CN1607956A - 具有天然植物活性成分的局部化妆品组合物及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了局部化妆品组合物，具有至少一种天然活性组分和药学上或化妆上可接受的载体。这里还有改善皮肤、头发和/或指甲美学外观的方法，它包括局部施用本发明的组合物。

Description

具有天然植物活性成分的局部化妆品组合物及其使用方法

发明背景

1.发明领域

本发明涉及具有源自天然植物材料的活性组分的局部组合物。更具体地，本发明涉及改善皮肤、头发和/或指甲美学外观的局部组合物。成分更具体地，本发明涉及使用局部组合物的方法。

2.现有技术说明

源自植物和植物种子的活性成分通常已经用于无数医学、治疗和化妆目的用的局部组合物。这样的活性物质得自植物的各种部分，例如种子、针、叶、根、树皮、球果、茎、根茎、愈伤组织细胞、原生质体、器官和器官系统，以及分生组织。活性成分以各种形式掺入这样的组合物。这样的形式包括纯或半纯组分，固体或液体提取物或衍生物，或者固体植物物质。植物物质可以种种衍生形式掺入，例如整个、粉碎的、磨碎或压碎。

使用源自植物和植物种子的活性成分时通常遇到的问题是它们天然存在的浓度较低。这样低的浓度常常需要处理相对大量的植物叶子/组织或种子，以便获得期望的或有效数量的活性物质。对于珍贵的植物或植物种子，如此巨大数量是难以获得的或难于得到的。

在化妆品工业发展可以局部施用于皮肤以提供抗老化、水合和/或皮肤肌理优点的产品目前有积极的兴趣。对增强皮肤外观的化妆品需要日益增长。消费者对减轻或延迟年龄的、激素的和/或光一老化皮肤的体征感兴趣，例如细纹、皱纹、皮肤干燥，和皮肤下垂。老化过程中，皮肤的肤色，即皮肤的颜色和外观，由于本身老化和/或暴露于阳光缓慢恶化。美容外科手术可用作老化皮肤的治疗，但是这种治疗成本昂贵，并具有一般与麻醉和手术有关的风险。选择性地，对于制造者和消费者，能够促进抗老化优点的化妆品是极度希望的。

涉及帮助消费者皮肤看上去更年轻和皱纹更少的化妆品的数量稳定增加。通常地，这种产品含有有机酸作为活性成分。这种抗老化活性成分包括，例如α-羟基酸(即，乳酸盐，乙醇酸盐，枸椽酸盐)，β-羟基酸(即，水杨酸盐；5-正-辛酰基水杨酸盐)和类维生素A(retinoid)(视黄酸；视黄醇)。已知这些抗老化活性成分具有显著的缺点，由于它们常常与消费者施用后的不适有关，这些不适特征是烧伤、刺痛、发痒或紧缩感。在化妆品工业保持对延迟或抗皮肤老化作用产品的普通需要，更准确地说，需要产生延迟或抗皮肤老化作用且无不希望的副作用的产品。

更具体地，考虑到先前化妆品工业内需要和限制的讨论，需要适于局部施用的、化妆品组合物，它采用天然成分作为活性组分，具有抗老化和皮肤肌理优点。

植物提取物通常用于各种具有治疗用途的草药组合物。例如，U.S.专利No.6,168,795涉及抗癌治疗，包括服用草药提取物基的组合物，该组合物具有绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)提取物和其它植物提取物。D’Jang的U.S.专利No.5,910,308还涉及包括绞股蓝的草药提取物基组合物。

印度楝(Azadirachta indica)(印楝树)，以及其它楝科植物提取物，已知具有杀虫活性。印苦楝子素，这些提取物中的主要活性成分，是用于商业杀虫剂的四正三萜(tetranortriterpenoid)型liminoid，它已经显示是有效的昆虫生长调节剂和取食抑制剂。由印度楝(印楝)种子原料制备azadirachin(印苦楝子素)浓缩物的方法是本领域已知的。Holowach-Keller等的U.S.专利No.5,698,423涉及通过印度楝的细胞培养生产azadiractin(印苦楝子素)的方法。

