CN1313459C

CN1313459C - 一种黄芩总黄酮苷元提取物、黄芩单体黄酮苷元及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN1313459C
Application number: CNB2005100437090A
Authority: CN
Inventors: 程秀民
Original assignee: Shandong University
Current assignee: Shandong University
Priority date: 2005-06-07
Filing date: 2005-06-07
Publication date: 2007-05-02
Anticipated expiration: 2025-06-07
Also published as: CN1709885A

Abstract

一种黄芩总黄酮苷元提取物、黄芩单体黄酮苷元及其制备方法与应用，属于中药制药技术领域。本发明获得的是主含黄芩素的黄芩总黄酮苷元提取物，或主含黄芩素或主含汉黄芩素或主含干层纸素-A的黄芩黄酮苷元单体化合物；将黄芩粉碎，加水，在41～46℃进行酶解反应，天然存在于黄芩中的黄芩酶与黄芩黄酮苷、在不经提取分离的情况下、直接在黄芩中发生的酶解反应。药学制剂包括以黄芩总黄酮苷元提取物为药学活性成分或以单体黄酮苷元为药学活性成分与药用辅料组成的各种剂型的药学制剂，用于制备治疗肝疾病、艾滋病的药物。本发明反应条件温和，收率高，产品质量好，能耗低，工艺简单，无污染，生产成本低。

Description

一种黄芩总黄酮苷元提取物、黄芩单体黄酮苷元及其制备方法与应用

(一)技术领域

本发明涉及中药制药领域，具体涉及一种黄芩总黄酮苷元提取物、黄芩单体黄酮苷元及其制备方法与用途。

(二)背景技术

黄芩(Scutcllaia Baicalensis Ceorgi)为唇形科植物黄芩的干燥根，是传统中药，用于湿热泻痢、肺热咳嗽、热病烦渴、黄疸、目赤肿痛、积热吐血、胎动不安、痛肿疮节等症。中医在治疗病毒性乙型肝炎的许多重要组方中配伍黄芩，如：三物黄芩汤、清肝颗粒、乙肝解毒胶囊等，表明黄芩具有治疗乙型肝炎的作用。中医在艾滋病预防与治疗中，也十分重视黄芩的作用。黄芩主要有效成分为黄酮类化合物，迄今已分离出40余种黄酮，其中黄芩苷(baicalin)含量最高，汉黄芩苷(wogonoside)较少，黄芩素(黄芩苷元，baicalein)及其他黄酮类成分含量很少。有研究认为，黄芩苷与黄芩素具有相同的代谢途径，而黄芩素口服吸收较快、生物利用度优于黄芩苷。也有文献证明，黄芩素具有较其它黄芩黄酮更强的药理作用并且毒副作用小，如：1.具有特异的抗艾滋病毒(HIV)作用，能诱导感染HIV的细胞发生凋亡，可抑制艾滋病毒(HIV-1)并抑制其逆转录酶(HIV-1 RT)，黄芩素抑制HIV-1 RT活性及细胞毒性均强于黄芩苷。2.能促进细胞调亡，对人肝癌细胞的拓扑异构酶II有强烈抑制作用，并抑制细胞增殖；对人肝癌细胞诱导死亡的方式是，诱导细胞调亡和产生细胞坏死。因此，对黄芩总黄酮苷元和单体黄酮苷元的研究开发具有广阔的应用前景和巨大的商业价值。

黄芩素虽然具有诸多特异的药理作用，但其制备技术难度很大，难以进行规模化工业生产，因此无法满足制剂和临床需要，影响了其潜在作用的发挥。现在用于黄芩素制备的方法主要有：1.从黄芩中提取分离黄芩素，由于黄芩中游离黄芩素含量低，一般在0.1～0.5％之间，因此基本不具备工业应用价值。2.常规水解方法水解黄芩苷制备黄芩素，有研究表明，常规水解方法不能使黄芩苷水解为黄芩素与葡萄糖醛酸。3.强烈的化学条件水解黄芩苷制备黄芩素，如在浓硫酸中进行水解，虽可使黄芩苷水解，但随着反应的进行，也使黄芩素的分解破坏增加，因此收率很低，不适用于工业生产。黄芩炮制学认为，在一定湿度和温度条件下，黄芩中黄芩酶可使苷分解为两个苷元——黄芩素和汉黄芩素，以及葡萄糖醛酸。黄芩素可进一步氧化为醌式结构而导致黄芩质量降低，为保证黄芩质量采取了各种“杀酶保苷”的炮制方法，表明黄芩中有黄芩苷分解酶存在；也有学者从黄芩中分离得到黄芩酶(β-葡萄糖醛酸酶)并实验证实了其对黄芩苷的分解作用。

