KR20010015882A

KR20010015882A - 식작용 및 ｉｃａｍ-1 발현을 조절하기 위한 조성물 및 방법

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Publication number: KR20010015882A
Application number: KR1020007006682A
Authority: KR
Inventors: 세이버그 미리; 스탠리 에스. 샤피로; 막달레나 아이싱어
Original assignee: 미쉘 지. 멘지니; 죤슨 앤드 죤슨 컨써머 캄파니스 인코포레이티드
Priority date: 1997-12-16
Filing date: 1998-12-10
Publication date: 2001-02-26
Also published as: AR017216A1; DE69835832D1; TW590775B; KR100601810B1; CA2314899A1; CN1282254A; WO1999030729A1; EP1037653A1; DE69835832T2; AU2010200198A1; EP1037653B1; JP2002508331A; ES2273445T3; CN1188164C; AU2003204412A1; ZA9811537B; JP4689039B2; AU2006203246A1; BR9814284A; AU1722099A

Abstract

본 발명은 적절한 세포에서 식작용(phagocytosis) 또는 ICAM-1 발현을 증가 또는 감소시키는 어느 하나에 의해 개선된 특정 포유 동물의 질병을 치료 및 방지하기 위한 물질 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한 세포 수준에서 식작용 또는 ICAM-1 발현을 변경하는 방법을 제공한다. 본 발명은 더 나아가 식작용 또는 ICAM-1 발현의 변경에 의해 영향 받는 포유류 동물의 질병을 치료 또는 방지하는 방법을 제공한다. 상기 방법 및 물질 조성물은 모두 특히 식작용 및 ICAM-1 발현을 증가 또는 감소하는 약제의 사용에 관한 것이다. 최종적으로 본 발명은 제조된 관련 물품을 제공한다.

Description

식작용 및 ＩＣＡＭ-1 발현을 조절하기 위한 조성물 및 방법{COMPOSITIONS AND METHODS FOR REGULATING PHAGOCYTOSIS AND ICAM-1 EXPRESSION}

일반적인 식작용 및 ICAM-1 발현

식작용은 미립자 물질의 소화 및 통상적으로 분리 또는 파괴의 세포내 과정이다. 척추동물에서, 식작용은 다양한 백혈구(leukocytes) 및 세망내피계(reticulo endothelial) 세포의 특징적인 기능이다. 식작용은 미생물에 의한 감염에 대해, 및 외래 입자와 조직 파편(debris)에 의한 점막 표면 및 조직의 폐색(occlusion)에 대해 중요한 신체방어 메카니즘으로 작용한다. 식작용은 함입(invagination)및 원형 질막(plasma membrane)의 수축(pinching off)을 통해 세포에 의해 유체를 흡수하는 것(uptake) 인 세포흡수작용(pinocytosis)과 구분된다. 여기서, "식작용" 및 "세포내 소화"라는 용어는 서로 교환하여 사용된다.

세포간 부착 분자-1(intercellular adhesion molecule-1 : "ICAM-1)은 세포-세포 부착 및 식작용에 관련된 유인할 수 있는 세포 표면 당단백질(glyco protein)이다. 특히, ICAM-1의 조절은 염증 상황, 패혈증성 충격(septic shock) 및 신경학상(neurological) 질병[1996년 반 데 스톨프 및 반 데 사그에 의해 (J Mol Med 74:1, 13-33)에서 논평된]에 작용한다. ICAM-1은 류마티즘성 관절염 및 건선 같은 자가면역에서 높아진다. 염증 및 면역 반응은 ICAM-1이 결여된 쥐들에서 감소된다(슬라이 등에 의한 PNAS 90:8529-33, 1993).

식작용 및 ICAM-1 발현과 관련된 포유 동물의 질병

서로 다른 세포들에서 식작용 및 ICAM-1 발현 수준은 중요한 관련을 가진다. 이러한 관련에 대한 다수의 실례가 여기서 제공된다.

면역-관련 및 염증성 질병

폐기종(pulmonary emphysema)의 첫째 원인은 폐에 외래 물질(예를 들어. 담배 응축물)이 축적되는 것이다. 이 축적은 시도된 식작용 동안 과립이 감소되는 뉴트로필(neutrophil)의 보충을 가져온다.(트래비스 등, Am. J. Respir. Crit. Care Med. Vol.150 : 5143- 5146, 1994)

알레르기성 폐 기관 아스페르길루스증(bronchopulmonary aspergillosis)같은 면역학적인 폐 질병은 공기통로(airway)의 점막 폐색, 호산구증다증 폐렴(eosinophylic pneumonia) 및 기관지염 오블리터런(obliterans)을 초래한다.

그러한 질병에서, 뉴트로필 엘라스타제-클리브드(cleaved) 면역글로블린 및 소화된 C3b 수용체는 병원체(pathogens)의 식작용을 제한한다(그린버거, JAMA, Vol.278, No. 22, 1997). 감소된 식작용동안 뉴트로필 엘라스타제의 증가는 특히 CF 환자의 폐에서 잠복기가 긴 박테리아성 감염에 대항하는데 유리하다(도링등, Am.J. Respir. Crit. Care Med. 150:6 Pt2, S114-7, 1994).

치주염은 치아의 뿌리에 플라크(plaque)가 축적되어 시작되고, 검 라인(gum line)아래서 기회를 기다리던 박테리아가 성장하게 된다. 기종(emphysema)에서 면역 반응에 따라, 뉴트로필이 감염 부위에 보충되어, 부진한 식작용 동안 그들의 과립감소를 가져온다(트래비스 등, Am. J. Respir. Crit. Care Med. Vol.150 : 5143-5146, 1994). 치주염 환자의 다형핵 세포("PMN's")에 의한 옵소닌성 황색포도상구균의 부착 및 감염 비율은 건강 조절에 비례하여 상당히 감소된다(맥팔란등, J Periodontol 1992; 63:908-913, 1992).

유전적으로 면역-타협된 사람, 면역-억제를 획득한(HIV-감염된 사람 같은)사람또는 일시적으로 면역-억제를 획득한(다음의 기관 이식법, 외래 이식 조각, 판막교체물(valve replacement) 또는 암 치료 및 그 유사물 같은)사람은 자주 2차 감염으로 고통받는다.

당뇨병환자로부터 유래한 폐의 다형핵 백혈구는 건강한 사람과 비교하여 박테리아의 섭취 및 살해 수준에서 모두 감소된 식작용 능력을 보여준다(예를 들면 머스클로우등, Cytobios, 65:15-24, 1991). 특히, 면역 반응에서 당뇨병의 비정상은 손상된 화학주성(chemotaxis), 손상된 식작용 및 손상된 부착을 포함한다(그랜트-테울, Periodontal Abstracts, Vol.44, No.3, 1996). 이들 환자들은 자주 바람직하지 않은 감염으로 고통받는다.

심장혈관계 질병

아테롬성(atherosclerotic) 플라크(plaque)의 형성은 노화에 의해 또는 벌룬 혈관형성술(balloon angioplastry)에 따른 협착증(restenosis)에 의해 유발된다. 아테롬성 장애는 콜레스테롤이 풍부한 입자를 포함하는데, 그들이 다수 뭉쳐서 대식구(macrophage)의 식작용에 의해 조절되지 않는 형식으로 흡수된다. 이러한 식작용 과정은 LDL 또는 스캐빈저 수용체와는 독립적이다. 소위 거품세포(foamy cell)라고 불리는 상기 지방-장전 대식구는 상기 아테롬성 플라크의 성장을 유발할 수 있다(호프등, 유럽심장 저널, Ⅱ(Supp.E), 105-115, 1990; 로버트 등, 사이언스의 Annals New York Acad., 673:331-341, 1992)

중추 신경계 질병

아밀로이드 플라크 코어 주변에서 발견되는 소교세포(microglial cells)는 베타/A4 아밀로이드의 플라크 소섬유(fibrils)를 함유하는 것으로 알려졌다(El 하치미 및 폰신, C.R. Acad. Sci. 파리, 사이언스 데 라 비에/라이프 사이언스, 317:445-451, 1994). 식작용(phagocytose)을 하고 노쇠한 플라크 코어를 제거하는 소교세포의 능력은 성상세포-분비 확산성 인자(astrocyte-secreted diffusable factor)의 존재 하에 억제된다. 상기 인자는 노쇠한 플라크의 제거를 방해하여, 알츠하이머 병 및 다른 신경병리적인 퇴행성 진행을 지속하도록 한다(데위트등, 익스페리멘털 뉴롤로지, 149:329-340, 1998).

뉴트로필 식작용은 정신적으로 우울한 환자들에서는 감소되는 것이 발견되었다(예를 들면, 맥담스 및 레오나드, Prog. Neuro-Psychopharmacol. & Biol. Psychiat., Vol. 17:971-984, 1993; 마에스 등, J. Psychiat. Res., Vol.26, No. 2, 125-134, 1992). 공포증(Phobic disorders)을 가진 환자들은 감소된 식작용 및 세포-살해 능력을 가진다. 신경병리상 질병의 치료에 사용되는 벤조디아제핀 화합물은 식작용을 감소 또는 억제하는 것으로 알려져 있다(예를 들면, 코벨리 등, Immunopharmacology and Immunotoxicology, 11(4):701-714, 1989).

피부 질병

중간-피부의 탄력섬유증(mid-dermal elastosis), 즉 피부 질병은 주름 및 형태학적으로 정상인 엘라스틱 조직의 식작용으로 인해, 부분적으로는 유래하는 노화된 외관의 출현에 의해 임상적으로 특징지워진다(예를 들면, 피미아니 등, Arch Dermatol Res., 287:152-157, 1995).

착색 질병의 다수 유형이 다양한 형태로 존재한다. 이들은 유전될 수 있고[예를 들면, 백반(vitiligo)], 획득될 수 있으며[예를 들면, 염증 후 백색 비강진(post-inflammatory pityriasis alba), 자연발생적 적상 하이포멜라노시스(idiophatic guttate hypomelanosis), 흑피증(melasma)], 감염을 통해 전이될 수 있다[예를 들면, 어루러기(tinea versicolor)]. 이들 질병들은 양성 및 자기-제한적일 수 있고 [예를 들면, 분리된 카페 아우 라이트 반점(isolated cafe au lait spots), 광접촉성 피부염(photocontact dermatitis)], 또는 더 심각한 잠재적인 질병의 신호일 수 있다 [예를 들면, 다수의 카페 아우 라이트 반점(multiple cafe au lait spots), 악성 흑색 극세포증(malignant acanthosis nigricans)](핵커, Postgrad Med 99:177-86, 1996).

UV 방사는 염증상태 및 ICAM-1 발현의 비정상적인 조절을 유도한다고 알려져 있다. 이러한 유도는 선번 및 PUVA 치료의 부작용의 형태로 상세히 알려졌다. PUVA 치료는 ICAM-1 발현의 상승조절(upregulation)과 관련된 질병인 건선 같은 다수의 피부 질병에 사용된다(예를 들면, 트론니어등, J.Cutan Pathol 1997, 24:278-85; 아렌즈등, PNAS 1997, 94:6837-41).

좌창 불가리스(Acne vulgaris)는 다단계 질병이다. 기본적인 좌창 손상은 여드름(comedo)이다. 둘째, 뉴트로필이 상기 여드름 영역에 보충되는 염증 단계는 상기 질병이 진행되는 원인이다. 좌창과 관련된 거의 모든 문제는 상기 염증 단계로 부터 유래한다. 테트라사이클린-치료 환자의 뉴트로필은 화학기술 인자(chemo tactic factors) 및 체외에서 억압된 랜덤 이동에 대하여 보다 느린 이동 속도를 입증한다(예를 들면, 웹스터, J. Am. Acad. Dermatol. 1995, 33:247-53).

