CN1481390A - 从热休克蛋白衍生的免疫调节肽及其使用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种调节受者免疫反应的方法。本发明是基于这样的发现：已获得一种改善与免疫性疾病的炎症有关的症状的有效的治疗策略，例如关节炎，其是通过调节潜在的免疫反应本身，而不仅是针对所产生炎症。该策略可用于调节炎症应答，并且预期应用在多个需要免疫调节的情况中，如：粘膜耐受性、DNA接种、无反应性诱导、自动免疫接种和离体抗原特异性T细胞调节。在一个实施方案中，该方法包括给受者施用细菌dnaJ肽或它的人同源物或非同源的人同工型肽。

Description

从热休克蛋白衍生的免疫调节肽及其使用

                     发明背景

技术领域

总的来说，本发明是关于调节受试者免疫反应的方法和组合物。特别地，本发明是关于包含细菌dnaJ肽，或其人同系物或非同源的人同工型肽的组合物，以及用这种组合物刺激免疫反应或诱发对免疫源的耐受性的方法。同样地，本发明提供了多种方法调节炎症应答，包括的方法有粘膜耐受性，DNA接种，无反应性诱导，自动免疫接种。

背景技术

很多疾病的治疗策略是注重减轻疾病的症状，而不是解决产生症状的原因。例如，在炎性疾病中，旨在减轻炎症的常用治疗通常是使用类固醇药或非类固醇的抗炎剂。

炎症常常是免疫反应的结果。虽然免疫反应和所产生的炎症应答通常对个体有利，例如，对细菌感染的反应；但是在有些病例中，免疫反应和炎症应答产生有害结果。特别是，患有自身免疫性疾病的病人，如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等疾病，常常遭受严重的组织损害，在有些病例中遭受全身性组织损害。虽然类固醇药的使用，例如，可减轻这些病人免疫反应的严重性，但是长期用这些药会产生副作用，包括降低病人的生活质量。而且，用这些药通常降低个体启动免疫反应的能力，这样，使个体容易易于被短期感染所感染，引起严重的后果。因此，存在对特别有用于调节免疫反应，和相关的炎症应答的组合物和方法的需要。本发明满足了这种需要并提供了其它的益处。

发明概述

本发明涉及从dnaJ热休克蛋白(hsp)衍生而来的免疫原性肽和使用这些肽的方法，及用这些肽在受试者中调节免疫反应的方法。正如本文所披露的，本发明中的免疫原性肽是通过T细胞介导的免疫反应起作用的，包括“促炎肽”，其引起促炎细胞因子的表达增加，如干扰素γ；和“抗炎肽”，其诱发抗炎细胞因子的表达增加，如白细胞介素-10。这些肽通常也以下述两种类型来表征：“同源肽”，其具有在各种物种的dnaJ hsp间的相对保守的氨基酸序列；和“非同源肽”，其具有基本上不保守的氨基酸序列。

相应地，本发明涉及调节受试者的免疫反应的方法。如，本发明的方法的实施可以通过把一种dnaJ hsp的免疫原性肽部分用在受试者中，以调节受试者的免疫反应。这种dnaJ hsp可以是原核的或者真核的dnaJ hsp，如细菌dnaJ hsp，比如大肠杆菌dnaJ hsp；无脊椎动物dnaJhsp，比如酵母菌dnaJ hsp；或脊椎动物dnaJ hsp，比如哺乳动物的dnaJhsp，包括人dnaJ hsp，如人HSJ1、HDJ1或HDJ2。

免疫原性肽可以是dnaJ hsp的任何免疫原性部分，包括这种肽的糖基化形式，常常是一种可以和II类主要组织相容性抗原复合物受体或T细胞受体结合的肽，其提供了基本上对dnaJ多肽有特异性的抗原决定簇。如，这个肽可以是大肠杆菌dnaJ hsp的免疫原性肽部分，这些肽具有这样的氨基酸序列QDYYEILGVSKTAEE(SEQ ID NO：1)，RKAYKRLAMKYHPDR(SEQ ID NO：2)，QKRAAYDQYGHAAFEQ(SEQ ID NO：3)，QGFFAVQQTCPHCQG(SEQ ID NO：4)，SKTLSVKIPGAVDTG(SEQ ID NO：5)，GDLYVQVQVKQHPIF(SEQ ID NO：6)，YCEVPINFAMAALGG(SEQ ID NO：7)，或PINFAMAALGGEIEV(SEQ ID NO：8)；或人的HSJ1，HDJ1或HDJ2 dnaJ hsp的免疫原性肽部分，这些肽具有这样的氨基酸序列ASYYEILDVPRSASA(SEQ ID NO：9)，KDYYQTLGLARGASD(SEQ ID NO：10)，TTYYDVLGVKPNATQ(SEQ ID NO：11)，KKAYRRKALQWHPDK(SEQ ID NO：12)，KRAYRRQALRYHPDK(SEQ ID NO：13)，KKAYRKLALKYHPDK(SEQ ID NO：14)，FRSVSISTFVQGRR(SEQ ID NO：15)，PGMVQQIQSVCMECQ(SEEQ ID NO：16)，或GRRITTRRMENGQE(SEQ ID NO：17)，或一个肽，具有氨基酸序列QAYEVLSDAKKRELYD(SEQ ID NO：18)，EAYEVLSDKHKREIYD(SEQ ID NO：19)，SGPFFTFSSSFPGHS(SEQ ID NO：20)，DGQLKSVTINGVPDD(SEQ ID NO：21)，DLQLAMAYSLSEMEA(SEQ ID NO：22)，EDLFMCMDIQLVEAL(SEQ ID NO：23)，LCGFQKPISTLDNRT(SEQ ID NO：24)，RTIVITSHPGQIVKH(SEQ ID NO：25)，或GRLIIEFKVNFPENG(SEQ ID NO：26)。

本发明的方法可以是通过增加或减少与免疫反应有关的炎症应答的来调节免疫反应。因此，在一个实施方案中，本发明的方法提供了一些手段，用于增加或诱导受试者的炎症应答。一方面，增加或诱导受试者的炎症应答的方法是通过对免疫状态下的受试者用有促炎活性的肽，也就是促炎肽而实施的。另一方面，这个方法是通过对耐受状态下的受试者用抗炎肽而实施。该方法还有另一方面，免疫原性肽的联合使用，例如，使用两种或更多种免疫状况下的促炎肽，或使用两种或更多种在耐受状况下的抗炎肽，或者使用至少一种免疫状态下的促炎肽和至少一种耐受状态下的抗炎肽。这样的增加或诱导炎症应答的方法导致了受试者的促炎细胞因子水平的增加，象伽马干扰素(IFNγ)，阿耳法肿瘤坏死因子(TNFα)，白细胞介素-1(IL-1)，IL-6，IL-12，或IL-23，或者导致受试者的抗炎细胞因子水平的降低，象IL-4，IL-10，或贝塔生长转化因子(TGFβ)，或者这两种情况同时发生。

在另外一个实施方案中，本发明的方法提供了在受试者中减轻或抑制炎症应答的手段。一方面是，在免疫状态下，在受试者中用有抗炎活性的肽进行减少或抑制炎症应答的方法。而另一方面，这方法是通过对耐受状态下的受试者用促炎肽。还有另一方面，免疫原性肽的结合使用，比如，在耐受状态下，两种或更多种的促炎肽，或免疫状态下，两种或更多种的抗炎肽，或耐受状态下的至少一种促炎肽和免疫状态下的至少一种抗炎肽。这样的一种减少或抑制炎症应答的方法导致受试者的抗炎细胞因子水平的增加，例如IL-4，IL-10，或TGFβ，或者是促炎细胞因子水平的降低，如IFNγ，TNFα，IL-1，IL-6，IL-12，或IL-23，或者两者同时存在。

正如此处所公开的，一种danJ hsp的免疫原性肽片段或其组合都可用，例如，包括SEQ ID NOS：1-26例举的免疫原性肽的一种或随意的组合，正如从此处公开内容将会清楚的，本发明中的肽被用于免疫条件或耐受条件下的受试者是依据肽是否是促炎肽或抗炎肽，是否肽用于增强或诱发炎症应答，或降低或抑制炎症应答。根据肽的免疫原性量，可以在免疫条件下使用肽，如：皮内，皮下，或肌肉内，并且如需要，是在含有免疫佐剂，像福氏完全佐剂或不完全佐剂的组合物中使用。根据肽的致耐受量，肽可以在耐受免疫条件下使用，如：粘膜，或皮内，皮下，或肌肉内。

本发明的方法可在有关受试者中实践，该受试者有或者是易感或可疑于任何需要调节免疫反应的状况，包括患有免疫性疾病或者可疑或易感免疫性疾病的受试者。这些受试者通常属于脊椎动物，特别是哺乳类，包括家养动物，如猫，狗，马；饲养动物如绵羊，牛，猪类或人类。免疫性疾病可以是免疫系统的病。如自身免疫性疾病，如关节炎，象特发性幼稚型关节关节炎，或者是免疫缺陷病，如获得性免疫缺陷病(AIDS)。另一种情况其是需要调节免疫反应，这种情况的受试者没有发育完善的免疫反应，如对感染性疾病或癌的反应。或者是受试者的情况是免疫反应太高，如受试者患有除了自身免疫性疾病以外的肠道炎症或者细菌性坏死。

本发明也涉及到调节免疫效应细胞的反应性的方法。通过把danJhsp的肽片段给受试者，接触免疫效应细胞，这种方法就可以进行。从其中可以衍生肽的dnaJ hsp可以是任何dnaJ hsp，如在此公开的或其他该领域已知的，包括原核或真核生物的dnaJ hsp。肽可以配制在组合物中，但不是必须的，如果需要，其中也可以含有免疫佐剂或其他免疫调节剂，如，一种或多种细胞因子。免疫效应细胞可以是T细胞介导的免疫反应相关的任何细胞，特别是T细胞，可以通过把肽用于受试者，在体内与该肽接触，或在体外接触。

当免疫效应细胞在体外被接触时(或离体)，该方法可进一步包括将接触过的免疫效应细胞施用给受试者。因此，免疫效应细胞相对于受试者可以是自体的，也就是，从患者自身取出的细胞，与该肽离体接触，然后施用给受试者，如果需要，是在培养使细胞扩张之后予以施用。免疫效应细胞相对于受试者可以是同种异体的，例如，细胞与受试者的细胞比较，至少是部分单倍体。相应地，这种方法通过增加或诱导受试者的炎症应答，或降低或抑制受试者的炎症应答，提供了调节免疫反应的手段。

本发明也涉及具有促炎或抗炎活性的dnaJ hsp的免疫原性肽片段。本发明的免疫原性肽是以在SEQ ID NO：1--26中表示的肽为例证的。另外，本发明涉及一种嵌合多肽，其包括本发明的一个肽与至少一个异源多肽有效连接。提供了至少含有一个本发明中的肽的组合物，例如，其含有表示在SEQ ID NO：1--26中的肽中的任何一个肽，和一个含有由这些肽任意组合的组合物，特别地，含有促炎肽的组合的组合物和含有抗炎肽的组合的组合物。本发明的组合物通常在生理适宜溶液里配制，如需要，可再加入一种或更多种的免疫佐剂，如，一种或更多种的细胞因子，完全福氏佐剂，不完全福氏佐剂，明矾，或者类似物。一般来说，当组合物包括一种或多种细胞因子时，细胞因子具有炎性活性，其与本发明的肽的炎性活性可相同或者补充其炎性活性。

本发明进一步涉及到编码本发明中免疫原性肽的多核苷酸。多核苷酸可以是单链或双链的，并且可以是核糖核酸分子(RNA)，脱氧核糖核酸分子(DNA)，或它们的杂交分子。也可以提供重组核酸分子，其含有本发明的多核苷酸与至少一个异源核苷酸序列的有效连接。异源核苷酸序列可以是任何核苷酸序列，在自然状态下，正常情况下，没发现该核苷酸序列与本发明的多核苷酸相邻连接。例如，异源核苷酸序列可以是一个表达控制序列，如转录调节元件或翻译调节元件，或是其组合；或可以是编码多肽，如细胞因子、或其他免疫调节因子，肽标记物，细胞定位结构域，或类似物。还提供含本发明的多核苷酸的载体，如表达载体，以及含本发明的多核苷酸或载体的细胞。

根据本发明，调节受试者的免疫反应的方法是基于下述发现：通过对潜在的免疫反应的调节，免疫反应自身的调节，而不仅仅注意于所导致的炎症，可以实现改善免疫相关疾病的炎症相关症状，例如关节炎，的有效治疗策略。这一策略可用于调节炎症应答，及用于需要免疫调节的多种情况下，例如，包括：粘膜耐受性，DNA接种，无反应性诱导，自动免疫接种，抗原特异T细胞的离体调节。

在多种实施方案中，调节可以包含促炎细胞因子水平增加，如受试者的IFNγ水平或TNFα水平；刺激单核细胞增殖；或增加抗炎细胞因子的水平，如受试者的IL-10，IL-4或TGFβ的水平。在其他实施方案中，调节可以降低或抑制受试者的的细胞因子水平。因此，本发明的组合物或方法提供了一种手段，用于加强促炎反应或耐受反应，这与欲接受这种治疗的受试者的情况相适合。

