CN1254339A - 作为光活性剂的一氢苯并卟啉衍生物的乙二醇酯 - Google Patents
作为光活性剂的一氢苯并卟啉衍生物的乙二醇酯 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1254339A CN1254339A CN98804737A CN98804737A CN1254339A CN 1254339 A CN1254339 A CN 1254339A CN 98804737 A CN98804737 A CN 98804737A CN 98804737 A CN98804737 A CN 98804737A CN 1254339 A CN1254339 A CN 1254339A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- compound
- bpd
- cell
- vinyl
- described compound
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
- C07D487/22—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
- A61K41/0071—PDT with porphyrins having exactly 20 ring atoms, i.e. based on the non-expanded tetrapyrrolic ring system, e.g. bacteriochlorin, chlorin-e6, or phthalocyanines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
光动力学治疗中有用的新化合物,它们具有如下(1)、(2)、(3)或(4)的化学结构式,及其金属化的和/或标记的和/或偶联的形式,其中,各R1为独立的C1-6烷基;各n为0—6中的一个独立整数;R2为乙烯基或其衍生物。
Description
技术领域
本发明涉及光动力学治疗(PDT)中有用的化合物及有关的应用。特别涉及一氢苯并卟啉的乙二醇酯。
背景技术
光动力学治疗(PDT)一般涉及给予能吸收光(通常是可见光，但也可是近紫外光)的化合物，然后辐照受治疗者需产生毒性或抑制效应的部位。PDT起初是用血卟啉和相关化合物治疗肿瘤中得以发展，因为这些化合物看来能“寻靶”到含有快速分裂细胞的部位。然后可用血卟啉所能吸收的光辐照肿瘤，并导致破坏周围组织。此后证明PDT可用于治疗动脉粥样硬化斑块、再狭窄、血液感染、类风湿性关节炎、牛皮癣和用于治疗眼部疾病，不一定局限于肿瘤。
美国专利No.5,171,749和授予相关申请的专利，美国专利No.5,283,255、5,399,583、4,883,790、4,920,143和5,095,030(其内容均纳入本文作为参考)描述和要求保护一类用于PDT中的光活性化合物，称作一氢苯并卟啉，即“BPD”。这类化合物是这样得到的：将一或二取代炔与原卟啉-IX进行Diels-Alder反应，所得化合物可进一步异构化、还原和/或衍生得到一大类BPD。如这些专利中所述，这类化合物中特别有用的亚类来自C环和D环上的2-羧乙基侧链的酯基的水解或部分水解。作为在Diels-Alder反应中保护这些基团的酯化，导致产生含2-烷酯基乙基的初产物。人们发现，可容易地进行这些酯的快速水解，而留下了实质上完全不水解的与得自二烷酯基炔的Diels-Alder产物有关的烷酯基。这导致4种化合物：BPD-MA、BPD-MB。BPD-DA和BPD-DB，如图1所示；此图取自美国专利No.5,171,749。在此图中，R1和R2为烷酯基，通常为甲酯基或乙酯基，R为C1-6烷基。
已发现，BPD-MA具有作PDT的特别有用的性质，正处于临床开发中。然而，如上所述，仍有必要寻找其特殊形式的光活性剂，它们能为采用PDT的各种适应症扩展成员。本发明提供在C环和D环上含有羧基烷基取代基的乙二醇酯的化合物。这些化合物具有的药物动力学性能在采用PDT的某些情况下是有利的。
发明的公开内容
本发明的化合物对光动力学治疗和在采用光活性化合物的有关方法学上给应用的化合物家族增添了有用的新成员。这些分子中乙二醇酯的存在所提供的特征是允许扩大使用这些光活性化合物的病症范围并使治疗有好的转机。
因此，一方面，本发明涉及下式所示化合物及其金属化的和/或标记的和/或偶联的形式
其中，R1为C1-6烷基，较佳为甲基，n为整数0-6，较佳为2，R2为乙烯基或其衍生物，较佳为乙烯基。
本发明还涉及下式所示化合物及其金属化的和/或标记的和/或偶联的形式其中，R1、n和R2定义如上。这些类似物分别得自原卟啉III和原卟啉XIII，其方式类似于式1和式2化合物得自原卟啉IX的方式。本发明还包括式1-4各种形式的异构体，它们来自未重排Diels-Alser缩合产物(即1，4-二烯)，如美国专利No.4,883,790所述，其内容纳入本文作为参考。
另一方面，本发明涉及用式1、2、3或4化合物或其1，4-二烯异构体或其混合物进行诊断和治疗的方法。
附图的简单说明
图1表示现有技术的化合物BPD-MA、BPD-MB、BPD-DA和BPD-DB。
图2表示L1210细胞摄取B-EA6的动力学。
图3表示L1210细胞释放B-EA6的动力学。
图4为B-EA6在体内的药物动力学图示。
图5为正常脾细胞和L1210细胞摄取B-EA6的动力学比较。
图6表示用B-EA6对小鼠作PDT的时程(与用BPD-MA和BPD-MB治疗的小鼠进行比较)。
图7显示B-EA6对小鼠微血管的效应。
图8为BPD-MA和B-EA6的血浆谱比较。
图9A和9B显示用A-EA6在L1210细胞和树突细胞中作光动力学治疗的细胞毒效应(与BPD-MA比较)。
图10表示A-EA6和BPD-MA在减少MHCI受体的表面表达上的效应比较。
图11表示用A-EA6和BPD-MA对HL60细胞中应激和细胞分裂途径激酶的光动力学治疗效应。
图12表示用A-EA6和BPD-MA对HL60细胞中蛋白酶类(caspase)激活的PDT效应比较。
图13表示用A-EA6和BPD-MA对HL60细胞中DNA片段化的PDT效应比较。
实施本发明的模式
本发明的化合物与上面引用的BPD专利中公开的化合物有关，但区别在于它们在C环和D环的取代基中包含乙二醇酯。这些化合物可通过苯并卟啉C环和D环中烷酯基烷基或烷酯基替代基的简单水解和所得羧基的再酯化来制备，或直接通过酯基转移而得到。
