WO2019088446A1 - 산수국 추출물을 함유하는 자외선에 의한 인간 피부세포 손상 개선용 조성물 - Google Patents

산수국 추출물을 함유하는 자외선에 의한 인간 피부세포 손상 개선용 조성물 Download PDF

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이근석
김현재
이선희
김지형
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Definitions

  • the present invention relates to a composition for improving human epidermal and dermal cell damage caused by UV-B exposure of skin containing an extract of Scr. .
  • Skin aging can be classified into intrinsic aging and extrinsic aging depending on factors. Endogenous aging is caused by changes in physiological functions of skin epidermis and dermis according to age. Exogenous aging is known to be caused by changes in physiological functions of skin caused by environmental pollution, exposure to ultraviolet rays, and stress. Oxidative stress induced by UV among these mechanisms of aging increases free radicals in the body and increases the activity of MMP-1 which degrades collagen and hyaluronic acid Decomposition causes skin epidermal and dermal damage by increased activity of hyaluronidase.
  • Plant-derived materials have been used for a long time because of their excellent safety, and in particular, functional materials based on plant and herbal ingredients used in the private sector or used in oriental medicine have been actively developed in the country.
  • Hydrangea serrata is a broad-leaved tall tree of the submandibular gland, and its leaf parts are indicated as edible parts in food raw materials notified in the place of shipment. It is used as a treatment for chronic bronchitis, warts, genomes, and anti-inflammatory drugs.
  • Korean Patent Laid-Open Publication No. 2004-0063874 discloses a composition containing an extract of Saccharomyces cerevisiae having hyperglycemia and hyperlipidemia inhibitory activity.
  • Patent Document 1 KR10-2004-0063874 A
  • Patent Document 2 KR10-2005-0056569 A
  • Non-Patent Document 1 WOO, M. S., et al. Comparison of skin elasticity test results from the Ballistometer® and Cutometer®Skin Research and Technology, 2014, 20.4: 422-428.
  • Non-Patent Document 2 IMOKAWA, Genji. Mechanism of UVB-induced wrinkling of the skin: paracrine cytokine linkage between keratinocytes and fibroblasts leading to the stimulation of elastase. In: Journal of Investigative Dermatology Symposium Proceedings. Nature Publishing Group, 2009. p. 36-43.
  • composition for improving human epidermal cell and dermal cell injury by ultraviolet rays which comprises an extract of Scr.
  • composition for preventing and ameliorating damage to human skin cells by ultraviolet rays containing an extract of hydrangea serrata as an active ingredient.
  • the present invention provides a composition for preventing and / or ameliorating human skin cell damage by ultraviolet light, wherein the human skin cell damage by ultraviolet rays is human epidermal cell and dermal cell damage caused by UV-B exposure.
  • the experimental example of the present invention not only restores the cell damage caused by UV-B in human epidermal cells and dermis cells, but also increases the secretion of hyaluronic acid and suppresses the secretion of MMP-1, .
  • " damage " of human skin cells includes death of human skin cells due to ultraviolet rays, damage of skin cell DNA, increase of reactive oxygen species, increase of lipid peroxidation, and the symptoms include erythema, Deposition, photoaging, skin cancer, and the like.
  • " prevention " of damage refers to any action that inhibits or delays skin cell damage by the ultraviolet light.
  • " improvement " of damage refers to any action that alleviates damage to the skin cells caused by the ultraviolet rays or reduces the degree of symptoms.
  • the extract can be extracted with any solvent conventionally used for extracting natural plants, and is preferably extracted with water, an alcohol having 1 to 4 carbon atoms, or a mixed solvent thereof .
  • the alcohol may be at least one selected from the group consisting of ethanol, methanol, isopropanol, and butanol, preferably ethanol, more preferably a fermented alcohol.
  • the extract may be contained in an amount of 0.001 to 80.0% by weight, preferably 5 to 20% by weight, based on the total weight of the composition.
  • the above conditions show a high yield and excellent recovery from UV-B.
  • the UV light may be UV-B.
  • the composition has at least one form selected from the group consisting of tablets, granules, pills, capsules, liquids, jellies or gums, and is characterized in that it is for oral consumption.