本发明的方法用于治疗患免疫反应相关或介导的病的受试者，如自身免疫病，感染性疾病，或癌症。按照本发明的方法，可以治疗的自身免疫性疾病的实例有关节炎，特别是特发性幼稚关节关节炎(oligoarticular juvenile idiopathic arthritis)(oJIA)，糖尿病和多发性硬化症。本发明的组合物或方法也可用于药物综合治疗的一部分，如，作为癌症治疗的佐剂，或在针对感染源的治疗中接用。

附图简述

图1A-1C。图1A显示了健康受试者(“CTRL”)和特发性幼稚关节关节炎(″oJIA″)患者用重组大肠杆菌hsp dnaJ刺激96小时，外周血(PBMC)和滑液单核细胞(SFMC)的增殖反应。结果以刺激指数表达，以均值+SD表示。

图1B提供的是健康受试者(CTRL)和oJLA患者用重组大肠杆菌hsp dnaJ培养72小时后，对CD69+T细胞的估值。结果以％CD3+CD69+细胞的百分数表达，以均值+SD表示。

图1C提供的是用破伤风类毒素(TT)或重组大肠杆菌hsp dnaJ(dnaJ)刺激oJIA患者96小时的PBMC-SFMC配对样本的刺激指数(SI)比率的估值。

图2显示了健康的受试者(CTRL)或oJLA患者用重组大肠杆菌hspdnaJ刺激72小时，PBMC或SFMC的培养物上清液中细胞因子的产量(以IFNγ，TNFα，IL-10，和IL-4所指示)。结果以pg/ml表达，表示为均值+SD。

图3A和3B显示了oJIA患者(图3A)或HLA B27+患者(图3B)的SFMC增殖反应，是用重组大肠杆菌hsp dnaJ肽培养72小时，再用有或无相关对照肽(OVA)存在下的自身辐射的饲养细胞或大肠杆菌hsp衍生肽刺激，(如图中所指明的)。结果以刺激指数(SI)表达，表示为均值+SD。

图4显示了oJIA患者SFMC培养物上清液中IL-10的产量，是用大肠杆菌hsp dnaJ肽刺激72小时，自身辐射饲养细胞再刺激，该细胞递呈与细菌肽同源或不同源的人肽。结果以pg/ml表达，表示为均值+SD。

图5显示了oJIA患者SFMC培养物上清液中的IL-10的产量，是用大肠杆菌hsp dnaJ刺激72小时，自身辐射饲养细胞再刺激，该细胞递呈同源或不同源的人肽(如图中指明的)。结果以pg/ml表达，表示为均值+SD。

图6显示了非同源的人肽50，51，134，197，254，256，270，283和318(分别为SEQ ID NO：18-26)的SI。

图7-9分别显示了对如图6所示肽进行反应的IFNγ，TNFα，和IL-10水平。

图10显示了对细菌dnaJ 4(SEQ ID NO：1)和它的人类源物，2(SEQID NO：9；HSJ1)，3(SEQ ID NO：10；HDJ1)和5(SEQ ID NO：11；HDJ2)反应的SI。

图11-13分别显示了对如图10所示的肽进行反应的TNFα，IFNγ，和IL-10水平。

图14显示了对细菌肽dnaJ 4，22，61，174，209，242，264，和268(分别为SEQ ID NO：1-8)反应的SI。

图15-18分别显示了对细菌肽dnaJ 174(SEQ ID NO：4)和它的人同源物，164(SEQ ID NO：15；HSJ1)，167(SEQ ID NO：16；HDJ2)和176(SEQ ID NO：17；HSJ1)进行反应的IFNγ，TNFα，和IL-10水平。

图19-22分别显示了对细菌dnaJ 22和它的人同源物，20(HSJ1)，21(HDJ)，和23(HSJ1)进行反应的SI，TNFα，IFNγ和IL-10水平。

图23显示了oJIA(″oligo″)患者与除oJLA以外的其他形式JIA患者(″syst/poly″)相比较针对各种肽的增殖反应。结果以SI(条线表示SD)表达。pandr和dnaJpv是对照肽。

图24A显示了对肽174和134刺激反应的CTLA4/CD25阳性细胞百分率。TC表示没有刺激的组织培养物。条线代表SD。

图24B显示了用肽174和134刺激oJIA患者的SFMC产生的IL-10生成量，表达为pg/ml。

图25A-25C显示了用如图所示的各种肽刺激oJIA患者SFMC的增殖反应(SI；图25A)和IFNγ图25B)或IL-10(图25C)的生成量。

图26A-26E显示了T细胞对dnaJP1的诱导治疗调节结果。图26A显示了用10μg/ml dnaJP1肽(SEQ ID NO：3)刺激5天，PBMC的T细胞增殖反应。评估以月间隔进行。对照是植物血凝素(PHA)，为一种常规促细胞分裂原，和dnaJpv(SEQ ID NO：28)。用FACS以月间隔评估筛选时有反应的病人的PBMC的细胞内细胞因子生成量(促炎症-图26B，C，和D；致耐受-图26E)。结果以dnaJP1刺激的/未刺激的培养物中的CD3+细胞的百分数表示。

发明祥述

本发明提供了一种调节受试者的免疫反应的方法。如此文所公开的，通过对根本的免疫反应的调节，而不仅仅是注重引发的炎症，可改善免疫相关疾病的与炎症有关的症状，如关节炎，是一种有效的治疗策略。这一策略可被用来调节炎症应答，并且在多种需要免疫调节的情况下可以应用，例如，粘膜耐受性，DNA接种，无反应性诱导，自动免疫接种，抗原特异T细胞的离体调节。

本发明提供了用于调节免疫反应的肽，本发明的肽是免疫原性肽，选择其能与最普通的II类人白细胞抗原的等位基因结合。如此文所述，免疫原性肽可以是dnaJ hsp任何免疫原性部分，通常是与II类组织相容性抗原复合物受体或者是T细胞受体结合的肽，并且其为dnaJ多肽提供了基本上特异性的抗原决定簇。

此文所述的例证性的免疫原性肽是从微生物和哺乳动物热休克蛋白(hsp)衍生的，包括大肠杆菌hsp dnaJ(见GenBank Acc.No.NP-308042和人dnaJ蛋白同源物如HSJ1(GenBank Acc.No.XP-010863)，HDJ1(GenBank Acc.No.P25685)和HDJ2 Genbank Acc.No.P31689)。然而，将会认识到同源于大肠杆菌dnaJ的蛋白或人dnaJ同源物，也可作为本发明获得免疫原性肽的来源。在这个领域中，对dnaJ同源物已很了解，如包括那些通过从各种原核或真核生物克隆的核酸分子编码，例如有鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)(GenBank Acc，No.CAC89325)，酿酒酵母(GenBank Acc.No.NP-013884)，zebrafish(GenBank Acc.No.B1846679)，鸡(GenBank Acc.No.B1391025)，小鼠(GenBank Acc.No.NP-064662)。将认识到，其他生物的别的dnaJ hsp可被鉴定和得到，方法是通过用术语象″dnaJ″，″HSJ1″，或类似术语和一种此处公开的检索方法和检索参数对核酸分子或蛋白质数据库进行检索，例如，如此文所述，国家生物技术信息中心(NCBI)的数据库。

如此文所述，细菌hsp dnaJ蛋白和人HSJ1，HDJ1和HDJ2的hsp的肽片段，包括与细菌hsp dnaJ肽序列同源的肽(“同源人肽”)和与细菌hsp dnaJ肽序列非同源的肽(“非同源人肽”)，可以调节受试者的免疫反应。典型的细菌hsp dnaJ肽和同源及非同源人肽包括：

细菌dnaJ肽

dnaJ4    QDYYEILGVSKTAEE(SEQ ID NO：1)，

dnaJ22   RKAYKRLAMKYHPDR(SEQ ID NO：2)，

dnaJ61   QKRAAYDQYGHAAFEQ(SEQ ID NO：3)，

dnaJ174  QGFFAVQQTCPHCQG(SEQ ID NO：4)，

dnaJ209  SKTLSVKIPGAVDTG(SEQ ID NO：5)，

dnaJ242  GDLYVQVQVKQHPIF(SEQ ID NO：6)，

dnaJ264  YCEVPINFAMAALGG(SEQ ID NO：7)，

dnaJ268  PINFAMAALGGEIEV(SEQ ID NO：8)；

同源人肽

2(HSJ1)  ASYYEILDVPRSASA(细菌dnaJ肽4的同源物；SEQ IDNO：9)

3(HDJ1)  KDYYQTLGLARGASD(细菌dnaJ肽4的同源物；SEQID NO：10)

5(HDJ2)  TTYYDVLGVKPNATQ(细菌dnaJ肽4的同源物；SEQID NO：11)

20(HSJ1)  KKAYRRKALQWHPDK(细菌dnaJ肽22的同源物；SEQ ID NO：12)

21(HDJ1)  KRAYRRQALRYHPDK(细菌dnaJ肽22的同源物；SEQID NO：13)

23(HDJ2)  KKAYRKLALKYHPDK(细菌dnaJ肽22的同源物；SEQ ID NO：14)

164(HSJ1)  FRSVSTSTTFVQGRR(细菌dnaJ肽174的同源物；SEQ ID NO：15)

167(HDJ2)  PGMVQQIQSVCMECQ(细菌dnaJ肽174的同源物；SEEQ ID NO：16)

176(HSJ1)  GRRITTRRIMENGQE(细菌dnaJ肽174的同源物；SEQ ID NO：17)

非同源人肽

50(HDJ2)QAYEVLSDAKKRELYD(SEQ ID NO：18)

51(HSJ1)EAYEVLSDKHKREIYD(SEQ ID NO：19)

134(HSJ1)SGPFFTFSSSFPGHS(SEQ ID NO：20)

197(HSJ1)DGQLKSVTINGVPDD(SEQ ID NO：21)

254(HSJ1)DLQLAMAYSLSEMEA(SEQ ID NO：22)

256(HDJ2)EDLFMCMDIQLVEAL(SEQ ID NO：23)

270(HDJ2)LCGFQKPISTLDNRT(SEQ ID NO：24)

283(HDJ2)RTIVITSHPGQIVKH(SEQ ID NO：25)

318(HDJ2)GRLIIEFKVNFPENG(SEQ ID NO：26)。

本发明的免疫原性肽包括“促炎肽”，其引起促炎细胞因子表达增加，如γ干扰素，也包括“抗炎肽”，其引起抗炎细胞因子的表达增加，如白细胞介素-10。本发明的肽是否有促炎活性或抗炎活性，便利地可采用此文所述(见实施例1和实施例2)的体外试验或可用该领域常规使用的任何方法来决定，例如肽与免疫效应细胞接触而表达的细胞因子的鉴定和数量。如此处所用，术语“免疫效应细胞”是指直接涉及产生或完成免疫反应的细胞。这些细胞在该领域是众所周知，包括B淋巴细胞(B细胞)；抗原呈递细胞，如树突状细胞，单核巨细胞，巨噬细胞，包括郎格罕细胞(Langerhans cells)，和在人类中，静脉内皮细胞(和B细胞)；特别是T细胞，例如，T辅助细胞，T抑制细胞，细胞毒性T细胞。

本发明的免疫原性肽按特点可以被归纳为两大类，包括含有在不同物种的dnaJ hsp中相对保守的氨基酸序列的肽(“同源肽”)；和含有在dnaJhsp中基本上不保守的氨基酸序列的肽(“非同源肽”)。如此文所用，术语“同源性”是用以表达，当通过比较窗或设定区域，用数种任何序列比较算法或通过手工排列和肉眼观察，比较和对齐获得最大对应时，氨基酸序列或核苷酸序列至少有大约占序列的百分之五十与参考序列具有一致性。为达到判定序列同一性的目的，保守氨基酸的替换，如类似这样的氨基酸替换，其有疏水脂肪侧链的氨基酸(如，丙氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，缬氨酸)，或有酸性侧链的氨基酸(如，天冬氨酸，谷氨酸)，或有碱性侧链的氨基酸(如，精氨酸，赖氨酸)或类似情况，被认为是相同的。另外，决定同源性，可以允许一个或几个插入或缺失，优选地为一个或两个插入和缺失，前提是只要这种插入或者缺失被认为是一个氨基酸，它们在比较效果中没有不同。因此，同源肽在长短上可以有一个，两个或几个氨基酸的不同，只要序列同一性的最低数量得以保持。

如此文所述，在与参考肽或多核苷酸分别比较时，本发明的同源肽或多核苷酸分别为具有至少有大约50％序列同一性，通常是至少大约60％序列同一性，可以是至少大约70％序列同一性或80％序列同一性或更高的序列同一性。例如，细菌dnaJ肽4(SEQ ID NO：1)，其含有15个氨基酸，与人HSJ1肽2(SEQ ID NO：9)同源，其含有15个氨基酸，相对于SEQ ID NO：1(9/15；60％)，包括7个相同的氨基酸和两个保守性替换；与人HDJ1肽3(SEQ ID NO：10)同源，其含15个氨基酸，相对于SEQ ID NO：1(9/15；60％)，包括6个相同的氨基酸和三个保守性替换；与人HDJ2肽5同源(SEQ ID NO：11，相对于SEQ IDNO：1(8/15；53.3％)，含有八个相同的氨基酸。本发明的非同源肽是不同源的肽，但是却具有本发明免疫原性肽的特点。

