CN1282254A - 调节吞噬作用和icam-1表达的组合物和方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了用来治疗和预防某些哺乳动物疾病的组合物,这些疾病可通过增加或减少合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善。本发明还提供了改变细胞中吞噬作用或ICAM-1表达水平的方法。本发明还提供了治疗和预防受吞噬作用或ICAM-1表达之变化影响的哺乳动物疾病的方法。本发明所有的方法和组合物均涉及特异性增加或减少吞噬作用或ICAM-1表达的制剂。最后,本发明提供了有关的生产制品。
Description
发明领域
本发明涉及哺乳动物疾病的预防和治疗,该疾病可通过改变某些细胞内的吞噬作用或ICMA-1表达来改善。本发明提供了各种组合物、方法和生产制品,并涉及了各种广泛的疾病,如皮肤、免疫和中枢神经系统疾病。本发明根据的是发现了调节吞噬作用和ICAM-1表达的机制。
发明背景
通常的吞噬作用和ICAM-1表达
吞噬作用(胞吞作用)是摄食的细胞过程,通常是颗粒物质分离或破坏的细胞过程。在脊椎动物中,它是各种白细胞和网状内皮细胞的特征性功能。吞噬作用作为体内重要的防御机制,起抵抗微生物感染、抵抗外来颗粒和组织碎片闭合粘液表面和组织的作用。吞噬作用和胞饮作用是不同的,胞饮作用是细胞通过内陷和夹断细胞质膜来吸收液体。在这里,术语“胞吞作用”和“细胞摄入”可以互换使用。
胞间粘附分子-1(“ICAM-1”)是一种可诱导的细胞表面糖蛋白,其参与细胞-细胞之间的粘附和吞噬作用。具体地说,ICAM-1的调节在炎性情况、脓毒休克和神经病学疾病中起一定作用(参见van de Stolpe和van der Saag,J Mol Med 74:1,13-33,1996)。在自身免疫疾病如类风湿性关节炎和牛皮癣中,ICAM-1的水平升高。在ICAM-1缺失的小鼠中,炎性和免疫反应被破坏(Sligh等人,PNAS 90:8529-33 1993)。
与吞噬作用和ICAM-1表达有关的哺乳动物疾病
在不同细胞中,吞噬作用和ICAM-1表达的水平具有重要的牵连。本文提供了这些牵连的许多例子。
免疫有关的和炎性疾病
导致肺气肿的主要原因是肺中外来物质(例如烟凝结物)的堆积。在此堆积后随即对尝试性吞噬期间失粒的中性粒细胞补充(Travis,等人,Am.J.Respir.Crit.CareMed.Vol.150:5143-5146,1994)。
免疫性肺病(如变应性支气管肺曲霉病)导致粘液堵塞气道、嗜酸性肺炎和细支气管闭塞。在该疾病中,中性粒细胞弹性酶断裂的免疫球蛋白和消化的C3b受体限制了病原体的胞吞作用(Greenberger,JAMA,278卷,No.22,1997)。中性粒细胞弹性酶的增加(同时破坏了吞噬作用)对于肺中持续细菌感染是有利的,尤其对于CF患者来说(Doring,等人,Am.J.Respir.Crit.Care Med.150:6 Pt 2,S114-7,1994)。
牙周病开始时是蚀斑堆积在齿根部,然后是机会细菌在牙床下生长。和肺气肿中的免疫反应一样,中性粒细胞被募集至受感染部位,然后在破坏性吞噬作用期间失粒(Travis,等人,Am.J.Respir.Crit.Care Med.Vol.150:5143-5146,1994)。牙周病患者的多形核细胞(“PMN”)对受调理的金黄色葡萄球菌粘附和摄食的速度明显慢于健康对照(MacFarlane,等人,J Peiodontol 1992;63:908-913,1992)。
在遗传上免疫调和的个体、获得免疫抑制的个体(如感染了HIV的个体)或临时获得免疫抑制的个体(例如在器官移植、植入外来物、瓣膜替代或癌症治疗等后)通常会得继发性感染。
糖尿病患者的肺多形核白细胞显示出,与健康的个体相比,其在摄食和杀死细菌水平上的吞噬活性降低(例如Musclow,等人,Cytobios,65:15-24 1991)。特别是,免疫反应中的糖尿病异常包括趋化性受损,吞噬作用受损和粘附作用受损(Grant-Theule,Periodontal Abstracts,Vol.44,No.3,1996)。这些患者通常患有不希望的感染。
心血管系统疾病
动脉粥样硬化斑块的形成由年龄老化或气球血管成形术后的再狭窄引起。动脉粥样硬化病灶含有富含胆固醇的颗粒,这些颗粒有许多聚集在一起并被巨噬细胞吞噬作用以不受调节的方式内化。该吞噬过程不依赖于LDL或清除受体。载有脂质的巨噬细胞(称为泡沫样受体)能导致动脉粥样硬化斑块进一步生长(Hoff,等人,European Heart Journal,Ⅱ(Supp.E),105-115,1990;Robert,等人,Annals New YorkAcad.of Sciences,673:331-341,1992)。
中枢神经系统疾病
已经表明,在淀粉样斑块核心周围发现的小角质细胞含有β/A4淀粉样蛋白的空斑原纤维(E1 Hachimi和Foncin,C.R.Acad.Sci.Paris,Sciences de la vie/Life sciences,317:445-451,1994)。小角质细胞吞噬和清除老年性空斑核心的能力在星形角质细胞分泌的可扩散因子存在下受到抑制。该因子阻止了老年性空斑的清除,从而使得它们在Alzheimer′s疾病和其它神经病理学退化过程中持续存在(DeWitt,等人,Experimental Neurology,149:329-340,1998)。
发现中性粒细胞吞噬作用在心理压抑的患者中减弱(例如McAdams和Leonard,Prog.Neuro-Psychopharmacol.& Biol.Psychiat.,Vol.17∶971-984,1993;Maes等人,J.Psychiat.Res.,Vol.26,No.2,125-134,1992)。患恐怖症的患者具有低下的吞噬作用和杀细胞能力。用于治疗神经性疾病的苯并二氮杂化合物显示出减少或抑制了吞噬作用(例如Covelli等人,Immunopharmacology and Immunotoxicology,11(4):701-714,1989)。
皮肤疾病
中皮(mid-dermal)弹性组织变性(一种皮肤病)在临床上的特征是出现皱纹和老年性外表,这部分是由形态上正常的弹性组织的吞噬作用所导致的(例如Fimiani,等人,Arch Dermatol Res.,287:152-1 57,1995)。
许多类型的色素沉着疾病以多种形式存在。它们可以是遗传性的(例如白癫风)、获得性的(例如炎症后白糠疹,自发性滴状黑色素过少症、黑斑病)和通过感染传播(例如花斑糠疹)。这些疾病可以是良性的和自限性的(例如分离的咖啡牛乳色斑、光接触性皮炎),或是更严重的潜伏疾病的征兆(例如多发性咖啡牛乳色斑、恶性黑棘皮病)(Hacker,Postgrad Med99:177-86,1996)。
已知UV辐射诱导产生炎性状况和ICAM-1表达调节异常。这种诱导作用被记载成晒斑形式和PUVA治疗的副作用。PUVA治疗用于治疗各种皮肤疾病,如牛皮癣,一种与ICAM-l表达上调有关的疾病(例如Tronnier,等人,J.Cutan Pathol 1997,24:278-85;Ahrens,等人,PNAS 1997,94:6837-41)。
寻常痤疮是一种多阶段的疾病。基础的痤疮病损是粉刺。当中性粒细胞被募集至粉刺区域,第二个炎性阶段是疾病进展的原因。几乎所有与痤疮有关的问题均来自该炎性阶段。经过四环素处理的患者的中性粒细胞证实向趋化因子迁移的速度较慢,在体外的随机迁移受到抑制(例如Webster,J.Am.Acad.Dermatol.1995,33:247-53)。
蛋白酶激活的受体
蛋白酶激活的受体-2(″PAR-2″)是7个跨膜G蛋白偶联的受体,它的序列与凝血酶受体(“TR′s”,也称为PAR-1,和PAR-3)以及PAR-4有关但不同。蛋白酶激活的受体通过胞外结构域处精氨酸-丝氨酸断裂而被蛋白水解激活。然后,新产生的N端激活了作为联系在一起的配体的这些受体。胰蛋白酶能激活两种受体,但是凝血酶只能激活TR′s和PAR-4。只有PAR-2被肥大细胞类胰蛋白酶激活。这些受体还能被对应于其新的N端、独立于受体断裂的肽激活。SLIGRL(小鼠PAR-2-激活肽)在激活人受体上与SLIGKVD(人激活肽)等效。(综述参见Coughlin,PNAS 91:9200-202,1994;Brass和Molino,Thrombosis and Haemostasis 78:234-41,1997;Morley,等人,Can.J.Physilo Pharmacol 25:832-41,1997)。尽管TR的功能已有详细记载,但是PAR-2的生物学性质还未被完全鉴定。最近,Derian等人,在Cell Growth & Differentiation8:743-749,1997中描述了PAR-2激活在抑制角质化细胞生长和分化中的作用。
