KR101072725B1

KR101072725B1 - 시호 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물

Info

Publication number: KR101072725B1
Application number: KR1020040076689A
Authority: KR
Inventors: 김한성; 김연준; 김수남; 이성일; 김덕희; 장이섭
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2004-09-23
Filing date: 2004-09-23
Publication date: 2011-10-11
Also published as: KR20060027764A

Abstract

본 발명은 유효성분으로 시호 추출물을 함유하는 각질형성세포 성장촉진용 조성물, MMP-1의 생합성 감소를 통해 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진하는 타입 1 프로콜라겐의 생합성 촉진용 조성물, 및 상기 시호 추출물에 인동 추출물, 행인 추출물, 차전초 추출물 및 의이인 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물에 관한 것으로, 상기 추출물은 물을 추출용매로 하여 추출한 것을 특징으로 하며, 상기 조성물에 1,3-부틸렌 글리콜을 더 함유하는 것을 특징으로 한다.

상기 추출물은 각질형성세포의 성장촉진 효과, 피부기질의 분해에 관련된 자외선에 의한 MMP-1의 생합성 감소를 통해 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진시키는 효과를 통해 피부노화를 억제하는 효과가 있으므로, 상기 추출물을 함유하는 조성물은 각질형성세포 성장촉진용 조성물, MMP-1의 생합성 감소를 통해 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진하는 타입 1 프로콜라겐의 생합성 촉진용 조성물, 피부노화방지용 조성물로써 화장품 및 의약품에 유용하게 이용할 수 있다.

시호, 인동, 행인, 차전초, 의이인, 각질형성세포, 활성산소, 타입 1 프로콜라겐, 조성물, 부틸렌 글리콜, 화장품, 의약품

Description

시호 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물{Composition containing as available ingredient the extracts of Bupleurum falcatum L.}

본 발명은 유효성분으로 시호 추출물을 함유하는 각질형성세포 성장촉진용 조성물, MMP-1의 생합성 감소를 통해 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진하는 타입 1 프로콜라겐의 생합성 촉진용 조성물, 및 상기 시호 추출물에 인동 추출물, 행인 추출물, 차전초 추출물 및 의이인 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물에 관한 것이다.

피부는 인체의 일차 방어막으로서 체내의 제기관을 온도 및 습도 변화와 자외선, 공해물질 등 외부환경의 자극으로부터 보호해 주며, 체온조절 등의 생체 항상성 유지에 중요한 역할을 하고 있다. 그러나, 자외선, 외부로부터 받는 과도한 물리적, 화학적 자극 및 스트레스, 영양결핍 등은 피부의 정상기능을 저하시키고 탄력손실, 각질화, 주름생성 등의 피부 노화현상을 촉진시키게 된다.

특히, 각질세포가 차례차례로 계속해서 만들어지고, 최외층의 오래된 각질세 포가 때때로 이탈해가므로 표피가 일정한 두께를 유지하게 하는 각화과정이 순조롭지 못하면 비정상적인 각질 세포가 생성되고 피부 표면에 쌓여 각질층이 두꺼워지게 되면 피부가 거칠어지고, 칙칙해지며, 미세한 잔주름이 생기게 되고 결국 피부 노화가 진행되는 것이다. 또한, 자외선에 의해 생성되는 활성산소 및 피부기질의 분해에 관련된 자외선에 의한 MMP-1의 생합성을 통한 타입 1 프로콜라겐의 생합성 감소도 피부 노화와 관련이 있다.

따라서, 이러한 현상을 방지하고 보다 건강하고 탄력 있는 피부를 유지하기 위하여 종래 각종 동물, 식물, 미생물 등으로부터 얻은 생리활성물질들이 강화된 화장품을 사용함으로써 피부의 고유기능을 유지시키고 피부세포를 활성화시켜 피부노화를 효과적으로 억제하기 위한 노력이 있어 왔다.

그러나, 기존의 화장품 원료들은 대부분 효능이 미진하거나 피부 부작용을 유발하는 등 여러 가지 문제점을 가지고 있다. 따라서, 피부 부작용을 유발하지 않으면서 피부 노화방지효과를 갖는 원료에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다.

시호(Bupleurum falcatum L.)는 산형과의 다년생 초본으로 식용, 약용에 쓰이고, 한방에서의 귀경은 간이며, 민간에서는 뿌리를 악한, 해열, 제암, 늑막염, 말라리아, 열로, 모세혈염, 강심, 사기, 상한, 악기, 진통, 지해 등에 약재로 쓰며, 감기와 발열이 반복되는 증상, 흉부의 불쾌감, 입이 쓴 증상, 두통, 어지러움증, 학질, 탈항, 월경부조, 자궁하수, 탈장 등에 사용한다. 시호에 함유되어 있는 유효성분으로는 부플레루몰(Bupleurumol), 사이코사포닌(Saikosaponin), 사이코게닌(Saikogenin) 등이 함유되어 있으며, 항염증, 항종양 연구가 보고된 바 있다.

