CN100349601C - 一种主治关节炎的中成药及制备和质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
一种主治关节炎的中成药及制备和质量控制方法，具体涉及“追风透骨丸”和“追风透骨片”制备方法及质量控制方法的改进。采用白芷等8味用超临界CO2提取脂溶性提取物A，药渣B加制川乌、制草乌等11味药材用40～80%的乙醇液提取，所得的醇提液浓缩至稠膏，加制没药等4味药材的细粉，干燥、粉碎后和脂溶性提取物A混匀，得药物E，按常规的中药制剂工艺制成口服制剂，用高效液相色谱法测定，1g药物E干品中含赤芍以芍药苷计不得少于1.0mg。本发明产品的镇痛、抗炎作用优于原追风透骨丸和原追风透骨片，无朱砂和细辛挥发油的毒性，服用量可减至原制剂的1/3～1/5，患者的治疗的依从性大为提高。
Description
技术领域
本发明涉及一种由植物为原料的主治关节炎的医药配制品及制备和质量控制方法；具体涉及“追风透骨丸”和“追风透骨片”制备方法及质量控制方法的改进。
背景技术
收载于中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十八册和第十一册的治疗关节炎的中成药“追风透骨丸”和“追风透骨片”，它是由制川乌、白芷、制草乌、制香附、甘草、炒白术、制没药、麻黄、川芎、制乳香、秦艽、地龙、当归、茯苓、赤小豆、羌活、天麻、赤芍、细辛、防风、制天南星、桂枝、甘松、朱砂24味中药材制成，具有通经活络，祛风镇痛之功效，用于治疗风寒湿痹，肢节疼痛，肢体麻木等症，临床疗效显著。
“追风透骨丸”的原剂型为水蜜丸，采用传统制丸工艺，药材未经提取而直接以粉末入药，在制剂过程中加入大量的蜜糖制丸，再用朱砂包衣制成。长期以来存在吸收不完全、服用量大、携带不方便、易吸潮霉变、含糖量高，不适合糖尿病人服用等缺点。另外，产品采用朱砂包衣，朱砂含汞量高，长期服用可引起体内汞的蓄积，人体有汞蓄积中毒的危险；“追风透骨片”中仍含有朱砂，它是将朱砂粉碎成极细粉入药，细辛提取挥发油入药，其余22味是用水提物入药制成的片剂，现有资料显示，细辛挥发油有毒，不宜提取入药。
据文献“谢伟，陆满文.细辛挥发油的化学与药理作用.宁夏医学杂志，1995，17(2)：121-124”和文献“柯铭清.中草药有效成分理化与药理特性.湖南科学技术出版社.1982：108”报道：
细辛入药的主要品种有辽细辛和华细辛，其中以辽细辛的来源丰富、产量大。细辛挥发油的主要成分为甲基丁香酚和黄樟醚。其挥发油毒性：辽细辛油对蛙、小鼠、家兔等均先呈兴奋，随后转入抑制，随意运动及呼吸减慢，反射消失，最后因呼驳麻痹而死亡。辽细辛油的小鼠ip LD50为1.02±0.04ml/kg。未成年大鼠ip辽细辛油18日，于末次给药后24小时及1周断头处死。其生化学检查及病理切片检查结果与对照组之间无明显差异。华细辛油的小鼠ip MLD为200mg/kg，LD50为247mg/kg。
黄樟醚具有使动物呼吸中枢麻痹及致癌作用。饲料中混入1％黄樟醚2年后，可使28％大鼠发生肝癌。
因此，为了提高药物的疗效，降低药物的毒性，有必要改进原追风透骨丸和原追风透骨片的处方和制备方法。
发明内容
本发明的目的是为了克服上述不足，提供一种疗效确切、安全可靠、服用量小、携带方便的追风透骨丸和追风透骨片换代产品，包括胶囊、片剂、浓缩丸等剂型，本发明的另一个目的是提供该产品的制备方法和质量控制方法。
为达到本发明的目的，所采用的技术方案是：
一种主治关节炎的中成药，是由下列重量百分比药材量制成，将白芷、麻黄、川芎、当归、羌活、防风、桂枝、甘松8味用超临界CO2萃取法提取脂溶性提取物A；然后将这8味药材提取脂溶性部位后的药渣B，加制川乌、制草乌、制香附、甘草、炒白术、秦艽、地龙、茯苓、天麻、细辛、制天南星11味药材一起用40～80％的乙醇溶液提取，所得的醇提物浓缩至稠膏为C；制没药、制乳香、赤小豆、赤芍4味药材粉碎成细粉，与稠膏C混合均匀，干燥、粉碎后得干膏粉D；干膏粉D和脂溶性提取物A混匀，得药物E，按常规的中药制剂工艺制成口服制剂，用高效液相色谱法测定，1g药物E干品中含赤芍以芍药苷(C23H23O11)计不得少于1.0mg。
处方：制川乌 5.21％ 白芷 5.21％ 制草乌 5.21％
制香附 5.21％ 甘草 5.21％ 炒白术 2.60％
制没药 1.05％ 麻黄 5.21％ 川芎 5.21％
制乳香 2.60％ 秦艽 2.60％ 地龙 5.21％
当归 2.60％ 茯苓 10.42％ 赤小豆 5.21％
羌活 5.21％ 天麻 2.60％ 赤芍 5.21％
细辛 5.21％ 防风 2.60％ 制天南星 5.21％
桂枝 2.60％ 甘松 2.60％
为了服用携带方便和适合于临床使用，所述的口服制剂可以是胶囊剂、片剂、浓缩丸。
为达到本发明的另一个目的，提供该产品的制备方法，按如下步骤制备：
步骤一：取处方量的白芷、麻黄、川芎、当归、羌活、防风、桂枝、甘松，置超临界萃取设备中，用CO2流体作为萃取介质，萃取条件为：萃取压力为24～30MPa，萃取温度为40～60℃，解析压力为5～7MPa，解析温度为30～50℃，萃取时间为1～3小时，从解析釜得到脂溶性提取物A，从萃取釜得到药渣B；
