CN1686464A - 一种紫金龙注射制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种紫金龙注射制剂，其特征在于，它是以紫金龙提取物为活性成分的注射制剂；其特征还在于，紫金龙提取物中总生物碱的重量百分含量为95％－98.5％；总生物碱中普罗托品的重量百分含量为40％－65％、异紫堇定的重量百分含量为25％－45％。本发明还公开了注射制剂的制备方法。药理实验结果表明，本发明注射制剂具有很好的镇痛、消炎、止血、降压、抗肿瘤作用。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种紫金龙注射制剂及其制备方法。
背景技术
紫金龙为罂粟科植物紫金龙Dactylicapnos scandens(D.Don)Hutch.的干燥根，具有消炎、镇痛、止血、降压等功效，常用于治疗各种痛症、跌打损伤、外伤出血、高血压等。药理研究表明，紫金龙中所含的生物碱类成分是其镇痛、止血的主要有效成分。生物碱中含量较高的成分为普罗托品和异紫堇定，此外还含有紫堇定、四氢巴马汀、四氢非洲防己胺、青藤碱、药根碱等。
参考文献[钱金栿，等。白族草药紫金龙成分的研究。西北药学杂志，2000年，15(2)：57]公开了从紫金龙药材中提取普罗托品和异紫堇定的方法，但是此方法只能适用于小规模的试验研究，没有实用性；参考文献[吴勐，等。紫金龙提取物的镇痛作用及其机制初探。中草药，2003，34(11)：1022]公开了紫金龙药材中总生物碱的提取方法，但是采用过阳离子交换树脂和氯仿萃取的方法得到，步骤繁琐，提取效率低，生产周期长，纯度低；申请号为CN01108424.3的专利文献公开了普罗托品在制备治疗老年性痴呆症药物中的应用，但是未公开从紫金龙药材中提取的生物碱的制备方法及其制剂。紫金龙药材的药理作用是所含的生物碱成分共同作用的结果，单独提取其中的一种成分是不科学的。
在资料检索中未发现有关于紫金龙药材中提取的生物碱类成分制备成注射制剂的任何报道。
发明内容
本发明旨在提供一种治疗效果好的以紫金龙生物碱为活性成分的注射制剂。
本发明的另一目的是提供一种紫金龙注射制剂的制备方法。
本发明通过以下技术方案实现。
一、工艺制法
(1)紫金龙提取物的制备
取紫金龙药材，粉碎成粗粉，加8倍量30％-60％的pH3-5的酸性乙醇溶液回流提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液用碱溶液调节至中性后减压回收乙醇并浓缩成稠膏，加入20-30倍量饱和氢氧化钙水溶液，搅拌，用稀硫酸调节pH2-4，静置24小时，倾出上清液，过滤，滤液用碱溶液调节pH值10-12，浓缩至相对密度为1.20，静置24小时，过滤，沉淀用pH2-4的盐酸水溶液溶解后，以5000转/分的速度离心30分钟，上清液过大孔吸附树脂吸附，先用水洗至流出液近无色，再用3-6倍柱体积70％-90％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，加注射用水稀释至0.5g生药/ml，用截留分子量5000的超滤膜超滤，合并超滤液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到紫金龙提取物。
(2)制剂制备
水针制剂的制备：称取紫金龙提取物2-4重量份用注射用水溶解，调pH值为5.0-6.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每支2ml的水针制剂。
输液制剂的制备：称取紫金龙提取物2-4重量份用注射用水溶解，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为5.0-6.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每瓶100ml的输液制剂。
粉针制剂的制备：称取紫金龙提取物2-4重量份用注射用水溶解，加入水溶性注射用赋形剂，调pH值为5.0-6.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，干燥，制备成粉针制剂。
本发明研究人员经过实验得知，紫金龙药材中的生物碱类有效成分，用酸性乙醇溶液的提取率比用单纯的酸水溶液或乙醇溶液提取效率均高。