인동(Lonicera japonica Thunberg)은 예로부터 우리나라 전국 각지의 산야지에서 자생하는 인동과의 반상록 덩굴성 관목 식물로서, 꽃은 '금은화', 잎과 줄기는 '인동등'이라고도 하며 약재로 널리 사용된 무독한 한방 생약이다. 한방에서는 예로부터 인동을 옹저(속과 겉의 염증)에 유효하다고 하여 관절염, 기관지염 등의 치료에 사용하여 왔는데 최근에는 유행성 감기, 각종 화농성 감염증, 습열로 인한 관절의 발적, 종창, 간독성 보호 및 세포 면역 능력 저하에도 약효가 있는 것으로 알려져 있다. 또한, 한방에서 심과 폐에 귀경하는 인동이 열을 내리고 독을 풀며 경맥을 잘 통하게 하는 작용을 하며 이뇨작용, 억균작용 등을 나타냄이 밝혀져 있으며, 열독에 의하여 설사하는데, 혈리, 부스럼, 간염, 종기, 저린증상, 관절염 등에 사용되는 약재이다. 인동에 함유된 유효 성분으로는 아피게닌(Apigenin), 로니세린(Lonicerin), 루테오린(Luteolin) 등의 플라보노이드(Flavonoid)류가 함유되어 있는데, 이들 플라보노이드(Flavonoid)류에 의해 항염증효과, 항암효과 등이 있는 것으로 알려져 있다.

행인(Prunus armeniaca)은 일반적으로 장미과에 속하는 살구나무의 성숙한 과실을 채취하여 과육 및 종피를 제거하고 종자만을 건조한 후 사용하는데, 유로키나제(Urokinase)활성 촉진, 진통효과, 소담효과, 항종양 활성 진해효과 등의 약리 효능이 있는 것으로 알려져 있다. 한방에서는 폐에 귀경하는 행인이 해수, 천식을 치료하는데, 풍열해수, 풍한해수 모두에 응용되며 담을 없애고 기침이 나면서 기가 치미는 것, 폐기로 숨이 찬 것, 코에 나는 종기를 치료하고 창종을 없애며 땀을 나게 하며 독을 풀어 주는 효과가 있다고 알려져 있다. 행인에 함유된 유효 성분으로 는 지방유, 아미그다린(Amygdalin), 에뮤신(Emusin) 등이 함유되어 있고 특히, 불포화 지방산을 다량 함유하여 피부 진정효과 및 유연효과가 우수하며 미백효과도 우수한 것으로 보고되어 있다. 또한, 하이퍼로사이드(Hyperoside), 아스트라갈린(Astragalin), 트리포린(Trifolin), 쿠에르치트린(Quercitrin) 등의 플라보노이드류가 함유되어 있는 것으로 알려져 있다.

차전초(Plantago asiatica)는 질경이라고도 하며 매우 흔한 풀로 민들레처럼 뿌리에서 바로 잎이 나는 식물로 원줄기는 없고 많은 잎이 뿌리에서 나와 옆으로 넓게 퍼진다. 6~8월에 이삭 모양의 하얀 꽃이 피어서 흑갈색의 자잘한 씨앗이 10월에 익는다. 이 씨를 차전자라고 한다. 신에 귀경하는 차천초는 민간요법에서 만병통치약으로 부를 만큼 질경이는 그 활용범위가 넓고 약효도 뛰어나다. 기침, 안질, 임질, 심장병, 태독, 난산, 출혈, 요혈, 금창, 종독 등에 다양하게 치료약으로 써 왔다. 이뇨작용, 완화작용, 진해작용, 해독작용이 뛰어나서 소변이 잘 나오지 않는데, 변비, 천식, 백일해 등에 효과가 뛰어나다. 또한 각기, 관절통, 눈충혈, 위장병, 부인병, 산후복통, 신경쇠약, 두통, 뇌질환, 축농증 같은 질병들을 치료하고 예방할 수 있다. 이외에도 기침, 위궤양, 십이지장궤양, 동맥경화, 당뇨병, 백일기침, 신장염, 신장결석, 이질, 장염, 특히 각종 암세포의 진행을 억제한다는 연구보고도 나와 있다. 차전초에 함유된 유효 성분으로는 아피게닌(Apigenin), 우루솔릭에씨드(ursolic acid), 프레타기닌(Plantaginin), 베타시토스테롤(β-sitosterol), 아큐빈(aucubin)등이 있다.

의이인(Coix lacryma-jobi)은 벼과에 속하는 율무의 종인으로 한방에서의 비 에 귀경하는 율무가 건비, 보폐, 이습, 해열 등의 효능이 있어 설사, 습비, 수종, 두통, 근육경련 등의 치료에 사용된다. 또한, 습을 이기게 하고 몸에 부기가 있거나 심한 천식에 좋으며 소염, 배농작용, 몸속의 이물질과 노폐물을 배출시키는데 뛰어나 이뇨작용 및 항균작용을 가진다. 임상에서는 항암작용, 혈압강하작용, 자궁수축작용, 장관운동조절작용 등이 보고된 바 있다. 의이인이 함유하고 있는 유효성분으로는 코익솔(Coixol), 코익세롤라이드(Coxenolide), 시토스테롤(Sitosterol), 스티그마스테롤(Stigmasterol) 등이 분리되어 보고된 바 있다.