尽管市场上各种皮肤治疗用于抗老化化妆品，仍然需要有效局部施用化妆品组合物以便采用天然成分作为活性组分提供皮肤、头发和/或指甲抗老化或恢复青春的优点。

发明概述

本发明的一个目的是提供释放有效浓度源自天然植物材料的活性成分的局部化妆品组合物。

本发明的另一个目的是提供局部化妆品组合物，它在药学上或化妆上可接受的载体中具有天然植物活性成分或天然植物活性成分的混合物。

本发明进一步的目的是提供局部施用这些组合物的方法。

本发明的又一目的是提供通过局部施用具有一种或多种天然植物活性成分的组合物，向皮肤、指甲和/或头发释放一致浓度的活性成分的方法。

通过具有单一天然植物成分或天然植物成分的混合物的组合物，以及这些组合物用于局部施用的用途获得本发明的这些和其它目的和优点，和其等价物。本发明的化妆品组合物具有源自下组的活性植物成分：绞股蓝；椰子汁；印度楝；或红景天(Rhodeola)，和药学上或化妆上可接受的载体。优选地，当本发明的组合物具有作为印度楝(印楝)种子细胞培养物的印度楝时，该组合物还具有至少一种附加的活性成分，它选自：绞股蓝、Rhodeola和椰子汁。本发明额外的组合物具有源自以下组的植物成分：绞股蓝，椰子汁和Rhodeola；和药学上或化妆上可接受的载体。还提供通过局部施用本发明的组合物改善皮肤、头发和/或指甲美学外观的方法。

附图描述

图1表示各种试验样品体外对角质化细胞内热休克蛋白生成的影响。

图2表示各种试验样品对角质化细胞培养中细胞凋亡的影响。

图3表示Gymnostemma对角质化细胞培养中ATP生成的影响。

图4表示Rhodeola对角质化细胞培养中热休克蛋白生成的影响。

图5表示椰子汁对角质化细胞培养中热休克蛋白生成的影响。

图6表示印度楝对角质化细胞培养中热休克蛋白生成的影响。

图7表示绞股蓝对角质化细胞培养中热休克蛋白生成的影响。

发明详述

本发明提供具有天然植物成分或天然植物成分混合物的局部组合物，它可通过修改在皮肤、头发和/或指甲内细胞对弹性蛋白、尤其热休克蛋白的反应恢复和增强皮肤、头发和/或指甲。本发明的组合物提供多种抗老化和皮肤肌理优点。

皮肤、头发和/或指甲的美学外观的改善通过局部施用本发明的组合物获得。这些组合物具有单一天然植物成分或天然植物成分的混合物。

植物成分优选包括以下组分：绞股蓝；椰子汁；印度楝(包括其细胞培养物、肉汤和/或提取物的印度楝(印楝))；和Rhodeola。特别优选的植物成分混合物是印度楝和一种或多种其它成分，特别是绞股蓝、椰子汁和/或Rhodeola。本发明组合物内活性植物成分的含量是组合物总重量的约0.0001百分数以重量计或重量百分比(wt％)至约50wt％，优选约0.001wt％至约10wt％，更优选约0.01wt％至约5wt％，又优选约0.1wt％至约3wt％。

印度楝(印楝)源于楝科植物印度楝(Azadirachta indica)。印度楝(印楝)种子细胞特别优选适用于本发明，由于它们是丰富的并能产生宽范围的活性成分。在本发明中，印度楝(印楝)种子细胞通常通过从种子提取细胞获得，优选种子胚芽，接着体外培养和均化。这种方法显著增加了种子细胞的含量和数量。优选地，在促进未分化状态的培养基中培养种子细胞。更优选地，均化之后，保藏种子细胞和植物细胞组分。由印度楝(印楝)种子细胞产生的活性成分例子包括，但不限于，17-β-羟基印苦楝二酮(azadirdione)；17-表印苦楝二酮(epiazadiradione)；1α-甲氧基-1，2-二氢  印苦楝二酮(azadiradione)；1β，2β-二环氧-印苦楝二酮(azadiradione)；22，23-二氢-23β-甲氧基-印苦楝二酮(azadiradione)，7-脱乙酰基-gedunin；印苦楝子素；印苦楝酮；环氧印苦楝二酮(azadiradione)；蜜尔得宁；苦楝三醇；nimolicinol；和vepinin。2001年11月9日提交的、名为具有皮肤复原优点的局部化妆品组合物的共同未决的申请显示了具有一种或多种印度楝(印楝)种子细胞和印度楝(印楝)种子细胞肉汤的教导，本文通过参考引入。

印度楝(印楝)种子细胞肉汤通过由印度楝(印楝)种子分离出的细胞的组织培养物制备。在含有适当养料和成分的组织培养基中培养印度楝(印楝)种子细胞。这种方法从印度楝(印楝)种子细胞提供快速细胞生长和关键活性化合物的产生。植物组织培养形式的细胞生物工程学的使用提供本发明成分标准的可预言的高效供应。本发明的体外研究已经显示印度楝(印楝)种子细胞肉汤改善角质化细胞细胞增殖，增加成纤维细胞代谢，减少皮肤色素沉着，增加前胶原合成，并且有效结合至雌激素受体。印度楝(印楝)种子培养物/肉汤或其提取物的优选数量是组合物总重量的约0.001wt％至约10wt％。印度楝(印楝)种子细胞肉汤具有组织培养的印度楝(印楝)种子细胞和培养基。