프로테아제-활성 수용체

상기 프로테아제-활성 수용체-2("PAR-2")는 그것의 서열에서 트롬빈 수용체("TR's", 또한 PAR-1, 및 PAR-3이라 부른다) 및 PAR-4와 관련되지만 구별되는 7개의 막을 통해서 생기는 G-프로테인-결합 수용체(seven transmembrane G-protein- coupled receptor)이다. 프로테아제-활성 수용체는 세포외적인 영역에서 아르기닌-세린 분열(cleavage)에 의해 단백질 가수 분해적으로 활성화된다. 그 후 새로 만들어진 N-말단이 속박된 리간드(tethered ligands)로서 이들 수용체를 활성화시킨다. 양 수용체는 트립신에 의해 활성화될 수 있지만, TR's 및 PAR-4만은 트롬빈에 의해서 활성화된다. TAR-2만은 마스트 세포(mast cell) 트립타제에 의해 활성화된다. 이들 수용체는 또한 수용체 분열과 관계없이 그들의 새로운 N-말단과 일치하는 펩티드에 의해 활성화될 수 있다. 쥐의 PAR-2-활성 펩티드인 SLIGRL은, 인간의 활성 펩티드 SLIGKVD인 인간의 수용체의 활성에서도 동일한 힘을 발휘한다(검토를 위해, 코우린, PNAS 91:9200-202, 1994; 브라스 및 모리노, Thrombosis 및 Haemostasis 78:234-41, 1997; 모를레이 등, Can. J. Physilo Pharmacol 25:832-41, 1997 참조). TR의 기능이 잘 문헌화되어 있는 반면, PAR-2의 생물학은 아직 완전히 확인되어 있지 않다. 각질세포(Keratinocyte) 성장 및 분화 억제에서 PAR-2 활성의 역할이 최근에야 데리안 등에 의해 세포 성장 및 분화 8:743-749(1997)에서 개시되었다.

본 발명은 특정 세포에서 식작용(phagocytosis) 또는 ICAM-1 발현을 변경시킴으로써 개선되는 포유 동물 질병의 방지 및 치료에 관한 것이다. 본 발명은 다수의 조성물, 방법 및 제조된 물품을 제공하고, 피부 질병 및 면역 질병 및 중추신경계 질병 같은 상당 범위의 질병을 다룬다. 본 발명은 식작용 및 ICAM-1 발현 조절을 위한 메카니즘의 발견에 기초한다.

도 1은 화합물 I 또는 SLIGRL로 처리한 후에 형광 마이크로스피어에 노출된 원시 각질세포를 도시하는 도면.

도 2는 화합물 I 또는 SLIGRL로 처리한 후에 형광 마이크로스피어에 노출된 각질세포 라인의 세포를 도시하는 도면.

도 3은 콩 트립신 억제인자("STI") 또는 SLIGRL로 처리한 후에 형광 마이크로스피어에 노출된 섬유아세포세포 라인의 세포를 도시하는 도면.

도 4A는 STI로 처리되고 및 형광 E. Coli.에 노출된 마크로파지의 투약-반응 그래프를 도시하는 도면.

도 4B는 화합물 I 또는 SLIGRL로 처리되고 형광 E.Coli.에 노출된 마크로파지의 투약-반응 그래프를 도시하는 도면.

도 5A는 SLIGRL, STI 또는 화합물 I로 처리된 각질세포에 의한 멜라닌 섭취를 도시하는 도면.

도 5B는 분리된 멜라노좀(Melanosomes)을 이용하여 도 5A와 같은 결과를 도시하는 도면.

도 6A는 ICAM-1 면역-형광 염색 처리된 각질세포를 도시하는 도면.

도 6B는 처리된 각질세포로부터 면역-침전된 ICAM-1 단백질의 웨시턴 블랏(Westen blot)을 도시하는 도면.

도 7A는 면역-억제 쥐에 이식되고 운반체 또는 SLIGRL로 처리된 인간 피부를 도시하는 도면.

도 7B는 면역-억제된 쥐에 이식되고, 운반체 또는 SLIGRL로 처리된 인간피부의 조직학적 단면을 도시하는 도면.

도 7C는 면역-억제된 쥐에 이식되고, 운반체 또는 STI로 처리된 인간피부의 조직학적 단면을 도시하는 도면.

도 8은 처리된 각질세포의 전자 현미경 스캐닝 이미지를 도시하는 도면.

도 9는 F-액션 염색 처리된 각질세포를 도시하는 도면.

도 10은 각질세포 식작용에 대한 항-ICAM-1 항체의 효과를 도시하는 도면.

도 11은 인간의 노화 반점을 옅게 하는 본 발명 화합물의 효과를 도시하는 도면.

본 발명은 특정 포유류 동물의 질병을 치료 및 방지하는 물질 조성물을 제공한다. 이들 조성물 및 관련된 방법은 식작용 및 ICAM-1 발현 조절에 대한 메카니즘의 발견에 기초한다. 본 조성물은 하기의 것을 포함한다:

(1) (a) 식작용 또는 ICAM-1 발현을 증가시키는 약제의 치료적으로 효과적인 양, 및 (b) 약학적으로 또는 화장용으로 적합한 운반체를 포함하는, 적절한 세포에서 식작용 또는 ICAM-1 발현의 증가에 의해 개선되는 질병으로 고통받는 포유동물을 치료하기 위한 물질 조성물;

(2) (a) 특히 식작용 또는 ICAM-1 발현을 감소시키는 약제의 치료적으로 효과적인 양, 및 (b) 약학적으로 또는 화장용으로 적합한 운반체를 포함하는, 적절한 세포에서 식작용 또는 ICAM-1 발현의 감소에 의해 개선되는 질병으로 고통받는 포유동물을 치료하기 위한 물질 조성물;

(3) (a) 특히 식작용 또는 ICAM-1 발현을 증가시키는 약제의 예방에 효과적인 양, 및 (b) 약학적으로 또는 화장용으로 적합한 운반체를 포함하는, 적절한 세포에서 식작용 또는 ICAM-1 발현의 증가에 의해 개선되는 포유동물의 질병을 방지하기 위한 물질 조성물; 및

(4)(a) 특히 식작용 또는 ICAM-1 발현을 감소시키는 약제의 예방에 효과적인 양, 및 (b) 약학적으로 또는 화장용으로 적합한 운반체를 포함하는, 적절한 세포에서 식작용 또는 ICAM-1 발현의 감소에 의해 개선되는 포유동물의 질병을 방지하기 위한 물질 조성물.

본 발명은 또한 세포에서 식작용 또는 ICAM-1 발현 수준을 변경하는 방법을 제공한다. 본 발명은 먼저 특히 식작용 또는 ICAM-1 발현을 증가시키는 약제의 효과적인 양을 세포에 접촉시키는 것을 포함하는 포유동물 세포에서 식작용 또는 ICAM-1 발현을 증가시키는 방법을 제공한다. 둘째, 본 발명은 특히 식작용 또는 ICAM-1 발현을 감소시키는 약제의 효과적인 양을 세포에 접촉시키는 것을 포함하는 포유동물 세포에서 식작용 또는 ICAM-1 발현을 감소시키는 방법을 제공한다.

본 발명은 더 나아가 식작용 또는 ICAM-1 발현의 변경에 의해 영향 받는 질병에 관한 치료 및 예방(prophylaxis) 방법을 제공한다. 특히, 본 발명은 하기의 것을 제공한다:

(1) 특히 식작용 또는 ICAM-1 발현을 증가시키는 약제의 치료적으로 효과적인 양을 포유동물에 투여하는 단계를 포함하는, 적절한 세포에서 식작용 또는 ICAM -1 발현의 증가에 의해 개선되는 질병으로 고통받는 포유동물을 치료하기 위한 방법;

(2) 특히 식작용 또는 ICAM-1 발현을 감소시키는 약제의 치료적으로 효과적인 양을 포유동물에 투여하는 단계를 포함하는, 적절한 세포에서 식작용 또는 ICAM -1 발현의 감소에 의해 개선되는 질병으로 고통받는 포유동물을 치료하기 위한 방법;

(3) 특히 식작용 또는 ICAM-1 발현을 증가시키는 약제의 예방에 효과적인 양을 포유동물에 투여하는 단계를 포함하는, 적절한 세포에서 식작용 또는 ICAM -1 발현의 증가에 의해 개선되는 포유동물의 질병을 방지하기 위한 방법; 및

(4) 특히 식작용 또는 ICAM-1 발현을 감소시키는 약제의 예방에 효과적인 양을 포유동물에 투여하는 단계를 포함하는, 적절한 세포에서 식작용 또는 ICAM -1 발현의 감소에 의해 개선되는 포유동물의 질병을 방지하기 위한 방법;

본 발명은 또한 실시 가능하게 부착된 조성물을 가진 고체형 방출 운반체(solid delivery vehicle)를 포함하는 상기 물질의 조성물을 포유동물에 투약하기 위한 제조된 물품을 제공한다.

마지막으로, 본 발명은 (a) 상기 화합물 및 (b) 약학용 또는 화장용 운반체 및 특히 화합물의 흡수가 요구되는 세포에서 식작용을 증가시키기에 충분한 양으로 식작용을 증가시키는 약제를 포함하는 물질의 조성물을 포유동물에 투여하는 단계를 포함하는 치료, 예방 또는 화장용 화합물을 포유 동물에 투여하는 방법을 제공하는데, 상기 조성물은 상기 화합물의 투여 전에 투여되고/투여되거나 상기 화합물의 투여와 동시에 투여된다.

본 발명은 PAR-2-매개 식작용 및 PAR-2 매개 ICAM-1 발현이 특히 변경될 수 있다는 발견에 기초한다. 특히 이러한 세포 기능을 증가 및 감소시키는 능력은 식작용 및/또는 ICAM-1 발현의 증가 또는 감소에 의해 개선되는 질병의 치료 및 방지를 가능하게 한다. 따라서 본 발명은 식작용 및/또는 ICAM-1 발현의 특정 변경에 의해 개선되는 질병의 치료를 위해 다양한 조성물 및 방법을 제공한다.

보다 구체적으로, 본 발명은 특정 포유동물의 질병을 치료 및 방지하기 위한 물질의 조성물을 다수 제공한다. 이들 조성물은 하기의 것을 포함한다:

(4) (a) 특히 식작용 또는 ICAM-1 발현을 감소시키는 약제의 예방에 효과적인 양, 및 (b) 약학적으로 또는 화장용으로 적합한 운반체를 포함하는, 적절한 세포에서 식작용 또는 ICAM-1 발현의 감소에 의해 개선되는 포유동물의 질병을 방지하기 위한 물질 조성물.