决定肽或多核苷酸是否与本发明所述用途同源，可以通过肉眼比较两个或几个序列得到，或者用计算机辅助法得到，其可以用于从蛋白质或核酸分子数据库中所包含的许多序列中确定同源序列。例如同源性或同一性的测算可以用序列分析软件，例如遗传学计算机组的序列分析软件(Wisconsin大学生物技术中心，1710 University Avenue，Madison，WI53705)。这样的软件是通过对各种缺失、替换及其他修饰赋予同源性程度对比相似序列。当使用一个序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入计算机，如果需要设定子序列坐标，然后设定序列算法程序参数。也可以使用缺省程序参数，或可以设定替代参数。基于程序参数，然后用序列比较算法计算与参考序列相关的测试序列的同一性百分比。

术语“比较窗”在本文以广义使用，是指一个包括相邻位置的任意数目的片段，例如约9-50个氨基酸位置，或约20-200个核苷酸位置，其中在两个序列被最佳地排列后，其中一个序列可以与一个具有相同数目相邻位置的参考序列进行比较。序列比较的排列方法是众所周知的，例如包括，Smith和Watermen(Adv.Appl.Math.2：482，1981)的局部同源性计算方法，Needleman and Nunsch(J.Mol.Biol.48：443，1970)的同源性排列计算方法，Person and Lipman(Proc.Natl.Acad.Sci.USA85：2444，1988)的搜索相似性的方法，此处将它们的每一个均引入，以供参考；通过实施这些计算方法的计算机化的执行程序(GAP，BESTFIT，FASTA，TFASTA in the Wisconsin Genetics Software Package，Genetics ComputerGroup，575 Science Dr.，Madison，WI)；或通过人工排列和肉眼检查。判断同源性或同一性的另外的计算方法，如，还有BLAST程序(国家生物信息中心：Basic Local Aligment Search Tool(基础局部排列搜索工具)，ALIGN，AMAS(多排列序列分析)，AMPS(蛋白多序列排列)，ASSET(排列段统计评估工具)，BANDS，BESTSCOR，BIOSCAN(生物序列比较分析结点)，BLIMPS(BLocks IMProved Searcher)，FASTA，间隔和点(Intervals&Points)，BMB，CLUSTAL V，CLUSTAL W，CONSENSUS，LCONSENSUS，WCONSENSUS，Smith-Waterman算法，DARWIN，Las Vegas算法，FNAT(强制多核苷酸排列工具(ForcedNucleotide Alignment Tool)，Framealign，Framesearch，DYNAMIC，FILTER，FSAP(FristensKy序列分析包)，GAP(综合排列程序)，GENAL，GIBBS，GenQuest，ISSC(敏感性序列比较)，LALIGN(局部序列排列)，LCP(局部目录程序)，MACAW(多排列结构及分析平台)，MAP(多排列程序)，MBLKP，MBLKN，PIMA(诱发型多序列排列)，SAGA(遗传算法序列排列)和WHAT-IF。这些排列程序也可用于筛选基因组数据库，以鉴定具有基本上相同的序列的多核苷酸序列。

一种有用算法的实例是BLAST和BLAST2.0算法，是由Altschul等阐述的。(Nucleic Acids Rses.25：3389-3402，1977；J.Mol.Biol.215：403-410，1990，将其每一个引用于此供参考)。完成BLAST分析的软件可以从国家生物技术中心公开得到。(全球信息网中的网址是ncbi.nlm.nih.gov)。该算法首先通过在查询序列中识别长度为W的短字词，识别出高得分序列对，当与数据库中序列一样长的字词对齐时，其或者匹配或者满足一些T记分阈值正值。T是指邻字词得分阈值(Altschul et al.，supra，1977，1990)。这些初始的邻字词命中作为启动搜索的籽晶(seed)，以便找到包括他们的更长的得分序列对。这种字词命中沿着每一个序列的两个方向扩展，只要累积排列得分可以增加。累积排列得分是计算所得，对核苷酸序列，是用参数M+(一对匹配残基的奖励得分；总是＞0)。对氨基酸序列，用记分矩阵计算累积得分。字词命中在每个方向的扩展在下述情况下停止，累积排列得分在X量获得最大极限值时下降；由于一或多个负积分残基排列的累计，类积得分达到0或更低；或是达到其中一种序列的末端。BLAST算法的参数W，T和X决定了排列的敏感性和速度。BLASTN程序(用于核苷酸序列)以字长(W)为11，期望值(E)为10，M＝5，N＝4，和双链比较作为缺省。对氨基酸序列，BLASTP程序以字长为3，期望值(E)为10和BLOSUM62记分矩阵(见Henikoff和Henikoff，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA 89：10915，1989)排列(B)为50，期望值(E)为10，M＝5，N＝-4，，和双链比较作为缺省。

BLAST算法也进行两个序列的相似性的统计学分析(见Karlin和Altschul，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA 90：5873，1933，在此将其引用供参考)。BLAST算法提供的一个相似性的量度标准是最小总计概率(P(N))，对偶然会发生的核苷酸和氨基酸之间的配对，其提供了概率指标。例如，比较中的试验核酸与参考核酸相比，如果最小总计概率小于0.2，则认为该核酸与参考核酸相似，更优选最小总计概率小于大约0.01，最优选小于大约0.001。

在一个实施方案中，用基本局部排列搜索工具(″BLAST″)评估蛋白质和核酸序列的同源性。尤其是，5个特异的BLAST程序用于完成了下列工作：

(1)BLASTP和BLAST3将一个氨基酸查询序列与一个蛋白质序列数据库进行比较；

(2)BLASTN将一个核苷酸查询序列与一个核苷酸序列数据库进行比较；

(3)BLASTX将一个查询核苷酸序列(两个链)的6-框概念区转录产物与一个蛋白质数据库进行比较；

(4)TBLASTN将一个查询蛋白质序列与一个全部以六个阅读框的形式翻译的核苷酸序列数据库进行比较；

(5)TBLASTX将一个核苷酸查询序列的6-框翻译与一个核苷酸序列数据库的6-框翻译进行比较。

BLAST程序确定同源序列是通过辨别相似片段进行的，在这里将其称为查询氨基酸或核酸序列与测试序列间的“高得分片断对”，其中测试序列优选来自蛋白质或核酸序列数据库。高得分片断对优选用记分矩阵确定(即，排列的)，其中许多记分矩阵在本领域是已知的。优选地，使用的记分矩阵是BLOSUM62矩阵(Gonnet等人，Science256：1443-1445，1992；Henikoff，和Henikoff，Proterns 17：49-61，1993，此处将其每一个引入供参考)。次优选地，PAM或PAM250矩阵也可以用(Schwartz和Dayhoff，编著，“探索距离关系的矩阵：蛋白质序列和结构图谱”(华盛顿，国家生物医学研究基金会1978))。BLAST程序通过美国国家医学图书馆可进入，如，在全球信息网中以网址ncbi.nlm.nih.gov进入。用于上述算法的参数可根据序列长度和所研究的同源性程度进行修改。在一些实施方案中，由于用户没有给出指令，这些参数可以是算法中所用的缺省参数。这些搜索方法也可以用于从数据库中鉴定dnaJ hsp。

本发明的肽可以用化学的肽合成方法制备，可以由编码的多核苷酸表达，或dnaJ hsp裂解后进行分离。纯化、合成或制备重组形式的肽的技术在本技术领域内是容易的，也是众所共知的，适宜用于制备足够纯度的免疫原性肽用于本发明的方法中。在这个方面，术语“分离”或“基本纯化”意指基本上不含有在体内通常与其结合在一起的其他化合物的多肽或者多核苷酸。在本发明的方法中，术语基本纯化是指基本上是同质的肽或多核苷酸，其中同质性是通过参考该领域已知的纯度标准确定的，这样的纯度足以容许得到该蛋白质的N端氨基酸序列。优选地，该肽或多核苷酸是充分分离的，以便它可以施用给受试者。所以，这种分离的肽或多苷酸一般地在含肽样本中占至少约50％，通常是至少约75％，特别地至少约90％，优选地约95％-99％或更多。应该认识到，这种纯度度量标准仅仅是指该肽，或者作为原材料，例如，将其配制成一种组合物，在这种情况下本发明的分离肽可以是该组合物的一个成分，该组合物可以进一步含有此处公开的其他成分，包括本发明的其他分离肽。

基本上纯dnaJ蛋白质和肽可以通过微生物表达从完整的微生物中获得，特别是细菌；用化学或生物合成方法，或用该领域内已知的常规纯化方法，包括，如亲合层析法。可利用这种技术获得dnaJ hsp的免疫原性肽片段。例如，用于本发明疫苗组合物的蛋白质或肽可以化学合成，用涉及α氨基的tBOC或FMOC保护的方法。两种方法涉及逐步合成，都依靠从肽的羧基末端开始每一步加入一个氨基酸，(如，见Coligant等人(Current Protocols in Immunology)现代免疫学方法，Wiley Interscience，1991，第9单元)。本发明的肽也可以用周知的固相肽合成法合成。(如，见Merrifield，J.Am.Chem.Soc.，8：2149，1962；Stewart和Young，固相肽合成(Solid Phase Peptides  Synthesis)(Freeman，SanFrancisco，1969)，见27-62页)，使用到一种共聚(苯乙烯-二乙烯基苯)，其中，每克聚合物含大约0.1-1.mmol胺。在完成化学合成后，通过用液态含氟化氢10％的茴香醚在0℃处理15分钟到1小时，使肽脱保护，并从聚合物上脱离下来。在反应物蒸发后，用1％的醋酸溶液从聚合物中提取肽，然后，冷冻干燥得到粗物质，可以用诸如凝胶过滤层析法等方法纯化，例如在SEPHADEX.RTM G-15亲和柱或SEPHAROSE.RTM亲和柱上进行纯化，使用5％的醋酸作为溶剂。过柱的适当组分的冷冻干燥得到基本上同质的肽或肽的衍生物，这些物质可以用标准技术定性，如氨基酸分析、薄层层析、高效液相层析、紫外吸收分光法、摩尔旋光、或溶解度，还可以测序，如用固相埃德曼降解法测序。

如果需要，本发明的免疫原性肽可被修饰，如，为了增加该肽作为免疫原或耐受原的能力，增加肽在受试者或其他介质中的稳定性，或为需要的其他任何目的进行修饰。如该肽可以通过糖基化修饰，这可以通过连接糖部分于该肽的氨基酸的活性侧链上而实现，或者通过在该肽的N端或C端引入一个或几个附加的氨基酸，并连接糖部分于这些附加的氨基酸上。这种连接可以是在糖蛋白上常见的任何连接方式。如，N-连接或O-连接糖分别与天冬酰胺残基或丝氨酸残基结合，或可以是任何其他方便地实现的连接方式。

本发明的免疫原性肽可以通过有效地连接在一个或更多其他肽或多肽上而被修改。因为这样，本发明也提供了一种嵌合多肽，其包括与至少一个异源多肽有效连接的本发明的肽。在此所用，术语″有效连接″表示两个或更多个肽(或两个或更多个多核苷酸)连接在一起，以便被连接的肽(或多核苷酸)的功能被保留，以便该嵌合多肽(或重组核酸分子)表现出每一个元件肽(或多核苷酸)的功能。例如，本发明的嵌合多肽可包括与肽标记物有效连接的本发明的肽，如肽标记物多聚组氨酸，以便该肽可以在样品中被鉴定或通过使用镍螯合剂将其从混合物中分离出来。例如，本发明的肽也可与细胞区室化功能域连接，该功能域促进细胞的肽区室定位，例如，在编码嵌合多肽重组核苷酸用于受试者后再行表达的肽。细胞区室化功能域可以促进该肽定位于细胞质，细胞核，质膜，内质网，内侧高尔基体外侧潴泡，或溶酶体或内含体；或可以是膜转转运肽，其可促进免疫原性肽通过细胞膜的转运；或是分泌肽，其可促使该肽分泌到细胞外。(例如，参见Hancock等人，EMBO J，10：4033-4039，1991；Buss等人，Mol.Cell.Boil.8：3960-3963，1988；美国专利5,776,689，将其每一个引用于此供参考)。

本发明也提供编码的本发明的免疫原性肽的多核苷酸。该多核苷酸可以是单链或双链，可以是核糖核酸分子(RNA)，脱氧核糖核酸分子(DNA)，或其杂交分子。另外，本发明还提供了重组核酸分子，该分子含有与至少一个异源核苷酸序列有效连接的本发明的多核苷酸。这种异源核苷酸序列可以是任何核苷酸序列，其在自然界与本发明的多核苷酸邻接通常是找不到的。例如异源核苷酸序列可以是表达控制序列，例如转录调控元件或翻译调控元件，或其组合；或可以是编码一个多肽的序列，例如细胞因子或其他免疫调节因子，肽标记物，细胞定位结构域，或类似物。其中重组核酸分子编码本发明的一个肽和一个第二种(或更多种)的功能多肽，如本发明的一个或多个另外的肽，或一个或多个细胞因子，或类似物，该重组核酸分子可以进一步编码一个位于编码的每一个肽之间的蛋白水解酶识别位点，这样一旦表达，编码的肽中的每一个就会以与其他编码的肽或多肽分离开的形式释放出来。