(三)发明内容

本发明针对已有技术的不足，提供一种便捷、实用、可靠的、可以进行规模化工业生产的黄芩总黄酮苷元提取物和黄芩单体黄酮苷元及其制备方法与应用。

黄芩总黄酮苷元提取物，主含黄芩素(baicalein)、汉黄芩素(Wogonin)和千层纸素-A(Oroxylin-A)黄芩单体黄酮苷元，黄芩黄酮苷元具有黄酮类母体结构，结构如下：

利用黄芩黄酮苷与黄芩酶(β-葡萄糖醛酸酶)在黄芩中共存的现象，将黄芩粉碎，加水，加热至41～46℃并保持4.1～4.8h进行酶解反应，黄芩酶便可将黄芩黄酮苷完全酶解转化为苷元和葡萄糖醛酸，热风干燥，将干粉置索氏提取器中通过加无水乙醇回流提取，制得黄芩总黄酮苷元提取物。

上述提取物中黄芩素含量＞54％、黄芩总黄酮苷元含量≥85％，均为重量百分比。

黄芩单体黄酮苷元，分别是黄芩素、汉黄芩素和千层纸素-A，由上述黄芩总黄酮苷元提取物进行分离制得。用无水乙醇溶解黄芩总黄酮苷元提取物，上聚酰胺层析柱层析分离，以体积百分比浓度10％～90％的乙醇或10％～90％甲醇进行洗脱，分段收集洗脱液，洗脱的先后顺序依此是：黄芩素，汉黄芩素，干层纸素-A。

上述的酶解反应，其特征在于，该反应是指天然存在于黄芩中的黄芩酶与黄芩黄酮苷，在未经提取分离的情况下，直接在黄芩中发生的酶解反应。

黄芩总黄酮苷元提取物的制备方法如下：

取黄芩(生条芩)，粉碎，过四号～五号筛使为中粉。在每100g黄芩粉末中加入41～46℃蒸馏水110～120ml，搅拌均匀，加热至41～46℃并保持温度恒定4.1～4.8h进行酶解反应，取出，50～80℃热风干燥。将干粉置索氏提取器中，加无水乙醇回流提取。提取液减压回收乙醇，收集残留物，粉碎，过筛，即得黄芩总黄酮苷元提取物，收率＞11.5％。

黄芩单体黄酮苷元的制备方法如下：

取上述黄芩总黄酮苷元提取物，用无水乙醇溶解，上聚酰胺层析柱层析分离，以体积百分比浓度10％～90％的乙醇或10％～90％甲醇进行洗脱，分段收集洗脱液(每管20ml)，根据硅胶G薄层板层析结果合并相同组分洗脱液，分别减压浓缩干燥，即制得黄芩素、汉黄芩素和千层纸素-A单体黄酮苷元。

本发明的黄芩总黄酮苷元提取物及单体黄酮苷元，用于制备治疗肝疾病、艾滋病药学制剂。

本发明的黄芩总黄酮苷元提取物及单体黄酮苷元，用作药学活性成分与药用辅料组成药物制剂，用于加工制成片剂、颗粒剂、胶囊剂、软膏剂。

本发明方法最显著的优点在于，利用了黄芩酶与黄芩黄酮苷于黄芩中共同存在的天然性质，不经提取分离，不加酸、碱等化学试剂，也不另加酶解底物和分解酶，只需将黄芩粉碎为中粉、加入适量水分并给予适宜的温度，即可发生酶解反应，使黄芩黄酮苷完全转化为苷元和葡萄糖醛酸，进行提取即得黄芩总黄酮苷元提取物(为酶解产生的和原有游离的苷元之和)，由提取物分离便制得黄芩单体黄酮苷元。该法反应条件温和，收率高，产品质量好，能耗低，工艺简单，无污染，生产成本低，适用于规模化工业生产。HPLC分析显示：提取后的药渣中几不含黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素；提取物中不含黄芩苷和汉黄芩苷，表明苷的水解是彻底的，苷元的提取是完全的，优于现有黄芩黄酮苷元制备方法。