绞股蓝是黄瓜科成员。它还被称为5-叶人参、绞股蓝或南方人参。它习惯上生长于中国中南部多山区域。这种药草与通常称为人参的植物相比是一种不同的植物。它是称为″绞股蓝皂甙″的皂甙的丰富来源，它类似于，某些情形中等同于人参中发现的人参皂甙，除此之外还发现浓度上比人参中发现的那些高几倍。这些皂甙已经显示具有抗氧化剂或细胞保护作用。绞股蓝(Jiaogulan)以粉末形式购得。在本发明的化妆品组合物中，基于组合物总重量绞股蓝优选含量是约0.001wt％至约10wt％。

椰子汁是液体或粉末形式，特别是冻干形式。在本发明的化妆品组合物中，基于组合物总重量，椰子汁优选含量是约0.001wt％至约10wt％。椰子汁是椰子中间的水。椰子果实成熟时，水″干涸″或者由植物/果实利用。

Rhodeola以粉末形式购得。在本发明的化妆品组合物中，基于组合物的总重量，Rhodeola优选含量是约0.001wt％至约10wt％。

本发明提供源自以上植物来源(包括植物种子)的医学、治疗学和化妆品活性成分的有效释放。种子通常具有种皮和由胚乳环绕的胚胎。植物种子细胞主要由胚胎的组织提取。位于植物的“非种子”部分(即根茎)的胚细胞还意图用于本发明。提供整个种子细胞(即全部成员)是优选的。全部种子细胞通过粉碎或破裂细胞壁粉碎以释放大范围的植物细胞组分。植物种子细胞，以及其它植物原料或植物原料混合物，接着掺入药学上或化妆上可接受的载体和/或局部组合物。

植物种子细胞通常具有或得到植物的所有植物细胞组分的最高潜力，包括任何治疗、化妆或医学活性。具有最高潜力的植物种子细胞是基本上未分化的那些。在本文使用时，术语“基本上未分化”包括已经分化成具体植物细胞的种子细胞，例如叶细胞、根细胞、木质部(xylum)和/或韧皮部细胞，具有特定的功能或化学成分(未分化的种子细胞)；分化程度有限使种子细胞保留较宽范围的基本上等同于未分化的植物组分的细胞(接近未分化的种子细胞)；和已经去分化成为未分化种子细胞的种子细胞(去分化种子细胞)。换言之，术语“基本上未分化”植物种子细胞包括未分化种子细胞、接近未分化种子细胞和去分化种子细胞。基本上，这些三种类型的种子细胞是多种作用的并显示宽范围的植物细胞成分。本发明中，术语“植物学的”和“植物”意思相同地使用。

去分化指在分化的种子细胞中逆转分化水平至认为它们未分化或接近未分化的程度。分化的逆转通常增强种子细胞内植物细胞成分的范围和发生率，包括治疗、化妆和医学活性。

影响未分化的条件包括营养组合物(以上所述)、温度、光或无光、气体顶部空间组成(gas headspace composition)、工作模式和持续时间。光条件包括自然光(宽波谱或频谱)，限制或窄波谱或频谱，或者无光(黑暗)。光还可在强度上变化。气体顶部空间组成可在氧气、二氧化碳和乙烯含量(以及其它气体)中变化或者没有气体。操作模式可在如分批相、半分批相、连续相和前述多相的方法操作中变化。例如，细胞生长/增生和活性物质的生物合成的分离相是可行的。持续时间随时间变化。

培养通常指植物种子细胞暴露于适当的营养培养基。培养可通过加入整个种子或其部分，例如胚乳和胚胎，至营养培养基中进行。细胞可在液体、半固体和固体营养培养基中培养。营养培养基可以与盐、营养基、激素和激发剂配制以促使细胞生长、细胞代谢和增生、细胞维护、活性成分生物合成或前述的组合。U.S.专利No.6,127,181的表4和U.S.专利No.5,407,816的例1至9阐明了有效的培养基配方的例子，这些例子在此引入以供参考。

U.S.专利Nos.5,407,816；5,885,826；和6,127,181公开了培养和未分化植物种子细胞的方法，这些文献在此引入以供参考。

均化通常指植物种子细胞壁的破碎和碎裂。均化通过促进它们由种子细胞释放，增强了细胞种子成分(包括治疗、化妆和医学活性组分)的可利用性。均化可通过由任何本领域已知的方式或方法或者本领域亦已知的冻熔技术机械破碎细胞进行。

