CN1413249A - 人乙酰肝素酶相关多肽和核酸 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及新鉴定的多核苷酸和由该多核苷酸编码的多肽、这种多肽的用途及这种多核苷酸和多肽的生产。更具体地，本发明多肽为乙酰肝素酶相关的内切葡糖醛酸酶(endoglucuronidase)。本发明也涉及含有本发明多核苷酸的载体和宿主细胞。此外，本发明涉及针对本发明所述多肽的抗体和含有该抗体、多肽或多核苷酸的药物组合物和诊断试剂。本发明也涉及改变、修饰或以其它方式调节该乙酰肝素酶相关的内切葡糖醛酸酶在细胞或生物体中表达水平的方法。本发明另一方面为适于鉴别该多肽的调节剂例如激动剂或拮抗剂的分析系统。

Description

人乙酰肝素酶相关多肽和核酸
发明领域
本发明涉及新鉴定的多核苷酸和由该多核苷酸编码的多肽、多肽的用途及该多核苷酸和多肽的产生。更具体地，本发明多肽为乙酰肝素酶(heparanase)相关的内切葡糖醛酸酶(endoglucuronidase)。本发明也涉及含有本发明多核苷酸的载体和宿主细胞。此外，本发明涉及针对本发明所述多肽的抗体和含有该抗体、多肽或多核苷酸的药物组合物和诊断试剂。本发明也涉及改变、修饰或其它方式调节该乙酰肝素酶相关的内切葡糖醛酸酶在细胞或生物体中表达水平的方法。本发明另一方面为适于鉴定调节剂例如该多肽的激动剂或拮抗剂的分析系统。
发明背景
胞外基质(ECM)和基底膜(BM)蛋白植埋于主要由硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)组成的纤维网状结构中。HSPG是血管的主要化合物(内皮下基底膜)，其支撑着血管壁内皮细胞并使毛细管壁的结构稳定。乙酰肝素酶(一种内切-β-D-葡糖醛酸酶)在血小板、胎盘滋养层和白细胞中的表达证实了乙酰肝素酶在胚胎形态发生、伤口愈合、组织修复和炎症中的常规功能。与消化ECM的蛋白酶一样，乙酰肝素酶可以使细胞穿过基底膜并释放贮存于ECM中的结合肝素的生长因子(如bFGF，VEGF)(Finkel等，科学，1999，285：33-34；Eccles，自然医学，1999，5：735-736)
最近，乙酰肝素酶已被4个独立的研究小组克隆成功(Vlodavsky等，自然医学，1999，5：793-802；Hulett等，自然医学，1999，5：803-809；Toyoshima和Nakajima，生物化学杂志，1999，274：24153-24160；Kussie等，生物化学和生物物理研究通讯，1999，261：183-187)，其作为65kDa前体蛋白得以表达，该前体蛋白的N端被加工后成为50kDa的活性酶。该活性酶的重组表达已在CHO、NIH3T3和COS-7细胞中成功进行。虽然以前已经对几个活性明显不同的乙酰肝素酶有所描述，但克隆了不同来源(正常细胞和肿瘤细胞)乙酰肝素酶cDNA的4个研究小组报导的cDNA序列却一致。
几种迹象都表明在肿瘤生长和转移形成中有降解ECM的葡糖醛酸酶参与：(1)与相应的正常组织相比，乙酰肝素酶优先在人肿瘤组织的mRNA和蛋白水平上进行表达，如乳房侵入性导管癌、肝癌、卵巢腺癌、子宫颈鳞状细胞癌、结肠腺癌(Vlodavsky等，同前)。(2)在患有转移性瘤动物的血清和尿里及癌症患者上发现有乙酰肝素酶水平的增加。(3)乙酰肝素酶mRNA的表达和酶活性与人和大鼠乳房瘤细胞系的转移潜能有关。(4)低转移性瘤细胞需要在乙酰肝素酶cDNA的转染方面具有高转移表型，如鼠科T淋巴瘤L5178Y和小鼠B16-F1黑色素瘤(Vlodavsky等，同前)。(5)抑制乙酰肝素酶活性的硫酸寡糖PI-88(磷酸甘露戊糖(phosphomannopentaose)SO4)抑制初级肿瘤生长、转移形成和肿瘤血管化(Parish等，癌症，1999，59：3433-3441)。
发明概述
本发明提供了一种新的、分离的核酸分子，其含有一段编码具有内切葡糖醛酸酶活性多肽或其片段的核酸序列或与该核酸序列互补。
本发明也涉及由该多核苷酸编码的多肽、其功能片段或功能衍生物或功能类似物。
本发明另一方面涉及制备此多肽或此多核苷酸的方法。
本发明再一方面涉及含有此多核苷酸的重组载体(优选与表达控制序列有效连接的)和用此重组载体转化的宿主细胞。
而且，本发明涉及改变、修饰或以其它方式调节此多肽或此多核苷酸在细胞或生物体中表达水平的方法。
本发明另一方面涉及利用此多核苷酸、或其片段或衍生物，或多肽、或其片段或衍生物进行诊断的方法。