本发明也提供了含有本发明的多核苷酸的载体，还提供含有本发明的多核苷酸或者载体的细胞。载体可以是克隆载体，其可以用于产生大量包含于其中的本发明的多核苷酸或重组核酸分子，或可以是表达载体，如果该多核苷酸用于细胞或受试者，其可以用于表达编码肽的目的。这样的载体在本领域是周知的，例如质粒载体和病毒载体，包括衍生自反转录病毒、腺病毒、腺伴随病毒、牛痘病毒、或类似病毒的载体。

有效编码外源结构基因插入物的一种常用质粒载体是pBR322质粒。  pBR322含有一个赋予氨苄青霉素抗性的基因，作为标记基因；但是，用于人时，这种氨苄青霉素抗性基因应该去除。用于基因免疫程序、但是没有氨苄青霉素抗性的修饰载体已有描述，例如，在1996年1月30日提出的申请的美国序列号08/593,554中已有描述，此处将其引入供参考。

在本发明中所用的各种病毒载体包括腺病毒、疱疹病毒、痘苗病毒或诸如逆转录病毒的RNA病毒。优选地，逆转录病毒载体是鼠类或鸟类逆转录病毒的衍生物。其中可以插入单个外源基因的逆转录病毒载体的实例，包括，但不限于，莫洛尼鼠白血病病毒(MoMuLV)，Harvey鼠肉瘤病毒(HaMuS-V)，鼠类乳腺肿瘤病毒(MuMTV)，和劳斯肉瘤病毒(RSV)。许多其他逆转录病毒载体可以并入多个基因。所有这些载体可以转移或并入一个基因作为选择标记，以便转导细胞可以被鉴定和增殖。

因为重组的逆转录病毒有缺陷，它们需要帮助以便生产感染性载体颗粒。例如，这种帮助可以通过使用辅助细胞系获得，该细胞系含有在长末端重复序列(LTR)内的调控序列控制下的编码该逆转录病毒的所有结构基因的质粒。这些质粒缺少一种能够使包装机制识别用于包衣壳作用的一种RNA转录物的核苷酸序列。辅助细胞系发生包装信号的缺失，例如，包括，但不限于Ψ2，PA317和PA12。由于没有包入基因组，这些细胞系产生空心病毒体。如果逆转录病毒载体被导入这样的辅助细胞中，由于逆转录病毒载体中的包装信号是完好的、但是结构基因却被其他有关基因替代，则该载体可以被包装，产生载体病毒体。

施用编码本发明的一种肽的多核苷酸作为疫苗以代替施用肽作为传统疫苗可以获得某些优势，包括，例如，潜在毒性危险可以基本上被消除，例如与蛋白质疫苗相关的过敏性休克。在与细胞接触或给予受试者时，本发明的多核苷酸或重组核酸分子，或含有该多核苷酸的载体可以以“裸”DNA的形式施用，或者配制进输送载体中，例如脂质体或胶体颗粒中，这可以促进多核苷酸的吸收，减少细胞吸收前多核苷酸降解的可能性。

本发明也提供了一种组合物，其中包括至少一个本发明的肽，以及本发明可以提供包括多种本发明的免疫原性肽的组合物，例如，一种含有SEQ ID NOS：1-26阐明的肽中的任一肽的组合物，或是一种含有这些肽的任意组合的组合物，特别是一种含有促炎肽的组合的组合物，和一种含有抗炎肽的组合的组合物。一般来说，本发明的组合物是配制在生理学上接受的溶液内，并且，如果需要，可以进一步含有一种或多种免疫佐剂，例如，一种或多种细胞因子，福氏完全佐剂，福氏不完全佐剂，明矾，或类似物。一般地说，该组合物含有一种或多种细胞因子，这些细胞因子与本发明的肽具有相同的炎症活性或能补充本发明的肽的炎症活性。这种组合物也可含有任何免疫佐剂，包括免疫刺激物，或者，如果需要，可以是免疫抑制剂，其可以调节个体的全身性免疫反应。有这种活性的适宜物质在本技术领域是周知的，包括IL-6，其可以刺激抑制性或细胞毒性T细胞，以及环孢菌素A和抗-CD4抗体，其可以抑制免疫反应。这些化合物可以分开施用或与本发明的疫苗作为混合物施用。

此文广泛使用的术语“细胞因子”指一种可溶性糖蛋白，它是由免疫系统的细胞释放的、以非酶作用通过特异性受体调节免疫反应。所以，如此文所用，术语“细胞因子”包括趋化因子，白细胞介素，淋巴因子，单核因子，干扰素，集落刺激因子，血小板活化因子，肿瘤坏死因子-α，受体相关蛋白，及其功能片段。如此文所用，术语“功能片段”是指具有天然蛋白质的生物学功能或活性特征的某种蛋白质的肽或多肽部分。IL-10或IL-4的功能片段，例如分别与天然存在或重组产生的IL-10或IL-4具有基本上相同的抗炎活性，而IFNγ或TNFα的功能片段，例如分别与天然存在或重组产生的IFNγ或TNFα具有基本上相同的促炎活性。

细胞因子在本领域是周知的，包括，例如，内皮单核激活性多肽II(EMAP-II，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，粒细胞集落刺激因子(粒细胞-CSF)(G-CSF)，巨噬细胞-CSF(M-CSF)，IL-1，IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-10，IL-12，IL-13，等，干扰素，包括IFNα、IFNβ、IFNγ、和TNF-α，它们中的每一个都与细胞或细胞机制的生物学、形态学或表型改变有关。趋化因子的例证进一步说明如下：CXC(或α)趋化因子亚家族的成员，其在前两个保守性的半胱氨酸的中有一个间插的氨基酸；CC(或β)亚家族的成员，其没有这种间插的氨基酸残基；以及C(或γ)趋化因子，其缺乏第一和第三半胱氨酸残基。总地来说，α趋化因子成员在噬中性细胞和T淋巴细胞(T细胞)中有活性，β趋化因子在单核细胞、巨噬细胞和T细胞中有活性。α和β亚家族趋化因子的几个成员也在树突状细胞上有活性，树突状细胞是游走细胞，它们表现出强大抗原递呈性能、被认为参与很多炎症疾病的病理学过程。(Xu等人，J.Leuk.Biol.，60：365-71，1996和Sozzani等人，J.Immunol.，159：1993-2000，1997)。第四型人类CX3C型趋化因子，fractalkine，也已被描述(Bazan等人，Nature，385：640-4，1997；Imai等人，Cell，91：521-30，1997；Mackay，Curr.Biol.7：R384-6，1977)。不象其他趋化因子，fractalkine存在于膜上，且可以以可溶形式存在。对单核细胞和T细胞而言，这种可溶性形式是一种有力的化学吸引剂。这种趋化因子的细胞表面受体被命名为CX3CR1。

α趋化因子(也称之为IL-8)是以下述为例证的：粒细胞趋化蛋白质-2(GCP-2)；生长相关性致癌性α(GRO-α)，GRO-β，GRO-γ；上皮细胞衍生嗜中性细胞激活肽-78(ENA-78)；血小板碱性蛋白(PBP)；结缔组织激活肽III(CTAP III)；嗜中性细胞激活肽-2(NAP-2)；低亲和性血小板因子(LAPF-4)；γ干扰素(IFNγ)诱导性单核因子(MIG)；血小板因子4(PF4)；干扰素诱导蛋白10(IP-10)；基质源因子SDF-1α，SDF-1β，和SDF-2。β趋化因子是以下述为例证的：单核细胞趋化蛋白MCP-1，MCP-2，MCP-3，MCP-4和MCP-5；巨噬细胞抑制蛋白质MIP-1α，MIP-1β，MIP-1γ，MIP-2，MIP-2α，MIP-2β，MIP-3 α，MIP-3β，MIP-4和MIP-5；巨噬细胞衍生趋化因子(MDC)；人趋化因子1(HCC-1)；LD78β；RANTES；eotaxin 1；eotaxin 2；胸腺和激活作用调节性趋化因子(TARC)；SCYA17；和I-309；树突状细胞趋化因子-1(DC-CK-1)。γ趋化因子是以lymphotactin为例证的。

通过将免疫原性肽或多种免疫原性肽与生理学上可以接受的载体混合可以制备施用于受试者的本发明组合物。在以所用的剂量和浓度使用时，这些载体对接受试者无毒。通常地，这种组合物的制备必须将特定疫苗抗原与下述物质结合：盐水，缓冲液，抗氧化剂如抗坏血酸，低分子量(少于约10个残基)多肽，蛋白质，氨基酸，碳水化合物包括葡萄糖或葡聚糖，或螯合剂如EDTA，谷胱甘肽，和其他稳定剂和赋形剂。这些组合物可以是悬浮液、乳剂或冷冻干燥态，并且在是与制备和批准用于需要应用方面的条件下进行配制。

生理上可接受的载体可以是任何物质，只要当与本发明的免疫原性肽或多肽结合时，其能够使该成分保持生物活性并且没有不合需要地破坏受试者免疫系统的反应。实例包括，但不限于，任何标准的生理上可接受载体，例如磷酸缓冲盐溶液，水，乳剂如油/水乳剂，及各种类型的润湿剂。对雾化或肠道外施用，优选使用的稀释剂是磷酸缓冲盐溶液或生理盐水(0.9％)。包括这些载体的组合物的配制是已知的常规方法(例如，参见Remington’s Phamaceutical Sciences，第43章，14^th版，Mach Publishing Co.，Easton PA 18042，USA)。

为了施用于受试者，肽或编码的多核苷酸常配制成组合物。相应的，本发明提供一种组合物，其中除了本发明的肽或多核苷酸以外，通常含有一种载体，通过将肽或多核苷酸方便地配制到载体中用于施用。例如，载体可以是水溶液，比如生理缓冲盐水或其他溶剂或媒介物，如二元醇，甘油，油如橄榄油，或可注射的有机酯类。载体也可以包括一种生理上可以接受的化合物，例如，其有稳定肽或编码多核苷酸或增加其吸收的作用。生理上可以接受的化合物，包括，例如，碳水化合物如葡萄糖，蔗糖或葡聚糖，抗氧化剂如抗坏血酸或谷胱甘肽，螯合剂，低分子量蛋白质，或其他稳定剂或赋形剂。类似地，为了实践本发明方法的目的，被处理过的培养细胞，例如，滑膜液单核细胞，树突状细胞，或类似细胞，也可以配制在组合物中，将细胞施用给受试者。

有技术的临床人员应该认识到：载体的选择，包括生理上可以接受的化合物的选择，取决于，例如，肽或编码多核苷酸在施用时的方式，以及组合物的施用途径。当该组合物是在免疫状态下施用时，即用作疫苗，一般是肌肉内、皮内或皮下施用，但也可以是肠道外施用如静脉注射，也可以通过注射、插管、或其他本领域内已知的方法。当对免疫系统的期望调节是耐受性时，该组合物优选是口服，或可用上述方法施用。

本发明的组合物还可以含有第二种试剂，如诊断试剂，营养物质，毒素，或治疗剂，例如，癌症化学治疗剂。优选地，第二种试剂是一种免疫调节剂，例如，一种免疫刺激物如细胞因子或B7分子。另外，当需要刺激免疫反应时，该组合物可以含佐剂，如明矾，DETOX佐剂(RibiImmunochem Research，Inc.；Hamilton MT)，或福氏完全或不完全佐剂。佐剂的添加可以加强本发明肽的免疫原性，这样就减少了刺激免疫反应所需要的抗原量。佐剂增强免疫反应可以通过延长抗原持久性，加强共刺激信号作用，减少肉芽肿的形成，刺激淋巴细胞非特异性增殖，或改善T细胞和抗原呈递细胞(APC)的对合。

包括本发明的肽或多核苷酸的组合物也可以掺入到包囊材料中，如油水乳液，微乳剂，微胶粒，混合微胶粒，脂质体，微球颗粒，或其他聚合物基质(如见Gregoriadis，Liposome Technoloy，第1卷(CRCPress，Boca Raton，FL 1984)；Fraley等人，Trends Biochem Sci.，6：77，1981，将它们中的每一个引用与此供参考)。例如脂质体由磷脂或其他脂类构成，是无毒的、生理上能接受的并可代谢的载体，其制备和施用相对简单。“Stealth”脂质体(例如参见U.S.专利5,882,679；5,395,619；和5,225,212,将将它们中的每一个引用与此供参考)是这类包囊材料的实例。阳离子脂质体，例如，也可以用特异性受体或配体修饰(Morishita等人，J.Clin.Invest.，91：2580-2585，1993，将其引入此处供参考)。另外，多核苷酸制剂可以被导入细胞，例如，使用腺病毒-聚赖氨酸DNA复合物(例如，参见Michael等人，J.Biol.Chem.268：6866-6869，1993，将其引入此处供参考)。

