CN1443539A - 治心脑血管病的赤芍总苷的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种治疗心脑血管疾病的赤芍总苷组合物及其制备方法，特别是涉及以赤芍总苷组合物为活性成分的药物组合物，如含有赤芍总苷组合物的赤芍总苷注射剂以及含赤芍总苷组合物的赤芍总苷胶囊、片剂，用于预防和治疗人和动物心肌或脑组织缺血缺氧等引起的损伤，本发明的制备工艺重现性好，适合工业化生产。

Description

治心脑血管病的赤芍总苷的药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药赤芍中治疗心脑血管疾病的有效部位赤芍总苷组合物及其制备方法，以及以赤芍总苷组合物为主要成分的药物组合物。

背景技术

动脉硬化性脑梗塞是因供应脑部的动脉粥样硬化，使动脉管腔狭窄、闭塞，导致急性脑供血不足或脑动脉血栓形成，造成局部脑组织坏死。临床表现为瘫痪、失语等突然发生的局灶性神经功能缺失。动脉硬化性脑梗塞发病率约占全部脑卒中的70％左右。脑栓塞是指来自身体各部位的栓子，阻塞了脑血管，造成血管供血区的脑梗塞及脑功能障碍。引起脑栓塞的病因很多。根据栓子的来源可分为心源性和非心源性两大类。心源性最常见，约占脑栓塞病因的60-70％。脑栓塞后产生脑缺血的改变大致与动脉硬化性脑梗塞相似。目前世界上治疗心脑血管疾病的药物虽然很多，但由于西药的毒副作用和传统中药药效有限等原因，仍然需要不断开发新的高效低毒的治疗药物来满足广大人民群众的健康需求。

赤芍，在《本经》中记载，为毛茛科植物芍药(Paeonia Lactiflora Pall.)(野生种)、草芍药(Paeonia obovata maxim.)或川赤芍(Paeonia veitchii Lynch)的干燥根；主要分布于河北、辽宁、吉林、陕西、甘肃等地；性苦，微寒，归肝经；主要功效为清热凉血，散瘀止痛。用于温毒发斑，吐血衄血，目赤肿痛，肝郁胁痛等。赤芍及其制剂的药理作用比较广泛，可单用，也可配伍成复方用于脑血管病治疗。目前已有多种含赤芍的中药制剂收载于药典和部颁标准中，如脑血栓片、益脑复健胶囊、偏瘫复原丸、回生再造丸、大活络丸等。这些产品均为传统中药产品，组方复杂，虽具一定的疗效，但也存在着服用量大、起效慢、使用不便、药效有限及质量控制难等缺点。

赤芍总苷是赤芍药的水溶性成分，主要包括芍药苷、羟基芍药苷、芍药内酯苷及苯甲酰芍药苷等，以芍药苷为主。文献报道的传统的赤芍总苷的制备方法有水提法、醇提法、水提醇沉法，由于赤芍药材的成分复杂，含有非苷类的成分如逆没食子鞣酸、挥发油、树脂、粘液质等，所以传统的制法得到赤芍总苷的含量一般均较低，不适合开发成现代中药制剂(参见：川北医学院学报，2000年，15卷第4期49-50页)。也有报道通过大孔树脂吸附法提取赤芍总苷(参见：中成药，1999，21(12))，该方法采用70％乙醇提取，醇提液浓缩后，再用水溶解上柱，采用20％的乙醇洗脱。

发明内容

本发明要解决的技术问题是研制含赤芍有效部位赤芍总苷的药物组合物及其制备方法。本发明研制的药物组合物，有效成分的含量高，杂质少，疗效好，临床使用的药量大大减少，并且质量易控。杂质的减少不但可改善中成药常有的吸潮性，而且使药效显著，减少有些杂质所导致的副作用，增加患者服药的依从性。

本发明要解决的技术问题还涉及研制赤芍总苷药物组合物的制备工艺，该方法能够提高活性成分含量，去除大量杂质，同时重复性、稳定性好，并且原料的得率高，成本低，适合工业化生产。

为解决上述技术问题，本发明研究制定了如下技术方案。

一种治疗心脑血管病的赤芍总苷组合物，可用下述方法得到：

取赤芍药材，水提取，将水提液上大孔吸附树脂柱，先用水洗脱杂质，再用60-90％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩后，加入乙醇使醇浓度达80～90％，滤去沉淀物，滤液浓缩、干燥。大孔吸附树脂柱型号为D101、D-3520或AB-8型。