而且，本发明涉及特异性识别并结合于此多肽的抗体和利用此抗体进行诊断的方法。
而且，本发明涉及含有此多核苷酸或此多肽或此抗体或其片段的药物组合物及含有此多核苷酸或此多肽或此抗体或其片段给药的治疗方法。
本发明再一方面涉及鉴定能够调节该多肽生物活性的物质的方法及由此方法得到的物质。
发明详述
本发明提供了一种分离的核酸分子，其含有一段编码具有内切葡糖醛酸酶活性的多肽的核酸序列或其与该核酸序列互补。
在其中的一个优选实施方案中，本发明所述的分离的核酸分子是这样的核酸分子，其含有(a)至少SEQ ID NO1所列核苷酸序列的蛋白编码部分，(b)在遗传密码的简并范围内与(a)序列相应的核苷酸序列，或(c)在严格条件下与(a)和/或(b)的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。
本发明也提供了由本发明所述核酸分子编码的多肽。该多肽优选含有(a)SEQ ID NO2中列出的氨基酸序列或(b)与(a)的氨基酸序列具有至少70％，优选至少85％，更优选至少95％同源性的氨基酸序列。
除了SEQ ID NO1中所列核苷酸序列和在遗传密码简并范围内与其相应的核苷酸序列以外，本发明也包括在严格条件下与上述序列之一杂交的核苷酸序列。本发明所述术语“在严格条件下杂交”是按Sambrook等(分子克隆，实验手册，冷泉港实验室出版，1989，1∶1.101-1.104)定义的。优选地，在严格条件下的杂交是指在用1xSSC和0.1％SDS在50℃(优选55℃，更优选62℃，最优选68℃)洗涤1小时后，特别是在0.2xSSC和0.1％SDS中50℃(优选55℃，更优选62℃，最优选68℃)洗涤1小时后可以观察到阳性的杂交信号。在上述洗涤条件下与SEQ ID NO1中所列核苷酸序列或在遗传密码简并范围内与其相应的核苷酸序列杂交的核苷酸序列也包括在本发明之内。
本发明所述核苷酸序列优选DNA，例如cDNA、基因组DNA或合成DNA，其可以是双链也可以是单链，并且假如是单链的话可以是编码链也可以是非编码(反义)链。然而，它可以含有RNA，例如编码或非编码(反义)链的mRNA、前体mRNA和合成RNA或核酸类似物(如peptidic核酸)。本发明所述核苷酸序列特别优选含有SEQ ID NO1中所示核苷酸序列的蛋白编码部分或与SEQ ID NO1中所示核苷酸序列具有多于70％，优选多于85％，更优选多于95％同源性的序列或其具有长度为优选至少20个核苷酸，更优选至少30个核苷酸，最优选至少50个核苷酸的部分。
在核苷酸或蛋白水平上的同源性测定如下：
                       I＝n∶L，
其中
I代表同源性百分比，
n代表在受检序列与分别选自核苷酸序列SEQ ID NO1、氨基酸序列SEQ ID NO2或其一部分的基本序列之间不同核苷酸或氨基酸的数目，
L是与受检序列进行比较的基本序列的长度。
本发明的多核苷酸可以从哺乳动物(例如人细胞)或从来源于哺乳动物(例如人细胞)的cDNA文库或基因组文库中获得。具体地说，此处描述的多核苷酸可从购自Incyte公司的cDNA文库(PENCNOT07，BLADNOT09，PROSTUT08，BRSTNOT27，MIXDNOP01，ESOGNOT04，PENCNOT03)中分离得到。SEQ ID NO1中所示的cDNA插入子长度为3943碱基对(bp)并含有编码长度为492个氨基酸蛋白的开放阅读框架。本发明多肽推断出的氨基酸序列与人乙酰肝素酶有38％的氨基酸同源性(图1)。本发明cDNA的5’末端是不完整的；推断的成熟蛋白从其与人乙酰肝素酶的同源性推测来看是完整的。电子表达(Northern)分析表明本发明的多核苷酸优先在神经系统和雄性生殖器组织中表达(图2)。
本发明也涉及此处描述的多核苷酸的变体，其编码具有SEQ IDNO2推导的氨基酸序列多肽的片段、类似物和衍生物。本发明也涉及从SEQ ID NO1的多核苷酸序列或SEQ ID NO1的片段构建的多核苷酸探针。此处描述的变体包括缺失变体、取代变体和添加或插入变体。
本发明也包括多核苷酸，其中该多肽的编码序列或其片段可与某一可帮助多肽由宿主细胞中表达或分泌，或可以使本发明的多肽进行纯化(即多聚组氨酸标签，血凝素标签，GST标签)的多核苷酸融合在相同的阅读框架中。
制备本发明所述多核苷酸的方法代表了本发明的一个方面。此方法可以包含化学合成、重组DNA技术、聚合酶链式反应或这些方法的组合。该多核苷酸优选由上述适合原料通过扩增反应获得，例如使用序列特异性寡核苷酸引物进行的PCR。