应注意到化合物1和2是上面所引美国专利中描述的一族中的个别种类，通过包括与原卟啉IX的Diels-Alder反应的过程而得到。化合物3和4是以完全类似的方式但以原卟啉III或原卟啉XIII为diels-Alder反应的基质而制成的。由于原卟啉IX就A环和B环而言不是对称的，因此根据Diels-Alder加成发生在A环还是B环上而有两种可能的产物。另一方面，原卟啉III和XIII就A环和B环而言是对称的，因此，不管加成的位置如何，都只有一种产物。
本发明的化合物中，R2较佳为乙烯基，但也可为其衍生物。通过加成或氧化，A环或B环上的乙烯基易衍生为其它实施例的R2基团。加成或氧化产物可被进一步取代，如果所加的取代基起可离去基团的作用，例如，-Br可被-OH、-OR″、-NH2、-NHR″或-NR2″等取代，其中R″是烃基。例如，所加的取代基之一可以是氢，其余可以是卤素、羟基、低级烷氧基、氨基，或酰氨基、巯基或有机硫化物或另外的氢。本发明的化合物包括各种基团作为R2，包括提供另外的卟啉或与卟啉有关的环系统的取代基。
因此，R2可以是乙烯基，-CHOR′，-CHO，-COOR′，-CH(OR′)CH3，-CH(OR′)CH2OR′，-CH(SR′)CH3，-CH(NR′)2CH3，-CH(CN)CH3，-CH(COOR′)CH3，-CH(OOCR′)CH3，-CH(MR′COR′)CH3，-CH(CONR′2)CH3，-CH(卤素)CH3或-CH(卤素)CH2(卤素)，其中R′为H或为可任意地被杂原子取代基取代的C1-6烃基，或其中R2是从乙烯基直接或间接衍生而来的少于12个碳原子的有机基团，或其中R2是含有1-3个四吡咯型核的基团。
本文所用的术语“烷基”，指饱和直链烃或支链烃，它如果含有足够数目的碳原子，则可以是环状的或含有环状部分。典型的例子是甲基、乙基、叔丁基、环己基等。
“烃基”指只含有碳和氢的单价取代基，它可以是直链或支链、饱和或不饱和、芳族或非芳族或两者兼有、环状或非环状。因此，C1-10烃基可包括环戊基乙基、2-戊烯基、3-丁炔基、2，4-二甲基己基等。
本发明的一些实施例中，烃基可被含杂原子的取代基取代。这样的取代基包括-OR，-NR2，-SR，-COOR，-COMR2，-OOCR，-NRCOR，-SOR，-SO2R，-SO3R，卤素，-CN等，其中R为H或C1-6烷基。环状胺包括吡啶基、嘧啶基、噻唑基、喹啉基等。因此，它们可包括单环或稠环系统，并可包含另外的杂原子。
要特别提到的是，本发明化合物含至少一个手性中心，因此可以各种立体异构体的形式存在。如果需要，可用本领域的标准技术分离包含对映体在内的这些立体异构体，但是，外消旋混合物或包含一种以上非对映异构体的混合物也可使用。因此，视情况而定，式1-4所示化合物代表了各旋光异构体、对映体或非对映异构体，也可是这些手性异构体的混合物。
如果需要，可用合适的离子(如镁离子、锌离子、亚锡离子等)处理四吡咯型核得到金属复合物，制成金属化形式的本发明化合物。金属离子也可作放射标记。一般用合适的盐在本领域的标准条件下插入金属离子。例如，在1∶1的二氯甲烷∶甲醇中用醋酸锌处理化合物可引入锌离子。
化合物还可包含标记物，如放射性同位素、生色团和荧光标记。当化合物准备用于体内试验或用于标记特定基团时，一般使用放射性同位素标记。作为放射性同位素的有用的阳离子基团包括锝、镓和铟。另外，分子自身中的杂原子的同位素(如131I或32P)或包括14C可用来标记分子。
如上述有关BPD的专利进一步描述的，如果需要，本发明的化合物可偶联于靶向剂，使分子指向特定的组织或器官。
这样的靶向剂包括抗体、受体、受体-配基等。靶向剂与本发明化合物的连接用标准技术进行。“偶联型是指如上所述的偶联于靶向剂的式1-4化合物。
式1-4化合物的优选实施例包括式中二个n等于2的化合物，或式中两个R1均为乙基或甲基，较佳为甲基，及式中R2为乙烯基的化合物。特别优选的是下式的化合物
A-EA6和B-EA6均已制得。两者均为有效的光敏剂，似乎A-EA6较易配制。
本发明化合物的各种形式可用于本领域通常知悉的光动力学治疗技术。如上面背景部分所述，可用大量方案进行光动力学治疗，并可用于各种适应症。此外，这类化合物在某些情况下在光线缺乏时也显示药理学活性。需要时，可将标准药物组合物(包括脂质体组合物为佳)用于这种用途中。
下面的实施例意在阐述而非限制本发明。当实施例阐述和证明本发明的两类成员A-EA6和B-EA6的令人惊奇的药物动力学性质时，可预期式1-4所述其余化合物在这些性质上将有类似的变化。因此，本发明中所含的该小类化合物为用来治疗各种病症的光动力学药物家族提供了有价值的成员。
实施例1
两种类型EA6的制备
A.为制备B-EA6，起始物料为BPD-DB，作为二甲酯，即图1所示BPD-DB，其中R1和R2均为COOMe，R″为乙烯基。
向2.0g(2.7mM)BPD-DB(在50ml乙二醇和100ml二氯甲烷中的混合物中)加入1.0ml硫酸。室温搅拌反应物18小时。然后将反应物加入搅拌中的100ml 5％乙酸铵水溶液和100ml二氯甲烷的混合物中。分离有机层，用50ml水洗涤两次。用旋转蒸发法除去溶剂。将深绿色的残渣在75g氧化铝(以5％水灭活)上进行层析分离，用二氯甲烷配的0.5％-5.0％甲醇液梯度洗脱。旋转蒸发除去含产物组分中的溶剂。残渣真空干燥过夜，得到2.02g(89％)分析纯绿色固体标题化合物。
B.以类似于上述A段所述方式，但用BPD-DA取代BPD-DB，制得异构型A-EA6。
实施例2
L1210细胞摄取和释放B-EA6和BPD-MA的比较
在10％胎牛血清存在下，将BPD-MA或B-EA6以3μg/ml与10个/ml小鼠白血病细胞系L1210细胞一起培育。在各不同时间测定细胞溶解物的荧光，衡量光敏剂的细胞内含量。达到的最大浓度B-EA6为145.9ng/106个细胞，BPD-MA为149.5ng/106个细胞。摄取时程见图2，为60分钟时细胞含量的百分率，此时两者均达到最大摄取。如图所示，B-EA6摄取得更快，仅5分钟后即达到其最大浓度的80％，在15分钟内达到最大摄取。
L1210细胞释放这些药物的动力学是这样测定的：将细胞置于3μg/ml的药物中1小时，然后将细胞放置在无药物的含10％胎牛血清的培养基中。在各时间点溶解细胞，测荧光，衡量保留在细胞内的药物含量。如图3所示(也以起始时细胞内浓度的百分率表示)，BPD-MA和B-EA6显示不同的释放动力学。B-EA6开始时释放快得多，但BPD-MA释放得更完全。
意想不到的是，B-EA6的体外动力学比BPD-MA更快。B-EA6的较高保留可归因于其体积比BPD-MA大，但较快通过细胞膜转运却是意想不到的。
实施例3
体内药物动力学比较
将BPD-MA或B-EA6以4mg/kg剂量给DBA/2小鼠作静脉注射，每个时间点3只小鼠。以组织提取液中的荧光确定血浆、皮肤、肝脏和肾脏的药物含量。图4表示以注射15分钟后有关组织中的浓度百分率作点线得到的结果。如图4所示，BPD-MA或B-EA6均不蓄积于血浆、肝脏或肾脏，但是，BPD-MA在起初3小时内蓄积于皮肤；B-EA6则否。
