CN101008022B - 一种黄芩黄酮总苷元提取物的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种黄芩黄酮总苷元提取物的制备方法，包括以下步骤：将黄芩药材粉碎，加水4～10倍，加热至40～70℃并保温5～24小时，进行酶解反应，反应完全后过滤，弃去滤液，将药渣用乙醇回流提取，提取液回收乙醇，析出沉淀，过滤后干燥，即得黄芩黄酮总苷元提取物产品。本方法可随酶解反应的温度调整反应时间，以得到最佳的酶解效果，提高药材的利用率；由于黄酮苷元难溶于水，将酶解反应完成后的水解液过滤，可以除去水溶性杂质，便于后续的黄酮苷元的提取纯化。本方法收率较高，工艺简便，成本低廉，适用于工业化生产。

Description

一种黄芩黄酮总苷元提取物的制备方法

技术领域

本发明涉及中药有效成分的制备方法，具体地说，本发明涉及黄芩黄酮总苷元(或称黄芩总苷元、黄芩总黄酮苷元)的提取工艺。

背景技术

黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)是中国药典所收载的常用中药，具有清热、泻火、解毒之功效。已有研究表明，黄芩主要有效成分为黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素(黄芩苷元)及汉黄芩素等黄酮类化合物，黄芩素的作用比黄芩苷强(胡世林等：《中国药学杂志》2001，36(11)：728)，且是上述4种黄酮中抗氧化作用最强的成分。《中药现代研究与应用》(郑虎占等主编，北京学苑出版社1998年1月，p.3960)中曾报道了对黄芩苷和黄芩素的药理学作用的比较研究，结果证明黄芩素的作用强于黄芩苷。此外，黄芩苷口服吸收率很低，仅约4～5％(赵玉男等：《中国中医基础医学杂志》2002，8(9)：59)，一般来说苷元的生物利用度高于苷。因此，将黄芩黄酮苷类成分转化为苷元具有更好的药效作用和广泛的医疗用途。

公开号CN1404831的中国专利报道黄芩总苷元的提取方法为：黄芩药材粉碎成粗粉，加水润湿，常温保持24小时后，用乙醇回流提取三次，减压回收乙醇、浓缩，拌以硅胶或聚酰胺，经硅胶柱层析或聚酰柱层析分离得到黄芩总苷元提取物。其不足之处在于：(1)在常温(10～30℃)条件下，于24小时内黄芩苷水解不完全，药材利用率低；(2)提取工艺复杂，经硅胶柱层析或聚酰柱层析分离得到黄芩总苷元提取物，工业化生产成本高。

公开号CN1709885的中国专利申请公开黄芩总黄酮苷元的提取方法为：黄芩粉碎，在每100克黄芩粉末中加入41～46℃蒸馏水110～120毫升搅拌均匀(湿润)，加热至41～46℃并保温4.1～4.8小时进行酶解反应，取出，热风干燥，再用无水乙醇回流提取。其不足之处在于：(1)于41～46℃保温4.1～4.8小时的条件下酶解反应不完全，药材利用率低；(2)在中药制药领域，中药提取常用乙醇浓度≤95％，便于回收乙醇循环使用，一般不使用无水乙醇回流提取中药材；此外，该方法尚需将酶解后的药材烘干，再用无水乙醇回流提取，增加了生产工序和能源消耗，因此，该提取工艺成本高，工业化生产可行性差。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种工业化可行、药材利用率高、生产成本低廉、提取物纯度较高的黄芩黄酮总苷元提取物的制备方法。

本发明所述的黄芩黄酮总苷元提取物的制备方法，其主要步骤包括：

一、将黄芩药材粉碎；

二、将经粉碎的药材加水后加热并保温，进行酶解反应；

三、过滤，弃去滤液；

四、将药渣用乙醇回流提取；

五、将提取液回收乙醇，析出沉淀，将沉淀过滤、干燥，即得黄芩黄酮总苷元提取物。

该提取物主要成分为黄芩素、汉黄芩素和/或千层纸素A、可加黄芩素等黄芩黄酮苷元成分。

黄芩中黄酮苷类成分和黄芩酶并存，当黄芩药材在水中加热时，二者发生酶解反应，黄酮苷类成分被酶水解为黄酮苷元和葡萄糖醛酸；黄酮苷元(黄芩素)易溶于醇而难溶于水，因此，通过将水解液过滤，弃去滤液，可以除去水溶性杂质；然后以乙醇为溶媒，回流提取黄芩药材酶解后的药渣，即可提取得到纯度较高的黄酮苷元。