本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽或合成多肽。本发明的功能片段、衍生物或类似物可以是其一或多个氨基酸被其它氨基酸取代的，或其一或多个氨基酸残基包括取代基团的，或该多肽与其它化合物(即聚乙二醇)融合在一起的，或附加氨基酸与该多肽融合在一起的(即前导序列、分泌序列、纯化标签)。
本发明也涉及含有本发明多核苷酸的重组载体。此载体优选表达载体，即含有与合适表达控制序列有效连接的本发明多核苷酸的载体。该载体可以是原核载体也可以是真核载体。原核载体的实例有染色体载体(如细菌噬菌体)和非染色体载体(如质粒)，其中特别优选环型质粒载体。适合的原核载体在如Sambrook等，同前，1-4章中有述。另一方面，该载体可以是真核载体，例如酵母载体或适合在更高等细胞(例如昆虫细胞、植物细胞或脊椎动物细胞，具体地说为哺乳动物细胞)中表达的载体。真核载体的优选实例有质粒或病毒载体。适合的真核载体在Sambrook等，同前，16章中有述。
而且，本发明涉及含有至少一个上述多核苷酸或载体异源拷贝的细胞。该多核苷酸或载体可通过已知方法，例如通过转化(此术语也包括转染、电穿孔、脂质转染、侵染等)，插入到细胞中。该细胞可以是真核或原核细胞。用核酸转化细胞的方法是通常所知的，并不需要进行详细解释。优选细胞的实例为真核细胞，具体地说为脊椎动物细胞，更具体地说为哺乳动物细胞。
本发明另一方面涉及制备本发明多肽的重组方法，所说的方法包括在适于该多肽进行表达的条件下培养用上述多核苷酸或载体转化的宿主细胞，和从细胞或培养物上清中分离由此表达的多肽。宿主细胞可在经恰当修饰的常规营养培养基中进行培养以筛选转化子、扩增此多核苷酸或此载体或纯化该多肽。
如此表达的本发明多肽可从重组细胞培养物中通过迄今所使用的方法，包括去污剂匀浆、肝磷脂-琼脂糖层析、阳离子交换层析、Con A-Sepharose层析、凝胶过滤层析、螯合镍层析、谷胱甘肽琼脂糖(琼脂糖)层析、疏水层析和抗体亲和层析，进行回收和纯化。
本发明的多肽可以是由高表达细胞系天然表达的纯产物，或化学合成的产物，或通过重组技术从原核或真核宿主中产生的产物。根据重组生产方法中所用宿主的不同，本发明多肽可以是糖基化的，也可以是非糖基化的。
本发明另一方面涉及寡核苷酸或其衍生物，其在严格条件下与SEQ ID NO1所列核苷酸序列杂交。根据计划用途的不同，此寡核苷酸的长度，例如从约5，优选约15到约100或甚至几百个核苷酸单位或其类似物。
本发明的寡核苷酸可用作为克隆引物，或作为PCR引物，或作为测序引物，或作为杂交探针来使用。另一个用途涉及在体内通过有义或反义技术刺激或抑制本发明多肽的表达。这些技术可通过在双链DNA上三股螺旋的形成或在RNA的反义机制来控制基因表达，这两种方法都基于此寡核苷酸与DNA或RNA的结合。寡核苷酸，具体地说是RNA寡核苷酸，的另一个用途涉及使用核酶技术的表达控制。通过本领域的方法，该寡核苷酸可通过现有技术被直接递送至细胞，或者此反义或核酶RNA或DNA可在胞内表达以抑制本发明多肽的产生。本发明多核苷酸的反义构建体或核酶抑制本发明多肽的活性并可被用于治疗某些紊乱情况，例如癌症和癌症转移。
此外，此类寡核苷酸可用于检测本发明多核苷酸是否存在及多核苷酸的表达水平。而且，此类寡核苷酸可用于检测编码本发明多肽的基因中的突变。基因中的突变可能与疾病或疾病预后有关。因此，寡核苷酸可作为诊断标记物对紊乱(如癌症、癌症和血管生成异常)进行诊断。
多肽、它们的功能片段、其衍生物或类似物、或表达它们的细胞、或此多核苷酸或其片段可被用作免疫原以产生抗体。因此，本发明涉及特异性识别并结合于本发明多肽的抗体。
此种抗体可以是，例如，多克隆或单克隆抗体。本发明也包括嵌合的、单链的和人源化的抗体及Fab片段。本领域已知的各种方法均可用于此抗体和片段的生产。
多克隆抗体可由用选择性偶联于载体的适当多肽或肽抗原免疫实验动物并从该免疫动物中分离该抗体获得。单克隆抗体可通过由Khler和Milstein发展的杂交瘤技术获得。产生多克隆和单克隆抗体的方法分别是通常所知的，并不需要详细解释(Harlow和Lane抗体：实验手册，冷泉港实验室，1988)。
该抗体可用于从表达此多肽的组织中分离该多肽。本发明多肽的特异性抗体通过与该多肽结合可进一步用来抑制该多肽的生物活性。该抗体可以此方式用于治疗，例如治疗癌症。该癌症治疗可通过Weiner(Semin.Oncol.26(1999)，41-50)或其引用的参考文献所描述的方法进行。
