KR20210024789A - 피부 표피 손상 개선용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 명세서에는 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 수화물 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는 피부 표피 손상 개선용 조성물이 개시된다. 일 측면에서 본 개시의 유효성분인 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 수화물 또는 용매화물은 피부 표피의 재생을 촉진하고, 특히 피부 표피가 외부 환경으로부터 자극을 받아 손상되는 경우 이를 보다 신속하게 회복시킨다는 이점이 있다. 더욱이, 본 개시의 탈수소 아비에틱산은 세포에서 세포 독성을 나타내지 않으므로, 화장료, 약제, 건강기능식품 등 다양한 형태로 피부 표피의 손상 개선 효능을 제공할 수 있다는 이점이 있다.
Description
본 명세서에는 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는 피부 표피 손상 개선용 조성물이 개시된다.
피부는 환경으로부터 지속적인 영향에 노출되게 되는데, 이러한 영향은 곤충, 기생충 및 해충, 애완동물 및 식물, 또는 이들의 배설물 등에 의할 수도 있고, 생활 습관 등에 의한 미세한 피부 스크래치 등에 의할 수도 있다. 피부는 외부에서부터 순서대로 표피, 진피, 피하 조직의 3개의 층으로 크게 구분되며, 그 중 표피에서는 체내의 제 기관을 기온 및 습도 변화, 자외선, 기타 물리적, 화학적인 외부 환경의 자극으로부터 보호해 주는 기능을 가진다. 이때, 상기 자극들이 반복적으로 발생하거나 그 강도가 강한 경우 상기와 같은 피부 표피의 기능이 약해지거나, 최악의 경우 해당 기능을 잃게 될 수 있으므로, 피부 표피에 손상이 발생하는 경우 손상을 빠르게 개선하는 것이 중요하다.
이에, 본 발명자들은 피부 표피에 손상이 발생하는 경우 이러한 손상을 개선하기 위한 다양한 방법을 연구하던 중, 탈수소 아비에틱산이 피부 표피에 발생한 손상을 보다 신속하게 회복시켜주는 효능을 가짐을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
일 측면에서, 본 개시의 목적은 피부 표피 손상 개선용 조성물을 제공하는 것이다.
상기 과제를 달성하기 위하여, 일 측면에서 본 개시는 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는, 피부 표피 손상 개선용 조성물을 제공한다.
또 다른 측면에서, 상기 손상은 물리적 자극에 의한 것일 수 있다.
또 다른 측면에서, 상기 손상은 찰과상, 열상, 절창 및 자상 중 하나 이상일 수 있다.
또 다른 측면에서, 상기 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물은 이의 처리 후 48시간 내에 손상된 피부 표피 면적 전체에 대하여 78% 이상, 의 면적을 재생하는 것일 수 있다.
또 다른 측면에서, 상기 조성물은 Ki-67 유전자의 발현을 촉진하는 것일 수 있다.
또 다른 측면에서, 상기 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물의 투여량은 0.3 내지 9.6 mg/kg/일일 수 있다.
또 다른 측면에서, 상기 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물은 전체 조성물 중량에 대하여 0.01 내지 3 중량%로 포함하는 것일 수 있다.
또 다른 측면에서, 상기 조성물은 화장료 조성물, 약학적 조성물 또는 건강기능식품 조성물일 수 있다.
일 측면에서 본 개시의 유효성분인 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물은 피부 표피의 재생을 촉진하고, 특히 피부 표피가 외부 환경으로부터 자극을 받아 손상되는 경우 이를 보다 신속하게 회복시킨다는 이점이 있다. 더욱이, 본 개시의 탈수소 아비에틱산은 세포에서 세포 독성을 나타내지 않으므로, 화장료, 약제, 건강기능식품 등 다양한 형태로 피부 표피의 손상 개선 효능을 제공할 수 있다는 이점이 있다.
도 1은 인간 각질형성 세포주에 탈수소 아비에틱산이 2.5 μM을 처리한 후 피부세포 손상 개선 효능을 확인한 결과는 나타내는 도이다.