본 발명은 더 나아가 식작용 또는 ICAM-1 발현의 변경에 의해 영향 받는 질병에 관한 치료 및 예방법을 제공한다. 특히, 본 발명은 하기의 것을 제공한다:

본 물질 조성물은 종래 기술에서 공지된 임의의 제형일 수 있다. 한 실시예에서, 상기 조성물은 약학적으로 적합한 운반체 및 특히 식작용 또는 ICAM-1 발현을 변경하는 약제로서 작용하는 하나 이상의 분리된 약학용 화합물을 포함한다. 다른 실시예에서, 상기 물질 조성물은 약학적으로 또는 화장용으로 적합하다고 간주되는 천연적으로-발생하는 조성물 또는 추출물 또는 이들의 구성성분을 포함한다. 그러한 천연적으로 발생하는 조성물은 활성제로서 작용하는 특정 구성성분 및 약학용 또는 화장용 운반체로서 작용하는 다수의 다른 성분을 함유한다. 본 조성물은 인공적, 자연 발생적 또는 이들의 결합일 수 있다. 부가적으로, 상기 조성물은 액체(예를 들면, 용액, 크림, 로션, 젤, 주사가능물질(injectable)), 고체(예를 들면, 정제, 캡슐, 파우더, 입자), 에로졸, 및 코팅제 같은 종래 기술에서 공지된 임의의 물리적 제형일 수 있다.

세린 프로테아제 억제인자, 특히 콩 트립신 억제인자("STI")같이, 트립신을 억제하는 천연 화합물이 본 발명에 사용될 수 있다. 콩 추출물, 리마콩 추출물 및 유사 추출물 및 두유, 콩 페이스트, 미소, 콩 또는 리마콩 및 그 유사물로부터 유래된 트립신 억제인자 같은 콩 및 그 유사물로부터 제조된 다른 천연 산물이 또한 상기 메카니즘에 의해 식작용을 또한 유도할 수 있다.

더 바람직한 실시예에서, 상기 천연 발생적인 조성물은 두유 또는 STI이다. 예를 들면, 세린 프로테아제 억제인자의 부가적인 소스는 하기의 식물과를 포함한다: 가지과(Solanaceae)(예를 들면, 감자, 토마토, 토마틸라(tomatilla) 및 그 유사물); 그라미니아(gramineae)(예를 들면, 쌀, 메밀, 사탕수수, 밀, 보리, 오트 및 그 유사물); 박과(Cucurbitaceae)(예를 들면, 오이, 호박(squash), 호리병박(gourd), 수세미(luffa) 및 그 유사물); 및 바람직하게는 콩과(Leguminosae)(예를 들면, 콩(bean), 완두(pea), 렌즈콩(lentil), 땅콩 및 그 유사물).

예를 들면, 제제(formulation)는 두유 또는 콩과식물 또는 다른 적절한 식물로부터 직접적으로 유래된 다른 액체 제제를 함유할 수 있다. 한 실시예에서, 그러한 제제는 다량의 두유, 상기 두유의 물리적 안정을 유지하는 유화제, 및 선택적으로 킬레이팅제, 방부제, 연화제(emollient), 습윤제 및/또는 농후제 또는 젤제를 함유한다.

특히 식작용 또는 ICAM-1 발현을 증가 또는 감소시키는 본 조성물의 약제는 종래 기술에서 공지된 임의 유형의 화합물일 수 있다. 실시예들은 제한 없이 유기분자, 무기 분자, 펩티드, 단백질, 탄수화물, 핵산분자, 지방 및 이들의 어떤 조합을 포함한다. 예를 들면, 세린 프로테아제 및 PAR-2 길항제는 식작용을 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 트립신, 트립타제 및 트롬빈 억제인자 및 PAR-2 길항제는 식작용을 감소시키기 위해 사용될 수 있다.

식작용을 증가시키기 위한 바람직한 실시예에서, 상기 약제는 SLIGRL, SAIGRL, 또는 SLIGKVD 이다. 식작용을 감소시키기 위한 바람직한 실시예에서, 상기 약제는 콩 유도체(두유, 콩 페이스트 또는 STI와 같은) 또는 화합물 I이다. 화합물 I는 화학식 (S)-N-메틸-D-페닐알라닐-N-[4-{(아미노이미노메틸)아미노}-1-(2-벤조티아졸릴카르보닐)부틸]-L-프롤린아미드(케미컬 앱스트랙트에서 확인되는 바와 같이)을 가지고, 하기에 도시된 구조를 가진다.

이 화합물은 미국특허 번호 제 5,523,308 뿐만 아니라, 코스탄조 등, J.Med.Chem., 1996, 39:3039-3043에 개시되어 있다. 미국 특허 번호 5,523,308은 세린 프로테아제 억제인자(d-페닐알라닌-프롤린-아르기닌 모티프를 가진 화합물 같은)로서 행동하고, 그러므로 식작용 및 ICAM-1 발현을 감소시키기 위해 사용될 수 있는 관련 화합물을 개시한다. 화합물 I와 관련된 부가적인 화합물이 하기 실시예에서 상세하게 기술된다.

여기서 사용되는 "포유동물"이라는 용어는 웹스터의 의학 데스크 사전 407(1986)에서 정의된 바와 같이 포유류(Mammalia) 강(class)에 속하는 고등 척추동물(higher vertebrate animal)의 어떠한 구성원이라도 의미하고, 인간에게 제한되지는 않지만 다른 영장류(primate), 돼지, 개, 및 설치동물(rodent) [면역 억제된 쥐(immunosuppressed mice)와 같은]을 포함한다. 본 발명의 바람직한 실시예에서, 포유 동물은 인간이다.

본 발명을 사용해서 치료되거나 또는 방지될 수 있는 질병은, 적절한 세포에서 식작용 또는 ICAM-1 발현의 증가 또는 감소에 의해 개선[즉, 질병 그 자체에 대한 분명한 효과(positive effect), 및/또는 이것의 이차적인 효과]될 수 있는 어떠한 질병이라도 포함한다. 바람직한 실시예에서, 식작용은 PAR-2-매개이다(PAR-2- mediated). 이러한 질병들은 제한없이 면역 시스템 질병(immune system disorder), 당뇨병(diabete), 염증성 질병(inflammatory disorder), 중추신경계(central nervous system)의 질병, 피부 질병, 육체적인 상처, 치주질환(periodontal disorder) 및 호흡기 질병을 포함한다. 예를 들어 또한 이러한 질병에는 원하지 않는 임신(unwanted fertilization)이 있는데, 한 가지 실시예에서 이것은 PAR-2 경로를 개시하는 정자 프로테아제 아크로신(sperm protease acrosin)의 억제인자(inhibitor)(즉, PAR-2 억제인자)를 투여함으로써 방지된다(아크로신을 검토하기 위해서는 팍스 등의 FEBS Lett 417:3, 267-9, 1997을 참조한다).

많은 질병들은 한 범주(category) 이상의 질병의 특징을 갖는다. 예를 들어 이러한 질병에는 피부 질병과 면역 시스템 질병 양쪽으로 분류될 수 있는 유착 질병(adhesion disorder)이 있다. 따라서, 질병이 특정 범주(예를 들어, 피부 질병)에 있다는 진술은, 여기에서 질병이 적어도 상기 범주의 특징을 갖고 있다는 것을 의미한다. 그러나 상기 질병은 또한 다른 범주의 특징을 부가적으로 가질 수 있다.

박테리아와 바이러스 같은 외래 물질을 주입하여 면역 세포의 능력을 증가시키는 것은, 면역 반응(immune response)을 강화시킬 것으로 예상된다. 예를 들어, 단핵 식세포(mononuclear phagocyte)는 만성적인 세균 감염(chronic microbial infection)에 대해 비활성(inactive)이고(Reiner, Immunol Today 15:8, 374-81, 1994), 이들의 재활성(re-activation)은 질병을 치료할 것으로 예상된다. 다른 한편, 면역 시스템이 지나치게 활성인 질병들은 식작용을 억제함으로써 개선될 것이다.

본 발명에서 치료할 수 있는 면역 시스템과 염증성 질병들에는, 예를 들어 AIDS, 화학요법-유발 면역결핍증(chemotherapy-induced immunodeficiency), 천식(asthma), 독성 물질 노출에 의한 손상[예를 들어, 석면(asbestos) 또는 연기(smoke)], 이식되는 물질(implant)과 이식되는 조직(transplanted tissue)의 거부반응(host rejection), 유착 질병, 가벼운 감염(보통의 감기와 같은), 심한 감염[뇌막염(meningitis) 또는 "살인 박테리아(killer bacteria)"와 같은], 상처(감염, 당뇨병, 급성 및 만성 상처), 협착증(restenosis), 방광 섬유형성증(cystic fibrosis), 폐기종(pulmonary emphysema), 치주 질환, 및 기저귀 발진(diaper rash)이 있다.

피부 질병은, 불필요한 색소형성(unwanted pigmentation), 불필요한 탈색(unwanted de-pigmentation), 건선(psoriasis), 발진, 및 특정한 육체적 피부결함(예를 들어, 주름)을 포함한다. 한 가지 특정한 실시예에서, 백반 환자(vitiligo patients)는, 옅은 반점을 어둡게 하기 위해 식작용-증가제(phagocytosis-increasing agent)(예를 들어, SLIGRL)와 더불어 멜라닌(melanin)[리포솜(liposome) 또는 플레인(plain)을 통해]으로 치료된다. 다른 한편, 이들은 더 어두운 부위를 밝게 하기 위해 화합물 I로 치료되었다(1998년 7월 6일 출원된 미국 시리얼 번호 09/110,409를 참조하라). 피부 질병과 관련된 예에서, 회색 모발(gray hair)은 이상적으로는 샴푸 또는 크림인 멜라닌(플레인 또는 리포솜-전달된)과 식작용-증가제(예를 들어, SLIGRL)로 치료된다. 중추신경계 질병은, 제한 없이 알쯔하이머 병(Alzheimer's disease) 및 다른 노인성 플라크 질병(senile plaque disorder)[아밀로이드 섬유(amyloid fibrils)의 식작용을 상향 조절함으로써 치료], 우울증(depression), 공포증 및 벤조디아제핀(benzodiazepin)치료의 이차적인 효과로부터 발생하는 다른 질병들을 포함한다.

본 방법에서 치료되는 포유 동물 세포는 바람직하게 PAR-2-발현 세포이고, 제한 없이 각질세포, 섬유아세포세포(fibroblast), 및 "전문적인 식세포(즉, 일차적인 기능으로 식작용을 갖는 세포)"를 포함한다. 예를 들어, 전문적인 식세포에는 뉴트로필(neutrophil), 마크로파지(macrophage) 및 마크로파지-유사 세포들(macrophage-like cells)[예를 들어, 랑거한스 세포(Langerhans cell)와 쿠퍼 세포(Kuper cells)]이 있다. 바람직한 실시에에서, 포유 동물 세포는 인간 세포이다.

본 발명에서, 본 물질 조성물에 반응화여 식작용 또는 ICAM-1 발현이 변화되어야만 하는 "적절한 세포"는, 치료되거나 또는 예방되는 질병의 특성에 기초해서쉽게 결정된다. 예를 들어, 치료되는 질병이 색소형성 질병이면, 식작용 또는 ICAM-1 발현이 변화될 필요가 있는 적절한 세포는 각질세포이다.

본 방법은 질병을 치료할뿐만 아니라 방지하기 위한 것이다. 여기서 사용되는, 질병을 "치료한다"는 것은 질병 진행의 감소, 질병 진행 중지, 질병의 이차적인 효과의 중지 또는 그렇지 않으면 개선, 질병 진행의 전환(reversing), 또는 바람직하게는 질병의 치료를 의미한다. 여기서 사용되는, 질병을 "방지한다"는 것은 질병 발생의 가능성을 감소, 및 바람직하게는 제거한다는 것을 의미한다.