而且，该抗体可以检测本发明的多肽是否存在及此多肽的浓度水平，因此用作紊乱(例如癌症、癌症转移和异常血管生成)诊断的诊断标记物。
另一方面，本发明涉及鉴定具有调节本发明多肽的生物活性或表达能力的物质的方法。因此，本发明涉及鉴定本发明多肽功能或活性或表达的拮抗剂和抑制剂，以及激动剂和刺激剂的方法。
例如，拮抗剂可与本发明多肽结合并抑制或消除其功能。例如，该拮抗剂可以是抗该多肽的抗体或高亲和力的寡核苷酸或肽，其通过与该多肽结合消除该多肽的葡糖醛酸酶活性。抑制剂的实例为低分子量分子，其通过结合并占据催化位点使该多肽失活，从而使底物无法进入该催化位点进而抑制该多肽的生物活性。
拮抗剂和抑制剂可通过阻止该多肽从胞外基质上剥落硫酸乙酰肝素蛋白多糖的这一功能来治疗癌症、癌症转移和异常血管生成。
由上述方法鉴定的拮抗剂和抑制剂或其衍生物可与适合的药物载体一起在组合物中使用。
具体地说，本发明涉及鉴定上述物质(例如低分子量的抑制剂，其对本发明多肽是特异性的并可抑制其功能或抑制其表达)的分析方法。天然的或合成的碳水化合物底物将用于评估该多肽的内切葡糖醛酸酶活性。
另一方面涉及本发明所述多核苷酸或多肽在医药方面的用途。具体地说，本发明涉及本发明所述多肽或多核苷酸在制备药物组合物中的用途，该药物组合物用于治疗由所说多肽的不足或缺乏导致的疾病。多肽的激动剂或多肽的表达诱导物/增强剂可代替和与本发明的多核苷酸和多肽一起用于医学目的。例如，此类疾病有外伤、自身免疫疾病、皮肤病、心血管疾病和神经系统疾病。本发明多肽可用于基因治疗。基因治疗可按Beutler(生物血液骨髓移植，1999，5：273-276)或Gomez-Navarro等人(欧洲癌症杂志，1999，35：867-885)或其中引用的文献所描述的方法进行。
本发明另一方面涉及本发明所述的抗体或其片段在医药领域的用途。具体地说，本发明涉及本发明所述抗体在制备药物组合物中的用途，该药物组合物用于治疗由本发明多肽的过量活性或过表达所导致的疾病。除了本发明的抗体以外，此多肽的拮抗剂或抑制剂或表达抑制剂可用于医学目的。此类疾病为，例如癌症、癌症转移、血管生成和炎症(包括关节炎)。
此外，本发明涉及药物组合物，该药物组合物适于对患有由于本发明多肽不足或缺乏或失活导致的疾病，或对患有由于本发明多肽的过量活性或过表达导致的疾病的恒温动物(包括人)给药。
既然本发明多核苷酸优先在雄性生殖器组织中表达，其所编码多肽的表达和/或活性的调节可在雄性生殖器功能(即雄性生育力控制，勃起功能障碍)方面用于医学介入。
实施例1
本发明多核苷酸的鉴定
使用已经公布的人乙酰肝素酶序列(AAD54941.1)，三个Incyte模板(即Incyte ESTs集合)被发现与此人乙酰肝素酶具有明显的同源性。每个模板的这些ESTs中的一些购自Incyte公司。每个EST克隆的3’和5’末端核苷酸序列的确定显示出了更新的序列信息，这些序列信息进一步从Incyte克隆中导出两个集合。将此序列信息与由这些Incyte克隆本身的测序结果得到的序列信息结合在一起，使我们能够装配一个人乙酰肝素的新的貌似物(paralogue)，人乙酰肝素酶相关多肽。该新序列含有3943bp并且鉴定的编码序列范围为1bp-1479bp(包括终止密码子)。编码区分析(由ESTSCAN程序确定)和与人乙酰肝素酶的同源性提示5’末端仍是开放的。
实施例2
电子表达分析
基于所给定组织ESTs的数目，我们可以估计或推测一种在此特定组织中测定特定基因的体内表达水平的方法。
“电子-northern”是一种生物信息方法，其首先确定在数据库中所给组织的所有ESTs的总数(所谓的“库大小“)，然后确定该组织中仅与此查询序列相关的ESTs的数目。
使用所感兴趣基因的cDNA作为查询条件，以人EST数据库(Incyte公司的LifeSeqGold)作为数据来源，通过BLAST(NCBIBLAST版本2.0.10；Altschul等，核酸研究，1997，25：3389-3402)进行搜索。搜索参数为E＝le-30。随后在此数据库中进行的SQL查询检出搜索到的每个EST的组织来源和每个组织的库大小。
该数据被认为与体内表达水平有关。此处，统计分析(库大小的标准化和置信区间的确定)帮助评估该数据的可信度并帮助比较不同组织之间表达水平的差异。此预测方法的可信度通常随采样数/组织和组织的库大小的提高而增加。
实施例3
多核苷酸的表达