도 2는 인간 각질형성 세포주에 탈수소 아비에틱산이 5 μM을 처리한 후 피부세포 손상 개선 효능을 확인한 결과는 나타내는 도이다.
도 3는 인간 각질형성 세포주에 탈수소 아비에틱산이 10 μM을 처리한 후 피부세포 손상 개선 효능을 확인한 결과는 나타내는 도이다.
도 4는 인간 각질형성 세포주에 탈수소 아비에틱산이 20 μM을 처리한 후 피부세포 손상 개선 효능을 확인한 결과는 나타내는 도이다.
도 5는 인간 각질형성 세포주에 탈수소 아비에틱산이 33 μM을 처리한 후 피부세포 손상 개선 효능을 확인한 결과는 나타내는 도이다.
도 6는 상기 도 1 내지 5의 결과를 하나의 그래프로 나타낸 도이다.
도 7는 인간 각질형성 세포주에 탈수소 아비에틱산을 농도별(2.5 μM, 5 μM, 10 μM, 20 μM 및 40 μM)로 처리한 후 Ki-67의 mRNA 발현양 변화를 확인한 결과를 나타내는 도이다.
도 8는 탈수소 아비에틱산 처리 후 24시간 경과시 인간 각질형성 세포주에 대한 세포 독성을 가지는 지 여부를 확인한 결과를 나타내는 도이다.
도 9는 탈수소 아비에틱산 처리 후 48시간 경과시 인간 각질형성 세포주에 대한 세포 독성을 가지는 지 여부를 확인한 결과를 나타내는 도이다.
도 2는 인간 각질형성 세포주에 탈수소 아비에틱산이 5 μM을 처리한 후 피부세포 손상 개선 효능을 확인한 결과는 나타내는 도이다.
도 3는 인간 각질형성 세포주에 탈수소 아비에틱산이 10 μM을 처리한 후 피부세포 손상 개선 효능을 확인한 결과는 나타내는 도이다.
도 4는 인간 각질형성 세포주에 탈수소 아비에틱산이 20 μM을 처리한 후 피부세포 손상 개선 효능을 확인한 결과는 나타내는 도이다.
도 5는 인간 각질형성 세포주에 탈수소 아비에틱산이 33 μM을 처리한 후 피부세포 손상 개선 효능을 확인한 결과는 나타내는 도이다.
도 6는 상기 도 1 내지 5의 결과를 하나의 그래프로 나타낸 도이다.
도 7는 인간 각질형성 세포주에 탈수소 아비에틱산을 농도별(2.5 μM, 5 μM, 10 μM, 20 μM 및 40 μM)로 처리한 후 Ki-67의 mRNA 발현양 변화를 확인한 결과를 나타내는 도이다.
도 8는 탈수소 아비에틱산 처리 후 24시간 경과시 인간 각질형성 세포주에 대한 세포 독성을 가지는 지 여부를 확인한 결과를 나타내는 도이다.
도 9는 탈수소 아비에틱산 처리 후 48시간 경과시 인간 각질형성 세포주에 대한 세포 독성을 가지는 지 여부를 확인한 결과를 나타내는 도이다.
이하, 상세히 설명한다.
일 측면에서 본 개시는 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는, 피부 표피 손상 개선용 조성물을 제공한다.
일 측면에서 상기 탈수소 아비에틱산(dehydrated abietic acid)은 분자식 C20H28O2의 분자량 300.44 g/mol의 물질로서, 하기 화학식 1로 나타나는 화합물이다.
일 측면에서 '염'은 개체에게 비교적 비독성이고 무해한 유효작용을 갖는 농도로서 탈수소 아비에틱산의 염으로부터 기인한 부작용이 아비에틱산의 이로운 효능을 저하시키지 않는 임의의 모든 유기 또는 무기 부가염을 모두 포함하는 것으로, 아비에틱산으로 표시되는 화합물에 존재할 수 있는 산성 또는 염기성 기(group)의 염을 모두 포함한다. 일례로 유리산(free acid)에 의해 형성되는 산부가염 또는 염기에 의해 형성되는 금속염이 있다.