한편, 본 발명자들은 천연물 중에서 피부 부작용을 유발하지 않으면서 피부 노화 방지효과를 가지는 원료를 찾기 위해 노력한 결과, 상기와 같은 시호 추출물및 상기 시호 추출물에 인동 추출물, 행인 추출물, 차전초 추출물 및 의이인 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 추출물이 피부노화 방지와 관련된 효과 즉, 각질형성세포 성장촉진 효과, MMP-1의 생합성을 감소시켜 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진하는 효과가 있음을 발견하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 유효성분으로 시호 추출물을 함유하는 각질형성세포 성장촉진용 조성물, MMP-1의 생합성 감소를 통해 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진하는 타입 1 프로콜라겐의 생합성 촉진용 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 상기 시호 추출물에 인동 추출물, 행인 추출물, 차전초 추출물 및 의이인 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 추출물을 함유하는 조성물은 부틸렌 글리콜을 함유하여 방부 및 원료의 안전성을 가짐을 특징으로 한다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 유효성분으로 시호 추출물을 함유하는 각질형성세포 성장촉진용 조성물을 제공한다.

삭제

또한, 본 발명은 유효성분으로 시호 추출물을 함유하는 MMP-1의 생합성 감소를 통해 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진하는 타입 1 프로콜라겐의 생합성 촉진용 조성물을 제공한다.

삭제

또한, 본 발명은 상기 시호 추출물에 인동 추출물, 행인 추출물, 차전초 추출물 및 의이인 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다.

상기 추출물은 물을 추출용매로 하여 추출한 것을 특징으로 하며, 이 때 추 출시 생약재와 추출용매인 물을 중량비로 1:10 내지 1:20의 비율로 혼합하여 추출된 것이 바람직하며, 가장 바람직한 생약재와 물의 혼합비는 1:10의 비율이다. 이 때, 생약재와 물의 혼합비가 1:10 미만일 경우, 그 추출에 어려움이 있고, 생약재와 물의 혼합비가 1:20 초과일 경우, 효과적으로 추출할 수 없기 때문이다.

또한, 상기 추출물을 함유하는 조성물은 1,3-부틸렌 글리콜을 더 함유하는 것을 특징으로 하며, 이 때, 상기 1,3-부틸렌 글리콜은 조성물 100중량부 중 1,3 부틸렌글리콜을 15 내지 30 중량부 더 함유하는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 시호 추출물을 유효성분으로 함유하는 각질형성세포 성장촉진용 , 활성산소 소거용, MMP-1의 생합성 감소를 통해 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진하는 타입 1 프로콜라겐의 생합성 촉진용 조성물, 피부노화방지용 조성물 및 상기 시호 추출물에 인동 추출물, 행인 추출물, 차전초 추출물 및 의이인 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물은 화장료 조성물 또는 약학 조성물임을 특징으로 한다.

상기 화장료 조성물은 전체 조성물 중 총 활성성분 즉, 시호 추출물 또는 상기 시호 추출물에 인동 추출물, 행인 추출물, 차전초 추출물 및 의이인 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 추출물을 0.0001 내지 25 중량%의 농도로 함유하는 것이 바람직하다. 이는 활성성분이 0.0001 중량% 미만일 경우에는 그 효과가 미미하고, 25 중량% 초과일 경우에는 제품의 사용감 및 제형의 안정도에 문제가 발생하기 때문이다.

본 발명의 상기 약학조성물은, 전체 조성물 중 상기 추출물을 0.0001 내지 0.5 중량 %의 농도로 함유하는 것이 바람직하다. 이는 활성성분이 0.0001 중량 % 미만의 농도에서는 그 효과를 얻기 어려우며, 0.5 중량% 초과의 농도에서는 생식기능에 이상을 초래할 수 있기 때문이다.

이하, 본 발명의 구성에 대해 보다 상세하게 설명하면 다음과 같다.

본 발명에 의한 추출물은 각 생약재의 별도의 추출물을 혼합하여 이용할 수도 있고, 생약재를 혼합한 후, 한꺼번에 추출하여 제조된 것을 사용할 수도 있다.

본 발명의 생약재 추출물을 수득하기 위하여, 먼저, 각각의 생약재 즉, 인동, 행인, 차전초, 의이인 각 일정량에 추출용매인 물을 중량비로 1:10 내지 1:20의 비율, 바람직하게는 1:10의 비율로 첨가한 후, 60 내지 100 ℃, 바람직하게는 95 내지 100 ℃ 환류장치 하에서 2 내지 48시간, 바람직하게는 18시간 동안 끓이면서 추출한 후, 여과지로 여과하여 그 여액을 취하고 물을 첨가하여 총 100 ㎖가 되도록 조정한 다음, 조정액을 2 내지 10 ℃, 바람직하게는 5 ℃에서 6 내지 48시간, 바람직하게는 24시간 동안 방치하여 추출물 성분중 용해도가 낮은 물질들을 침전시킨 후 침전이 쉽게 되는 미세 물질들을 잡아줄 수 있는 별도의 여과층, 바람직하게는 셀라이트(Celite)를 이용하여 1 내지 3 회 여과한 후, 이어서 1 내지 0.45 ㎛ 막을 사용하여 막여과를 실시하여 각 생약재 물 추출물을 수득할 수 있다.