从提高药材利用率和提取物纯度同时兼顾工业化生产降低成本、减少工序、提高效率的角度考虑，上述制备方法可以优化。在步骤一，将黄芩药材粉碎为过10～20目筛的粗粉为宜。在步骤二，加入的水的体积毫升数为黄芩药材重量克数的4～10倍为宜，5～8倍更佳；然后加热至40～70℃并保温5～24小时，更适宜的是加热至55～65℃并保温8～15小时。在步骤四，回流提取所用的乙醇浓度为50～95％，最好是选用浓度为70～90％的乙醇。另外，在步骤四，回流提取所用的乙醇的体积毫升数一般为药材重量克数的3～12倍，以6～9倍为更佳；回流提取次数为2～4次，每次0.5～2.5小时。(本说明书中的乙醇浓度为体积百分数，所提到的其它百分数均为质量百分数。)

通过大量的实验研究，在考虑工业生产成本的情况下，上述制备方法可进一步优化为如下具体步骤：

一、将黄芩药材粉碎为过10目筛的粗粉；

二、向粉碎后的药材中加入体积毫升数为药材重量克数6倍的水，然后加热至60℃并保温10小时；

三、待反应完全后过滤，弃去滤液；

四、将去除滤液后的药渣用乙醇回流提取，在药渣中加入70％浓度的乙醇，乙醇的体积毫升数为药材重量克数的8倍，回流提取2次，每次1～2小时；

五、过滤，合并乙醇提取液，减压回收乙醇至无醇味，放冷，析出沉淀，将沉淀过滤、干燥，得黄芩黄酮总苷元提取物。

在不主要考虑成本的情况下，前述制备方法可优化为如下具体步骤：

一、将黄芩药材粉碎为过20目筛的粗粉；

二、向粉碎后的药材中加入体积毫升数为药材重量克数9倍的水，然后加热至60℃并保温12小时；

三、待反应完全后过滤，弃去滤液；

四、将去除滤液后的药渣用乙醇回流提取，在药渣中加入90％浓度的乙醇，

乙醇的体积毫升数为药材重量克数的10倍，回流提取3次，每次1小时；

五、过滤，合并乙醇提取液，减压回收乙醇至无醇味，放冷，析出沉淀，将沉淀过滤、干燥，得黄芩黄酮总苷元提取物。

本发明所述的黄芩黄酮总苷元提取物的制备方法，其主要的有益效果在于：(1)可灵活选择酶解反应的温度和时间搭配，如较低温度加热(40℃)可延长水解时间(24小时)，较高温度加热(70℃)可缩短水解时间(5小时)，使黄芩黄酮苷类成分水解完全，提高药材的利用率；(2)黄酮苷类成分水解后生成黄酮苷元，不溶于水，水解液过滤可除去水溶性杂质，便于后续的黄酮苷元的提取纯化；(3)用于回流提取的乙醇不局限于无水乙醇，且乙醇回流提取之前不需要干燥等步骤，使本工艺更适用于工业化生产；(4)步骤简单方便，工业化生产工艺可行，成本低廉；(5)收率较高，使用本制备方法，黄芩黄酮总苷元提取物的收率约为12～18％，紫外-可见分光光度法测定总黄酮含量大于70％，高效液相色谱法测定黄芩素含量大于30％。

在本发明的研究过程中，进行了大量的实验工作，部分详细试验结果如下：

1、室温条件下黄芩苷水解效果的考察

将黄芩药材粉碎成细粉，加适量水湿润，于室温(22～26℃)条件下放置，不同时间点取样，于100℃烘干，HPLC法测定各样品中黄芩素和黄芩苷的含量，结果见表1，表明室温条件下黄芩苷水解不完全。

表1 室温条件下黄芩苷水解效果的考察

水解时间(h)	0	2	4	8	12	16	20	24
									黄芩苷含量(％)	14.6	13.9	13.1	11.6	10.3	9.2	8.2	7.4
黄芩素含量(％)	0.7	1.1	1.5	2.4	3.1	3.8	4.3	4.7

2、不同水解温度和时间对黄芩苷水解效果的影响

黄芩药材细粉加水湿润，分别于40℃、60℃、70℃水解，不同时间点取样，于100℃烘干，HPLC法测定各样品中黄芩素的含量，结果见表2，表明水解温度和时间对黄芩素的含量有显著影响。