相应地，本发明提供了一种调节受试者免疫反应的方法，是通过对受试者施用dnaJ hsp的免疫原性肽片段或编码这样的肽的多核苷酸。正如此文所述，dnaJ hsp可以是原核或真核生物的dnaJ hsp，包括，例如，细菌dnaJ hsp比如大肠杆菌dnaJ hsp；无脊椎动物dnaJ hsp比如酵母菌dnaJ hsp；或脊椎动物dnaJ hsp比如哺乳动物dnaJ hsp，包括人类dnaJ hsp比如人HSJ1，HDJ1或HDJ2。按照这样的描述，本发明的肽，其可以组成本发明的组合物的一个成分，能作为药剂使用，包括治疗人类受试者和用于兽医学目的。

本发明的方法可以通过增加与免疫反应有关的炎症应答或降低与免疫反应有关的炎症应答而调节免疫反应。所以，在一个实施方案中，本发明的方法提供了一种增强或诱发受试者的炎症应答的手段。这样的方法可以以如下步骤实施：对免疫状态下的受试者施用具有促炎活性的肽，即促炎肽；对耐受状态下的受试者施用抗炎肽；或是施用这些肽的组合，例如，在免疫状态下施用两种或多种促炎肽，或在耐受状态下施用两种或多种抗炎肽，或者免疫状态下的至少一种促炎肽和耐受状态下的至少一种抗炎肽。增强或诱导炎症应答的方法可以导致受试者的促炎细胞因子如IFNγ，TNFα，IL-1，IL-6，IL-12，或IL-23的水平增加，或导致受试者的抗炎细胞因子如IL-4，IL-10，或TGFβ的水平降低，或这些情况的结合。

本发明的方法也提供了减少或抑制受试者的炎症应答的手段，是通过对免疫状态下的受试者施用具有抗炎活性的肽；或对耐受状态下的受试者施用具有促炎活性的肽；或结合使用这些肽，例如在耐受状态下施用两种或多种促炎肽，或在免疫状态下施用两种或多种抗炎肽，或至少一种耐受状态下的促炎肽和至少一种免疫状态下抗炎肽。这样的方法可以导致受试者的抗炎细胞因子比如IL-4，IL-10，或TGFβ水平的增加，或受试者的促炎细胞因子如IFNγ，TNFα，IL-1，IL-6，IL-12，或IL-23水平的减少，或这些情况的结合。

如此文所述，可以施用dnaJ hsp免疫原性肽片段之一种或一个组合，包括，例如，由SEQ ID NO：1-26例示的免疫原性肽中的任何一个或者任何组合。鉴于本发明的公开内容，有技术的临床人员将会认识到本发明的肽是用于免疫状态下的受试者或用于耐受状态下的受试者，这要取决于该肽是促炎肽或是抗炎肽，并且要根据该肽是用于增强或诱发炎症应答，或者是用于降低或抑制炎症应答。

如此文所用，术语“在免疫状态下”(under immunizing conditions)意思是本发明的肽与细胞接触或用于受试者，以便它可以实现其免疫原活性。正因为这样，该肽是T细胞免疫原，一般将在致免疫量下使用，典型地在激发剂量使用一段时间后，给予加强剂量一次或者多次，方式是皮内、皮下、或肌肉注射，如果需要，可配制在组合物中，其中包括免疫佐剂，比如福氏完全或不完全佐剂。如此文所用，术语“在耐受状态下”(under tolerizing conditions)意思是本发明的肽与细胞接触或用于受试者，以便它可以诱发对其他免疫原活性的耐受性。结果是，例如，受试者对该肽产生耐受性，以致受试者认为该肽是“自身的”而不会产生免疫反应。可以在耐受状态下使用的肽以该肽的耐受量施用，一般是一段时间内的小剂量使用，施用方式是皮内、皮下、肌肉内，或优选地为透粘膜，例如鼻粘膜喷雾，或口服。

本发明的方法实施时涉及到的受试者具有需要调节免疫反应的状态，或者素因性或易患病性的状态，包括患有免疫疾病的受试者，或者对于免疫学疾病具有易患病性或素因性。一般地，受试者是脊椎动物受试者，特别是哺乳动物，包括饲养动物比如猫、狗、或马；牧养动物比如绵羊、牛、或猪类动物；或人类。免疫学疾病可以是免疫系统病，比如自身免疫性疾病，例如，关节炎比如特发性幼稚关节关节炎(oJIA)，或免疫缺陷病比如获得性免疫缺陷综合症(AIDS)。其他需要调节免疫反应的状况有：受试者不能产生足够的免疫反应，例如对感染性疾病或癌症的反应；或者一种状况是受试者的免疫反应太强，例如，患除了自身免疫病的炎症性肠病的受试者或患细菌性脓毒症的受试者。

在实践本发明的方法时，所用组合物的总量可以以一次性剂量给予受试者，在相对短的时间里用丸剂或通过输注，以及在一段时间内给予一次或几次加强剂量。该用于刺激受试者免疫反应的组合物的用量要依据各种因素决定，包括受试者的年龄和一般健康状况，及施用途径和施用中的处理次数。对于这些因素，有技术的临床人员将会知道按需要调整特定剂量。通常，该组合物的配方和使用的途径及频率最初是用I期临床实验(参见实施例8)和II期临床实验确定的。

本发明的免疫原性肽优选是用一种可以充分选择性刺激受试者的胃肠道IgA生成并且诱导口腔耐受性的方式施用的。通过给人或动物受试者饲喂抗原诱导口腔耐受性的方法是众所周知的(例如，参见Husby等人，J.Immunol.152：4663-4670(1994)，将其引入此处供参考)。因此，需要耐受性时，本发明的肽可以伴随一种IgA免疫刺激剂同时施用，其中IgA免疫刺激剂诱导IgM向IgA转换；例如，TGF-β，其也可以抑制全身性T辅助细胞活性。优选地，免疫原性肽和IgA(如果存在)通过肠道施用，使得疫苗效果局限在胃肠道。而且本发明的肽可以以免疫治疗领域接受的任何其他方式施用，例如血管内、皮内、皮下、肌肉、或腹膜内。

多核苷酸可以通过任何用于免疫学程序的常规途径使用，特别是皮内(例如参见美国序列编号08/446,691，是于1995年6月7日提出申请的，将其引入此处供参考；又参见美国序列编号08/593,554)。根据这些公开内容，重组基因表达载体是通过诸如注射、吸收或经皮传递的方式通过宿主的皮肤或者粘膜而使用。

本发明的肽或多核苷酸的施用的方案依所用组合物的成分和病人的年龄、体重及状况的不同而不同。但是，施用肽的一个优选方案涉及每天口服(肠道)免疫学上有效剂量的疫苗，可以用或者不用其他形式的治疗方法，如上所述，或者传统的抗炎治疗(例如，用类固醇或非类固醇抗炎药和/或止痛药)。依据给药频率，本发明的每一种肽疫苗的免疫有效剂量的变动范围是大约从10μg-100mg，一般是大约100μg-100mg，通常大约是1mg-50mg，特别是大约25mg的抗原性蛋白或肽。抗原性肽的每日剂量将一般以约1mg/日的用量施用。

多核苷酸的使用剂量按照本发明的方法将是不同的，其根据宿主需要的反应和所用载体完成的基因表达水平而定。一般地，对于通过皮内途径导入裸多核苷酸，单次剂量可以达到大约100μg--200μg的多核苷酸，而通过皮肤和粘膜施用则只用0.3μg的多核苷酸就可以诱导长期持续的免疫反应。但是，为了达到本发明的目的，提供足以导致编码免疫原性肽的裸基因表达载体表达的剂量是足够的。这些剂量可以调整以获得不同的表达水平，从而提供了免疫量或耐受量。证实表达肽的存在和数量的方法在该领域是周知的，包括，例如，免疫测定法比如酶联免疫吸附测定法，PCR技术，和免疫组织学分析。根据这些检测和定量手段提供的信息和临床领域已被医师们了解的体内临床症状，可以调节施用的多核苷酸的剂量，以便达到所需的表达水平。

常规剂量的免疫刺激剂或免疫抑制剂可以包括在含有本发明的肽或多核苷酸的组合物中，或者可以分开使用，优先于该肽，与该肽同时，或在该肽之后，例如大约1μg/kg-100μg/kg的IL-6。这样的剂量将是根据该领域已知的或用其他普通实践过的方法可确定的信息。早期病人的治疗可以持续到，贯穿，或超过观察到终期接替症状时。

本发明的肽或多核苷酸施用给素因性受试者，但不是已发生的受试者，可以通过短期施用一次或多次剂量的该组合物，例如，产生可以检测到的病人胃肠道或外周血管循环液体中抗dnaJ肽IgA的增加，从而治疗该疾病。一般地，本发明的疫苗优选使用于患早期疾病的病人。

随着时间推移，本发明治疗方法的效果可以通过对这些疾病具有素因性的受试者的免疫学疾病症状或临床征消失予以鉴定，但在治疗开始时没有疾病的病症或症状。对于诊断有免疫性疾病的病人，或在其他需要调节免疫反应的状况中，本发明的方法的功效可以通过受试者病症或症状的严重性的减少进行衡量评估或通过疾病终期接替症状的发生评估。

关于免疫性疾病比如自身免疫性关节炎，关节炎和该疾病的终期接替症状的临床征和症状的常用参数是周知的，包括，例如进行关节触痛的“里奇指数(Ritchie Index)”测量(Ritchie等人，Quart J.Med.，37：393-406(1968))，测量关节肿大的数量，每天早上关节僵硬持续的时间，握力，或在直观模拟疼痛标出上的疼痛强度(Huskisson，lancet 2：1127-1131(1974))，和测量病人使用抗炎剂或止痛剂的相对水平。其他临床常用参数可以是下面的，包括，例如，疾病持续时间，红细胞沉降率(ESR)，C-反应蛋白(CRP)水平，活动性关节炎数量(NAA)，关节指数严重性(CSA)，缓和间歇，儿童健康评估调查表(CHAQ)，和对dnaJ肽治疗的反应(反应者对无反应者的特征)。

根据大肠杆菌提取物(Brackertz等人，J.Rheum.16：19-23，1989)临床双盲实验的结果，使用本发明的组合物在受试者上的所产生的不利副作用如果有的话，也是很少的。例如，可能发生胃肠道刺激，但预期很轻。用常规方法监测这些组合物的毒性，比如周期性实验评估，是通过分析这些变量进行，如血细胞比容、血红蛋白、血小板和类风湿因子水平和血液化学。对于其他免疫性疾病或者其他需要调节受试者的免疫反应的状况，将监测疾病的病征和症状特点。

本发明也提供了一种调节免疫效应细胞反应性的方法。这种方法可以这样实施，例如，用dnaJ hsp的肽片段或编码这样的肽的多核苷酸接触免疫效应细胞。从其中衍生这种肽的dnaJ hsp可以是此处公开的任何dnaJ hsp或是该领域已知的其他dnaJ hsp，并且可以，但不必需，配制进一种组合物中，如果需要，其也可以包括免疫佐剂或其他免疫调节剂，例如一种或多种细胞因子。免疫效应细胞，是T细胞介导免疫反应涉及的任意细胞，包括抗原呈递细胞比如树突细胞，特别是T细胞，可以通过将该肽施用给受试者使免疫效应细胞与肽在体内接触，或也可以在体外接触。

免疫效应细胞与该肽在体外接触(或离体的)时，该方法可以进一步包括将接触过的免疫效应细胞施用给受试者，这样就提供了调节受试者免疫反应的一种手段。免疫效应细胞可以是来自于病人的自身细胞，与该肽离体接触，然后返回施于受试者。这种方法提供了便利，可以允许免疫效应细胞在体外繁殖，如果需要，然后细胞扩张后的细胞群可以被用于受试者。相对于受试者，免疫效应细胞可以是同种异体的，例如，从与受试者相关的、并与受试者分享共同单倍体的个体选择而来的细胞，或选自已知单倍体的、并且至少有部分单倍体与受试者相配的细胞系群体的细胞。这种细胞在施用于受试者后可以调节受试者的免疫反应，是通过增强或诱导受试者的炎症应答，或通过降低或抑制受试者的炎症应答实现的。

以下的实施例是为了说明而不是为了限制本发明。

                    实施例1

对重组大肠杆菌dnaJ的细胞免疫反应

来自10个健康受试者(“对照组”)和21个特发性幼稚关节关节炎(“oJLA”)患者的外周血单核细胞(PBMC)对重组大肠杆菌hspdnaJ(dnaJ)的增殖反应没有显著不同(图1A)。为了评估是否dnaJ-特异性T细胞在炎性的滑膜区是增多的，所有“oJLA”患者的滑膜液单核细胞(SFMC)用dnaJ刺激了96小时。SFMC的平均刺激指数(SI)比相应的PBMC的SI有显著性增高(p＝0.01；图1A)。另外，在用dnaJ刺激后，以CD3+CD69+细胞数进行评估，与PBMC相比，在SFMC中激活的T细胞百分比有显著性增高(p＝0.0002)(图1B)。