  • the composition has at least one formulation selected from the group consisting of a softening agent, a nutritional lotion, a nutritional cream, a water cream, a spot, a gel lotion or an ointment.
  • composition of the present invention comprising the extract of Scutellaria baicalensis as an active ingredient can be used for various purposes, for example, as a cosmetic composition, a pharmaceutical composition, a health functional food composition and the like.
  • the cosmetic composition according to the present invention may further comprise at least one cosmetically acceptable carrier mixed with a cosmetic composition for general skin.
  • a cosmetic composition for general skin examples include oil, water, a surfactant, a moisturizer, a lower alcohol, , A chelating agent, a coloring agent, a preservative, a perfume, and the like may be appropriately compounded, but the present invention is not limited thereto.
  • the pharmaceutical composition or health functional food composition according to the present invention may further comprise an appropriate carrier, excipient, diluent or the like conventionally used in the production of a pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent is selected from the group consisting of lactose, dextrose, sucrose, calcium silicate, cellulose, methylcellulose, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, Benzoate, talc, magnesium stearate, and mineral oil.
  • the present invention is not limited thereto.
  • the pharmaceutically effective amount and the effective dose of the pharmaceutical composition according to the present invention may vary depending on the formulation method, administration method, administration time and / or administration route of the pharmaceutical composition.
  • the type and degree of the reaction to be achieved by the administration of the pharmaceutical composition the kind of the subject to be administered, age, weight, general health condition, symptom or degree of disease, sex, diet, excretion, The components of the drug or other composition used in conjunction therewith, and the like, and similar factors well known in the medical arts.
  • One of ordinary skill in the art can readily determine and prescribe dosages effective for the desired treatment.
  • Administration of the pharmaceutical composition according to the present invention can be administered once a day, or divided into several doses. Accordingly, the dosage is not limited in any way to the scope of the present invention.
  • a preferred dose of the pharmaceutical composition according to the present invention may be from 1 mg / kg to 1, OOO mg / kg per day.
  • the composition containing the extract of the present invention of the present invention promotes the activity of SOD (superoxide dismutase), inhibits ROS caused by UV in skin cells, It is suitable as a composition for skin care by restoring the damage.
  • the composition containing the extract of the present invention of the present invention increases secretion of hyaluronic acid and inhibits secretion of MMP-1, thereby preventing skin aging caused by ultraviolet rays and maintaining skin elasticity. This is a safe material and can be usefully used in food composition field or cosmetic field.
  • the extract of Scutellariae Radix contained in the composition of the present invention is prepared by the following procedure. Firstly, a 1 year cultivating station, which is a native species in Jeju Island, was purchased, washed thoroughly with distilled water, and completely dried in a cool, sunny place until there was no change in weight. Thereafter, the completely dried dried material was pulverized by using a homogenizer to obtain pulverized products, and 400 g of an extraction solvent was prepared by mixing ethanol: distilled water at a weight ratio of 7: 3, and then 50 g of the pulverized product was added. At this time, the mixing ratio of the pulverized material to the extraction solvent was 1: 8 by weight.
  • the extraction solvent mixed with the pulverized product was put into a shaking constant-temperature water bath and stirred at 50 DEG C for 2 hours.
  • the material obtained by extraction was insoluble matter removed at room temperature using Wattman (No. 2) extraction solvent filter paper. Thereafter, the solvent was completely removed while concentrating under reduced pressure in a distillation apparatus equipped with a cooling condenser. After extracting the extracts, the extraction yield was 20%.
  • Example 1 The extract obtained in Example 1 was assayed for cytotoxicity against skin cells.
  • HaCaT keratinocyte was used as keratinocyte and HS68 fibroblast was used as dermal cell.
  • each cell of 1.0 ⁇ 10 4 cells was placed on a 96-well plate and allowed to adhere for 24 hours to stabilize the cells at a concentration of 0, 5, 25, 125 ppm ( ⁇ g / ml)
  • the ethanol extract of mountain water plant was treated. After 24 hours, cell viability was measured by MTT assay.
  • MTT assay is a method for measuring the amount of formazan formed from MTT reduced by mitochondria of living cells.
  • Each cell was treated with 50 mg of 5 mg / ml MTT solution and incubated for 4 hours. The solution was completely removed and the plate dissolved in DMSO was measured at 540 nm absorbance.