본 발명에서, 본 조성물을 투여하는 것은 당업자에게 공지된 여러 방법과 전달 시스템 중 어떠한 것을 사용해서도 달성 및 실행될 수 있다. 예를 들어, 투여는 정맥을 통해(intravenously), 경구적으로(orally), 임플랜트를 통해(via implant), 점막을 통해(transmucosally), 국소적으로, 피부를 통해(transdermally), 근육을 통해(intramuscularly), 피하를 통해서(subcutaneously) 및 에어로졸(aerosol)을 통해서 실행될 수 있다. 게다가, 이상적으로 본 조성물은 하나 이상의 일반적으로 사용되는 약용 또는 화장용으로 적합한 운반체(carrier)를 포함한다. 이러한 운반체들은 당업자에게 잘 공지되어 있다. 다수의 일반적으로 사용되는 운반체들을 사용하는 다음의 전달 시스템은, 본 조성물을 투여하기 위해 계획된 많은 실시예들을 나타낼 뿐이다.

피부를 통한 전달 시스템에는, 패치(patch), 겔(gel), 테이프(tape), 로션(lotion), 비누(soap), 샴푸와 크림이 있으며 가용화제(solubilizer), 침투 강화제(permeation enhancer)(예를 들어, 지방산, 지방산 에스테르, 지방 알콜과 아미노산), 친수성 중합체(hydrophilic polymer)[예를 들어, 폴리카보필(polycarbophil)과 폴리비닐피롤리돈(polyvinylpyrolidone)], 및 접착제(adhesive)와 점착제(tackifier)[예를 들어, 폴리이소부틸렌(polyisobutylene), 실리콘에 기초한 접착제, 아크릴레이트(acrylate)와 폴리부텐(polybutene)]같은 부형제(excipient)를 포함할 수 있다.

트립신(trypsin), 트립타제(tryptase)와 STI와 같은 단백질을 포함하는, 특히 이러한 본 발명 조성물 일부의 국소 전달은, 리포솜을 사용해서 이루어 질 수 있다. 바람직하게 리포솜은 비이온성(non-ionic)이다. 한 실시예에서, 이들은, (a) 글리세롤 디라우레이트(glycerol dilurate); (b) 콜레스테롤에서 발견되는 스테로이 백본(steroid backbone)을 갖는 화합물들; 및 (c) 약 12개 내지 약 18개의 탄소원자를 갖는 지방산 에테르를 포함하는데, 여기서 리포솜의 구성 화합물들은 약 37.5: 12.5 : 33.3: 16.7의 비로 존재한다. 글리세롤 디라우레이트/콜레스테롤/폴리옥시에틸렌-10-스테아릴 에테르/폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르("GDL" 리포솜)을 포함하는 리포솜이 바람직하다. 한 실시예에서, 리포솜은 조성물의 총 부피에 기초해서, 약 10 mg/ml 내지 약 100 mg/ml, 및 바람직하게는 약 15 mg/ml 내지 약 50 mg/ml의 양으로 존재한다. 약 37.5: 12.5: 33.3: 16.7의 비가 바람직하다. 리포솜을 제조하는 방법은, 니에미엑 등의 12 Pharm. Res. 1184-88(1995)에서 개시된 것과 같은 기술에서 잘 공지된다.

또한, 국소적 또는 피부를 통한 투여에 대해서, 본 조성물은 가습제(moisturizer), 화장용 보조제(cosmetic adjuvant), 항산화제, 표백제(bleaching agent), 티로시나제 억제인자(tyrosinase inhibitor)와 다른 알려진 탈색제, 알파-하이드록시 산, 계면활성제, 거품제(foaming agent), 컨디셔너(conditioner), 습윤제(humectant), 방향제(fragrance), 점성제(viscosifier), 완충제, 방부제, 태양광선 차단제(sunscreen) 및 그 유사물과 같은 다른 성분들과 혼합될 수 있다. 또한 본 발명의 조성물들은, 예를 들어 트레티노인(tretinoin), 레티놀(retinol), 트레티노인 및/또는 레티놀의 에스테르와 그 유사물을 포함하는 레티노이드의 활성량을 포함할 수 있다.

점막을 통한 전달 시스템에는 패치, 정제, 좌약(suppository), 페사리(pessary), 겔과 크림이 있고, 가용화제 및 강화제(enhancer)[예를 들어, 프로필렌 글리콜, 담즙염(bile salt) 및 아미노산]와 같은 부형제, 및 다른 운반체(vehicle)(예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜, 지방산 에스테르와 그 유도체, 및 하이드록시프로필메틸셀룰로오스와 히알루론산과 같은 친수성 중합체)를 포함할 수 있다.

주사를 통한 전달 시스템에는 용액, 현탁액(suspension), 겔, 마이크로스피어(microsphere)와 주사할 수 있는 중합체(polymeric injectable)가 있고, 용해도-변경제(solubility-altering agent)[예를 들어, 에탄올, 폴리프로필렌 글리콜과 수크로스(sucrose)] 및 중합체(예를 들어, 폴리카프릴락톤과 PLGA의 중합체)와 같은 부형제를 포함할 수 있다. 중추신경계 전달 시스템에는, 예를 들어 혈액 두뇌 장벽(blood brain barrier)(예를 들어, DHA)을 건너기 위한 지질-결합 유도체(lipid-coupled derivatives)가 있다. 이식 가능한 시스템에는 막대(rods) 및 디스크(disk)가 있고, PLGA 및 폴리카프릴 아세톤과 같은 부형제를 포함할 수 있다.

경구 전달 시스템에는 정제와 캡슐이 있다. 이들은 결합제(binder)(예를 들어, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스, 폴리비닐피릴로돈, 다른 섬유성 물질과 전분), 희석제(diluent)(예를 들어, 락토오스와 다른 당분, 전분, 디칼슘 포스페이트와 섬유성 물질), 분해제(disintegrating agent)(예를 들어, 전분 중합체와 섬유성 물질) 및 윤활제(예를 들어, 스테아레이트 및 탈크)와 같은 부형제를 포함할 수 있다. 또한 이러한 전달 시스템은 예를 들어 치약(toothpaste), 양치질약(mouthwash), 로젠지(lozenge)와 롤리팝(lollipop)을 포함한다.

재구성할 수 있는 전달 시스템을 위한 용액, 현탁액 및 분말은, 현탁제(suspending agent)[예를 들어, 검(gum), 잔탄(zanthan), 섬유소(cellulosics)와 당분], 습윤제(예를 들어, 소르비톨), 가용화제(예를 들어, 에탄올, 물, PEG와 프로필렌 글리콜), 계면활성제[예를 들어, 소듐 라우릴 설페이트, 스팬(Span), 트윈(Tween), 및 세틸 피리딘], 방부제와 항산화제(예를 들어, 파라벤, 비타민 E와 C, 아스코르브산과 천연 추출물), 항응결제(anti-caking agent), 코팅제, 및 킬레이팅제(chelating agent)(예를 들어, EDTA)와 같은 운반체를 포함한다. 또한 당업자에게 공지된 수중유 에멀션(oil-in-water emulsion), 유중수 에멀션(water-in-oil emulsion), 용매에 기초한 제제(solvent-based formulation) 및 수성 겔(aqueous gel)은, 본 발명의 조성물의 전달을 위한 운반체로 사용될 수 있다.

인간에게 본 조성물을 투여하기 위해 치료와 예방적으로 유효한 복용량(effective doses)을 결정하기 위한 방법은 공지된 것이다. 예를 들어, 이러한 유효량은 동물 연구의 결과로부터 쉽게 결정될 수 있다.

한 가지 실시예에서, 본 조성물은 식작용의 억제인자가 요구될 때 피부 표면의 cm²를 기초로 약 2l/cm²내지 약 200l/cm²의 식작용-변경제가 존재하도록 피부 표면에 도포된다. 화합물 I 또는 이것의 유사체와 같은 트롬빈(thrombin)과 트립신 억제인자를 사용할 때, 제제가 합성적으로 유도되거나 또는 천연적으로 유도되든지 간에, 이러한 활성 화합물은 조성물의 중량/부피에 대해 약 0.0001% 내지 약 15%의 양으로 존재한다. 다른 실시예에서, 활성 화합물은 조성물의 약 0.0005% 내지 약 5%의 양으로 존재한다. 바람직하게, 이것은 조성물의 약 0.001 내지 약 1%의 양으로 존재한다.

다른 실시예에서, 식물 또는 식물 소스(botanical source)에서 직접 제조되는 액체 유도체(liquid derivatives)와 천연 추출물은, 약 1 내지 약 99%의 농도(w/v), 바람직하게는 약 75 내지 약 95%의 농도로 본 조성물에 사용된다. 또 다른 실시예에서, 천연 추출물과 STI와 같은 천연적으로 유도된 프로테아제 억제인자 부분은 조성물의 약 0.01% 내지 약 20%, 바람직하게는 약 1% 내지 약 10%의 농도 범위를 갖는다.

또한 추가적으로 본 발명은, 포유 동물에게 본 물질 조성물을 투여하기 위한 제조된 물품(an article of manufacture)을 제공하는데, 여기에 실시 가능하게(즉, 전달 가능하게) 부착된 조성물을 갖는 고체 전달 운반체(solid delivery vehicle) 를 포함한다. 단단한 전달 운반체는, 이것이 원래 전달 운반체로 사용되도록 의도되었는가에 관계없이, 신체와 임시적 또는 영구적으로 접촉되도록 제작된 어떠한 장치도 될 수 있다. 제한하지 않고 본 제조 물품의 실시예는, 상처를 치료하기 위한 코팅된 밴드(coated bandage) 또는 다른 상처 드레싱(dressing), 조직 성장을 억제 또는 촉진하기 위한 코팅된 형체 임플랜트(coated bodily implant)(코팅된 내부 골격을 갖는 임플랜트를 포함), 및 협착증(restenosis)을 방지하기 위한 코팅된 벌룬 카테테르(balloon catheter)와 스텐트(stent)를 포함한다.

마지막으로, 본 발명은 포유 동물에게 치료, 예방 또는 화장용 화합물을 투여하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 포유 동물에게 (a) 화합물과 (b) 약용 또는 화장용 운반체 및 특히 화합물의 흡수(uptake)가 요구되는 세포 내에서 식작용을 증가시키기에 충분한 양으로 식작용을 증가시키는, 약제(agent)를 포함하는 물질의 조성물을 포유 동물에 투여하는 단계를 포함하는데, 여기서 상기 조성물은 화합물의 투여 전 및/또는 화합물의 투여와 동시에 투여된다.

예를 들어, 상기 약학적 화합물은 폴리펩티드, 단백질, 또는 핵산 분자가 될 수 있다. 한 가지 실시예에서, 약학적 화합물과 조성물은 미세한 동공의 생분해성 비드(microscopic porous biodegradable bead)를 통해 함께 투여되는데, 이것은 다음에 적절한 세포에 의한 식작용을 통해 주입된 후 약학적 화합물을 방출한다.

본 발명은 다음에 오는 실시예에 의해 더욱 잘 이해될 것이지만, 당업자는 실시예가 이 다음에 오는 청구항에서 보다 완전하게 설명되기 때문에 본 발명을 예시할 뿐이라는 것을 쉽게 알 것이다. 게다가, 여러 문헌들이 이 출원을 통해 인용된다. 따라서 이러한 문헌들의 개시는, 본 발명이 속하는 기술 상태를 보다 완전하게 설명하기 위해 참조에 의해 상기 출원으로 병합된다.

