CN114028513B - 一种改善银屑病的沙棘叶组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种改善银屑病的沙棘叶组合物及其应用,属于中药领域。本发明所述沙棘叶组合物以沙棘叶为主成分,同时辅以各种天然植物原料共同发生协同作用,可起到显著抑制角化细胞过度增殖的作用,对个体银屑病表现出直观的症状改善效果,降低皮肤的厚度,减缓皮肤损伤的进程,同时还可提升皮肤组织的抗氧化能力,降低皮肤MDA含量,安全无毒副作用。本发明还公开了所述沙棘叶组合物的制备方法及由所述沙棘叶组合物制备的预防和改善银屑病症状的药物制剂。
Description
技术领域
本发明涉及中药领域,具体涉及一种改善银屑病的沙棘叶组合物及其应用。
背景技术
沙棘别名醋柳、达布尔、拉巴才尔玛等,其富含营养物质并具有多种生物活性,其果实和种子已在食用、药用等方面得以广泛利用,沙棘的根、茎、叶、枝干等的产业化利用相对较少。近年来的研究证明,沙棘叶和沙棘果同样具有多种活性成分,富含多糖类、有机酸、黄酮类、甾类、氨基酸、类胡萝卜素、萜类、挥发油、酚类及微量元素等。因此,进一步开发沙棘叶相关的食品、药品和化妆品不仅有利于资源的充分利用,同时也能拓展其经济和社会效益。
银屑病(Psoriasis)是一种常见的由皮肤免疫系统持续失调引起的非愈合性慢性皮肤病变,流行病学显示目前我国银屑病患者已有650多万。银屑病斑块表面的结垢是该疾病的典型特征,常见于头皮、膝盖、肘部和躯干,该病病程长,容易反复发作,难以根治。此外,银屑病还可以导致慢性关节损害,严重时可致残、因此早期治疗非常重要。银屑病的早期治疗多使用免疫抑制剂,因用量及疗程等因素均会出现毒副反应。中、重度银屑病患者常采用单克隆抗体和靶点特异性药物,长期过度抑制炎症因子亦会导致二重感染的风险,停药后病情易反复。对于轻症患者,常采用外用药物治疗,包括糖皮质激素,维A酸,钙调磷酸酶抑制药,维生素D3类似物等,但实际上这类药物的疗效有限,且可能伴随特定的副作用。
发明内容
基于现有技术的不足,本发明的目的在于提供了一种改善银屑病的沙棘叶组合物,该组合物以沙棘叶为主要功效成分,辅以同为天然植物原料的辅料,各组分间协同作用,具有较好的改善银屑病效果,能够抑制银屑病皮肤的过度角化和表皮损伤,同时该组合物还能够改善皮肤组织抗氧化能力指数(ORAC)和抑制脂质过氧化产物MDA的积累。
为了达到上述目的,本发明采取的技术方案为:
一种改善银屑病的沙棘叶组合物,包括以下重量份的原料:
沙棘叶60~80份、高良姜20~38份、白芷15~25份、芫荽10~20份和桑葚5~10份。
银屑病的机制一般被认为是角质形成细胞过度增殖和异常分化会引起机体表皮增生,导致皮肤角化过度变厚并呈现鳞屑样病变,而本申请发明人在对中药材的药理研究中意外发现,沙棘叶含有有效成分,可对角化细胞的过度增殖及角化、分化作用产生抑制,同时抑制其造成的表皮损伤。然而单纯的沙棘叶及其提取物的抑制强度不高,还不足以起到改善整体银屑病的理想效果;经过发明人将沙棘叶与多种天然植物进行搭配筛选后,得到的沙棘叶组合物各组分可发生协同效应,经测试相比于单独的沙棘叶或其他组分原料可起到显著抑制角化细胞过度增殖的作用,对个体银屑病表现出直观的症状改善效果,降低皮肤的厚度,减缓皮肤损伤的进程,同时还可提升皮肤组织的抗氧化能力,降低皮肤MDA含量(脂质过氧化物丙二醛,一般其含量与皮肤老化程度呈正相关);所述沙棘叶组合物取材纯天然,无毒副作用。
优选地,所述中药组合物中的原料可使用相应的植物提取物代替。
本领域技术人员根据实际生产的需要,可将本发明所述沙棘叶组合物的原料组分中的至少一种采用相应的植物提取物代替(例如沙棘叶采用沙棘叶提取物代替),所得产品同样具备相同的技术效果。