使用HepR1(5′-GAC AGG AGA CCC TTG CCT GTA GAC-3′)作为5’引物、HepR2(5′-ATA GTC GAG TTA TCG GTA GCG GCA GGCCAA AGC-3′)作为3’引物和使用分离自克隆#3207535H1和#3385824H1(Incyte公司1999年十月/十一月公布的LifeSeqGold数据库)的DNA作为模板，扩增SEQ ID NO1中所给出的多核苷酸的编码区。此1488bp DNA以T4多核苷酸激酶去磷酸化后，再用XhoI限制性消化。该片段按三联体密码框架连入pISP-myc载体(其有一个N-末端免疫球蛋白信号序列，其后接有myc标签表位)。将该片段以HIndIII和XhoI限制性消化，然后连入表达载体pCEP4(Invitrogen)的适当位点，得到表达载体HepR-pCEP。HepR-pCEP被转染到MCF7、MBA-231、和MBA-468乳腺癌细胞系和CHO细胞。重组蛋白以抗-myc-标签表位抗体进行鉴定。
为在昆虫中进行表达，该PCR片段用EcoR1和Xbal从pISP-myc载体中释放出来。然后此片段被克隆到pVL1392杆状病毒穿梭载体，得到HepR-pVL载体并转染Sf9昆虫细胞。
实施例4
抗体的产生
使用实施例3中的表达载体HepR-pVL从受感染的昆虫细胞Sf9中纯化多肽，用该多肽以标准方法(Harlow和Lane，抗体：实验手册，冷泉港实验室，1988)分别免疫小鼠和兔。
                              序列表SEQUENCE ID NO1：编码人的类乙酰肝素酶多肽的cDNA的核苷酸序列表长度：          3943bp编码序列区：    1-1476bp终止密码子：    1477-1479bp下划线表示两个推定的聚腺苷酸位点1  gacaggagac ccttgcctgt agacagagct gcaggtttga aggaaaagac51  cctgattcta cttgatgtga gcaccaagaa cccagtcagg acagtcaatg101  agaacttcct ctctctgcag ctggatccgt ccatcattca tgatggctgg151  ctcgatttcc taagctccaa gcgcttggtg accctggccc ggggactttc201  gcccgccttt ctgcgcttcg ggggcaaaag gaccgacttc ctgcagttcc251  agaacctgag gaacccggcg aaaagccgcg ggggcccggg cccggattac301  tatctcaaaa actatgagga tgacattgtt cgaagtgatg ttgccttaga351  taaacagaaa ggctgcaaga ttgcccagca ccctgatgtt atgctggagc401  tccaaaggga gaaggcagct cagatgcatc tggttcttct aaaggagcaa451  ttctccaata cttacagtaa tctcatatta acagagccaa ataactatcg501  gaccatgcat ggccgggcag taaatggcag ccagttggga aaggattaca551  tccagctgaa gagcctgttg cagcccatcc ggatttattc cagagccagc601  ttatatggcc ctaatattgg gcggccgagg aagaatgtca tcgccctcct651  agatggattc atgaaggtgg caggaagtac agtagatgca gttacctggc701  aacattgcta cattgatggc cgggtggtca aggtgatgga cttcctgaaa751  actcgcctgt tagacacact ctctgaccag attaggaaaa ttcagaaagt801  ggttaataca tacactccag gaaagaagat ttggcttgaa ggtgtggtga851  ccacctcagc tggaggcaca aacaatctat ccgattccta tgctgcagga901  ttcttatggt tgaacacttt aggaatgctg gccaatcagg gcattgatgt951  cgtgatacgg cactcatttt ttgaccatgg atacaatcac ctcgtggacc1001  agaattttaa