일반적으로 화장품 원료로서 이용되는 생약재 추출물의 추출용매로서는 알콜류와 같은 용제를 사용하나 본 발명에서는 한방에서 적용하는 추출방법을 답습하여 추출용매로서 물을 가열 환류시키면서 추출하였다.

상기 생약재 물 추출물의 피부 노화에 대한 효능을 알아보기 위하여, 피부 노화와 관련된 효과 즉, 각질형성세포 성장촉진 효과, 자외선에 의해 생성되는 활성산소 소거 효과, 피부기질의 분해에 관련된 자외선에 의한 MMP-1의 생합성 감소를 통해 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진하는 효과를 측정해 본 결과, 그 효능을 확인하였다.

한편, 상기 추출물은 화장품과 같은 제품에 적용하고자 할 때 문제가 되는 것은 원료로서 장기간 보관을 위한 자체 방부능력과 안정화가 문제이다.

따라서, 본 발명에서는 일반적으로 화장품에서 많이 쓰이는 용매를 중심으로 용매 조성을 결정하여 상기 추출물에 용매를 중량비별로 녹여 피부자극도를 시험하여 최소한의 용매를 사용하도록 하였다.

이 때, 용매의 조성으로는 상기 추출물과 용매가 함유된 본 발명에 따른 조성물 100중량부 중에 1,3-부틸렌글리콜 15 내지 30중량부가 함유된 것이 바람직하고, 특히, 1,3-부틸렌글리콜 15중량부가 함유된 것이 가장 바람직하며, 이 용매조성에서 추출물이 가장 안정하게 장기간 유지될 수 있다.

물추출의 경우, 용제추출에 비해 다당류의 함량이 높고, 물에는 방부 효과가 거의 없기 때문에 추출물을 원료로서 장기간 보관 시 미생물의 발생을 피할 수 없기 때문에 별도의 방부제를 첨가하게 되는데, 방부제의 함량이 높을 경우 인체에 해를 끼치거나 피부 자극을 유발하기 때문에 방부제의 사용 함량을 최소화하여야 한다. 따라서 방부의 효과가 있는 용매 조건을 찾기 위해 여러 실험을 한 결과, 본 발명에 따른 생약재 추출물 100중량부 중에 1,3-부틸렌글리콜 15 내지 30중량부가 함유된 용매조성에서 방부 및 원료의 안정성 모두 우수함을 알 수 있다.

따라서, 본 발명은 상기와 같이 수득된 시호 추출물을 유효성분으로 함유하는 각질형성세포 성장촉진용, 활성산소 소거용, 타입 1 프로콜라겐의 생합성 촉진용 조성물, 노화방지용 조성물 및 상기 시호 추출물에 인동 추출물, 행인 추출물, 차전초 추출물 및 의이인 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공함과 동시에 상기 추출물은 물을 추출용매로 하여 추출한 것을 특징으로 하며, 상기 조성물에 1,3-부틸렌 글리콜을 더 함유하는 것을 특징으로 한다. 또한, 상기 조성물은 화장료 조성물임을 특징으로 한다.

본 발명에 따른 상기 화장료 조성물은, 상기한 추출물 외에 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유하는 것도 무방하다.

본 발명에 따른 추출물은, 상기 화장료 제형으로써 용출물, 용출액, 용출물 또는 용출액의 건조분말을 그대로 도포하는 것이 적합하나, 통상의 외용의 제제 또는 화장료 형태로 제형화 할 수 있다.

본 발명의 추출물을 함유하는 상기 조성물은 화장품, 세안제 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 각종 크림, 로션, 스킨 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누 등이 있다.

또한, 본 발명의 추출물을 함유하는 상기 화장료 조성물은 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

본 발명에 의한 상기 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되지 않 지만, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 에센스, 팩, 젤, 파우더, 립스틱, 메이컵 베이스, 파운데이션, 로션, 연고, 겔, 패취, 미용액, 클렌징 폼, 클렌징크림, 클렌징 워터, 비누 또는 분무제 등과 같은 제형을 들 수 있다.

각 제형의 화장료 조성물에 있어서, 상기의 추출물 이외에 다른 성분들은 기타 화장료의 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의선정하여 배합할 수 있다.

상기한 제제는 그 효과를 증가시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질을 함유할 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총 중량에 대하여 바람직하게는 0.01∼10 중량 %, 보다 바람직하게는 0.01∼5 중량 %로 배합된다.

또한, 본 발명은 상기와 같이 수득된 시호 추출물을 유효성분으로 함유하는 각질형성세포 성장촉진용, 활성산소 소거용, 타입 1 프로콜라겐의 생합성 촉진용 약학조성물 및 상기 시호 추출물에 인동 추출물, 행인 추출물, 차전초 추출물 및 의이인 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 것을 특징으로 하는 약학조성물을 제공한다.

본 발명의 추출물을 함유하는 약학조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 추출물을 포함하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 연고, 크림 등의 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 제형화하여 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 비경구, 경구 등의 다양한 경로로 투여될 수 있으며, 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular)주사에 의해 투여될 수 있다. 이 때, 비경구 루트로는 경피투여가 바람직하며, 그 중에서도 국소도포가 가장 바람직하다.