为了证明SFMC对dnaJ的增殖反应不是继发于SFMC反应性的非特异性增加，研究了来自两个部分的细胞对无关记忆抗原，破伤风类毒素(TT)的增殖反应。与PBMC(均值SI＝12.3)相比，针对TT的增殖反应在SFMC(均值SI＝6.0)倾向增高。为了比较PBMC和SFMC对dnaJ和TT的反应不同，计算了所得的两个部分对两种抗原中的每一种的刺激指数的比率。如图IC所显示，用dnaJ刺激后比用TT刺激后，SISFMC/SI PBMC的比率更显著增高(p＝0.038)。

用健康对照组的PBMC的培养物上清液和来自oJLA病人的用或没用dnaJ培养72小时的PBMC-SFMC配对样本，评估了促炎细胞因子干扰素γ(IFNγ)和肿瘤坏死因子α(TNFα)，和抗炎细胞因子(IL-4)和IL-10的生成量。如图2所显示，病人和对照组的PBMC的细胞因子生成量没有不同。对PBMC-SFMC配对样本的细胞因子生成量的分析显示：用dnaJ刺激诱导oJLA病人的SFMC的IFNγ的生成量比PBMC的IFNγ的生成量显著增高(P＜0.01)；，INF的生成量与疾病持续期间具有显著的反相关(p＝-0.40，p＝0.034)。TNFα和IL-10的生产量是在两个部分中比较。IL-4水平在对照组和病人组中均低于检测限，是以PBMC和SFMC的上清液进行测定的。

表1显示了oJLA病人的SFMC的培养物上清液的促炎细胞因子和抗炎细胞因子的生成量的评估结果，将SFMC在重组大肠杆菌的dnaJ蛋白培养72小时，然后再用在无关对照肽存在或缺乏时的自身辐射滋养细胞，卵清蛋白(OVA)或者大肠杆菌hsp dnaJ衍生肽再刺激。结果表示为pg/ml(均值+SD)。

             表1：促炎和抗炎细胞因子的生成量

肽	IFNγ	TNFα	IL-6	IL-10	IL-4
						4	38.5±47.7	9.8±21.2	49.8±54.0	5.4±6.9	＜0.39
22	27±38.0	14.1±26.8	45.7±57.7	4.4±2.7	＜0.39
						61	31±45.7	22.6±35.3	47.6±70.5	＜3.9	＜0.39
174	29.8±44.6	16.1±31.5	47.3±61.2	4.2±1.9	＜0.39
						209	41.3±46.9	15.3±29.2	56.6±65.9	6.2±5.8	＜0.39
242	41.2±48.8	14.2±29.2	34.1±41.7	5.3±6.6	＜0.39
						264	44.9±55.8	14.0±29.3	47.4±61.2	＜3.9	＜0.39
268	34.7±51.2	17.2±30.1	45±58.4	＜3.9	＜0.39

这些结果说明针对dnaJ的增殖反应和IFNγ生成量在oJLA病人的滑膜间隙中比外周血中高一些，表明大肠杆菌hsp dnaJ或其同源蛋白或肽片断在关节的炎性过程中具有一定作用。

                      实施例2

对重组大肠杆菌dnaJ衍生的合成肽的细胞免疫反应

为了确定细菌dnaJ蛋白可能的相关表位，oJLA病人的PBMC和SFMC用dnaJ培养72小时，并且，用自身供给细胞在有或没有精选的大肠杆菌衍生的II类主要组织相容复合物结合肽的存在下再刺激92小时。总共测试了8种肽，有3种(pep4，pep22，pep174)是从大肠杆菌dnaJ的N末端区衍生而来，它们与3种人dnaJ同工型(HDJ1，HDJ2，HSJ1；同源肽)中的每一个表现序列同源性；5种肽是从大肠杆菌dnaJ的C末端区衍生而来，它们与人的相对物(pep61，pep209，pep242 pep264，pep268；非同源肽)不存在任何同源性。

用大肠杆菌衍生的肽刺激PBMC导致非常低的增殖反应(SI＜1)，并且没检测到促炎或抗炎细胞因子的生成。相反，SFMC对所有肽表现增殖反应，虽然是不同程度，在肽22，61，174，或268(图3)存在下的均值SI≥6。为了评估反应的特异性，SFMC用dnaJ培养，然后给予不相关OVA肽再刺激。来自不患有oJLA的HLA B27+病人(n＝4)的SFMC对这些细菌肽中每一种的反应的均值SI＜3。这个结果提示对大肠杆菌dnaJ衍生肽的高增殖反应是疾病特异性的。针对同样的肽的细胞因子生成量是以来自oJLA病人的SFMC培养物上清液进行检测的。如表1所显示，促炎细胞因子的生成量在与每一种大肠杆菌衍生肽接触后而被检测到。来自21个患有oJLA的病人中只有一个的SFMC生成了可以检测水平的抗炎细胞因子IL-10，并且没有一个生成可检测水平的IL-4。

在被测试促炎的细胞因子中，IFNγ生成量与所有细菌肽的增殖反应显著相关，除了肽4和264(表2)。与肽22，61，174，和268的相关性强些，它们诱导的SI≥6，表明这些肽可能在炎性位点呈现了相关的靶表位。另外，对肽209、242或264刺激的反应中的IFNγ的生成量与CRP和ESR的值显著相关。表2显示来自oJLA病人的SFMC的培养物上清液中的IFNγ的生成相关性，是用重组大肠杆菌hsp dnaJ刺激，然后用有或没有大肠杆菌hsp dnaJ衍生肽存在下的辐射自身滋养细胞再刺激，并且所诱导的刺激指数(SI)表明了用同样肽刺激SFMC，ESR，或CRP值。

                   表2.相关性(通过斯皮尔曼试验(Spearman test))

细菌肽	IFNγ生成对SI	IFNγ生成对ESR	IFNγ生成对CRP
				4*	NS	NS	NS
22*	R＝0.55   p＜0.01	NS	NS
				61	R＝0.67   p＜0.0008	NS	NS
1 74*	R＝0.77   p＜0.00001	NS	NS
				209	R＝0.50   p＜0.02	R＝0.72 p＝0.01	R＝0.65 p＝0.02
242	R＝0.50   p＜0.02	R＝0.64 p＝0.032	R＝0.63 p＜0.03
				264	NS	R＝0.60 p＜0.05	R＝0.59 p＜0.04
268	R＝0.71   p＜0.001	NS	NS

^*区分与衍生自大肠杆菌hsp dnaJ的3种人的同工物的肽表现出序列同源性的细菌肽。

                           实施例3

对人HSJ1，HDJ1，或HDJ2的细胞免疫反应

          与大肠杆菌hspdnaJ同源或非同源的肽

为了评估是否人的同源肽可能是导致自身反应的交叉识别的靶，对衍生于HSJ1，HDJ1，或HDJ2，与大肠杆菌hsp dnaJ具有序列同源性区域的人肽进行了研究。14名oJLA病人的SFMC对重组大肠杆菌hsp dnaJ呈现的SI比3大些，是在有或没有下述肽存在下用自身细胞再刺激了96小时：人肽2、3或5，其是细菌肽4的同源物；人肽20、21或23，其是细菌肽22的同源物；或人肽164、167或176，其是细菌肽174的同源物。从人dnaJ蛋白质衍生的肽和同源的细菌肽的SFMC增殖反应，促炎细胞因子生成量，和抗炎IL-4水平是全面相似的。

表3显示oJLA病人的SFMC用重组大肠杆菌hsp dnaJ培养72小时，然后用自身辐射滋养细胞在有或没有大肠杆菌hsp dnaJ衍生肽或人dnaJ同工型(HSJ1，HDJ1，或HDJ2)衍生的同源肽存在下再刺激。结果表现为SI或pg/ml(均值+SD)。

               表3：增殖反应和细胞因子生成量

	SI	IFNγ	TNFα	IL-6
					大肠杆菌pep4	4.1+3.3	30.8+52.4	6.0+4.5	60.2+60.3
HSJ1 pep2	5.9+5.7	51.3+72.4	23.2+26.8	41.7+43.8
					HDJ1 pep3	8.0+7.5	57.5+85.7	10.3+9.9	114.0+126
HDJ2 pep5	8.2+7.3*	69.5+105.2@	18.9+16.9	60.0+67.2
					大肠杆菌pep22	4.7+4.0	20.1+33.5	10.5+23.1	54.3+69.0
HSJ1 pep20	4.7+4.7	25.3+47.4	11.8+11.2	33.0+34.0
					HDJ1 pep21	4.6+4.2	30.8+56.4	26.6+39.3	33.5+43.8
HDJ2 pep23	4.7+4.0	38.2+75	7.7+7.6	33.3+32.7
					大肠杆菌pep174	5.9+7.5	31.4+53.1	16.1+30.9	56.4+70
HSJ1 pep164	4.2+4.0	52.5+85.2	13.5+18.9	27.3+31.3
					HDJ1 pep167	3.9+3.1	38.3+61.2	7.3+7.3	23.0+22.3
HDJ2 pep176	4.3+2.7	45.6+68.3	8.9+10.3	21.2+25.2

^*p＜0.03对大肠杆菌pep4，@：p＜0.05对大肠杆菌pep4

观察到仅有不同是人肽5，其诱导增殖反应和IFNγ生成量显著比与其细菌同源物的反应中发现的那些情况高些(分别为p＜0.03和p＜0.05)。在评估衍生自HSJ1、HDJ1、或HDJ2蛋白的、与大肠杆菌hsp dnaJ没有序列同源性的区域的9种人肽的反应性时，也观察到相似的结果。与用细菌肽获得的结果比较，在用人肽刺激的SFMC培养物的上清液中检测到了IL-10的生成，虽然程度不同，其中人肽与细菌是同源的或非同源的。用非同源(27.1±10.3pg/ml)人肽刺激后IL-10生成量均值比用同源(7.7±7.0pg/ml：图4)人肽高些，并且对同源人肽20、21和23是特别证实的，其相似于他们的细菌同源物(肽22)，它们没有诱导IL-10(图4)的可检测水平的出现。这些表位作图实验显示不同的生物效应发生于不同的肽，并且这种效应是疾病特异性的。

这些结果表明通过对来自与大肠杆菌dnaJ相遇而诱导的人dnaJ蛋白的不同同工型的肽的免疫反应，能够通过抗炎IL-10的生成而具有调节作用，虽然对大肠杆菌hsp dnaJ的促炎反应用细菌肽和在肽上来自与其人的相对物同源相关表位可以使其持续。这一结果通过检查在取样时表现广泛少关节关节炎的3个病人的IL-10生成量而得以证实，其中用细菌或人肽刺激的培养物上清液显出IL-10生成量的减少，特别是对于人肽50、254、256和283，它们与大肠杆菌hsp dnaJ衍生肽是非同源的。

                       实施例4

         对人非同源肽反应时的增殖和细胞因子生成

按照如上所述，对其他一些肽进行了实验，包括一系列来自细菌dnaJ肽的同工型的非同源区域的人肽。图6显示非同源肽50，51，134，197，254，256，270，283和318的SI。IFNγ，TNFα和IL-10对这些肽的反应中的水平分别显示在图7-9中。

                       实施例5

对细菌肽和它们的人同源物反应时的增殖和细胞因子生成

在用各种细菌肽刺激反应中检查了增殖和细胞因子生成，并与这些细菌肽的人同源物的刺激反应进行比较。图10显示对细菌dnaJ 4和人同源物肽2(HSJ1)、3(HDJ1)和5(HDJ2)反应中的SI。图11-13分别显示了在对这些肽的反应中的TNFα、IFNγ和IL-10水平。为了比较，对细菌肽dnaJ，4，22，61，174，209，242，264和268的反应中的SI显示在图14。图15-18分别显示的对细菌dnaJ 174和同源人肽164(HSJ1)、167(HDJ2)和176(HSJ1)的反应中的SI、TNFα、IFNγ和IL-10水平。对细菌dnaJ 22和同源人肽20(HSJ1)、21(HDJ2)和23(HSJ1)的反应中的SI、TNFα、IFNγ和IL-10水平分别显示在图19-22。

                       实施例6

             体外检验与临床结果之间的相关性

(上述的)增殖和细胞因子的结果与临床参数进行了比较，包括在同一病人中的疾病持续期、血细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)水平、活动性关节炎计数(NAA)、关节严重度指数CSA)、疼痛间隙、儿童健康评价调查表(CHAQ)和用dnaJ肽治疗的反应(“反应者对无反应者”)。如表4-10显示，对dnaJ肽治疗的反应的关节炎病人也显示出良好的结果，是使用仅仅属于人同工型中的肽(即非同源人肽)刺激他们自己的单核细胞以用于检测体外增殖和细胞因子分析。与这些观察结果一致，用dnaJ肽治疗其关节炎已经扩展到不仅仅是几个关节而是广泛受累的关节炎患者(“广泛性少关节炎”)表明广泛性少关节炎患者对非同源人肽反应不好(表11)。