发明概述
本发明提供了用于治疗和预防某些哺乳动物疾病的组合物。这些组合物和有关的方法根据的是发现了调节吞噬作用和ICAM-1表达的机制。本发明包括下列组合物:
(1)一种治疗受累于某疾病的哺乳动物的组合物,该疾病可通过增加合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该组合物包括(a)治疗有效量的增加吞噬作用或ICAM-1表达的制剂,和(b)药学上或美容上可接受的载体;
(2)一种治疗受累于某疾病的哺乳动物的组合物,该疾病可通过减少合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该组合物包括(a)治疗有效量的特异性减少吞噬作用或ICAM-1表达的制剂,和(b)药学上或美容上可接受的载体;
(3)一种用于预防哺乳动物患某种疾病的组合物,该疾病可通过增加合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该组合物包括(a)预防有效量的特异性增加吞噬作用或ICAM-1表达的制剂,和(b)药学上或美容上可接受的载体;和
(4)一种用于预防哺乳动物患某种疾病的组合物,该疾病可通过减少合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该组合物包括(a)预防有效量的特异性减少吞噬作用或ICAM-1表达的制剂,和(b)药学上或美容上可接受的载体。
本发明还提供了改变细胞中吞噬作用或ICAM-1表达水平的方法。本发明首先提供了一种增加哺乳动物细胞中吞噬作用或ICAM-1表达的方法,该方法包括使该细胞与有效量的特异性增加吞噬作用或ICAM-1表达的制剂接触。其次,本发明提供了一种减少哺乳动物细胞中吞噬作用或ICAM-1表达的方法,该方法包括使细胞与有效量的特异性减少吞噬作用或ICAM-1表达的制剂接触。
本发明还提供了治疗和预防受改变的吞噬作用或ICAM-1表达之影响的疾病的方法。具体地说,本发明提供了下列方法:
(1)一种治疗受累于某疾病的哺乳动物的方法,该疾病可通过增加合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该方法包括给予该哺乳动物治疗有效量的特异性增加吞噬作用或ICAM-1表达的制剂;
(2)一种治疗受累于某疾病的哺乳动物的方法,该疾病可通过减少合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该方法包括给予该哺乳动物治疗有效量的特异性减少吞噬作用或ICAM-1表达的制剂;
(3)一种预防哺乳动物患某种疾病的方法,该疾病可通过增加合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该方法包括给予该哺乳动物预防有效量的特异性增加吞噬作用或ICAM-1表达的制剂;和
(4)一种预防哺乳动物患某种疾病的方法,该疾病可通过减少合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该方法包括给予该哺乳动物预防有效量的特异性减少吞噬作用或ICAM-1表达的制剂。
本发明还提供了用来给予哺乳动物本发明组合物的制品,它包含一个与该组合物操作性附带的固体输送工具。
最后,本发明提供了一种给予哺乳动物治疗、预防或美容组合物的方法,该方法包括给予该哺乳动物(a)化合物和(b)组合物,该组合物包含药学或美容上可接受的载体以及特异性增加吞噬作用的制剂,该制剂的用量足以增加希望摄取化合物的细胞中的吞噬作用,其中组合物的给予在给予化合物之前和/或同时进行。
附图简述
图1显示了在用化合物Ⅰ或SLIGRL处理后暴露于荧光微珠下的原代角质细胞。
图2显示了在用化合物Ⅰ或SLIGRL处理后暴露于荧光微珠下的角质细胞系的细胞。
图3显示了在用大豆胰蛋白酶抑制剂(“STI”)或SLIRL处理后暴露于荧光微珠下的成纤维细胞系的细胞。
图4A显示了经STI处理并暴露于荧光大肠杆菌下的巨噬细胞的剂量响应曲线。
图4B显示了经化合物Ⅰ或SLIGRT处理并暴露于荧光大肠杆菌下的巨噬细胞的剂量响应曲线。
图5A显示了经SLIGRL、STI或化合物Ⅰ处理的角质细胞的黑色素摄食。
图5B显示了采用分离的黑素体后和图5A一样的结果。
图6A显示了经处理的角质细胞的ICAM-1免疫荧光染色。
图6B显示了经处理的角质细胞的免疫沉淀的ICAM-1蛋白的Western印迹。
图7A显示了移植到免疫抑制的小鼠上、经载体或SLIGRL处理过的人皮肤。
图7B显示了移植到免疫抑制小鼠上、经载体或SLIGRL处理过的人皮肤的组织切片。
图8显示了经处理的角质细胞的扫描电子显微图象。
图9显示了经处理的角质细胞的F-肌动蛋白染色。
图10显示了抗ICAM-1抗体对角质细胞吞噬作用的影响。
图11显示了本发明的化合物减少人老年斑的效果。
发明详述
本发明根据的是发现可以特异性地改变PAR-2介导的吞噬作用和PAR-2介导的ICAM-1表达。这种特异性增加和减少这些细胞功能的能力可以治疗和预防某些疾病,这些疾病可通过增加或减少吞噬作用和/或ICAM-1表达来改善。因此,本发明提供了各种组合物和方法用来治疗和预防通过特异性改变吞噬作用和/或ICAM-1表达来改善的疾病。
更具体地说,本发明提供用来治疗和预防某些哺乳动物疾病的组合物。这些组合物包括下列组合物:
(1)一种治疗受累于某疾病的哺乳动物的组合物,该疾病可通过增加合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该组合物包括(a)治疗有效量的增加吞噬作用或ICAM-1表达的制剂,和(b)药学上或美容上可接受的载体;
(2)一种治疗受累于某疾病的哺乳动物的组合物,该疾病可通过减少合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该组合物包括(a)治疗有效量的特异性减少吞噬作用或ICAM-1表达的制剂,和(b)药学上或美容上可接受的载体;
(3)一种用于预防哺乳动物患某种疾病的组合物,该疾病可通过增加合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该组合物包括(a)预防有效量的特异性增加吞噬作用或ICAM-1表达的制剂,和(b)药学上或美容上可接受的载体;和
(4)一种用于预防哺乳动物患某种疾病的组合物,该疾病可通过减少合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该组合物包括(a)预防有效量的特异性减少吞噬作用或ICAM-1表达的制剂,和(b)药学上或美容上可接受的载体。
本发明还提供了改变细胞中吞噬作用或ICAM-1表达水平的方法。本发明首先提供了一种增加哺乳动物细胞中吞噬作用或ICAM-1表达的方法,该方法包括使该细胞与有效量的特异性增加吞噬作用或ICAM-1表达的制剂接触。其次,本发明提供了一种减少哺乳动物细胞中吞噬作用或ICAM-1表达的方法,该方法包括使细胞与有效量的特异性减少吞噬作用或ICAM-1表达的制剂接触。
本发明还提供了治疗和预防受改变的吞噬作用或ICAM-1表达之影响的疾病的方法。具体地说,本发明提供了下列方法:
(1)一种治疗受累于某疾病的哺乳动物的方法,该疾病可通过增加合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该方法包括给予该哺乳动物治疗有效量的特异性增加吞噬作用或ICAM-1表达的制剂;
(2)一种治疗受累于某疾病的哺乳动物的方法,该疾病可通过减少合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该方法包括给予该哺乳动物治疗有效量的特异性减少吞噬作用或ICAM-1表达的制剂;
(3)一种预防哺乳动物患某种疾病的方法,该疾病可通过增加合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该方法包括给予该哺乳动物预防有效量的特异性增加吞噬作用或ICAM-1表达的制剂;和
(4)一种预防哺乳动物患某种疾病的方法,该疾病可通过减少合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该方法包括给予该哺乳动物预防有效量的特异性减少吞噬作用或ICAM-1表达的制剂。