일례로 상기 유리산으로는 무기산과 유기산이 사용될 수 있으며 무기산으로는 염산, 브롬화수소산, 브롬산, 황산, 염산, 황산, 아황산, 질산 또는 인산 등이 사용될 수 있고 유기산으로는 아세트산, 프로파이옹산, 헥사노산, 시클로펜테인프로피온산, 글라이콜산, 피루브산, 락트산, 말론산, 숙신산, 말산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 3-(4-히드록시벤조일) 벤조산, 신남산, 만델산, 메테인설폰산, 에테인설폰산, 2-에테인-디설폰산 2-히드록시에테인설폰산, 벤젠설폰산, 4-클로로벤젠설폰산, 2-나프탈렌설폰산, 4-툴루엔설폰산, 캄퍼설폰산, 4-메틸바이시클로[2,2,2]-oct-2-엔-1-카르복실산, 글루코햄톤산, 3-페닐프로파이온산, 트리메틸아세트산, tert-7부틸아세트산, 라우릴 황산, 글루콘산, 글루탐산, 히드록시나프토산, 살리실산, 스테아르산, 뮤콘산, 후마산 또는 구연산 등이 사용될 수 있다. 일례로, 상기 금속염으로 알칼리 금속염 또는 알칼리 토금속염이 있다.
일 측면에서 '입체 이성질체'는 동일한 화학구조를 가지고 있고, 구성하는 원자 간의 결합 순서도 동일하지만 삼차원 구조는 다른 분자들을 포함하는 개념으로, 거울상 이성질체, 부분 입체 이성질체를 포함하며, 이때 거울상 이성질체는 비대칭 성질만 다르기 때문에 녹는점, 끓는점, 일반 용매에 대한 용해도 등과 같은 물리적 성질들이 같다.
일 측면에 있어서, '수화물'은 물이 결합되어 있는 화합물을 의미하며, 물과 화합물 사이에 화학적인 결합력이 없는 내포 화합물을 포함하는 광범위한 개념이다.
일 측면에 있어서, '용매화물'은 용질의 분자나 이온과 용매의 분자나 이온 사이에 생긴 고차의 화합물을 의미한다.
일 측면에 있어서, 본 개시의 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물은 시판되는 물질을 구입하여 사용할 수 있으며, 또는 이들을 합성하는 등을 방식으로 수득하여 사용할 수 있다.
일 측면에서 본 개시의 손상은 조직의 정상적인 구조가 형태학적으로 파괴되는 것을 말하며, 창상으로도 지칭되는 개념이다. 일례로 상기 손상은 물리적 자극에 의한 것일 수 있고, 상기 물리적 자극은 스크래치에 의한 것일 수 있다.
일례로 상기 손상은 찰과상, 열상, 절창 및 자상 중 하나 이상일 수 있다. 본 개시에서 '찰과상'은 마찰에 의하여 피부의 표면에 생기는 상처를 지칭한다. 본 개시에서 '열상'은 외부의 힘에 의하여 피부가 찢어져 생기는 상처를 지칭한다. 본 개시에서 '절상'은 끝이 예리한 물체, 예로 칼, 유리, 파편 등에 의해 피부가 잘려져 생기는 상처를 지칭한다. 본 개시에서 '자상'은 끝이 뾰족한 물체, 예로 못, 창 등에 의해 피부가 찔려서 생기는 상처를 지칭한다.
일 측면에서 피부 표피 손상의 개선은 피부 표피 손상의 회복을 의미할 수 있다.
일 측면에서 피부 표피 손상의 개선은 피부 표피층에 손상이 발생과 동시에 또는 피부 표피층에 손상이 발생된 이후에 피부 표피층 세포의 재생이 촉진되는 것을 의미할 수 있다. 일례로 상기 피부 표피층 세포는 피부 각질세포를 의미한다.