실시예 1

SLIGRL, STI 및 화합물 I는 각질세포의 식작용에 영향을 준다

식작용에서 PAR-2 경로의 역할을 연구하기 위하여 여러 가지 시험관 내의 모델 시스템을 사용하였다. 사용된 한 시스템은 원시 인간 각질세포(primary human keratinocyte) 또는 인간 각질세포 세포 라인을 포함한다. 여기서 및 다음의 많은 실시예에서, 세포는 다른 시간 동안(1시간 내지 3일) 시험 화합물로 처리되었고, 샘플은 형광 마이크로스피어로 2 시간 동안 배양되었다. 상기 세포에 의해 흡수된 비드는 형광현미경 검사법을 사용하여 촬영되었다.

본 실시예에서, 인간의 원시 각질세포 또는 인간 각질세포 세포 라인 HaCaT는 각질세포 식작용에 대한 PAR-2 조절자의 효과를 연구하기 위한 시험관 모델 시스템으로 사용되었다. 사용된 인간 원시 각질세포는 클로네틱(산디에고,CA)으로부터 상업적으로 이용가능하다. 세포는 2 챔버/슬라이드와 60,000 세포/챔버로 챔버 슬라이드에서 배양되었다. 세포는 화합물 I(1), SLIGRL(10), 또는 운반체[기보-BRL(가이델스버그, MD) 인산염-완충 살린("PBS")]로 2일 또는 3일 동안 매일 한 번씩 처리되었다. 시험 화합물에서 2일 또는 3일 노출한 후에, 세포는 나일-레드(Nile-red) 또는 FITC 형광 마이크로스피어 (직경 1㎛, 50 마이크로스피어/세포)로 37℃에서 2 시간동안 노출시킨다. 마이크로스피어는 분자 프로브(molecular probes)(유진, OR)로부터 유래되었고, 제조자의 지시에 따라 공정이 진행되었다. 상기 처리 후에, 세포는 15% 태아의 보바인 혈청("FBS", 기보-BRL에서 유래)에서 배양되었고, 37℃에서 15분 동안 PBS로 세척된다. 이 때, 챔버는 슬라이드로부터 분리되었고, 상기 슬라이드는 글리세롤과 커버슬립으로 덮어졌다. 형광현미경 검사법은 제이스 막시오벌트 35 또는 닉콘 옵티폿-2 현미경을 사용해서 수행되었다.

도 1은 운반체(대조구) 인간 원시 각질세포의 3 가지 이미지를 보여준다. 화합물 I 또는 SLIGRL로 2일 동안 처리된다. 이 도면에서 보듯이 마이크로스피어는 대조구의 각질세포에 의해 흡수되었고, 세포의 핵 주위에 분배되었다. 마이크로스피어는 또한 세포 주위에서 발견되었는데, 아마도 이는 그들이 세포에서 분비된 세포외-매트릭스 구성 성분에 비특이적으로 부착되었기 때문이다. 흡수되는 마이크로스피어의 양은 상기 처리에 따라 변화되었다. PAR-2 활성 억제인자인 화합물 I의 처리는 흡수되는 마이크로스피어의 양을 급격히 감소시킨다. PAR-2-활성 펩티드인 SLIGRL의 처리는 흡수되는 마이크로스피어 수를 현저히 증가시키는 결과를 가져온다.

(도 2에 나타난 바와 같이) 원시 각질세포의 사용 대신에 인간 각질세포 세포 라인 HaCaT가 사용되었을 때도 동일한 결과가 얻어졌다. SLIGRL, STI 및 화합물 I이 각질세포 식작용에 대한 그들의 효과에 대해 시험되었다.이들 실험에서 마이크로스피어의 세포외 축적은 씻어질 수 있다. 오직 볼 수 있는 미립자는 그들의 핵 주위에 축적된 각질세포에 의해 흡수된 마이크로스피어이다. PAR-2 경로에 영향을 줄 수 있는 세린 프로테아제 억제인자인 콩 트립신 억제인자("STI")는 이 실험에서 화합물 I로서 마소구체의 흡수를 감소시키는 것을 보여준다. 한편, SLIGRL 처리는 마이크로스피어 흡수의 증가를 가져온다. 이들 각각의 실험은 적어도 3회 반복되었다. 이들 실험은 처음으로 PAR-2-매개 식작용 능력을 가지는 각질세포를 보여준다. 이러한 실험들은 또한 각질세포 식작용의 단계를 조절할 수 있는 PAR-2 경로를 조절하는 화합물을 나타낸다.

이러한 실험이 PAR-2를 발현하지 않는 멜라노사이트를 이용하여 반복되었을 때, SLIGRL은 마이크로스피어 흡수 유발 효과를 주지 못했다. 멜라노사이트는 상기 어떤 조건하에서도 비드를 흡수하지 않았다. SLIGRL이 PAR-2만을 활성화시키고 멜라노사이트는 PAR-2를 발현하지 않기 때문에, 이들 세포는 SLIGRL 신호에 응답하지 않고 식작용에 영향을 받을 수 없다.

실시예 2

SLIGRL과 화합물 I는 섬유아세포 식작용에 영향을 미친다

실시예 1에서 설명된 실험은, 섬유아세포 세포 라인 92-3T3 (MD, Rockville에 위치한 ATCC로부터 얻어진)을 이용하여 반복되었다. 섬유아세포들이 식작용 능력을 가지고 있는지는 알려지지 않았다. 정말로, 작은 비드 흡수만이 처리되지 않은 섬유아세포들에서 관찰되었다. 그러나, SLIGRL-처리된 섬유아세포들은 흡수 비드의 수가 증가했다(도 3). 섬유아세포는 체내에서 식작용을 수행하지 않기 때문에, SLIGRL-유도된 섬유아세포 식작용은 각질세포의 식작용과 양적으로 달랐다. 이 실험은 처음으로, 섬유아세포가 유도 PAR-2 식작용 능력을 가지고 있음을 보여준다. 환언하면, 이 실험은 PAR-2 경로를 조절할 수 있는 화합물은 섬유아세포 식작용 수준을 조절할 수 있다는 것을 입증한다.

실시예 3

SLIGRL, STI 및 화합물 I는 마크로파지 식작용에 영향을 준다

실시예 1에서 설명된 실험이 식작용 특징을 복막의 마크로파지와 공유하는 마크로파지 셀 라인 IC-21(ATCC에서 얻어진)을 이용하여 반복되었다. 각질세포와 섬유아세포에서 나타난 바와 같이, "전문 식작용" 세포인 이들 마크로파지에 의해 흡수되는 마이크로스피어의 수를 화합물 I과 STI는 감소시켰고, SLIGRL은 증가시켰다.

식작용 수준의 양을 더욱 잘 표시하기 위해, 분자 프로브(유진, 오르곤)인 "비르렌트^TM식작용 분석기"가 IC-21 세포 라인을 위한 세포 배양 조건의 변형을 갖는 다음의 제조자의 지시에 따라 사용되었다. 이 장치는 형광-표지된 E-Coli K-12 입자를 사용하고, 식작용 기능에 미치는 약 또는 다른 환경적 요인의 영향 정도를 측정하기 위해 디자인된 것이다. 마크로파지는 100nM의 화합물 I, 0.5의 SLIGRL, 또는 0.1mg/ml의 STI, PBS안에 용해된 모든 것으로 밤새 처리되었다. 이 장치에 의해 측정된 바와 같은, 처리된 마크로파지의 형광 E. Coli를 흡수하는 능력이 표 1에 나타난다. 이 실험은 3회 반복되었다. 표 1은 한 실험의 데이터를 예시한 것이다.

본 실험은 마크로파지 식작용이 PAR-2 경로 모듈레이터에 의해 조절될 수 있다는 것을 입증한다. 본 실험은 또한 합성 화합물 및 천연적으로 유도된 화합물이 모두 PAR-2 경로를 통해 식작용을 모듈레이트할 수 있다는 것을 나타낸다.

실시예 4

PAR-2 신호와 마크로파지 식작용의 투약-반응 관계

마크로파지-식작용의 분석의 양적 특성을 증명하기 위해, 투약-반응 실험(dose-response experiment)이 수행되었다. 마크로파지는 0, 0.01, 0.1 및 1 mg/ml의 STI로 처리되었고, 실험은 실시예 3에 기술된 바와 같이 수행되었다. 도 4A에 도시된 바와 같이, STI 농도가 증가함에 따라 식작용이 감소되는 투약-반응이 관찰되었다. SLIGRL 처리가 식작용을 증가시키는 결과를 가져오는 반면(도 4B), 0.01, 0.1 및 1 nM의 화합물 I처리는 유사한 결과가 얻어졌다. 각각의 실험은 3회 반복되었다. 이 실험은 PAR-2-모듈레이팅 화합물의 식작용 효과가 투약-반응적이고 양적으로 잴 수 있다는 것을 입증한다.

실시예 5

PAR-2 신호와 각질세포 식작용 사이의 투약-반응 관계

인간 케라틴노사이트는 실시예 1에 개시된 동일한 방식으로 2일 동안 0, 5 및 10 ㎛로 SLIGRL, PAR-2 펩티드 활성자 및 길항제의 농도를 증가시키면서 처리되었다. SLIGRL의 농도 증가는 식작용의 증가를 가져왔다. 인간 각질세포는 또한 화합물 I 및 STI로 농도를 증가시키면서 2일 동안 처리되었다. 화합물 I(1pM 내지 1) 또는 STI(0.01 내지 1 mg/ml)의 농도 증가에 따른 처리는 식작용의 투약-의존성 감소 결과를 가져온다(표 2 참조).

각질세포 내부의 형광성 비드의 이미지 분석은, 이 시스템에서 식작용 효과의 양을 측정하는 대안으로 사용 되었다. 엠파이어 이매진 데이터베이스 버전 1.1 이 게이트웨이 2000 P5-100 컴퓨터 (미디어 사이버네틱스, 실버 스프링, MD)에서 이미지를 잡기 위해 사용되었다. 이미지 프로 플러스 버전 1.3은 측정에 사용되었고, 마이크로소프트 엑셀 버전 5.0은 데이터 프로세싱에 사용되었다. 이 각질세포-마이크로스피어 시스템에서 얻어진 데이터가 마크로파지/E. Coli 시스템에서 얻은 데이터와 완전히 일치하였다.

실시예 6

화합물 I, SLIGRL 및 STI는 각질세포에 의한 색소 획득에 영향을 준다

이 실시예는 체외 멜라닌 또는 멜라노솜을 획득하는 각질세포의 능력을 테스트하는 것으로서, 즉 피부에서 멜라노솜이 흡수되는 단순화된 시스템의 기능을 테스트 하는 것이다. 각질세포는 이미 기술된 바와 같이 챔버 슬라이드 글라스에서 배양되었고, SLIGRL, 화합물 I 또는 STI로 이틀 동안 처리되었다. 그 때, 멜라닌 가루(시그마, ST. 루이스, MO)가 10㎍/ml로 살균한 PBS와 혼합되고, 두 시간 동안 (1:10 희석) 배양 매체가 첨가되었다. 그 후 세포는 PBS로 씻어내고 폰타나-마손("F&M")으로 염색되었다. F&M은 질산은-환원 분자를 염색해서 각질세포 내부의 멜라닌을 확인한다. 도 5A에 도시된 바와 같이, 비처리된 각질세포는 배양 매체로부터 멜라닌을 흡수할 수 있도록 하고, 흡수된 멜라닌을 그들의 핵 주위에 위치될 수 있도록 한다. 그러므로, 이 시스템은 그러므로, 멜라노솜 전이와 체내에 멜라닌 분포를 모방할 수 있고, 이것은 피부 각질세포가 그들의 핵 위의 UV-보호 캡으로서 멜라닌을 사용하는 것과 같다. 이 캡핑 형태는 또한 실시예 1 및 도 1과 2에서 입증된대로 흡수된 마이크로스피어와 함께 관찰된다. 도 5A는 또한 PAR-2 경로를 작동시키는 SLIGRL 처리가 멜라닌의 내면화(internalization) 및 이것을 핵 주위에 있도록 하는 것을 현저하게 증가시키는 것을 보여준다. 한편 화합물 I과 STI는 각질세포에 의한 멜라닌 흡수를 현저하게 감소시킨다. 이 실시예는 합성 및 자연적인 기원 모두의 PAR-2-모듈레이팅제들이 상피 세포내의 색소 분포에 영향을 줄 수 있다는 것을 입증한다. 동일한 결과가 에스.올로 등의 J. I. D. 100:55-64(1993)(도 5B)에 도시된 바와 같이 분리된 멜라노솜을 이용해서도 관찰되었다.