  • Example 1 The extracts obtained in Example 1 were measured for damage to skin cells exposed to UV-B.
  • HaCaT keratinocyte was used as keratinocyte and HS68 fibroblast was used as dermal cell.
  • 1.0 x 10 4 cells of each cell were dispensed on 96-well plates, stuck for 24 h, stabilized and irradiated with UV-B at 15 mJ / cm 2 .
  • the cells were treated with ethanolic extracts of Oryzias latipes at concentrations of 0, 5, 25 and 125 ppm ( ⁇ g / ml) and cell viability was measured by MTT assay.
  • MTT assay is a method for measuring the amount of formazan formed from MTT reduced by mitochondria of living cells. More specifically, 50 ⁇ l of 5 mg / ml MTT solution was added to each of the cells and incubated for 4 hours. The solution was completely removed and the plate dissolved in DMSO was measured at 540 nm absorbance.
  • Example 1 The extract obtained in Example 1 was assayed for increasing hyaluronic acid in dermal HS68 fibroblast. To confirm that the hyaluronic acid could be increased by the treatment of the material, 1.0 ⁇ 10 5 cells of each of the cells were dispensed on a 24-well plate and stuck for 24 h and then stabilized at 0, 5, 25, 125 ppm ( ⁇ g / ml) and cultured for 24 hours in a medium supplemented with ethanol extract of mountain water. The degree of secretion of hyaluronic acid was measured using a TECO r Hyaluronic Acid PLUS ELISA Kit (TE 1018-2, TECO Medical Group, US) in the supernatant treated with the substance.
  • TECO r Hyaluronic Acid PLUS ELISA Kit TE 1018-2, TECO Medical Group, US
  • MMP-1 could be increased in the epidermal cell HaCaT Keratinocyte.
  • MMP-1 could be reduced by treatment with the material, 1.0 ⁇ 10 5 cells were seeded on 24-well plates for 24 h and stabilized by attachment at 0, 5, 25, 125 ppm ⁇ g / ml), and cultured for 24 hours. After that, the secretion level of MMP-1 was measured in the supernatant treated with MMP-1 Human ELISA Kit (ab100603, abcam, US).
  • Example 1 The extracts obtained in Example 1 were mixed with the components shown in Table 5 according to a conventional tablet preparation method and tableted to prepare tablets.
  • Example 1 The ingredients obtained in Example 1 were mixed with the ingredients shown in Table 6 according to a conventional capsule preparation method and filled in gelatin capsules to prepare capsules.
  • Example 1 The ingredients obtained in Example 1 were mixed with the ingredients listed in Table 7 according to the preferred beverage preparation method, and filled into bottles or pouches to prepare a liquid preparation.
  • Example 1 The extracts obtained in Example 1 were mixed with the ingredients shown in Table 8 according to the preferred jelly preparation method and filled into three-sided jelly.
  • Example 1 Raw material content The extract of Example 1 1.0 Sitosterol 4.0 Polyglyceryl 2-olate 3.0 3.0 Setares-4 2.0 cholesterol 3.0 Dicetyl phosphate 0.4 Concentrated glycerin 5.0 Sunflower oil 22.0 Carboxyvinyl polymer 0.5 Triethanolamine 0.5 antiseptic a very small amount Spices a very small amount Purified water Balance
  • composition ratio is generally prepared by mixing suitable components to formulate the formulation.
  • the blending ratio and the raw materials may be arbitrarily changed as necessary.
  • the extract of the present invention was stable in all formulation test conditions and therefore had no problem in the stability of the formulation.

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Abstract

본 발명은 산수국 추출물을 유효성분으로 함유하는 자외선에 의한 인간 표피세포 및 진피세포 손상 개선용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 본 발명의 조성물은 인간 표피세포 및 진피세포에서 UV-B에 의한 세포 손상을 복구시킬 뿐만 아니라, 히알우론산의 분비를 증가시키고 MMP-1의 분비를 억제시킴으로써, UV-B에 인한 세포손상 개선을 나타낼 수 있다. 따라서 안전한 소재로서 산수국 추출물은 식품 조성물 분야 또는 화장품 분야에 유용하게 사용 될 수 있다.