          表4：资料概述和与临床参数的比较病人(n＝21)                         R          P斯皮尔曼疾病持续期对CD69总数        -0.52      0.02斯皮尔曼疾病持续期对TNF peph20      0.68       0.01斯皮尔曼ESR对IL-10 peph23           0.77       0.005

                 表5：病初起的C-反应蛋白斯皮尔曼                              R          P病初起的CRP对SI pep4                -0.67      0.004病初起的CRP对TNF pep4               -0.59      0.02病初起的CRP对SI pep209              -0.52      0.037病初起的CRP对SI pep264              -0.51      0.043病初起的CRP对IL-10 peph23           0.72       0.008病初起的CRP对IL-10 peph3同源于 pep4 0.73       0.022病初起的CRP对IL-10 peph5同源于 pep4 0.79       0.011

                  表6：活动性关节计数(NAA)斯皮尔曼                       R            PNAA对IL-10 peph164            0.62          0.022

              表7：关节炎严重指数斯皮尔曼                       R            PCSA对SI dnaJ                  0.51          0.02CSA对SI h50非同源的           0.75          0.018CSA对TNF pep242               0.48          0.03

            表8：反应者对非反应者于6个月时Mann-Whitney反应者在6个月时对SI pep268                  0.049反应者在6个月时对SI h167同源于174           0.037＞反应者反应者在6个月时对IFN 174                    0.012＞反应者反应者在6个月时对SI h20同源于22             ＞反应者反应者在6个月时对IFN 22                     ＞反应者反应者在6个月时对SI h270非同源的            0.034＞反应者反应者在6个月时对IFN 4                      0.034＞反应者反应者在6个月时对IL-10 a dnaJ               0.024＞无反应者

                   表9：缓解间期(Rem int.)斯皮尔曼                          R           PRem int.对SI dnaJ                0.53       0.049Rem int.对SI 174                 0.6        0.021Rem int.对SI 209                 0.61       0.02Rem int.对SI 268                 0.56       0.038Rem int.对IFN 174                0.68       0.019Rem int.对IFN 22                 0.71       0.009

           表10：儿童健康评价调查表(CHAO)

                               R          PCHAQ对SI dnaJ                    -0.49      0.037CHAQ对SI 174                 -0.63         0.005CHAQ对ST 268                 -0.56         0.015CHAQ对ST 209                 -0.5          0.032CHAQ对SI h20                 -0.54         0.043CHAQ对IFN dnaJ               -0.56         0.017CHAQ对IFN 174                -0.61         0.006CHAQ对IFN 268                -0.59         0.009CHAQ对IFN 22                 -0.6          0.0076CHAQ对IFN 61                 -0.56         0.015CHAQ对IFN h167(同源于174)    -0.59         0.04CHAQ对TFN 174                -0.57         0.011CHAQ对TFN 22                 -0.57         0.011CHAQ对IFNγ人类非同源50      -0.49         0.036CHAQ对IFNγ人类非同源51      -0.5          0.034CHAQ对IFNγ人类非同源134     -0.49         0.036CHAQ对IFNγ人类非同源197     -0.6          0.01CHAQ对IFNγ人类非同源254     -0.49         0.036CHAQ对IFNγ人类非同源256     -0.49         0.036CHAQ对IFNγ人类非同源270     -0.49         0.036CHAQ对IFNγ人类非同源283     -0.49         0.036CHAQ对IFNγ人类非同源318     -0.5          0.034

表11：少关节炎病人与广泛性少关节炎病人的比较少关节炎(n＝14)广泛性少关节炎(n＝7)Mann WhitneyIFNγ22                                     0.033IFNγ174                                    0.427IFNγh164同源于174                          0.037IFNγh167同源于174                          0.037IFNγh176同源于174                          0.037IFNγ22                                     0.032IFNγ268                                    0.044

                 实施例7

       “oJLA”患者的滑膜液单核细胞中

        对细菌hsp dnaJ表位的免疫反应

T细胞对完整的大肠杆菌dnaJ热休克蛋白反应是以TH-1型为主并且限制在滑膜液间隙中。在oJLA患者中的SFMC的反应与同一来源的PBMC比较时，T细胞增殖(SI)和IFN生成量显著性升高。oJLA患者的SFMC的反应与疾病对照组的SFMC比较时显著性升高，有14名系统和多关节JIA患者，细菌hsp dnaJ来源的8个pan-DR结合肽中的4个作为T细胞抗原(图23)进行测试。这些反应也是具有促炎性质，这由体外对个体肽反应中的IFN生成量和调节细胞因子不能被检测到而得以支持。这样的反应性是区室性的，也是抗原和疾病特异性的，这是因为从14个不同型JLA患者以及年龄相配的健康对照组来源的PBMC和SFMC显示出微不足道的反应。

对先证抗原的反应性和对照的无关肽进行比较时发现了显著性不同，这些肽包括pan-DR结合设计肽(pandr)，大肠杆菌衍生改变肽配体(dnaJpv；参见图23)。SFMC对重组dnaJ的反应增加不是SFMC反应性上的非特异性增加的结果。也检测了7名oJLA患者中，来自两部分的细胞对破伤风类毒素(TT)，一种无关的记忆抗原的增殖反应。为了比较PBMC和SFMC对重组dnaJ和TT反应不同，对两种抗原中的每一个在两部分中的刺激指数的比率进行了计算。用重组dnaJ刺激比起用TT刺激，比率SI SFMC/SI PBMC有显著性(p＜0.02)增高。

这些结果展示了在oJLA患者滑膜液间隙对大肠杆菌dnaJ表位具有显著性的反应，表明这种反应在发炎区有一定作用。这种作用可能与自身免疫炎症的调节有关，它可能是基于细菌蛋白和它的人对等蛋白的不同表位间的相互作用，这些表位可以在滑膜区过量表达。所以研究了这些推定的表位的鉴定。

由于4个免疫原性细菌肽中的2个(22和174)是衍生于与人dnaJ蛋白(HSJ1、HDJ1或HDJ2)有序列同源性的大肠杆菌hsp dnaJ区域，评价了可能因交叉识别而导致的自身反应性。同源人肽20、21和23(细菌肽22的同源物)和肽164、167-181和176(细菌肽174的同源物)，和非同源人肽被检测。这些肽诱导出T细胞反应，与用对应的同源细菌肽刺激而得到的进行比较具有增殖作用和IFNγ的生成。对这些人肽的SI和IFNγ反应是与存在细菌同源物所得到的情况高度相关的。这些结果通过交叉识别展示了T细胞对细菌肽和它们的人同源物反应之间的相关性。与用细菌肽获得的结果相比，用人dnaJ肽衍生的肽刺激的SFMC培养物上清液中检测到达检测水平的IL-10；没有检测到IL-4。这些结果进一步证实自身抗原可以引起大量不同的T细胞反应。

在用非同源人肽134刺激oJLA长期患者的代表性SFMC之后，FACS分析用于评估CTLA+/CD25/CD4阳性细胞的百分数。与维持在对照条件下的细胞比，被认为具有调节功能的CTLA+/CD25/CD4阳性细胞的百分数在肽处理过的细胞中较高些(图24A)。在同样培养条件下，对肽134反应中调节细胞的扩张与IL-10的生成量很好地相关(图24B)。这些结果证明人dnaJ134肽的识别作用导致调节细胞扩张和IL-10生成。

为了探索临床特征与肽诱发的免疫调节之间的可能相关性，按照疾病过程将oJLA患者分组，其中包括永久性(n＝16)和中期(n＝15)o-JLA患者。与永久性o-JLA患者相比较，来自中期患者的样本中对肽134的增殖反应显著降低(p＝0.05)(图25A和25B)。另外，统计学显著意义的一个临界水平(p＝0.076)与IFN生成量相关。在考虑IL-10生成量时，发现了特别显著的不同(p＝0.0012；参见图25C)。

为了进一步分析与比较良性疾病的相关性，在关节内使用一种可注射的类固醇，TXA之后，将所研究关节的临床缓解间期作为衡量个体关节炎性活性程度的量度。在对非同源人肽134的反应中的IL-10生成量与个体关节的临床缓解间期有高度的相关性(R＝0.537，p＝0.026)。这些结果表明免疫调节自身表位的识别与减轻疾病相关。

                        实施例8

dnaJP1肽在类风湿性关节炎患者中提供了一种促炎表位

鉴定了一种来自hsp dnaJ蛋白的肽，它具有作为类风湿性关节炎(RA)病人外周血和滑膜液细胞的T细胞增殖和促炎细胞因子生成的的触发物的作用。这种肽，dnaJ P1(QKRAAYDQYGHAAFE；SEQ ID NO：27)，与“共同表位”(shared epitope)分享序列同源性，共同表位是一个通常在RA相关HLA等位基因中共有的含有5个氨基酸的片段(Albani等人，Nat.Med.1：448-52，1995，将此文引入此处供参考)。为确定在RA中HLA和dnaJ衍生肽之间的相互作用是否维持和刺激T细胞而进行研究，其中T细胞参与自身免疫炎症。这样的T细胞群一直是I期免疫耐受性研究的靶标。

在I期临床试验中，15个RA患者用3种不同的剂量的dnaJ P1(每天4次，口服)治疗6个月。参与的条件要求是疾病为临床活动型和促炎T细胞在体外对该肽具有反应性。如图26所示，粘膜对dnaJ P1的耐受性诱导从促炎向调节型细胞因子的显著免疫偏离。这种免疫变化是治疗特异性的和治疗诱导性的。

虽然参照上述实施例已阐述了本发明，然而要理解的是修改和变化是包括在本发明的精神和范围之中的。相应地，本发明唯受所附权利要求的限制。

                       序列表<110>   加利福尼亚大学董事会<120>   从热休克蛋白衍生的免疫调节肽及其使用<130>   UCSD1360WO<150>   US 60/245,181<151>   2000-11-01<160>   27<170>   PatentIn version 3.0<210>   1<211>   15<212>   PRT<213>   大肠杆菌<400>   1Gln Asp Tyr Tyr Glu Ile Leu Gly Val Ser Lys Thr Ala Glu Glu1               5                   10                  15<210>   2<211>   15<212>   PRT<213>   大肠杆菌<400>   2Arg Lys Ala Tyr Lys Arg Leu Ala Met Lys Tyr His Pro Asp Arg1               5                   10                  15<210>   3<211>   16<212>   PRT<213>   大肠杆菌<400>   3Gln Lys Arg Ala Ala Tyr Asp Gln Tyr Gly His Ala Ala Phe Glu Gln1               5                   10                  15<210>   4<211>   15<212>   PRT<213>   大肠杆菌<400>   4Gln Gly Phe Phe Ala Val Gln Gln Thr Cys Pro His Cys Gln Gly1               5                   10                  15<210>   5<211>   15<212>   PRT<213>   大肠杆菌Ser Lys Thr Leu Ser Val Lys Ile Pro Gly Ala Val Asp Thr Gly1               5                   10                  15<210>   6<211>   15<212>   PRT<213>   大肠杆菌<400>   6Gly Asp Leu Tyr Val Gln Val Gln Val Lys Gln His Pro Ile Phe1               5                   10                  15<210>   7<211>   15<212>   PRT<213>   大肠杆菌<400>   7Tyr Cys Glu Val Pro Ile Asn Phe Ala Met Ala Ala Leu Gly Gly1               5                   10                  15<210>   8<211>   15<212>   PRT<213>   大肠杆菌<400>   8Pro Ile Asn Pne Ala Met Ala Ala Leu Gly Gly Glu Ile Glu Val1               5                   10                  15<210>   9<211>   15<212>   PRT<213>   人类<400>   9Ala Ser Tyr Tyr Glu Ile Leu Asp Val Pro Arg Ser Ala Ser Ala1               5                   10                  15<210>   10<211>   15<212>   PRT<213>  人类<400>  10Lys Asp Tyr Tyr Gln Thr Leu Gly Leu Ala Arg Gly Ala Ser Asp1               5                   10                  15<210>  11<211>  15<212>  PRT<213>  人类<400>  11Thr Thr Tyr Tyr Asp Val Leu Gly Val Lys Pro Asn Ala Thr Gln1               5                   10                  15<210>  12<211>  15<212>  PRT<213>  人类<400>  12Lys Lys Ala Tyr Arg Arg Lys Ala Leu Gln Trp His Pro Asp Lys1               5                   10                  15<210>  13<211>  15<212>  PRT<213>  人类<400>  13Lys Arg Ala Tyr Arg Arg Gln Ala Leu Arg Tyr His Pro Asp Lys1               5                   10                  15<210>  14<211>  15<212>  PRT<213>  人类<400>  14Lys Lys Ala Tyr Arg Lys Leu Ala Leu Lys Tyr His Pro Asp Lys1               5                   10                  15<210>  15<211>  15<212>  PRT<213>  人类<400>  15Phe Arg Ser Val Ser Thr Ser Thr Thr Phe Val Gln Gly Arg Arg1               5                   10                  15<210>  16<211>  15<212>  PRT<213>  人类<400>  16Pro Gly Met Val Gln Gln Ile Gln Ser Val Cys Met Glu Cys Gln1               5                   10                  15<210>  17<211>  15<212>  PRT<213>  人类<400>  17Gly Arg Arg Ile Thr Thr Arg Arg Ile Met Glu Asn Gly Gln Glu1               5                   10                  15<210>  18<211>  16<212>  PRT<213>  人类<400>  18Gln Ala Tyr Glu Val Leu Ser Asp Ala Lys Lys Arg Glu Leu Tyr Asp1               5                       10              15<210>  19<211>  16<212>  PRT<213>  人类<400>  19Glu Ala Tyr Glu Val Leu Ser Asp Lys His Lys Arg Glu Ile Tyr Asp1               5                   10                  15<210>  20<211>  15<212>  PRT<213>  人类<400>  20Ser Gly Pro Phe Phe Thr Phe Ser Ser Ser Phe Pro Gly His Ser1               5                   10                  15<210>  21<211>  15<212>  PRT<213>  人类<400>  21Asp Gly Gln Leu Lys Ser Val Thr Ile Ash Gly Val Pro Asp Asp1               5                   10                  15<210>  22<211>  15<212>  PRT<213>  人类<400>  22Asp Leu Gln Leu Ala Met Ala Tyr Ser Leu Ser Glu Met Glu Ala1               5                   10                  15<210>  23<211>  15<212>  PRT<213>  人类<400>  23Glu Asp Leu Phe Met Cys Met Asp Ile Gln Leu Val Glu Ala Leu                5                  10                   15<210>  24<211>  15<212>  PRT<213>  人类<400>  24Leu Cys Gly Phe Gln Lys Pro Ile Ser Thr Leu Asp Asn Arg Thr1               5                   10                  15<210>  25<211>  15<212>  PRT<213>  人类<400>  25Arg Thr Ile Val Ile Thr Ser His Pro Gly Gln Ile Val Lys His1               5                   10                  15<210>  26<211>  15<212>  PRT<213>  人类<400>  26Gly Arg Leu Ile Ile Glu Phe Lys Val Asn Phe Pro Glu Asn Gly1               5                   10                  15<210>  27<211>  15<212>  PRT<213>  大肠杆菌<400>  27Gln Lys Arg Ala Ala Tyr Asp Gln Tyr Gly His Ala Ala Phe Glu1               5                   10                  15