실시예 7

세포-세포 접촉이 화합물 I의 멜라노사이트에서 각질세포로의 색소 전이 효과에 요구된다.

PAR-2가 멜라노사이트가 아닌 각질세포에서 발현된 후에, 각질세포-멜라노사이트 접촉의 가능한 요구가 각질세포에 의한 멜라노솜 식작용에 대한 화합물 I 및 SLIGRL 효과가 시험되었다. 일차 멜라노사이트 배양물(산 디에고에 있는 클로네틱스로부터 상업적으로 구입가능한)은 각질세포와 멜라노사이트 사이의 접촉이 없이 공동-배양된 등가-단일층을 만들어내기 위해 상피의 등가물(MA, 애쉬랜드에 위치한 멧택의 상피) 하에서 배양되었다. 이들 공동-배양은 맬라노덤 등가물(멧텍의)과 비교되었고, 여기서 멜라노사이트는 등가물의 기초층에 위치한다. 배양은 화합물 I, PAR-2 길항제 TFLLRNPNDK 및 PAR-2 길항제로 처리되었다. 표 3에 개시된 대로 각질세포는 "K", 멜라노사이트는 "M", 그리고 각질세포-멜라노사이트 접촉의 결여는 "no K-M cont"로 표시한다. 표 3에서 나타나는 바와 같이, 멜라노솜 전이 무효과가 착색 수준을 측정할 때에 이들 약제로 처리되는 등가 - 단일층 공동 - 배양물(각질세포/멜라노사이트 접촉이 없는)에서 관찰된다. 멜라노사이트 - 함유 등가물에서 화합물 I은 감소되었고 SLIGRL은 멜라노솜 전이에 영향을 미침으로써 착색을 유도했다. 또한 동일한 결과가 각질세포/멜라노사이트 접촉을 갖는 단일층 각질세포/멜라노사이트 공동 - 배양물에서 관찰되었다. 이들 결과는 각질세포 - 멜라노사이트 접촉이 멜라노솜 식작용에 대한 PAR-2 효과에 요구되는 것을 입증한다.

실시예 8

식작용에 대한 화합물 I과 SLIGRL의 효과 타이밍

인간 각질세포는 1시간 내지 2일 범위의 기간 동안 화합물 I또는 SLIGRL에서 처리되었다. 처리 기간의 끝에서, 세포는 실시예 1에 개시된 바와 같이 마이크로스피어로 처리되었다. 표 4는 이들 화합물이 식작용에 영향을 미치기 위해 요구되는 시간을 보여준다. 플러스 사인은 식작용에 효과가 있음을 나타내고, 마이너스 사인은 식작용에 효과가 없음을 나타내며, 플러스/마이너스 사인은 식작용에 한계적 효과를 나타낸다. 측정된 효과는 화합물 I에 대해 감소되었고 SLIGRL에 대해 증가되었다. 이 실험은 다음의 활성화 또는 PAR-2 신호 경로의 억제가 각질세포의 식작용 능력을 변경시키기 위해 8시간 이상 요구되는 것을 증명한다. 이것은 존재하는 관련 단백질의 제거, 또는 단백질의 재배열(세포체질 성분의 재구성에서 발생되는)을 하기 위해 교체 시간이 요구될 때, PAR-2 신호는 새로운 단백질 합성, 단백질 합성에서 환원의 결과가 되는 것을 의미한다.

실시예 9

화합물 I, STI 및 SLIGRL은 ICAM-1 세포내 발현 및 배치에 영향을 준다

세포간 부착 분자-1(ICAM-1)은, 세포-세포간 부착, 세포 막 래플링(raffling) 및 식작용과 관련되는 유도할 수 있는 세포-표면 당단백질이다. 따라서, ICAM-1에 대해 PAR-2 모듈레이션 효과가 시험되었다. 각질세포는 설명한 바와 같이 챔버 슬라이드에서 성장되었고, 상술한 대로 SLIGRL, 화합물 I 및 STI로 처리되었으며, 그 후에 표준 과정을 이용하여 ICAM-1에 대해 면역형광 염색되었다. 보통 당나귀 시럽(donkey serum), (1:5로 희석하여 사용), 은 잭슨 면역조사 연구소(웨스트그로브, PA)에서 얻어졌다. 폴리클로날 염소(polyclonal goat)의 항-인간 ICAM-1 항체(1:200으로 희석하여 사용), 은 R&D 시스템(미네아폴리스, MN)에서 얻어졌고, FITC-접합된 당나귀 항-염소 항체는 잭슨 면역조사 연구소에서 얻어졌다. 도 6A에 도시된 바와 같이, ICAM-1의 세포내 배치는 PAR-2 경로에 의해 모듈레이트 될 수 있다. 비처리 각질세포에서, ICAM-1은 핵 막에 약간 착색된, 원형질 막에 주로 배치되었다. 화합물 I 또는 STI 처리 후에는, 염색이 원형질 막에서 관찰되었고, 핵 막에서 더욱 많이 관찰되었다. SLIGRL 처리는 반대 효과를 가져오는데, 원형질 막 착색은 더욱 증가되고 확산되며, 핵 막 착색은 감소되는 결과를 가져온다.

면역-침전 및 웨스턴 블랏팅 실험이 처리된 각질세포의 ICAM-1 단백질 수준을 평가하기 위해 공지된 방법에 따라 수행되었다. 도 6B에 나타난 바와 같이, SLIGRL은 이들 세포에서 ICAM-1 발현 수준을 증가시켰고, 반면 화합물 I은 ICAM-1 발현 수준을 감소시켰다.

실시예 10

STI와 화합물 I는 화학주성 세포 이동(chemotactic cell migration)에 영향을 미친다

ICAM-1이 세포 이동에 포함된 후에, 화학주성 펩티드로의 세포 이동이 화합물 I 및 STI로 처리된 세포에서 연구되었다. 인간 PMN 세포는 표준 기술을 이용하여 보이덴 챔버의 한 쪽에 위치시키고, 화학주성 펩티드(FMLP)는 다른 챔버에 위치시켰다. 세포는 두 번째 챔버로 이동되었으며, 필드 당 이동 세포의 수와 이동 거리가 측정되었다. 본 실험은 다음의 5 또는 0.5 mg/ml STI, 1 또는 0.1화합물 I, 완충 운반체, 및 화학주성 펩티드 포함과 비포함 중 어느 하나로 PMN 세포를 선처리하여 반복 실험을 하였다. 비처리 대조구로서, 같은 거리를 이동하는 필드 당세포의 수가 측정되었다. 이들 데이터가 표 5에 요약된다. 펩티드가 없고 처리되지 않은 상태에서 평균적으로 필드 당 19개의 세포가 80 마이크론의 거리를 이동하였다. 화학주성 펩티드의 첨가는 필드 당 41개의 세포가 115 마이크론 거리를 이동하는 결과를 가져왔다. 두 화합물 모두 상기 펩티드로 세포가 이동하는 것을 완전히 억제한다. 즉, 어떤 세포도(또는 5/필드보다 작은) 115 마이크론에서 확인되지 않았다. 이것은 이들 억제인자가 식작용 뿐만아니라 세포 이동에도 영향을 미치는 것을 보여준다. PMN 이동을 억제하는 능력은 항-염증성 화합물의 조성에 중요하다.

실시예 11

SLIGRL과 STI는 인간 피부 착색에 영향을 미친다

백인 얼굴 피부 샘플이 면역-억제된 쥐에 표준 기술을 사용하여 이식되었다. 약 6주 후에, 다른 쥐들에 이식된 동일 개체의 그래프트가 운반체(에탄올:프로필렌글리콜 70:30), 또는 50SLIGRL로 처리되었다. 처리는 주당 5일 동안 수행되었다. SLIGRL-처리된 그래프트의 짙어짐이 처리의 마지막 주 동안에 시각적으로 관찰되었다(도 7A 참조). 66일 째, 동물을 죽인 후에 그들의 피부가 조직적으로 분석되었다. F&M-착색 단편은 도 7B에 나타난 바와 같이, SLIGRL-처리된 그래프트에서 멜라닌이 증가되는 것을 나타내었다. 이 실험은 인간의 피부가 태양 없이 그을리도록 유도하기 위해 SLIGRL이 사용될 수 있음을 입증한다.

같은 실험이 흑인 가슴 피부 샘플을 면역-억제된 쥐에 이식하여 반복되었다. 같은 개체의 그래프트가 운반체(GDL 리포좀) 또는 1% STI로 처리되었다. GDL 리포좀은 니에니엑 등에서 개시된 대로 준비되었는데, 다음의 변화는 제어한다: 비-이온성 리포좀 형성은 37.5:12.5:33.3:16.7의 비율로 글리세롤 디라우레이트(에뮬신트 GDL, ISP 반 Dyk)/콜레스테롤 (크로다)/폴리옥시에틸렌-10-스테아릴 에테르(Brij76, ICI)/폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르를 포함하였다. 0.05 M, pH 7.4인 헤페스 완충제(가이셜스버그, MD의 기보-BRL)가 리포좀 제조시 액상으로서 사용되었다. 도 7C는 이들 그래프트에서 F&M-착색 피부 단편을 보여준다. 이 도는 인간 피부 내의 착색을 감소시키는 STI의 능력을 명백히 보여준다.

실시예 12

식작용과 이동에 대한 PAR-2 효과는 세포 형태의 변화와 관련된다

식작용과 세포 이동은 모두 세포 형태의 변화를 포함한다. 그러므로, 세포 복족(podia)에 대한 PAR-2 경로 시약의 효과가 스캔 전자 현미경 검사법을 이용하여 연구되었다. 각질세포는 화합물 I("SH00230"과 동일), SLIGRL 및 완충 운반체로 2일 동안 처리되었고, 그 후에 표준 기술을 이용하여 SEM 과정이 처리되었다. 도 8에서 나타난 바와 같이, 세포 복족 형태의 극적인 변화가 관찰된다. 운반체-처리된 대조구에 비해, 화합물 I-처리된 세포는 대단히 더 짧은 복족을 가진다. 즉, 세포의 "핑거(fingers)"는 더 짧아지고 기형이 된다. 따라서, 그들은 대조구 세포뿐만 아니라 물질을 잡을 수 없다. SLIGRL-처리된 샘플은 반대 효과를 입증하였다. 그들의 복족은 수가 증가되었고, 어느정도 더 길어지며, 더욱 얇아졌다. 즉, 이들 세포는 입자간의 상호작용을 만들어낼 더 큰 가능성을 가진다. 도 8의 이들 SEM 그림을 비교하여 보면, SLIGRL-처리된 세포는 입자간 상호작용의 능력이 더 크고, 반면에 화합물 I-처리된 세포는 이러한 작업에 덜 적절함이 명백하다.