상기 제제의 투여량은 대상자의 연령, 성별, 체중, 증상, 투여 방법에 의해 상이하나, 외용제의 경우는 1일당 1.0 내지 3.0 ㎖로 이를 1일 1 내지 5회 도포하여 1개월 이상 계속하는 것이 좋다.

또한, 경구형 제형의 경우도 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 0.001 내지 100 mg/㎏의 양을 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다. 또한 그 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

이하, 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명이 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.

실시예 1 내지 16. 생약재 물 추출물의 제조

시호, 인동, 생인, 차전초, 의이인(건화약품(주)) 각 10 g을 취하여 각각 정제수 100 ㎖씩을 첨가한 후, 약 95 내지 100℃ 환류장치 하에서 18시간 동안 끓이면서 추출한 후, 여과지로 여과하여 그 여액을 취하고 물을 첨가하여 총 100 ㎖가 되도록 조정한 다음, 조정액을 5 ℃에서 24시간 동안 방치하여 추출물 성분중 용해도가 낮은 물질들을 침전시킨 후 침전이 쉽게 되는 미세 물질들을 잡아줄 수 있는 별도의 여과층(셀라이트(Celite) 사용)을 이용하여 1회 여과한 후, 이어서 1-0.45 ㎛ 막여과를 실시하여 각 생약재 물 추출물을 수득하였으며, 각 생약재 물 추출물을 하기 표 1의 실시예 1 내지 16과 같은 조합으로 혼합하여 제조한 추출물을 실험에 사용하였다.

성분

실시예

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

시호

Ｏ

인동

Ｏ

행인

Ｏ

차전초

Ｏ

의이인

Ｏ

실시예 17-32. 화장료 조성물의 제조

상기 실시예 1 내지 16에서 제조한 추출물 함유에 따른 각질세포성장촉진 효과, 자외선에 의해 생성되는 활성산소 소거 효과, 피부기질의 분해에 관련된 자외선에 의한 MMP-1의 생합성 감소를 통해 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진시키는 효과를 통한 피부 노화방지 효과를 알아보기 위하여 실시예 17 내지 32 및 비교예 1로 하기 표 2의 조성을 갖는 각각의 화장료 조성물을 제조하였다. 이 때, 각각 유상과 수상은 65 내지 75 ℃에서 완전 용해시키고, 7,000 내지 8,000 rpm에서 5분간 유화시켜 크림제형을 제조하였다.

성분(중량 %)	비교예 1	실시예 17 내지 32
비즈왁스	2	2
스테아릴알코올	3	3
스테아린산	8	8
스쿠알렌	10	10
프로필렌글리콜모노스테아레이트	3	3
폴리옥시에틸렌에테르	1	1
방부제, 항산화제	적량	적량
글리세린	5	5
프로필렌글리콜	4	4
트리에틸아민	1	1
소디윰폴리아크릴레이트	0.2	0.2
정제수	100까지	100까지
각 실시예(1 내지 16)	-	5
카보머	적량	적량

비교예 1. 화장료 조성물의 제조

상기 실시예 17 내지 32에서 제조한 화장료 조성물의 비교예 1로 상기 표 2의 비교예 1의 조성을 갖는 화장료 조성물을 제조하였다. 이 때, 각각 유상과 수상은 65 내지 75 ℃에서 완전 용해시키고, 7,000 내지 8,000 rpm에서 5분간 유화시켜 크림제형을 제조하였다.

실험예 1. 각질형성세포의 성장촉진(MTT assay) 효과

상기 실시예 1 내지 16에서 제조한 추출물이 각질형성세포의 성장능에 미치는 효과를 MTT 방법으로 측정하였으며, 그 방법을 간략하게 설명하면 하기와 같다.

먼저, 각질형성세포를 96 웰 플레이트(well plate)에 웰 당 200 ㎕ 당 5 ㅧ 10³ 개 농도로 심어서 24시간 배양한 후, 0.0001, 0.001, 0.01, 0.1 % 농도로 실시예 1 내지 16에서 제조한 추출물을 처리하여 48시간 동안 배양한 다음, 배양액을 흡입하여 제거한 후, PBS로 1회 세척하고, MTT(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, Sigma, USA) (0.5 ㎎/㎖)용액을 100 ㎕씩 세포에 첨가하고, 4 시간 동안 37 ℃, 5 % CO₂에서 배양하였다. 그 후, 배양액을 흡입하여 제거한 다음, DMSO(dimethyl sulfoxide) 용액 200 ㎕를 첨가하고, 쉐이커(shaker)에서 10분간 흔들어 준 후 ELISA 리더(reader)(DIbiotech, Korea)로 540 ㎚에서의 흡광도를 판독하였다. 이 때 대조군으로는 실시예 1 내지 16에서 제조한 추출물 무처리군을 사용하였다.

그 결과, 하기 표 3에 나타낸 바와 같이, 모든 경우에 있어서 그 효과가 나타남을 알 수 있었으며, 대체로 사용한 추출물의 농도가 높을수록 각질형성세포의 성장촉진 효과도 증가함을 알 수 있었고, 시호 추출물에 인동 추출물, 행인 추출물, 차전초 추출물, 의이인 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유시, 대체로 함유된 추출물이 많을수록 각질형성세포의 성장 촉진 효과도 그에 따라 증가함을 알 수 있었다.