cccattacca gactactggc tctctctcct ctacaagcgc1051  ctgatcggcc ccaaagtctt ggctgtgcat gtggctgggc tccagcggaa1101  accacggcct ggccgagtga tccgggacaa actaaggatt tatgctcact1151  gcacaaacca ccacaaccac aactacgttc gagggtccat tacacttttt1201  atcatcaact tgcatcgakc aagaaagaaa atcaagctgg ctgggactct1251  cagagacaag ctggttcacc agtacctgct gcagccctat gggcaggagg1301  gcctaaagtc caagtcagtg caactgaatg gccagccctt agtgatggtg1351  gacgacggga ccctcccaga attgaagccc cgcccccttc gggccggccg1401  gacattggtc atccctccag tcaccatggg cttttatgtg gtcaagaatg1451  tcaatgcttt ggcctgccgc taccgaTAAg ctatcctcac actcacggct1501  accagtgggc ctgctgggct gcttccactc ctccactcca gtagtatcct1551  ctgttttcag acatcctagc aaccagcccc tgctgcccca tcctgctgga1601  atcaacacag acttgctctc caaagagact aaatgtcata gcgtgatctt1651  agcctaggta ggccacatcc atcccaaagg aaaatgtaga catcacctgt1701  acctatataa ggataaaggc atgtgtatag agcagaatgt ttcccttcat1751  gtgcactatg aaaacgagct gacagcacac tcccaggaga aatgtttcca1801  gacaactccc catgatcctg tcacacagca ttataaccac aaatccaaac1851  cttagcctgc tgctgctgct gccctcagag gaagatgagg aaggaaaaaa1901  actgggtgga cctacaaaaa cccatcctct cccaactcct tcttctctgc1951  ctctttcttg ctgctgccct gagttttttg acacatctct ttccataggg2001  gagtaatggg tgtgtcagcc ctggcctgct gggagagctg tttgtatgat2051  ttcccggctg atgtatgagc gtgcgcatct gggttcctga cagtggcatc2101  catcactggc agttcttctg ggaagcgggt gcttcaaaag taaaattaca2151  atcacactcc agatttggta agaaggttct attcctctgt gaatccagat2201  tcccccagag ttgtaatggg agtcaagtaa caatattcat tgagtggaga2251  gcagtttatt aggcacaaca aaaagtaatc atcattcttc atgttgctat2301  gagggagagt ttgagtacaa agagaaagca tactgaaaca tcaggtacac2351  acacacaccc caactggaca aagcaaatta gacctctcca aaattaagag2401  aatattaggg gctctatagg gtaagccttt aattgtttgg ttaactcaaa2451  tcattatttt taaaaaagaa gaaaaaagtg tgaatcaagg tcatcactgg2501  aagacacaac tgaatctaac ctttttgcct cttcccaagt agcctatttg2551  agctagaaca aaactttgtt agccattttg ggagagaata gggaatctag2601  agaatgaaga tctgcccaaa