本组合物可以是本领域已知的任何形式。在一个实施方案中,该组合物包含药学上可接受的载体以及一种或多种分散的药物化合物,该药物化合物起特异性改变吞噬作用或ICAM-1表达之制剂的作用。在另一个实施方案中,该组合物包含认为是药学上或美容上可接受的天然存在的组合物、提取物或其组分。这些天然存在的组合物含有起活性剂作用的某些组分,以及起药学上或美容上之载体作用的其它许多组分。本组合物可以是人造的、天然存在的或它们的组合。另外,该组合物可以是本领域已知的任何物理形式,例如液体(如溶液、乳膏、洗液、凝胶、可注射剂)、固体(如片剂、胶囊剂、粉末、颗粒剂)、气雾剂和涂料。
本发明可采用抑制胰蛋白酶的天然化合物,例如是丝氨酸蛋白酶抑制剂,尤其是大豆胰蛋白酶抑制剂(“STI”)。大豆提取物、利马豆提取物和类似的提取物,以及从大豆等制得的其它天然制品如豆奶、豆浆、豆面酱,来自大豆或利马豆等的胰蛋白酶抑制剂,这些也能通过该机制来减少吞噬作用。在一个较佳的实施方案中,天然存在的组合物是豆奶或STI。丝氨酸蛋白酶抑制剂的其它来源例如包括,下列植物家族:茄属(如土豆、西红柿、粘果酸浆(tomatilla)等);禾本科(例如,水稻、荞麦、高粱、小麦、大麦、燕麦等);葫芦科(如黄瓜、南瓜、葫芦、丝瓜等);以及较佳的豆科(如菜豆、豌豆、小扁豆、花生等)。
例如,制剂可以含有豆奶或从豆类或其它合适植物直接衍生获得的其它液体制剂。在一个例子中,这种制剂含有大部分的豆奶、维持该豆奶物理稳定性的乳化剂,以及任选的一种螯合剂、防腐剂、润肤剂、保湿剂和/或增稠剂或胶凝剂。
本组合物中特异性增加或减少吞噬作用或ICAM-1表达的制剂可以是本领域已知的任何类型的化合物。例子包括但不局限于,有机分子、无机分子、肽、蛋白质、糖类、核酸分子、脂质及其任何组合。例如,丝氨酸蛋白酶和PAR-2激动剂可用来增加吞噬作用。胰蛋白酶、类胰蛋白酶和凝血酶抑制剂以及PAR-2拮抗剂可用来减少吞噬作用。
在增加吞噬作用的一个较佳实施方案中,制剂是SLIGRL、SAIGRL或SLIGKVD。在减少吞噬作用的较佳实施方案中,制剂是大豆衍生物(如豆奶、豆浆或STI)或化合物Ⅰ。化合物Ⅰ具有化学式(S)-N-甲基-D-苯基丙氨酰-N-[4-[(氨基亚氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-L-脯氨酰胺(在Chemical Abstract中鉴定),在结构如下。
该化合物在美国专利5,523,308以及Costanzo,等人,J.Med.Chem.,1996,39:3039-3043中有所描述。美国专利5,523,308描述了作为丝氨酸蛋白酶抑制剂因而可用来减少吞噬作用和ICAM-1表达的有关化合物(例如具有d-苯丙氨酸-脯氨酸-精氨酸基序的化合物)。与化合物Ⅰ有关的其它化合物在下文实施例中有详细的描述。
本文所用的术语“哺乳动物”指较高等脊椎动物中的任何成员,其包括Webster′sMedical Desk Dictionary 407(1986)中定义的哺乳类,其包括但不局限于人、其它灵长类、猪、狗和啮齿类动物(如免疫抑制的小鼠)。在本发明的较佳实施方案中,该哺乳动物是人。
可用本发明治疗或预防的疾病包括可通过增加或减少合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善(即对疾病本身和/或其次级效果有正效应)的任何疾病。在较佳的实施方案中,吞噬作用由PAR-2介导。这些疾病包括,但不局限于,免疫系统疾病、糖尿病、炎性疾病、中枢神经系统疾病、皮肤病、物理性受伤、牙周病和呼吸道疾病。这些疾病例如还包括,不需要的受精作用,在一个实施方案中这可通过给予启动PAR-2通道的精蛋白酶顶体素抑制剂(即PAR-2抑制剂)来阻止(关于顶体素的讨论见Fox等人,FEBS Lett 417:3,267-9,1997)。
许多疾病具有多类疾病的特征。这些疾病例如包括,粘附疾病(adhesiondisorder),它可分到皮肤病和免疫系统疾病的类别中。因此,本文所称的术语特定类别(如皮肤疾病)的疾病指该疾病至少具有该类别的特征。然而,该疾病还可具有另一类别的特征。
增加免疫细胞摄食外来物质如细菌和病毒的能力预计将会增强免疫反应。例如,单核吞噬细胞在慢性微生物感染中没有活性(Reiner,Immunol Today 15:8,374-81,1994),将它们重新激活预计会治疗该疾病。或者,通过抑制吞噬作用可以改善免疫系统过度活泼的疾病。
可用本发明治疗的免疫系统和炎性疾病的例子包括,AIDS、化疗诱导的免疫缺陷症、哮喘、由于接触毒性物质(如石棉或烟)的损伤、宿主排斥植入物和移植的组织,粘附疾病、轻度感染(如普通感冒)、严重的感染(如脑膜炎或“杀伤细菌”)、伤口(如感染性、糖尿病性、急性和慢性伤口)、再狭窄、囊性纤维化、肺气肿、牙周病和尿布疹。
皮肤疾病包括不希望的色素沉着、不希望的脱色素、牛皮癣、皮疹和某些物理性皮肤不完善(例如皱纹)。在一个具体例子中,用黑色素(通过脂质体或直接输递)和增加吞噬作用的制剂(例如 SLIGRL)一起治疗白癫风患者,以使亮斑变暗。或者,用化合物Ⅰ对其进行治疗,以使较深的部位变浅(见美国申请No.09/110,409,1998年7月6日提交)。在与皮肤疾病有关的一个例子中,用黑色素和增加吞噬作用的制剂(例如 SLIGRL)(理想的是在洗发水或乳膏中)处理灰色的头发(直接输送或通过脂质体输送)。中枢神经系统疾病包括,但不局限于,Alzheimer′s疾病和其它老年性空斑疾病(通过上调淀粉样原纤维的吞噬作用来治疗)、忧郁症、恐怖症、和由苯并二氮杂草治疗的继发作用引起的其它疾病。
本发明方法中处理的哺乳动物细胞宜为表达PAR-2的细胞,其包括但不局限于,角质细胞、成纤维细胞和“专职的吞噬细胞”(即以吞噬作用作为主要功能的细胞)。专职的吞噬细胞例如包括,中性粒细胞、巨噬细胞和巨噬细胞样细胞(例如郎氏细胞和枯否细胞)。在较佳的实施方案中,哺乳动物细胞是人细胞。
在本发明中,其中的吞噬作用或ICAM-1表达必定会因本发明组合物而改变的“合适的细胞”很容易根据待治疗或预防的疾病的特征来确定。例如,如果受治疗的疾病是色素沉着疾病,则需要改变吞噬作用或ICAM-1表达的合适的细胞是角质细胞。
本发明的方法涉及预防以及治疗疾病。本文所用的术语“治疗”疾病指减少疾病的进展、中止疾病的进展、中止或改善疾病的继发作用、逆转疾病的进展、或较佳的治愈疾病。本文所用的“预防”疾病指减少、较佳的是消除疾病发生的可能性。
在本发明中,可以用本领域技术人员已知的各种方法和输药系统来给予本发明的组合物。例如,可以通过静脉内、口服、通过植入、透粘膜、局部、透皮、肌内、皮下和通过气雾剂来给药。另外,理想的是本发明的组合物含有一种或多种常规采用的药学上或美容上可接受的载体。这些载体是本领域技术人员所熟知的。下列采用了多种常用载体的输药系统仅仅代表性地描述了预期用来给予该组合物的许多实施方案。
透皮输药系统包括贴剂、凝胶、胶带、洗液、肥皂、洗发剂和乳膏,并可含有赋形剂如增溶剂、渗透增强剂(例如脂肪酸、脂肪酸酯、脂肪族醇和氨基酸)、亲水性聚合物(例如玻璃纤维增强聚碳酸酯塑料(polycarbophil)和聚乙烯吡咯烷酮)、以及粘合剂和增粘剂(例如聚异丁烯、硅氧烷为基体的粘合剂、丙烯酸酯和聚丁烯)。
本发明的一些组合物(尤其是包含蛋白质(如胰蛋白酶、类胰蛋白酶和STI)的那些组合物)的局部输送可用脂质体实现。脂质体宜为非离子型。在一个例子中,它们含有(a)甘油二月桂酸酯;(b)具有胆固醇中所见类固醇骨架的化合物;和(c)具有12-18个碳原子的脂肪酸的醚,其中组成脂质体的化合物之比约为37.5:12.5:33.3:16.7。包含甘油二月桂酸酯/胆固醇/聚氧乙烯-10-硬脂酰醚/聚氧乙烯-9-月桂酰醚(″GDL″脂质体)是较佳的。在一个实施方案中,以组合物总体积计,脂质体存在的量约为10毫克/毫升至100毫克/毫升,较佳的约为15毫克/毫升至50毫克/毫升。比例约为37.5:12.5:33.3:16.7是较佳的。制备脂质体的方法是本领域所熟知的,例如在Niemiec,等人,12Pharm.Res.1184-88(1995)中有所描述。
另外,为了进行局部或透皮给药,本发明的组合物可以和其它组分组合,这些组分例如是增湿剂、美容佐剂、抗氧化剂、漂白剂、酪氨酸酶抑制剂和其它已知的脱色素剂、α-羟基酸、表面活性剂、起泡剂、调节剂、保湿剂、芳香剂、增粘剂、缓冲剂、防腐剂、防晒剂等。本发明的组合物还可含有活性量的类视黄酸,例如包括维甲酸、视黄醇、维甲酸和/或视黄醇的酯等。