%	0.0001	0.001	0.01	0.1
실시예 1	130	181	235	250
실시예 2	131	180	236	248
실시예 3	130	181	234	249
실시예 4	135	188	245	255
실시예 5	131	182	237	247
실시예 6	133	185	238	250
실시예 7	145	215	252	265
실시예 8	138	188	240	251
실시예 9	149	215	260	269
실시예 10	140	185	241	525
실시예 11	150	214	266	273
실시예 12	165	227	270	290
실시예 13	170	226	278	302
실시예 14	168	221	270	298
실시예 15	155	218	265	277
실시예 16	180	234	285	332
대조군	100	100	100	100

실험예 2. 활성산소 소거 효과

상기 실시예 1 내지 16에서 제조한 추출물의 자외선에 의해 생성되는 활성산소 생성 억제 효과 즉, 활성산소 소거 효과를 알아보기 위하여, 형광물질을 이용하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.

먼저, 실험에 사용한 세포주는 독일 암연구센터의 퓌세니그 박사(Dr. Fusenig)로부터 분양 받은 인간 각질세포 HaCaT 세포주(Human keratinocytes HaCaT cell line)로 형광측정용 96 웰 블랙 플레이트(well black plate)에 웰당 2.0 ×10⁴개로 분주하고 페니실린/스트렙토마이신(penicillin/streptomycin) 첨가된 DMEM(Dulbeccos Modification of Eagles Medium, FBS 10%, Gibco, USA) 배지를 사용하여 37 ℃, 5 % CO₂ 조건에서 1 일간 배양한 후, 0.5, 0.25, 0.125, 0.0625, 0.03125 % 농도로 실시예 1 내지 16에서 제조한 추출물을 처리하였다. 시료 처리에 사용된 배지로 페니실린/스트렙토마이신(penicillin/streptomycin) 첨가된 DMEM(Dulbeccos Modification of Eagles Medium, FBS free, Gibco, USA)을 사용하고 37℃, 5 % CO₂ 조건에서 1일간 배양하였다.

시험시료를 넣고 24 시간 배양한 후 HCSS(HEPES-buffered control salt solution, Gibco, USA)로 세척하여 남아있는 배지를 제거하고 HCSS에 20 μM로 준비된 DCFH-DA(2',7'-dichlorodihydro-fluorescein diacetate, Molecular Probes, USA)를 100 ㎕가하고 37 ℃, 5 % CO₂ 조건에서 20 분간 배양하고 HCSS로 세척하였다. 이 후 각 시료 농도별로 처리된 HCSS를 100 ㎕ 가한 후 초기에 활성산소로 산화된 DCF(dichlorofluorescein)의 형광도를 형광플레이트 리더(Ex=485 nm, Em=530 nm)로 측정하였다. 이후 UVB(30mJ/cm²)를 조사하고 처리직후(표 4) 및 처리 3시간 후(표 5)의 형광도를 형광플레이트 리더(Ex=485 nm, Em=530nm)로 측정하였다.

그 결과, 하기 표 4 및 표 5에 나타낸 바와 같이, 모든 경우에 있어서 그 효과가 나타남을 알 수 있었으며, 대체로 사용한 추출물의 농도가 높을수록 형광도가 낮았고, 시호 추출물에 인동 추출물, 행인 추출물, 차전초 추출물, 의이인 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유시, 대체로 함유된 추출물이 많을수록 형광도도 그에 따라 낮았다. 또한, 처리직후 보다 처리 3시간 후 그 형광도가 더 높았다. 이를 통하여, 대체로 사용한 추출물의 농도가 높을수록 활성 산소 생성이 더 억제됨을 알 수 있었고, 시호 추출물에 인동 추출물, 행인 추출물, 차전초 추출물, 의이인 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유시, 대체로 함유된 추출물이 많을수록 활성산소 생성도 그에 따라 더 억제됨을 알 수 있었다. 또한, 처리직후 보다 처리 3시간 후 그 효과가 더 높음을 알 수 있었다.

%	0.5	0.25	0.125	0.0625	0.03125
실시예 1	71.41	75.70	75.38	82.73	82.67
실시예 2	71.50	75.70	75.70	82.70	82.75
실시예 3	71.38	75.68	75.75	82.74	82.70
실시예 4	71.40	75.50	75.65	82.68	82.70
실시예 5	71.35	75.60	75.65	82.70	82.75
실시예 6	71.40	75.28	75.32	82.50	82.64
실시예 7	71.35	75.22	75.30	82.46	82.60
실시예 8	71.38	75.30	75.45	82.52	82.65
실시예 9	71.38	75.20	75.30	82.38	82.55
실시예 10	71.40	75.36	75.50	82.38	82.50
실시예 11	71.40	75.28	75.52	82.40	82.62
실시예 12	71.00	74.68	75.00	81.38	82.00
실시예 13	70.98	74.56	76.88	81.38	81.98
실시예 14	71.00	74.66	75.05	81.30	81.86
실시예 15	70.86	74.48	75.00	81.36	81.88
실시예 16	70.52	73.58	74.72	80.35	81.21
대조군	100	100	100	100	100