步骤二：将步骤一得到的药渣B，与处方量的药材：制川乌、制草乌、制香附、甘草、炒白术、秦艽、地龙、茯苓、天麻、细辛、制天南星，用40～80％的乙醇溶液提取1～3次，每次0.5～3小时，合并提取醇溶液，滤过，浓缩得稠膏C；
步骤三：取处方量的药材：制没药、制乳香、赤小豆、赤芍，粉碎成细粉，与稠膏C混合均匀，干燥、粉碎后得干膏粉D；
步骤四：取干膏粉D与脂溶性提取物A混匀，得药物E；
步骤五：取药物E，按常规的中药制剂工艺制成口服制剂。
其口服制剂可采用常规的中药制剂工艺制备，如取药物E，加入药用辅料，经制粒或不经制粒直接灌装胶囊，制成胶囊剂；
或取药物E，加入药用辅料，经制粒，压制成片剂；
或取药物E，加入药用辅料，用塑制法或泛制法制成浓缩丸。
本发明的产品及其制备方法是发明者采用正交试验法，通过药效学筛选获取的，试验如下：
1、确定提取条件的正交试验
取处方量的药材：制川乌、制草乌、制香附、甘草、炒白术、秦艽、地龙、茯苓、天麻、细辛、制天南星等11味，与超临界萃取后的药渣B混合，采用正交试验法，以镇痛、抗炎药效学指标筛选提取溶剂、溶剂用量、提取时间、提取次数及粉碎度。正交表选取L16(4)5表，因素水平见表1。
表1提取因素水平表
| 因素水平 | 乙醇浓度(％)A | 提取时间(h)B | 溶剂用量(倍)C | 粉碎度D | 提取次数(次)E |
| 1234 | 0406080 | 0.511.52 | 57911 | φ0.6cm最粗粉粗粉中粉 | 1234 |
2供试品的制备
按处方比例称取药材，桂枝25g、白芷50g、麻黄50g、川芎50g、当归25g、羌活50g、防风25g、甘松25g，粉碎成粗粉，经CO2超临界萃取，萃取条件为：萃取压力26Mpa，萃取温度40℃，解析压力6Mpa，解析温度30℃，萃取时间为3小时。另称取制川乌50g、制草乌50g、制香附50g、甘草50g、炒白术25g、秦艽25g、地龙50g、茯苓100g、天麻25g、细辛50g、制天南星50g，按下表7中16组条件粉碎成不同细度，与超临界提取后的药渣B混合，按下表7中16组不同条件分别提取，滤过，合并滤液，静置12小时，取上清液，60℃减压回收乙醇并浓缩至稠膏状，备用。制没药10g、制乳香25g、赤小豆50g、赤芍50g粉碎成细粉，加入上述稠膏中，混匀，60℃下减压干燥，粉碎成细粉。超临界萃取物用适量乙醇溶解，喷入上述干膏粉中，混匀，即得16组供试品。
3正交试验各组供试品的药效学试验
所筛选药物是临床用于治疗关节炎的有效方药，根据其适应症我们选择了镇痛的2个指标：①对醋酸所致小鼠扭体反应的影响②对小鼠热板法所致疼痛作用的影响；以及抗炎的3个指标：①对尿酸钠(MSU)诱发大鼠足肿胀的影响②对大鼠棉球肉芽肿的影响③对二甲苯所致小鼠耳肿胀试验的影响。通过上述5个指标对正交试验各组样品进行了药效学试验。
3.1试验材料与剂量
3.1.1药品与试剂
追风透骨丸为阳性对照药品；冰醋酸，0.6％醋酸(由冰醋酸配成)；消炎痛，25mg/片；戊巴比妥钠；肝素钠注射液；0.9％氯化钠注射液，500ml/瓶；尿酸(Lancaster)25g/瓶，Morecambe.England，Batch：10057758；注射用青霉素钠，80万单位/只。
3.1.2动物
Wistar大鼠，体重140±30g，昆明种小鼠，体重20±2g，
3.1.3剂量的选择
原追风透骨丸及原追风透骨片的人临床剂量为4g生药量/次，2次/日。正交试验各组样品以得膏量与投料药材量作相应换算，与原制剂服用生药量相等。选择大剂量组进行实验，小鼠中剂量相当于人临床剂量的9.01倍，常用按10倍计算；大鼠中剂量，相当于人临床剂量的6.25倍，常用按7.5倍计算。在此基础之上，大剂量小鼠提高至20倍，大鼠提高至15倍。一天两次的剂量作一次给药。
3.2方法与结果
3.2.1镇痛试验
(1)对醋酸所致小鼠扭体反应的影响
取小白鼠，按体重随机分18组，每组10只，筛选药物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16剂量分别为0.76、1.16、1.28、1.48、1.00、1.00、1.00、0.88、0.96、1.00、0.79、0.75、0.92、0.88、0.92、0.88g/kg(即g干膏/kg动物，以下相同)；17组为生理盐水对照组。各组均等容积0.4ml/只灌胃给药7天，末次给药30min后，各鼠分别腹腔注射0.6％HAC0.2ml/只，观察各鼠产生扭体潜伏期、15min内扭体次数及产生扭体反应的小鼠数，计算镇痛百分率。结果见表2。
镇痛百分率(％)＝(NS对照组扭体数-给药组扭体数)/NS对照组扭体数×100％
表2对醋酸所致小鼠扭体反应的影响(x±s，n＝10)
| 组别 | 药物及剂量(g/kg) | 鼠数(只) | 潜伏期(s) | 扭体次数(n) | 镇痛百分率(％) |