일 측면에서 상기 조성물은 Ki-67 유전자의 발현을 촉진하는 것일 수 있고, 상기 발현은 mRNA 수준의 변화를 지칭하는 것일 수 있다. 일 측면에서 상기 Ki-67 유전자는 세포 증식 관련 유전자로 해당 유전자의 발현의 촉진은 세포의 재생을 의미한다.
일 측면에서 본 개시의 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물은 이의 처리 후 비교적 빠른 시간 내, 일례로 48시간 내에 손상된 피부 표피 면적 전체에 대하여 약 78% 이상, 79% 이상, 80% 이상, 81% 이상, 82% 이상, 83% 이상, 84% 이상, 85% 이상, 86% 이상, 87% 이상, 88% 이상, 89% 이상, 90%, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상, 100%의 면적을 재생할 수 있다.
본 명세서에 있어서, '투여량'은 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미하며, '처리량'으로도 지칭할 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있고, 상기 투여는 광의로 기능성 화장품을 제공하는 것을 포함할 수 있다. 일 측면에 있어서, 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물의 투여량은 0.3 이상, 0.45 이상, 0.6 이상, 0.75 이상, 0.9 이상, 1.05 이상, 1.2 이상, 1.35 이상, 1.5 이상, 1.65 이상, 1.8 이상, 1.95 이상, 2.1 이상, 2.25 이상, 2.4 이상, 2.55 이상, 2.7 이상, 2.85 이상, 3.0 이상, 3.3 이하, 3.6 이하, 3.9 이하, 4.2 이하, 4.5 이하, 4.8 이하, 5.1 이하, 5.4 이하, 5.7 이하, 6 이하, 6.3 이하, 6.6 이하, 6.9 이하, 7.2 이하, 7.5 이하, 7.8 이하, 8.1 이하, 8.4 이하, 8.7 이하, 9 이하, 9.3 이하, 또는 9.6 이하의 mg/kg/일일 수 있고, 바람직하게는 0.45 mg/kg/일 내지 7.5 mg/kg/일일 수 있으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 피부 상태, 건강 상태 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다. 일례로 탈수소 아비에틱산의 투여량이 0.3 mg/kg/일 미만인 경우 피부 표피 재생 효과가 미비하고, 탈수소 아비에틱산의 투여량이 9.6 mg/kg/일 초과인 경우 이를 처리하지 않은 대조군보다 효과가 떨어질 수 있다.
일 측면에 있어서, 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물은 조성물 전체 중량에 대하여 0.01 이상, 0.02 이상, 0.03 이상, 0.04 이상, 0.05 이상, 0.06 이상, 0.07 이상, 0.08 이상, 0.09 이상, 0.1 이상, 0.2 이상, 0.3 이상, 0.4 이상, 0.5 이상, 0.6 이하, 0.7 이하, 0.8 이하, 0.9 이하, 1 이하, 1.1 이하, 1.2 이하, 1.3 이하, 1.4 이하, 1.5 이하, 1.6 이하, 1.7 이하, 1.8 이하, 1.9 이하, 2 이하, 2.1 이하, 2.2 이하, 2.3 이하, 2.4 이하, 2.5 이하, 2.6 이하, 2.7 이하, 2.8 이하, 2.9 이하, 3 이하 중량%로 포함하는 것일 수 있으며, 바람직하게는 0.5 내지 2.3 중량%일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 일례로 상기 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물이 0.01 중량% 미만으로 포함되는 경우 피부 표피 재생 효과가 미비하고, 3 초과 중량%로 포함되는 경우 이를 처리하지 않은 대조군보다 효과가 떨어질 수 있다.
일 측면에서 상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.