%	0.5	0.25	0.125	0.0625	0.03125
실시예 1	61.05	69.02	73.68	80.86	79.98
실시예 2	61.02	68.99	73.60	80.85	80.01
실시예 3	61.00	68.89	73.55	80.26	79.98
실시예 4	61.05	69.00	73.60	80.66	80.00
실시예 5	61.01	69.01	73.65	80.68	79.99
실시예 6	60.99	69.02	73.00	80.54	79.98
실시예 7	61.00	68.97	72.99	80.55	79.99
실시예 8	60.97	68.99	73.24	80.55	80.01
실시예 9	60.99	69.00	72.85	80.32	79.98
실시예 10	61.01	69.01	73.66	80.44	80.00
실시예 11	60.99	69.00	73.00	80.28	79.99
실시예 12	60.50	68.65	71.60	79.50	79.97
실시예 13	60.44	68.40	71.44	79.77	79.99
실시예 14	60.28	68.55	71.40	79.70	79.98
실시예 15	60.32	68.44	71.56	79.68	79.99
실시예 16	59.47	66.27	71.09	78.64	78.91
대조군	100	100	100	100	100

실험예 3. MMP-1 및 프로콜라겐 분석(procollagen assay)

상기 실시예 1 내지 16에서 제조한 추출물의 피부기질의 분해에 관련된 자외선에 의한 MMP-1의 생합성을 감소시켜 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진시키는 효과를 알아보기 위하여 MMP-1 및 프로콜라겐 분석(procollagen assay)을 하기와 같은 방법으로 수행하였다.

먼저, 정상포피의 지방층을 제거하고 잘게 잘라 콜라겐아제(collagenase)로 표피와 진피를 분리한 후 표피와 진피조직을 각각 0.25 % 트립신(trypsin) 용액에 넣고 37 ℃, 5 % CO₂ 배양기에서 10분간 처리하였다. 이후 보텍스(vortex)를 시행하여 각질형성세포와 섬유아세포를 각각 유리시켰다. 유리된 세포를 모아 세척한 후 각질형성세포는 KGM(keratinocyte growth medium, Clonetics, USA)에 1 ×10⁴ cells/cm² 농도로 배양하였으며, 섬유아세포는 10 % 우태아혈청(FBS)이 첨가된 DMEM 배지에서 배양하였다. 70-80 % 정도 자라면 1:3의 비율로 분주하여 계대 배양하였고, 3-4차 계대배양한 세포를 실험에 이용하였다.

MMP-1의 양을 측정하는 실험을 위해서 섬유아세포를 48 웰 플레이트(well plate)에 90 % 이상 배양한 후 하루동안 기아(starvation)상태로 하였다. 이후 PBS로 2회 세척한 후 PBS를 100 ㎕씩 넣어준 상태에서 플레이트(plate)의 뚜껑을 열고 자외선 A(Dermlight cube 401 equipped with UVA filters, UVAtec, USA)를 15J/cm²로 조사하였다. 조사 직후 다시 PBS로 1회 세척하고, 실시예 1 내지 16에서 제조한 추출물이 각각 0.001, 0.01 % 포함된 우태아 혈청을 포함하지 않은 DMEM을 넣어 37 ℃, 5 % CO₂ 배양기에서 48시간동안 배양한 후, 배지 중에 유리된 MMP-1의 양을 MMP-1 인간 ELISA 시스템(human ELISA system) (RPN2610, Amersham Pharmacia Biothch, UK)을 이용하여 측정하고, 섬유아세포의 총 단백질 양으로 보정하였다(표 6). 프로콜라겐의 양을 측정하는 실험을 위해서는, 동일한 조건에서 기아(starvation)와 자외선 조사 없이, 실시예 1 내지 16에서 제조한 추출물을 각각 가하고, 24시간 후에 배지 중에 유리된 프로콜라겐의 양을 프로콜라겐 타입-1 C-펩타이드 EIA 키트(procollagen type-1 C-peptide EIA kit) (MK101, Takara, Japan)를 사용하여 측정하였다(표 7).

그 결과, 하기 표 6에 MMP-1 억제 효과를 나타낸 바와 같이, 모든 경우에 있어서 그 효과가 나타남을 알 수 있었으며, 대체로 사용한 추출물의 농도가 높을수 록 생성된 MMP-1의 양이 감소함을 알 수 있었고, 시호 추출물에 인동 추출물, 행인 추출물, 차전초 추출물, 의이인 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유시, 대체로 함유된 추출물이 많을수록 생성된 MMP-1의 양도 그에 따라 감소함을 알 수 있었다.

또한, 하기 표 7에 타입 1 프로콜라겐의 생합성 증가 효과를 나타낸 바와 같이, 모든 경우에 있어서 그 효과가 나타남을 알 수 있었으며, 대체로 사용한 추출물의 농도가 높을수록 생성된 프로콜라겐의 양이 증가함을 알 수 있었고, 시호 추출물에 인동 추출물, 행인 추출물, 차전초 추출물, 의이인 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유시, 대체로 함유된 추출물이 많을수록 생성된 프로콜라겐의 양도 그에 따라 증가함을 알 수 있었다.