실시예 13

PAR-2는 세포체질 조직화에 영향을 미친다

도 8에서 나타난 세포 형태의 변형은 세포체질 성분의 재조직화를 요구한다. 그러므로, PAR-2 모듈레이션에 따른 F-액틴 필라멘트의 조직화가 시험되었다.각질 세포는 실시예 1에서 설명된 바와 같이, 화합물 I(10nM), STI(0.1 mg/ml), 또는 SLIGRL(5㎛)로 처리되었고, 표준 기술을 이용하여 F-액틴을 착색하였다. 도 9는 이들 처리 후에 액틴 필라멘트 조직화의 극적인 변화를 보여준다. SLIGRL 처리는 세포의 움직임과 식작용 조절에 중요한 부분인 세포 피질(cortex) 주위의 액틴 중합 반응을 유도했다. 반대로, STI와 화합물 I은 세포 피질의 정돈된 조직화를 감소시켜서, 그들의 움직임과 복족을 조절하는 세포의 능력을 감소시켰다.

실시에 14

ICAM-1 모듈레이션은 각질세포 식작용에 영향을 미친다

실시예 1에 기술된 바와 같이, 각질세포는 형광 마이크로스피어(즉, 비드)에 노출되었다. 이러한 세포는 쥐의 항-인간 ICAM-1 항체(R&D 시스템) 50㎍/ml로 16시간 동안 선처리 되었고, 그 후 배양하기 전에 4시간 동안 상기 비드로 부스트되었다(boosted). 도 10에 나타난 바와 같이, 각질세포에서 표면 ICAM-1 분자를 막는 것은 비드 흡수의 감소를 가져온다. 그러므로 이 실험은 ICAM-1과 각질세포 식작용사이의 연결을 이루는 것이다.

실시예 15

STI/리포좀 형성은 인간의 노화 반점을 엷게할 수 있다

개인의 손등에 있는 세 개의 노화 반점을 8주 동안, 하루에 두 번, 다음과 같이 처리했다. 기부의 노화 반점은 20 mg/ml의 리보솜을 포함하는 플라시보로 처리되었다. 중간 노화 반점은 처리되지 않았다. 말단의 노화 반점은 리보솜(20mg/ml)에 있는 STI, 1%로 처리되었다. GDL 리보솜은 니에미엑 등에서 개시된 대로 준비되었는데, 다음의 변화는 제외되었다. 비-이온성 리포좀의 형성은 37.5:12.5:33.3:16.7의 비율로 글리세롤 디라우레이트(에뮬신트 GDL, ISP 반 Dyk)/콜레스테롤(크로다)/폴리옥시에틸렌-10-스테아릴 에트르(Brij76, ICI)/폴옥시에틸렌-9-라우릴 에테르를 포함하였다. 0.05M, pH 7.4인 헤페tm 완충제(가이델스버그, MD의 기보-BRL)는 리포좀 제조시에 액상으로 사용되었다. UV와 가시 광선 디지털 사진을 처리의 0, 4 및 8주 마다 찍었다. L^*(밝음 정도) 값은 아도브 포토샵을 이용한 이미지로부터 계산되었다.

도 11에서 보는 바와 같이, STI로 처리된 노화 반점은 8주 처리 후에 보다 엷어진다. 도 11은 4 사진의 합성물이다. 왼쪽 페널은 8주 처리 전(상) 및 후(하)의 가시광선 사진이다. 이런 방향성에서, 기부의 노화 반점은 플라시보-처리되고, 중간 노화 반점은 처리되지 않으며, 말단의 연령 점은 STI-처리된다. 오른쪽 패널은 UV-사진을 사용하여 동일 시간의 같은 손을 보여준다. UV 광선은 피부에 더 깊게 착색의 시각화를 가능하게 하는데, 이는 STI 화이트닝 효과가 표면적이 아님을 증명한다. 도 11은 STI 제제가 말단의 노화 반점을 엷게 하는 것을 명확히 보여준다. 15 L^*단위의 증가는 STI-처리된 반점에서 계산되었고, 나아가 이 처리가 노화반점을 엷게 하는 능력을 입증한다.

실시예 16

화합물 I과 유사한 식작용-감소 화합물

특정 화합물 및 약학적으로 적절한 염, 코즈탄조 등에서 개시된 것과 같이, "S₁을 조사하는 잠재 트롬빈 억제인자" 서브사이트: 헤테로사이클-활성 카르보닐 그룹에 기초를 둔 트리펩티드 전이 상태 유사형", (J. Med. Chem., 1996, vol.39, pp.3039-3043,)은 세린 프로테아제 억제인자(즉, 식작용 억제인자)로 행동하고, 다음의 구조식을 갖는다:

여기서:

A는 C₁-C₈알킬, 카르복시 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시카르보닐 C₁-C₄알킬, 패닐 C₁-C₄알킬, 치환된 페닐 C₁-C₄알킬(여기서 페닐 치환체는 C₁-C₄알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 카르복시 또는 C₁-C₄알콕시카르보닐에서 독립적으로 하나 이상 선택), 포르밀, C₁-C₄알콕시카르보닐, C₁-C₂알킬카르보닐, 페닐 C₁-C₄알콕시카르보닐, C₃-C₇사이클로알킬카르보닐, 페닐카르보닐, 치환된 페닐카르보닐(여기서 페닐 치환체는 C₁-C₄알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 카르복시 또는 C₁-C₄알콕시카르보닐에서 독립적으로 하나 이상이 선택된다), C₁-C₄알킬술포닐, C₁-C₄알콕시술포닐, 퍼플로로 C₁-C₄알킬-술포닐, 페닐술포닐, 치환된 페닐술포닐(여기서 페닐 치환체는 C₁-C₄알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 카르복시 또는 C₁-C₄알콕시카르보닐에서 독립적으로 하나 이상이 선택된다), 10-캄포르술포닐, 페닐 C₁-C₄알킬술포닐, 치환된 페닐 C₁-C₄알킬술포닐, C₁-C₄알킬술피닐, 퍼플로로 C₁-C₄알킬술피닐, 페닐술피닐, 치환된 페닐술피닐(여기서 페닐 치환체는 C₁-C₄알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 카르복시 또는 C₁-C₄알콕시카르보닐에서 독립적으로 하나 이상이 선택된다), 페닐 C₁-C₄알킬술피닐, 치환된 페닐 C₁-C₄알킬술피닐, 1-나프틸술포닐, 2-나프틸술포닐 또는 치환된 나프틸술포닐(여기서 상기 나프틸 치환체는 C₁-C₄알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, 카르복시 또는 C₁-C₄알콕시카르보닐에서 독립적으로 하나 이상이 선택된다) 1-나프틸술피닐, 2-나프틸술피닐 또는 치환된 나프틸술피닐(여기서 상기 나프틸 치환체는 C₁-C₄알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디일칼아미노, 카르복시 또는 C₁-C₄알콕시카르보닐)으로 구성된 그룹에서 선택된다.

D 또는 L 아미노산은 상기 구조식에서 도시된 구조와 같이, 카르복시 말단에서 질소로 결합되고 알라닌, 아스파라긴, 2-아제티딘카르복실산, 글리신, N-C₁-C₈알킬글리신, 프롤린, 1-아미노-1-사이클로 C₃-C₈알킬카르복실산, 티아졸리딘-4-카르복실산, 5,5-디메틸딜티아졸리딘-4-카르복실산, 옥사졸리딘-4-카르복실산, 피페콜린산, 발린, 메티오닌, 시스테인, 세린, tM레오닌, 노르루이신, 루이신, 터셔리-루이신, 이소루이신, 페닐알라닌, 1-나프트알라닌, 2-나프트알라닌, 2-티에닐알라닌, 3-티에닐알라닌, [ 1,2,3,4] -테트라하이드로이소퀴놀린-1-카르복실산과 [ 1,2,3,4] -테트라하이드로이소퀴놀린-2-카르복실산으로 구성된 그룹에서 선택되는데,

여기서 상기 아미노산의 아미노 말단은 C₁-C₄알킬, 테트라졸-5일-C₁-C₂알킬, 카르복시 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시카르보닐 C₁-C₄알킬, 페닐 C₁-C₄알킬, 치환된 패닐 C₁-C₄알킬(여기서 페닐 치환체는 C₁-C₄알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 카르복시 또는 C₁-C₄알콕시카르보닐에서 독립적으로 하나 이상이 선택된다), 1,1-디페닐 C₁-C₄알킬, 3-페닐-2-하이드록시프로피오닐, 2,2-디페닐-1-하이드록시에틸카르보닐, [1,2,3,4] -테트라하이드로이소퀴놀린-1-카르보닐, [ 1,2,3,4] -테트라하이드로이소퀴놀린-3-카르보닐, 1-메틸아미노-1-사이클로핵산카르보닐, 1-하이드록시-1-시이클로헥산카르보닐, 1-하이드록시-1-페닐아세틸, 1-사이클로핵실-1-하이드록시아세틸,3-페닐-2-하이드록시프로피오닐, 3,3-디페닐-2-하이드록시프로피오닐, 3-사이클로헥실-2-하이드록시프로피오닐, 포르밀, C₁-C₄알콕시카르보닐, C₁-C₁₂알킬카르보닐, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알킬카르보닐, 페닐 C₁-C₄알킬카르보닐, 치환된 페닐 C₁-C₄알킬카르보닐(여기서 상기 페닐 치환체는 C₁-C₄알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 카르복시 또는 C₁-C₄알콕시카르보닐에서 독립적으로 하나 이상이 선택된다), 1,1-디페닐 C₁-C₄알킬카르보닐, 치환된 1,1-디페닐 C₁-C₄알킬카르보닐 (여기서 상기 페닐 치환체는 C₁-C₄알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 카르복시 또는 C₁-C₄알콕시카르보닐에서 독립적으로 하나 이상이 선택된다), 퍼플로로 C₁-C₄알킬술포닐, C₁-C₄알킬술포닐, C₁-C₄알콕시술포닐, 페닐술포닐, 치환된 페닐술포닐(여기서 페닐 치환체는 C₁알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 카로복실 또는 C₁-C₄알콕시카르보닐에서 독립적으로 하나 이상이 선택된다). 10-캄포르술포닐, 페닐 C₁-C₄알킬술포닐, 치환된 페닐 C₁-C₄알킬술포닐, 퍼플로로 C₁-C₄알킬술포닐, C₁-C₄알킬술포닐, 페닐술피닐, 치환된 페닐술피닐(여기서 상기 페닐 치환체는 C₁-C₄알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 카르복시 또는 C₁-C₄알콕시카르보닐에서 독립적으로 하나 이상이 선택된다), 1-나프틸술포닐, 1,2-나프틸술포닐, 치환된 나프틸술포닐(여기서 나프틸 치환체는 C₁-C₄알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 카르복시 또는 C₁-C₄알콕시카르보닐에서 독립적으로 하나 이상이 선택된다), 1-나프틸술피닐, 2-나프틸술피닐 및 치환된 나프틸술피닐(여기서 상기 나프틸 치환체는 C₁-C₄알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 카르복시 또는 C₁-C₄알콕시카르보닐에서 독립적으로 하나 이상이 선택된다);