有许多学者在探索黄芩总黄酮苷元和单体黄酮苷元制备问题，由于各家的研究方法不同，因此制备的效果也各不相同，若要比较制备效果的优劣则需要比较制备的黄芩总黄酮苷元和单体黄酮苷元是否具有产品收率高、质量好，生产成本低，是否适用于规模化工业生产的优势，要比较方法的科学性和实用性。本发明方法真正达到了简便、快速、经济、科学、高效率、规模化生产制备黄芩总黄酮苷元提取物的最佳效果。黄芩资源丰富，黄酮苷含量高，某些产地的黄芩黄酮苷含量高达20％以上，是制备黄芩黄酮苷元的理想原料。应用本发明能够科学有效地开发黄芩资源、拓展黄芩应用空间。

(四)附图说明

图1是实施例1所得的黄芩总黄酮苷元提取物样品的HPLC色谱图，横坐标是保留时间，纵坐标是信号强度。其中，A代表2种黄芩黄酮苷元对照品，B代表黄芩总黄酮苷元提取物；1是黄芩素、2是汉黄芩素。

图2是实施例1所得的黄芩总黄酮苷元提取物样品的三维HPLC色谱图，X轴是保留时间，Y轴是波长，Z是信号强度。1是黄芩素、2是汉黄芩素。

图3是实施例1-3所得的黄芩总黄酮苷元提取物样品的HPLC色谱图。其中，a代表实施例1的样品(批号050308)，b代表实施例2的样品(批号050311)，c代表实施例3的样品(批号050320)。由图3可见，三个样品的HPLC色谱基本一致，表明该法制备的提取物质量稳定。

(五)具体实施方式

实施例1.

取干燥的黄芩根，粉碎，过四号筛，称取粉末100g，加41℃水120ml，搅拌均匀，置41℃水浴中，加盖并保持41℃恒温4.2小时后，取出，于80℃热风干燥。将干粉置索氏提取器中，加无水乙醇加热回流提取，减压回收溶剂。收集残留物，粉碎，过筛，得黄芩总黄酮苷元提取物12.8g，其中含黄芩素7.8g，黄芩总黄酮苷元11.3g。

实施例2.

取干燥的黄芩根，粉碎，过四号筛，称取粉末100g，加42℃水120ml，搅拌均匀，置42℃水浴中，加盖并保持42℃恒温4.2小时后，取出，于80℃热风干燥。将干粉置索氏提取器中，加无水乙醇加热回流提取，减压回收溶剂。收集残留物，粉碎，过筛，得黄芩总黄酮苷元提取物12.6g，其中含黄芩素7.7g，黄芩总黄酮苷元11.1g。

实施例3.

取干燥的黄芩根，粉碎，过四号筛，称取粉末100g，加45℃水110ml，搅拌均匀，置45℃水浴中，加盖并保持45℃恒温4.2小时后，取出，于60℃热风干燥。将干粉置索氏提取器中，加无水乙醇加热回流提取，减压回收溶剂。收集残留物，粉碎，过筛，得黄芩总黄酮苷元提取物12.9g，其中含黄芩素7.8g、黄芩总黄酮苷元11.2g。

实施例4.

取干燥的黄芩根，粉碎，过四号筛，称取粉末100g，加45℃水110ml，搅拌均匀，置45℃水浴中，加盖并保持45℃恒温4.5小时后，取出，于60℃热风干燥。将干粉置索氏提取器中，加无水乙醇加热回流提取，减压回收溶剂。收集残留物，粉碎，过筛，得黄芩总黄酮苷元提取物12.8g，其中含黄芩素7.8g，黄芩总黄酮苷元11.2g。

实施例5.

取干燥的黄芩根，粉碎，过四号筛，称取粉末100g，加45℃水115ml，搅拌均匀，置45℃水浴中，加盖并保持45℃恒温4.2小时后，取出，于70℃热风干燥。将干粉置索氏提取器中，加无水乙醇加热回流提取，减压回收溶剂。收集残留物，粉碎，过筛，得黄芩总黄酮苷元提取物12.8g，其中含黄芩素7.8g，黄芩总黄酮苷元11.4g。

实施例6.

取干燥的黄芩根，粉碎，过四号筛，称取粉末100g，加45℃水115ml，搅拌均匀，置45℃水浴中，加盖并保持45℃恒温4.5小时后，取出，于70℃热风干燥。将干粉置索氏提取器中，加无水乙醇加热回流提取，减压回收溶剂。收集残留物，粉碎，过筛，得黄芩总黄酮苷元提取物13.2g，其中含黄芩素8.0g，黄芩总黄酮苷元11.5g。

实施例7.