B-EA6比BPD-MA蓄积快，如体内试验中快速从所有组织清除所确证的那样，构成了有利之处。用光治疗可在注射光敏剂后立即进行，由于快速清除，不会出现皮肤或眼睛的延缓光敏性。因此，受治疗者可恢复正常生活，无须特别小心避免强光和佩戴深色眼镜。
然后，以15分钟至3小时的时间框架计算各种组织中B-EA6和BPD-MA的半衰期，结果见表1：
表1：B-EA6和BPD-MA的组织半衰期
T1/2*(15分钟-3小时)
组织 B-EA6 BPD-MA
肝 0.6 2.4
脾 0.8 10.9
肾 0.8 5.6
皮肤 1.9 0**
肌肉 11.1 ND+
血浆 0.6 2.0*以小时表示**3小时以内皮肤中BPD-MA浓度增加+ND＝未测定
在这一时间框架中BPD-MA在皮肤中的半衰期不能计算出，因为在3小时内其浓度增加。如表1所示，在大多数组织，B-EA6的半衰期一般比BPD-MA短得多。正常皮肤中与BPD-MA相比B-EA6不蓄积，这是意想不到的，表明它比BPD-MA清除地快得多。如上所述，这是一个优点，因为皮肤光敏性是用光敏剂进行光动力学治疗的唯一可见的副作用。
还用小鼠体内肿瘤模型测定了药物动力学。对含有M1横纹肌肉瘤的每组10只DBA/2小鼠静脉注射0.75-1.5mg/kg的各种剂量的BPD-MA脂质体制剂。在注射后各个时间，用690nm激光以50或150J/cm2辐照肿瘤。结果如表2所示，依据注射后第7天每组小鼠无肿瘤的百分率而定。
表2：生物试验的结果
PDT条件 第7天无肿瘤的百分率药物剂量** 静注后时间IV 光剂量*** BPD-MA B-EA6(mg/kg) (分钟) (J/cm2)
0.75 15 50 (4/5) 50％
30 50 70％ 0％
1.0 15 50 100％ 90％
30 50 90％ 0％
1.5 180 150 70％ 0％*肿瘤模型＝DBA/2小鼠中的M1肿瘤-每种PDT条件在10只动物上测试**药物制成脂质体，静脉注射***690nm激光
如表2所示，注射后15-180分钟时间内，BPD-MA处理的小鼠存活率高。另一方面，B-EA6处理的小鼠在30分钟或180分钟时显示无反应；但是，当辐照在仅15分钟后进行时，得到了明显的反应。
这些数据证明，用B-EA6作PDT在处理早期用光是有效的。由于上面所述的原因，注射后较晚时间无效应表明B-EA6的快速清除，这是其优点。
实施例4
有或无血清时LD50的测定
B-EA6或BPD-MA以一系列浓度与L1210细胞一起培育12小时，并暴露于9J/cm2宽谱光。在无血清或有10％血清存在下进行测定。结果见表3。
表3：LD50值
无血清 10％血清
BPD-MA 3.7ng/ml 54.0ng/ml
B-EA6 4.7ng/ml 19.7ng/ml
如同所示那样，在无血清时BPD-MA和B-EA6的LD50值相当；但是，在有血清存在下，B-EA6显示了好得多的效力保留。
在大多数情况下，血清的存在大大地降低PDT中所用的药物(如BPD-MA)的光活性。令人惊奇的是B-EA6对细胞膜比对血浆成份显示出较高的亲和力，因此在细胞环境中受血清存在的影响极小。因此，在体内其活性可能比BPD-MA和该类物质中其它化合物的活性更高。
实施例5
B-EA6的体外效能
在不存在血清的情况下，将L1210细胞与不同浓度的B-EA6一起培育1小时，进一步测试B-EA6体外对L1210细胞显示细胞毒效应的能力。除去多余的药物后，将细胞暴露于9J/cm2宽谱光(380-750nm)，用MTT试验(Mosmann，T.等.，JImmunol Meth(1983)65：55-63)测定细胞的存活。参见仅暴露于光的细胞的存活计算被杀死的细胞的百分率。在约7ng/ml浓度时，杀死了80％细胞；在15ng/ml时，几乎100％细胞未存活。如上所述，B-EA6的LD50约为4.7ng/ml。
体外试验中B-EA6的效应比BPD-MA略低，这使得如实施例4所显示的那样在有血清存在下体内B-EA6比BPD-MA活性高更显得不可思议了。
实施例6
B-EA6对肿瘤细胞的选择性
将L1210细胞积聚B-EA6的能力与脾细胞的这种能力进行比较。将B-EA6(3μg/ml)与这两类细胞一起培育，测定细胞裂物的荧光以确定B-EA6的细胞含量。图5显示这两类细胞的摄取(ng/106个细胞)比较。如所示，L1210细胞能摄取大约140ng/106个细胞，约20分钟达到此值。另一方面，脾细胞在培育1小时后积聚不到20ng/106个细胞。
用两侧腹部皮下生有M1(横纹肌肉瘤)肿瘤的DBA/2小鼠作模型，显示B-EA6对肿瘤有选择性。小鼠静脉内给予0.75mg/kg B-EA6脂质体制剂。15分钟后，将包括5mm直径肿瘤在内的1cm面积暴露于50J/cm2的充氩染料激光器发出的690nm波长70mW的光。此暴露有效地消除了肿瘤，但不影响周围正常皮肤。因此，B-EA6显示出肿瘤特异性。
实施例7
B-EA6的免疫调节作用
用迟发性皮肤光敏试验(也称作接触性过敏(CHS)试验)测试Balb/C小鼠(每组5-8只小鼠)。将小鼠侧腹面涂以光敏剂二硝基氟代苯(DNFB)，5天后，一只耳朵涂以DNFB，另一只作为对照。肿胀是免疫反应的指针。小鼠静脉注射1mg/kg脂质体B-EA6，用15J/cm2光辐照全身，或暴露于周围光中。测定这种处理阻止免疫反应的能力，以耳肿胀抑制为依据。结果表明，在用15J/cm2全身光照或用周围光辐照后，注射B-EA6小鼠与未处理小鼠相比，受试耳的肿胀减轻。两种情况的肿胀程度仅为未处理小鼠的大约60％。
在测定免疫调节作用的另一个试验中，分离、纯化小鼠腹腔巨噬细胞，用重组γ-干扰素(100U/ml)激活。将活化的细胞与一系列浓度的B-EA6于37℃培育1小时，然后暴露于690nm LED，5J/cm2光中。24小时后，用FITC偶联抗体和细胞分选仪测定NHCI，MHCII，CD54，CD80和CD86的表达水平。结果见表4，为B-EA6(0.5ng/ml)与用BPD-MA(2.5ng/ml)的类似试验所作的比较。表4：低剂量PDT和B-EA6对小鼠腹腔巨噬细胞表面抗原表达水平的效应化合物 MHC MHC CH54 CD80 CD86
I类 II类 (ICAM-1) (B7-1) (87-2)BPD-MA 99.1 79.3 105.4 93.5％ 99.2％(2.5ng/ml) ±4.3％ ±10.1％ ±3.0％BPD-B-EA6 100.4％ 71.8％ 106.9％ 102.3％ 92.2％(0.5ng/ml)