Description

산수국 추출물을 함유하는 자외선에 의한 인간 피부세포 손상 개선용 조성물
본 발명은 자외선에 의한 인간 피부세포 손상 개선용 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 산수국 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부의 UV-B노출에 의해 생기는 인간 표피세포 및 진피세포 손상을 개선하는 조성물에 관한 것이다.
피부노화는 요인에 따라 내인성 노화 (Intrinsic aging)와 외인성 노화 (Extrinsic aging)로 구분할 수 있다. 내인성 노화는 나이에 따른 피부 표피 및 진피의 생리적 기능 변화가 원인이며, 외인성 노화는 대기오염, 자외선 노출, 스트레스 등의 환경으로부터 발생하는 피부의 생리적 기능 변화가 원인으로 알려져 있다. 이러한 노화의 메커니즘 중 UV에 의해 유도되는 산화적 스트레스 (Oxidative Stress)는 체내의 자유라디칼(Free Radical)을 증가시키고, 콜라겐(Collagen)을 분해하는 MMP-1의 활성 증가 및 히아루론산 (Hyaluronic acid)을 분해는 히아루론라제(Hyaluronidase)의 활성 증가로 피부 표피 및 진피 손상을 야기한다.
일상생활에서 우리는 햇빛에 항상 노출되어 있으며, 특히 UV-B 노출로 인해 발생하는 세포의 손상 및 피부암 유발은 일상생활에서 피할 수 없는 요소이다.
이에 따른 UV 노출에 의한 피부세포손상 억제에 대한 기전 연구가 활발히 진행되어 왔으며 생화학적 효능, 효과를 나타내는 화장료 및 건강기능식품, 의약품에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다. 연구수준의 발달 및 기술력 증가로 실질적인 효능, 효과를 가진 소재들이 주 연구 대상이다.
식물유래 소재는 안전성 측면에서 우수하여 오랫동안 이용되었으며, 특히 국내의 경우 민간에서 이용되거나 혹은 한방에서 이용되는 식물 및 생약성분을 주로 한 기능성 소재 개발이 활발히 이루어지고 있다.
산수국(Hydrangea serrata) 은 범의귀과의 넓은 잎 작은 키 나무로 식약처에서 고시한 식품원재료에 잎 부위가 식용가능부위로 명시되어 있다. 한방에서는 생약명으로 칠엽담이라고 하여 만성기관지염, 지해, 거담, 소염해독 등의 치료에 예로부터 사용되고 있다. 한국공개특허 제2004-0063874호에서는 고혈당 및 고지혈증 억제 활성을 갖는 감차산수국 추출물을 함유한 조성물이 개시되었다.
그러나, 산수국의 자외선에 의한 인간 표피세포 및 진피세포 손상 억제 대한 직접적인 기전 연구가 이루어지지 않은 실정이다. 따라서 본 발명자들은 상기 추출물들이 가지는 자외선에 의한 항산화 효소 활성과 인간 표피세포 및 진피세포 손상 억제에 대한 직접적인 기초 효능 연구를 수행하였다.
이에, 본 발명자들은 상기 종래기술들의 문제점들을 극복하기 위하여 예의 연구노력한 결과, 산수국(Hydrangea serrata)의 추출물을 유효성분으로 함유하는 인간 표피세포 및 진피세포에서 항산화효소 활성을 통한 ROS제거 및 UV-B에 의한 피부 손상을 엑제함으로써 피부개선효과를 나타낼 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
(특허문헌 1) KR10-2004-0063874 A
(특허문헌 2) KR10-2005-0056569 A
[비특허문헌]
(비특허문헌 1) WOO, M. S., et al. Comparison of skin elasticity test results from the Ballistometer®and Cutometer®Skin Research and Technology, 2014, 20.4: 422-428.
(비특허문헌 2) IMOKAWA, Genji. Mechanism of UVB-induced wrinkling of the skin: paracrine cytokine linkage between keratinocytes and fibroblasts leading to the stimulation of elastase. In: Journal of Investigative Dermatology Symposium Proceedings. Nature Publishing Group, 2009. p. 36-43.