actatggaat ggtaggtagg aagcttctga2651  gttgggcagg tgtgaagtgg gggatgagga cgttctatat gattcaaggg2701  gcatgagggt ctttgccaat gagctacagc tgaaatgact ttcttttctg2751  gggatgtgat tttctttctc aggataaatg acaggaatga tgcttttgtt2801  agaaggagga gagatttgac actgttccaa gtgagacagt gatacaattt2851  ctgctgtttg tgaaaggaca ggaatggggy gggggcaagg cagggttgcc2901  tagggcagag actagggagg ctgcctaaga cgcacacgga gttaaggatt2951  tgggccaagt ctgcaaagtg agagatggaa gggagattag accaaagagg3001  agggagagaa ttctgagctt ggagaacggt ggatttggga gagggaagct3051  gactacctaa ttccaggaag cgaggggacc gggttttgac atgcttatca3101  ttaagcacag gaggaacagc atacagcaga tgtactacag cgagcaagaa3151  agggagagcc cgaggaccag gctgcaccag gtcagtggct gtgctcagca3201  tggaagcaac tggagagaga ggggcagacc ctgagacygc cctgcaaggc3251  tgcccagaag ggacccgttt ctctgggacc aggcacctcc cactgaggct3301  tcagctctga gagggcagga aagtgaagta ccaagatggg ggcggggcgg3351  ggggtaggaa ataagagaaa gaagaaacag attgacaggc caaagtgagg3401  aaaagagagg aaaagagaaa tgagactaaa aggtcgttcc cccaactgtt3451  aaaaatgtgt gcagatatca acgtctcttc tacatactgg tacaggtgcg3501  actgcagggc cccctgatat aacaagagta accaaaggtc cctaagagcc3551  tggccctggg gacctatggt ttgctttgcg tccttagtaa ccccatgata3601  aaggggtact actgttatcc ccatttttcc tacgaggcat ggagaggatc3651  catggctcgc cccaggggca cccggggaaa tgggttgccg agcgcgaaat3701  aatccagagc ctgcccactc agccacaagg ctcagcggct ccacaggtcc3751  agacacctcc ttcacatctt tgtaggttct gctcattcag aacagccaga3801  actccactca aacacacttt ctgtaaataa gtgttgattt ttttttacta3851  aaccttgcag aatatgggta attcctgctt cttttatctt tctctgtgta3901  ttaaatgctg ctctcacgag atttaagttt tgtttatttt ttaSEQUENCE ID NO2：人乙酰肝素酶相关多肽的氨基酸序列表翻译产物长度：4921  DRRPLPVDRA AGLKEKTLIL LDVSTKNPVR TVNENFLSLQ LDPSIIHDGW51  LDFLSSKRLV TLARGLSPAF LRFGGKRTDF LQFQNLRNPA KSRGGPGPDY101  YLKNYEDDIV RSDVALDKQK GCKIAQHPDV MLELQREKAA QMHLVLLKEQ151  FSNTYSNLIL TEPNNYRTMH GRAVNGSQLG KDYIQLKSLL QPIRIYSRAS201  LYGPNIGRPR KNVIALLDGF MKVAGSTVDA VTWQHCYIDG RVVKVMDFLK251  TRLLDTLSDQ IRKIQKVVNT YTPGKKIWLE GVVTTSAGGT NNLSDSYAAG301  FLWLNTLGML ANQGIDVVIR HSFFDHGYNH LVDQNFNPLP DYWLSLLYKR351  LIGPKVLAVH VAGLQRKPRP GRVIRDKLRI YAHCTNHHNH NYVRGSITLF401  IINLHRXRKK IKLAGTLRDK LVHQYLLQPY GQEGLKSKSV QLNGQPLVMV451  DDGTLPELKP RPLRAGRTLV IPPVTMGFYV VKNVNALACR YR

