/剂量 大白鼠效力试验(ED50)
型别
0月 12月 18月 24月 0月 18月
I 20 20 18 18 2.19 2.08
II 16 16 16 16 1.49 1.12
III 30 30 30 28 1.82 1.67
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步描述。
实施例1
1、三级放大细胞培养:
a、首先对细胞种子进行离心清洗,按最低需求培养基液(MEM)∶Vero细胞种子=500∶1的比例,接种到7升发酵罐中进行细胞培养,控制培养温度37℃,pH7.2,溶解氧50%,并于培养第三天开始灌流,灌流量由1升/天最终增加到5升/天,培养7天,细胞增殖至2.13×106个细胞/毫升,结束一级培养,进行胰酶消化;
b、将a步骤胰酶消化过的细胞悬液,按最低需求培养基液(MEM)∶Vero细胞种子=500∶1的比例,接种于75升发酵罐中培养,控制培养温度37℃,pH7.2,溶解氧50%,在再循环培养液(MEM)体积为100升条件下,于第三天开始进行再循环培养,培养7天,细胞密度达2.74×106个细胞/毫升,结束二级培养,进行胰酶消化;
c、将b步骤胰酶消化过的细胞悬液,按最低需求培养基液(MEM)∶Vero细胞种子=500∶1的比例,接种于550升发酵罐中培养,控制培养温度37℃,pH7.2,溶解氧50%,培养7天,细胞密度为1.07×106个细胞/毫升,结束三级培养;
2、病毒培养:收获c步骤得到的细胞培养液,用M199洗细胞一次,按病毒∶细胞=0.02∶1的比例,接种I型毒种(Sabin I SO+2,UPV91-02),进行病毒培养,控制培养温度34℃,pH7.4,溶解氧30%,培养93小时,收获病毒液353升。
实施例2
1、三级放大细胞培养:
a、首先对细胞种子进行离心清洗,按最低需求培养基液(MEM)∶Vero细胞种子=1000∶1的比例,接种到10升发酵罐中进行细胞培养,控制培养温度35℃,pH7.0,溶解氧30%,并于培养第三天开始灌流,灌流量由1升/天最终增加到5升/天,培5天,细胞增殖至2.93×106个细胞/毫升,结束一级培养,进行胰酶消化;
b、将a步骤胰酶消化过的细胞悬液,按最低需求培养基液(MEM)∶Vero细胞种子=1000∶1的比例,接种于85升发酵罐中培养,控制培养温度35℃,pH7.0,溶解氧40%,在再循环培养液(MEM)体积为100升条件下,于第三天开始进行再循环培养,培养6天,细胞密度达2.94×106个细胞/毫升,结束二级培养,进行胰酶消化;
c、将b步骤胰酶消化过的细胞悬液,按最低需求培养基液(MEM)∶Vero细胞种子=1000∶1的比例,接种于500升发酵罐中培养,控制培养温度35℃,pH7.0,溶解氧50%,培养6天,细胞密度为1.77×106个细胞/毫升,结束三级培养;
2、病毒培养:收获c步骤得到的细胞培养液,用M199洗细胞一次,按病毒∶细胞=0.1∶1的比例,接种I型毒种(Sabin I SO+2,UPV91-02),进行病毒培养,控制培养温度32℃,pH7.0,溶解氧20%,培养50小时,收获病毒液。
用与实施例1相同的方法进行了九批培养,结果见表6和表7
表6.九批550升规模细胞培养结果:
体积(L) 培养
细胞倍增数
开始 细胞数
批号 开始 结 时间 本次 总
日期 (106/ml)
束 (h)
SI 00-1001 2000.03.28 350 370 88.5 2.57 10.82 1.24
SI 00-2001 2000.05.23 353 359 90.5 2.10 10.34 1.13
SI 00-3001 2000.07.25 350 370 93.0 2.85 10.69 0.90
SI 01-1001 2001.06.03 314 327 168.0 2.39 10.68 1.07
SI 01-3001 2001.08.05 262 352 120.0 3.01 9.75 1.16
SI 02-1001 2002.08.20 320 350 144.8 2.01 9.09 0.94
SI 02-2001 2002.07.21 344 345 141.0 2.05 9.81 1.01
SI 02-3001 2002.09.24 355 361 143.5 1.85 10.25 1.06
SI 03-2001 2003.04.15 347 361 144.0 3.04 11.46 0.93
表7.九批550升规模病毒培养结果:
体积(L) 细胞数
病毒培养 滴度
批号 开始日期 (106/ml 温度 时间 (logCCID50/
开始 结束
) (℃) (h) ml)
SI 2000.04.