따라서, 본 발명의 주된 목적은 산수국 추출물을 유효성분으로 함유하는 자외선에 의한 인간 표피세포 및 진피세포 손상 개선용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 산수국(Hydrangea serrata)의 추출물을 유효성분으로 함유하는 자외선에 의한 인간 피부세포 손상 예방 및 개선용 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 자외선에 의한 인간 피부세포 손상은 UV-B 노출에 의해 생기는 인간 표피세포 및 진피세포 손상인 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 인간 피부세포 손상 예방 및 개선용 조성물을 제공한다. 본 발명의 실험예에서는 인간 표피세포 및 진피세포에서 UV-B에 의한 세포 손상을 복구시킬 뿐만 아니라, 히알우론산의 분비를 증가시키고 MMP-1의 분비를 억제시킴으로써 UV-B에 의한 세포손상 복구 효과가 있음을 증명하였다.
본 발명에 있어서, 인간 피부세포의 “손상”이란 자외선에 의한 인간 피부세포의 사멸, 피부 세포 DNA 손상, 활성산소종 증가, 지질과산화 증가 등을 포함하며, 그 증상으로는 홍반, 일광화상, 색소침착, 광노화, 피부암 등을 포함할 수 있다. 또한, 손상의“예방”은 상기 자외선에 의한 피부세포의 손상을 억제시키거나 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 또한, 손상의 “개선”은 상기 자외선에 의한 피부세포의 손상 상태의 완화 또는 증상의 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에 있어서, 상기 추출물은 종래에 천연식물을 추출하기 위하여 이용된 어떠한 용매로로 추출될 수 있으며, 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출되는 것을 특징으로 한다. 상기 알코올은 에탄올, 메탄올, 이소프로판올, 및 부탄올 등으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상이 사용될 수 있으며, 바람직하게는 에탄올이 사용될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 발효주정이 사용될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 추출물은 조성물 총 중량대비 0.001 내지 80.0 중량%로 포함할 수 있으며, 바람직하게는 5 내지 20 중량% 포함하는 것을 특징으로 한다. 또한 상기 조건에서 높은 수율과 뛰어난 UV-B로 부터의 복구 효능을 나타냄을 확인할 수 있었다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 자외선은 UV-B일 수 있다.
본 발명의 실험예에 따르면, 산수국 에탄올 추출물이 피부의 UV-B노출에 의해 생기는 손상을 개선할 수 있음을 알 수 있다(실험예 1, 2 참조).
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 정제, 과립제, 환제, 캡슐제, 액상형, 젤리 또는 껌으로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 제형을 갖는 것으로서, 구강 섭취용 인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 유연화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 수분 크림, 스팟, 젤 로션 또는 연고로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 제형을 갖는 것으로서, 피부 외용제용 인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 산수국 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 다양한 용도로 사용될 수 있으며, 예컨대 화장료 조성물, 약학적 조성물, 건강기능 식품 조성물 등으로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면 활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 약학적 조성물 또는 건강기능식품 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제, 또는 희석제 등을 더 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 또는 희석제는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 마그네슘스테아레이트, 및 광물유 등으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상이 포함될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명에 따른 약학적 조성물의 약학적 유효량, 유효 투여량은 약학적 조성물의 제제화 방법, 투여 방식, 투여시간 및/또는 투여 경로 등에 의해 다양할 수 있다. 또한, 상기 약학 조성물의 투여로 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 투여 대상이 되는 개체의 종류, 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 질병의 증세나 정도, 성별, 식이, 배설, 해당 개체에 동시 또는 이시에 함께 사용되는 약물 기타 조성물의 성분 등을 비롯한 여러 인자 및 의약 분야에서 잘 알려진 유사 인자에 따라 다양해질 수 있다. 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 목적 하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다. 본 발명에 따른 약학 조성물의 투여는 하루에 1회 투여될 수 있고, 수회에 나누어 투여될 수 있다. 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명에 따른 약학적 조성물의 바람직한 투여량은, 1일 1 mg/kg 내지 1,OOO mg/kg일 수 있다.