跨粘膜输药系统包括贴剂、片剂、栓剂、阴道栓剂、凝胶和乳膏,并可含有赋形剂如增溶剂和增强剂(例如丙二醇、胆汁盐和氨基酸),以及其它载体(如聚乙二醇、脂肪酸酯及其衍生物,以及亲水性聚合物如羟丙基甲基纤维素和透明质酸)。
可注射输药系统包括溶液、悬浮液、凝胶、微珠和可注射聚合物,并可包含赋形剂如改变溶解度的试剂(例如乙醇、丙二醇和蔗糖)以及聚合物(如聚己酸内酯和PLGA′s)。用于中枢神经系统输药的系统例如包括,通过脑血管屏障的连接脂质的衍生物(如DHA)。可植入的系统包括棒和圆片,并可含有赋形剂如PLGA和聚己酸内酯。
口服输药系统包括片剂和胶囊剂。这些系统可含有赋形剂,如粘合剂(例如羟丙基甲基纤维素,聚乙烯吡咯烷酮,其它纤维素材料和淀粉)、稀释剂(如乳糖和其它糖类、淀粉、磷酸二钙和纤维素材料)、崩解剂(如淀粉聚合物和纤维素材料)以及润滑剂(如硬脂酸和滑石)。这些输药系统例如还包括,牙膏、漱口剂、锭剂和棒糖。
用于可重建输药系统的溶液、悬浮液和粉末包括载体,如悬浮剂(例如树胶、黄原胶、纤维素和糖)、润湿剂(例如山梨糖醇)、增溶剂(例如乙醇、水、PEG和丙二醇)、表面活性剂(例如十二烷基硫酸钠、丝盘、吐温、和十六烷基吡啶)、防腐剂和抗氧化剂(例如对羟基苯甲酸酯、维生素E和C、抗坏血酸和天然的提取物)、抗结块剂、涂覆剂和螯合剂(例如EDTA)。本领域技术人员已知的水包油乳剂、油包水乳剂、溶剂为基的制剂和水凝胶也可作为载体来输送本发明的组合物。
确定给予人体该组合物的治疗和预防有效剂量的方法是本领域已知的。例如这些有效剂量很容易从动物研究的结果确定。
在一个例子中,将本发明组合物施加到皮肤表面上,从而使得在希望改变吞噬作用时有约2至200微升/平方厘米的改变吞噬作用的试剂存在(以每平方厘米的皮肤表面计)。当在制剂中采用凝血酶和胰蛋白酶抑制剂(如化合物Ⅰ或其类似物)(无论是合成的还是天然存在的)时,该活性化合物存在的量为组合物重量/体积的大约0.0001%至15%。在另一个实施方案中,其存在的量约为组合物的0.0005%至5%。较佳的,其存在的量约为组合物的0.001至1%。
在另一个例子中,从植物或植物来源直接制得的液体衍生物和天然提取物在本组合物中采用的浓度(w/v)约为1至99%,较佳的约75至95%。在还有一个实施例中,天然提取物以及用天然方法衍生的蛋白酶抑制剂(如STI)部分的浓度范围约为0.01-20%,较佳的约为组合物的1%-10%。
本发明还提供了用于给予哺乳动物本发明组合物的生产制品,它包含一个固体输送工具,该工具中操作性地(即可输送地)附有该组合物。该固体输送工具可以是任何装置,该装置被设计成临时或永久性地接触身体,无论其最初目的是否用作输送工具。该生产制品的例子包括,但不局限于,涂敷的绷带或其它处理伤口的伤口敷料,用来预防或促进组织生长的涂敷身体植入物(包括具有涂敷的内部搭架的植入物),以及用来预防再狭窄的气球导管(balloon catheter)和斯坦特固定模。
最后,本发明提供了一种给予哺乳动物治疗、预防或美容化合物的方法,该方法包括给予哺乳动物(a)化合物和(b)一种组合物,该组合物包含药学或美容载体以及一种特异性增加吞噬作用的制剂,其用量足以增加需要吸收该化合物的细胞中的吞噬作用,其中组合物的给予在给予化合物之前和/或同时进行。
该药物化合物例如可以是多肽、蛋白质或核酸分子。在一个实施方案中,药物化合物和组合物通过显微级多孔的生物可降解的珠粒来一同给予,该珠粒被合适细胞的吞噬作用摄入后释放出药物化合物。
在阅读了下面的实施例后,将能更好地了解本发明,但是本领域技术人员应理解,这些实施例仅仅描述了本发明,更全面的描述在下文的权利要求中。另外,整个申请中引用了各种文献。这些文献的公开内容均被纳入本申请作为参考,以更全面地描述本发明所述领域的现有技术水平。
实施例
实施例1
SLIGRL、STI和化合物Ⅰ影响角质细胞吞噬作用
为了研究PAR-2通道在吞噬作用中的作用,采用了几个体外模型系统。所用的一种系统含有原代人角质细胞或人角质细胞系。在本实施例和下文许多实施例中,用测试化合物处理细胞不同时间(从1小时至3天),然后使样品和荧光微珠一起培育2小时。用荧光显微镜拍摄被细胞摄入的珠粒。
在本实施例中,体外模型系统采用人原代角质细胞或人角质细胞系HaCaT来研究PAR-2调节剂对角质细胞吞噬作用的影响。所用的人原代角质细胞购自Clonetics(San Diego,CA)。将细胞涂布到分室玻片上,每个玻片上2个室,每个室有60000个细胞。每天用化合物I(1微摩尔)、SLIGRL(10微摩尔)或载体(磷酸缓冲盐溶液,(″PBS″),购自Gibco-BRL(Gaithersburg,MD))处理细胞1次,持续2或3天。暴露于测试化合物2或3天后,使细胞接触尼罗红或FITC荧光微珠(直径为1微米,每个细胞50个微珠,37℃下2小时)。微珠购自Molecular Probes(Eugene,OR),根据生产商说明书进行加工。在该处理后,用15%胎牛血清(“FBS”,购自Gibco-BRL)37℃培育细胞15分钟后,用-PBS冲洗。此时,将室与玻片分开,用甘油和盖玻片覆盖玻片。用Zeiss Axiovert35或Nikon Optiphot-2显微镜进行荧光镜检。
图1显示了经载体(对照)、化合物Ⅰ或SLIGRL处理2天后的人原代角质细胞的三个图片。从该图中可以看出,微珠被对照角质细胞摄入,并分散在细胞核周围。发现微珠还在细胞的周围,这可能是因为它们与细胞分泌的胞外基质组分非特异性地连接的缘故。被摄入的微珠的量随处理的不同而变化。用化合物Ⅰ(PAR-2激活的抑制剂)处理,结果导致被摄入的微珠数量大幅度减少。用SLIGRL(PAR-2激活性肽)处理,结果导致被摄入的微珠数量大幅度增加。
当用人角质细胞系HaCaT代替原代角质细胞后,也获得了相同的结果(见图2)。测试SLIGRL、STI和化合物Ⅰ对角质细胞吞噬作用的影响。在这些试验中,微珠的胞外积累可以被清除。唯一可见的颗粒是被角质细胞内化的微珠,它们堆积在细胞核周围。在本实验中,大豆胰蛋白酶抑制剂(″STI″)(一种能影响PAR-2通道的丝氨酸蛋白酶抑制剂)以及化合物Ⅰ显示出减少了微珠的摄入。另一方面,SLIGRL的处理导致微珠摄入增加。这些实验每个均重复至少三次。这些实验首次表明,角质细胞具有PAR-2-介导的吞噬能力。这些实验还证明调节PAR-2通道的化合物能调节角质细胞吞噬作用的水平。
当用不表达PAR-2的黑色素细胞重复这些实验时,SLIGRL对微珠摄入没有可诱导的效果。黑色素细胞在上述任一种情况下均不摄入珠粒。由于SLIGRL仅仅激活PAR-2,而黑色素细胞不表达PAR-2,因此这些细胞对SLIGRL信号没有反应,从而不会影响吞噬作用。
实施例2
SLIGRL和化合物Ⅰ影响成纤维细胞的吞噬作用
用成纤维细胞细胞系92-3T3(从Rockville,MD的ATCC获得)重复实施例1所述的实验。不知道成纤维细胞具有吞噬能力。实际上,用未经处理的成纤维细胞观察到只有极少的珠粒被摄入。然而,SLIGRL-处理的成纤维细胞增加了摄入珠粒的数目(图3)。SLIGRL-诱导的成纤维细胞吞噬作用在量上与角质细胞不同,因为成纤维细胞在体内不担任吞噬的任务。本实验首次表明,成纤维细胞具有可诱导的PAR-2吞噬能力。换句话说,本实验证明调节PAR-2通道的化合物能调节成纤维细胞的吞噬作用水平。
实施例3
SLIGRL,STI和化合物Ⅰ影响巨噬细胞的吞噬作用
用与和腹膜巨噬细胞共有吞噬特征的巨噬细胞系IC-21(从ATCC获得)重复实施例1所述的实验。如角质细胞和成纤维细胞所显示的那样,化合物Ⅰ和STI减少了作为“专职的吞噬”细胞的这些巨噬细胞摄入的微珠数目,而SLIGRL则增加了该数目。
为了更好地定量测定吞噬作用的水平,采用Molecular Probes(Eugene,Oregon)的″VybrantTM吞噬作用测定试剂盒″,按照生产商说明书,修改IC-21细胞系的细胞培养条件。该试剂盒采用荧光素标记的大肠杆菌K-12颗粒,经过设计可用来定量测定药物或其它环境因素对吞噬功能的影响。用100nM化合物Ⅰ、5μM SLIGRL或0.1毫克/毫升STI(均溶于PBS中)处理巨噬细胞过夜。表1中记录了经处理的巨噬细胞摄入荧光大肠杆菌的能力(经该试剂盒测得)。重复该实验三次。表1代表一个实验的数据。
表1
处理 | (摄入)效果% |
未处理的对照 | 100 |
SLIGRL | 331.6+/-5.9 |
化合物Ⅰ | 89.9+/-13.6 |
STI | 56.06+/-12.4 |
本实验证明巨噬细胞的吞噬作用可通过PAR-2通道的调节剂来调节。本实验还表明,合成的化合物以及天然衍生的化合物均可通过PAR-2通道调节吞噬作用。
实施例4
PAR-2信号传导和巨噬细胞吞噬作用之间的剂量-反应关系
