CN1500212A - 有多个被标记部分的信号增强系统 - Google Patents

有多个被标记部分的信号增强系统 Download PDF

Info

Publication number
CN1500212A
CN1500212A CNA018223907A CN01822390A CN1500212A CN 1500212 A CN1500212 A CN 1500212A CN A018223907 A CNA018223907 A CN A018223907A CN 01822390 A CN01822390 A CN 01822390A CN 1500212 A CN1500212 A CN 1500212A
Authority
CN
China
Prior art keywords
targeting agent
analyte
chromatostrip
label
derivatives
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CNA018223907A
Other languages
English (en)
Other versions
CN100472212C (zh
Inventor
���ס�����˹����
海伦·李
黄凌
玛格达·阿纳斯塔索瓦·迪内瓦
向·云·胡
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Diagnostics for the Real World Ltd
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Publication of CN1500212A publication Critical patent/CN1500212A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN100472212C publication Critical patent/CN100472212C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G01N33/54386—Analytical elements
    • G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
    • G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/81—Packaged device or kit
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S977/00—Nanotechnology
    • Y10S977/70—Nanostructure
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S977/00—Nanotechnology
    • Y10S977/70—Nanostructure
    • Y10S977/773—Nanoparticle, i.e. structure having three dimensions of 100 nm or less
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S977/00—Nanotechnology
    • Y10S977/70—Nanostructure
    • Y10S977/788—Of specified organic or carbon-based composition
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S977/00—Nanotechnology
    • Y10S977/902—Specified use of nanostructure
    • Y10S977/904—Specified use of nanostructure for medical, immunological, body treatment, or diagnosis
    • Y10S977/918—Immunological

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

描述了一种检测分析物的测试条测试法。在优选实施方案中，一种能结合分析物的多生物素化抗体与胶体金标记的抗－生物素抗体结合，和随被认为含分析物的测试液一起通过毛细管作用沿测试条向上。在分析物、生物素化抗－分析物抗体和胶体金标记的抗－生物素抗体之间形成的复合物在测试条捕获区被捕获。捕获区胶体金标记物的存在表明测试液中分析物的存在。使用这样方法检测分析物的灵敏度比类似方法高一个数量级，类似方法中与分析物结合的生物素化抗－分析物抗体在第一步中通过毛细管作用沿测试条向上，和在另一个步骤中，胶体金标记的抗生物素抗体通过毛细管作用沿测试条向上。同样还描述了实施本发明中测试方法的试剂盒。