所述的赤芍总苷组合物，其特征在于：药材粉碎后，加6～7倍量水热提3次，每次2h，将提取液过滤后，上大孔吸附树脂柱，再用70～75％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩后，加入乙醇使醇浓度达85％，滤去沉淀物，滤液浓缩、干燥。赤芍总苷组合物中，赤芍总苷含量至少为50％。赤芍总苷组合物中，赤芍总苷含量为50～95％；芍药苷含量为40～85％。

一种治疗心脑血管病的赤芍总苷的药物组合物，其特征在于：其中含有治疗有效量的前述任一项赤芍总苷组合物和药学上可接受的载体。

所述的药物组合物，其特征在于：药学上可接受的载体是口服制剂辅料或胃肠外途径给药的辅料。

所述的药物组合物，是含有赤芍总苷组合物1～5mg/ml的赤芍总苷注射剂；或者含有赤芍总苷组合物2mg/ml的赤芍总苷注射剂。

所述的药物组合物，是每粒或片含有赤芍总苷组合物10～100mg的赤芍总苷胶囊、片剂。

本发明运用大孔吸附树脂分离技术，采用水提后直接上柱、水洗脱后再用50～90％乙醇充分洗脱，最后再用95％乙醇精制的方法，取得良好效果，此方法不但操作简便，降低了成本，而且非常适合工业化生产。大量研究表明，D101、D-3520或AB-8型大孔树脂对赤芍总苷的吸附分离效果最好。

根据上述赤芍总苷组合物，其特征在于其制成的制剂符合《药品注册管理办法》中药、天然药物注册分类5的要求，即未在国内上市的中药、天然药物提取的有效部位制成的制剂。

根据上述赤芍总苷组合物，其特征在于所述赤芍总苷组合物，可以与药学上可接受的载体和/或赋形剂混合，制成含有上述赤芍总苷组合物为主要活性成分的口服制剂，如片剂、胶囊、滴丸、软胶囊等，以及胃肠道外途径给药的制剂，如粉针、注射液等。

由于赤芍总苷组合物水溶性好，为便于脑血管疾病急救用，适合将赤芍总苷组合物制成注射液。注射液中赤芍总苷组合物浓度为1～5mg/ml，优选浓度为2mg/ml。通常成人用量为每天10～100mg赤芍总苷组合物，优选20～40mg赤芍总苷组合物，一天给药一次。

赤芍总苷组合物，也可制成每粒(片)含有赤芍总苷10～100mg的胶囊和片剂。优选每粒(片)含有上述赤芍总苷50mg的赤芍总苷的胶囊和片剂。通常成人用量为每天30～300mg赤芍总苷组合物，优选100～200mg赤芍总苷组合物。

采用本发明制得的赤芍总苷组合物中，总苷的含量至少为50％，甚至可达50～95％，其主要活性成分为芍药苷，通过高效液相法测定，芍药苷的含量可占赤芍总苷组合物的40～85％。虽然本发明的赤芍总苷中除主要含芍药苷以外，还含羟基芍药苷、芍药内酯苷及苯甲酰芍药苷等成份，但该赤芍总苷以及含赤芍总苷的药物组合物总体疗效优良。药效学试验证明本发明的赤芍总苷以及含赤芍总苷的药物组合物总体上有很好的治疗心脑血管疾病的功效，与传统的制剂相比，本发明治疗心脑血管疾病的有效剂量小，毒副作用小。

本发明制得的赤芍总苷组合物，由于采用了中药现代化技术中的大孔吸附树脂技术，不但使其中的活性成分的含量提高，从而提高了药效，而且去除了大量杂质，既解决了中成药常有的吸潮性大的问题，又减小了副作用。

本发明对赤芍总苷的制备方法作了改进。针对现有的水提法、醇提法、水提醇沉及大孔树脂吸附分离方法的不足，运用大孔吸附树脂分离技术，采用水提后直接上柱、水洗脱后再用50～90％乙醇充分洗脱，最后再用95％乙醇精制的方法，取得良好效果，此方法不但操作简便，降低了成本，而且非常适合工业化生产。大量研究表明，D101、D-3520或AB-8型大孔树脂对赤芍总苷的吸附分离效果最好。