일 측면에 있어서, '화장료 조성물'은 인체의 외관을 아름답게 하는 모든 물건을 포함하는 개념으로, 본 개시의 피부 표피 손상 개선용 화장료 조성물은 생체리듬에 따른 생리적인 현상으로서 피부에서의 악영향을 억제하여 인체의 외관을 아름답게 하는 물건을 지칭하는 개념이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 측면에 있어서, 화장료 조성물은 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물 외에 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 향료 등과 같은 통상적인 보조제 및 담체가 더 포함될 수 있다. 예를 들어, 상기 화장료 조성물에는 글리세린, 부틸렌 글라이콜, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 토코페릴 아세테이트, 시트릭산, 판테놀, 스쿠알란, 소듐 시트레이트, 알란토인 등의 보조성분이 추가로 더 포함될 수 있다.
일 측면에 있어서, 화장료 조성물은 기본적으로 피부에 도포되는 것이므로, 당업계의 화장료 조성물을 참조하여 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 일례로, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
일 측면에 있어서, 본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는, 담체 성분으로 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 등이 포함될 수 있다.
일 측면에 있어서, 본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트, 폴리아미드 파우더 등이 포함될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄, 디메틸 에테르 등의 추진체를 포함할 수 있다.
일 측면에 있어서, 본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로 용매, 용해화제, 유탁화제 등이 포함될 수 있고, 구체적으로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 포함될 수 있다.
일 측면에 있어서, 본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로 물, 에탄올, 프로필렌글리콜 등의 액상 희석제; 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 등의 현탁제; 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가, 트라칸트 등이 포함될 수 있다.
일 측면에서 상기 조성물은 약학적 조성물일 수 있다.
일 측면에 있어서, '약학적'은 질병을 예방하거나 치료하는 데 사용되는 물질을 연구하는 분야를 의미한다.
일 측면에 있어서, 상기 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 또한, 식이요법, 물리치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하다.
일 측면에 있어서, 상기 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 눈 점막, 경구, 직장 또는 정맥, 근육 또는 피하에 투여될 수 있고, 바람직하게는 외용제로서 피부 표면에 처리될 수 있다.
일 측면에서 상기 조성물은 건강기능식품 조성물일 수 있다.
일 측면에 있어서, '건강기능식품 조성물'은 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병 방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품으로, 장기적으로 복용하였을 때 인체에 무해하여야 한다.
일 측면에 있어서, 건강기능식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 건강기능식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
일 측면에 있어서, 건강기능식품 조성물을 식품 첨가물로 사용할 수 있고, 이 경우 통상적인 방법에 따라 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
일 측면에 있어서, 건강기능식품의 종류의 예로 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병 방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계된 식품을 모두 포함한다.
일 측면에 있어서, 건강기능식품 조성물은 상기 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다.
중복되는 내용은 본 명세서의 복잡성을 고려하여 생락하며, 본 명세서에서 달리 정의되지 않은 용어들은 본 개시가 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것이다. 또한, 본 명세서 내에서 사용된 '또는'은 명확하게 반대하는 내용을 명시하고 있지 않는 한, '및'을 포함하는 개념이다.
이하, 본 개시의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 개시의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 개시의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 개시의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 개시를 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
실시예 1. 탈수소 아비에틱산(dehydrated abietic acid)의 수득
하기 화학식 1의 탈수소 아비에틱산은 Ramidus AB社로부터 수득하여 사용하였다.