优选地,所述沙棘叶组合物,包括以下重量份的原料:沙棘叶72~78份、高良姜30~34份、白芷20~25份、芫荽16~20份和桑葚8~10份。
本发明所述沙棘叶组合物其对于改善银屑病症状的功效主要是各组分的活性物质协同作用,因此各组分的配比对产品的功效具有较大影响,本申请发明人经过多次优化筛选后,发现上述配比制备的沙棘叶组合物其效果更佳。
本发明的另一目的在于提供所述改善银屑病的沙棘叶组合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)将各原料按配比称取后混合并干燥粉碎,得到混合药材粉末;
(2)将混合药材粉末加入溶剂中超声浸泡后,进行热回流提取3~5次,过滤,合并过滤液并进行旋蒸浓缩干燥处理,即得所述改善银屑病的沙棘叶组合物。
本发明所述沙棘叶组合物的制备方法操作步骤简单,对设备要求低,可实现工业化规模生产。
优选地,所述溶剂包括水、甲醇、乙醇、丙二醇、丙酮中的至少一种;
更优选地,所述溶剂为水,所述水与混合药材粉末的质量比为20~30:1。
基于实际需要,本发明所述产品原料在提取过程时可采用不同的溶剂进行,而基于所述产品的食用级用途安全特性,以水作为溶剂最佳。
优选地,所述超声浸泡的时间为2~4h,功率为400~800W,频率为40~60kHz。
所述技术参数下对混合药材粉末进行超声预处理,可实现提取物收率上的提升。
优选地,所述每次热回流的时间为1~1.5h。
优选地,所述过滤时的目数为150~250目。
本发明的再一目的在于提供一种预防和改善银屑病症状的药物制剂,所述药物制剂的制备原料包括本发明所述沙棘叶组合物。
本发明所述沙棘叶组合物安全无毒,各原料组分间发生协同作用,对个体银屑病症状具有明显有效的改善作用,对其他角化细胞增殖相关的鳞状皮肤病变也具有潜在的改善或治疗作用,可应用于制备各类剂型(包括口服或外用)的改善及预防相应症状的药物制剂中。
优选地,所述药物制剂为口服制剂或外用制剂;
更优选地,所述药物制剂的剂型包括粉剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、口服液剂、软膏、乳液中的任一种。
优选地,所述药物制剂的制备原料还包括加工助剂;
更优选地,所述加工助剂包括赋形剂、防腐剂、抗氧剂、润滑剂中的至少一种。
本发明所述中药组合物可与常见的载体赋形剂搭配结合使用,根据实际剂型发挥出完整功效,而添加诸如防腐剂、抗氧剂、润滑剂等也可进一步保障制得产品的稳定性,延长产品的保质期。
更优选地,所述赋形剂包括乳糖、白糖、甘露醇、淀粉中的至少一种;所述防腐剂包括氯丁醇、苄醇、二羟基乙酸中的至少一种;所述抗氧剂包括亚硫酸盐、抗坏血酸中的至少一种;所述润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石粉中的至少一种。
本发明的有益效果在于:本发明提供了一种改善银屑病的沙棘叶组合物,该组合物以沙棘叶为主成分,同时辅以各种天然植物原料共同发生协同作用,可起到显著抑制角化细胞过度增殖的作用,对个体银屑病表现出直观的症状改善效果,降低皮肤的厚度,减缓皮肤损伤的进程,同时还可提升皮肤组织的抗氧化能力,降低皮肤MDA含量,安全无毒副作用。本发明还提供了所述沙棘叶组合物的制备方法及由所述沙棘叶组合物制备的预防和改善银屑病症状的药物制剂。
具体实施方式
若无特别说明,本发明实施例中所用原料均购自市场。
为了更好地说明本发明的目的、技术方案和优点,下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明,其目的在于详细地理解本发明的内容,而不是对本发明的限制。
实施例1
本发明所述一种改善银屑病的沙棘叶组合物的实施例。
本实施例所述中药组合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)将沙棘叶75份、高良姜32份、白芷22份、芫荽18份和桑葚10份按配比称取后混合并干燥粉碎,得到混合药材粉末;