取实施例1的黄芩总黄酮苷元提取物10g，加无水乙醇溶解，上聚酰胺层析柱进行层析分离，以50％的乙醇进行洗脱，分段收集，每管20ml，薄层层析检测后，合并相同组分洗脱液，分别减压浓缩干燥，即制得黄芩单体黄酮苷元，分别是：黄芩素5.8g，纯度＞90％；汉黄芩素1.7g，纯度＞90％；干层纸素-A 0.3g，纯度＞90％。

实施例8.

取实施例2的黄芩总黄酮苷元提取物10g，加甲醇溶解，上聚酰胺层析柱进行层析分离，以50％的甲醇进行洗脱，分段收集洗脱液，每管20ml，薄层层析检测后，合并相同组分洗脱液，分别减压浓缩干燥，即制得黄芩单体黄酮苷元，分别是：黄芩素5.9g，纯度＞90％；汉黄芩素1.8g，纯度＞90％；千层纸素-A 0.3g，纯度＞90％。

实施例9.

黄芩总黄酮苷元片剂黄芩素片200mg，其中黄芩总黄酮苷元100mg。用于治疗艾滋病，口服，每日3次，每次2片。

实施例10.

黄芩素胶囊剂黄芩素胶囊200mg，其中黄芩素100mg。用于治疗肝癌，口服，每日3次，每次2粒。

实施例11.

汉黄芩素颗粒剂汉黄芩素颗粒400mg，其中汉黄芩素200mg。用于治疗乙型肝炎，口服，每日3次，每次1袋。

实施例12.

黄芩素软膏剂黄芩素软膏5g，其中黄芩素1g。用于治疗艾滋病并发皮肤皮疹，外用，涂布于患处，一日1次。

Claims

1、黄芩总黄酮苷元提取物，主含黄芩素、汉黄芩素和千层纸素-A黄芩单体黄酮苷元，黄芩黄酮苷元具有黄酮类母体结构，结构如下：

其特征在于，提取物中黄芩素含量＞54％、黄芩总黄酮苷元含量≥85％，均为重量百分比，是由以下方法获得的：

将黄芩粉碎，在每100g黄芩粉末中加入41～46℃蒸馏水110～120ml，在41～46℃保持4.1～4.8h进行酶解反应，黄芩酶将黄芩黄酮苷完全酶解转化为苷元和葡萄糖醛酸，50～80℃热风干燥，将干粉置索氏提取器中通过加无水乙醇回流提取而得。

2、从权利要求1的黄芩总黄酮苷元提取物中分离得到的黄芩单体黄酮苷元，其特征在于，分别是黄芩素、汉黄芩素和千层纸素-A，是用无水乙醇溶解黄芩总黄酮苷元提取物，上聚酰胺层析柱层析分离，以体积百分比浓度10％～90％的乙醇或10％～90％甲醇进行洗脱，分段收集洗脱液，洗脱的先后顺序依此是：黄芩素，汉黄芩素，千层纸素-A。

3、如权利要求2所述的黄芩单体黄酮苷元，其特征在于，所述黄芩素、汉黄芩素或千层纸素-A是根据硅胶G薄层板层析结果合并相同组分洗脱液，分别减压浓缩干燥而得。

4、一种权利要求1所述的黄芩总黄酮苷元提取物的应用，用作药学活性成分与药用辅料组成药物制剂。

5、如权利要求4所述的黄芩总黄酮苷元提取物的应用，其特征在于，所述药物制剂是片剂、颗粒剂、胶囊剂或软膏剂。

6、一种权利要求2所述的黄芩单体黄酮苷元的应用，其特征在于，所述的黄芩素、汉黄芩素或千层纸素-A分别用作药学活性成分与药用辅料组成药物制剂。

7、如权利要求6所述的黄芩单体黄酮苷元的应用，其特征在于，所述药物制剂是片剂、颗粒剂、胶囊剂或软膏剂。

8、权利要求1所述的黄芩总黄酮苷元提取物或权利要求2所述的黄芩单体黄酮苷元的应用，用于制备治疗肝疾病和艾滋病的药物，其中肝疾病包括肝癌或乙型肝炎。