保藏植物种子细胞通常指在希望的活性物质的功效在掺入至本局部组合物之前基本上不消失的条件下保存它们。由于在营养培养基，即肉汤中的种子细胞可直接局部施用，保藏对于本发明不是必需的。事实上，保藏对于确保质量和对于防止在培养之后和制造规模上生产局部组合物之前变质是重要的。

保藏可通过本领域任何已知的方式完成，例如冷却，低pH下贮藏，即约4或更低，优选约3.6至约4.0。优选地，种子细胞通过在低pH的营养肉汤中保存和冷却而保藏。

有益地，基本上未分化的植物种子细胞与化妆上可接受的载体混合形成本组合物。细胞从营养培养基中分离出并与载体混合，或者，更优选地，细胞和/或本发明其它天然植物活性组分和营养培养基一起在载体中混合。选择性地，本组合物可采用不含额外载体的营养培养基中细胞的形式，使含有种子细胞的营养肉汤可直接局部施用。肉汤优选20wt％植物种子细胞，尽管具有较高或较低植物种子细胞含量的肉汤在本发明的范围内。

单独或结合采用本发明的活性成分通过多途径增加了身体对应激反应的天然防卫机制。通过天然再生的复原，将保护提供给皮肤、头发和指甲免除应激反应诱导的损伤和真正的抗老化优点效果。具有本发明活性植物成分的组合物提供应激性防应激性反应或应激性平衡优点，从而防止皮肤、头发和指甲应激性反应诱导的早熟老化，并且同时提供真正的抗老化皮肤、头发和指甲护理优点。

体外研究已经显示单独或组合含有绞股蓝，印度楝，Rhodeola和椰子汁的本发明的组合物，通过天然应激反应防卫机制提供皮肤、头发和指甲复原优点。更具体地，在基于体外细胞试验的报道中，这些活性成分增加了应激蛋白，尤其是热休克蛋白的产生。然而，它们未增加天然具有较高热休克蛋白的细胞内热休克蛋白的浓度。本发明的活性物质在试验量是无毒的，不会诱发细胞凋亡。研究已经显示热休克蛋白随应激反应升高，超过对照组。活性成分上调弹性蛋白作为对应于生理需要对应激的自然防御。此外，体外绞股蓝意想不到地增加细胞ATP水平，从而产生激励作用。因此，通过在攻击之前应激性调节能保护细胞和/或刺激细胞从先前的攻击中复原。换言之，当本发明用于和，例如，皮肤护理有关时，本发明不仅用于处理已经处于应激反应的皮肤，而且作为每日皮肤护理方案的一部分，本发明还“预处理”皮肤不与应激物反应。“应激反应”意图包括任何由内在和/或外在因子(例如污染、温度变化，和UV辐射)引起的失调。应激皮肤的例子包括，但不限于，有斑皮肤(patchy skin)、黑眼袋、敏感性皮肤和发疹。敏感性皮肤对应激反应和其它损害特别具有反应性。

本发明的活性成分在处理皮肤、指甲、唇和/或头发的医学和/或化妆症状中进一步有效，所述的处理包括预防、停止、改善、减轻或减少。这种症状通常包括，但不限于，痤疮、牛皮癣、湿疹、皮脂溢、皮炎、皮肤和头发易裂、脱发、多毛症、红斑痤疮、搔痒症(pruritis)、老茧、疣、鸡眼、干皮肤、皱裂的皮肤、头皮屑、皮肤缺陷、老化斑、敏感性皮肤、色素沉着过多或色素减退，薄皮、脂肪团、萎缩纹、黑眼圈、雀斑、黄化、粗糙、角化症、炎症、变色、皮肤萎缩、皱纹、纹、增生、蜘蛛血管(毛细管扩张)、脱发、碰伤、扩大毛孔、纤维症、晒斑、皮肤老化(随年龄老化、激素老化和/或光化老化)、病毒感染、真菌感染、细菌感染，和它们的任意组合。本发明的活性成分还可用于增强公共健康，皮肤、指甲和头发的活力和外观。