350 370 1.27 33.5 66.50 8.400
00-1001 01
SI 2000.05.
350 362 1.10 33.5 75.50 7.850
00-2001 27
SI 2000.07.
360 380 0.90 32.5 59.50 8.380
00-3001 29
SI 2001.06.
349 353 1.07 32.5 68.50 8.000
01-1001 10
SI 2001.08.
332 344 1.16 32.5 64.15 7.750
01-3001 10
SI 2002.08.
340 352 0.94 32.5 65.00 8.620
02-1001 28
SI 2002.07.
345 358 1.01 32.5 67.31 7.625
02-2001 27
SI 2002.10.
350 356 1.06 32.5 76.00 7.870
02-3001 01
SI 2003.04.
328 332 0.93 33.0 65.00 7.875
03-2001 21
Claims (1)
1、一种减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗培养方法,其特征在于它经过下列工艺步骤:
1)、三级放大细胞培养:
a、首先对细胞种子进行离心清洗,按最低需求培养液(MEM)∶Vero细胞种子=500-1000∶1的比例,接种到5-10升小容量发酵罐中进行细胞培养,控制培养温度35-37℃.pH7.0-7.4,溶解氧30-50%,并于培养第三天开始灌流,灌流量按细胞生长情况由1升/天最终增加到5升/天,培养5-7天,使细胞增殖至1-3×106个细胞/毫升,进行胰酶消化;
b、将a步骤胰酶消化过的细胞悬液,按最低需求培养液(MEM)∶Vero细胞种子=500-1000∶1的比例,接种于50-85升中容量发酵罐中培养,控制培养温度35-37℃,pH7.0-7.4,溶解氧30-50%,在再循环培养液体积为50-100升条件下,于第三天开始进行再循环培养,培养5-7天,使细胞密度达1-3×106个细胞/毫升,进行胰酶消化;
c、将b步骤胰酶消化过的细胞悬液,按最低需求培养液(MEM)∶Vero细胞种子=500-1000∶1的比例,接种于300-550升大容量发酵罐中培养,控制培养温度35-37℃,pH7.0-7.4,溶解氧30-50%,培养5-7天,使细胞密度为1-3×106个细胞/毫升;
2)、病毒培养:收获c步骤的细胞培养液,用M199洗细胞一次,加入M199培养液,按病毒∶细胞=0.01-0.1∶1的比例,接种脊髓灰质炎减毒株病毒,进行病毒培养,控制培养温度32-34℃,pH7.0-7.4,溶解氧20-30%,培养48-96小时,收获病毒液。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CNB2004100407211A CN1297314C (zh) | 2004-09-16 | 2004-09-16 | 减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CNB2004100407211A CN1297314C (zh) | 2004-09-16 | 2004-09-16 | 减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗培养方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1616096A true CN1616096A (zh) | 2005-05-18 |
CN1297314C CN1297314C (zh) | 2007-01-31 |
Family
ID=34763643
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNB2004100407211A Expired - Lifetime CN1297314C (zh) | 2004-09-16 | 2004-09-16 | 减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗培养方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN1297314C (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102406928A (zh) * | 2011-11-25 | 2012-04-11 | 成都康华生物制品有限公司 | 一种人二倍体细胞脊髓灰质炎灭活疫苗的生产方法 |
CN104312981A (zh) * | 2014-10-23 | 2015-01-28 | 北京天坛生物制品股份有限公司 | 脊髓灰质炎灭活疫苗及其生产方法 |