表中的结果是与仅用光处理的细胞相比的表达百分率。如表所示，BPD-MA和B-EA6均能减少MHCII表达，而不减少其余的表面标志。因此，尽管B-EA6具有良好的药物动力学，它仍保留了BPD-MA和这组化合物中其它化合物的免疫调节活性。
实施例8
B-EA6在关节炎模型中的作用
MRI-Ipr小鼠自发地发生关节炎；皮内注射福氏佐剂可加强这种自发作用。各种数目的MRI-Ipr小鼠在注射佐剂后0、10和20天用PDT处理。PDT包括静脉注射0.5mg/kg脂质体B-EA6，然后在注射B-EA6后1小时将小鼠的腹部暴露于红(560-900nm)光，80J/cm2。每隔5天观察小鼠，并对症状计分，共30天。结果见图6，与用BPD-MA和BPD-MB作类似处理的小鼠作比较。如图6所示，无论用临床症状的发生率(即小鼠出现这些症状的百分率)或用双踝关节宽度毫米数的改变来衡量，B-EA6(用实心园表示)对预防佐剂注射的后遗症有效。
而且，证明B-EA6保持了免疫调节活性。
实施例9
B-EA6对微血管的作用
使用小鼠的睾提肌模型。静脉注射B-EA6 2mg/kg，注射后5分钟和15分钟开始将手术暴露的小动脉和小静脉用强度为25J/cm2的光辐照，开始于注射B-EA6后5分钟和15分钟，每5分钟辐照一次。测量血管红血柱的直径作为对照的百分数。
结果见图7。当5分钟开始辐照时，可达到短暂的血管闭合，而15分钟后开始辐照则达到永久的闭合。
如本实施例所证实的那样，B-EA6增强的阻塞或闭合血管能力，加上快速的药物动力学，使B-EA6在治疗眼内新生血管疾病中特别有益。
实施例10
B-EA6的吸收谱
暴露于荧光(380-750nm)前和暴露后4小时，在血浆中BPD-MA和B-EA6具有相似的吸收谱。这些谱的比较见图8。B-EA6的谱与BPD-MA的谱相似是有益的，因为在PDT中用BPD-MA作为有用的治疗剂已得到很好的开发。它们的谱相类似表明可将同样的光用于B-EA6的治疗如同BPD-MA成功用于治疗那样。
实施例11
A-EA6的体外细胞毒性
按实施例5所述类似的方法，测试了A-EA6对两株不同的细胞株的体外细胞毒性，并与BPD-MA进行比较。将L1210和树突细胞株D2SC/1分别与A-EA6或BPD-MA一起37℃培养1小时。除去过量药物后，将细胞暴露于690nm的光，树状细胞采用5J/cm2，L1210细胞采用9°J/cm2。18-24小时后，用实施例5中所述的MTT比色试验测定细胞的存活率。参考仅暴露于光的细胞计算杀死的细胞的百分率。如图9A所示，就L1210细胞而言，在无血清存在下A-EA6显示与BPD-MA可相比的细胞毒性，但在有血清存在下毒性明显比BPD-MA大。空心园代表A-EA6+血清；实心园代表BPD-MA+血清；空心方块代表A-EA6，无血清存在；实心方块代表BPD-MA，无血清存在。
如图9B所示，在5％胎牛血清存在下，在树突细胞中，BPD-MA的LD50为6ng/ml，A-EA6的LD50为2.7ng/ml，A-EA6在比BPD-MA更低的浓度下有毒性。图9B中，实心园代表BPD-MA，空心方块代表A-EA6。
在相似的测定中，但测定MHCI受体，而不是毒性，A-EA6在较低浓度下减少这些受体的表达。该测定中，将树突细胞在药物浓度低于LD50(BPD-MA用2.5ng/ml和5ng/ml，A-EA6用1ng/ml和2.Sng/ml)时培育1小时。细胞用690nm光照5J/cm2处理，处理后3小时用合适的抗体标记，用流式细胞计量术进行评估。测定的结果表示为光处理对照细胞的平均通道荧光强度的百分率。这些结果见图10；2.5ng/ml和5ng/ml的BPD-MA分别产生了18％和29％的降低；1ng/ml和2.5ng/ml浓度的A-EA6均降低通道荧光大约25％。
实施例12
A-EA6对细胞内信号传递的效应
重复实施例11所述研究的条件，用HL-60细胞作为靶细胞，比较A-EA6和BPD-MA对细胞毒性，对促细胞分裂途径激酶p70 S6K和对应激途径激酶c-jun和HSP27的效应。结果见图11。在亚致死浓度，A-EA6显示较强的应激途径激酶激活作用和较强的促细胞分裂途径激酶抑制作用。
还测定了在HL-60细胞中对蛋白酶类激活的效应。A-EA6显示比BPD-MA更强的蛋白酶类激活作用。此效应是合乎需要的，因为它伴有细胞程序死亡。用细胞程序死亡来除去不想要的细胞对周围正常细胞和组织的影响最小。A-EA6与BPD-MA的比较见图12。
图13显示类似的比较，在HL-60细胞中测定DNA片断化的百分率。又表明，A-EA的有效浓度比BPD-MA低。
实施例13
用A-EA6进行体内光动力学治疗
在类似于实施例3所述方案中，以1mg/kg剂量将A-EA6或BPD-MA给隐匿有M1肿瘤的小鼠作静脉注射。接着，在给药后不同时间用690nm激光作50J/cm2的全身辐照。第7天，测定无肿瘤动物的数目，结果见表5。
表5
| 光敏剂 | 辐照时间(i.v.后) | 第7天无肿瘤动物 |
| BPD-MA | 15分钟 | 10/10 |
| 30分钟 | 9/10 | |
| A-EA6 | 15分钟 | 2/2 |
| 30分钟 | 6/6 |
这些结果表明，在本试验中A-EA6至少与BPD-MA同样有效。
实施例14
免疫调节活性
对照和试验小鼠的腹侧部涂以抗原DMFB，5天后，它们的耳朵粘贴同样的化合物进行攻击。试验动物用BPD-MA或A-EA6作PDT全身处理，静脉注射光敏剂，然后将动物暴露于15J/cm2红色LED光。计算耳肿胀抑制百分率，与对照组相比。结果见表6，表明在此试验中A-EA6比BPD-MA有较强的免疫调节效应。
表6
| 光敏剂 | 剂量(mg/kg) | 抑制百分率 |
| BPD-MA | 1.0 | 49％ |
| A-EA6 | 1.0 | 66％ |
| A-EA6 | 0.3 | 59％ |
Claims (11)
1.一种下式所示化合物及其金属化的和/或标记的和/或偶联的形式
其中，各R1为独立的C1-6烷基；
各n为0～6中的一个独立整数；
R2为乙烯基或其衍生物。
2.如权利要求1所述的化合物，其中R2为乙烯基，-CHOR′，-CHO，-COOR′，-CH(OR′)CH3，-CH(OR′)CH2OR′，-CH(SR′)CH3，-CH(NR′)2CH3，-CH(CN)CH3，-CH(COOR′)CH3，-CH(OOCR′)CH3，-CH(NR′COR′)CH3，-CH(CONR′2)CH3，-CH(卤素)CH3或-CH(卤素)CH2(卤素)，其中R′为H或是可任意地被杂原子取代基取代的C1-6烃基，
或其中R2是从乙烯基取代基直接或间接衍生而来的少于12个碳原子的有机基团，
或其中R2是含有1-3个四吡咯型核的基团。
3.如权利要求1或2所述的化合物，所述化合物为金属化形式和/或偶联形式和/或被标记的形式。