具有这些活性成分的局部组合物能够改善皮肤的美学和/或化妆外观。这些改善能够以以下任何一种方式显现：减少皮肤病学老化症状，它归因于，例如，随年龄老化，激素老化和/或光老化；减少皮肤脆性；减少毛孔的尺寸；胶原和/或弹性蛋白损失的预防和/或逆转；改善雌激素失调的效应；皮肤萎缩的预防；预防和/或减少包括细纹和/或皱纹的纹/或皱纹的外观和/或深度；预防、减少和/或治疗色素沉着过度；肤色、光泽、清晰和/或紧缩度的改善；预防、减少和改善皮肤下垂；促进抗氧化活性；改善皮肤韧性、丰满弹性、柔度和/或柔软度；增加前胶原和/或胶原生成；改善皮肤肌理和/或促进恢复原来的肌理状态；促进皮肤屏障修复和/或功能；皮肤轮廓外观的改善；恢复皮肤光泽和/或亮度；最小化疲劳和应激性反应的皮肤病学症状，例如皮肤发疹和/或对环境影响所引起的应激性反应(例如，污染和/或温度变化)的抵抗力；补充由于老化和/或绝经减少的皮肤内基本营养和/或成分；增强皮肤细胞间的联系；增加细胞增生和/或增殖；增强由于老化和/或绝经下降的皮肤细胞新陈代谢；延缓细胞老化；抑制皮肤内加速皮肤细胞老化的酶；最小化皮肤干燥和/或增加皮肤水分；最小化皮肤变色，包括黑眼圈；促进和/或加速细胞更新；增加皮肤厚度；增加皮肤弹性和/或弹力；借助于或不借助于α羟基酸或其它剥离剂，增加表皮剥脱；预防和逆转葡糖胺聚糖(GAG)、胶原和/或弹性蛋白损失；微循环改善；减少和/或预防脂肪团形成；减少痤疮形成。

尤其是，具有本发明植物活性组分的局部组合物能够改善皮肤的美学外观、健康和活力。这样一种改善能够显现在以下的至少一种中：预防和/或逆转胶原和/或弹性蛋白损失；皮肤肌理改善；肤色、透明度，和/或紧固度改善；促进/加速细胞更新；和增加皮肤厚度。

本发明的局部组合物能够制备成任何适当的产品形式。这些产品形式包括，但不限于，气溶胶喷射剂、霜、分散体、乳剂、泡沫、凝胶、液体、洗剂、摩丝、软膏、贴、发蜡、粉剂、泵式喷雾剂、固体、溶液、棒和小毛巾。

本组合物优选包括载体。有效的载体是药学上或化妆上可接受的适于局部施用的。有效的载体包括，但不限于，一种或多种含水体系，甘油、Cl-4醇、脂肪醇、脂肪醚、脂肪酯、多元醇、乙二醇、植物油、矿物油、脂质体、层状类脂材料、硅油、水，或者它们的组合。

此外，按照本发明的组合物的载体可以是均相制剂形式或者包括但不限于的水包油、油包水的乳剂，以及包括三个的多相乳剂。这些乳剂能够覆盖宽范围的稠度，包括稀洗剂(它还可适于喷雾或气溶胶输送)、乳状洗剂、清霜和浓霜。其它适当的局部载体包括无水液体溶剂，例如油和醇；水基单相液体溶剂(例如，水—醇溶剂系统)；无水固体和半固体(例如凝胶和棒)；和水基凝胶和摩丝体系。以下四篇参考文献描述了用于本发明的载体系统的例子，所有文献整个通过参考引入本文：″Sun ProductsFormulary″，Cosmetics & Toiletries，105卷，122-139页(1990年12月)；″Sun ProductsFormulary″，Cosmetics& Toiletries，102卷，117-136页(1997年3月)；Figueroa等的U.S.专利No.4,960,764，1990年10月2日出版；和Fukuda等的U.S.专利No.4,254,105，1981年3月出版。

任选地，本局部组合物包括一种或多种麻醉剂、抗变应原、抗真菌、抗微生物、抗炎剂、抗氧化剂、防腐剂、螯合剂、着色剂、脱色剂、软化剂、乳化剂、脱落剂(exfollient)、成膜剂、芳香剂、湿润剂、驱虫剂、润滑剂、增湿剂、药剂、光稳定剂、防腐剂、皮肤保护剂、皮肤渗透增强剂、防晒剂、稳定剂、表面活性剂、增稠剂、粘度调节剂、维生素，或者它们的任何组合。

本组合物用于产品，特别是化妆品，它能改善皮肤、指甲和/或头发的状况。借助于本发明，提供具有较高纯度，以及多种治疗特效的组合物和标准活性成分供应品是可行的。此外，可配制本组合物以释放稳定浓度活性成分，或成分混合物，这样以便于获得希望的化妆效果，尤其在成批生成商业产品中。