[화학식 1]
실시예 2. 피부 손상에 대한 피부세포 손상 개선 효능 확인
인간 각질형성 세포주(human keratinocyte cell line)인 HaCaT 세포를 24웰 세포배양 디쉬에 2 x 10^5 cells / 0.6mL 농도로 seeding하고, 37 ℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다. 24시간 후, 배양디쉬 내 세포가 단층으로 가득 채워진 것을 확인한 다음, 1% 소태아혈청이 들어있는 세포배양액으로 교체해 주고 2시간 동안 추가 배양하였다. 스크래치 전용 도구(SPL Scratcher, Cat No.201924)를 이용하여 단층으로 채워진 세포에 선형 스크래치를 준 다음, 세포배양으로 2회 세척 후, 탈수소 아비에틱산이 각각 2.5 μM, 5 μM, 10 μM, 20 μM 및 30 μM로 첨가되어 있는 세포배양액(1% 소태아혈청 함유)을 0.6mL씩 세포에 처리하였다. 이때, 대조군(무처리군)에는 탈수소 아비에틱산이 첨가되어 있지 않은 세포배양액(1% 소태아혈청 함유)을 0.6 mL로 세포에 처리하였다. 이 후 타임랩스 현미경(JuLI stage image recorder, Nanoentek, Korea) 위에 올리고, 1시간 간격으로 48시간 동안 스크래치된 위치를 이미지로 저장하였다(그룹당 n=4). Wound healing area(%)는 처음 스크래치 면적 대비 시간 흐름에 따라 세포가 채워진 면적을 백분율로 계산하였으며, 세포가 채워진 면적 계산은 타임랩스 현미경에 연동된 소프트웨어 자체 기능을 이용하여 자동 산출하였다. 그 결과는 도 1 내지 6에 그래프로 나타내었고, 그 중 도 6은 탈수소 아비에틱산을 농도별로 처리한 결과를 하나의 그래프로 나타낸 도이다.
도 1 내지 6에 나타낸 바와 같이, 대조군과 달리 탈수소 아비에틱산을 처리한 경우 스크래치라는 물리적 자극으로 손상된 단층의 각질형성세포가 비교적 빠른 시간 내에 상기 손상이 개선되었다.
실시예 3. 세포증식에 관련된 유전자 Ki-67 의 mRNA 발현양 변화 확인
인간 각질형성 세포주(human keratinocyte cell line)인 HaCaT 세포를 6웰 세포배양 디쉬에 3 x 10^5 cells / 2 mL 농도로 seeding하고, 37 ℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다. 이후 탈수소 아비에틱산을 각각 2.5 μM, 5 μM, 10 μM, 20 μM 및 40 μM 농도로 처리한 후 18시간 동안 배양하였다. RNA를 추출하기 위해 세포에 트리졸 1 mL씩 넣어주고, 상온에서 5분간 균질화시켰다. 1.5mL 튜브에 옮기고, 여기에 클로로포름을 0.2mL씩 넣은 다음, 손으로 15초간 흔들어 섞어주고, 상온에서 15분간 반응시킨 후, 4℃, 13,000rpm에서 15분간 원심분리 하였다. 투명한 상층액 0.4mL을 새 튜브에 옮기고, 이소프로필 알코올을 0.4mL 넣고, 손으로 15초간 흔들어 섞어주고, 상온에서 8분간 반응시킨 후, 4℃, 13,000rpm에서 8분간 원심분리 하였다. 펠렛만 남기고 상층액은 버린 다음, 75%(v/v) 알코올을 0.5mL씩 넣고, 4℃, 10,000rpm에서 5분간 원심분리 하였다. 펠렛만 남기고 상층액은 버린 다음, 탈이온수를 22μL씩 넣어 순수한 RNA를 녹였다. 스펙트로미터 기기를 이용하여 260nm 흡광도 측정으로 RNA 양을 정량한 다음, cDNA를 합성하기 위해 RNA 4μg, 10x RT 버퍼 (Invitrogen, #18080-051) 3.5μL, 50μM 올리고 dT 2μL, 0.1M DTT 3.5μL, 25mM MgCl2 7μL, 10mM dNTP 3μL, RNAaseOutTM 1μL, Superscript III 1μL을 섞어주었다. 그런 다음, 35μL이 되도록 나머지 양을 탈이온수로 넣어주었다. PCR 기기를 이용하여 50℃에서 60분간 RT 반응을 진행하였다. 만들어진 cDNA 혼합액 35μL에 탈이온수 165μL 를 넣어 총 200μL로 희석하였다. Real-time qPCR을 진행하기 위해 cDNA혼합액 5μL, 탈이온수 4μL, Taqman 2X Universal PCR Master Mix (ABI, #4304437) 10μL, Taqman primer (대조군 유전자; RPLP0, 실험군 유전자; KI-67) 1μL씩을 섞어주어 총 20μL를 맞춘 다음, 96 웰 PCR tube의 각 웰마다 상기 용액을 넣어주고 Real-time PCR 장비(ABI, 모델명: 7500fast)에 로딩하였다. 리액션 셋업은 다음과 같다. 1. 홀딩단계: 95℃(10분), 2. 싸이클링단계: 95℃(15초) 및 60℃(60초), 총 40 싸이클을 반복한다. 이 때 사용된 Taqman 프라이머는 리포터역할 형광분자 FAM, ??처 NFQ-MGB 로 구성된 상용 프라이머를 이용하였다. KI-67 유전자의 발현량을 비교한 결과는 도 7에 나타내었다.