4.如权利要求1或2所述的化合物，所述化合物不含金属离子。
5.如权利要求1-4中任何一项所述的化合物，其中R2为乙烯基，和/或其中每个R1为甲基，和/或其中两个n均为2。
6.如权利要求5所述的化合物，其中R2为乙烯基，两个R1均为甲基。
7.如权利要求6所述的有以下化学式的化合物及其金属化的和/或标记的和/或偶联的形式。
8.如权利要求7所述的化合物，所述化合物为金属化形式和/或偶联形式和/或被标记的形式。
9.如权利要求7所述的化合物，所述化合物不含金属离子。
10.一种药物组合物，它包含权利要求1-9中任何一项所述的化合物和至少一种药学上可接受的赋形剂。
11.一种进行光动力学治疗或诊断的改良法，所述方法包括对需要所述治疗或诊断的受试者给予光活性剂，其中改进之处包括使用权利要求1-9中任何一项所述的化合物作为光活性剂。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US85249497A | 1997-05-07 | 1997-05-07 | |
| US08/852,494 | 1997-05-07 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1254339A true CN1254339A (zh) | 2000-05-24 |
| CN1113882C CN1113882C (zh) | 2003-07-09 |
Family
ID=25313492
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN98804737A Expired - Fee Related CN1113882C (zh) | 1997-05-07 | 1998-05-06 | 作为光活性剂的一氢苯并卟啉衍生物的乙二醇酯 |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5929105A (zh) |
| EP (2) | EP0983273B8 (zh) |
| JP (1) | JP3378889B2 (zh) |
| KR (1) | KR100397131B1 (zh) |
| CN (1) | CN1113882C (zh) |
| AR (1) | AR012673A1 (zh) |
| AT (1) | ATE211473T1 (zh) |
| AU (1) | AU741070B2 (zh) |
| CA (1) | CA2284879C (zh) |
| CZ (1) | CZ294715B6 (zh) |
| DE (1) | DE69803376T2 (zh) |
| DK (1) | DK0983273T3 (zh) |
| ES (2) | ES2437790T3 (zh) |
| HK (1) | HK1042439B (zh) |
| HU (1) | HU221754B1 (zh) |
| IL (1) | IL132066A (zh) |
| NO (1) | NO314264B1 (zh) |
| NZ (1) | NZ338031A (zh) |
| PL (1) | PL202341B1 (zh) |
| PT (1) | PT983273E (zh) |
| WO (1) | WO1998050387A1 (zh) |
Families Citing this family (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6756396B1 (en) * | 1997-05-07 | 2004-06-29 | Qlt Inc. | Ethylene glycol esters as photoactive agents |
| US6364907B1 (en) | 1998-10-09 | 2002-04-02 | Qlt Inc. | Method to prevent xenograft transplant rejection |
| US6331235B1 (en) * | 1998-12-11 | 2001-12-18 | The University Of British Columbia | Chiral separation of benzoporphyrin derivative mono-and di-acids by laser-induced fluorescence capillary electrophoresis |
| US6344050B1 (en) | 1998-12-21 | 2002-02-05 | Light Sciences Corporation | Use of pegylated photosensitizer conjugated with an antibody for treating abnormal tissue |
| EP1131099A2 (en) * | 1999-01-15 | 2001-09-12 | Light Sciences Corporation | Noninvasive vascular therapy |
| US6602274B1 (en) * | 1999-01-15 | 2003-08-05 | Light Sciences Corporation | Targeted transcutaneous cancer therapy |
| AU2789900A (en) * | 1999-02-26 | 2000-09-21 | Qlt Phototherapeutics, Inc. | Photodynamic therapy in combination with apoptosis inducing factors |
| GB9905911D0 (en) | 1999-03-15 | 1999-05-05 | Photocure As | Method |
| US6609014B1 (en) | 1999-04-14 | 2003-08-19 | Qlt Inc. | Use of PDT to inhibit intimal hyperplasia |
| US20020022032A1 (en) * | 1999-04-23 | 2002-02-21 | Curry Patrick Mark | Immuno-adjuvant PDT treatment of metastatic tumors |
| US7122568B1 (en) | 1999-11-17 | 2006-10-17 | Qlt, Inc. | Use of low-dose PDT to inhibit restenosis |