%	0.001	0.01
실시예 1	90	76
실시예 2	90	76
실시예 3	90	74
실시예 4	88	70
실시예 5	90	76
실시예 6	86	60
실시예 7	82	57
실시예 8	86	62
실시예 9	82	58
실시예 10	84	60
실시예 11	72	54
실시예 12	72	52
실시예 13	74	52
실시예 14	72	54
실시예 15	78	56
실시예 16	70	50
대조군	100	100

%	0.001	0.011
실시예 1	102	106
실시예 2	105	108
실시예 3	103	109
실시예 4	108	115
실시예 5	105	110
실시예 6	110	122
실시예 7	115	124
실시예 8	108	122
실시예 9	116	121
실시예 10	109	122
실시예 11	125	137
실시예 12	126	134
실시예 13	124	133
실시예 14	125	133
실시예 15	120	130
실시예 16	131	140
대조군	100	100

하기에 상기 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 비누 제조

실시예 1의 시호 추출물......................1.00 (%)

유지........................................적당량

수산화나트륨................................적당량

염화나트륨..................................적당량

향료........................................소 량

정제수로 전량을 100으로 하였으며, 상기의 배합비에 의해 비누를 제조하였다.

제제예 2. 로션 제조

실시예 1의 시호 추출물.....................3.00 (%)

L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염.............1.00

수용성 콜라겐 (1 % 수용액)..................1.00

시트르산나트륨..............................0.10

시트르산....................................0.05

감초 엑기스.................................0.20

1,3-부틸렌글리콜............................3.00

정제수로 전량을 100으로 하였으며, 상기의 배합비(%)에 의해 로션을 제조하였다.

제제예 3. 크림 제조

실시예 1의 시호 추출물.....................1.00(%)

폴리에틸렌글리콜모노스테알레이트............2.00

자기유화형모노스테아르산글리세린............5.00

세틸알코올..................................4.00

스쿠알렌....................................6.00

트리2-에틸헥산산글리세릴....................6.00

스핑고당지질................................1.00

1.3-부틸렌글리콜............................7.00

정제수로 전량을 100으로 하였으며, 상기의 배합비(%)로 크림을 제조하였다.

제제예 4. 팩 제조

실시예 1의 시호 추출물......................5.00(%)

폴리비닐알코올..............................13.00

L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염..............1.00

라우로일히드록시프롤린.......................1.00

수용성 콜라겐 (1 % 수용액)...................2.00

1,3-부틸렌글리콜.............................3.00

에탄올.......................................5.00

정제수로 전량을 100으로 하였으며, 상기의 배합비(%)로 팩을 제조하였다.

제제예 5. 미용액 제조

실시예 1의 시호 추출물.......................2.00(%)

히드록시에틸렌셀룰로오스(2 % 수용액).........12.00

크산탄검(2 % 수용액)..........................2.00

1,3-부틸렌글리콜...............................6.00

진한 글리세린..................................4.00

히알루론산나트륨 (1 % 수용액)..................5.00

정제수로 전량을 100으로 하였으며, 상기의 배합비(%)로 미용액을 제조하였 다.

제제예 6. 산제의 제조

실시예 1의 시호 추출물........................100 mg

유당..........................................100 mg

탈크...........................................10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 7. 정제의 제조

실시예 1의 시호 추출물........................50 mg

옥수수전분...................................100 mg

유당.........................................100 mg

스테아린산 마그네슘...........................2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 8. 캅셀제의 제조

실시예 1의 시호 추출물.......................50 mg

옥수수전분...................................100 mg

유당.........................................100 mg

스테아린산 마그네슘...........................2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 9. 주사제의 제조

실시예 1의 시호 추출물.......................50 mg

주사용 멸균 증류수...........................적량

pH 조절제....................................적량

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 10. 액제의 제조

실시예 1의 시호 추출물.......................100 mg

이성화당.....................................10 g

만니톨........................................5 g

정제수........................................적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

상기에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 따른 시호 추출물 및 시호 추출물에 인동 추출물, 행인 추출물, 차전초 추출물 및 의이인 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 것을 특징으로 하는 추출물은 각질형성세포의 성장촉진 효과, 자외선에 의해 생성되는 활성산소 소거 효과, 피부기질의 분해에 관련된 자외선에 의한 MMP-1의 생합성을 감소시켜 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진시키는 효과, 피부노화방지 효과가 있으므로, 상기 추출물을 함유하는 조성물은 각질형성세포 성장촉진용 조성물, 활성산소 소거용 조성물, MMP-1의 생합성 감소를 통해 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진하는 타입 1 프로콜라겐의 생합성 촉진용 조성물, 피부노화방지용 조성물로써 화장품 및 의약품에 유용하게 이용할 수 있다.

Claims

유효성분으로 시호 추출물을 함유하는 각질형성세포 성장촉진용 화장료 조성물.
삭제
유효성분으로 시호 추출물을 함유하는, MMP-1의 생합성 감소를 통해 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진하는 타입 1 프로콜라겐의 생합성 촉진용 화장료 조성물.
삭제
제1항 또는 제3항에 있어서, 인동 추출물, 행인 추출물, 차전초 추출물 및 의이인 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제5항에 있어서, 상기 추출물은 물을 추출용매로 하여 추출한 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
삭제