Description

有多个被标记部分的信号增强系统
本发明涉及检测测试液中分析物存在的方法和实施该方法的试剂盒。
一种检测测试液中分析物存在的传统方法包括用测试条捕获分析物和用测试条检测该分析物的存在。所述测试条有一个接触测试液的接触端和远离接触端、固定有抗-分析物抗体(捕获抗体)的捕获区。
为了检测分析物存在，将测试条接触端接触测试液。如果测试液中存在分析物，那么它将通过毛细管作用迁移至测试条捕获区，在捕获区被捕获抗体捕获。测试条捕获区分析物的存在进一步被标记有如胶体金的抗-分析物抗体(检测抗体)检测。
这些测试条测试方法有一些优点。它们操作简单、便宜，不需要专门仪器，结果快速易得并且可视测。因此，这些测试方法特别适合用于医师办公室、家庭、偏远地区和没有专门仪器的发展中国家。它们可用于例如检测患者是否受到了致病微生物如沙眼衣原体的感染。
然而，使用这样测试方法检测分析物的灵敏性是较低的。所以，如果测试液中仅含有少量分析物，那么将不能检测到。如果用该测试方法诊断患者是否患有特定疾病，当患者不能被诊断出患有该疾病时，这尤其是一个缺点。当患者没有表现出症状时，情况更是如此，但是，当表现出症状但需要确证这些症状由特定疾病或特定疾病劳损引起时，特定情况也是这样。
WO 00/25135公开了一种检测抗原的两步法测试条检测系统。该检测系统使用一种抗-抗原生物素化抗体和一种胶体金标记的抗-生物素抗体(抗生物素金缀合物)。第一步，将生物素化抗体和测试液混合，测试条膜末端浸入该混合物以便该含水混合物通过毛细管作用沿膜向上迁移。混合物中与生物素化抗体结合的抗原被固定在测试条捕获区的抗-抗原抗体捕获，从而形成一种含固定的抗-抗原抗体、抗原和生物素化抗体的复合物。第二步，将测试条浸入单独的抗生物素金缀合物混悬液中。抗生物素金缀合物通过毛细管作用沿膜向上迁移，并与在捕获区和抗原一起被捕获的生物素化抗体结合。然后通过检测捕获区的金标记物来检测出抗原。
尽管该两步法系统可提供增强的灵敏度，但是人们仍然希望进一步提高分析物检测的灵敏度。
因此，根据本发明第一方面，提供了一种检测测试液中分析物存在的方法，该方法包括以下步骤：
a)提供一种色谱条，该条含有接触测试液的接触端和固定在色谱条上远离接触端的捕获区的捕获部分，该捕获部分含有能结合(不是通过核酸碱基对相互作用)分析物或其衍生物的配体/抗-配体结合对中之一作为所述配体/抗-配体结合对中的另一个；
b)将能结合分析物或其衍生物的靶向试剂与测试液接触，使靶向试剂与测试液中的分析物或其衍生物结合，所述靶向试剂具有多个配体；
c)将标记物与靶向试剂中两个或更多个配体中的每个配体结合；
d)将色谱条的接触端与测试液接触，使结合了被标记靶向试剂的分析物或其衍生物通过毛细管作用迁移至捕获区被捕获部分并被捕获部分捕获；和
e)检测捕获区标记物的存在。
根据本发明，靶向试剂在其接触捕获区之前先与标记物结合形成了被标记靶向试剂。这与WO 00/25135中的方法相反，其中生物素化抗体和抗-生物素金缀合物分别在两步中通过毛细管作用沿测试条膜向上迁移。申请人出人意料地发现，使用本发明的方法检测分析物的灵敏度高于WO00/25135中的两步法。在最佳条件下，分析物检测的灵敏度至少比使用两步法检测的灵敏度高一个数量级。
为了实施本发明第一方面的方法，靶向试剂和标记物可仅仅是加入测试液中，然后使测试液与色谱条的接触端接触。这样的方法比WO00/25135中公开的、需要两次分别向上迁移的方法更容易操作。因此，可能更快得到结果，而分析物检测的灵敏度更高。
这里使用的术语“色谱条”是指材料能通过毛细管作用转运溶液的任何材料组成的多孔条。色谱条能吸收或不能吸收侧流，但是优选能吸收侧流。术语“不能吸收侧流”是指其中液体中溶解或分散的所有组分在侧向能以基本相等的速率和相对未减少的流量转运穿过膜，这与“能吸收侧向流量”引起的一种或更多组分选择性滞留相反。能吸收侧向流量的材料包括纸、硝化纤维素和尼龙。优选示例是硝化纤维素。
在靶向试剂加入(或以别的方式接触)测试液之前，可通过将靶向试剂和标记物预混合使标记物与靶向试剂的配体结合。然而在某些情况下，优选靶向试剂与标记物没有预混合，因为这样的预混合会引起靶向试剂与标记物的沉淀。因此，靶向试剂与标记物可分别加入(或分别接触)测试液。靶向试剂和标记物可基本上同时或以任何顺序加入(或接触)测试液。
在测试液接触色谱条的接触端之前，测试液可与靶向试剂和标记物预温育，以保证形成复合物。最佳预温育时间取决于反应物的比率和色谱条的流速。在某些情况下，预温育太长时间会减弱得到的检测信号，甚至导致假阳性检测信号。因此，对于使用的特定条件需要选择最佳的预温育时间。
可取的是，在标记物与靶向试剂结合之前，将测试液与靶向试剂预温育，以便使靶向试剂能在最佳结合条件下结合测试液中的分析物。
在本发明可选择的方面，标记物与靶向试剂的结合可发生在色谱条上。这可通过将标记物和/或靶向试剂可释放地固定在色谱条的接触端和捕获区之间的联接区来完成。当测试液通过毛细管作用迁移至捕获区时，标记物和/或靶向试剂被释放至测试液中。如果是标记物而非靶向试剂可释放地固定，那么应使靶向试剂接触测试液以便测试液中的靶向试剂能结合标记物，因为它们是可释放地固定的。相似地，如果是靶向试剂而非标记物是可释放地固定的，那么则使标记物接触测试液。
因此，根据本发明的第二方面，提供了一种检测测试液中分析物存在的方法，包括以下步骤：
a)提供了一种色谱条，含有：
i)接触测试液的接触端；
ii)固定在色谱条远离接触端的捕获区的捕获部分，该捕获部分含有能结合(不是通过核酸碱基对相互作用)分析物或其衍生物的配体/抗-配体结合对中之一作为所述配体/抗-配体结合对中的另一个；和
iii)可释放地固定在色谱条的接触端与捕获区之间联接区的靶向试剂，该靶向试剂具有多个配体并能结合分析物或其衍生物。
b)将多个标记物和测试液接触；
c)将色谱条接触端接触测试液，使测试液穿过联接区迁移至捕获区，从而靶向试剂从联接区释放出来，以便被释放靶向试剂两个或更多配体的每个配体被标记物结合，和以便结合了标记物的、被释放的靶向试剂与测试液中分析物或其衍生物一起迁移至捕获区和作为捕获部分、分析物或其衍生物、靶向试剂和标记物之间形成的复合物的一部分在捕获区被捕获；和
d)检测捕获区标记物的存在。
可选择的，标记物可释放地固定在色谱条联接区，和靶向试剂接触测试液，或标记物与靶向试剂都可释放地固定在联接区。
固定可仅仅是通过将标记物和/或靶向试剂在色谱条上干燥来实现。将实施本发明中方法所必需的一些或全部反应物可释放地固定在色谱条上的一个优点是，这些反应物不需要分别加入测试液中，或分别由其它实施该方法所必需的组分携带或包装。
在本发明的其它方面，可取的是，在色谱条接触端接触测试液后将接触端与含有被标记靶向试剂的测试液接触，或者在分析物或其衍生物通过毛细管作用迁移至捕获区后将靶向试剂和标记物与测试液接触，因此，被标记靶向试剂和分析物或其衍生物分别通过毛细管作用迁移至捕获区。
这些方面的可能的优点是，可减少任何非特异的标记物与色谱条的结合，因为更多测试液(或含靶向试剂的溶液)穿过色谱条，因此冲洗色谱条。
在本发明的其它方面，当分析物或其衍生物被捕获部分捕获后，可使被标记靶向试剂直接与色谱条的捕获区接触。应当在靶向试剂接触捕获区之前(或者在例外的情况下同时)将标记物与靶向试剂的配体结合。
因此，广义上而言，本发明的检测测试液中分析物存在的方法包括以下步骤：
a)提供了一种含有接触测试液的接触端和固定在色谱条捕获区的捕获部分的色谱条，该捕获部分含有能结合(不是通过核酸碱基对相互作用)分析物或其衍生物的配体/抗-配体结合对中之一作为所述配体/抗-配体结合对中的另一个；
b)将色谱条的接触端与测试液接触，使分析物或其衍生物通过毛细管作用迁移至捕获区，和被捕获部分捕获；
c)将被标记靶向试剂与捕获区接触，该被标记靶向试剂能结合分析物或其衍生物，使被标记靶向试剂作为含有捕获部分、分析物或其衍生物和被标记靶向试剂复合物的一部分在捕获区被捕获，其中被标记靶向试剂含有多个配体，其中两个或多个配体中的每个配体与标记物结合；和
d)检测捕获区标记物的存在。
在本发明一些方面和实施方案中，标记物和/或靶向试剂可取是干燥形式，例如与测试液接触的粉末或片状。这样做的优点在于能减小实施本发明中方法的试剂盒的重量和尺寸，因为此时不需要包括单独的标记物和/或靶向试剂溶液。这使得本发明的试剂盒易于使用，并且如果该试剂盒需要运输，尤其是到偏远地区的话，这一点尤为重要。其他优点在于靶向试剂和/或标记物的干燥形式更稳定。这在难以冷冻或冷藏反应物溶液、否则该反应物溶液在室温下不稳定的地区实施本发明中方法尤为重要。
优选靶向试剂至少有4个配体，更优选至少6个配体。优选靶向试剂不超过50个配体。最佳配体数目取决于靶向试剂本身。例如，对于含IgG的靶向试剂，优选每分子IgG不超过20个配体。然而对于含IgM的靶向试剂，可使用较多配体。
申请人发现靶向试剂配体的最佳数目取决于色谱条的流速。一般来说，流速越快，每分子靶向试剂的配体数目越多。
膜的流速取决于膜孔的大小、结构和表面活性剂处理。在未处理过的硝化纤维素膜上，孔的大小影响流速：孔越大，流速越快。然而，后处理和阻滞性溶液(blocking solution)对流速也有显著影响。不同溶液在膜上有不同流速，或者由于它们的粘度，或者由于粒子的含量。
这里所定义的快流速膜是指其中水通过毛细管作用以约70-80秒/40mm的速度迁移的膜。快流速膜的实例有：Whatman Purabind A-RP膜(孔径8μm)-水流速＝80秒/40mm；和Whatman Purabind A-XP膜(孔径12μm)-水流速＝70秒/40mm。慢流速膜的实例是Schleicher&SchuellAE99膜(孔径8μm)-水流速＝130秒/40mm。
对于快流速膜而言，每分子靶向试剂约9-20个配体可得到最佳结果，优选约14-18个。对于慢流速膜，每分子靶向试剂约6-12个配体可得到最佳结果，更优选8-12个配体，再更优选8-10个配体，最优选8或9个配体。
申请人发现每分子靶向试剂的最佳配体数目取决于生物样品的粘度。通常来讲，样品越粘，那么每分子靶向试剂的配体数目越少。例如，当本发明中方法用于检测CT时，典型的测试样品是尿、子宫颈粘液或尿道粘液。由于这些样品的粘度不同，因此使用的每分子靶向试剂最佳配体数目将取决于样品溶液的粘度。
靶向试剂可含有单一或多于一个部分。例如靶向试剂可含有：一个能结合分析物或其衍生物的主要部分，和一个能结合主要部分的辅助部分，该辅助部分具有多个配体。
优选的配体包括生物素c能与抗-生物素抗体、抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白或其衍生物结合)、荧光素(能与抗-荧光素抗体结合)和DNP(能与抗-DNP抗体结合)。
靶向试剂的部分或每个部分优选是抗体。这里所用的术语“抗体”是指任何能保持抗原结合活性的抗体或抗体片段(不管是天然的还是重组的)。这包括单克隆或多克隆抗体、单链抗体、单克隆或多克隆抗体的Fab碎片和嵌合抗体。
在一个优选实施方案中，靶向试剂包括能结合分析物或其衍生物的初级抗体，和能结合初级抗体的二次抗体，该二次抗体与多个配体共价结合。优选本实施方案是因为二次抗体能单独制备和能与不同初级抗体一起使用来检测不同分析物。