Claims (25)

1.一种多核苷酸，含有
(a)SEQ ID NO1中所列序列或至少其蛋白编码部分，
(b)在遗传密码的简并范围内与(a)序列相应的核苷酸序列，或
(c)在严格条件下与(a)和/或(b)的序列杂交的核苷酸序列。
2.权利要求1所述的多核苷酸，其编码具有内切葡糖醛酸酶生物活性的多肽。
3.权利要求1或2所述的多核苷酸，其与SEQ ID NO1所列的核苷酸序列或其片段至少具有70％的相同性。
4.权利要求1到3中任何一项所述的多核苷酸，其为DNA、RNA或核酸类似物。
5.重组载体，其含有至少一个拷贝的权利要求1到4中任何一项所述的多核苷酸。
6.权利要求5所述的载体，其为表达载体。
7.用权利要求1到4中任何一项所述的多核苷酸或用权利要求5到6中任何一项所述的载体转化的细胞。
8.由权利要求1到4中任何一项所述的多核苷酸编码的多肽。
9.权利要求8所述的多肽，其含有
(a)SEQ ID NO2中列出的氨基酸序列或
(b)与(a)的氨基酸序列或其片段具有至少70％相同性的氨基酸序列。
10.权利要求8或9所述的多肽，其具有内切葡糖醛酸酶活性。
11.权利要求8到10中任何一项所述的多肽或其片段，其具有引起特异性抗体的能力。
12.一种制备权利要求8到11中任何一项所述多肽的方法，所说的方法包括化学合成、重组DNA技术或这些方法的组合。
13.一种制备权利要求1到3中任何一项所述多核苷酸的方法，所说的方法包括化学合成、重组DNA技术、聚合酶链式反应或这些方法的组合。
14.特异识别并结合于权利要求8到11所定义多肽的抗体或寡肽或寡核苷酸或其衍生物。
15.权利要求1到4中任何一项所述的多核苷酸或权利要求8到11中任何一项所述的多肽在医药上的用途。
16.权利要求1到4中任何一项所述的多核苷酸或权利要求8到11中任何一项所述的多肽在制备药物组合物中的用途，该药物组合物用于治疗由于所说多肽不足或缺乏或失活所引起的疾病。
17.治疗由于权利要求8到11中所定义多肽的不足或缺乏或失活所引起疾病的方法，所说的方法包括给予适当量的权利要求1到4中任何一项所述的多核苷酸或权利要求8到11中任何一项所述的多肽。
18.治疗由于权利要求8到11中所定义多肽的过量活性或过表达所引起疾病的方法，所说的方法包含给予适当量的权利要求14所定义的抗体或寡肽或寡核苷酸或其衍生物。
19.鉴别能够在细胞中调节权利要求8到11中所定义多肽的生物活性或表达的物质的方法，所说的方法包括将该多肽，或其功能衍生物、功能片段或功能类似物，或能够表达该多肽的细胞与至少一种欲研究其调节所说多肽、功能衍生物、功能片段或功能类似物的生物活性或表达能力的化合物或试剂相接触，及确定由该物质引起的所说多肽、衍生物或片段的生物活性的改变。
20.权利要求19所述的方法，进一步包括以已被确定为调节剂的物质或其衍生物作为活性试剂配制药物组合物。
21.检测对权利要求8到11所定义多肽具有结合能力或有功能效果的物质的分析系统，所说的分析系统包含此多肽，或其功能衍生物、功能片段或功能类似物，或能够表达此多肽或其功能衍生物、功能片段或功能类似物的细胞，及任选地包括确定由该物质所引起的反应的手段。
22.通过权利要求19或20所定义方法获得的物质，所说的物质为权利要求8到11所定义多肽的激动剂或拮抗剂。
23.权利要求1到4中任何一项所述的多核苷酸或其片段或其衍生物在调节权利要求8到11所定义多肽在细胞内的表达中的应用。
24.权利要求1到4中任何一项所述的多核苷酸在基因治疗方面的用途。
25.权利要求14所定义的抗体或寡肽或寡核苷酸或其衍生物，或权利要求1到4中任何一项所述的多核苷酸或其片段或其衍生物在诊断由权利要求8到11所定义多肽的不足或过表达所引起的疾病中的用途。
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