도 7에 나타낸 바와 같이, 탈수소 아비에틱산의 처리에 의하여 Ki-67 유전자의 mRNA 발현이 증가하였다. 구체적으로 Ki67 유전자의 mRNA 발현이 무처리군(대조군) 대비 탈수소 아비에틱산 10μM 농도 처리시 6.5%, 20μM 농도 처리시 13.7%, 40μM 농도 처리시 8.7% 수준으로 유의적으로 증가하였다.
실시예 4. 세포 독성 확인
인간 각질형성 세포주인 HaCaT 세포를 24웰 세포배양 디쉬에 7 x 10^4 cells / 0.6mL 농도로 seeding 하고, 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다. 24시간 후, 탈수소 아비에틱산을 각각 2.5 μM, 5 μM, 10 μM, 20 μM 및 30 μM 농도로 첨가되도록 제조한 세포배양액을 각 웰의 세포에 넣어주었다(그룹당 n=4). 각각 24시간 및 48시간이 경과한 후, cell viability assay reagent(CCK-8 reagent, Dojindo, Japan)를 세포배양액에 5%(v/v) 농도로 희석한 것을 세포에 넣어주고, 37℃, 5% CO2 조건에서 90분간 반응시켰다. 반응이 일어난 세포배양액을 96웰 디쉬에 0.2 mL씩 옮겨, 450nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. 흡광도의 세기는 세포생존율에 비례하므로, 대조군(무처리군)의 흡광도 세기를 100%로 하고, 이를 기준으로 탈수소 아비에틱산 처리군의 상대적 세포생존율(%)을 산출하였다. 탈수소 아비에틱산 처리 후 24시간 동안 배양한 실험군에 대한 결과는 도 8에 나타내고, 48시간 동안 배양한 실험군에 대한 결과는 도 9에 그래프로 나타내었다.
도 8 내지 9에 나타낸 바와 같이, 탈수소 아비에틱산을 처리하는 경우 세포에 독성을 나타내지 않는 것으로 이는 화장료 등 다양한 분야에서 활용될 수 있음을 시사한다.
본 발명의 일 실시예에 따른 조성물의 제제예를 아래에서 설명하나, 다른 여러 가지 방식으로도 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아니라 본 발명을 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1. 화장료 제제의 제조
1-1. 유연화장수 제조
탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물 0.1중량%, 1,3-부틸렌글리콜 5.2중량%, 올레일알코올 1.5중량%, 에탄올 3.2중량%, 폴리솔베이트 20 3.2중량%, 벤조페논-9 2.0중량%, 카르복실비닐폴리머 1.0중량%, 글리세린 3.5중량%, 미량의 향, 미량의 방부제 및 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 유연화장수를 제조하였다.
1-2. 밀크로션 제조
탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물 0.1중량%, 글리세린 5.1중량%, 프로필렌글리콜 4.2중량%, 토코페릴아세테이트 3.0중량%, 유동파라핀 4.6중량%, 트리에탄올아민 1.0중량%, 스쿠알란 3.1중량%, 마카다미아너트오일 2.5중량%, 폴리솔베이트 60 1.6중량%, 솔비탄세스퀴롤레이트 1.6중량%, 프로필파라벤 0.6중량%, 카르복실비닐폴리머 1.5중량%, 미량의 향, 미량의 방부제, 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 밀크로션을 제조하였다.