(2)将混合药材粉末加入纯水(水与混合药材粉末的质量比为30:1)中超声浸泡2h后(600W,50kHz),进行热回流提取4次,每次热回流1h,200目过滤,合并过滤液并进行旋蒸浓缩干燥处理,即得所述改善银屑病的沙棘叶组合物。
实施例2
本实施例与实施例1的差别仅在于,各原料的添加配比为:沙棘叶65份、高良姜38份、白芷18份、芫荽6份和桑葚12份。
实施例3
本实施例与实施例1的差别仅在于,各原料的添加配比为:沙棘叶80份、高良姜22份、白芷26份、芫荽22份和桑葚3份。
对比例1
本对比例与实施例1的差别仅在于,所述原料不含沙棘叶。
对比例2
本对比例与实施例1的差别仅在于,所述原料不含高良姜和白芷。
对比例3
本对比例与实施例1的差别仅在于,所述原料不含白芷和芫荽。
对比例4
本对比例与实施例1的差别仅在于,所述原料不含白芷、芫荽和桑葚。
对比例5
本对比例与实施例1的差别仅在于,所述原料只含沙棘叶。
对比例6
本对比例与实施例1的差别仅在于,所述原料中的沙棘叶替换为金银花。
对比例7
本对比例与实施例1的差别仅在于,所述原料中的高良姜替换为防风,所述白芷替换为当归。
对比例8
本对比例与实施例1的差别仅在于,所述原料中的芫荽替换为罗汉果,所述桑葚替换为茯苓。
效果例1
为验证本发明所述改善银屑病的沙棘叶组合物的银屑病症状改善效果,对实施例1~3和对比例1~8所得产品进行使用测试。
为了达到上述目的,本发明参考(中国皮肤性病学杂志,2020,34(11):1238-1248)使用永生化人角质形成细HaCaT细胞体外构建角化细胞过度增殖的模型。在此模型上,探索实施例及对比例产品对角化细胞增殖的影响。
具体方法如下:
HaCaT细胞培养于含有10%FBS的DMEM培养基,置于37℃、5%CO2的培养箱中。选取处于对数生长期的细胞铺于96孔板中,24h后细胞贴壁给与相应刺激。设置空白对照组、KGF模型组和给药组,各组细胞数相等,均为每孔3×103个细胞,除空白对照组外,其余组均给与10ng/mL的角质形成细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF),在此基础上分出一个KGF模型组,剩余给药组再分别给与200μg/mL的实施例1~3提供的组合物提取物以及对比例1~8提供的对照品1~8,空白组更换新鲜培养基(FBS浓度为5%),48h后每孔加入10μL的CCK-8溶液,各组置于培养箱中继续孵育4h,最后使用多功能酶标仪测定450nm处的吸光度值。按照如下公式计算相对细胞活力(%)=(A450sample-A450blank)/(A450control-A450blank)×100。样品的增殖抑制率(%)=(VKGF-Vsample)/(VKGF-Vcontrol)×100(V:代表细胞活力)。测试结果如表1所示。
表1
从表1可知,本发明所述KGF模型组对比空白对照组细胞活力显著提升,造模成功。本发明所述沙棘叶组合物在200μg/mL的给药量下对体外角化细胞可实现显著的增殖抑制,其中实施例1产品抑制率最高,达到77.6%。相比之下,实施例2和3及对照品1~8产品未能达到理想效果,说明本发明所述沙棘叶组合物只有在优选原料种类及配比的情况下才能实现理想的协同作用,缺少组分、替换组分或者配比不当均会对产品性能产生消极影响。
效果例2
基于上述测试,为了进一步验证本发明所述沙棘叶组合物在活体生物中的银屑病病症改善效果,参考现有技术采用咪喹莫特(J Dermatol.47(2):147-154,2020)诱导动物银屑病模型并进行活体验证,该模型与人类银屑病有较多相似之处,是研究银屑病的常用动物模型,且具有操作简单、经济、重复性高等优点。