Claims (73)

1.一种调节受试者免疫反应的方法，该方法包括给受试者施用一种dnaJ热休克蛋白(hsp)的免疫原性肽片段，从而调节受试者的免疫反应。

2.权利要求1所述的方法，其中所述dnaJ hsp是细菌dnaJ hsp。

3.权利要求2所述的方法，其中所述细菌dnaJ hsp是大肠杆菌dnaJhsp。

4.权利要求3所述的方法，其中所述肽是：

QDYYEILGVSKTAEE(SEQ ID NO：1)，

RKAYKRLAMKYHPDR(SEQ ID NO：2)，

QKRAAYDQYGHAAFEQ(SEQ ID NO：3)，

QGFFAVQQTCPHCQG(SEQ ID NO：4)，

SKTLSVKIPGAVDTG(SEQ ID NO：5)，

GDLYVQVQVKQHPIF(SEQ ID NO：6)，

YCEVPINFAMAALGG(SEQ ID NO：7)，

PINFAMAALGGEIEV(SEQ ID NO：8)，或

它们的任意组合。

5.权利要求1所述的方法，其中所述dnaJ hsp是一种真核dnaJ hsp。

6.权利要求5所述的方法，其中所述真核dnaJ hsp是一种酵母菌dnaJ hsp或一种脊椎动物dnaJ hsp。

7.权利要求6所述的方法，其中所述脊椎动物dnaJ hsp是一种人dnaJ hsp。

8.权利要求7所述的方法，其中所述人dnaJ hsp是HSJ1，HDJ1或HDJ2。

9.权利要求8所述的方法，其中所述肽是同源于细菌dnaJ hsp的肽片段。

10.权利要求9所述的方法，其中所述肽是：

ASYYEILDVPRSASA(SEQ ID NO：9)，

KDYYQTLGLARGASD(SEQ ID NO：10)，

TTYYDVLGVKPNATQ(SEQ ID NO：11)，

KKAYRRKALQWHPDK(SEQ ID NO：12)，

KRAYRRQALRYHPDK(SEQ ID NO：13)，

KKAYRKLALKYHPDK(SEQ ID NO：14)，

FRSVSTSTTFVQGRR(SEQ ID NO：15)，

PGMVQQIQSVCMECQ(SEEQ ID NO：16)，

GRRITTRRIMENGQE(SEQ ID NO：17)，或

它们的任意组合。

11.权利要求8所述的方法，其中所述肽是细菌dnaJ hsp的肽片段的非同源物。

12.权利要求11所述的方法，其中所述肽是：

QAYEVLSDAKKRELYD(SEQ ID NO：18)，

EAYEVLSDKHKREIYD(SEQ ID NO：19)，

SGPFFTFSSSFPGHS(SEQ ID NO：20)，

DGQLKSVTINGVPDD(SEQ ID NO：21)，

DLQLAMAYSLSEMEA(SEQ ID NO：22)，

EDLFMCMDIQLVEAL(SEQ ID NO：23)，

LCGFQKPISTLDNRT(SEQ ID NO：24)，

RTIVITSHPGQIVKH(SEQ ID NO：25)，

GRLIIEFKVNFPENG(SEQ ID NO：26)，或

它们的任意组合。

13.权利要求1所述的方法，其中调节免疫反应包括增强或诱导受试者的炎症应答。

14.权利要求13所述的方法，其中所述肽具有促炎活性，并且其中增强或诱导炎症应答包括在免疫状态下施用该肽。

15.权利要求13所述的方法，其中所述肽具有抗炎活性，并且其中增强或诱导炎症应答包含在耐受状态下使用肽。

16.权利要求13所述的方法，其中强化或诱导炎症应答包括增加受试者的伽吗干扰素(IFNγ)、肿瘤坏死因子(TNFα)或两者的水平。

17.权利要求13所述的方法，其中增强或诱导炎症应答包括增加受试者的白细胞介素-1(IL-1)、IL-6、IL-12、IL-23或它们的组合。

18.权利要求13所述的方法，其中增强或诱导炎症应答包括减少受试者的IL-4、IL-10、转化生长因子贝塔(TGFβ)或它们的组合的水平。

19.权利要求13所述的方法，其中调节免疫反应包括减低或抑制受试者的炎症应答。

20.权利要求19所述的方法，其中所述肽具有抗炎活性，并且其中减低或抑制炎症应答包括在免疫状态下施用该肽。

21.权利要求19所述的方法，其中所述肽具有促炎活性，并且其中减低或抑制炎症应答包括在耐受状态下施用该肽。

22.权利要求19的方法，其中减低或抑制炎症反应包含提高受试者IL-4，IL-10，TGFβ，或它们的组合的水平。

23.权利要求19的方法，其中减低或抑制炎症反应包含降低受试者IFNγ，TNFα，或两者的水平。

24.权利要求19的方法，其中强化或诱导炎症应答包含降低受试者IL-1，IL-6，IL-12，IL-23，或它们组合的水平。

25.权利要求1的方法，其中使用肽包含在免疫状态下使用肽。

26.权利要求25的方法，其中在免疫状态下使用肽包含在皮内，皮下，或肌肉内使用肽。

27.权利要求25的方法，其中肽被配制在一种组合物里，并且其中该组合物进一步包含免疫佐剂。

28.权利要求1的方法，其中使用肽包含在耐受状态下使用肽。

29.权利要求28的方法，其中在耐受状态下使用肽包含肽的经粘膜使用。

30.权利要求28的方法，其中在耐受状态下使用肽包含肽的皮内，皮下，或肌肉内使用。

31.权利要求1的方法，其中受试者有免疫性疾病。

32.权利要求31的方法，其中免疫性疾病是自身免疫性疾病。

33.权利要求32的方法，其中自身免疫性疾病是一种关节炎。

34.权利要求33的方法，其中关节炎是特发性幼稚关节型关节炎。

35.权利要求1的方法，其中受试者患感染性疾病，炎性肠道病，或癌症。

36.一种调节免疫效应细胞反应性的方法，该方法包括将免疫效应细胞与施用于受试者的dnaJ热休克蛋白(hsp)的肽片段接触。

37.权利要求36的方法，其中dnaJ hsp是细菌dnaJ hsp。

38.权利要求37的方法，其中细菌dnaJ hsp是大肠杆菌dnaJ hsp，选自：

QDYYEILGVSKTAEE(SEQ ID NO：1)，

RKAYKRLAMKYHPDR(SEQ ID NO：2)，

QKRAAYDQYGHAAFEQ(SEQ ID NO：3)，

QGFFAVQQTCPHCQG(SEQ ID NO：4)，

SKTLSVKIPGAVDTG(SEQ ID NO：5)，

GDLYVQVQVKQHPIF(SEQ ID NO：6)，

YCEVPINFAMAALGG(SEQ ID NO：7)，

PINFAMAALGGEIEV(SEQ ID NO：8)，或

它们的任意组合。

39.权利要求36的方法，其中dnaJ hsp是真核dnaJ hsp。

40.权利要求39的方法，其中真核dnaJ hsp是人dnaJ hsp。

41.权利要求40的方法，其中肽是同源于细菌dnaJ hsp的肽片段。

42.权利要求41的方法，其中肽是：

ASYYEILDVPRSASA(SEQ ID NO：9)，

KDYYQTLGLARGASD(SEQ ID NO：10)，

TTYYDVLGVKPNATQ(SEQ ID NO：11)，

KKAYRRKALQWHPDK(SEQ ID NO：12)，

KRAYRRQALRYHPDK(SEQ ID NO：13)，

KKAYRKLALKYHPDK(SEQ ID NO：14)，

FRSVSTSTTFVQGRR(SEQ ID NO：15)，

PGMVQQIQSVCMECQ(SEEQ ID NO：16)，

GRRITTRRIMENGQE(SEQ ID NO：17)，或

它们的任意组合。

43.权利要求42的方法，其中肽是非同源于细菌dnaJ hsp的肽片段。

44.权利要求43的方法，其中肽是：

QAYEVLSDAKKRELYD(SEQ ID NO：18)，

EAYEVLSDKHKREIYD(SEQ ID NO：19)，

SGPFFTFSSSFPGHS(SEQ ID NO：20)，

DGQLKSVTINGVPDD(SEQ ID NO：21)，

DLQLAMAYSLSEMEA(SEQ ID NO：22)，

EDLFMCMDIQLVEAL(SEQ ID NO：23)，

LCGFQKPISTLDNRT(SEQ ID NO：24)，

RTIVITSHPGQIVKH(SEQ ID NO：25)，

GRLIIEFKVNFPENG(SEQ ID NO：26)，或

它们的任意组合。

45.权利要求36的方法，其中接触免疫效应细胞包括把肽用于受试者，其中所述接触发生在体内。

46.权利要求36的方法，其中接触免疫效应细胞是在体外进行。

47.权利要求46的方法，进一步包含把免疫效应细胞用于受试者，以此调节受试者的免疫反应。

48.权利要求47的方法，其中免疫效应细胞是受试者自身的。

49.权利要求47的方法，其中免疫效应细胞是与受试者有关的同种异体的。

50.权利要求47的方法，其中调节免疫反应包括增强或诱导受试者的炎症反应。

51.权利要求47的方法，其中调节免疫反应包括降低或抑制受试者的炎症反应。

52.权利要求36的方法，其中免疫效应细胞是T细胞。

53.权利要求36的方法，进一步包括免疫效应细胞与免疫佐剂接触。

54.权利要求53的方法，其中免疫佐剂是细胞因子。

55.权利要求54的方法，其中细胞因子是促炎细胞因子。

56.权利要求55的方法，其中细胞因子是抗炎细胞因子。

57.选自SEQ ID NOS：1-26中的任意一个的肽。

58.嵌合多肽，包括与至少一种异源的多肽有效连接的权利要求57的肽。

59.组合物，包括至少一种权利要求57的肽。

60.权利要求59的组合物，包括多种所述肽。

61.权利要求60的组合物，其进一步包括生理上可接受的溶液。

62.权利要求57的组合物，其进一步包括免疫佐剂。

63.权利要求62的组合物，其中免疫佐剂是细胞因子。

64.权利要求63的组合物，其中细胞因子有促炎活性。

65.权利要求63的组合物，其中细胞因子有抗炎活性。

66.权利要求62的组合物，其中免疫佐剂包括福氏完全佐剂，福氏不完全佐剂或明矾。

67.编码权利要求57的肽的多核苷酸。

68.权利要求67的多核苷酸，其是一个双链脱氧核苷酸分子。

69.重组核酸分子，包括与至少一个异源的核苷酸序列有效连接的如权利要求67所述的多核苷酸。

70.权利要求69的重组核酸分子，其中异源的核苷酸序列包括转录调节元件，翻译调节元件或者它们的组合。

71.权利要求69的重组核酸分子，其中异源的核苷酸序列编码多肽。

72.载体，其含有权利要求67的多核苷酸。

73.细胞，其含有权利要求67的多核苷酸。

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