| US20040208855A1 (en) * | 1999-11-17 | 2004-10-21 | Allison Beth Anne | Use of PDT to inhibit intimal hyperplasia |
| WO2001051087A2 (en) * | 2000-01-12 | 2001-07-19 | Light Sciences Corporation | Novel treatment for eye disease |
| AU2001258117A1 (en) | 2000-05-08 | 2001-11-20 | The University Of British Columbia | Supports for photosensitizer formulations |
| WO2001085212A2 (en) * | 2000-05-08 | 2001-11-15 | The University Of British Columbia | Drug delivery systems for photodynamic therapy |
| US7521239B2 (en) * | 2000-11-29 | 2009-04-21 | Pci Biotech As | Photochemical internalization for virus-mediated molecule delivery into the cyosol |
| BR0115795A (pt) * | 2000-11-29 | 2003-08-12 | Pci Biotech As | Métodos para introduzir uma molécula no citosol de uma célula, para o tratamento ou prevenção de uma doença, distúrbio ou infecção em um paciente, para estimular uma resposta imune, célula, e, uso de uma molécula de transferência e/ou um agente fotossensibilizante |
| US6984395B2 (en) * | 2001-04-11 | 2006-01-10 | Qlt, Inc. | Drug delivery system for hydrophobic drugs |
| CA2448562A1 (en) * | 2001-05-31 | 2002-12-05 | Miravant Pharmaceuticals, Inc. | Metallotetrapyrrolic photosensitizing agents for use in photodynamic therapy |
| EP1424942B1 (en) * | 2001-08-22 | 2008-12-31 | Montana State University-Bozeman | Porphyrins with enhanced multi-photon absorption cross-sections for photodynamic therapy |
| US20040013717A1 (en) * | 2001-11-02 | 2004-01-22 | Allen Theresa Mary | PEG-lipid containing formulations |
| DE60225169D1 (de) | 2001-11-09 | 2008-04-03 | Quadra Logic Tech Inc | Photodynamische therapie zur behandlung von haarausfall |
| US7264629B2 (en) | 2001-11-09 | 2007-09-04 | Qlt, Inc. | Photodynamic therapy for the treatment of hair loss |
| CA2437638A1 (en) * | 2003-08-20 | 2005-02-20 | John Robert North | Photodynamic therapy |
| CA2457214A1 (en) | 2004-02-06 | 2005-08-06 | Qlt Inc. | Photodynamic therapy for the treatment of acne |
| US20120034155A1 (en) * | 2010-08-03 | 2012-02-09 | Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware | Artificial cells |
| CN102482249B (zh) | 2009-07-08 | 2016-06-08 | 德米拉(加拿大)公司 | 用于治疗皮肤病症或疾病状态的tofa类似物 |
| WO2011097533A1 (en) | 2010-02-04 | 2011-08-11 | Transmolecular, Inc. | Chlorotoxin polypeptides and conjugates and uses thereof |
| JP5964322B2 (ja) | 2011-01-13 | 2016-08-03 | キュー エル ティー インク．ＱＬＴ Ｉｎｃ． | 光増感剤の局所送達用医薬組成物及びその使用 |
| WO2013003507A1 (en) | 2011-06-27 | 2013-01-03 | Morphotek, Inc. | Multifunctional agents |
| JP6181059B2 (ja) | 2011-10-25 | 2017-08-16 | メモリアル スローン−ケタリング キャンサー センター | 前立腺がんのための診断薬、予後判定薬、および治療薬としてのフリーｐｓａ抗体 |
| KR20150030763A (ko) | 2012-07-11 | 2015-03-20 | 더미라, 인코포레이티드 | 감광제의 국부 전달을 위한 약제학적 조성물 및 이의 이용 |
| US9365542B2 (en) | 2012-10-26 | 2016-06-14 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Modulators of resistant androgen receptor |