이상 설명한 바와 같이, 본원발명의 산수국 추출물을 함유하는 조성물은 과산화물제거효소(SOD, Superoxide dismutase)의 활성을 촉진시켜 피부세포에서 UV에 의해 발생하는 ROS를 저해하며, 또한 UV에 의해 발생하는 세포손상을 복구함으로써 피부 미용을 위한 조성물로 적합하다. 또한, 본원발명의 산수국 추출물을 함유하는 조성물은 히알우론산의 분비를 증가시키고 MMP-1의 분비를 억제시킴으로써 자외선에 의한 피부노화를 방지하고 피부탄력을 유지시킬 수 있다. 이는 안전한 소재로서 산수국 추출물이 식품 조성물 분야 또는 화장품 분야에 유용하게 사용 될 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.
실시예 1: 에탄올을 이용한 추출물의 제조
본 발병의 조성물에 함유되는 산수국 추출물은 다음과 같은 과정에 의해 제조된다. 우선, 제주도 내에서 자생하는 1년생 산수국을 구입하여 증류수로 깨끗이 씻은 다음, 햇빛이 없는 서늘한 곳에서 중량의 변화가 없을 때까지 완전히 건조시켰다. 그 후, 완전히 건조된 건조물을 균질화기를 사용하여 분쇄하여 분쇄물들을 얻은 다음 에탄올 : 증류수를 7 : 3의 중량비로 혼합하여 추출 용매 400g 씩을 준비 한 후, 상기 분쇄물을 50g 첨가하였다. 이때, 분쇄물과 추출용매의 혼합비율은, 중량비로 1 : 8로 하였다. 다음으로, 상기 분쇄물과 혼합한 추출 용매를 진탕 항온 수조에 넣어서 50 ℃, 2시간 동안 교반추출 하였다. 추출에 의해 얻어진 물질은 상온에서 와트만(No 2.) 추출 용매 여과지를 사용하여 불용성 물질을 제거하였다. 그 후, 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 감압농축 하면서 용매를 완전히 제거하였다. 산수국 추출물을 완전히 건조 후 추출 수율을 측정한 결과 20%의 수율을 나타내었다.
실험예 1: 산수국 에탄올 추출물의 세포독성 평가
상기 실시예 1에서 얻은 추출물에 대하여 피부세포에 대해 세포독성이 있는지 측정하였다. 본 실험에서 각질세포로 HaCaT Keratinocyte 및 진피세포로 HS68 fibroblast를 사용하였다. 세포 독성이 있는지 확인하기 위해 1.0X104 세포수의 각각의 세포들을 96-웰 플레이트 상에 분주하고 24시간 동안 부착시켜 안정화 시킨 후, 0, 5, 25, 125 ppm (μg/ml)의 농도로 산수국 에탄올 추출물을 처리하였다. 24시간이 지난 후, MTT 어세이를 통해 세포 생존 정도를 측정하였다. MTT 어세이는 살아있는 세포의 미토콘드리아에 의해 환원된 MTT로부터 형성된 포마잔의 양을 측정하는 방법이다. 5mg/ml MTT 용액을 50㎕ 씩 각각의 세포에 처리하고 4시간동안 배양한 후, 용액을 완전히 제거하고 DMSO로 용해시킨 플레이트를 540nm의 흡광도에서 측정하였다.
추출물 추출물의 세포독성 (%)
0 μg/ml 5 μg/ml 25 μg/ml 125 μg/ml
표피세포 100.0 108.0 100.3 113.9
진피세포 100.0 104.7 102.9 95.6
상기 표 1의 결과와 같이, 산수국 추출물을 농도별로 처리하여 세포독성 시험을 수행한 결과, 진피세포 및 표피세포에서 세포독성이 없음을 확인하였다.
실험예 2: 산수국 에탄올 추출물의 UV-B에 의한 세포손상 복구 평가
상기 실시예 1에서 얻은 추출물에 대하여 UV-B에 노출시킨 피부세포의 손상을 복구할 수 있는지 측정하였다. 본 실험에서 각질세포로 HaCaT Keratinocyte 및 진피세포로 HS68 fibroblast를 사용하였다. 세포 복구 효능이 있는지 확인하기 위해 1.0X104 세포수의 각각의 세포들을 96-웰 플레이트 상에 분주하고 24h동안 부착시켜 안정화 시킨 후, 15mJ/cm2으로 UV-B를 조사하였다. 이후, 0, 5, 25, 125 ppm (μg/ml)의 농도로 산수국 에탄올 추출물을 처리한 배지로 갈아주고 MTT 어세이를 통해 세포 생존 정도를 측정하였다. MTT 어세이는 살아있는 세포의 미토콘드리아에 의해 환원된 MTT로부터 형성된 포마잔의 양을 측정하는 방법이다. 더 자세하게는, 5mg/ml MTT 용액을 50㎕ 씩 각각의 세포에 처리하고 4시간동안 배양한 후, 용액을 완전히 제거하고 DMSO로 용해시킨 플레이트를 540nm의 흡광도에서 측정하였다.