为了确认巨噬细胞-吞噬作用试验的定量特征,进行剂量-反应实验。用0、0.01、0.1和1毫克/毫升的STI处理巨噬细胞,如实施例3所述进行实验。图4A表明,观察到有随STI浓度增加吞噬作用减少的剂量-反应关系。0.01、0.1和1nm的化合物Ⅰ获得了相似的结果,而SLIGRL的处理却导致吞噬作用增加(图4B)。每个实验重复三次。本实验证明PAR-2-调节性化合物的吞噬效果是是剂量-反应性的,可定量测定。
实施例5
PAR-2信号传导和角质细胞吞噬作用之间的剂量-反应关系
用浓度增加的SLIGRL(PAR-2肽激活剂和激动剂)在0、5和10μM下以实施例1所述相同方式处理人角质细胞2天。增加SLIGRL的浓度导致吞噬作用增加。另用浓度增加的化合物Ⅰ和STI处理人角质细胞2天。浓度增加的化合物Ⅰ(从1pM到1μM)或STI(从0.01到1毫克/毫升)的处理结果导致吞噬作用呈剂量依赖型减少(见表2)。
用对角质细胞内的荧光珠粒进行图象分析作为定量测定该系统中吞噬效果的另一种方式。在Gateway 2000 P5-100计算机(Media Cybemetics,Silver Springs,MD)上用Empire Imagins Database 1.1版捕获图象。用Image Pro Plus 1.3版进行测定,用Microsoft Excel 5.0版处理数据。该角质细胞-微珠系统获得的数据与巨噬细胞/大肠杆菌系统获得的数据完全符合。
表2
处理 摄入%
未处理 100+/-12
STI,0.01% 76+/-15
STI,0.1% 55+/-14
STI,1% 41.6+/-11
实施例6
化合物Ⅰ、SLIGRL和STI影响角质细胞捕获色素
本实施例测试了角质细胞在体外捕获黑色素或黑色素体的能力,从而可作为皮肤中黑色素体吸收的一个简单化的系统。如上所述,将角质细胞接种到玻璃分室玻片上,用SLIGRL、化合物Ⅰ或STI处理2天。此时,将黑色素粉末(购自Sigma,St.Louis,MO)混入无菌PBS成10微克/毫升,加入培养基(1∶10稀释)中放置2小时。然后用PBS洗涤细胞,用Fontana-Mason(″F&M″)染色。F&M使还原的硝酸银分子染色,从而能鉴定角质细胞内的黑色素。如图5A所示,未处理的角质细胞能从培养基中摄入黑色素,使内化的黑色素局限在其细胞核周围。因此,该系统可模拟体内的黑色素体转移和黑色素分布,因为皮肤角质细胞用黑色素作为其细胞核的UV保护性罩子。如实施例1、图1和2所证实的,摄入的微珠也观察到有该遮罩方式。图5A还显示了打开PAR-2通道的SLIGRL处理大幅度地增加了黑色素的内化及其在细胞核周围的沉积。相反,化合物Ⅰ和STI却大幅度地减少了角质细胞对黑色素的吸收。本实施例证明了合成和天然来源的PAR-2调节剂能影响表皮细胞中的色素分布。用S.Orlow等人,J.I.D.100:55-64(1993)所述分离的黑色素体也观察到相同的结果(图5B)。
实施例7
细胞-细胞接触是化合物Ⅰ影响色素从黑色素细胞转移到角质细胞所必需的。
由于PAR-2在角质细胞内表达,而不在黑色素细胞内表达,因此测试化合物Ⅰ和SLIGRL对于角质细胞的黑色素体吞噬作用的影响可能需要角质细胞-黑色素细胞接触。在表皮等效物(equivalent)(EpiDerm,MatTek,Ashland,MA)下涂布原代黑色素细胞培养物(购自Clonetics,San Diego),产生等效的单层共培养物,使角质细胞和黑色素细胞之间没有接触。将这些共培养物与MalanoDerm等效物(MatTek,其中黑色素细胞存在于等效物的基底层中)相比。用化合物Ⅰ、PAR-2激动剂TFLLRNPNDK和PAR-2激动剂SLIGRL处理培养物。在表3中,角质细胞用“K”表示,黑色素细胞用“M”表示,黑色素细胞和角质细胞之间没有接触用″没有K-M接触″表示。如表3所示,当以色素沉着水平测定时,经这些制剂处理的等效物-单层共培养物(角质细胞与黑色素细胞没有接触)中没有观察到对黑色素体转移的效果。在含有黑色素细胞的等效物中,化合物Ⅰ和SLIGRL通过影响黑色素体的转移分别减少和诱导了色素沉着。用角质细胞与黑色素细胞接触的单层角质细胞/黑色素细胞共培养物也观察到有相同的结果。这些结果证明角质细胞-黑色素细胞的接触是对黑色素体吞噬作用的PAR-2效果所需的。
表3
处理 | 单层共培养物(K-M接触) | 等效物单层共培养物(没有K-M接触) | 表皮等效物(K-M接触) |
化合物Ⅰ | 变浅 | 没有效果 | 变浅 |
SLIGRL | 变深 | 没有效果 | 变深 |
TFLLRNPNDK | 没有效果 | 没有效果 | 没有效果 |
实施例8
化合物Ⅰ和SLIGRL对吞噬作用的效果的时间
用化合物Ⅰ或SLIGRL处理人角质细胞一定时间(从1小时至2天)。在处理期最后,如实施例1所述用微珠处理细胞。表4显示了这些化合物影响吞噬作用所需的时间。加号表示对吞噬作用有影响,减号表示对吞噬作用没有影响,加号/减号表示对吞噬作用或多或少有影响。测得的效果是化合物Ⅰ为减少,SLIGRL为增加。本实验表明,在激活或抑制PAR-2信号传导通道后,要改变角质细胞的吞噬能力至少需要8小时。这暗示,PAR-2信号传导导致合成新的蛋白质,在需要周转时间来消除已有的相关蛋白时减少蛋白质的合成,或重排蛋白质(在细胞骨架组分重新组织时发生)。
表4
处理时间 化合物Ⅰ SLIGRL
1小时 - -
2小时 - -
4小时 - -
6小时 - -
8小时 -/+ -/+
16小时 + +
24小时 + +
48小时 + +
实施例9
化合物Ⅰ、STI和SLIGRL影响ICAM-1的胞内表达和定位
胞间粘附分子-1(ICAM-1)是一种可诱导的细胞表面糖蛋白,它参与了细胞-细胞的粘附、细胞膜的抽取(raffling)和吞噬作用。因此,测试了PAR-2对ICAM-1调节的效果。如上所述,使角质细胞在分室玻片上生长,用SLIGRL、化合物Ⅰ和STI处理,然后用标准程序对ICAM-1进行免疫荧光染色。从Jackson ImmunoresearchLaboratory(Westgrove,PA)获得正常的驴血清(以1∶5稀释使用)。从R&DSystems(Minneapolis,MN)获得多克隆山羊抗人ICAM-1抗体,(以1∶200稀释使用)从Jackson Immunoresearch Laboratory获得FITC偶联的驴抗山羊抗体。如图6A所示,ICAM-1的胞内定位可通过PAR-2通道来调节。在未经处理的角质细胞中,ICAM-1主要定位于质膜处,在细胞核膜处有一些染色。在经化合物Ⅰ或STI处理后,在胞质膜处观察到的染色较少,而更多的在细胞核膜处。SLIGRL处理具有相反的效果,结果导致细胞质膜染色增加并更加扩散,而细胞核膜染色减少。
根据已知的方法进行免疫沉淀和Western印迹实验,以评价在经处理的角质细胞中ICAM-1蛋白质的水平。如图6B所示,SLIGRL增加了这些细胞中的ICAM-1表达水平,而化合物Ⅰ减少了ICAM-1的表达水平。
实施例10
STI和化合物Ⅰ影响趋化细胞的迁移
由于ICAM-1涉及细胞迁移,因此在经化合物Ⅰ和STI处理的细胞中研究朝向趋化肽的细胞迁移。用标准技术将人PMN细胞置于Boyden室的一侧,将趋化肽(FMLP)置于另一个室内。使该细胞向第二个室迁移,计算每个迁移区和迁移距离的迁移细胞数目。用经下列物质之一预处理的PMN细胞重复该实验:5或0.5毫克/毫升STI、1或0.1微摩尔化合物Ⅰ、缓冲液载体、以及具有和不具有趋化肽。测定每个区内与未处理细胞迁移相同距离的细胞数目。这些数据归纳在表5中。没有肽和未经处理时,每个区平均有19个细胞迁移了80微米。加入趋化肽后,导致每个区有41个细胞迁移115微米。两种化合物均完全抑制细胞向此肽的迁移。换句话说,在115微米处没有鉴定出细胞(或每个区少于5个)。这表明,这些抑制剂不仅影响吞噬作用,还影响细胞迁移。抑制PMN迁移的能力是抗炎性化合物的一个重要的组成部分。
表5
处理 每个区的细胞 迁移
缓冲液 19 80μ
FMLP 41 115
FMLP+化合物Ⅰ <5 115
FMLP+STI <5 115
实施例11
SLIGRL和STI影响人皮肤色素沉着
用标准技术将人白色脸部皮肤样品移植到免疫抑制的小鼠上。大约6周后,用载体(乙醇∶丙二醇70∶30)或50μM SLIGRL处理来自同一个体、移植到不同小鼠上的移植物。每天进行处理,1周5天。在治疗的最后一周用肉眼观察到SLIGRL处理的移植物变黑(见图7A)。在第66天,处死动物,对其皮肤进行组织学分析。F&M染色的切片揭示SLIGRL处理的移植物中黑色素有所增加,如图7B所示。本实验证明了在人皮肤上用SLIGRL能诱导无日光的晒黑。