| EP3087182B1 (en) | 2013-12-23 | 2019-03-20 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Methods and compositions for treating cancer using peptide nucleic acid-based agents |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4883790A (en) | 1987-01-20 | 1989-11-28 | University Of British Columbia | Wavelength-specific cytotoxic agents |
| US4920143A (en) * | 1987-04-23 | 1990-04-24 | University Of British Columbia | Hydro-monobenzoporphyrin wavelength-specific cytotoxic agents |
| US5283255A (en) * | 1987-01-20 | 1994-02-01 | The University Of British Columbia | Wavelength-specific cytotoxic agents |
| US5095030A (en) * | 1987-01-20 | 1992-03-10 | University Of British Columbia | Wavelength-specific cytotoxic agents |
| US5171749A (en) | 1987-01-20 | 1992-12-15 | University Of British Columbia | Wavelength-specific cytotoxic agents |
| EP0476011A1 (en) * | 1989-06-07 | 1992-03-25 | The University Of British Columbia | Photosensitizing diels-alder porphyrin derivatives |
| US5498710A (en) * | 1994-04-22 | 1996-03-12 | Health Research, Inc. | Alkyl ether analogues of benzoporphyrin derivatives |
| ATE253068T1 (de) * | 1997-05-07 | 2003-11-15 | Univ British Columbia | Ein klasse von benzoporphyrin derivate photowirksame verbindungen |
-
1998
- 1998-05-06 CN CN98804737A patent/CN1113882C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-05-06 PL PL336790A patent/PL202341B1/pl unknown
- 1998-05-06 CA CA002284879A patent/CA2284879C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-05-06 PT PT98921294T patent/PT983273E/pt unknown
- 1998-05-06 EP EP98921294A patent/EP0983273B8/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-06 ES ES01121719.7T patent/ES2437790T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-06 JP JP54758598A patent/JP3378889B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-05-06 AT AT98921294T patent/ATE211473T1/de active
- 1998-05-06 KR KR10-1999-7010283A patent/KR100397131B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-05-06 ES ES98921294T patent/ES2171022T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-06 HU HU0003604A patent/HU221754B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1998-05-06 EP EP01121719.7A patent/EP1177795B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-06 AU AU74207/98A patent/AU741070B2/en not_active Ceased
- 1998-05-06 DK DK98921294T patent/DK0983273T3/da active
- 1998-05-06 DE DE69803376T patent/DE69803376T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-06 WO PCT/CA1998/000468 patent/WO1998050387A1/en active IP Right Grant
- 1998-05-06 IL IL132066A patent/IL132066A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-05-06 CZ CZ19993923A patent/CZ294715B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-05-06 NZ NZ338031A patent/NZ338031A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-05-07 AR ARP980102133A patent/AR012673A1/es active IP Right Grant