表2 不同水解温度和时间对黄芩苷水解效果的影响(黄芩素含量％)

3、药材粉碎程度及水解时间对黄芩苷水解效果的影响

将黄芩药材粉碎过10目筛、切片和原药材，各加水6倍，加热至60℃保温水解5小时、10小时和24小时，过滤，于100℃烘干，HPLC法测定各样品中黄芩素和黄芩苷的含量，结果见表3，表明药材前处理对黄芩苷水解有显著影响，以黄芩药材粉碎过10目筛的粗粉水解效果为佳。

表3 药材粒度大小对黄芩苷水解效果的影响(％)

4、黄芩黄酮总苷元提取条件研究

由于黄芩黄酮苷元(黄芩素)易溶于醇而难溶于水，因此，以乙醇为溶媒，回流提取酶解后黄芩药材中黄芩黄酮总苷元。对黄芩素提取率影响相对较大的因素——乙醇浓度(A₁：50％、A₂：70％、A₃：90％)、用量(B₁：6倍、B₂：8倍、B₃：10倍)、提取次数(C₁：1次、C₂：2次、C₃：3次)及回流时间(D₁：1.0h、D₂：1.5h、D₃：2.0h)进行考察，按照四因素三水平正交设计原理进行实验，试验结果表明：上述各因素对黄芩素提取率的影响程度为A＞C＞B＞D，最佳工艺条件为：A₃B₃C₃D₁；因素A和C有显著性影响，因素B和D无显著性影响。从节约能耗、节省时间和降低成本等生产实际考虑，乙醇浓度、用量和回流次数均选择次佳水平(A₂、B₂和C₂)，所以确定黄芩素提取工艺为A₂B₂C₂D₁，即酶解后的黄芩药材用8倍量70％乙醇回流提取2次，每次1小时。

以下通过具体实施方式的实例对本发明作进一步详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均包括在本发明的范围内。

具体实施方式

实施例1

取黄芩药材10公斤粉碎过10目筛，加水60升，加热至60℃并保温10小时；过滤，弃去滤液，将去除滤液后的药渣用乙醇回流提取，在药渣中加入70％浓度的乙醇80升，回流提取2次，每次1小时；过滤，合并乙醇提取液，减压回收乙醇至无醇味，放冷，析出沉淀，将沉淀过滤、干燥，得黄芩黄酮总苷元提取物1.7公斤，其中黄芩素含量为35.4％，总黄酮含量为75.1％。

实施例2

取黄芩药材10公斤粉碎过15目筛，加水50升，加热至65℃并保温8小时；过滤，弃去滤液，将去除滤液后的药渣用乙醇回流提取，在药渣中加入85％浓度的乙醇60升，回流提取2次，每次2.5小时；过滤，合并乙醇提取液，减压回收乙醇至无醇味，放冷，析出沉淀，将沉淀过滤、干燥，得黄芩黄酮总苷元提取物1.6公斤，其中黄芩素含量为35.8％，总黄酮含量为76.0％。

实施例3

取黄芩药材10公斤粉碎过10目筛，加水80升，加热至55℃并保温15小时；过滤，弃去滤液，将去除滤液后的药渣用乙醇回流提取，在药渣中加入90％浓度的乙醇50升，回流提取3次，每次0.5小时；过滤，合并乙醇提取液，减压回收乙醇至无醇味，放冷，析出沉淀，将沉淀过滤、干燥，得黄芩黄酮总苷元提取物1.5公斤，其中黄芩素含量为36.5％，总黄酮含量为76.3％。

实施例4

取黄芩药材10公斤粉碎过20目筛，加水70升，加热至50℃并保温20小时；过滤，弃去滤液，将去除滤液后的药渣用乙醇回流提取，在药渣中加入80％浓度的乙醇90升，回流提取2次，每次1.5小时；过滤，合并乙醇提取液，减压回收乙醇至无醇味，放冷，析出沉淀，将沉淀过滤、干燥，得黄芩黄酮总苷元提取物1.7公斤，其中黄芩素含量为35.7％，总黄酮含量为75.4％。