| 12345678910111213141516生理盐水(NS) | 0.761.161.281.481.001.001.000.880.961.000.790.750.920.880.920.880.4ml/只 | 1010101010101010101010101010101010 | 158.8±46.74131.8±67.68177.6±47.11243.6±125.06273.8±123.99236.7±108.48265.8±143.88*243±93.72259±88.75240.6±67.82224.5±30.41342.5±146.50**247±41.16118.1±92.37180±64.35*237.9±68.76253.5±45.78 | 19.9±16.8024.5±13.2722.2±7.7416.6±9.5414.9±10.0916.5±7.9914.2±9.07*19.4±9.4018.1±8.1219.5±7.2520.2±4.669.1±8.56**22.7±11.4026.5±11.5516.5±7.89*23.2±15.7224.4±7.26 | 18.44-0.419.0231.9738.9332.3841.820.4925.8220.0817.2162.706.97-8.6132.384.92-- |
注：与生理盐水对照组比*P＜0.05，**P＜0.01
由表可知，筛选药物7、12、15组能减少扭体次数，延长产生疼痛反应的潜伏期，与阴性对照组比有显著性差异(P＜0.05)。
(2)对小鼠热板法所致疼痛作用的影响
①取雌性小鼠在22℃室温条件下，开启热板式镇痛实验仪，将温度定于(55±0.5)℃，预热10min，然后每次投入1只小鼠记录小鼠自投入至出现痛反应(舔后足)的时间，共测2次，每次间隔5min，求平均值(以平均值不超过30s为合格)。
②筛选合格小鼠190只，分18组，筛选药物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16(0.76、1.16、1.28、1.48、1.00、1.00、1.00、0.88、0.96、1.00、0.79、0.75、0.92、0.88、0.92、0.88g/kg)，17组为生理盐水对照组。各组均等容积0.4ml/只灌胃给药，给药后30、45、60、90、120min同前测定痛反应时间2次，求平均值。若小鼠60s仍无痛反应，则停止测试，按60s计算，实验结束后按不同时间所测得之痛阈平均值，计算痛阈提高百分率。结果见表3。
痛阈提高百分率＝(用药后平均痛阈值-用药前平均痛阈值)/用药前平均痛阈值×100％
表3对小鼠热板法所致疼痛作用的影响(x±s，n＝10)
| 组别 | 剂量(g/kg | 药前(s) | 痛阈提高百分率(％) | ||||
| 30min | 45min | 60min | 90min | 120min | |||
| 12345678910 | 0.761.161.281.481.001.001.000.880.961.00 | 15.48±3.8912.89±2.3514.52±3.7416.47±0.1817.72±7.031.71±3.1714.35±2.5015.05±3.5315.62±4.2616.54± | -23.58±21.69-14.51±41.3-34.15±26.13-32.66±20.65-49.09±12.06-49.09±30.63-1.38±46.2-24.07±33.6710.83±33.68-1.53± | -7.36±37.334.58±43.390.17±38.41-11.94±44.47-41.89±22.96-41.89±35.08-16.41±41.96-24.63±36.0217.24±44.5-18.02± | -13.82±32.820.93±27.28-26.23±30.02-2.05±72.78-31.29±45.47-31.29±36.4515.63±93.53-11.61±51.6129.09±68.54-18.02± | 1.58±33.14113.30±156.49-32.23±23.014.71±74.47-5.67±42.59-5.67±37.5846.05±69.8511.22±47.0339.51±62.793.64± | 1.39±61.08103.93±95.26*-5.97±54.658.13±83.01-0.97±50.75-0.97±63.4434.39±59.172.13±105.3767.74±79.8316.19± |
| 111213141516生理盐水(NS) | 0.790.750.920.880.920.880.4ml/只 | 3.4215.67±5.4816.94±3.1317.33±2.6918.51±4.9016.56±2.0216.35±4.0917.10±5.14 | 34.83-10.3±29.013.82±32.33-6.12±34.26-3.43±37.06-16.69±22.14-4.68±38.7511.32±48.72 | 25.4317.67±45.062.03±35.98-4.37±27.05-22.17±17.28-13.94±26.19-9.34±48.781.56±54.98 | 28.6215.57±32.792.76±40.973.51±47.33-14.5±17.44-12.91±42.89-1.34±71.9-3.47±30.16 | 33.1529.52±43.7359.37±75.394.26±36.281.73±22.527.08±48.2430.75±38.6960.42±123.8 | 45.2355.84±66.5979.52±54.96*26.22±48.265.46±52.4118.43±52.4253.32±92.7817.67±60.2 |