优选多个标记物至少与一个靶向试剂配体结合，因此进一步增加了分析物检测的灵敏度。
当作为在捕获部分、分析物或其衍生物、靶向试剂和标记物之间形成的复合物的一部分时，任何一种可在色谱条上检测该复合物的标记物均可使用。优选标记物是肉眼可检测的标记物。适合的肉眼可检测标记物的实例包括织物染料和有色微粒如有色乳胶粒和金属溶胶如胶体金或硒。优选胶体金粒径范围约20-60nm，更优选20-40nm。使用窄粒径分布范围23-31nm(30nm British Biocell International Limited)的胶体金或宽粒径分布范围20-47nm(平均29-38nm)的胶体金可得到相似的分析灵敏度。
其它合适的标记物的实例包括放射性标记物、发光标记物尤其是荧光素标记物、和含有能与发色底物或可被酶转化为发光物质的底物反应的酶的标记物。尤其优选化学发光标记物，因为它们产生发光信号的强度比其它标记物高，因而提高了分析物检测的灵敏度。
每个标记物可由标记试剂提供。每种标记试剂可包括单一或多于一个部分。例如，一种标记试剂可包括：能结合靶向试剂配体的主要部分；和能结合主要部分的被标记辅助部分。
优选标记试剂的部分或每个部分是抗体。
在优选实施方案中，标记试剂含有一个能结合靶向试剂配体的初级抗体和能结合初级抗体的二次抗体，该二次抗体结合有标记物。优选该实施方案，因为二次抗体可单独制备和与不同初级抗体一起使用来结合不同配体。
对于靶向试剂配体含生物素的实施方案，适合的标记试剂包括以下：
i)一种被标记的抗生物素抗体；
ii)一种含有抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白或其衍生物的被标记部分，其中抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白或其衍生物保持有生物素结合活性。
iii)一种保持有生物素结合活性的抗-生物素抗体，抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白或其衍生物(主要部分)，和能结合主要部分的被标记抗体(辅助部分)。
可优选每个标记试剂含有多个标记物来进一步提高检测的灵敏度。这可通过将多个标记物与每个标记试剂共价结合来实现。可选择的，如果标记试剂含有多于一个部分，那么每个部分均可被标记，如图5C所示。
捕获部分可含有单个或没有共价结合在一起的多个部分。捕获部分可含有能结合分析物或其衍生物的抗体。
在其它实施方案中，分析物可以是抗体，捕获部分可是抗原。如果测试液中引起疾病的微生物抗原的量可能非常低时，那么在检测个体是否感染致病微生物时，这样的实施方案尤其有优点。由个体对抗微生物感染抗原时产生的抗体可能以非常高的量存在，因此使抗体检测成为一种更灵敏的诊断感染的方法。其实例是响应HIV感染时产生的抗体。
分析物的衍生物可通过化学修饰分析物来得到，例如将分析物与能被捕获部分结合的配体共价结合。在一个实施方案中，分析物可共价结合生物素形成分析物的衍生物，该分析物衍生物接着能被含有抗生物素抗体、抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白、或其生物素结合衍生物的捕获部分捕获。可选择地，可通过将衍生部分如抗体与能被捕获部分结合的分析物非共价结合来形成分析物。
形成分析物衍生物的一个优点在于分析物和被标记靶向试剂可进一步从色谱条上分开，因此减小或防止了任何位阻效应，否则会在色谱条和被捕获区捕获的、含分析物的复合物之间产生位阻效应。如果分析物衍生物含有能被这样色谱条的捕获部分结合的捕获配体，那么分析物衍生物的捕获也允许使用同样的色谱条来捕获不同分析物。
在优选实施方案中，分析物衍生物含有多个捕获配体，每个捕获配体能被捕获部分结合。多个捕获配体的存在增加了分析物衍生物被捕获部分捕获的可能性。
图6显示了分析物被衍生部分结合的优选实施方案中的实施例。注意到在该图中，没有显示分析物与被标记靶向部分的结合。
本发明中方法可用于检测任何适合的分析物。实例包括感染性试剂的抗原或对抗这些抗原产生的抗体、激素(如怀孕测试)、代谢物(如检测代谢紊乱)、药物(治疗或违禁药)、维生素、类固醇或应激反应产生的抗体。
优选的感染性试剂的抗原或对抗这些抗原产生的抗体的实例是：乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、HBsAg的’a’抗原决定基、乙型肝炎’e’抗原(HbeAg)、抗HbeAg抗体、抗乙型肝炎核抗原抗体(如抗乙型肝炎核抗原IgG和IgM)、丙型肝炎病毒(HCV)抗原、抗HCV抗原抗体、HIV抗原(HIV1和HIV2)、抗HIV抗原抗体、沙眼衣原体抗原或淋病抗原。
根据本发明，还提供了实施本发明中方法的试剂盒。
一种实施本发明中第一方面方法的试剂盒，包括：
i)色谱条，有接触测试液的接触端和固定在色谱条远离接触端的捕获区的捕获部分，该捕获部分含有能结合(不是通过核酸碱基对相互作用)分析物或其衍生物的配体/抗-配体结合对中之一作为所述配体/抗-配体结合对中的另一个；
ii)从色谱条中分离出、能结合分析物或其衍生物的靶向试剂和多个标记试剂，该靶向试剂具有多个配体，每个标记试剂与靶向试剂的一个配体结合，每个标记试剂具有一个标记物。一种实施本发明中第二方面方法的试剂盒，包括：
i)色谱条，含有接触测试液的接触端和固定在色谱条远离接触端的捕获区的捕获部分，该捕获部分含有能结合(不同于通过核酸碱基对相互作用)分析物或其衍生物的配体/抗-配体结合对中之一作为所述配体/抗-配体结合对中的另一个；和可释放地固定在色谱条接触端和捕获区之间的联接区的靶向试剂，该靶向试剂具有多个配体和能结合分析物或其衍生物；和分离地
ii)多个能结合靶向部分配体的标记试剂，每个标记试剂具有一个标记物。
标记试剂与靶向试剂一起可释放地固定在色谱条的联接区。可选择地，标记试剂而不是靶向试剂可释放地固定在色谱条上。
当试剂盒用于实施本发明第二方面的方法时，应当理解可释放地将靶向试剂和标记试剂固定在色谱条联接区尤其有这样的优点：所有检测测试液中分析物存在的反应物都存在于色谱条上c条件是选择标记试剂，使它不需要通过与另外的试剂进一步反应使捕获区捕获的复合物肉眼可见，除非这些另外的试剂也同样可释放地固定在色谱条上)。
在这样的实施方案中，需要保证联接区和捕获区之间有足够的距离，使得一旦它们被释放到达捕获区时，标记试剂能结合靶向试剂。可选择的，联接区应浸入测试液中使靶向试剂被释放出来和标记试剂进入测试液，因而在它们通过毛细管作用迁移至捕获区之前能在测试液中互相结合。
当靶向试剂和标记试剂可释放地固定在色谱条联接区时，它们可以固定在联接区的相同部分或联接区内的不同区域。当靶向试剂和标记试剂固定在联接区同一部分时，它们可在联接区相互散开或在不同层。
在一种方案中，可优选标记试剂直接固定在色谱条的联接区，因此形成第一层，靶向试剂固定在第一层上，因此在第一层上形成第二层。这种方案的一种可能的优点是预计靶向试剂能先于标记试剂释放至测试液中。如果怀疑标记试剂会干扰靶向试剂与分析物或其衍生物的结合的话，这对于确保在捕获区有效形成复合物是重要的。
当靶向试剂和/或标记试剂没有固定在色谱条时，可优选它们的干燥形式，例如粉末或片状。
分析物检测的灵敏度可取决于靶向试剂和标记试剂的比率。因此，应当选择能得到最佳结果的比率。
当本发明中试剂盒含有由多于一个部分组成的靶向试剂时，在某些情况下，可取的是一个或更多部分可释放地固定在色谱条上和一个或更多剩余部分从色谱条分离出来。同样的，当每个标记试剂含有一个或更多部分时，在某些情况下，可取的是一个或更多部分可释放地固定在色谱条上和一个或更多剩余部分从色谱条分离出来。
本发明中需要另外的试剂来检测含有标记试剂的被捕获复合物的试剂盒c例如，那些其中标记试剂含有能转变发色底物的酶或能被酶转变为发光产物的底物的试剂盒)优选还含有检测需要的试剂。
本发明中这些方面和实施方案中，其中靶向试剂和/或标记物可释放地固定在色谱条联接区，通过毛细管作用到达捕获区的测试液中标记物和/或靶向试剂的浓度可能发生变化。这是因为测试液中靶向试剂和/或标记物的浓度会随着可释放地固定的靶向试剂和/或标记试剂释放到测试液中直到联接区没有残余试剂而上升或下降。
当捕获区靶向试剂和/或标记物浓度增加时，可能会超过靶向试剂和/或标记物在捕获区最佳形成复合物的量。相反，当靶向试剂和/或标记物浓度降低时，捕获区靶向试剂和/或标记物的量可能不足。因此，当色谱条接触端接触含有最佳靶向试剂和/或标记物浓度的测试液时，在捕获区捕获的复合物总量可能少于捕获的总量。因此检测的灵敏度可能下降。
因而，优选靶向试剂和/或标记物没有可释放地固定在色谱条联接区。
根据本发明还提供了本发明中检测测试液中分析物存在的试剂盒的用途。
根据本发明还提供了检测测试液中分析物存在的被标记靶向试剂，该被标记靶向试剂能结合分析物或其衍生物，而不是被分析物或其衍生物结合，其中被标记靶向试剂具有多个配体，每个配体能被标记物结合，可利用标记物检测被标记靶向试剂。本发明进一步提供了本发明中检测测试液中分析物存在的被标记靶向试剂的用途。
参考图1对本发明中的实施方案进行说明。在以下讨论中，初级抗体相当于靶向试剂，半抗原相当于靶向试剂的配体，标记二次抗体相当于标记试剂，和捕获抗体相当于捕获部分。
任一以膜为基础的快速检测法的主要缺点是，与酶联免疫分析法(EIA)相比其灵敏度降低。这种灵敏度降低归因于这样一个事实：快速检测时，抗原抗体反应必须在15-20分钟内完成，没有轮流冲洗和温育步骤带来的优点。另外，抗原抗体复合物用肉眼检测出，而不是用酶促反应放大信号。因有限样品量及快速检测法所固有的灵敏度下降的缺点必须以一种改进的检测系统来补偿。
希望通过将半抗原如生物素或荧光素的多拷贝(N)，与能定向于被检测分析物的初级抗体以化学方式结合来放大检测信号。这与用标记物如有色微粒(例如胶体金)标记二次抗体(抗-半抗原)一起将检测信号增强。
图1显示了没有放大的直接检测(现有技术)和根据本发明有放大的间接检测系统之间分析灵敏度的比较。
图1中，被检测分析物是CT-脂多糖(CT-LPS)。在现有技术没有放大的检测方法中(直接检测，没有根据本发明的信号增强)，被标记抗体定向于分析物上的特定抗原。图1A显示了连结胶体金的抗-LPS抗体，该抗体能与液态样品中的分析物(如CT-LPS)上的特定抗原(如LPS)反应并结合。当与被标记抗体结合时，为了检测分析物，使用了固定的捕获抗体。这在图1A中作为能识别同一分析物上一种不同特定抗原的抗-LPS抗体来显示。
CT-LPS分析物(如图1A参考1显示)是多聚的(multimeric)。它是从CT细菌中提取出来，例如通过清洁剂或热处理。捕获抗体和被标记抗体与CT-LPS多聚物的不同部分结合。
根据本发明，对分析物特异的初级抗体不是直接标记的c间接检测)。初级抗体中含有半抗原尤其是生物素的多拷贝(优选3-9)。初级抗体上的多个半抗原能被标记了抗-半抗原的二次抗体定向。图1B的例子是有胶体金标记物的抗-生物素抗体。多个二次抗体可结合单个初级抗体，导致每个分析物结合标记物数目放大。接着分析物和初级抗体c标记有二次抗体)的缀合物被捕获和以使用捕获抗体的传统方式检测。