本发明的组合物可方便地用于任何适于皮肤护理、化妆、个人护理、头发护理或指甲护理的化妆品。

以下是本发明的非限制性实例。除非另外说明，所有比例和百分比以重量计。

                        实施例1

                 生物测定热休克蛋白的生成

评价在生物测定中各种物质对热休克蛋白的作用。热休克70蛋白水平通过采用商业上可得到的测定试剂盒-EKS-700(StressGenBiotechnologies，Victoria，B.C.，Canada)测量。初生的角质化细胞以试验样品处理约18小时。细胞接着溶解。细胞溶解产物一式双份流入提供的ELISA HSP-70免疫测定板并培养2小时。洗涤板并加入抗-HSP-70：生物素抗体。板接着培养另外1小时。洗涤板，加入抗生物素蛋白-HRP(辣根过氧化物酶)共轭物，并培养1小时。再次洗涤板。加入TMB(四甲苯)底物并培养10分钟；接着加入停止液。在450nm光度计测量板，并测定Hsp70蛋白。

热休克蛋白的生成与培养基中角质化细胞对照比较。评价以下试样：亚砷酸钠(0.001％wt./vol.+对照)；绞股蓝(0.01％wt./vol.+对照)；Rhodeola(0.01％wt./vol.+对照)；和椰子汁(0.01％wt./vol.+对照)。以％wt./vol给出的浓度基于每体积培养基成分的总重量。亚砷酸钠已知刺激热休克蛋白的生成。该试验结果如图1所示。这些数据显示与亚砷酸钠产生的热休克蛋白相比，本发明的植物成分在0.01％wt./vol浓度对初生人角质化细胞是无毒的。

                         实施例2

                   生物测定细胞凋亡产生

评价生物测定中各种物质对细胞凋亡的作用。以各种试验样品处理初生角质化细胞。在细胞生理学中细胞凋亡是严重事件。细胞应激反应或损伤期间，复合级联过程的程序性细胞死亡发生，称为细胞凋亡。细胞凋亡的特征为一系列描述为编程性细胞死亡的形态学和分子变化。细胞凋亡中最早的事件之一是称为天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶的特异性蛋白酶的活化。

健康细胞中，线粒体在它们的外细胞膜上表达两种蛋白质Bcl-2和Apaf-1。Bcl-2蛋白质通常与蛋白质Apaf-1结合。细胞除去应激性反应开始，Bcl-2和Apaf-1蛋白分离。此外，线粒体膜开始漏细胞色素C至细胞液。释放的Apaf-1蛋白和细胞色素C结合至其它称为天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(特别是天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9)的细胞液分子。大多数细胞中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(半胱氨酸-天门冬氨酸-蛋白酶)广泛表达在惰性酶原形式中。天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9，细胞色素C和Apaf-1结合形成称为凋亡体的复合物。在这种复合物中，天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9变得有活性，开始其它天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(例如天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶8)蛋白水解激活的级联。这种级联是可行的，由于活性天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶通常激活其它原天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶。最终通过这种级联，激活天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3。天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3初步激活在蛋白质降解中是主要效应物，并且看起来是朝向细胞死亡不可逆的参与。

细胞凋亡(天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3)测量采用商业上可得到的分析试剂盒(E-13183；Molecular Probes Eugene，OR)进行。在溶解缓冲液中溶解和一个“冻-熔”周期之前将初生人角质化细胞处理1小时。将细胞溶解产物离心，除去上清液用于分析。上清液加入底物储液，盖盖子，室温培养30分钟，接着以荧光板阅读器测量(激发/发射342/441nm)。增加的荧光性是增加的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3活化的指示。

在初生角质化细胞生物测定中，通过试验物诱导的细胞凋亡与培养基内角质化细胞的对照比较。评价以下试样：亚砷酸钠(0.001％wt./vol.+对照)；紫外光(+对照)；绞股蓝(0.01％wt./vol.+对照)；Rhodeola(0.01％wt./vol.+对照)；和椰子汁(0.01％wt./vol.+对照)。以培养基的总体积为基准，给出的浓度为植物成分的％wt。紫外辐射已知诱导细胞凋亡。试验结果如图2所示。这些数据显示与紫外辐射诱导的凋亡相比，通过诱导凋亡测定，本发明的植物成分在0.01％wt./vol的浓度体外对初生人角质化细胞是无毒的。

                       实施例3

                   ATP生成的生物测定

评价在细胞培养生物测定中绞股蓝(Gynostesmma)对ATP生成的影响。采用商业上可得到的试剂盒(ATPLite-M)，它得自PackardBioscience，Meriden，CT的，测量细胞ATP浓度。初生人角质化细胞以试验材料或培养基单独处理18小时。细胞在溶解溶液中溶解并置入96孔微板。加入底物溶液(荧光素)，板摇晃一分钟。该板通过放入不透光的盒中适应黑暗10分钟，继之以光度计测量。测量的发光数量越大，ATP浓度越高。