- 1998-06-01 US US09/088,524 patent/US5929105A/en not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-05-17 US US09/313,106 patent/US6153639A/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-05 NO NO19995436A patent/NO314264B1/no not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-06-05 HK HK02104249.9A patent/HK1042439B/zh not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1113882C (zh) | 作为光活性剂的一氢苯并卟啉衍生物的乙二醇酯 | |
| TW407055B (en) | Pharmaceutical compositions for use in a photodynamic therapy for treating multiple sclerosis and rheumatoid arthritis | |
| US20090192071A1 (en) | Use of photodynamic therapy to enhance treatment with immuno-modulating agents | |
| CN1099612A (zh) | 破坏或抑制不需要的细胞或组织生长的方法 | |
| CN1894003A (zh) | 用于局部脂肪细胞减少的光动力疗法 | |
| JPH0688902B2 (ja) | 新規なテトラピロ−ル医薬用組成物 | |
| CN1101188C (zh) | 绿卟啉在制备无须有意光照卟啉衍生物而治疗动脉硬化药物上的应用 | |
| CN1198671A (zh) | 绿卟啉免疫调节剂 | |
| Richter et al. | Characterization of benzoporphyrin derivative, a new photosensitizer | |
| JPH0764728B2 (ja) | 新規なテトラピロ−ル医薬用組成物 | |
| CN1531442A (zh) | 用作光敏剂和声敏剂的苝醌 | |
| Kwitniewski et al. | Influence of diamino acid derivatives of protoporphyrin IX on mouse immunological system: preliminary results | |
| CN1071914A (zh) | 血卟啉和其衍生物的复合盐，它们的合成及用做治疗剂 | |
| CN1452956A (zh) | 竹红菌素类光敏剂在制药中的应用 | |
| US6756396B1 (en) | Ethylene glycol esters as photoactive agents | |
| CN1901896A (zh) | 精选氨基酸锌复合物作为抗疟疾的应用 | |
| CN1149101C (zh) | 绿卟啉作为免疫调节剂 | |
| JPWO2006085517A1 (ja) | クロリン類及びポルフィリン類のｐｄｔ用軟膏製剤及び坐剤 | |
| MXPA99010169A (es) | Esteres de etilenglicol de derivados de monohidrobenzoporfirina como agentes fotoactivos | |
| Kogan et al. | Aluminium sulphophthalocyanine as an NIR photosensitizer for PDT | |
| EA036853B1 (ru) | Фармацевтическая композиция | |
| Chan et al. | Serum levels of hematoporphyrin derivatives in the photodynamic therapy of malignant tumors |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C53 | Correction of patent of invention or patent application | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: E - Sternberg Inventor after: David Dolphin Inventor after: Julia G. Levy Inventor after: A - M Richter Inventor after: HUNT DAVID W. C. Inventor after: Ashok J Inventor after: E M Waterfield Inventor after: R E Bush Inventor after: A - N - Tovey Inventor before: E * Stenberg Inventor before: D * Dorfin Inventor before: J * G * Levy Inventor before: A * M * Rickert Inventor before: D * W * C * Hunt vJ * Ashok Inventor before: E * M * Watford |
|
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: E. STERNBERG; D. DOLPHIN; J. G. LEVY; A. M. RICTER; D. W. C. HUNT; J AXIAOKE; E M WOTEFEIERDE TO: E. STERNBERG; D. DOLPHIN; J. G. LEVY; A. M. RICTER; D. W. C. HUNT; J AXIAOKE; E M WOTEFEIERDE; R E BUSH; A N TOVE |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20030709 Termination date: 20170506 |