또는 폴리펩티드는 두 개의 아미노산을 포함하는데,

여기서 제 1 아미노산은 D 또는 L 아미노산이고, 식 I에서 도시된 바와 같이 질소에 탄소 말단을 경유하여 결합되고, 글리신, N-C₁-C₈알킬글리신, 알라닌, 2-아제티딘카르복실산, 프롤린, 티아졸리딘-4-카르복실산, 5,5-디메틸티아졸리딘-4-카르복실산, 옥사졸리딘-4-카르복실산, 1-아미노-1-사이클로 C₃-C₈알킬카르복실산, 3-하이드록시프롤린, 4-하이드록시프롤린, 3-(C₁-C₄알콕시) 프롤린, 4(C₁-C₄알콕시) 프롤린, 3,4-디하이드로프롤린, 2,2-디메틸-4-티아졸리딘 카르복실산, 2,2-디메틸-4-옥사졸리딘 카르복실산, 피페콜린산, 발린, 메티오닌, 시스테닌, 아스파라긴, 세린, 쓰레오닌, 루이신, 터셔리-루이신, 이소루이신, 페닐알라닌, 1-나프트알라닌, 2-나프트알라닌, 2-티에닐알라닌, 3-티에닐알라닌, [ 1,2,3,4] -테트라하이드로이소퀴놀린-1-카르복실산, 아스파라틱산-4-C₁-C₄알킬 에스테르와 글루타민산 5-C₁-C₄알킬 에스테르이고,

여기서 제 2 D 또는 L 아미노산은 상기 제 1 아미노산의 아미노 말단에 부착되어 있고, 페닐알라닌, 4-벤조일페닐알라닌, 4-카르복시페닐알라닌, 4-(카르복시C₁-C₂알킬)페닐알라닌, 치환된 페닐알라닌(여기서 상기 페닐 치환체는 C₁-C₄알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 카르복시 또는 C₁-C₄알콕시카르보닐에서 독립적으로 하나 이상이 선택된다), 3-벤조티에닐알라닌, 4-바이페닐알라닌, 호모페닐알라닌, 옥타하이드로인돌-2-카르복실산, 2-피리딜알라닌, 3-피리딜알라닌, 4-티아졸릴알라닌, 2-티에닐알라닌, 3-(3-벤조티에닐)알라닌, 3-티에닐알라닌, 트립토판, 티로신, 아스파라긴, 3-트리-C₁-C₄알킬실릴알라닌, 사이클로헥실글리신, 디페닐글리신, 페닐글리신, 메티오닌 술폭사이드, 메티오닌 술폰, 2,2-디사이클로핵실알라닌, 2-(1-나프틸알라닌), 2-(2-나프틸알라닌), 페닐 치환된 페닐알라닌(여기서 상기 치환체는 C₁-C₄알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 카르복시 또는 C₁-C₄알콕시카르보닐에서 독립적으로 하나 이상이 선택된다), 아스파라틱산, 아스파라틱산-4-C₁-C₄알킬 에스테르, 글루타민산, 글루타민산-5-C₁-C₄알킬 에스테르, 사이클로 C₃-C₈알킬알라닌, 치환된 사이클로 C₃-C₈알킬알라닌 (여기서 상기 고리 치환체는 카르복시, C₁-C₄알킬 에스테르, 시이클로 C₃-C₈알킬아닐린, 치환된 사이클로 C₃-C₈알킬알라닌(여기서 상기 고리 치환체는 카르복시, C₁-C₄알킬카르복시, C₁-C₄알콕시카르보닐 또는 아미노카르보닐), 2,2-디페닐알라닌과 모든 아미노산 유도체의 모든 알파-C₁-C₄알킬이며,

여기서 상기 제 2 아미노산의 아미노 말단은 치환되지 않거나, 포르밀, C₁-C₁₂알킬, 테트라졸-5-일 C₁-C₂알킬, 카르복시 C₁-C₈알킬, 카르보알콕시 C₁-C₄알킬, 페닐 C₁-C₄알킬, 치환된 페닐 C₁-C₄알킬(여기서 페닐 치환체는 C₁-C₄알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 카르복시 또는 C₁-C₄알콕시카르보닐에서 독립적으로 하나 이상이 선택된다), 1,1-디페닐 C₁-C₄알킬, C₁-C₆알콕시 카르보닐, 페닐 C₁-C₆알콕시 카르보닐, C₁-C₂알킬 카르보닐, 퍼플로로 C₁-C₄알킬카르보닐, C₁-C₄알킬카르보닐, 페닐 C₁-C₄알킬카르보닐, 치환된 페닐 C₁-C₄알킬카르보닐(여기서 상기 페닐 치환체는 C₁-C₄알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 카르복시 또는 C₁-C₄알콕시 카르보닐에서 독립적으로 하나 이상이 선택된다), 1,1-디페닐 C₁-C₄알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시카르보닐), 10-캄포르술포닐, 페닐 C₁-C₄알킬술포닐, 치환된 페닐 C₁-C₄알킬술포닐, C₁-C₄알킬술피닐, 퍼플로로 C₁-C₄알킬술피닐, 페닐술피닐, 치환된 페닐술피닐(여기서 페닐 치환체는 C₁-C₄알킬, 퍼플로로C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 카르복시 또는 C₁-C₄알콕시카르보닐에서 독립적으로 하나 이상이 선택된다), 페닐 C₁-C₄알킬술피닐, 치환된 페닐 C₁-C₄알킬술피닐, 1-나프틸술포닐, 2-나프틸술포닐, 치환된 나프틸술포닐(여기서 나프틸 치환체는 C₁-C₄알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 카르복시 또는 C₁-C₄알콕시카르보닐에서 독립적으로 하나 이상이 선택된다), 1-나프틸-술피닐, 2-나프틸술피닐 그리고 치환된 나프틸술피닐(여기서 나프틸 치환체는 C₁-C₄알킬, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 카르복시 또는 C₁-C₄알콕시카르보닐에서 독립적으로 하나 이상이 선택된다); R1은 하이드로겐과 알킬로 구성되는 그룹에서 선택되고; R2는 아미노 C₂-C₅알킬, 구아니디노 C₂-C₅알킬, C₁-C₄알킬구아니디노 C₂-C₅알킬, 디C₁-C₄알킬구아니디노C₂-C₅알킬, 아미디노 C₂-C₅알킬, C₁-C₄알킬아미디노 C₂-C₅알킬, 디 C₁-C₄알킬아미디노 C₂-C₅알킬, C₁-C₃알콕시 C₂-C₅알킬, 페닐, 치환된 페닐(여기서 상기 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알킬, C₁-C₃알콕시 또는 니트로에서 독립적으로 하나 이상 선택된다), 벤질, 페닐 치환 벤질(여기서 상기 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플로로C1-4알킬, C1-4알킬, C1-3알콕시 또는 니트로), 하이드록시 C₂-C₅알킬, C₁-C₅알킬아미노 C₂-C₅알킬, C₁-C₅디알킬아미노 C₂-C₅알킬, 4-아미노사이클로핵실 C₀-C₂알킬 및 C₁-C₅알킬로 구성된 그룹의 멤버로 모노 치환되고;

P는 0 또는 1;

B는 하기의 구조식으로,

여기서 n은 0-3, R₃는 H 또는 C, C₁-C₅알킬이고, B의 카르보닐 성분은 E와 연결되는데; E는 옥사졸린-2-일, 옥사졸-2-일, 티아졸-2-일, 티아졸-5-일, 티아졸-4-일, 티아졸린-2-일, 이미다졸-2-일, 4-옥소-2-퀴녹살린-2일, 2-피리딜, 3-피리딜, 벤조[ b] 티오펜-2-일, 트리아졸-4-일 트리아졸-6-일, 피라졸-2-일, 4,5,6,7-테트라하이드로벤조티아졸-2일, 나프토[ 2,1-d] 티아졸-2-일, 나프토[ 1-2-d] 티아졸-2-일 퀴녹살린-2-일, 이소퀴놀린-1-일, 이소퀴놀린-3-일, 벤조[b]프란-2-일, 피라진-2-일, 퀴나졸린-2-일, 이소티아졸-5-일, 이소티아졸-3-일, 퓨린-8-일 및 치환체가 C₁-C₄, 퍼플로로 C₁-C₄알킬, C₁-C₄알콕시, 하이드록시, 할로, 아미도, 니트로, 아미노, C₁-C₄알킬아미노, C₁-C₄디알킬아미노, 카르복실, C₁-C₄알콕시카르보닐, 하이드록시 또는 페닐 C₁-C₄알킬아미노카르보닐, 인돌-2-일, 벤족아졸-2-일, 벤지미다졸-2-일 및 벤조티아졸-2-일인 치환된 헤테로사이클로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 헤테로사이클이다.

본 출원은 본 발명의 원리를 기술했지만, 본 발명의 범위 내에서 다른 관점, 이점 및 변형은 당업자에게 명백할 것이라고 이해할 수 있을 것이다.

Claims

(a) 식작용(phagocytosis) 또는 ICAM-1 발현(expression)을 특히 증가시키는 약제의 치료적으로 효과적인 양과, (b) 약학적 또는 화장용으로 적합한 운반체(carrier)를 포함하는, 적절한 세포에서 식작용 또는 ICAM-1 발현의 증가에 의해 개선되는, 질병으로 고통받는 포유동물의 치료를 위한 물질 조성물.
(a) 식작용 또는 ICAM-1 발현을 특히 증가시키는 약제의 치료적으로 효과적인 양과, (b) 약학적으로 또는 화장용으로 적당한 운반체를 포함하는, 적절한 세포에서 식작용 또는 ICAM-1 발현의 감소에 의해 개선되는, 질병으로 고통받는 포유동물의 치료를 위한 물질 조성물.
(a) 식작용 또는 ICAM-1 발현을 특히 증가시키는 약제의 예방적으로 효과적인 양과, (b) 약학적으로 또는 화장용으로 적합한 운반체를 포함하는, 적절한 세포에서 식작용 또는 ICAM-1 발현의 증가에 의해 개선되는, 포유동물의 질병을 예방하기 위한 물질 조성물.
(a) 식작용 또는 ICAM-1 발현을 특히 감소시키는 약제의 예방적으로 효과적인 양과, (b) 약학적으로 또는 화장용으로 적합한 운반체를 포함하는, 적절한 세포에서 식작용 또는 ICAM-1 발현의 감소에 의해 개선되는, 포유동물의 질병을 예방하기 위한 물질 조성물.
제 1 항 또는 제 3 항에 있어서, PAR-2 경로를 활성화시키는 약제를 포함하는 조성물.
제 5 항에 있어서, 상기 조성물은 SLIGRL, SAIGRL, SLIGKVD 및 세린 프로테아제로 구성된 그룹에서 선택되는 약제를 포함하는 조성물.
제 6 항에 있어서, 상기 약재는 SLIGRL, 트립신(trypsin), 트롬빈(thrombin) 및 트립타아제(tryptase)로 구성되는 그룹에서 선택되는 조성물.
제 2 항 또는 제 4 항에 있어서, 상기 조성물은 PAR-2 경로를 억제하는 약재를 포함하는 조성물.
제 2 항 또는 제 4 항에 있어서, 상기 조성물은 콩 유도체(soybean derivative) 및 세린 프로테아제 억제인자(serine protease inhibitor)로 구성되는 그룹에서 선택되는 약재를 포함하는 조성물.
제 9 항에 있어서, 상기 약재는 두유, 콩 페이스트, 화합물 I, 트립신 억제인자, 트립타아제 억제인자, 트롬빈 억제인자 및 STI로 구성되는 그룹에서 선택되는 조성물.