以培养基总体积为基准的植物成分浓度为0.001％wt./vol.和0.01％wt./vo的绞股蓝在人角质化细胞培养基生物测定中试验，并且与培养基中角质化细胞的对照比较。测定发光背景。该实验的结果如图3所示。这些数据显示，与对照培养物相比，0.001％wt./vol和0.01％wt/vol数量的绞股蓝显著增加了体外人角质化细胞内ATP生成。

                      实施例4

           生物测定热休克蛋白70报道子的活化

在初生人角质化细胞培养生物测定中，评价本发明组合物对热休克70蛋白(Hsp70)启动子激化的作用。初生人角质化细胞通过借助于质粒(pCMV/Bsd)报道系统的电穿孔转染，该系统含有与编码荧光素酶的基因连接的Hsp70启动子，它充当报道子。转染之后，含有该质粒的细胞通过暴露于杀稻瘟菌素选择。转染细胞杀稻瘟菌素。未转染的角质化细胞死亡。抗杀稻瘟菌素是质粒内发现的杀稻瘟菌素脱氨基酶基因转染和表达的确认。转染的角质化细胞接着以试验材料处理24小时。相对于NaAsO₂(13μg/ml)、Rhodeola(0.10μg/ml；1.0μg/ml；和100μg/ml)、椰子汁(0.10μg/ml；1.0μg/ml；和100μg/ml)、印度楝(Azadiracta)(0.10μg/ml；1.0μg/ml；和100μg/ml)，和绞股蓝(0.10μg/ml；1.0μg/ml；和100μg/ml)试验角质化细胞培养物。接着洗涤细胞并暴露于荧光素。荧光素酶通过Hsp70启动子激化转录，随后转化为与底物荧光素反应的酶活性蛋白。荧光素酶蛋白氧化荧光素产生由发光计测量的光能。测量的发光量越大，Hsp70启动子活性越大。Hsp70启动子检测和荧光素酶活性的光检测是热休克70蛋白的指示。培养基内的角质化细胞作为对照(载体)。该试验的结果如图4、图5(椰子汁)、图6(印度楝)和图7(绞股蓝)所示。这些数据清楚显示本发明的植物成分显著引起角质化细胞培养物内热休克蛋白70的生成。

前述的说明应当理解为仅仅是说明本发明。各种选择和修正可由本领域熟练人员不背离本发明而设计。从而，本发明意图包括所有落入以下权利要求范围内的这种选择和修正以及变化。

Claims (30)

1.一种局部组合物，包括：至少一种选自绞股蓝、椰子汁、印度楝和Rhodeola的植物成分；和药学上或化妆上可接受的载体，其中当植物成分来自印度楝种子时，该组合物进一步包括至少一种选自绞股蓝、椰子汁和Rhodeola的其它成分。

2.权利要求1的组合物，其中至少一种植物成分含量是组合物总重的约0.0001wt％至约50wt％。

3.权利要求1的组合物，其中至少一种植物成分含量是组合物总重的约0.001wt％至约10wt％。

4.权利要求1的组合物，其中至少一种植物成分含量是组合物总重的约0.01wt％至约5wt％。

5.权利要求1的组合物，其中至少一种植物成分含量是组合物总重的约0.1wt％至约3wt％。

6.权利要求1的组合物，其中至少一种植物成分是绞股蓝。

7.权利要求6的组合物，其中绞股蓝含量是组合物总重的约0.001wt％至约10wt％。

8.权利要求1的组合物，其中至少一种植物成分是椰子汁。

9.权利要求8的组合物，其中椰子汁含量是组合物总重的约0.001wt％至约10wt％。

10.权利要求1的组合物，其中至少一种植物成分是印度楝种子细胞培养物或其提取物，含量是组合物总重的约0.001wt％至约10wt％。

11.权利要求1的组合物，其中至少一种植物成分是Rhodeola。

12.权利要求11的组合物，其中Rhodeola含量是组合物总重的约0.001wt％至约10wt％。

13.权利要求1的组合物，其中所述植物成分是绞股蓝、椰子汁、印度楝和Rhodeola。

14.权利要求1的组合物，其中载体是一种或多种选择含水系统、甘油、C1-4醇、脂肪醇、脂肪醚、脂肪酯、多元醇、乙二醇、植物油、矿物油、脂质体、层状类脂材料、硅油、水和它们的任意组合。

15.权利要求1的组合物，其中该组合物是选自气溶胶喷射剂、霜剂、乳剂.固体、液体、分散体、泡沫、凝胶、洗剂、摩丝、软膏、粉剂、贴、发蜡、溶液、泵式喷雾剂、棒和小毛巾的产品形式。