用移植到免疫抑制的小鼠上的黑色人乳房皮肤样品重复相同的实验。用载体(GDL脂质体)或1%STI处理同一个体的移植物。GDL脂质体如Niemiec等人,所述的那样制备,只是作下列改变:非离子性脂质体配方含有二月桂酸甘油酯(EmulsyntGDL,ISP Van Dyk)/胆固醇(Croda)/聚氧乙烯-10硬脂酰醚(Brij76,ICI)/聚氧乙烯-9-月桂酰醚,比例为37.5:12.5:33.3:16.7。在制备脂质体时,用Hepes缓冲液,0.05M,pH7.4(Gibco-BRL of Gaithersburg,MD)作为水相。图7C显示了这些移植物的F&M-染色的皮肤切片。该图清楚地证明了STI减少人皮肤内色素沉着的能力。
实施例12
PAR-2对吞噬作用和迁移的效果与细胞形状的变化有关
吞噬作用和细胞迁移均涉及细胞形状的变化。因此,用扫描电子显微术研究PAR-2通道制剂对细胞足(cell podia)的影响。用化合物Ⅰ(鉴定为“SH00230”)、SLIGRL和缓冲液载体处理角质细胞2天,然后用标准技术进行SEM。如图8所示,观察到细胞足的形状有很大变化。与载体处理的对照相比,经化合物Ⅰ处理的细胞具有非常短的足。换句话说,细胞的“手指”较短,呈畸形,因此它们不能象对照细胞那样抓住物体。经SLIGRL处理的样品表现出相反的作用。它们的足的数目增加,一定程度上较长,并且细得多。换句话说,这些细胞更可能与颗粒发生生产性相互作用。比较图8中的SEM图片,显然SLIGRL-处理的细胞更能与颗粒相互作用,而化合物I处理的细胞较不适合这个任务。
实施例13
PAR-2影响细胞骨架的组成
图8中所示的细胞形状的变化需要重新组织细胞骨架组分。因此,测试在PAR-2调节后的F-肌动蛋白丝的组织。如实施例1所述,用化合物Ⅰ(10nM)、STI(0.1毫克/毫升)或SLIGRL(5μM)处理角质细胞,用标准技术对F-肌动蛋白染色。图9显示出在这些处理后肌动蛋白丝的组织有很大的变化。SLIGRL处理诱导肌动蛋白聚合在细胞皮质周围,该区域在控制细胞移动和吞噬作用中非常重要。相反,STI和化合物Ⅰ减少了细胞皮质的有序组织,从而减少了细胞调节其移动和足的能力。
实施例14
ICAM-1调节影响角质细胞的吞噬作用
如实施例1所述,使角质细胞暴露于荧光微珠(即珠粒)。用50微克/毫升的小鼠抗人ICAM-1抗体(购自R&D Systems)预处理这些细胞16小时,然后在与珠粒一起培育前4小时再次强化。如图10所示,封闭角质细胞表面上的ICAM-1分子导致珠粒的摄入减少。因此,本实验在ICAM-1和角质细胞吞噬作用之间建立一个关系。
实施例15
STI/脂质体配方能使人老年斑变浅
如下所述,处理手背上有三个老年斑的个体8周,每天2次。用含有20毫克/毫升脂质体的安慰剂处理最靠近身体的老年斑。中间的老年斑不作处理。最远的老年斑用STI(1%,在脂质体中(20毫克/毫升))处理。如Niemiec等人所述的那样制备GDL脂质体,只是作下列改动。非离子性脂质体配方含有二月桂酸甘油酯(EmulsyntGDL,ISP Van Dyk)/胆固醇(Croda)/聚氧乙烯-10硬脂酰醚(Brij76,ICI)/聚氧乙烯-9-月桂酰醚,比例为37.5:12.5:33.3:16.7。在制备脂质体时,用Hepes缓冲液,0.05M,pH 7.4(Gibco-BRL of Gaithersburg,MD)作为水相。在治疗的第0、4和8周拍摄UV和可见光数字图片。用Adobe Photoshop计算图象的L*值(亮度)。
如图11所示,在处理8周后,经STI处理的老年斑颜色变浅。图11显示了一组四幅图片。左侧是手在处理前(上图)和处理8周后(下图)的可见光图片。在方向是,最靠近身体的老年斑用安慰剂处理,中间的老年斑未作处理,最远的老年斑用STI处理。右图显示了用UV照相术在同一时间拍摄的同一个手的图片。UV光能使皮肤中较深的色素显示出来,这表明STI的增白效果并不在表面。图11明显证明STI配方使远端的老年斑变浅。从此STI处理过的斑点计算出L*单位增加15个单位,这进一步证实该处理具有使老年斑变浅的能力。
实施例16
与化合物Ⅰ类似的减少吞噬作用的化合物
某些化合物,及其药学上可接受的盐,例如在Costanzo等人,″探测S1′亚基的强效的凝血酶抑制剂:基于杂环-激活的羰基基团的三肽过渡态类似物″,J.Med.Chem.,1996,Vol.39,3039-3043页中所述的那样,可作为丝氨酸蛋白酶抑制剂(即吞噬作用抑制剂),并具有下列结构式:其中:
A选自C1-8烷基,羧基C1-4烷基,C1-4烷氧羰基C1-4烷基,苯基C1-4烷基,取代的苯基C1-4烷基(其中苯基取代基独立选自下列基团中的一个或多个:C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、羧基或C1-4烷氧羰基)、甲酰基、C1-4烷氧羰基、C1-2烷基羰基、苯基C1-4烷氧羰基、C3-7环烷羰基、苯基羰基、取代的苯基羰基(其中苯基取代基独立选自下列基团中的一个或多个:C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、羧基或C1-4烷氧羰基)、C1-4烷磺酰基、C1-4烷氧基磺酰基、全氟C1-4烷基-磺酰基、苯磺酰基、取代的苯磺酰基(其中苯基取代基独立选自下列基团中的一个或多个:C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、羧基或C1-4烷氧羰基)、10-樟脑磺酰基、苯基C1-4烷磺酰基、取代的苯基C1-4烷磺酰基、C1-4烷基亚磺酰基、全氟C1-4烷基亚磺酰基、苯基亚磺酰基、取代的苯基亚磺酰基(其中苯基取代基独立选自下列基团中的一个或多个:C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、羧基或C1-4烷氧羰基)、苯基C1-4烷基亚磺酰基、取代的苯基C1-4烷基亚磺酰基、1-萘基磺酰基、2-萘基磺酰基或取代的萘基磺酰基(其中萘基取代基独立选自下列基团中的一个或多个:C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、羧基或C1-4烷氧羰基)、1-萘基亚磺酰基、2-萘基亚磺酰基或取代的萘基亚磺酰基(其中萘基取代基独立选自下列基团中的一个或多个:C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、羧基或C1-4烷氧羰基);
一种D型或L型氨基酸,氨基酸的羧基端与上述结构所示的氮相连,该氨基酸选自:丙氨酸、天冬酰胺、2-氮杂环丁烷羧酸、甘氨酸、N-C1-8烷基甘氨酸、脯氨酸、1-氨基-1-环C3-8烷基羧酸、噻唑烷-4-羧酸、5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸、噁唑烷-4-羧酸、2-哌啶酸、缬氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、正亮氨酸、亮氨酸、叔-亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、1-萘基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、2-噻吩基丙氨酸、3-噻吩基丙氨酸、[1,2,3,4]-四氢异喹啉-1-羧酸和[1,2,3,4]-四氢异喹啉-2-羧酸,其中所述氨基酸的氨基端与一种物质相连,该物质选自下列:C1-4烷基、四唑-5-基-C1-2烷基、羧基C1-4烷基,C1-4烷氧羰基C1-4烷基,苯基C1-4烷基,取代的苯基C1-4烷基(其中苯基取代基独立选自下列基团中的一个或多个:C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、羧基或C1-4烷氧羰基)、1,1-二苯基C1-4烷基、3-苯基-2-羟基丙酰基、2,2-二苯基-1-羟乙基羰基、[1,2,3,4]-四氢异喹啉-1-羰基、[1,2,3,4]-四氢异喹啉-3-羰基、1-甲氨基-1-环己烷羰基、1-羟基-1-环己烷羰基、1-羟基-1-苯乙酰基、1-环己基-1-羟基乙酰基、3-苯基-2-羟基丙酰基、3,3-二苯基-2-羟基丙酰基、3-环己基-2-羟基丙酰基、甲酰基、C1-4烷氧羰基、C1-12烷基羰基、全氟C1-4烷基、C1-4烷基羰基、苯基C1-4烷基羰基、取代的苯基C1-4烷基羰基(其中苯基取代基独立选自下列基团中的一个或多个:C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、羧基或C1-4烷氧羰基