注：与生理盐水对照组比*P＜0.05，**P＜0.01
由以上热板实验结果可知，筛选药物2、12组镇痛作用均于给药后120min出现，小鼠疼痛反应时间及痛阈提高百分率与生理盐水组比有显著性差异(P＜0.05)。
3.3.2.2药物抗炎作用试验
(1)对尿酸钠(MSU)诱发大鼠足肿胀的影响
微晶型尿酸钠(MSU)的制备：取8g尿酸置于1600ml沸水中，调pH至7.4，再加热至95℃，室温冷却并轻轻搅拌，过滤，得到微晶尿酸钠，高温(200℃)灭菌。用前以无菌生理盐水配成100mg/ml的混悬液。
取雄性大鼠190只，按体重随机分18组，每组10只，筛选药物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16(0.57、0.87、0.96、1.11、0.75、0.75、0.75、0.66、0.72、0.75、0.59、0.56、0.69、0.66、0.69、0.66g/kg)，17组为生理盐水对照组。各组等容积3ml/只，均为致炎前灌胃给药7天。末次给药1小时后致炎，无菌操作，给大鼠右后足跖皮下注射MSU(100mg/ml)、0.1ml/只，采用大鼠足爪容积测定法测定致炎前和致炎后不同时间(每小时1次，连续5～6次)大鼠足爪容积变化，以致炎前、后足爪容积的差值作为肿胀度，计算各肿胀度及肿胀抑制率，并作t检验。结果见表4。
肿胀率(％)＝(致炎后足跖容积-致炎前足跖容积)/致炎前足跖容积×100％
肿胀抑制率(％)＝(对照组平均肿胀率-给药组平均肿胀率)/对照组平均肿胀率×100％
表4对MSU诱导大鼠足肿胀的影响(x±s，n＝10)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 致炎前足趾容积(ml) | 足容积差(ml) | 3h肿胀抑制率(％) | ||||
| 1h | 2h | 3h | 4h | 5h | ||||
| 12345678910111213141516生理盐水(NS) | 0.570.870.961.110.750.750.750.660.720.750.590.560.690.660.690.663ml/只 | 1.14±0.201.12±0.121.12±0.101.08±0.241.10±0.131.01±0.121.05±0.181.10±0.161.20±0.111.12±0.891.34±0.191.14±0.171.03±0.191.15±0.171.07±0.231.12±0.181.21±0.13 | 0.22±0.190.30±0.180.38±0.160.35±0.160.39±0.220.33±0.180.29±0.200.38±0.260.36±0.200.31±0.130.31±0.220.42±0.320.40±0.160.36±0.230.43±0.330.44±0.210.29±0.15 | 0.39±0.210.33±0.240.45±0.150.42±0.110.43±0.170.27±0.230.46±0.180.50±0.320.31±0.150.36±0.220.32±0.360.39±0.290.49±0.200.28±0.150.45±0.290.31±0.170.29±0.12 | 0.37±0.170.20±0.11*0.22±0.230.30±0.190.40±0.210.43±0.250.45±0.260.51±0.350.31±0.160.37±0.110.33±0.230.19±0.13*0.37u±0.210.27±0.190.46±0.220.39±0.150.37±0.18 | 0.39±0.200.34±0.280.43±0.180.49±0.270.43±0.210.38±0.150.36±0.140.45±0.260.36±0.140.45±0.130.29±0.12*0.24±0.18*0.47±0.200.48±0.090.36±0.300.31±0.230.41±0.11 | 0.48±0.240.36±0.210.55±0.150.60±0.250.46±0.240.55±0.190.56±0.220.51±0.400.45±0.220.50±0.150.42±0.180.46±0.220.57±0.210.34±0.260.55±0.230.52±0.270.41±0.19 | 4.2147.342.0318.02-7.32-25.65-26.48-36.8323.762.527.3248.22-6.0230.71-26.87-2.77-- |
注：与生理盐水对照组比*P＜0.05，**P＜0.01
由以上结果可知，筛选药物2、12组在致炎后3h即出现作用，11组4h出现作用，足肿胀度明显减小，肿胀抑制率也明显升高，与对照组比有非常显著性差异(P＜0.05)，特别是12组3h时出现作用，作用维持至4h仍较明显(P＜0.05)，说明筛选药物2、11、12可对抗MSU引起的炎症反应。
(2)对大鼠棉球肉芽肿的影响