在酸性乙醇的提取物中，含有大量的粘液质、树脂等无效成分，利用氢氧化钙可以高效率的除去这些杂质，生物碱的盐则易溶解于水而几乎不会损失，对提取物进行初步的纯化。利用生物碱在碱性溶液中游离，而在酸性溶液中溶解的性质可以除去一些杂质，对生物碱进一步纯化，最后利用大孔吸附树脂和超滤技术，可以使得得到的紫金龙提取物中的生物碱重量百分含量达到95％以上。
二、含量测定
总生物碱测定方法按照参考文献[申请号CN03118261.5专利文献]中的UV方法测定。普罗托品和异紫堇定的测定方法按照参考文献[严田青，等。高效液相色谱法测定紫金龙中普罗托品和异紫堇定的含量。中国中药杂志，2004，29(10)：961]中的高效液相色谱法测定。紫金龙提取物样品均由广东天之骄药物开发有限公司提供。含量测定结果见表1和表2。
表1总生物碱含量测定结果
| 批次 | 总生物碱含量(％) |
| 12345 | 98.597.395.896.695.0 |
注：总生物碱含量是指：总生物碱占紫金龙提取物的重量百分比。
由上表含量测定结果可以看出：紫金龙提取物中总生物碱的重量百分含量为95.0-98.5％。
表2主要生物碱含量测定结果
| 批次 | 含普罗托品 | 量(％)异紫堇定 |
| 123 | 48.740.057.6 | 38.445.031.6 |
| 45 | 65.058.5 | 25.033.2 |
注：普罗托品含量是指：普罗托品占总生物碱的重量百分比；异紫堇定含量是指：异紫堇定占总生物碱的重量百分比。
由上表含量测定结果可以看出：紫金龙提取物中，普罗托品占总生物碱的重量百分含量为40％-65％；异紫堇定占总生物碱的重量百分含量为25％-45％。
三、动物急性毒性试验
紫金龙提取物按不同的剂量注射小鼠或大鼠，观察1周。给药后动物的活动减少，俯卧少动，高剂量组动物死亡前出现呼吸困难、紫组、抽搐、等症状。小鼠ip、iv的LD50为162.4mg/kg及41.2mg/kg，大鼠ip的LD50为120.2mg/kg。
四、药理实施例
本发明紫金龙注射制剂由广东天之骄药物开发有限公司实验室提供。
1、对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制实验
小鼠30只，随机分为对照组、普罗托品组(给药剂量40mg/kg)、紫金龙注射制剂组(给药剂量40mg/kg)。对照组给予等体积的生理盐水。各组腹腔注射给药，连续5天，末次给药后1小时于小鼠右耳两面涂二甲苯25μl，左耳不涂为正常耳，2小时后，脱颈椎处死，用直径8mm打孔器打下左耳和右耳同一部位的圆片，于扭力天平上称重，计算耳肿胀率及抑制率。结果见表3。
表3对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用(X±S)
| 组别 | 左耳重(mg) | 肿胀度(mg) | 抑制率(％) |
| 对照组普洛托品组紫金龙注射制剂组 | 13.8±2.714.1±2.614.0±2.9 | 8.5±2.44.7±1.7**3.2±1.6**# | -44.762.4 |
注：与对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01；与普罗托品组比较：#P＜0.05。
由上述实验结果可以看出，本发明紫金龙注射制剂具有很好的消炎作用，且比普罗托品组疗效更好。说明本发明的总生物碱的药理效果好。
2、扭体法镇痛试验
小鼠30只，随机分为对照组、异紫堇定组(给药剂量40mg/kg)、紫金龙注射制剂组(给药剂量40mg/kg)。对照组给予等体积的生理盐水。各组给药后1小时，腹腔注射0.8％醋酸0.2ml/只，记录5-20min内扭体次数。结果见表4。
表4对小鼠扭体反应的影响(X±S)
| 组别 | 鼠数(只) | 扭体次数(n) | 抑制率(％) |
| 对照组异紫堇定组紫金龙注射制剂组 | 101010 | 38.0±8.821.5±5.6**15.3±5.0**# | -43.459.7 |
注：与对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01。与异紫堇定组比较：#P＜0.05。
由上述实验结果可以看出，本发明紫金龙注射制剂有很好的镇痛作用，且比异紫堇定组疗效更好。说明本发明的总生物碱的药理效果好。
3、对凝血时间的影响
小鼠30只，分组及给药剂量同上。对照组给予等体积的生理盐水。各组给药后1小时，测量小鼠的凝血时间。用弯镊摘除小鼠的眼球后，在干净的载玻上两端各滴一滴血，开始计时。每隔30s用洁净大头针由边缘向里挑动，观察有无血丝挑出。如果有血丝挑出，用大头针挑另一滴血，以第2滴血挑出血丝的时间为小鼠的凝血时间。结果见表5。