预期通常可通过将初级抗体和测试样品(可能含有或不合分析物)首先反应来实施根据本发明中这些实施方案的分析物检测。一旦初级抗体和任何存在的分析物反应，其紧接着会被二次抗体标记。接着，任一分析物与初级抗体和二次抗体标记物的缀合物能被捕获抗体捕获。
然而，抗体-抗原和抗体-半抗原反应严格按照这个顺序实施并不是本发明根本原则所绝对必须的。现有技术中的技术人员可理解为，在某种情况下，被标记二次抗体与未标记定向于分析物的初级抗体的反应作为第一步反应，下一步是缀合物与测试样品中任一分析物反应和捕获被标记分析物是可能的，甚至是优选的。
同样不排除以下可能性：首先是捕获抗体捕获任一分析物，接下来实施初级抗体和二次抗体结合反应(任何顺序均是可理解的)，只要初级抗体和二次抗体在到达捕获区之前相互结合。
可以理解，在某些情况下，把其中抗分析物抗体(或靶向试剂)有与存在于样品中的任何分析物反应的最佳条件(时间，温度，试剂等)的反应作为第一步反应可能是一个优点。尤其当分析物以低浓度存在于样品中或在某种程度上难以与初级抗体接近时的情况就是这样。
在这种情况下，如果获知检测样品中分析物的可能性，则可发现与初级抗体最佳可能结合条件。因此，可以理解，可能存在这样一些条件，即它们可能促进未标记初级抗体与分析物的结合，胜于促进被标记初级抗体与分析物的结合(现有技术中直接标记方法的情况就是这样)。
而且，既然载有标记物的二次抗体对初级抗体上半抗原的亲和力可能非常高，因此使用相对较低浓度的被标记抗体同时仍得到相对较高水平(放大的)标记物粘附(通过粘附于分析物的初级抗体/二次抗体缀合物)的可行性是本发明另一个潜在的优点。
申请人同样认识到，在现有技术直接标记方法中，标记物(例如有色微粒：胶体金)可通过抗体以非常接近分析物目标(如LPS)的方式被粘附。这在图1A中已图示了。例如，分析物和金微粒之间约12nm的间隔是可能的。相反，当同时使用图1中显示的初级抗体类型和多个半抗原时，和使用抗-半抗原标记的二次抗体时，增加分析物和标记物之间的间隔是可能的。例如约24.2nm间隔是可能的。
因而，在本发明图1B所示实施方案中，很可能信号放大(如信号增强)不仅归因于捕获抗体捕获了更多的有色微粒，而且归因于当金标记的抗体与特定抗原的抗原决定基结合时，减少了受到的空间阻碍。换句话说，增加有色微粒和抗原位点之间的间隔将减少空间位阻和允许在捕获区凝集更多的有色微粒。
通过本发明中方法和试剂盒得到的检测灵敏度增强的其它可能的原因可能来源于由于靶向试剂中存在多个配体而引起的标记物与靶向试剂结合可能性的增加。
在本发明的其他实施方案中，分析物可以是抗体，例如个体对抗感染性微生物如HIV的抗原时产生的抗体。在这样的实施方案中，初级抗体c仍然具有半抗原如生物素或荧光素的多拷贝)定向于分析物抗体。和其它实施方案中描述的一样，初级抗体上的多个半抗原能被标记了抗-半抗原二次抗体定向，因此使每个分析物的标记物数目放大。然而，为了捕获分析物与初级抗体(标记有二次抗体)的缀合物，使用了能通过分析物抗体定向的固定的捕获抗原。
当分析物是人抗体时，初级抗体可以是抗-人Fc抗体或抗-人抗体，如IgG、IgM或其片段。
图5显示了本发明的进一步优选实施方案。
应当注意，图1和5中解释的本发明实施方案是示意性的，在实际操作中，标记物相对于其它组分可比显示中的大很多，和每种标记物可联接多个部分。
现在仅以示例的方式，参照附图对本发明实施方案进行描述，其中：
图1以图方式显示了传统分析物检测和根据本发明一个实施方案的分析物检测之间的比较；
图2以图方式显示了一种用于实施本发明中方法实施方案的色谱条；
图3显示了使用传统方法(直接检测)和本发明中方法(间接方法)检测沙眼衣原体得到的结果；
图4显示了通过传统方法(直接检测)和本发明中方法(间接方法)检测HBsAg得到的结果；
图5显示了本发明中实施方案的实例；
图6显示了和分析物一起被捕获部分(注意没有显示分析物与被标记靶向试剂的结合)捕获的衍生部分的实例；
图7显示了使用间接方法和直接方法检测分析物的灵敏度比较，和改变每抗-分析物抗体的配体数目对间接检测的影响；
图8显示了当使用快流速测试条膜时，改变每抗-分析物抗体的配体数目对分析物检测灵敏度的影响。
图9显示了一步和两步检测法检测分析物的灵敏度比较。
图10显示了使用偶合了抗-分析物抗体的FITC分析物检测的结果；和
图11显示了本发明中方法和商业上可得到的检测系统检测HBsAg时的比较。
在以下实施例中，直接检测指现有技术中与图1A中描述相似的分析物检测方法。间接检测指使用本发明中方法的分析物检测。使用方法的细节在每个实施例中给出。
实施例1  在检测沙眼衣原体(CT)的测试条免疫分析法中使用偶合了生物素的抗-脂多糖(LPS)抗体的信号增强。
目的
考察使用偶合了生物素的抗-LPS单克隆抗体(作为靶向试剂)和胶体金标记的抗-生物素单克隆抗体(作为标记试剂)检测CT的灵敏度。
使用本发明中第二方面的方法进行检测，其中靶向试剂和标记试剂可释放地固定在色谱条上。
实验步骤
测试条设计
见图2，显示了用于实施本发明中方法的色谱条示意图。
图2显示：
A.联接垫；B.读数区(膜)；C.吸收垫；D.初级抗体＝偶合了生物素的抗-CT-LPS抗体(靶向试剂)；E.二次抗体＝抗生物素-金缀合物(标记试剂)；F.特定抗体捕获区；G对照抗体捕获区。膜可以在A与B和B与C之间交迭。样品流动用粗体箭头表示。
捕获区F：在膜上固定了一种对抗特定种类CT-LPS抗原决定基的单克隆抗体(捕获部分)。
根据本发明中方法间接检测CT的检测试剂(靶向试剂和标记试剂)：在联接垫的D区和E区沉积的偶合了生物素的抗-CT-LPS单克隆抗体(靶向试剂)和偶合了胶体金的抗-生物素单克隆抗体(标记试剂)。
使用传统方法直接检测CT的检测试剂：胶体金标记的抗-CT-LPS单克隆抗体。
样品制备：待测分析物：
人尿液：尿液2ml离心，去上清，用样品缓冲液重新悬浮沉淀，100℃加热15min。
样品缓冲液：
含有盐、清洁剂和阻滞剂(如BSA或奶粉)的标准样品缓冲液。
样品展开剂：样品提取物(100μl)加入联接垫(A)，或将联接垫浸入样品提取物中。检测试剂(D & E)溶解，并通过毛细管作用随样品流沿色谱条迁移。样品中CT-LPS分子(分析物)被初级抗体(偶合了生物素的抗CT-LPS抗体)结合。二次抗体(抗-生物素-金)缀合初级抗体上的生物素。当样品进入读数区(B)和穿过固定有捕获抗体(F)的区(捕获区)时，该复合物被捕获。F区产生的颜色与样品中CT-LPS的量成正比。
对照步骤：作为直接检测的对照，将抗-鼠-IgG抗体固定在G区。对于间接检测，将抗生物素抗体固定在G区作为对照。
结果
见图3和表1，显示了上述直接和间接检测法的比较。表1和图7中还显示了每抗体生物素的分子比率对检测灵敏度的影响。
表1直接和间接检测法的比较，和每抗体生物素的分子比率对检测灵敏度的影响(使用AE99膜，一种慢流速膜)。
CT-LPS(μl)* 直接检测              间接检测(每抗-LPS抗体的生物素数目)
 2  4  6  8  9  10  11  12
 0  0  0  0  0  0  0  0  0  0
 0.001  0  0  0  0.5  1  1  0.5  0.5  0.5
 0.003  0  0  0  1  2  2  1.5  1.5  1.5
 0.01  0.5  0.5  0.5  2  2.5  2.5  2  2  2
 0.03  1  1  2.5  3  4  4  3.5  3.5  3.5
 0.1  2  2.5  3  4  4.5  4.5  4  4  4
*1μl含LPS 4.218ng。
检测信号在1至5范围内，5是最强的。
表1中结果显示
(1)本发明中放大检测法能检测比直接检测法中更低的CT-LPS浓度；
(2)使用本发明中的检测法放大(即增强)了检测信号。
实施例2  HBsAg检测的鉴定
快速检测用于一些发展中国家筛选血液中HBsAg，尤其是用于血库中，在那里筛选了太少的样品以至于不能证明酶免疫分析(EIA)微量板或必要设备的大量花费是正当的。发展中国家最常用的快速检测HBsAg的测试是凝集、测试条和现场测试。凝集测试灵敏度低、相对不具有特异性、主观和劳动量大。现场测试需要多种试剂和不适于中等规模并需预筛选。另外，这些鉴定方法比标准EIA法昂贵得多。测试条也是商业上可得到的，它们中有一些效果很好。与EIA相比，这些快速检测的灵敏度检测限低一个数量级和导致检测到较低百分比的感染HBV血液单位。EIA本身比基因组放大低3％灵敏度(表2)。
表2不同筛选鉴定检测HBV感染的血液单位。
测试法     检测限 检测到得感染HBV血液单位百分率*
凝集     30ng/ml     54
测试条     5ng/ml     77
EIA     0.5ng/ml     97
基因组     40IU/ml NDA     100
*100％相当于EIA检测HBsAg加上在EIA检测显阴性的血单位中用PCR检测HBV的DNA。
在市场上可得到的检测HBsAg的快速测试条检测中，Abbott检测似乎是最灵敏的(表3)，检测限大约5ng/ml，而其它检测在12-25ng/ml之间。
表3三种商业上可得到的HBsAg快速检测的比较。
 公司名称               HBsAg(ng/ml)
    25     12     6     3
 Abbott     3     2     1.5     0.5
 Veda Lab     2     1     0     0
 Alfa Scientific     1     0     0     0
信号在1至5范围内，其中5是最强的。
目的
考察使用偶合了生物素的抗-HBsAg单克隆抗体(靶向试剂)和胶体金标记的抗-生物素单克隆抗体(标记试剂)检测HBsAg的灵敏度。使用本发明中第二方面方法进行检测，其中靶向试剂和标记试剂可释放地固定在色谱条上。
实验步骤
测试条设计：见图2
捕获线：定向抗属特异性HBsAg抗原决定基(所有HBsAg亚型都有的“a”抗原决定基)的多克隆抗体固定在膜上(捕获部分)。
检测：
直接：胶体金标记的抗-HBsAg的单克隆抗体用于传统方法中的直接检测。
间接：使用偶合了生物素的抗-HBsAg单克隆抗体(靶向试剂)和胶体金标记的抗-生物素单克隆抗体(标记试剂)。
样品：50μl血清加入10μl浓度为2％的吐温20。
展开样品：将样品(60μl)加入容器中，测试条浸入溶液中。
对照过程：固定抗-鼠-IgG抗体作为对照。
结果
见图4和表4。
表4使用Purabind A-XP膜(一种快流速膜)的直接检测法(现有技术)和间接检测法(根据本发明信号增强)的比较。
HbsAg(ng/ml) 直接检测            间接检测(生物素数目/抗HBsAg抗体)
  2   4   8   9   10   11
  0   0   0   0   0   0   0   0
  0.195   0   0   0   0.5   0.5   0   0
  0.39   0   0   0   1   1   0.5   0.5
  0.78   0   0   0.5   1.5   1.5   1   1