取雄性大鼠190只，按体重随机分19组，每组10只，筛选药物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16(0.57、0.87、0.96、1.11、0.75、0.75、0.75、0.66、0.72、0.75、0.59、0.56、0.69、0.66、0.69、0.66g/kg)，17组为生理盐水对照组。各组均等容积灌胃给药3ml/只。乙醚浅麻醉，无菌操作，将两个脱脂棉球分别植入大鼠两侧腋窝皮下，棉球形状应和植入部位一样。
大鼠术前灌胃给药3天，术后再连续给药7天，第8天脱臼处死大鼠，取出棉球，置60℃烤箱烤至恒重，减去棉球原重量，即为肉芽肿重量，肉芽肿重量以g表示，比较各组肉芽肿重量，并计算抑制率，结果见表5。
肿胀率＝(致炎后足跖容积-致炎前足跖容积)/致炎前足跖容积×100％
肿胀抑制率＝(对照组平均肿胀率-给药组平均肿胀率)/对照组平均肿胀率×100％
| 组别 | 鼠数(只) | 剂量(g/kg) | 肉芽肿重量(g) | 肿胀抑制率(％) |
| 12345678910111213141516生理盐水(NS) | 1010101010101010101010101010101010 | 0.570.870.961.110.750.750.750.660.720.750.590.560.690.660.690.663ml/只 | 0.042±0.0110.045±0.0220.041±0.0150.037±0.0160.036±0.0180.039±0.0150.038±0.0200.038±0.0200.038±0.0110.039±0.0120.035±0.0190.034±0.013*0.044±0.0190.037±0.0110.032±0.010**0.035±0.0160.042±0.019 | 0-7.142.3811.914.297.149.529.529.527.1416.6719.05-4.7611.923.8116.67-- |
注：与生理盐水对照组比*P＜0.05，**P＜0.01
由以上结果可知，筛选药物12(P＜0.05)、15(P＜0.01)能明显抑制肉芽肿生长，与阴性对照组比有显著性差异。
(3)对二甲苯所致小鼠耳肿胀试验的影响
取昆明种小白鼠190只，按体重随机分19组，每组10只，筛选药物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16剂量分别为0.76、1.16、1.28、1.48、1.00、1.00、1.00、0.88、0.96、1.00、0.79、0.75、0.92、0.88、0.92、0.88g/kg；17组为生理盐水对照组。各组均等容积(0.4ml/只)灌胃给药7天，末次给药0.5小时后，将二甲苯涂于小鼠右耳前后两面，50ul/只，2h后将小鼠颈椎脱臼处死，沿耳廓基线剪下两耳，用9mm打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重，计算肿胀抑制率。结果见表6。
肿胀度＝(右耳片重量-左耳片重量)/左耳片重量×100％
肿胀率＝(对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/对照组平均肿胀度×100％
肿胀抑制率＝(对照组平均肿胀率-给药组平均肿胀率)/对照组平均肿胀率×100％
表6对二甲苯致小鼠耳肿胀度的影响(x±s，n＝10)
| 组别 | 鼠数(只) | 剂量(g/kg) | 肿胀度(g) | 肿胀率(％) | 肿胀抑制率(％) |
| 12345678910111213141516生理盐水 | 1010101010101010101010101010101010 | 0.761.161.281.481.001.001.000.880.961.000.790.750.920.880.920.880.4ml/只 | 0.014±0.0060.008±0.006*0.017±0.0060.014±0.0050.013±0.0070.012±0.0050.013±0.0060.014±0.0060.011±0.0040.009±0.004*0.012±0.0060.014±0.0060.016±0.0060.011±0.0050.014±0.0040.014±0.0040.015±0.003 | 87.08±44.1256.98±35.23*113.37±44.9694.15±35.6279.63±42.4375.58±33.0186.14±46.0888.21±50.9474.38±34.8660.46±29.36*76.6±36.7889.24±42.09111.99±57.5376.27±38.3990.63±33.5181.93±28.3291.04±27.61 | 4.3537.41-24.53-3.4212.5316.985.383.1118.333.5915.861.98-23.0116.220.4510.01-- |
注：与生理盐水对照组比*P＜0.05，**P＜0.01
由以上结果可知，筛选药物2、10组能明显抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀、提高肿胀抑制率，与生理盐水组比有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)。