实施例5

取黄芩药材10公斤粉碎过6目筛，加水40升，加热至40℃并保温24小时；过滤，弃去滤液，将去除滤液后的药渣用乙醇回流提取，在药渣中加入95％浓度的乙醇30升，回流提取4次，每次2小时；过滤，合并乙醇提取液，减压回收乙醇至无醇味，放冷，析出沉淀，将沉淀过滤、干燥，得黄芩黄酮总苷元提取物1.3公斤，其中黄芩素含量为37.1％，总黄酮含量为77.8％。

实施例6

取黄芩药材10公斤粉碎过40目筛，加水100升，加热至70℃并保温5小时；过滤，弃去滤液，将去除滤液后的药渣用乙醇回流提取，在药渣中加入50％浓度的乙醇120升，回流提取3次，每次1小时；过滤，合并乙醇提取液，减压回收乙醇至无醇味，放冷，析出沉淀，将沉淀过滤、干燥，得黄芩黄酮总苷元提取物1.4公斤，其中黄芩素含量为33.0％，总黄酮含量为74.2％。

实施例7

取黄芩药材10公斤粉碎过20目筛，加水90升，加热至60℃并保温12小时；过滤，弃去滤液，将去除滤液后的药渣用乙醇回流提取，在药渣中加入90％浓度的乙醇100升，回流提取3次，每次1小时；过滤，合并乙醇提取液，减压回收乙醇至无醇味，放冷，析出沉淀，将沉淀过滤、干燥，得黄芩黄酮总苷元提取物1.8公斤，其中黄芩素含量为36.3％，总黄酮含量为76.5％。

Claims (8)

1.一种黄芩黄酮总苷元提取物的制备方法，包括以下步骤：

一、将黄芩药材粉碎；

二、将经粉碎的药材加入体积毫升数为药材重量克数4～10倍的水，然后加热至55～70℃的温度，并保温5～24小时，进行酶解反应；

三、过滤，弃去滤液；

四、将药渣用浓度为50～95％的乙醇回流提取；

五、将提取液回收乙醇，析出沉淀，将沉淀过滤、干燥，即得黄芩黄酮总苷元提取物。

2.如权利要求1所述的黄芩黄酮总苷元提取物的制备方法，其特征在于：步骤二中，加入体积毫升数为药材重量克数5～8倍的水，然后加热至55～65℃并保温8～15小时。

3.如权利要求1所述的黄芩黄酮总苷元提取物的制备方法，其特征在于：步骤一中，黄芩药材粉碎为过10～20目筛的粗粉。

4.如权利要求1所述的黄芩黄酮总苷元提取物的制备方法，其特征在于：步骤四中，回流提取所用的乙醇浓度为70～90％。

5.如权利要求1～4任一所述的黄芩黄酮总苷元提取物的制备方法，其特征在于：步骤四中，回流提取所用的乙醇的体积毫升数为药材重量克数的3～12倍，回流提取次数为2～4次，每次0.5～2.5小时。

6.如权利要求5所述的黄芩黄酮总苷元提取物的制备方法，其特征在于：步骤四中，回流提取所用的乙醇的体积毫升数为药材重量克数的6～9倍。

7.如权利要求1～4任一所述的黄芩黄酮总苷元提取物的制备方法，其步骤为：

一、将黄芩药材粉碎为过10目筛的粗粉；

二、向粉碎后的药材中加入体积毫升数为药材重量克数6倍的水，然后加热至60℃并保温10小时；

三、待反应完全后过滤，弃去滤液；

四、将去除滤液后的药渣用乙醇回流提取，在药渣中加入70％浓度的乙醇，乙醇的体积毫升数为药材重量克数的8倍，回流提取2次，每次1～2小时；

五、过滤，合并乙醇提取液，减压回收乙醇至无醇味，放冷，析出沉淀，将沉淀过滤、干燥，得黄芩黄酮总苷元提取物。

8.如权利要求1～4任一所述的黄芩黄酮总苷元提取物的制备方法，其步骤为：

一、将黄芩药材粉碎为过20目筛的粗粉；

二、向粉碎后的药材中加入体积毫升数为药材重量克数9倍的水，然后加热至60℃并保温12小时；

三、待反应完全后过滤，弃去滤液；

四、将去除滤液后的药渣用乙醇回流提取，在药渣中加入90％浓度的乙醇，乙醇的体积毫升数为药材重量克数的10倍，回流提取3次，每次1小时；

五、过滤，合并乙醇提取液，减压回收乙醇至无醇味，放冷，析出沉淀，将沉淀过滤、干燥，得黄芩黄酮总苷元提取物。