)、1,1-二苯基C1-4烷基羰基、取代的1,1-二苯基C1-4烷基羰基(其中苯基取代基独立选自下列基团中的一个或多个:C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、羧基或C1-4烷氧羰基)、全氟C1-4烷磺酰基、C1-4烷磺酰基、C1-4烷氧基磺酰基、苯磺酰基、取代的苯磺酰基(其中苯基取代基独立选自下列基团中的一个或多个:C-1烷基、全氟C1-4烷基、C1-4二烷氨基、羧基或C1-4烷氧羰基)、10-樟脑磺酰基、苯基C1-4烷磺酰基、取代的苯基C1-4烷磺酰基、全氟C1-4烷基亚磺酰基、C1-4烷基亚磺酰基、苯基亚磺酰基、取代的苯基亚磺酰基(其中苯基取代基独立选自下列基团中的一个或多个:C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、羧基或C1-4烷氧羰基)、1-萘基磺酰基、1,2-萘基磺酰基、取代的萘基磺酰基(其中萘基取代基独立选自下列基团中的一个或多个:C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、羧基或C1-4烷氧羰基)、1-萘基亚磺酰基、2-萘基亚磺酰基和取代的萘基亚磺酰基(其中萘基取代基独立选自下列基团中的一个或多个:C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、羧基或C1-4烷氧羰基);
或包含两个氨基酸的多肽,
其中第一个氨基酸是D型或L型氨基酸,它通过其羧基端与式Ⅰ所示的氮相连,该氨基酸选自:甘氨酸、N-C1-8烷基甘氨酸、丙氨酸、2-氮杂环丁烷羧酸、脯氨酸、噻唑烷-4-羧酸、5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸、噁唑烷-4-羧酸、1-氨基1-环C3-8烷基羧酸、3-羟基脯氨酸、4-羟基脯氨酸、3-(C1-4烷氧基)脯氨酸、4(C1-4烷氧基)脯氨酸、3,4-二氢脯氨酸、2,2-二甲基-4-噻唑烷羧酸、2,2-二甲基-4-噁唑烷羧酸、2-哌啶酸、缬氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、苏氨酸、亮氨酸、叔-亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、1-萘基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、2-噻吩基丙氨酸、3-噻吩基丙氨酸、[1,2,3,4]-四氢异喹啉-2-羧酸、天冬氨酸-4-C1-4烷酯以及谷氨酸5-C1-4烷酯和
其中第二个D型或L型氨基酸与所述第一个氨基酸的氨基端相连,它选自:苯丙氨酸、4-苯甲酰苯丙氨酸、4-羧基苯丙氨酸、4-(羧基C1-2烷基)苯丙氨酸、取代的苯丙氨酸(其中苯基取代基独立选自下列基团中的一个或多个:C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、羧基或C1-4烷氧羰基)、3-苯并噻吩基丙氨酸、4-二苯基丙氨酸、高(homo)苯丙氨酸、八氢吲哚-2-羧酸、2-吡啶基丙氨酸、3-吡啶基丙氨酸、4-噻唑基丙氨酸、2-噻吩基丙氨酸、3-(3-苯并噻吩基)丙氨酸、3-噻吩基丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、3-三-C1-4烷基甲硅烷基丙氨酸、环己基甘氨酸、二苯基甘氨酸、苯基甘氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸砜、2,2-二环己基丙氨酸、2-(1-萘基丙氨酸)、2-(2-萘基丙氨酸)、苯基取代的苯丙氨酸(其中取代基独立选自下列基团中的一个或多个:C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、羧基或C1-4烷氧羰基)、天冬氨酸、天冬氨酸-4-C1-4烷酯、谷氨酸、谷氨酸-5-C1-4烷酯、环C3-8烷基丙氨酸、取代的环C3-8烷基丙氨酸(其中环取代基是羧基、C1 -4烷酯、环C3-8烷基丙氨酸、取代的环C3-8烷基丙氨酸(其中环取代基为羧基、C1-4烷基羰基、C1-4烷氧羰基或氨基羰基)、2,2-二苯基丙氨酸及其所有氨基酸衍生物的所有的α-C1-5烷基,以及
其中所述第二个氨基酸的氨基端没有被取代或被选自下列物质的一个成员单取代:甲酰基、C1-12烷基、四唑-5-基-C1-2烷基、羧基C1-8烷基,烷氧羰基C1-4烷基,苯基C1-4烷基,取代的苯基C1-4烷基(其中苯基取代基独立选自下列基团中的一个或多个:C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、羧基或C1-4烷氧羰基)、1,1-二苯基C1-4烷基、C1-6烷氧羰基、苯基C1-6烷氧羰基、C1-2烷基羰基、全氟C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基、苯基C1- 4烷基羰基、取代的苯基C1-4烷基羰基(其中苯基取代基独立选自下列基团中的一个或多个:C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、羧基或C1-4烷氧羰基)、1,1-二苯基C1-4烷基羰基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧羰基、10-樟脑磺酰基、苯基C1-4烷磺酰基、取代的苯基C1-4烷磺酰基、C1-4烷基亚磺酰基、全氟C1-4烷基亚磺酰基、苯基亚磺酰基、取代的苯基亚磺酰基(其中苯基取代基独立选自下列基团中的一个或多个:C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、羧基或C1-4烷氧羰基)、苯基C1-4烷基亚磺酰基、取代的苯基C1-4烷基亚磺酰基、1-萘基磺酰基、2-萘基磺酰基、取代的萘基磺酰基(其中萘基取代基选自:C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、羧基或C1-4烷氧羰基)、1-萘基亚磺酰基、2-萘基亚磺酰基和取代的萘基亚磺酰基(其中萘基取代基选自:C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、羧基或C1-4烷氧羰基);R1选自氢和烷基;R2选自氨基C2-5烷基、胍基C2-5烷基、C1-4烷基胍基C2-5烷基、二C1-4烷基胍基C2-5烷基、脒基C2-5烷基、C1-4烷基脒基C2-5烷基、二C1-4烷基脒基C2-5烷基、C1-3烷氧基C2-5烷基、苯基、取代的苯基(其中取代基独立选自下列基团中的一个或多个:氨基、脒基、胍基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、苄基、苯基取代的苄基(其中取代基独立选自下列基团中的一个或多个:氨基、脒基、胍基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、卤素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、羟基C2-5烷基、C1-5烷氨基C2-5烷基、C1-5二烷氨基C2-5烷基、4-氨基环己基C0-2烷基和C1-5烷基
p是0或1;
B是其中n是0-3,R3是H或C1-5烷基,B的羰基部分与E相连;E是一个杂环,它选白:噁唑啉-2-基、噁唑-2-基、噻唑-2-基、噻唑-5-基、噻唑-4-基、噻唑啉-2-基、咪唑-2-基、4-氧代-2-喹喔啉-2-基、2-吡啶基、3-吡啶基、苯并[b]噻吩-2-基、三唑-4-基、三唑-6-基、吡唑-2-基、4,5,6,7-四氢苯并噻唑-2-基、萘并[2,1-d]噻唑-2-基、萘并[1-2-d]噻唑-2-基喹喔啉-2-基、异喹啉-1-基、异喹啉-3-基、苯并[b]呋喃-2-基、吡嗪-2-基、喹唑啉-2-基、异噻唑-5-基、异噻唑-3-基、嘌呤-8-基和取代的杂环,其中取代基选白C1-4,全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、卤素、酰胺基、硝基、氨基、C1-4烷氨基、C1-4二烷氨基、羧基、C1-4烷氧羰基、羟基、或苯基C1-4烷氨基羰基、吲哚-2-基、苯并噁唑-2-基、苯并咪唑-2-基和苯并噻唑-2-基。
Claims (69)