4药效学试验结果分析
根据以上5种指标的药效学试验数据，采用综合评价法对正交试验各组结果进行统计分析。各指标的权重系数均取0.2，总分为100分，所得5种指标得分相加，得各组综合评分，结果见表7。计算公式如下：
(1)镇痛指标：
扭体镇痛百分率评分＝(20/最大镇痛百分率)×各组镇痛百分率
2h痛阈提高百分率评分＝(20/最大镇痛提高百分率)×各组痛阈提高百分率
(2)抗炎指标(3种指标计算方法相同，其中MSU模型取3h结果)：
肿胀抑制率评分＝(20/最大肿胀抑制率)×各组肿胀抑制率
表7提取正交试验结果
从极差R的大小可知，各因素对药效结果的影响程度依次为A＞C＞E＞B＞D。根据K值的大小进行直观分析，确定最佳工艺为A3B4C2D1E2，即药材粉碎成通过φ0.6cm筛网的粗粒(D1)，与超临界提取后的药渣混合后，加7倍量(C2)60％乙醇(A3)提取2次(E2)，每次2小时(B4)。
5本发明的产品与原追风透骨丸、原追风透骨片的药效学比较
为了考察优选工艺的合理性与重复性，根据优选工艺制备了三批产品(药物E)，分别进行了上述5种指标的药效学试验，并与原追风透骨丸及追风透骨片进行了药效学比较，结果见表8。
表8本发明的产品与原追风透骨丸、原追风透骨片的药效学比较结果
| 样品 | 扭体镇痛百分率(％) | 热板2h痛阈提高百分率(％) | MSU3h肿胀抑制率(％) | 肉芽肿胀抑制率(％) | 二甲苯耳肿胀抑制率(％) |
| 123平均值原追风透骨丸原追风透骨片 | 74.13**66.43*63.99*68.1838.1160.42* | 88.52*77.36*82.60*82.8361.4958.31 | 50.00*57.32**52.44**53.2529.27*40.80* | 54.89**38.46*21.7038.3515.0010.78 | 15.90*5.21*12.46*11.193.757.34 |
注：与生理盐水对照组比较*P＜0.05；**P＜0.01
将三批产品药效结果的平均值与正交试验各组试验比较可知，扭体镇痛百分率、MSU 3h肿胀抑制率、肉芽肿胀抑制率均优于正交试验各组结果，热板2h痛阈提高百分率在各组结果中列第二，二甲苯耳肿胀抑制率处于中上水平。与原追风透骨丸和原追风透骨片组比较，本发明产品的各项指标均优于该二组结果。
结果表明：
1、本发明的制备方法合理，产品的镇痛、抗炎作用优于原工艺制备的追风透骨丸。
2、采用乙醇溶液提取优于水提，治疗效果优于追风透骨片；
3、采用60％乙醇溶液提取效果最佳。
本发明的另一个目的是提供该产品的质量控制方法：
采用高效液相色谱法测定，1g药物E干品中含赤芍以芍药苷(C23H23O11)计不得少于1.0mg。其色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，体积浓度为15～30％的甲醇水溶液为流动相，检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备：精密称定芍药苷对照品，加乙醇或甲醇溶液制成每1ml含0.06mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇或甲醇溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用乙醇或甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明的有益效果：
1、本发明的制备方法合理，产品的镇痛、抗炎作用优于原工艺制备的追风透骨丸和追风透骨片。
2、产品中无朱砂和细辛的挥发油成分，避免了汞蓄积中毒的危险及细辛挥发油的毒性，保证了临床用药的安全性，因此临床安全性高于原追风透骨丸及原追风透骨片。
3、由于在制剂过程中不加蜜糖，糖尿病人服用不会导致血糖增高，因此较原追风透骨丸扩大了适用人群。
4、原追风透骨丸服用剂量为每次6g、每日2次，按新工艺制备的胶囊、片剂、浓缩丸的每次服用剂量为1.2～2g，每日服用次数不变，因此服用量可减至原制剂的1/3～1/5，患者的治疗的依从性大为提高。
5、本发明中增加了芍药苷的含量测定，芍药苷为本品处方中赤芍的主要有效成分，具有解热、镇痛、抗炎、抗溃疡等药理作用，与本品的疗效密切相关。因此增加该成分的含量测定有利于控制本品的质量，从而较原追风透骨丸和原追风透骨片提高了产品的质量标准。
附图说明
图1为制备本发明产品的工艺流程简图。
下面通过实施例进一步阐述本发明的技术方案。
具体实施方式
实施例1：(见图1)
称取白芷2832g、麻黄2832g、川芎2832g、当归1416g、羌活2832g、防风1416g、桂枝1416g、甘松1416g，采用CO2超临界萃取，萃取条件为：萃取压力为24MPa，萃取温度为40℃，解析压力为5MPa，解析温度为30℃，萃取时间为3小时。得692g脂溶性提取物A及药渣B 15.87kg备用；称取制川乌2832g、制草乌2832g、制香附2832g、甘草2832g、炒白术1416g、秦艽1416g、地龙2832g、茯苓5660g、天麻1416、细辛2832g、制天南星2832g，与超临界萃取所余药渣B混合，采用60％乙醇溶液提取，乙醇用量为药材量的7倍，提取时间为2小时，提取2次，提取液滤过，减压浓缩至稠膏C，相对密度为1.26(50℃)；称取制没药568g、制乳香1416g、赤小豆2832g、赤芍2832g粉碎成细粉，与上述稠膏C混合，干燥，粉碎后得干膏粉D，干膏粉D和脂溶性提取物A混匀，得药物E 15.24kg，照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定芍药苷的含量：