1-3. 영양크림 제조
탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물 0.5중량%, 글리세린 4.0중량%, 바셀린 3.5중량%, 트리에탄올아민 2.1중량%, 유동파라핀 5.3중량%, 스쿠알란 3.0중량%, 밀납 2.6중량%, 토코페릴아세테이트 5.4중량%, 폴리솔베이트 60 3.2중량%, 카르복실비닐폴리머 1.0중량%, 솔비탄세스퀴올레이트 3.1중량%, 미량의 향, 미량의 방부제 및 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 영양크림을 제조하였다.
제제예 2. 약학적 제제의 제조
2-1.
산제 제조
탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물 20㎎, 유당 100㎎ 및 탈트 10㎎을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
2-2. 정제 제조
탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물 10㎎, 옥수수전분 100㎎, 유당 100㎎ 및 스테아린산 마그네슘 2㎎을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
2-3. 캡슐제 제조
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물 10㎎, 결정성 셀룰로오스 3㎎, 락토오스 14.8㎎ 및 마그네슘 스테아레이트 0.2㎎을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
제제예 3. 건강 기능 식품 제제의 제조
3-1. 건강식품 제조
탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물 100㎎, 비타민 혼합물 적량, 비타민 A 아세테이트 70g, 비타민 E 1.0㎎, 비타민 B1 0.13㎎, 비타민 B2 0.15㎎, 비타민 B6 0.5㎎, 비타민 B12 0.2g, 비타민 C 10㎎, 비오틴 10g, 니코틴산아미드 1.7㎎, 엽산 50g, 판토텐산 칼슘 0.5㎎, 무기질 혼합물 적량, 황산제1철 1.75㎎, 산화아연 0.82㎎, 탄산마그네슘 25.3㎎, 제1인산칼륨 15㎎, 제2인산칼슘 55㎎, 구연산칼륨 90㎎, 탄산칼슘 100㎎ 및 염화마그네슘 24.8㎎을 혼합한 다음, 과립을 제조하고 통상의 방법에 따라 건강식품을 제조하였다. 이때, 상기 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
3-2. 건강음료 제조
통상의 건강음료 제조방법에 따라 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물 100㎎, 비타민 C 15g, 비타민 E(분말) 100g, 젖산철 19.75g, 산화아연 3.5g, 니코틴산아미드 3.5g, 비타민 A 0.2g, 비타민 B1 0.25g, 비타민 B2 0.3g 및 정량의 물을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 건강음료를 제조하였다. 이때, 상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
Claims (10)
- 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는, 피부 표피 손상 개선용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 손상은 물리적 자극에 의한 것인 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 손상은 찰과상, 열상, 절창 및 자상 중 하나 이상인 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물은 이의 처리 후 48시간 내에 손상된 피부 표피 면적 전체에 대하여 78% 이상의 면적을 재생하는 것인, 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 조성물은 각질형성세포 내 Ki-67 유전자의 발현을 촉진하는 것인 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물의 투여량은 0.3 내지 9.6 mg/kg/일인 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 탈수소 아비에틱산, 이의 염, 입체 이성질체, 수화물 또는 용매화물은 조성물 전체 중량에 대하여 0.01 내지 3 중량%로 포함하는 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 조성물은 화장료 조성물인 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 조성물은 약학적 조성물인 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 조성물은 건강기능식품 조성물인 조성물.
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| KR1020190104385A KR20210024789A (ko) | 2019-08-26 | 2019-08-26 | 피부 표피 손상 개선용 조성물 |
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Citations (2)
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|---|---|---|---|---|
| KR101822414B1 (ko) | 2015-07-29 | 2018-01-30 | 한림대학교 산학협력단 | 돌미나리 추출물을 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 예방 또는 개선용 조성물 |
| KR101902911B1 (ko) | 2017-11-02 | 2018-10-01 | 코스맥스바이오 주식회사 | 산수국 추출물을 함유하는 자외선에 의한 인간 피부세포 손상 개선용 조성물 |
-
2019
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Patent Citations (2)
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