1.一种治疗受累于某疾病的哺乳动物的组合物,该疾病可通过增加合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该组合物包括(a)治疗有效量的特异性增加吞噬作用或ICAM-1表达的制剂,和(b)药学上或美容上可接受的载体。
2.一种治疗受累于某疾病的哺乳动物的组合物,该疾病可通过减少合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该组合物包括(a)治疗有效量的特异性减少吞噬作用或ICAM-1表达的制剂,和(b)药学上或美容上可接受的载体。
3.一种用于预防哺乳动物患某种疾病的组合物,该疾病可通过增加合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该组合物包括(a)预防有效量的特异性增加吞噬作用或ICAM-1表达的制剂,和(b)药学上或美容上可接受的载体。
4.一种用于预防哺乳动物患某种疾病的组合物,该疾病可通过减少合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该组合物包括(a)预防有效量的特异性减少吞噬作用或ICAM-1表达的制剂,和(b)药学上或美容上可接受的载体。
5.根据权利要求1或3所述的组合物,其中该组合物包含激活PAR-2通道的制剂。
6.根据权利要求5所述的组合物,其中该组合物包含选自SLIGRL、SAIGRL、SLIGKVD和丝氨酸蛋白酶的制剂。
7.根据权利要求6所述的组合物,其中该制剂选自SLIGRL、胰蛋白酶、凝血酶和类胰蛋白酶。
8.根据权利要求2或4所述的组合物,其中该组合物包含抑制PAR-2通道的制剂。
9.根据权利要求2或4所述的组合物,其中该组合物包含选自大豆衍生物和丝氨酸蛋白酶抑制剂的制剂。
10.根据权利要求9所述的组合物,其中该制剂选自豆奶、豆浆、化合物Ⅰ、胰蛋白酶抑制剂、类胰蛋白酶抑制剂、凝血酶抑制剂和STI。
11.根据权利要求1、2、3或4所述的组合物,其中合适的细胞是表达PAR-2的细胞。
12.根据权利要求11所述的组合物,其中合适的细胞选自角质细胞、成纤维细胞和专职的吞噬细胞。
13.根据权利要求12所述的组合物,其中合适的细胞是角质细胞。
14.根据权利要求12所述的组合物,其中合适的细胞是成纤维细胞。
15.根据权利要求12所述的组合物,其中合适的细胞是专职的吞噬细胞。
16.根据权利要求1、2、3或4所述的组合物,其中该疾病选自皮肤疾病、免疫系统疾病、炎性疾病、呼吸道疾病和中枢神经系统疾病。
17.根据权利要求16所述的组合物,其中该疾病是皮肤疾病。
18.根据权利要求16所述的组合物,其中该疾病是免疫系统疾病。
19.根据权利要求16所述的组合物,其中该疾病是炎性疾病。
20.根据权利要求16所述的组合物,其中该疾病是呼吸道疾病。
21.根据权利要求16所述的组合物,其中该疾病是中枢神经系统疾病。
22.根据权利要求1、2、3、或4所述的组合物,其中哺乳动物是人。
23.一种增加哺乳动物细胞中吞噬作用或ICAM-1表达的方法,该方法包括使细胞与有效量的特异性增加吞噬作用或ICAM-1表达的制剂接触。
24.一种减少哺乳动物细胞中吞噬作用或ICAM-1表达的方法,该方法包括使细胞与有效量的特异性减少吞噬作用或ICAM-1表达的制剂接触。
25.根据权利要求23所述的方法,其中该制剂激活PAR-2通道。
26.根据权利要求25所述的方法,其中该制剂选自SLIGRL、SAIGRL、SLIGKVD和丝氨酸蛋白酶。
27.根据权利要求26所述的方法,其中该制剂选自SLIGRL、胰蛋白酶、凝血酶和类胰蛋白酶。
28.根据权利要求24所述的方法,其中该制剂抑制PAR-2通道。
29.根据权利要求24所述的方法,其中制剂选自大豆衍生物和丝氨酸蛋白酶抑制剂。
30.根据权利要求29所述的方法,其中制剂选自豆奶、豆浆、化合物Ⅰ、胰蛋白酶抑制剂、类胰蛋白酶抑制剂、凝血酶抑制剂和STI。
31.根据权利要求23或24所述的方法,其中哺乳动物细胞是表达PAR-2的细胞。
32.根据权利要求31所述的方法,其中哺乳动物细胞选自角质细胞、成纤维细胞、和专职的吞噬细胞。
33.根据权利要求32所述的方法,其中哺乳动物细胞是角质细胞。
34.根据权利要求32所述的方法,其中哺乳动物细胞是成纤维细胞。
35.根据权利要求32所述的方法,其中哺乳动物细胞是专职的吞噬细胞。
36.根据权利要求23或24所述的方法,其中哺乳动物细胞是人细胞。
37.一种治疗受累于某疾病的哺乳动物的方法,该疾病可通过增加合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该方法包括给予该哺乳动物治疗有效量的特异性增加吞噬作用或ICAM-1表达的制剂。
38.一种治疗受累于某疾病的哺乳动物的方法,该疾病可通过减少合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该方法包括给予该哺乳动物治疗有效量的特异性减少吞噬作用或ICAM-1表达的制剂。
39.一种预防哺乳动物患某种疾病的方法,该疾病可通过增加合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该方法包括给予该哺乳动物预防有效量的特异性增加吞噬作用或ICAM-1表达的制剂。
40.一种预防哺乳动物患某种疾病的方法,该疾病可通过减少合适细胞中的吞噬作用或ICAM-1表达来改善,该方法包括给予该哺乳动物预防有效量的特异性减少吞噬作用或ICAM-1表达的制剂。
41.根据权利要求37或39所述的方法,其中制剂激活PAR-2通道。
42.根据权利要求41所述的方法,其中制剂选自SLIGRL、SAIGRL、SLIGKVD和丝氨酸蛋白酶。
43.根据权利要求42所述的方法,其中制剂选自SLIGRL、胰蛋白酶、凝血酶和类胰蛋白酶。
44.根据权利要求38或40所述的方法,其中制剂抑制PAR-2通道。
45.根据权利要求38或40所述的方法,其中制剂选自大豆衍生物或丝氨酸蛋白酶抑制剂。
46.根据权利要求45所述的方法,其中制剂选自豆奶、豆浆、化合物Ⅰ、胰蛋白酶抑制剂、类胰蛋白酶抑制剂、凝血酶抑制剂和STI。
47.根据权利要求37、38、39或40所述的方法,其中合适的细胞是表达PAR-2的细胞。
48.根据权利要求47所述的方法,其中合适的细胞选自角质细胞、成纤维细胞和专职的吞噬细胞。
49.根据权利要求48所述的方法,其中合适的细胞是角质细胞。
50.根据权利要求48所述的方法,其中合适的细胞是成纤维细胞。
51.根据权利要求48所述的方法,其中合适的细胞是专职的吞噬细胞。
52.根据权利要求37、38、39或40所述的方法,其中疾病选自皮肤疾病、免疫系统疾病、炎性疾病、呼吸道疾病和中枢神经系统疾病。
53.根据权利要求52所述的方法,其中该疾病是皮肤疾病。
54.根据权利要求52所述的方法,其中该疾病是免疫系统疾病。
55.根据权利要求52所述的方法,其中该疾病是炎性疾病。
56.根据权利要求52所述的方法,其中该疾病是呼吸道疾病。
57.根据权利要求52所述的方法,其中该疾病是中枢神经系统疾病。
58.根据权利要求37、38、39或40所述的方法,其中哺乳动物是人。
59.一种用来给予权利要求1、2、3或4所述的组合物的生产制品,它包含一个固体输送载体,该载体中操作性地附有该组合物。
60.根据权利要求59所述的制品,其中该组合物包含激活PAR-2通道的制剂。
61.根据权利要求60所述的制品,其中该组合物包含选自SLIGRL、SAIGRL、SLIGKVD和丝氨酸蛋白酶的制剂。
62.根据权利要求61所述的制品,其中该制剂是SLIGRL。
63.根据权利要求59所述的制品,其中该组合物包含抑制PAR-2通道的制剂。
64.根据权利要求59所述的制品,其中该组合物包含选自大豆衍生物和丝氨酸蛋白酶抑制剂的制剂。
65.根据权利要求64所述的制品,其中制剂选自豆奶、豆浆、化合物Ⅰ、胰蛋白酶抑制剂、类胰蛋白酶抑制剂、凝血酶抑制剂和STI。
66.一种给予哺乳动物治疗、预防或美容化合物的方法,该方法包括给予哺乳动物(a)化合物和(b)组合物,该组合物包含药学上或美容上可接受的载体以及特异性增加吞噬作用的制剂,该制剂的用量足以增加希望摄取化合物的细胞中的吞噬作用,其中组合物的给药在给予化合物之前和/或同时进行。
67.根据权利要求66所述的方法,其中组合物包含激活PAR-2通道的制剂。
68.根据权利要求67所述的方法,其中该组合物包含选自SLIGRL、SAIGRL、SLIGKVD和丝氨酸蛋白酶的制剂。
69.根据权利要求68所述的方法,其中该制剂是SLIGRL。
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