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；21％甲醇水溶液为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算为2020；
对照品溶液的制备：取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36小时的芍药苷对照品，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含0.06mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：精密称取本品1.0324g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，得药物E的芍药苷平均含量为1.18mg/g。
实施例2：
称取白芷283.2g、麻黄283.2g、川芎283.2g、当归141.6g、羌活283.2g、防风141.6g、桂枝141.6g、甘松141.6g，采用CO2超临界萃取，萃取条件为：萃取压力为30MPa，萃取温度为60℃，解析压力为7MPa，解析温度为50℃，萃取时间为1小时。得63.1g脂溶性提取物A及药渣B 1.54kg备用；称取制川乌283.2g、制草乌283.2g、制香附283.2g、甘草283.2g、炒白术141.6g、秦艽141.6g、地龙283.2g、茯苓566.0g、天麻141.6、细辛283.2g、制天南星283.2g，与超临界萃取所余药渣B混合，采用40％乙醇溶液提取，乙醇用量为药材量的8倍，提取时间为0.5小时，提取3次，提取液滤过，减压浓缩至稠膏C，相对密度为1.26(50℃)；称取制没药56.8g、制乳香141.6g、赤小豆283.2g、赤芍283.2g粉碎成细粉，与上述稠膏C混合，干燥，粉碎后得干膏粉D，干膏粉D和脂溶性提取物A混匀，得药物E 1.48kg，照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定芍药苷的含量：
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；30％甲醇水溶液为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算为2250；
对照品溶液的制备：取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36小时的芍药苷对照品，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含0.06mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：精密称取本品1.0235g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，得药物E的芍药苷平均含量为1.25mg/g。
实施例3：
称取白芷1416g、麻黄1416g、川芎1416g、当归708g、羌活1416g、防风708g、桂枝708g、甘松708g，采用CO2超临界萃取，萃取条件为：萃取压力为27MPa，萃取温度为50℃，解析压力为6MPa，解析温度为40℃，萃取时间为2小时。得352g脂溶性提取物A及药渣B 7.95kg备用；称取制川乌1416g、制草乌1416g、制香附1416g、甘草1416g、炒白术708g、秦艽708g、地龙1416g、茯苓2830g、天麻708、细辛1416g、制天南星1416g，与超临界萃取所余药渣B混合，采用80％乙醇溶液提取，乙醇用量为药材量的5倍，提取时间为3小时，提取1次，提取液滤过，减压浓缩至稠膏C，相对密度为1.26(50℃)；称取制没药284g、制乳香708g、赤小豆1416g、赤芍1416g粉碎成细粉，与上述稠膏C混合，干燥，粉碎后得干膏粉D，干膏粉D和脂溶性提取物A混匀，得药物E 7.50kg，照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定芍药苷的含量：
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；25％甲醇水溶液为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算为2340；
对照品溶液的制备：取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36小时的芍药苷对照品，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含0.06mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：精密称取本品1.0013g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，得药物E的芍药苷平均含量为1.12mg/g。