추출물 추출물의 UV에 의한 피부세포 손상 복구능 (%)
0 μg/ml 0 μg/ml 5 μg/ml 25 μg/ml 125 μg/ml
UV-B15mJ/cm2 - + + + +
표피세포 100 80.46 96.45 100.10 110.20
P-value - 0.000 * 0.000 * 0.000*
진피세포 100 76.48 104.1 100.53 167.7
P-value - 0.020 * 0.130 0.010 *
P-value : t-test를 통한 추출물을 처리하지 않은 그룹(0 μg/ml)과 추출물을 처리한 그룹간의 통계처리 결과 상기 표 2의 결과와 같이, 15mJ/cm2의 UV-B 처리시 표피세포 및 진피세포에서 각각 80%, 76%로 세포손상을 나타내었다. 이에 산수국 추출물을 농도별로 처리하여 UV에 의한 피부세포 손상복구 실험을 수행한 결과, 통계적으로 유의하게 (P-value<0.05) 세포의 손상이 복구됨을 확인 할 수 있었다. 본원발명의 조성물이 추출물임을 감안할 때 농도 의존적으로 비교적 높은 복구 효능을 확인할 수 있었다.
실험예 3: 히알우론산 (Hyaluronic Acid) 함량 분석
상기 실시예 1에서 얻은 추출물에 대하여 진피세포 HS68 fibroblast에서 히알우론산을 증가시킬 수 있는지 측정하였다. 물질처리에 따라 히알우론산이 증가할 수 있는지 확인하기 위해 1.0X105 세포수의 각각의 세포들을 24-웰 플레이트 상에 분주하고 24h동안 부착시켜 안정화 시킨 후, 0, 5, 25, 125 ppm (μg/ml)의 농도로 산수국 에탄올 추출물을 처리한 배지로 갈아주고 24시간 동안 배양하였다. 이후, 물질을 처리한 상층액에서 TECOⓡ Hyaluronic Acid PLUS ELISA Kit (TE 1018-2, TECO medical Group, US)를 사용하여 히알우론산의 분비 정도를 측정하였다.
추출물 Hyaluronic Acid (ng/ml)
0 μg/ml 5 μg/ml 25 μg/ml 125 μg/ml
진피세포 88.0 83.0 124.6 119.6
P-value 0.300 0.000* 0.000*
P-value : t-test를 통한 추출물을 처리하지 않은 그룹(0 μg/ml)과 추출물을 처리한 그룹간의 통계처리 결과 상기 표 3의 결과와 같이, 산수국 추출물을 농도별로 처리하여 히알우론산 실험을 수행한 결과, 진피세포에서 25, 125 μg/ml를 처리한 그룹에서 통계적으로 유의하게 (P-value<0.05) 히알우론산의 분비 촉진 효과를 확인하였다.
실험예 4: MMP-1의 함량 분석
상기 실시예 1에서 얻은 추출물에 대하여 표피세포 HaCaT Keratinocyte에서 MMP-1을 증가시킬 수 있는지 측정하였다. 물질처리에 따라 MMP-1이 감소할 수 있는지 확인하기 위해 1.0X105 세포수의 각각의 세포들을 24-웰 플레이트 상에 분주하고 24h동안 부착시켜 안정화 시킨 후, 0, 5, 25, 125 ppm (μg/ml)의 농도로 산수국 에탄올 추출물을 처리한 배지로 갈아주고 24시간 동안 배양하였다. 이후, 물질을 처리한 상층액에서 MMP-1 Human ELISA Kit (ab100603, abcam, US)를 사용하여 MMP-1의 분비 정도를 측정하였다.