与现有技术(参见：中成药，1999，21(12))相比，用水提取比用70％乙醇提取成本低；用水提液直接上柱比浓缩后再用水溶解浓缩物上柱减少了工艺步骤，且能耗减低；该文献中没有公开大孔树脂的型号，因此不能得知在什么型号的树脂柱上用20％的乙醇能够将赤芍总苷洗脱完全。

采用多种动物模型研究赤芍总苷组合物的药效，并和目前市场上主要的治疗缺血性脑损伤药灯盏花素注射液作对照。其方法和结果如下：

1、大鼠大脑中动脉结扎(MCAO)模型：大鼠随机分成6组：假手术组(Sham)、生理盐水(NS)对照组、受试药3个剂量组及阳性药(灯盏花素)组，每组10只，♀ 各半。大鼠乙醚麻醉后，颈部正中切开，分离并结扎右侧颈总动脉(CCA)，缝合肌肉皮肤后，右侧位固定。在右耳和右眼外眦连线中点切开皮肤，分离颞肌，暴露颧突及颞骨，在颧突的头端1-2mm处，开一3×3mm的骨窗，暴露大脑中动脉(MCA)，将MCA灼断，缝合切口。MCAO大鼠术后24小时进行行为学指标观察并评分(A、提尾观察：如手术对侧前肢出现腕屈、肘屈曲、肩内旋、既有肘屈曲又有肩内旋者，分别记1、2、3、4分；向手术对侧推，阻力下降者分别记1、2、3分；C、双前肢置金属网上观察：手术对侧肢张力下降者分别记1、2、3分；D、转圈者记1分)。行为学观察后处死动物，取右大脑半球称重后置石英大鼠模中，按石英脑模上刻度均匀切成10片，将脑片置于0.2％NBT中，37℃稳育30min，将未被染成蓝色的白色梗塞组织，仔细分离并称重。药物于MCAO前15min静注(iv)给药。结果见下表1和2：

表1赤芍总苷组合物对MCAO致大鼠脑梗塞组织重量的影响( x±s)

             剂量            梗塞脑组织重量百     抑制率

组别                  n

           (mg/kg)               分比(％)           (％)

Sham         -        8          3.9±5.0^**         -

NS           -        8          35.7±8.3           -灯盏花素       6        8          26.3±6.1^*         26.3赤芍总苷组合物   12       8          24.1±4.2^**        33.33

             6        8          28.4±5.4^*         22.22

             3        8          36.8±11.1          -

与NS比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

结果如表1所示，大鼠MCAO后有明显的脑梗塞发生，赤芍总苷组合物6、12mg/kg(iv)可明显降低脑梗塞组织重量百分比。12mg/kg赤芍总苷组的疗效要好于6mg/kg灯盏花素组。

表2赤芍总苷组合物对MCAO致大鼠缺血损伤行为学指标的影响( x±s)

             剂量

组别                   n               行为学评分

            (mg/kg)

Sham          -        8               0.0±0.0^**

NS            -        8               4.6±2.5灯盏花素        6        8               2.5±1.5赤芍总苷组合物    12       8               0.9±1.1^**

              6        8               1.9±1.2^*

              3        8               2.8±1.7

与NS比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

结果如表2所示，与NS组比较，赤芍总苷组合物6、12mg/kg组与假手术组一样，能明显改善MCAO大鼠行为学指标。6、12mg/kg赤芍总苷组的疗效要好于6mg/kg灯盏花素组。

2、大鼠颈总动脉-颈外静脉旁路血栓的形成：大鼠随机分成5组：NS对照组、受试药3个剂量组及阳性药(灯盏花素)组，每组8只，♀

兼用。10％水合氯醛麻醉后，做颈部正中切口，分离左颈总动脉和右颈外静脉。在一长15cm、外径为2mm的聚乙烯管中置入一根5cm长的称重丝线并充满50U·ml^-1肝素生理盐水溶液，将该聚乙烯管一端插入右颈外静脉中，结扎固定，另一端插入左颈总动脉中，扎紧后打开动脉夹开放血流15min，然后取出聚乙烯管内的血栓，称重后放入80℃烤箱中烘烤6h再称其干重，减去丝线重量分别得血栓的湿重和干重。结果如下：

表3赤芍总苷组合物对大鼠动-静脉环路致血栓形成的影响( x±s)

             剂量

组别                     n       血栓湿重(mg)   血栓干重(mg)

            (mg/kg)

NS            -          8       9.49±2.83     1.49±0.72灯盏花素        6          8       6.14±2.59^*   1.06±0.35赤芍总苷组合物    12         8       5.99±2.39^*   0.85±0.32^*

              6          8       6.40±0.82^*   0.99±0.35

              3          8       6.11±2.18^*   0.86±0.55

与NS比较，^*P＜0.05.