实施例4：
将实施例1所述的药物E，经以下工艺制成不同制剂：
(1)胶囊剂：取3.81kg药物E，加入微粉硅胶390g，混匀，制粒，灌装胶囊，制成10000粒，每粒装0.42g，测得芍药苷为0.41mg/粒。
(2)浓缩丸(塑制法)：取3.81kg药物E，加入适量微粉硅胶300g、羧甲基淀粉钠100g，混匀，采用塑制法，以乙醇溶液制软材，压丸条，干燥，包衣，制成45000丸，每丸重0.1g，测得芍药苷含量为1.03mg/g。
(3)浓缩丸(泛制法)：取3.81kg药物E，加入适量微粉硅胶300g、羧甲基淀粉钠100g，混匀，以水或乙醇溶液泛丸，干燥，包衣，制成45000丸，每丸重0.1g，测得芍药苷含量为1.06mg/g。
(4)取3.81kg药物E，加入适量微粉硅胶400g、羧甲基淀粉钠150g，混匀，制粒，压片，包衣，制成10000片。每片重0.45g，测得芍药苷含量为0.43mg/粒。
Claims (5)
1.一种主治关节炎的中成药，其特征在于由下列重量百分比的药材制备而成：
制川乌 5.21％ 白芷 5.21％ 制草乌 5.21％
制香附 5.21％ 甘草 5.21％ 炒白术 2.60％
制没药 1.05％ 麻黄 5.21％ 川芎 5.21％
制乳香 2.60％ 秦艽 2.60％ 地龙 5.21％
当归 2.60％ 茯苓 10.42％ 赤小豆 5.21％
羌活 5.21％ 天麻 2.60％ 赤芍 5.21％
细辛 5.21％ 防风 2.60％ 制天南星 5.21％
桂枝 2.60％ 甘松 2.60％
将白芷、麻黄、川芎、当归、羌活、防风、桂枝、甘松8味药材用超临界CO2萃取法提取脂溶性提取物A；然后将这8味药材提取脂溶性部位后的药渣B，加制川乌、制草乌、制香附、甘草、炒白术、秦艽、地龙、茯苓、天麻、细辛、制天南星11味药材一起用40～80％的乙醇溶液提取，所得的醇提液浓缩至稠膏为C；制没药、制乳香、赤小豆、赤芍4味药材粉碎成细粉，与稠膏C混合均匀，干燥、粉碎后得干膏粉D；干膏粉D和脂溶性提取物A混匀，得药物E，按常规的中药制剂工艺制成口服制剂，用高效液相色谱法测定，1g药物E干品中含赤芍以芍药苷计不得少于1.0mg。
2.如权利要求1所述的主治关节炎的中成药，其特征在于所述的口服制剂是胶囊剂、片剂、浓缩丸。
3.一种制备权利要求1所述的中成药的方法，其特征在于由下列重量百分比药材按如下步骤制备：
制川乌 5.21％ 白芷 5.21％ 制草乌 5.21％
制香附 5.21％ 甘草 5.21％ 炒白术 2.60％
制没药 1.05％ 麻黄 5.21％ 川芎 5.21％
制乳香 2.60％ 秦艽 2.60％ 地龙 5.21％
当归 2.60％ 茯苓 10.42％ 赤小豆 5.21％
羌活 5.21％ 天麻 2.60％ 赤芍 5.21％
细辛 5.21％ 防风 2.60％ 制天南星 5.21％
桂枝 2.60％ 甘松 2.60％
步骤一：取白芷、麻黄、川芎、当归、羌活、防风、桂枝、甘松，置超临界萃取设备中，用CO2流体作为萃取介质，萃取条件为：萃取压力为24～30Mpa，萃取温度为40～60℃，解析压力为5～7Mpa，解析温度为30～50℃，萃取时间为1～3小时，从解析釜得到脂溶性提取物A，从萃取釜得到药渣B；
步骤二：将步骤一得到的药渣B，与药材：制川乌、制草乌、制香附、甘草、炒白术、秦艽、地龙、茯苓、天麻、细辛、制天南星，用40～80％的乙醇溶液提取1～3次，每次0.5～3小时，合并提取醇溶液，滤过，浓缩得稠膏C；
步骤三：取药材：制没药、制乳香、赤小豆、赤芍，粉碎成细粉，与稠膏C混合均匀，干燥，粉碎后得干膏粉D；
步骤四：取干膏粉D与脂溶性提取物A混匀，得药物E；
步骤五：取药物E，按常规的中药制剂工艺制成口服制剂。
4.如按权利要求3所述的中成药的制备方法，其特征在于所述的步骤五：
取药物E，加入药用辅料，经制粒或不经制粒直接灌装胶囊，制成胶囊剂；
或取药物E，加入药用辅料，经制粒，压制成片剂。
或取药物E，加入药用辅料，用塑制法或泛制法制成浓缩丸。
5.一种如权利要求1所述的药物E的质量控制方法，其特征在于高效液相色谱法的色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，用体积浓度为15～30％的甲醇水溶液作流动相，检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备：精密称定芍药苷对照品，加乙醇或甲醇溶液制成每1ml含0.06mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇或甲醇溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用稀乙醇或甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
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