  1.56   0.5   0.5   1   2.5   2.5   2   2
  3.12   1   1   1.5   3.5   3.5   3   3
  6.25   1.5   2   2   4.5   4.5   4   4
  12.5   2   3   3   5   5   4.5   4.5
检测信号在1-5范围内，5为最强。
使用本发明间接检测方法可检测到的分析物浓度比传统直接检测方法中的低。
对于那些在两种方法(直接和间接)中都能检测到分析物的浓度(≥1.56ng/ml)，使用间接检测方法能得到比直接检测方法更强的信号。
对于间接检测方法，每分子抗体最佳生物素分子的数目为8或9。
虽然与直接检测方法相比，间接检测方法额外使用了一种抗体，但是其仍然是一步系统。
表4中结果也显示，根据本发明的间接检测方法比商业上可得到的快速检测方法更灵敏。为了证实这一点，将使用本发明中方法检测HBsAg的灵敏度直接与使用商业上可得到的Abbott检测法的灵敏度进行比较。
结果如表5和图11中显示。
表5本发明中方法和商业上可得的Abbott快速检测法检测HBsAg的比较。
测试条测试                    HBsAg(ng/ml)
12  6  3  1.5  0.75  0.38  0.18  0
间接 5  4  3  2  1.5  1  0.5  0
直接(Abbott) 2  1.5  0.5  0  0  0  0  0
信号在1-5范围内，5是最强的信号。
实施例1和2的讨论和结论。
与现有技术中直接检测系统相比，使用偶合了生物素的抗体和金标记的抗-生物素抗体放大了检测信号。
与使用现有的快速测试条测试法检测HBsAg的灵敏度(Abbott检测法约5ng/ml，其它检测法约12-25ng/ml)相比，本发明中的检测相对更灵敏，可检测到0.38ng/ml。
灵敏度提高的程度取决于每抗-LPS或HBsAg抗体生物素的分子比率。可通过将每抗体生物素的分子数目从4增加到8或9来增强信号。当抗-LPS或HBsAg单克隆抗体标记了8或9个生物素时，CT-LPS的检测灵敏度增加30倍，HBsAg的检测灵敏度增加8倍。使用本发明中检测方法检测0.001μlCT-LPS时，可得到与使用现有技术中直接检测法检测0.03μlCT-LPS相同的信号强度(1)。增强30倍尤其令人惊讶，因为当使用每抗体8或9个生物素时，估计分析物检测的灵敏度最大增加8或9倍。
两个使用本发明中方法可增加有色微粒凝集的可能解释在以下给出：
(1)抗原特异性抗体上的生物素比率越高，捕获的金微粒就越多。然而，每抗体超过一定数目的生物素分子时，生物素的可用性不会增加。相反，如果提供了过多的生物素，抗体对抗原的反应性会降低。
(2)含有有色微粒的间接检测将增加金微粒和抗原决定基之间的距离，并因此减少它们结合的空间位阻。
当使用金标记的链霉抗生物素蛋白时，与使用金标记的抗-生物素抗体的间接检测法相比，使用本发明中间接法检测分析物的灵敏度降低。这表示，如果标记物和捕获部分之间的距离太小或靶向和/或标记试剂的适应性不够，检测的灵敏度可能下降。
与有色微粒缀合的两层抗体将进一步增加有色微粒和抗原决定基之间的距离。
应当优化用于被标记抗-半抗原抗体的有色微粒的尺寸来得到最大信号。例如，30nm胶体金用于CT-LPS鉴定和HBsAg鉴定。
可使用其它配体，如FITC(参见实施例8)。
使用一种本发明中不同的间接方法重复实施例1和2中描述的实验。不是将生物素化的抗-分析物抗体和抗-生物素金缀合物固定在色谱条上，而是在色谱条接触端接触混合溶液之前，将试剂与含有CT-LPS或HBsAg分析物的测试液混合。得到的结果与实施例1和2中得到的结果相似。这表示使用本发明中方法得到的分析物检测灵敏度的提高不依赖于使用的试剂是固定在色谱条上，还是最初存在于测试液中。
实施例3  不同流速膜的最佳配体数目/每靶向试剂
申请人发现，每抗-分析物抗体的最佳生物素数目取决于测试条膜的流速。对于慢流速膜(例如Schleicher & Schuell AE99膜，孔径8μm)，每靶向试剂约6-12个配体可得到最佳结果，更优选8-12个配体，甚至更优选8-10个配体，最优选8或9个配体。
表6和图8中显示了当使用快流速膜(Whatman Purabind A-RP膜)时，每抗-分析物抗体生物素的数目对分析物检测灵敏度的影响。通过将含有CT-LPS分析物的缓冲液与生物素化抗CT-LPS抗体和抗生物素金缀合物混合，然后用色谱条的接触端接触混合溶液，从而实施本发明中间接检测方法。
表6不同流速膜的每靶向试剂最佳配体数目
CT-LPS(μl)*            间接检测(生物素数目/抗LPS抗体)
 6  9  12  14  18  20
 0  0  0  0  0  0  0
 0  0  0  0  0.5  0.5  0
 0.003  0  0.5  0.75  1  1  0.75
 0.01  0.5  1  1.5  2  2  1.5
 0.03  1  2  2.5  3.5  3.5  2.5
 0.1  2  3  3.5  4.5  4.5  4
*1μl含LPS 4.218ng。
信号在1-5范围内，5为最强信号。
当只有0.003μlCT-LPS存在时，为了使用本发明中间接检测方法能得到强度为1的信号，生物素化抗体应当含有14-18个生物素。因而，针对使用膜的流速，应当优化每生物素化抗-LPS抗体的生物素数目。
实施例4  一步法和两步法的比较
在本实施例中，比较了使用一步检测法(根据本发明第一方面的实施方案)和两步检测法(不是根据本发明)检测CT-LPS分析物的灵敏度。
为了实施一步法和两步法，使用了含有接触端和测试条远离接触端的捕获区固定有抗体(捕获抗体)的测试条(Purabind A-RP膜，一种快流速膜)。该捕获抗体能结合CT-LPS分析物(抗-CT-LPS抗体)。使用一种含有每抗体14个生物素(靶向试剂)和金标记抗-生物素抗体(标记试剂)的生物素化抗-CT-LPS抗体来检测CT-LPS分析物。
一步法如下进行：将含CT-LPS测试液与生物素化抗-CT-LPS抗体和抗-生物素-抗体-金缀合物混合，然后用测试条接触端接触混合溶液，使溶液通过毛细管作用到达捕获区，在捕获区检测金标记的存在。这样，分析物、靶向试剂和标记试剂在单一步骤中通过毛细管作用同时沿测试条向上。
两步法如下进行：将50μl缓冲液与CT-LPS和生物素化抗-CT-LPS抗体混合，然后用测试条接触端接触混合溶液，使溶液通过毛细管作用到达捕获区。然后，测试条接触端接触100μl抗-生物素-金缀合物的混悬液，使该混悬液通过毛细管作用迁移至捕获区。然后，在捕获区检测金标记物存在。这样，靶向试剂和标记试剂分别在两个不同步骤中通过毛细管作用沿测试条向上。
表7和图9显示了一步法和两步法分析比较的结果。
表7一步和两步分析法的比较
CT-LPS(μl)*  一步法  两步法
0  0  0
0.001  0.5  0
0.003  1  0
0.01  2  0.5
0.03  3  1
0.1  4.5  2
*1μl含LPS 4.218ng。
信号在1至5范围内，5为最强信号。
表7和图9的结果表明，使用一步CT-LPS检测法检测CT-LPS的灵敏度是两步CT-LPS检测法中的10倍(使用一步检测法检测0.003μlCT-LPS得到的信号强度与两步检测法检测0.03μlCT-LPS得到的信号强度相同)。
申请人还发现，一步检测法中测试条捕获区产生的信号线的质量和清晰度比两步法中的高。
实施例8  使用FITC作为靶向试剂配体
在本实施例中，又一次比较了直接和间接检测法检测分析物的灵敏度。然而，在间接检测方法中使用的配体是异硫氰酸荧光素(FITC)而不是生物素。按照与实施例1中描述相似的方法进行直接检测法(现有技术)。通过将含CT-LPS分析物的缓冲液与偶合抗-CT-LPS抗体的FITC和胶体金标记的抗-FITC抗体混合来实施本发明的间接方法。然后，用色谱条接触端接触混合溶液。每抗-分析物抗体FITC配体的数目可以变化。表8和图10中显示了得到的结果，与实施例1得到的结果非常相似。每抗-CT-LPS抗体的最佳FITC数目大约为7-11。
表8使用FITC作为靶向试剂的配体(AE99膜)
CT-LPS(μl)*  直接检测法  间接检测法(FITC数目/抗LPS抗体)
 6  7  9  11
 0  0  0  0  0  0
 0.001  0  0  1  1  1
 0.003  0  0.5  2  2  2
 0.01  0.5  1  2.5  2.5  2.5
 0.03  1  2  3.5  4  3
 0.1  2  3  4.5  4.5  4
*1μl含LPS 4.218ng。
信号在1-5范围内，5为最强信号。
这些结果证明，使用本发明间接方法得到的分析物检测灵敏度的改善不局限于使用生物素。
附图说明
图1
A)传统分析物检测(直接检测)的示意图。该图显示了CT细菌(1)被固定在固相(3)上的抗-LPS抗体(2)结合，和胶体金(5)标记的抗-LPS抗体(4)结合CT细菌(1)。
B)根据本发明实施方案的分析物检测的示意图。该图显示CT细菌(6)被固定在固相(8)上的抗-LPS抗体(7)结合，和偶合了8个生物素(10)的抗-LPS抗体(9)【(9)和(10)形成靶向试剂】。每个生物素与胶体金(12)标记的抗-生物素抗体(11)结合【(11)和(12)形成标记试剂】。
图5
该图显示了本发明的不同实施方案：
A)被固定在固相(22)上的捕获部分(21)捕获的分析物(20)。靶向试剂的主要部分(23)【例如抗-分析物鼠抗体】与分析物(20)结合，和它本身被靶向试剂的辅助部分(24)【例如抗-鼠抗体】结合。辅助部分(24)包括多个配体(25)。配体被含有标记物(27)的标记试剂(26)【例如缀合了有色微粒的抗配体抗体】结合。
B)被固定在固相(32)上的捕获部分(31)捕获的分析物(30)。具有多个配体(34)的靶向试剂(33)【例如抗-分析物抗体】与分析物(30)结合，和它本身被标记试剂的多个主要部分(35)【例如抗-配体鼠抗体】结合。每个主要部分(35)与含有标记物(37)的标记试剂的辅助部分(36)【例如缀合了有色微粒的抗-鼠抗体】结合。
C)被固定在固相(42)上的捕获部分(41)捕获的分析物(40)。具有多个配体(44)的靶向试剂(43)与分析物(40)结合，和它本身被标记试剂的多个被标记主要部分(45)结合。每个被标记主要部分(45)与标记试剂的被标记辅助部分(46)结合。标记物如(47)所示。
图6
该图表示了本发明的另外的实施方案：
A)与衍生部分(112)结合的分析物(110)，该衍生部分具有多个配体(114)，配体被固定在色谱条(118)捕获区的捕获部分(116)捕获。
B)与具有多个配体(124)的第一衍生部分(122)结合的分析物(120)。第二衍生部分(126)与第一衍生部分的配体结合。第二衍生部分被固定在色谱条(130)捕获区的捕获部分(128)捕获。
C)与第一衍生部分(142)结合的分析物(140)。结合第一衍生部分的第二衍生部分(144)具有多个捕获配体(146)。固定在色谱条(150)捕获区的捕获部分(148)结合捕获配体之一。