结果如表3所示，赤芍总苷组合物3、6、12mg/kg(iv)均可使大鼠颈总动脉-颈外静脉环路致血栓湿重明显减轻(P＜0.05)；赤芍总苷组合物12mg/kg尚可明显减轻血栓干重(P＜0.05)，而6mg/kg灯盏花素则不能减轻血栓干重。

3、本申请人其他研究结果表明，赤芍总苷组合物6、12、24mg/kg在小鼠断头后张口喘气模型上，可显著延长小鼠断头后张口喘气时间，并呈一定的量效关系。24mg/kg赤芍总苷组合物尚可显著延长小鼠氮气缺氧死亡时间，并明显提高小鼠双侧颈总动脉结扎存活率。从而表明本品静脉注射对缺血、缺氧性脑损伤具有保护作用。6、12mg/kg赤芍总苷组合物可显著抑制MCAO大鼠缺血脑组织中LDH活性的下降，进一步提示其对脑组织损伤具有保护作用；3、12mg/kg赤芍总苷组合物能显著抑制MCAO大鼠脑组织中NO含量的降低，提示其保护作用与抗氧化有关。本品1.5、3mg/kg静脉注射后50分钟，可见狗颈内动脉血流量显著增加，提示本品能显著增加脑血流量，产生抗脑缺血作用。对狗血压、心电图和心率均无明显影响，提示本品在发挥抗脑缺血、缺氧的同时对心血管系统无明显的不利影响。

综上，赤芍总苷组合物对缺血性脑损伤具有保护作用，其作用可能与增加脑血流量、抑制血栓形成和抗氧化作用有关。

大鼠的药效模型研究结果表明，灯盏花素注射液和赤芍总苷注射液的最佳剂量分别为6mg/kg和12mg/kg。6mg/kg的赤芍总苷注射液的药效与灯盏花素注射液的最佳药效大体相当，而赤芍总苷注射液的最佳剂量(12mg/kg)的药效要明显好于灯盏花素注射液最佳剂量6mg/kg时的药效。并且，研究还表明，灯盏花素注射液小鼠静脉注射的LD₅₀为2g/kg，而赤芍总苷注射液小鼠静脉注射的LD₅₀为3.5g/kg，说明赤芍总苷注射液的毒性比灯盏化花注射液的毒性要小。

由于赤芍总苷的水溶性要明显好于灯盏花素，并且赤芍总苷的成本要低于灯盏花素，因此本发明可为市场提供一种高效、低毒、价廉的抗缺血性脑损伤新药。

此外，本发明克服了中药传统工艺的缺陷，运用中药现代化技术中的大孔树脂吸附技术，提供了一种含量高、成分明确、质量可控、药效确切、副作用小的赤芍总苷组合物及其制备方法，为一种高效低毒的现代中药。本发明的制备工艺重现性、稳定性都好，原料的得率高，适合工业化生产。

具体实施方式

实施例中，赤芍药材分别购自毫州、洛阳和成都，均符合《中国药典》2000年版一部中“赤芍”项下的规定。

赤芍总苷测定方法：照紫外分光光度法(《中国药典》2000年版一部附录VA)在230nm波长处测定。

原料中芍药苷测定方法：照高效液相色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VID)测定。

色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；0.05mol/L磷酸二氢钾-乙腈-四氢呋喃(89∶11∶1.5)为流动相，检测波长为230nm，理论塔板数以芍药苷计应不低于3000。

下列实施例旨在进一步举例描述本发明，而不是以任何方式限制本发明。

实施例一：

取赤芍药材(产地：洛阳)120kg，粉碎成粗粉，放入提取罐中；分别加700L的水沸提3次，每次2h，提取液乘热过滤后，放冷；上AB-8大孔吸附树脂柱，用水充分洗脱至流出液为澄清且无还原糖反应后，再用75％乙醇洗脱；收集洗脱液，减压回收至近干，加入95％乙醇，使醇浓度为85％。放冷静置0.5h，过滤，将滤液减压回收至干，即得赤芍总苷组合物1.6kg。