测试方法为:
实验使用雄性6~8周龄BALB/c小鼠,在清洁级层流架中饲养,温度为23±2℃,相对湿度为湿度55±5%,照明时间为12h/天(7:00~19:00),小鼠可自由饮水,在适应性饲养一周后进行实验。将实验小鼠分为正常对照组、咪喹莫特模型组、组合物(采用实施例1所得沙棘叶组合物)150和300mg/kg两个剂量的给药组,以及对照品5(组合物只使用单一沙棘叶为原料)150和300mg/kg两个剂量的给药组,每组10只小鼠。将所有小鼠的背部毛发剔除,除正常对照组外,其余小鼠脱毛区涂抹5%咪喹莫特乳膏60mg,连续9天制备小鼠银屑病模型,正常对照组给与等量的凡士林。给药组于造模前2周灌胃给药(给药量为0.1mL/10g体重)直至造模结束,正常对照组与咪喹莫特模型组给予等量的生理盐水溶液。
造模期间每日对各组小鼠背部皮肤进行观察,并对各组小鼠背部红斑、鳞屑、浸润肥厚分别进行银屑病面积和严重程度指数(psoriasis area and severity index,PASI)评分,评分标准如下:按照皮损程度进行等级评分(0~4分),具体如下:0分(无)、1分(轻度)、2分(中度)、3分(重度)、4分(极重度),评分越高表明受损越严重,三者相加为最终总评分。
小鼠第9天的PASI结果如表2所示,与正常对照组相比,咪喹莫特模型组小鼠皮肤的PSAI显著增加,高达11.4±1.58,说明造模成功。而给药组中给小鼠灌胃150mg/kg和300mg/kg剂量的组合物后能明显减缓小鼠皮肤损伤的进展。此外,组合物给药组相对于对照品5给药组,各组其小鼠的改善银屑病表皮损伤症状的效果更好。
将小鼠处死,取小鼠背部剃毛区皮肤通过石蜡切片和HE染色技术检测小鼠的皮肤形态学改变并测量小鼠的表皮厚度,进而检测本发明所述沙棘叶组合物在体内是否能够抑制角化细胞的过度增殖。结果如表2所示,与正常对照组相比,咪喹莫特模型组小鼠表皮显著增厚,厚度高达65.2±5.19μm;而给药150mg/kg和300mg/kg剂量的实施例1所得沙棘叶组合物后,能明显降低小鼠皮肤的厚度,减缓皮肤损伤的进程。此外,对照品5给药组的给药改善银屑病表皮增生症状的效果不如组合物给药组。
表2
效果例3
为了验证本发明所述沙棘叶组合物对皮肤的抗氧化功能,将效果例2中所得的测试后各组小鼠皮肤进行氧化自由基吸收能力(ORAC)试验测定,具体测试方法如下:
取效果例2试验后正常对照组、咪喹莫特模型组和组合物给药组的小鼠皮肤组织在液氮中研磨后收集至离心管,加入高氯酸溶液(3%)制备质量含量为2%的皮肤组织匀浆液,在4℃条件下以10000r/min转速离心15min,取上清液作为测定ORAC的样品溶液。
ORAC检测实验过程:在96孔板中加入不同组别小鼠的20μL上述ORAC的样品溶液和20μL磷酸盐缓冲液,再加入20μL荧光素钠,最后添加140μLAAPH后迅速将96孔板置于控温37℃的荧光酶标仪中开始测定。每2min测定一个点,共测定2h。ORAC值以1μmol/L的Trolox在荧光衰减曲线上对应的保护积分面积作为标准对照计算。
结果如表3所示。
表3
组别 | ORAC(μmol/L Trolox eq.) |
正常对照组 | 121.1±8.24 |
咪喹莫特模型组 | 57.6±4.81 |
组合物(150mg/kg) | 78.2±4.98 |
组合物(300mg/kg) | 99.6±6.13 |
从表3可看出,经过咪喹莫特处理后,小鼠皮肤组织的ORAC值相比正常对照组小鼠显著下降,而在给药组中给药150mg/kg和300mg/kg剂量的组合物后,小鼠皮肤组织的ORAC值有所提升,其中高剂量给药后的小鼠皮肤组织其ORAC值可达到接近100μmol/L Troloxeq.,说明本发明所述沙棘叶组合物可在改善银屑病症状的前提下增强个体的皮肤抗氧化能力。
效果例4