表5对凝血时间的影响(X±S)
| 组别 | 鼠数(只) | 凝血时间(min) |
| 对照组紫金龙注射制剂低剂量组紫金龙注射制剂高剂量组 | 101010 | 2.87±0.662.14±0.42**1.86±0.35** |
注：与对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01。
由上述实验结果可以看出，本发明紫金龙注射制剂有很好的止血作用。
4、对大鼠血压的影响
SD大鼠乙醚麻醉后，仰卧位固定于木板上，腹部剪毛、消毒，腹正中切口，暴露腹腔脏器，挤出左侧肾脏，仔细剥离后，在肾门根部分离出肾动脉，用内径0.25-0.28mm自制银夹夹于根部造成部分狭窄，右侧同法处理，然后逐层关腹，并消毒创口。术后给予青霉素皮下注射，连续三天以预防感染。自由进食、饮水。术后每周无创法测血压1次，5-6周血压升高趋于稳定，以收缩压升高达到25.3kPa(190mmHg)以上者视为高血压。对大鼠用35％水合氯醛1ml/kg腹腔注射麻醉，固定，剪开颈部正中皮肤，分离肌肉，游离出左侧颈总动脉。结扎远心端，用动脉夹阻断近心端，插入动脉插管(导管内充满0.5％的肝素，抗凝血)，通过压力换能器与载波放大器和血压计数器连接，记录收缩压SAP和舒张压DAP；对侧颈静脉插管，与微量注射器相连。血压稳定10min，记录正常值，然后用微量注射器匀速静脉推注本发明紫金龙注射制剂1mg/kg及2mg/kg，观察给药后1、10、30分钟时的血压变化。实验结果见表6。
表6对大鼠血压的影响(X±S)
| 指标 | 时间(分钟) | |||
| 给药前 | 1 | 10 | 30 | |
| 低剂量组SAP高剂量组低剂量组DAP高剂量组 | 200.4±24.6198.8±27.5170.4±26.3167.2±19.8 | 196.7±25.6197.4±30.7165.6±22.6164.0±24.8 | 181.8±23.6*166.2±28.4**154.4±22.2*136.8±27.4** | 185.8±26.8*174.2±25.4**163.8±28.7151.4±21.3** |
注：与给药前比较：*P＜0.05，**P＜0.01。
由上述实验结果可以看出，本发明紫金龙注射制剂有很好的降压作用。
5、体内肿瘤生长抑制实验
选用昆明种雄性小鼠30只，18-22g。将接种后7天的H22瘤株荷瘤小鼠颈椎脱臼处死，在无菌条件下取出腹水，用生理盐水1∶3稀释，于腋窝皮下接种瘤液0.2ml。接种后24小时，将动物随机分为3组，每组10只。分组及给药剂量同上。每日1次，连续给药10天。末次给药后，颈椎脱臼处死动物，分别称体重、瘤重，计算肿瘤抑制率，进行疗效评价。
肿瘤生长抑制率(％)＝(对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％。实验结果见表7。
表7对小鼠肝癌H22生长的抑制作用(X±S)
| 组别 | 鼠只(只) | 瘤重(g) | 抑制率(％) |
| 对照组紫金龙注射制剂低剂量组紫金龙注射制剂高剂量组 | 101010 | 2.38±0.801.37±0.481.02±0.36 | -42.4**57.1** |
注：与对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01。
由上述实验结果可以看出，本发明紫金龙注射制剂有很好的抗癌作用。
五、制备实施例
实施例1
取紫金龙药材，粉碎成粗粉，加8倍量30％的pH3的盐酸乙醇溶液回流提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液用氢氧化钠溶液调节至中性后减压回收乙醇并浓缩成稠膏，加入30倍量饱和氢氧化钙水溶液，搅拌，用稀硫酸调节pH2，静置24小时，倾出上清液，过滤，滤液用氢氧化钠溶液调节pH值12，浓缩至相对密度为1.20，静置24小时，过滤，沉淀用pH4的盐酸水溶液溶解后，以5000转/分的速度离心30分钟，上清液过D101型大孔吸附树脂吸附，先用水洗至流出液近无色，再用6倍柱体积70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，加注射用水稀释至0.5g生药/ml，用截留分子量5000的超滤膜超滤，合并超滤液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到紫金龙提取物。