Claims (31)

1.一种检测测试液中分析物存在的方法，包括以下步骤：
a)提供一种色谱条，含有接触测试液的接触端和固定在色谱条捕获区的捕获部分，该捕获部分含有能结合(不是通过核酸碱基对相互作用)分析物或其衍生物的配体/抗-配体结合对中之一作为所述配体/抗-配体结合对中的另一个；
b)将色谱条接触端与测试液接触，使分析物或其衍生物通过毛细管作用迁移至捕获区，被捕获部分捕获；
c)将被标记靶向试剂与捕获区接触，被标记靶向试剂能结合分析物或其衍生物，因此使被标记靶向试剂作为含捕获部分、分析物或其衍生物和被标记靶向试剂形成的复合物的一部分在捕获区被捕获，其中，被标记靶向试剂含有多个配体，且其中两个或更多配体的每个配体与标记物结合；和
d)检测捕获区标记物的存在。
2.一种检测测试液中存在分析物的方法，包括以下步骤：
a)提供一种色谱条，含有接触测试液的接触端和固定在色谱条上远离接触端的捕获区的捕获部分，该捕获部分含有能结合(不是通过核酸碱基对相互作用)分析物或其衍生物的配体/抗-配体结合对中之一作为所述配体/抗-配体结合对中的另一个；
b)将能结合分析物或其衍生物的靶向试剂与测试液接触，使靶向试剂与测试液中的分析物或其衍生物结合，靶向试剂具有多个配体；
c)将标记物与靶向试剂中两个或更多配体的每个配体结合；
d)将色谱条接触端与测试液接触，使结合了被标记靶向试剂的分析物或其衍生物通过毛细管作用迁移至捕获区，被捕获部分捕获；和
e)检测捕获区标记物的存在。
3.一种检测测试液中分析物存在的方法，包括以下步骤：
a)提供一种色谱条，含有：
i)接触测试液的接触端；
ii)固定在色谱条远离接触端的捕获区的捕获部分，该捕获部分含有能结合(不是通过核酸碱基对相互作用)分析物或其衍生物的配体/抗-配体结合对中之一作为所述配体/抗-配体结合对中的另一个；和
iii)可释放地固定在色谱条的接触端与捕获区之间联接区的靶向试剂，该靶向试剂具有多个配体并能结合分析物或其衍生物。
b)将多个标记物和测试液接触；
c)将色谱条接触端接触测试液，使测试液穿过联接区迁移至捕获区，从而使靶向试剂从联接区释放出来，以便使被释放靶向试剂的两个或更多配体的每个配体被标记物结合，和以便使结合了标记物的、被释放的靶向试剂与测试液中分析物或其衍生物一起迁移至捕获区，并作为捕获部分、分析物或其衍生物、靶向试剂和标记物之间形成的复合物的一部分在捕获区被捕获；和
d)检测捕获区标记物的存在。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于标记物可释放地固定在色谱条联接区，以便使标记物在迁移至捕获区时与测试液接触，因而释放标记物使它们与释放出的靶向试剂结合。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于是标记物而不是靶向试剂可释放地固定在色谱条上，并且是靶向试剂而不是标记物在步骤(b)中与测试液接触。
6.一种检测测试液中分析物存在的方法，包括以下步骤：
a)提供一种色谱条，含有接触测试液的接触端和固定在色谱条上远离接触端的捕获区的捕获部分，该捕获部分含有能结合(不是通过核酸碱基对相互作用)分析物或其衍生物的配体/抗-配体结合对中之一作为所述配体/抗-配体结合对中的另一个；
b)将色谱条与测试液接触，使分析物或其衍生物通过毛细管作用迁移至捕获区并被捕获部分捕获；
c)两者选一：
(i)将能结合分析物或其衍生物的靶向试剂与测试液接触，该靶向试剂具有多个配体，标记物和靶向试剂的两个或更多配体的每个配体结合，和将色谱条接触端与测试液接触，使测试液中被标记靶向试剂通过毛细管作用迁移至捕获区并与被捕获区捕获的分析物或其衍生物结合；或
(ii)将色谱条接触端与含有能结合分析物或其衍生物的靶向试剂的溶液接触，该靶向试剂具有多个配体，标记物与两个或更多配体的每个配体结合，使溶液中被标记靶向试剂通过毛细管作用迁移至捕获区，并与被捕获区捕获的分析物或其衍生物结合；和
d)检测捕获区标记物的存在。
7.一种测试测试液中分析物存在的方法，包括以下步骤：
a)提供了一种含有接触测试液的接触端和固定在色谱条捕获区的捕获部分的色谱条，该捕获部分含有能结合(不是通过核酸碱基对相互作用)分析物或其衍生物的配体/抗-配体结合对中之一作为所述配体/抗-配体结合对中的另一个；
b)将色谱条的接触端与测试液接触，使分析物或其衍生物通过毛细管作用迁移至捕获区，并被捕获部分捕获；
c)将能结合分析物或其衍生物的靶向试剂与捕获部分接触，使靶向试剂与在捕获部分捕获的分析物或其衍生物结合，该靶向试剂具有多个配体，标记物与该靶向试剂的两个或更多配体的每个配体结合；和
d)检测捕获区标记物的存在。
8.根据权利要求1、2、6或7所述的方法，其特征在于标记物和靶向试剂配体的结合是在测试液中进行的。
9.根据权利要求8中所述的方法，其特征在于标记物由标记试剂提供的，该标记试剂在与该靶向试剂接触测试液基本相同的时间单独加入测试液中。
10.根据权利要求8中所述的方法，其特征在于靶向试剂在与标记物结合之前与测试液一起预温育。
11.根据前面任一权利要求中所述的方法，其特征在于多个标记物与靶向试剂中至少一个配体结合。
12.一种检测测试液中分析物存在的试剂盒，包括：
i)如权利要求2所述的色谱条；
ii)与色谱条分开的、能结合分析物或其衍生物的靶向试剂，该靶向试剂具有多个配体，多个标记试剂中的每个结合靶向部分的一个配体，每个标记试剂具有一个标记物。
13.一种检测测试液中分析物存在的试剂盒，包括：
i)如权利要求3所述的色谱条；
ii)能结合靶向部分一个配体的多个标记试剂，每个标记试剂具有一个标记物。
14.一种检测测试液中分析物存在的试剂盒，包括：
i)如权利要求2或3所述的色谱条；和可释放地固定在色谱条接触端和捕获区之间的联接区的标记试剂。
15.根据权利要求12所述的试剂盒，其特征在于被标记靶向试剂是干燥形式。
16.根据权利要求13所述的试剂盒，其特征在于标记试剂是干燥形式，或根据权利要求14所述的试剂盒，当靶向试剂与测试条分离时，其中的靶向试剂是干燥形式。
17.根据权利要求12至16任一所述的试剂盒，其特征在于靶向试剂含有偶合了多个配体的抗体。
18.根据权利要求12至16任一所述的试剂盒，其特征在于靶向试剂含有：能结合分析物或其衍生物的主要部分；和能结合主要部分的辅助部分，该辅助部分偶合了多个配体。
19.根据权利要求18所述的试剂盒，其特征在于，靶向试剂的主要部分和/或辅助部分是抗体。
20.根据权利要求12至19任一所述的试剂盒，其特征在于每个标记试剂含有一个被标记抗体。
21.根据权利要求12至19任一所述的试剂盒，其特征在于每个标记试剂含有：能结合靶向试剂配体的主要部分，和能结合主要部分的被标记辅助部分。
22.根据权利要求21所述的试剂盒，其特征在于标记试剂的主要部分和/或辅助部分是抗体。
23.根据权利要求21或22所述的试剂盒，其特征在于标记试剂的主要部分是被标记的。
24.根据权利要求12至23任一所述的试剂盒，其特征在于标记包括肉眼可检测的标记物优选有色微粒，或发光标记物，优选荧光标记物。
25.根据权利要求12至24任一所述的试剂盒，其特征在于标记物含有能将底物转化为有色或发光产物优选荧光素产物的酶。
26.根据权利要求12至25任一所述的试剂盒，其特征在于分析物是CT分析物或HBsAg。
27.根据权利要求12至26中任一所述的试剂盒在检测测试液中分析物存在中的用途。
28.根据权利要求1至11任一所述的方法，其特征在于分析物是CT分析物或HBsAg。
29.用于检测测试液中分析物存在的被标记靶向试剂，该被标记靶向试剂能结合分析物或其衍生物，但是不被分析物或其衍生物结合，其中被标记靶向试剂具有多个配体，每种配体能被标记物结合，可利用标记物检测被标记靶向试剂。
30.根据权利要求29所述的靶向试剂，其特征在于该靶向试剂具有约6-50个配体。
31.根据权利要求29或30的靶向试剂在检测测试液中分析物存在中的用途。
CNB018223907A 2000-11-30 2001-11-30 检测测试液中分析物存在的靶向试剂、试剂盒、用途以及检测方法 Expired - Lifetime CN100472212C (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB0029154.2 2000-11-30
GBGB0029154.2A GB0029154D0 (en) 2000-11-30 2000-11-30 Signal enhancement with multiple labelled-antibodies
GB0109313.7 2001-04-17
GBGB0109313.7A GB0109313D0 (en) 2000-11-30 2001-04-17 Signal enhancement with multiple laballed-antibodies