추출물 MMP-1 (pg/mL)
0 μg/ml 5 μg/ml 25 μg/ml 125 μg/ml
표피세포 10613 9703 9813 8263
P-value 0.010* 0.030* 0.000*
P-value : t-test를 통한 추출물을 처리하지 않은 그룹(0 μg/ml)과 추출물을 처리한 그룹간의 통계처리 결과 상기 표 4의 결과와 같이, 산수국 추출물을 농도별로 처리하여 MMP-1 실험을 수행한 결과, 표피세포에서 통계적으로 유의하게 (P-value<0.05) MMP-1의 분비 억제 효과를 확인하였다.
제형예 1: 정제의 제조
상기 실시예 1에서 얻은 추출물에 대하여 통상의 정제 제조방법에 따라 하기 표 5의 성분을 혼합하고 타정하여 정제를 제조한다.
원료명 단위중량 (mg)
실시예 1의 추출물 50
옥수수 전분 100
유당 100
스테아린산 2
제형예 2: 캡슐제의 제조
상기 실시예 1에서 얻은 추출물에 대하여 통상의 캡슐제 제조방법에 따라 하기 표 6의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
원료명 단위중량 (mg)
실시예 1의 추출물 50
옥수수 전분 100
유당 100
스테아린산 2
제형예 3: 액제의 제조
상기 실시예 1에서 얻은 추출물에 대하여 기호에 적합한 음료 제조방법에 따라서 하기 표 7의 성분을 혼합하고 과병 또는 파우치에 충전하여 액제를 제조한다.
원료명 단위중량 (g)
실시예 1의 추출물 2.5050
산탄검 0.0075
프락토올리고당액 0.7500
코코넛꽃진액분말 1.0500
쌍화농축액 1.5000
홍삼향 0.0450
정제수 9.1425
제형예 4: 젤리의 제조
상기 실시예 1에서 얻은 추출물에 대하여 기호에 적합한 젤리 제조방법에 따라서 하기 표 8의 성분을 혼합하고 삼면포에 충전하여 젤리를 제조한다.
원료명 단위중량 (g)
실시예 1의 추출물 2.0000
푸드겔 0.3600
카라기난 0.0600
젖산칼슘 0.1000
구연산나트륨 0.0600
복합황금추출물 0.0200
효소처리스테비아 0.0440
프락토올리고당액 5.0000
적포도농축액 2.4000
정제수 13.9560
제형예 5 : 영양크림의 제조
상기 실시예 1에서 얻은 추출물에 대하여 영양크림을 통상의 방법에 따라 하기 표 9의 조성으로 제조하였다.
원 료 함 량
실시예 1의 추출물 1.0
시토 스테롤 4.0
폴리글리세릴 2-올레이트 3.0 3.0
세테아레스-4 2.0
콜레스테롤 3.0
디세틸포스페이트 0.4
농글리세린 5.0
선플라우어오일 22.0
카르복시비닐폴리머 0.5
트리에탄올아민 0.5
방부제 미량
향료 미량
정제수 잔량
상기의 조성비는 일반적으로 적합한 성분을 혼합하여 제형예로 조성하였지만, 필요에 따라서 그 배합비 및 원료를 임의로 변경 실시하여도 무방하다.
본 발명의 추출물은 모든 제형예 시험 조건에서 안정하므로 제형의 안정성에는 문제가 없었다.

Claims (6)

  1. 산수국(Hydrangea serrata)의 추출물을 유효성분으로 함유하는 자외선에 의한 인간 피부세포 손상 예방 및 개선용 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 자외선에 의한 인간 피부세포 손상은 UV-B 노출에 의해 생기는 인간 표피세포 및 진피세포 손상인 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 인간 피부세포 손상 예방 및 개선용 조성물.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출되는 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 인간 피부세포 손상 예방 및 개선용 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 조성물 총 중량대비 0.001 내지 80중량% 포함하는 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 인간 피부세포 손상 예방 및 개선용 조성물.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 정제, 과립제, 환제, 캡슐제, 액상형, 젤리 또는 껌으로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 제형을 갖는 것으로서, 구강 섭취용 인 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 인간 피부세포 손상 예방 및 개선용 조성물.
  6. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 유연화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 수분 크림, 스팟, 젤 로션 또는 연고로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 제형을 갖는 것으로서, 피부 외용제용 인 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 인간 피부세포 손상 예방 및 개선용 조성물.
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