与效果例3相似,本发明还探讨了所得沙棘叶组合物对皮肤组织MDA含量的影响,测试方法如下:
取效果例2试验后正常对照组、咪喹莫特模型组和组合物给药组的小鼠皮肤组织在液氮中研磨后收集至离心管,加入RIPA组织裂解液,自动匀浆机进一步破碎组织后置于冰浴继续裂解30min,在4℃条件下12000r/min离心15min后,取上清液;使用BCA法测定上清液中的总蛋白含量,用于标准化MDA含量。上清液中的MDA使用碧云天生物技术公司的脂质氧化(MDA)检测试剂盒(S0131M)测定(MDA丙二醛在较高温度及酸性环境中可与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)反应形成红色的MDA-TBA加合物,该产物在535nm处有最大吸收,可通过酶标仪进行检测)。
测试结果如表4所示。
表4
组别 | MDA(μmol/g protein) |
正常对照组 | 17.3±3.51 |
咪喹莫特模型组 | 42.1±4.32 |
组合物(150mg/kg) | 31.2±4.12 |
组合物(300mg/kg) | 26.4±2.78 |
与效果例3呈现相近的变化趋势,经过咪喹莫特处理后,模型小鼠的皮肤中MDA含量相比正常对照组的小鼠显著上升,而在给药组中给药150mg/kg和300mg/kg剂量的组合物后,小鼠皮肤组织的MDA含量有所下降,其中高剂量给药后的小鼠皮肤组织的MDA含量与正常对照组小鼠接近,说明本发明所述沙棘叶组合物可在改善银屑病症状的前提下降低皮肤组织中的MDA含量。
最后所应当说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制,尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (10)
1.一种改善银屑病的沙棘叶组合物,其特征在于,由以下重量份的原料制成:
沙棘叶72~78份、高良姜30~34份、白芷20~25份、芫荽16~20份和桑葚8~10份。
2.如权利要求1所述改善银屑病的沙棘叶组合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将各原料按配比称取后混合并干燥粉碎,得到混合药材粉末;
(2)将混合药材粉末加入溶剂中超声浸泡后,进行热回流提取3~5次,过滤,合并过滤液并进行旋蒸浓缩干燥处理,即得所述改善银屑病的沙棘叶组合物。
3.如权利要求2所述改善银屑病的沙棘叶组合物的制备方法,其特征在于,所述溶剂为水,所述水与混合药材粉末的质量比为20~30:1。
4.如权利要求2所述改善银屑病的沙棘叶组合物的制备方法,其特征在于,所述超声浸泡的时间为2~4h,功率为400~800W,频率为40~60kHz。
5.如权利要求2所述改善银屑病的沙棘叶组合物的制备方法,其特征在于,所述每次热回流的时间为1~1.5h。
6.一种预防和改善银屑病症状的药物制剂,其特征在于,所述药物制剂的制备原料包括权利要求1所述沙棘叶组合物。
7.如权利要求6所述预防和改善银屑病症状的药物制剂,其特征在于,所述药物制剂为口服制剂或外用制剂。
8.如权利要求7所述预防和改善银屑病症状的药物制剂,其特征在于,所述药物制剂的剂型包括粉剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、口服液剂、软膏、乳液中的任一种。
9.如权利要求6所述预防和改善银屑病症状的药物制剂,其特征在于,所述药物制剂的制备原料还包括加工助剂。
10.如权利要求9所述预防和改善银屑病症状的药物制剂,其特征在于,所述加工助剂包括赋形剂、防腐剂、抗氧剂、润滑剂中的至少一种。
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