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1500212A true CN1500212A (zh) 2004-05-26
CN100472212C CN100472212C (zh) 2009-03-25

Family

ID=26245354

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB018223907A Expired - Lifetime CN100472212C (zh) 2000-11-30 2001-11-30 检测测试液中分析物存在的靶向试剂、试剂盒、用途以及检测方法

Country Status (7)

Country Link
US (3) US7776617B2 (zh)
EP (1) EP1340083B1 (zh)
CN (1) CN100472212C (zh)
AT (1) ATE530912T1 (zh)
AU (1) AU2002222117A1 (zh)
GB (2) GB0029154D0 (zh)
WO (1) WO2002044729A1 (zh)

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102227631A (zh) * 2008-11-28 2011-10-26 英佛皮亚有限公司 免疫层析测试中信号放大的方法以及使用该方法的免疫层析试剂盒
CN101031798B (zh) * 2004-07-29 2012-06-27 瑞莱诊断体系有限公司 侧向流系统和测定
CN102539790A (zh) * 2011-12-31 2012-07-04 南开大学 一种生物素的酶联免疫检测试剂盒
CN102879525A (zh) * 2004-12-13 2013-01-16 拜尔保健有限公司 独立式测试传感器
CN105403707A (zh) * 2015-09-29 2016-03-16 南方医科大学 一种检测靶物质的信号放大方法及使用该方法的免疫层析试纸和装置
CN107110847A (zh) * 2014-05-28 2017-08-29 快速诊断国际公司 用于检测或测量乙基葡萄糖醛酸苷的乙基葡萄糖醛酸苷侧向流动测试带、免疫测定、装置和方法
CN107643399A (zh) * 2017-03-06 2018-01-30 广州佰芮慷生物科技有限公司 一种提高免疫检测系统灵敏性的方法及使用该方法的装置
CN109596832A (zh) * 2018-12-25 2019-04-09 海卫特(广州)医疗科技有限公司 孕酮免疫层析检测试纸条及其制作方法
CN111868526A (zh) * 2018-03-13 2020-10-30 豪夫迈·罗氏有限公司 减少免疫测定中的干扰
CN112129956A (zh) * 2020-09-02 2020-12-25 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种胶体金免疫层析的胶体金标记液及其制备方法和应用

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0016836D0 (en) 2000-07-07 2000-08-30 Lee Helen Improved dipstick assays (1)
GB0016813D0 (en) * 2000-07-07 2000-08-30 Lee Helen Improved dipstick assays (4)
GB0025245D0 (en) 2000-10-14 2000-11-29 Lee Helen Multiple target detection
GB0029154D0 (en) * 2000-11-30 2001-01-17 Lee Helen Signal enhancement with multiple labelled-antibodies
AU2002323649A1 (en) 2001-09-06 2003-03-24 Genomic Profiling Systems, Inc. Rapid detection of replicating cells
AU2003277309A1 (en) * 2002-10-08 2004-05-04 Tara Nylese Portable diagnostic device and method for determining temporal variations in concentrations
US20100279279A1 (en) * 2003-09-17 2010-11-04 Robert Danielzadeh Compositions and methods for analysis of target analytes
US7090803B1 (en) * 2003-10-28 2006-08-15 American Bio Medica Corporation Lateral flow immunoassay device
US9057046B2 (en) * 2005-09-26 2015-06-16 Rapid Micro Biosystems, Inc. Cassette containing growth medium
US20080138842A1 (en) * 2006-12-11 2008-06-12 Hans Boehringer Indirect lateral flow sandwich assay
US7919331B2 (en) 2006-12-21 2011-04-05 Silver Lake Research Corporation Chromatographic test strips for one or more analytes
WO2008140814A1 (en) * 2007-05-10 2008-11-20 Acorda Therapeutics, Inc. Methods for detecting cardiac damage
CN102224260B (zh) 2008-09-24 2015-11-25 施特劳斯控股公司 用于检测分析物的试剂盒和装置
WO2010096394A2 (en) * 2009-02-17 2010-08-26 Redwood Biosciences, Inc. Aldehyde-tagged protein-based drug carriers and methods of use
US20110076697A1 (en) * 2009-04-28 2011-03-31 Innovative Laboratory Technologies, Inc. Lateral-flow immuno-chromatographic assay devices
WO2012097333A2 (en) 2011-01-14 2012-07-19 Redwood Bioscience, Inc. Aldehyde-tagged immunoglobulin polypeptides and method of use thereof
JP6105613B2 (ja) 2011-11-07 2017-03-29 ラピッド マイクロ バイオシステムズ インコーポレイテッド 無菌試験用カセット
EP2780705B1 (en) * 2011-11-16 2018-09-19 Becton, Dickinson and Company Methods and systems for detecting an analyte in a sample
CN107841461A (zh) 2012-04-16 2018-03-27 快速微型生物系统公司 细胞培养装置
JP6296457B2 (ja) 2013-01-11 2018-03-20 ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニーＢｅｃｔｏｎ， Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ 低コストの臨床現場即時アッセイデバイス
CN103344776A (zh) * 2013-06-08 2013-10-09 赵磊 多功能体外检测生物芯片及其制备方法
BR112016009958B1 (pt) 2013-11-06 2021-08-03 Becton, Dickinson And Company Dispositivo microfluídico, método, sistema e kit
US10018640B2 (en) 2013-11-13 2018-07-10 Becton, Dickinson And Company Optical imaging system and methods for using the same
PL3094252T3 (pl) 2014-10-14 2022-02-21 Becton, Dickinson And Company Zarządzanie próbką krwi z zastosowaniem pianki otwartokomórkowej
BR122020024283B1 (pt) 2014-10-14 2023-02-23 Becton, Dickinson And Company Dispositivo de transferência de sangue adaptado para receber uma amostra de sangue
EP3253788A4 (en) * 2015-02-06 2018-08-08 Cell IDX, Inc. Antigen-coupled immunoreagents
AU2016229837B2 (en) 2015-03-10 2018-05-24 Becton, Dickinson And Company Biological fluid micro-sample management device
JP2018536142A (ja) 2015-09-01 2018-12-06 ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニーＢｅｃｔｏｎ， Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ 試料の相を分離するためのデプスフィルトレーションデバイス
AU2017257504A1 (en) 2016-04-26 2018-10-25 R.P. Scherer Technologies, Llc Antibody conjugates and methods of making and using the same
CA3071328A1 (en) * 2017-07-27 2019-01-31 Verax Biomedical Incorporated Sequential lateral flow device
CA3073191A1 (en) * 2017-08-14 2019-02-21 Fujirebio Diagnostics, Inc. Antibody conjugation method
WO2019200326A1 (en) 2018-04-13 2019-10-17 Rarecyte, Inc. Kits for labeling of biomarkers and methods of using the same
CN112740017A (zh) 2018-04-19 2021-04-30 曙光诊断学公司 靶标检测
CN108872611B (zh) * 2018-05-23 2021-04-02 浙江安吉赛安芙生物科技有限公司 一种胶体金利用标记羊抗鼠二抗后间接连接鼠抗标记的金标免疫层析试纸条的制备方法
US20200199567A1 (en) * 2018-12-20 2020-06-25 Medimmune, Llc Methods for selection and expansion of t cells expressing pd-1
GB201912866D0 (en) * 2019-09-06 2019-10-23 Cambridge Molecular Diagnostics Ltd Miltiply labelled polymetric molecule for detection assays
GB202103321D0 (en) * 2021-03-10 2021-04-21 Cambridge Molecular Diagnostics Ltd Multiply labelled polymeric constructs for detection assays