CN106520626A (zh) * | 2016-12-06 | 2017-03-22 | 武汉市工程科学技术研究院 | 一种用链球菌培养物制剂大幅提高pcv2培养毒价的方法 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA1292691C (en) * | 1986-09-15 | 1991-12-03 | Allen D. Allen | Method for the effective treatment of disease conditions in humans associated with htl virus infection |
GB9107552D0 (en) * | 1991-04-10 | 1991-05-29 | Macadam Andrew J | Attenuated viruses |
-
2004
- 2004-09-16 CN CNB2004100407211A patent/CN1297314C/zh not_active Expired - Lifetime
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102406928A (zh) * | 2011-11-25 | 2012-04-11 | 成都康华生物制品有限公司 | 一种人二倍体细胞脊髓灰质炎灭活疫苗的生产方法 |
CN104312981A (zh) * | 2014-10-23 | 2015-01-28 | 北京天坛生物制品股份有限公司 | 脊髓灰质炎灭活疫苗及其生产方法 |
CN106520626A (zh) * | 2016-12-06 | 2017-03-22 | 武汉市工程科学技术研究院 | 一种用链球菌培养物制剂大幅提高pcv2培养毒价的方法 |
CN106520626B (zh) * | 2016-12-06 | 2019-04-26 | 武汉市工程科学技术研究院 | 一种用链球菌培养物制剂大幅提高pcv2培养毒价的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN1297314C (zh) | 2007-01-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101934074B (zh) | 猪圆环病毒ⅱ型疫苗及其生产方法 | |
CN1142271C (zh) | 适应非洲绿猴肾细胞的减毒的日本脑炎病毒和其疫苗 | |
CN103740758B (zh) | 一种重组杆状病毒载体及病毒样颗粒及制备方法和用途 | |
CN1876181A (zh) | 犬科动物重要疫病系列弱毒联合疫苗制剂及制备工艺 | |
CN111041002B (zh) | 猪流行性腹泻病毒变异株2a、2b二价灭活疫苗及其制备方法 | |
CN110237246A (zh) | 一种全悬浮细胞培养禽流感(h9)灭活疫苗的方法 | |
CN109091669A (zh) | 猪瘟-圆环混合抗原的制备方法及其产品、猪瘟-圆环二联亚单位疫苗及其制备方法 | |
CN103525855A (zh) | 一种制备重组肠道病毒ev71型病毒样颗粒的方法 | |
CN107744530A (zh) | 柯萨奇病毒a10驯化株ta151r‑1感染动物模型的建立和评价 | |
CN118028250A (zh) | 一株番鸭查帕马病毒毒株、应用和疫苗 | |
CN1616096A (zh) | 减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗培养方法 | |
CN103923885B (zh) | 鸡传染性法氏囊病毒Vero细胞适应株及其应用 | |
CN108421037A (zh) | 一种猪伪狂犬病/猪细小病毒病二联灭活疫苗及其悬浮培养制备方法 | |
CN1943789A (zh) | 抗丙肝病毒感染的dna疫苗 | |
CN108159412A (zh) | 一种生产细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗的方法及其产品 | |
CN107496913A (zh) | 猪丹毒、猪细小病毒、猪流感病毒三联灭活疫苗制备方法 | |
CN1883704A (zh) | 甲型肝炎-戊型肝炎联合疫苗及其制备方法 | |
CN1616095A (zh) | 减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗后处理方法 | |
CN1174672C (zh) | 一种应用铁皮石斛激素自养型茎尖培养生产药材的方法 | |
CN1169964C (zh) | 银杏细胞培养生产银杏多糖的方法 | |
CN1907337A (zh) | 禽用双黄连口服液及其制备方法 | |
CN103710384A (zh) | 小核糖核酸病毒科重组载体和病毒样颗粒及制备方法和用途 | |
CN1299768C (zh) | 人用二倍体细胞乙型脑炎纯化疫苗的制备方法 | |
CN107137705B (zh) | 猪伪狂犬gE基因缺失病毒灭活疫苗的生产方法 | |
CN107937353A (zh) | 一种鱼类传染性造血器官坏死病病毒的培养方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CX01 | Expiry of patent term |
Granted publication date: 20070131 |