实施例2
取紫金龙药材，粉碎成粗粉，加8倍量60％的pH5的硫酸乙醇溶液回流提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液用氢氧化钾溶液调节至中性后减压回收乙醇并浓缩成稠膏，加入20倍量饱和氢氧化钙水溶液，搅拌，用稀硫酸调节pH4，静置24小时，倾出上清液，过滤，滤液用氢氧化钾溶液调节pH值10，浓缩至相对密度为1.20，静置24小时，过滤，沉淀用pH2的盐酸水溶液溶解后，以5000转/分的速度离心30分钟，上清液过AB-8型大孔吸附树脂吸附，先用水洗至流出液近无色，再用3倍柱体积90％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，加注射用水稀释至0.5g生药/ml，用截留分子量5000的超滤膜超滤，合并超滤液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到紫金龙提取物。
实施例3
取紫金龙药材，粉碎成粗粉，加8倍量40％的pH4的盐酸乙醇溶液回流提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液用氢氧化钠溶液调节至中性后减压回收乙醇并浓缩成稠膏，加入25倍量饱和氢氧化钙水溶液，搅拌，用稀硫酸调节pH3，静置24小时，倾出上清液，过滤，滤液用氢氧化钠溶液调节pH值11，浓缩至相对密度为1.20，静置24小时，过滤，沉淀用pH3的盐酸水溶液溶解后，以5000转/分的速度离心30分钟，上清液过NKA型大孔吸附树脂吸附，先用水洗至流出液近无色，再用4倍柱体积80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，加注射用水稀释至0.5g生药/ml，用截留分子量5000的超滤膜超滤，合并超滤液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到紫金龙提取物。
实施例4
取紫金龙药材，粉碎成粗粉，加8倍量50％的pH4.5的醋酸乙醇溶液回流提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液用氢氧化钾溶液调节至中性后减压回收乙醇并浓缩成稠膏，加入22倍量饱和氢氧化钙水溶液，搅拌，用稀硫酸调节pH3.5，静置24小时，倾出上清液，过滤，滤液用氢氧化钾溶液调节pH值11.5，浓缩至相对密度为1.20，静置24小时，过滤，沉淀用pH2.5的盐酸水溶液溶解后，以5000转/分的速度离心30分钟，上清液D101型过大孔吸附树脂吸附，先用水洗至流出液近无色，再用5倍柱体积75％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，加注射用水稀释至0.5g生药/ml，用截留分子量5000的超滤膜超滤，合并超滤液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到紫金龙提取物。
实施例5
取紫金龙药材，粉碎成粗粉，加8倍量45％的pH3.5的盐酸乙醇溶液回流提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液用氢氧化钠溶液调节至中性后减压回收乙醇并浓缩成稠膏，加入28倍量饱和氢氧化钙水溶液，搅拌，用稀硫酸调节pH2.5，静置24小时，倾出上清液，过滤，滤液用氢氧化钠溶液调节pH值10.5，浓缩至相对密度为1.20，静置24小时，过滤，沉淀用pH3.5的盐酸水溶液溶解后，以5000转/分的速度离心30分钟，上清液过D101型大孔吸附树脂吸附，先用水洗至流出液近无色，再用4倍柱体积85％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，加注射用水稀释至0.5g生药/ml，用截留分子量5000的超滤膜超滤，合并超滤液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到紫金龙提取物。
实施例6
称取紫金龙提取物2g，用注射用水溶解，调pH值为5.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每支2ml的水针制剂。
实施例7
称取紫金龙提取物3g，用注射用水溶解，加入氯化钠调等渗，调pH值为6.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每瓶100ml的输液制剂。