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4228237A (en) 1978-09-21 1980-10-14 Calbiochem-Behring Corp. Methods for the detection and determination of ligands
US4434150A (en) * 1981-10-19 1984-02-28 Ortho Diagnostic Systems, Inc. Immunological reagents employing polymeric backbone possessing reactive functional groups
US5073484A (en) * 1982-03-09 1991-12-17 Bio-Metric Systems, Inc. Quantitative analysis apparatus and method
US4626501A (en) * 1983-09-02 1986-12-02 Integrated Genetics, Inc. Labeled DNA
NZ211888A (en) * 1984-05-10 1987-08-31 Abbott Lab Biotin-antibiotin immunoassay for detecting ligands
AU7385387A (en) 1986-06-09 1987-12-10 Ortho Diagnostic Systems Inc. Immunoassay using detection of colloidal gold
US5206136A (en) * 1986-11-19 1993-04-27 Genetic Systems Corporation Rapid membrane affinity concentration assays
JPS6447952A (en) * 1987-05-06 1989-02-22 Saibaafuruua Inc Immunoassay, reagent used therefor and making thereof
US4943522A (en) * 1987-06-01 1990-07-24 Quidel Lateral flow, non-bibulous membrane assay protocols
CA1308022C (en) 1988-08-11 1992-09-29 Eleftherios P. Diamandis Multiple fluorescence labelling with europium chelators
US5252459A (en) * 1988-09-23 1993-10-12 Abbott Laboratories Indicator reagents, diagnostic assays and test kits employing organic polymer latex particles
IL93661A0 (en) * 1989-03-07 1990-12-23 Adeza Biomedical Corp Endometriosis diagnosis and kits and reagents therefor
US5188937A (en) * 1989-04-06 1993-02-23 Becton, Dickinson And Company Layered sandwich assay method for chlamydia and materials therefor
EP0566695B1 (en) * 1991-01-11 1999-06-02 Quidel Corporation A one-step lateral flow assay and nonbibulous support used therein
DK137992D0 (da) 1992-11-13 1992-11-13 Alk Lab As Fremgangsmaade til paavisning af et immunologisk aktivt stof i en proeve under anvendelse af et maerkningsstof
JPH10511460A (ja) 1994-12-22 1998-11-04 アボツト・ラボラトリーズ 被験サンプル中の複数分析物の時差式検出方法
GB9502112D0 (en) * 1995-02-03 1995-03-22 British Biocell Int Assay device and method
US5679519A (en) * 1995-05-09 1997-10-21 Oprandy; John J. Multi-label complex for enhanced sensitivity in electrochemiluminescence assay
US5773234A (en) * 1995-08-07 1998-06-30 Quidel Corporation Method and device for chlamydia detection
US6096563A (en) * 1996-03-29 2000-08-01 Strategic Diagnostics Inc. Dual particle immunoassay method and kit
US5876944A (en) 1996-06-10 1999-03-02 Bayer Corporation Method for amplification of the response signal in a sandwich immunoassay
US6117631A (en) 1996-10-29 2000-09-12 Polyprobe, Inc. Detection of antigens via oligonucleotide antibody conjugates
WO1998036278A1 (en) 1997-02-15 1998-08-20 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Multiple-site antibody capture immunoassays and kits
NZ508062A (en) * 1998-05-13 2002-04-26 Accelr8 Technology Corp Enumeration method of analyte detection
US6203989B1 (en) * 1998-09-30 2001-03-20 Affymetrix, Inc. Methods and compositions for amplifying detectable signals in specific binding assays
GB2342992A (en) 1998-10-22 2000-04-26 Horticulture Res Int Dipstick detection system
JP3680090B2 (ja) * 2000-05-25 2005-08-10 株式会社ニチレイ 分析装置
US6803196B1 (en) * 2000-10-13 2004-10-12 Affymetrix, Inc. Methods and compositions for detecting signals in binding assays using microparticles
GB0029154D0 (en) 2000-11-30 2001-01-17 Lee Helen Signal enhancement with multiple labelled-antibodies

Cited By (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101031798B (zh) * 2004-07-29 2012-06-27 瑞莱诊断体系有限公司 侧向流系统和测定
US9383351B2 (en) 2004-12-13 2016-07-05 Ascensia Diabetes Care Holdings Ag Self-contained test sensor
CN102879525A (zh) * 2004-12-13 2013-01-16 拜尔保健有限公司 独立式测试传感器
CN101614730B (zh) * 2004-12-13 2013-05-01 拜尔保健有限公司 独立式测试传感器
CN102879525B (zh) * 2004-12-13 2014-12-24 拜尔保健有限公司 独立式测试传感器
CN102227631A (zh) * 2008-11-28 2011-10-26 英佛皮亚有限公司 免疫层析测试中信号放大的方法以及使用该方法的免疫层析试剂盒
CN102227631B (zh) * 2008-11-28 2014-04-23 英佛皮亚有限公司 免疫层析测试中信号放大的方法以及使用该方法的免疫层析试剂盒
CN102539790A (zh) * 2011-12-31 2012-07-04 南开大学 一种生物素的酶联免疫检测试剂盒
CN107110847A (zh) * 2014-05-28 2017-08-29 快速诊断国际公司 用于检测或测量乙基葡萄糖醛酸苷的乙基葡萄糖醛酸苷侧向流动测试带、免疫测定、装置和方法
US10648974B2 (en) 2014-05-28 2020-05-12 Carehealth America Corporation Ethyl glucuronide lateral flow test strips, immunoassays, devices and methods for detecting or measuring thereof
CN105403707A (zh) * 2015-09-29 2016-03-16 南方医科大学 一种检测靶物质的信号放大方法及使用该方法的免疫层析试纸和装置
CN105403707B (zh) * 2015-09-29 2017-05-17 南方医科大学 一种检测靶物质的信号放大方法及使用该方法的免疫层析试纸和装置
CN107643399A (zh) * 2017-03-06 2018-01-30 广州佰芮慷生物科技有限公司 一种提高免疫检测系统灵敏性的方法及使用该方法的装置
CN111868526A (zh) * 2018-03-13 2020-10-30 豪夫迈·罗氏有限公司 减少免疫测定中的干扰
CN109596832A (zh) * 2018-12-25 2019-04-09 海卫特(广州)医疗科技有限公司 孕酮免疫层析检测试纸条及其制作方法
CN112129956A (zh) * 2020-09-02 2020-12-25 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种胶体金免疫层析的胶体金标记液及其制备方法和应用
CN112129956B (zh) * 2020-09-02 2022-05-27 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种胶体金免疫层析的胶体金标记液及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
US20080206853A1 (en) 2008-08-28
US20120094272A1 (en) 2012-04-19
US9494584B2 (en) 2016-11-15
WO2002044729A1 (en) 2002-06-06
GB0109313D0 (en) 2001-05-30
US7776617B2 (en) 2010-08-17
EP1340083B1 (en) 2011-10-26
US7972837B2 (en) 2011-07-05
CN100472212C (zh) 2009-03-25
GB0029154D0 (en) 2001-01-17
EP1340083A1 (en) 2003-09-03
AU2002222117A1 (en) 2002-06-11
ATE530912T1 (de) 2011-11-15
US20040048395A1 (en) 2004-03-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1500212A (zh) 有多个被标记部分的信号增强系统
CN1675546A (zh) 基于流控技术的测定装置
Fouda et al. Multiplex assay for simultaneous measurement of antibodies to multiple Plasmodium falciparum antigens
CN1582394A (zh) 分子的快速灵敏检测
CN105308458B (zh) 用于进行过敏症和自身免疫性疾病的诊断测定的自动化免疫分析系统
Liu et al. Microfluidic device as a new platform for immunofluorescent detection of viruses
Mirhashemi et al. Comparison of diagnostic techniques for the detection of Cryptosporidium oocysts in animal samples
CN1675547A (zh) 采用磁性颗粒的具有内部自校正系统的流式测定
CN1564945A (zh) 快速诊断装置,分析方法及多功能缓冲液
CN101035429A (zh) 定量侧向流系统和测定
CN1675544A (zh) 用于磁结合测定的自校正系统
Jang et al. Simultaneous quantification of Plasmodium antigens and host factor C-reactive protein in asymptomatic individuals with confirmed malaria by use of a novel multiplex immunoassay
CN1498275A (zh) 检棒分析中改良的目标核酸的捕获及检测
CN1743849A (zh) 一种多肿瘤标志物并行检测的方法及试剂盒
CN100347548C (zh) 固相免疫层析试验方法
CN1880959A (zh) 一种指示高剂量钩状效应的方法
CN1682112A (zh) 使用荧光化抗体的荧光分析方法
WO2009084369A1 (ja) Ｈｉｖ－１抗原の検出用試薬及び検出方法
CN1189749C (zh) 检测液体样品中抗体的方法
JP2021505906A (ja) ＨＢｓＡｇの定量検出のためのキット及び方法
CN1247996C (zh) 免疫反应测定方法以及方法中使用的免疫反应测定用试剂盒
JP2017509897A (ja) 多重分析法を実行するための対照
CN1313564C (zh) 一种经过表面修饰活化的上转换发光材料
HUE030824T2 (en) A method for diagnosing and differentiating HIV-2 infections
Liu et al. High-accuracy multiplexed SARS-CoV-2 antibody assay with avidity and saliva capability on a nano-plasmonic platform

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: DIAGNOSTICS FOR THE REAL WORLD

Free format text: FORMER OWNER: HELEN LEE

Effective date: 20080314

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20080314

Address after: American California

Applicant after: Diagnostics for the Real World

Address before: cambridge

Applicant before: Hu Hsiang Yun

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CX01 Expiry of patent term

Granted publication date: 20090325

CX01 Expiry of patent term