16.权利要求1的组合物，其中植物成分选自绞股蓝、椰子汁和Rhodeola。

17.一种改善皮肤、头发和/或指甲美学外观的方法，包括向皮肤、头发和/或指甲局部施用化妆有效量的权利要求1的组合物。

18.权利要求17的方法，其中改善是至少一种选自以下的改善：年龄老化、激素老化和/或光老化的皮肤病学症状减少；皮肤脆性减少；毛孔缩小；胶原和/或弹性蛋白损失的预防和/或逆转；改善雌激素失调的效应；预防皮肤萎缩；预防和/或减少纹和/或皱纹的外观；预防、减少和/或治疗色素沉着过度；肤色、光泽、清晰和/或紧固度的改善；预防、减少和改善皮肤下垂；促进抗氧化活性；改善皮肤韧性、丰满弹性、柔度和/或柔软度；增加前胶原和/或胶原生成；改善皮肤肌理和/或促进恢复原来的肌理状态；促进皮肤屏障修复和/或功能；皮肤轮廓外观的改善；恢复皮肤光泽和/或亮度；最小化疲劳和/或应激性反应的皮肤病学症状；抗环境影响所引起的应激性反应；补充由于老化和/或绝经减少的皮肤内成分；增强皮肤细胞间的联系；增加细胞增生和/或增殖；增强由于老化和/或绝经下降的皮肤细胞新陈代谢；延缓细胞老化；抑制皮肤内加速皮肤细胞老化的酶；最小化皮肤干燥和/或增加皮肤水分；最小化皮肤变色；促进和/或加速细胞更新；增加皮肤厚度；增加皮肤弹性和/或弹力；增加表皮剥脱；预防和逆转葡糖胺聚糖、胶原和/或弹性蛋白损失；微循环改善；减少和/或预防脂肪团形成；减少痤疮形成；和它们的任何组合。

19.权利要求17的方法，其中的改善是至少一种选自以下的改善：年龄老化、激素老化和/或光老化的皮肤病学症状减少；预防和/或减少纹/或皱纹的外观和或深度；肤色、光泽、清晰和/或紧固度的改善；改善皮肤韧性、丰满弹性、柔度和/或柔软度；改善皮肤肌理和/或促进恢复原来的肌理状态；和它们的任何组合。

20.权利要求17的方法，其中改善是至少一种选自以下的改善：最小化疲劳和/或应激性反应的皮肤病学症状；抗环境影响所引起的应激性反应；抗皮肤发疹；抗污染和/或温度变化；最小化皮肤干燥和/或增加皮肤水分；增加皮肤弹性和/或弹力；改善污染、皮肤发疹、温度变化和/或太阳幅射对皮肤的影响；和它们的任何组合。

21.权利要求17的方法，其中所述组合物含有绞股蓝、椰子汁、印度楝和Rhodeola。

22.改善皮肤、头发和/或指甲美学外观的方法，包括向皮肤、头发和/或指甲局部施用化妆有效量的权利要求16的组合物。

23.权利要求22的方法，其中改善是至少一种选自以下的改善：最小化疲劳和应激性反应的皮肤病学症状；抗环境影响所引起的应激性反应；抗皮肤发疹；抗污染和/或温度变化；最小化皮肤干燥和/或增加皮肤水分；增加皮肤弹性和/或弹力；改善污染、皮肤发疹、温度变化和/或太阳幅射对皮肤的影响；和它们的任何组合。

24.权利要求22的方法，其中至少一种植物成分是组合物总重的约0.0001wt％至约50wt％。

25.处理皮肤、头发和/或指甲的方法，包括向皮肤、头发和/或指甲局部施用有效量的权利要求1的组合物，以预防、改善、抑制和/或减少皮肤病学老化的症状。

26.权利要求25的方法，其中老化症状与由疲劳、生理学上应激反应、环境影响所引起的应激性反应、污染、温度变化、皮肤发疹、太阳幅射和它们的任何组合组成的组的一种或多种有关。

27.权利要求26的方法，其中老化症状是一种或多种选自疲劳、生理学上应激发反性和环境影响所引起的应激性反应的症状。

28.权利要求26的方法，其中老化症状与一种或多种选自污染、皮肤发疹、温度变化和/或太阳幅射的症状有关。

29.一种治疗应激性皮肤的方法，包括向皮肤局部施用有效量的权利要求1的组合物。

30.一种治疗应激性皮肤的方法，包括向皮肤局部施用有效量的权利要求16的组合物。

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