实施例8
称取紫金龙提取物3.5g，用注射用水溶解，加入葡萄糖调等渗，调pH值为6.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每瓶100ml的输液制剂。
实施例9
称取紫金龙提取物4g，用注射用水溶解，加入甘露醇，调pH值为5.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，干燥，制备成粉针制剂。
实施例10
称取紫金龙提取物3.2g，用注射用水溶解，加入右旋糖苷，调pH值为5.2，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成冻干粉针制剂。
实施例11
称取紫金龙提取物2.7g，用注射用水溶解，加入果糖，调pH值为5.7，用0.22μm微孔滤膜过滤，干燥，制备成粉针制剂。
实施例12
称取紫金龙提取物2.3g，用注射用水溶解，加入葡聚糖和果糖，调pH值为5.6，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成冻干粉针制剂。
实施例13
称取紫金龙提取物3.8g，用注射用水溶解，加入聚乙烯吡咯烷酮，调pH值为5.2，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成冻干粉针制剂。
Claims (7)
1、一种紫金龙注射制剂，其特征在于，它是以紫金龙提取物为活性成分的注射制剂；其特征还在于，紫金龙提取物中总生物碱的重量百分含量为95％-98.5％。
2、根据权利要求1所述的注射制剂，其特征在于，总生物碱中普罗托品的重量百分含量为40％-65％、异紫堇定的重量百分含量为25％-45％。
3、一种紫金龙注射制剂，其特征在于，其制备方法为：
(1)紫金龙提取物的制备
取紫金龙药材，粉碎成粗粉，加8倍量30％-60％的pH3-5的酸性乙醇溶液回流提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液用碱溶液调节至中性后减压回收乙醇并浓缩成稠膏，加入20-30倍量饱和氢氧化钙水溶液，搅拌，用稀硫酸调节pH2-4，静置24小时，倾出上清液，过滤，滤液用碱溶液调节pH值10-12，浓缩至相对密度为1.20，静置24小时，过滤，沉淀用pH2-4的盐酸水溶液溶解后，以5000转/分的速度离心30分钟，上清液过大孔吸附树脂吸附，先用水洗至流出液近无色，再用3-6倍柱体积70％-90％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，加注射用水稀释至0.5g生药/ml，用截留分子量5000的超滤膜超滤，合并超滤液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到紫金龙提取物。
(2)制剂制备
水针制剂的制备：称取紫金龙提取物2-4重量份用注射用水溶解，调pH值为5.0-6.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每支2ml的水针制剂。
输液制剂的制备：称取紫金龙提取物2-4重量份用注射用水溶解，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为5.0-6.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每瓶100ml的输液制剂。
粉针制剂的制备：称取紫金龙提取物2-4重量份用注射用水溶解，加入水溶性注射用赋形剂，调pH值为5.0-6.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，干燥，制备成粉针制剂。
4、根据权利要求2所述的注射制剂，其中所述的酸性乙醇中的酸为盐酸、硫酸或醋酸中的一种。
5、根据权利要求2所述的注射制剂，其中所述的碱溶液为氢氧化钠或氢氧化钾的水溶液。
6、根据权利要求2所述的注射制剂，其中所述的水溶性注射用赋形剂为甘露醇、右旋糖苷、果糖、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种。
7、权利要求1所述的紫金龙注射制剂具有消炎、镇痛、止血、降压、抗肿瘤作用。
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