经测定：上述实验所得赤芍总苷组合物中总苷含量为86％，赤芍总苷组合物中主要成分芍药苷含量为78％。

实施例二：

赤芍药材120kg(产地：毫州)，粉碎成粗粉，放入提取罐中；分别加840L的水沸提3次，每次2h，提取液乘热过滤后，放冷；上D-3520大孔吸附树脂柱，用水充分洗脱至流出液为澄清且无还原糖反应后，再用90％乙醇洗脱；收集洗脱液，减压回收至近干，加入95％乙醇加热搅拌，使醇浓度为90％。放冷静置0.5h，过滤，将滤液减压回收至干，即得赤芍总苷原料1.9kg。

经测定：上述实验所得赤芍总苷组合物中总苷含量为80％，赤芍总苷组合物中主要成分芍药苷含量为73％。

实施例三：

赤芍药材150kg(产地：成都)，粉碎成粗粉，放入提取罐中；分别加1000L的水沸提3次，每次2h，提取液乘热过滤后，放冷；上D-3520大孔吸附树脂柱，用水充分洗脱至流出液为澄清且无还原糖反应后，再用65％乙醇洗脱；收集洗脱液，减压回收至近干，加入95％乙醇，使醇浓度为80％。放冷静置1h，过滤，将滤液减压回收至干，即得赤芍总苷原料2.4kg。

经测定：上述实验所得赤芍总苷组合物中总苷含量为67％，赤芍总苷组合物中主要成分芍药苷含量为59％。

实施例四

赤芍总苷注射液的制备

取上述赤芍总苷组合物2g，加适量注射用水溶解后，再加入活性碳0.02g，加热煮沸20分钟，滤过，加水至900ml，用1％的NaOH调pH至6.5，静置2h，滤过，滤液加注射用水至1000ml，灌封(10ml/支，2mg/ml)，灭菌，即得。用法用量为每日1次，每次20～40mg静脉注射或加入生理盐水或5～10％的葡萄糖溶液中静脉滴注。

实施例五(赤芍总苷胶囊的制备方法)：

取上述赤芍总苷原料50g，淀粉50g，β-环糊精100g混匀，制粒，过筛，干燥后装成1000粒胶囊(50mg/粒)，即得。用法用量为：口服，每次1粒，每日3次。

实施例六(赤芍总苷片的制备方法)：

取上述赤芍总苷原料50g，淀粉50g，β-环糊精100g混匀，制粒，过筛，干燥后压成1000片(50mg/片)，即得。用法用量为：口服，每次1片，每日3次。

Claims (10)

1、一种治疗心脑血管病的赤芍总苷组合物，可用下述方法得到：

取赤芍药材，水提取，将水提液上大孔吸附树脂柱，先用水洗脱杂质，再用60-90％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩后，加入乙醇使醇浓度达80～90％，滤去沉淀物，滤液浓缩、干燥。

2、根据权利要求1所述的赤芍总苷组合物，其特征在于：大孔吸附树脂柱型号为D101、D-3520或AB-8型。

3、根据权利要求2所述的赤芍总苷组合物，其特征在于：药材粉碎后，加6～7倍量水热提3次，每次2h，将提取液过滤后，上大孔吸附树脂柱，再用70-75％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩后，加入乙醇使醇浓度达85％，滤去沉淀物，滤液浓缩、干燥。

4、根据权利要求3所述的赤芍总苷组合物，其特征在于：赤芍总苷组合物中，赤芍总苷含量至少为50％。

5、根据权利要求4所述的赤芍总苷组合物，其特征在于：赤芍总苷组合物中，赤芍总苷含量为50-95％；芍药苷含量为40-85％。

6、一种治疗心脑血管病的赤芍总苷的药物组合物，其特征在于：其中含有治疗有效量的权利要求1-5中任一项赤芍总苷组合物和药学上可接受的载体。

7、根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于：药学上可接受的载体是口服制剂辅料或胃肠外途径给药的辅料。

8、根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于：含有赤芍总苷组合物1～5mg/ml的赤芍总苷注射剂。

9、根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于：含有赤芍总苷组合物2mg/ml的赤芍总苷注射剂。

10、根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于：每粒或片含有赤芍总苷组合物10～100mg的赤芍总苷胶囊、片剂。